黄曲霉毒素检测光化学衍生系统

柱后衍生的福音——黄曲霉毒素光化学衍生器黄曲霉毒素（AFT）B1和G1显示天然荧光性，因此B1和G1在检测之前必须进行衍生。传统的电化学衍生费时费力，应用的化学药品不仅会腐蚀色谱仪而且对操作人员有毒副作用，黄曲霉毒素光化学衍生器（Pribolab® MDU）是一款新型的柱后衍生器，尤其适用于当前较为流行的UPLC。该方法结果与电化学方法一致但其不使用任何腐蚀性试剂，HPLC的使用寿命将会增加，且不需要额外的清理工作，更加省时省力省心。黄曲霉毒素光化学衍生器实现了对黄曲霉毒素在线衍生和检测，有效提高检测效率，准确性，检测灵敏度以及重复性，此方法已被AOAC认可。

黄曲霉毒素光化学器柱後衍生法的B1及G1会因为紫外线254nm照射而结构改变

各位大神，我单位拟采购一台光化学衍生器用于测定黄曲霉毒素，现看了两家的产品，LC-TECH和ROMER，很难抉择，请各位大神给点意见，哪个品牌的哪个型号好，感激不尽！

PriboFast®KRC 光化学柱后衍生反应器广泛应用于液相色谱检测分析, 使用时置于色谱柱和检测器之间，进行柱后连续光化学衍生反应提高荧光、紫外、电化学检测和化学发光检测器的灵敏度和响应的选择性。技术特点：1. 在线对黄曲霉毒素B1、G1进行衍生，重现性好；不需要任何化学衍生试剂，减少了液相系统的清洗工作，延长了其使用寿命。2．黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的最低检测限在0.5ppb以下。可以同时进样，对黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2，M1, M2同时进行检测。3．安装、操作简单（5分钟即可投入使用），使用寿命长。4．符合AOAC 2005.08, AOAC 2008.02,AOCS Aa 11-05，中国台湾标准（食字第0981800370 号公告）和欧盟药典 2.8.18标准分析方法5．型号： PriboFast® KRC, 厂家：新加坡 Pribolab Pte. Ltd.【较传统的电化学衍生相比具有如下优点】 无需使用化学物质（省钱的同时，也避免操作人员接触有毒化学物质）； 增加 HPLC 仪器的寿命（没有腐蚀性酸流经毛细管）； 无需冲洗步骤； 结果与电化学方法（溴衍生）一致。光化学柱后衍生光化学反应装置除应用于黄曲霉毒素检测外, 还可以应用于大量的巴比妥酸盐、氨基酸、多肽、黄曲霉毒素、维生素及磺胺类药物等分析。HPLC 法检测磺胺类药物时, 还能够增强磺胺类药物的荧光强度：磺胺嘧啶（Sulfadiazine），磺胺吡啶（Sulfapyridine），磺胺甲基嘧啶（Sulfamerazine），磺胺二甲嘧啶（Sulfamethazine），磺胺对甲氧嘧（Sulfamethoxydiazine），磺胺喹噁啉（Sulfaquinoxaline），灵敏度达到10ppb 左右

柱后衍生的福音——黄曲霉毒素光化学衍生器黄曲霉毒素（AFT）B1和G1显示天然荧光性，因此B1和G1在检测之前必须进行衍生。传统的电化学衍生费时费力，应用的化学药品不仅会腐蚀色谱仪而且对操作人员有毒副作用，黄曲霉毒素光化学衍生器（Pribolab® MDU）是一款新型的柱后衍生器，尤其适用于当前较为流行的UPLC。该方法结果与电化学方法一致但其不使用任何腐蚀性试剂，HPLC的使用寿命将会增加，且不需要额外的清理工作，更加省时省力省心。黄曲霉毒素光化学衍生器实现了对黄曲霉毒素在线衍生和检测，有效提高检测效率，准确性，检测灵敏度以及重复性，此方法已被AOAC认可。

安捷伦1260，荧光检测器，光化学衍生，检测黄曲霉毒素B1，响应值太低，进样量2ppb 20微升？

大家工作中作黄曲霉毒素B1时，测定用的衍生装置是哪种的：柱后衍生泵？光化学衍生装置？还是电化学衍生装置？它们的哪种衍生方式性价比更高？

2015版药典中药中黄曲霉毒素的检测有两种方法，不知大家是采用的哪种方法呢？液质？还是液相色谱-光化学衍生+荧光呢？

黄曲霉毒素（AFT）B1和G1显示天然荧光性，因此B1和G1在检测之前必须进行衍生。以前用我们实验室用的电化学衍生。费时费力，应用的化学药还腐蚀色谱仪而且对我们这些操作人员有毒副作用，现在我们实验室用的黄曲霉毒素光化学衍生器（Pribolab® MDU）是一款新型的柱后衍生器，换适用于当前较为流行的UPLC。我们这个方法得出的结果与电化学方法一致但其不使用任何腐蚀性试剂，HPLC的使用寿命将会增加，且不需要额外的清理工作，更加省时省力省心。 黄曲霉毒素光化学衍生器实现了对黄曲霉毒素在线衍生和检测，有效提高检测效率，准确性，检测灵敏度以及重复性，此方法已被AOAC认可。1.衍生时间缩短(大致5分钟即可完成)2.无需使用化学物质3.增加HPLC仪器的寿命4.无需冲洗步骤。5.结果与电化学方法（溴衍生）一致6.适用于超高效液相色谱仪(UPLC)

光化学柱后衍生器可以在254nm下用光化学的方法对黄曲霉毒素B1和G1进行衍生,与...具体的又有什么区别谁能钙素我希杰,2015新增药典也加了这个光化学柱后衍生,...我们也是了解了这个好处之后，用了普瑞邦这个仪器，效果确实和这个一样，光化学柱后衍生器具有以下特点:1、无需使用化学物质(省钱的同时，也避免操作人员接触有毒化学物质);2、增加 HPLC 仪器的寿命(没有腐蚀性酸流经毛细管);3、无需冲洗步骤;4、结果与电化学方法(澳衍生)一致。5、黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的最低检测限均小于0.5 PPB。6、符合湾O湾C 2005.08，湾O湾C2008.02，湾O湾C 湾a 11-05，中国台湾标准(食宇0981800370号公告)和欧盟药典2.8.18 标准分析方法。符合中国国家标准和进出口检验标准听说普瑞邦出了新型的光化学后衍生器MDU，不知道跟这个有什么区别，有什么特殊的功能吗？谁知道吗？

由于黄曲霉毒素B1和G1只显示天然荧光性，因此需要将其进行衍生，提高其荧光强度后才能准确测定含量，光化学柱后衍生器可以取代传统的电化学衍生法，在线对黄曲霉毒素B1、G1进行衍生，不需要任何化学试剂，无需清洗仪器，减少对色谱仪的腐蚀，同时更好的保护操作人员，用于液相色谱荧光法检测黄曲霉毒素，有效提高检测的灵敏度。符合AOAC 2005.08，AOAC2008.02，AOAC Aa 11-05，中国台湾标准（食字0981800370号公告）和欧盟药典2.8.18标准分析方法。用液相色谱荧光检测法进行测定时先将黄曲霉毒素从相应的基质中提取，经免疫亲和柱（净化后进行紫外光照射，黄曲霉毒素B1和G1被羟基化，从而产生稳定可测量的荧光性。其它的黄曲霉毒素（B2，G2，M1，M2）的化学及测量相关特性在此步中不变，然后进行检测即可。本衍生器还可应用于巴比妥酸盐、氨基酸、多肽、烟酸/烟酰胺、维生素及磺胺类药物的分析。

用PICKERING柱后衍生系统检测黄曲霉毒素，用0.05%碘液（甲醇水2：8），衍生泵压力偏高，超过2000，用甲醇冲洗的时候压力正常1000。想请教下各位大神，衍生泵压力偏高，是否跟碘液的溶剂比例有关，调高甲醇水的甲醇比例是否能够降低衍生泵压力。 在反相液相色谱中，调整溶剂比例是否能够影响系统压力，原理是什么，求各位大神解惑。

光化学衍生器可有效放大黄曲霉毒素B1、G1的信号，具有不用试剂，使用方便无害，不需额外装置，灵敏度高，重现性好等诸多优点，是HPLC方法检测样品中黄曲霉毒素B1&G1的好搭档。目前市场上也有不少厂家在做此产品，诸位使用者对光化学衍生器的参数具体要求是怎样的呢？有没有招标参数数据支持？http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/default/em09511.gif

请问液相上加个光化学衍生器测黄曲霉毒素的话，还符合国家标准吗？

1、仪器及方法：黄曲霉毒素检测，waters柱后衍生系统，衍生液为0.05%碘溶液，反应温度70℃，流速0.2ml/min2、现象：衍生液不输液（上机检测过程中，几个小时之后会出现不输液或者是输液量降低，压力为0或者是降低为100psi（正常压力1100psi左右））3、故障排查：将衍生液（0.05%碘溶液)更换为屈臣氏水（超声10min)。 a、滤芯拆掉，做prime，仍然不出液。不是滤芯的问题， b、拆卸4个单向阀，超声，之后做prime，正常输液。、 c、单独断开衍生泵走0.2ml/min的流速，按时间计时，出液量正常。压力稳定950-1000psi d、将屈臣氏水更换为衍生液（0.05%碘溶液)，按照abc三个步骤做。出液量正常。0.2ml/min流速压力正常1000-1150psi e、上机检测黄曲霉毒素，运行20h，正常。正常关机。大约3h之后，断开衍生泵。将衍生液更换为屈臣氏水，做prime，直至出液正常。更换为衍生液（0.05% 碘溶液)，用0.2ml/min流速直至出液正常，压力正常1000-1150psi f、二次上机检测黄曲霉毒素，晚上运行，第二天上班（已经运行15h），经看样品曲线，运行6h之后，基线不稳，可以看出是输液量不正常，压力显示为150psi。做prime不出液。经和waters工程师沟通，可以再超声单向阀。超声之后按照abcd四个步骤操作，更换新开封的碘配置的碘液。0.2ml/min的流速压力2h内从950上升到1150psi。4、[b]疑问[/b]：上机检测前半时间衍生泵还是正常输液，后半段时间输液就不正常，是什么原因导致的？仅仅是单向阀的问题还是有别的地方存在故障。请大神解答。

最近在检测黄曲霉毒素时，为何要衍生，好多文献只是提到水可以猝灭，但是对于原因却不清楚，所以产生了疑问，B1、G1为何在水中会猝灭，衍生的机理是什么，请教下各位老师，有没有相关的文献或者出处。

[color=#444444]我们用碘衍生方法，按照药典中样品前处理的方法配制样品溶液，加样做回收率，其中黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1的回收率均在70%以上，而黄曲霉毒素G2的回收率总是在40%左右，换了另一个品牌新色谱柱结果一样，想问一下这个跟四种毒素的结构有关系吗，或者跟免疫亲和柱有关吗？[/color][img=,absmiddle]http://muchongimg.xmcimg.com/data/emuch_bbs_images/smilies/rolleyes.gif[/img]

[align=center][b]高效液相色谱法检测花生中的黄曲霉毒素[/b][/align][align=center][b] [/b][/align]一、[b]黄曲霉毒素[/b]1、[b]黄曲霉毒素及来源[/b]黄曲霉毒素:是一组真菌(霉菌)毒素。黄曲霉毒素是一类化学结构类似的化合物，均为二氢呋喃香豆素的衍生物。主要有黄曲霉寄生曲霉产生的次生代谢物。来源：存在于土壤、动物、植物、各种坚果里。特别是花生、大豆、荞麦、酱豆很容易被污染。2、[b]理化性质及毒性 [/b]它是目前自然界中已经发现的理化性质最稳定的一类真菌毒素,具有很强的毒性、致癌性、致突变性和致畸毒性。其中以黄曲霉毒素B1的毒性最大，相当氰化钾的10倍, 砒霜的68倍，且其致癌性是二甲基亚硝胺的70倍。在水中很难溶解，可以溶解在油、甲醇、丙酮和氯仿等有机溶剂，但不溶于石油醚、己烷和乙醚中。一般在中性溶液中比较稳定，在强酸性溶液中稍有分解，可以在PH9-10的强碱溶液中分解迅速，其纯品为无色结晶，耐高温。二、[b]检测方法选择 [/b]我国很早之前就已经对黄曲霉毒素展开研究，制定了一系列相应检测标准。目前国标方法已有12种之多，其中包括薄层分析法，液相色谱法，酶联免疫法，毛细管电泳法，荧光光度法，金标试纸法和生物传感器法。液相色谱法中高效液相色谱法是目前国内外比较权威的定量检测黄曲霉的分析方法，也是我国黄曲霉毒素检测的国家标准方法。所以在检测时选用了高效液相色谱-柱后光化学衍生法。三、[b]高效液相色谱仪[/b]1、[b]原理 [/b][color=#333333]样品溶液经进样器进入流动相，[/color][color=#333333]随着流动相进入色谱柱[/color][color=#333333]，由于样本溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中作相对运动时，经过反复多次的“吸附-解吸”的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样本浓度被转换成电信号传送到记录仪，数据以图谱形式输出检测结果。[/color]2、[b]组成[/b][color=#333333]高压输液系统、[/color][color=#333333]进样系统[/color][color=#333333]、[/color][color=#333333]分离[/color][color=#333333]系统（色谱柱）[/color][color=#333333]、[/color][color=#333333]检测系统[/color][color=#333333]、[/color][color=#333333]数据处理和记录系统[/color][color=#333333]。[/color]3、[b]特点[/b][color=#333333]高效液相色谱[/color][color=#333333]与经典液相色谱相比有以下优点：[/color][color=#333333]分析[/color][color=#333333]速度快[/color][color=#333333]、[/color][color=#333333]分辨率高[/color][color=#333333]、[/color][color=#333333]检测[/color][color=#333333]灵敏度高[/color][color=#333333]、[/color][color=#333333]色谱柱可反复使用[/color][color=#333333]、[/color][color=#333333]样品量少，容易回收[/color][color=#333333]。[/color]四、[b]实验过程[/b]1、[b]样品前处理 [/b]样液准备：将均质杯放在天平上，在其内分别称取25g花生四份。再称取5gNaCl加入均质杯中。最后用200mL量筒量取125mL甲醇-水溶液（700+300）加入均质杯内。在其中两份两份花生中分别加入50μL（1μg/mL）标准品溶液作为回收。将盛有样品的均质杯依次放在均质器上进行打磨混匀。将定性滤纸两张叠放在玻璃漏斗上，下端接入锥形瓶内，先在滤纸上倒入少量样品过滤润洗锥形瓶，润洗后正式开始过滤。过滤完成后取滤液15mL分别倒入100mL量筒中再加入30mL超纯水震荡混匀。 样液的净化：在过滤的同时激活免疫亲和柱，将免疫亲和柱安装好加入10mL超纯水进行激活，速度控制在大约1s滴1滴。激活完成后将混合好的样液经过两张玻璃滤纸过滤15mL到已经激活的免疫亲和柱中，混合样液完全从亲和柱中过滤后，再在免疫亲和柱中加入10mL超纯水。 样液洗脱：在亲和柱中加入1mL甲醇，用洗耳球吹洗，速度控制在1滴/秒，甲醇全部通过亲和柱后再加入1mL超纯水，吹洗速度与甲醇的保持一致。 样液装瓶：把洗脱下来的液体放在涡旋混合器上，震荡混匀后取1000μL装入进样瓶，在进样瓶上注明名称以及日期。配制1ng/mL的标准品1000μL放入进样瓶混匀，再配制一个空白（1000μL甲醇-水溶液）。 备注：实验所用药品氯化钠([u]NaCl[/u]）为优级纯、甲醇（CH[sub]3[/sub]OH）为色谱纯，水为超纯水。混合标准品为国标GB5009. 22 — 2016中规定标样。2、[b]实验参数[/b] 以C18柱为分离色谱柱，甲醇-水（45：55，体积：体积）溶液为流动相梯度洗脱，流速1mL／min，在室温下，激发波长360nm，发射波长435nm条件下，进样量20μL，经过光化学衍生后用荧光检测器检测。3、[b]进样检测[/b]①先换流动相（A：甲醇-45% B：水-55%）②再打开电脑和仪器③打开联机软件④进样针变绿后再打开泵和温控箱，将流动相容量修改为相应的体积，再将流速改为3mL/min，打开空气阀排净气泡，再把空气阀关闭流速改为1mL/min，冲柱一段时间。⑤将进样瓶放入指定位置（依次为空白、标准品、样品、回收）⑥建立序列，修改子目录（将日期设为子目录），修改完毕点击样品位置修改名称、坐标，查看进样次数，确定进样量（20μL）。⑦打开FLD，同时打开荧光检测器，和光化学衍生器，待准备就绪后点击开始。⑧检测完毕后，打开结果查看峰，有杂峰影响时点击删除杂峰，然后点击校正，删除校正。4、[b]实验数据 [/b]黄曲霉毒素G[sub]2[/sub]在8.1分钟左右出现峰，黄曲霉毒素G[sub]1[/sub]在9.6分钟左右出现峰，黄曲霉毒素B[sub]2[/sub]在11.7分钟左右出现峰，黄曲霉毒素B[sub]1[/sub]在14.3分钟左右出现峰,若在其他时间段出现峰则不属于黄曲霉毒素的峰。四种黄曲霉毒素峰宽在0.3～0.4min，而峰高和峰面积中则是B[sub]2[/sub]较大，G[sub]1[/sub]较小，B[sub]1[/sub]和G[sub]2[/sub]属于居中。回收率=样品峰高/标准品的峰高70％≤回收率≤120％视为未检出黄曲霉毒素。①标准品[table][tr][td][align=center]峰[/align][/td][td][align=center]保留时间/min[/align][/td][td][align=center]峰宽/min[/align][/td][td][align=center]峰面积/LU[/align][/td][td][align=center]峰高/LU[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]1[/align][/td][td][align=center]8.142[/align][/td][td][align=center]0.3682[/align][/td][td][align=center]2.20190[/align][/td][td][align=center]9.18729e[sup]-2[/sup][/align][/td][/tr][tr][td][align=center]2[/align][/td][td][align=center]9.686[/align][/td][td][align=center]0.3735[/align][/td][td][align=center]1.18640[/align][/td][td][align=center]4.57970e[sup]-2[/sup][/align][/td][/tr][tr][td][align=center]3[/align][/td][td][align=center]11.710[/align][/td][td][align=center]0.4021[/align][/td][td][align=center]5.54293[/align][/td][td][align=center]2.15125e[sup]-1[/sup][/align][/td][/tr][tr][td][align=center]4[/align][/td][td][align=center]14.376[/align][/td][td][align=center]0.4373[/align][/td][td][align=center]2.67834[/align][/td][td][align=center]9.30720e[sup]-2[/sup][/align][/td][/tr][/table]②花生回收1[table][tr][td][align=center]峰[/align][/td][td][align=center]保留时间/min[/align][/td][td][align=center]峰宽/min[/align][/td][td][align=center]峰面积/LU[/align][/td][td][align=center]峰高/LU[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]1[/align][/td][td][align=center]8.169[/align][/td][td][align=center]0.3323[/align][/td][td][align=center]2.01464[/align][/td][td][align=center]9.31226e[sup]-2[/sup][/align][/td][/tr][tr][td][align=center]2[/align][/td][td][align=center]9.720[/align][/td][td][align=center]0.3330[/align][/td][td][align=center]1.02491[/align][/td][td][align=center]4.53172e[sup]-2[/sup][/align][/td][/tr][tr][td][align=center]3[/align][/td][td][align=center]11.756[/align][/td][td][align=center]0.3750[/align][/td][td][align=center]4.88574[/align][/td][td][align=center]2.03627e[sup]-1[/sup][/align][/td][/tr][tr][td][align=center]4[/align][/td][td][align=center]14.442[/align][/td][td][align=center]0.4124[/align][/td][td][align=center]2.18995[/align][/td][td][align=center]7.94352e[sup]-2[/sup][/align][/td][/tr][/table]③花生回收2[table][tr][td][align=center]峰[/align][/td][td][align=center]保留时间/min[/align][/td][td][align=center]峰宽/min[/align][/td][td][align=center]峰面积/LU[/align][/td][td][align=center]峰高/LU[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]1[/align][/td][td][align=center]8.178[/align][/td][td][align=center]0.3238[/align][/td][td][align=center]1.76791[/align][/td][td][align=center]8.68845e[sup]-2[/sup][/align][/td][/tr][tr][td][align=center]2[/align][/td][td][align=center]9.727[/align][/td][td][align=center]0.3353[/align][/td][td][align=center]1.05383[/align][/td][td][align=center]4.89711e[sup]-2[/sup][/align][/td][/tr][tr][td][align=center]3[/align][/td][td][align=center]11.764[/align][/td][td][align=center]0.3602[/align][/td][td][align=center]5.12116[/align][/td][td][align=center]2.18196e[sup]-1[/sup][/align][/td][/tr][tr][td][align=center]4[/align][/td][td][align=center]14.452[/align][/td][td][align=center]0.4125[/align][/td][td][align=center]2.44144[/align][/td][td][align=center]8.91182e[sup]-2[/sup][/align][/td][/tr][/table]④结果计算[table][tr][td]样品 [sub] [/sub][sub] [/sub] 峰名称[/td][td][align=center]B1[/align][/td][td][align=center]B2[/align][/td][td][align=center]G1[/align][/td][td][align=center]G2[/align][/td][td][align=center]是否检出[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]花生回收1[/align][/td][td][align=center]85.34%[/align][/td][td][align=center]94.65%[/align][/td][td][align=center]98.95%[/align][/td][td][align=center]101.3%[/align][/td][td][align=center]否[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]花生回收2[/align][/td][td][align=center]95.75%[/align][/td][td][align=center]101.43%[/align][/td][td][align=center]106.93%[/align][/td][td][align=center]94.57%[/align][/td][td][align=center]否[/align][/td][/tr][/table][b]5、结果与讨论[/b] 在此实验中使用高效液相色谱检测黄曲霉毒素一般分为：提取、净化、衍生和测定，但因文中采用了无衍生器法，所以此实验无衍生那一步骤。提取采用了甲醇水溶液和氯化钠固体，净化采用了免疫亲和柱（IAC），测定时流动相为甲醇水45:55，用荧光检测器检测在激发波长为365nm，发射波长为450nm下检测20μL样品。结果表明：在此方法中黄曲霉毒素回收率在70％～120％之间，选用样品中均无黄曲霉毒素。 黄曲霉毒素存在范围极广难以防范，国家对黄曲霉检测制定了相应的标准。但我们在日常生活中不可能将所有所需所用都进行检测，但我们可以通过一些方法在日常生活中进行辨别：如不建议摄入发霉食物，也可以通过在低温、干燥、避免阳光直射的地方存放食物；关注食品的保质期等方式减少食物被黄曲霉毒素污染的风险。

食品中黄曲霉毒素的测定，主要有TLC、ELISA、HPLC 等方法，TLC法灵敏度和重现性较差；ELISA法重现性差，易受样品基质干扰假阳性率高，仅能作为筛选方法。近年来，由于HPLC法具有灵敏度和准确度高、方法重现性好等优点，现已成为黄曲霉毒素分析的主要手段。HPLC法测定黄曲霉毒素，一般使用灵敏度和选择性较好的荧光检测器。但由于黄曲霉毒素的荧光强度会受溶剂影响，正相色谱中，B1和B2的荧光强度仅稍低一点，不需衍生化；而在常用的反相色谱中，B1和G1两种异构体荧光强度很弱，需进行衍生化，提高其荧光强度，灵敏度才能满足一般食品法规的限量。衍生化的方法一般有柱前和柱后两类， 柱前衍生一般使用三氟乙酸，柱后衍生有碘液、过溴化吡啶溴以及电化学和光化学等方法。近年来，很多标准方法利用免疫亲合柱净化，HPLC柱后衍生对花生和玉米等农产品和食品中黄曲霉的含量进行了分析，方法检出限能够达到1 μg/kg以下。Q1。免疫亲和柱的填料是什么，它是怎样工作的，为什么要用它？ 免疫亲合柱对于欧们学化学的好像陌生了一点，不过你把它当成一种层析柱就行了。它的所谓填料就是固定了抗体的凝胶（黄曲霉毒素的柱子一般是单克隆抗体），基于抗原抗体反应进行工作，专一性很强，再加上另一种原理（反相或正相液相色谱）的分离，即使你把它当作确证方法也能说的过去。其实免疫亲和柱净化后的样品已经非常干净，直接加溴水也可在荧光分光光度计上进行测定，也是AOAC 991。31正式方法。现在还有一种普通霉菌毒素净化柱（不是免疫柱）要便宜一些，能做的霉菌毒素品种也多，但是专一性就差些。Q2。Kobra cell可以在线产生溴，这对分析有什么作用？是可以提高灵敏度吗？如果是，溴是如何与黄曲霉素反应的？络合？氧化？还是别的什么？ 由欧以上的论述，应该说是提高反相HPLC分析中黄曲霉毒素B1、G1的灵敏度。反应原理欧还真的没研究，可能和柱后衍生类似（氧化？），考虑到进入精益求精的要求还是不乱猜了吧。Q3。看到书上说黄曲霉素的毒性是KCN的10倍，是砒霜的68倍。晕啊。。。操作时有没有特别的个人防护措施？这个阿胖讲得差不多了，方法也就是用次氯酸钠溶液泡器皿，当然最好不要自己称固体标样，那东东有静电，很容易飞出来，买溶液就行了。要补充的1、就是没阿胖讲的那么可怕，对欧盟出口花生及制品的检测实验室都使用免疫亲和柱净化-HPLC—RF法确证，每年可能要做上万个样品。2、HPLC法的干扰比酶免方法不知道要小多少，有的HPLC筛选方法，提取后不净化就直接进样了，也很少有干扰。采用哪种方法主要是和要求有关，如果让洋人拿着鞭子在后面抽着干，肯定是要用HPLC法；如果就骗骗中国的官僚和老百姓，那就像啊胖说的，酶免法又省钱有省事，嘿嘿。。。。3、GB/T 5009的TLC法，净化方法很差，UV灯下看上去是一条亮带，满足国标20PPB的限量都很勉强，这一点你可看看旧贴http://www.sepu.net/dvbbs/dispbbs.asp?BoardID=5&replyID=47615&id=18220&skin=0欧论述的也差不多了。1、AOAC方法简述25g均匀样品，加入氯化钠5 g和125 mL甲醇：水（7+3），均质2min，过滤。取15 mL滤液加30 mL水，再次过滤后，取10 mL过免疫亲和柱，2×10 mL水洗柱，最后用1 mL甲醇洗脱黄曲霉毒素，用水定容至2 mL，供HPLC测定。HPLC条件：色谱柱：4.6×250 mm, 5 μm，C18；流动相：甲醇-乙腈-水（1+1+3）；流速：1.0 mL/min； 柱后衍生试剂：100 mg碘溶于2 mL甲醇，加水至200 mL。流速0.3 mL/min；衍生化温度：70 ℃；衍生化时间：55 s；激发波长：360 nm；发射波长： 420 nm；进样量：50 μL。3. 方法技术指标：免疫亲和柱净化，HPLC柱后衍生化的方法回收率(1) 2000年AOAC协同试验结果B1: 82- 109 %(添加水平：1.0- 5.0 ng/g)B2: 77- 123 %(添加水平：0.2- 0.8 ng/g)G1: 58- 93 %(添加水平：1.0- 5.0 ng/g)G2: 62- 105 %(添加水平：0.2- 0.8 ng/g)(2) 1991年AOAC协同试验结果B1: 77- 90 %(添加水平：5.8- 17.5 ng/g)B2: 55- 70 %(添加水平：0.83- 2.5 ng/g)G1: 76- 98 %(添加水平：2.5- 7.5 ng/g)G2: 36- 55 %(添加水平：0.83- 2.5 ng/g)碘衍生化方法的反应温度要70 ℃，需要单独的柱温箱，还要一个打衍生剂的泵。故可以采用以下两种方法来代替碘溶液作柱后衍生（1）过溴化吡啶溴（PBPB）衍生色谱柱：4.6×250 mm, 5 μm，C18；流动相：水-乙腈-甲醇（6+2+3）；流速：1.00 mL/min；衍生化溶液：25 mg PBPB (CAS: 39516-58-3)溶于500 mL水，室温下避光可保存5天；衍生化溶液流速：0.30 mL/min；衍生化反应管：55 cm × 0.5 mm id. 衍生化反应温度：室温。（2）电化学反应池衍生色谱柱：4.6×250 mm, 5 μm，C18；流动相：水-乙腈-甲醇（6+2+3），每升加350 μL HNO3 (5 mol/L)，同时溶解120 mg KBr；衍生化反应池：Kobra cell Rhone Diagnostics Technologies Ltd.，衍生化操作电流：100 μA。

食用油中黄曲霉毒素B1的柱前衍生法怎么也做不好，回收只有20%，找不到原因，有做过的吗？具体方法：称取油样5g，加入84+16乙腈-水20毫升浸泡过夜，次日超声20min，离心5min，取上清液过黄曲霉专用柱，取净化液2毫升，氮吹，吹干后，加入正己烷0.6毫升，三氟乙酸0.3毫升，混匀，40度烘箱衍生15min，取出氮吹，吹干后1毫升15+85乙腈+水定容，上机测定。

食品中黄曲霉毒素的测定，主要有TLC、ELISA、HPLC 等方法，TLC法灵敏度和重现性较差；ELISA法重现性差，易受样品基质干扰假阳性率高，仅能作为筛选方法。近年来，由于HPLC法具有灵敏度和准确度高、方法重现性好等优点，现已成为黄曲霉毒素分析的主要手段。HPLC法测定黄曲霉毒素，一般使用灵敏度和选择性较好的荧光检测器。但由于黄曲霉毒素的荧光强度会受溶剂影响，正相色谱中，B1和B2的荧光强度仅稍低一点，不需衍生化；而在常用的反相色谱中，B1和G1两种异构体荧光强度很弱，需进行衍生化，提高其荧光强度，灵敏度才能满足一般食品法规的限量。衍生化的方法一般有柱前和柱后两类， 柱前衍生一般使用三氟乙酸，柱后衍生有碘液、过溴化吡啶溴以及电化学和光化学等方法。近年来，很多标准方法利用免疫亲合柱净化，HPLC柱后衍生对花生和玉米等农产品和食品中黄曲霉的含量进行了分析，方法检出限能够达到1 μg/kg以下。Q1。免疫亲和柱的填料是什么，它是怎样工作的，为什么要用它？ 免疫亲合柱对于欧们学化学的好像陌生了一点，不过你把它当成一种层析柱就行了。它的所谓填料就是固定了抗体的凝胶（黄曲霉毒素的柱子一般是单克隆抗体），基于抗原抗体反应进行工作，专一性很强，再加上另一种原理（反相或正相液相色谱）的分离，即使你把它当作确证方法也能说的过去。其实免疫亲和柱净化后的样品已经非常干净，直接加溴水也可在荧光分光光度计上进行测定，也是AOAC 991。31正式方法。现在还有一种普通霉菌毒素净化柱（不是免疫柱）要便宜一些，能做的霉菌毒素品种也多，但是专一性就差些。Q2。Kobra cell可以在线产生溴，这对分析有什么作用？是可以提高灵敏度吗？如果是，溴是如何与黄曲霉素反应的？络合？氧化？还是别的什么？ 由欧以上的论述，应该说是提高反相HPLC分析中黄曲霉毒素B1、G1的灵敏度。反应原理欧还真的没研究，可能和柱后衍生类似（氧化？），考虑到进入精益求精的要求还是不乱猜了吧。Q3。看到书上说黄曲霉素的毒性是KCN的10倍，是砒霜的68倍。晕啊。。。操作时有没有特别的个人防护措施？这个阿胖讲得差不多了，方法也就是用次氯酸钠溶液泡器皿，当然最好不要自己称固体标样，那东东有静电，很容易飞出来，买溶液就行了。要补充的1、就是没阿胖讲的那么可怕，对欧盟出口花生及制品的检测实验室都使用免疫亲和柱净化-HPLC—RF法确证，每年可能要做上万个样品。2、HPLC法的干扰比酶免方法不知道要小多少，有的HPLC筛选方法，提取后不净化就直接进样了，也很少有干扰。采用哪种方法主要是和要求有关，如果让洋人拿着鞭子在后面抽着干，肯定是要用HPLC法；如果就骗骗中国的官僚和老百姓，那就像啊胖说的，酶免法又省钱有省事，嘿嘿。。。。3、GB/T 5009的TLC法，净化方法很差，UV灯下看上去是一条亮带，满足国标20PPB的限量都很勉强，这一点你可看看旧贴http://www.sepu.net/dvbbs/dispbbs.asp?BoardID=5&replyID=47615&id=18220&skin=0欧论述的也差不多了。1、AOAC方法简述25g均匀样品，加入氯化钠5 g和125 mL甲醇：水（7+3），均质2min，过滤。取15 mL滤液加30 mL水，再次过滤后，取10 mL过免疫亲和柱，2×10 mL水洗柱，最后用1 mL甲醇洗脱黄曲霉毒素，用水定容至2 mL，供HPLC测定。HPLC条件：色谱柱：4.6×250 mm, 5 μm，C18；流动相：甲醇-乙腈-水（1+1+3）；流速：1.0 mL/min； 柱后衍生试剂：100 mg碘溶于2 mL甲醇，加水至200 mL。流速0.3 mL/min；衍生化温度：70 ℃；衍生化时间：55 s；激发波长：360 nm；发射波长： 420 nm；进样量：50 μL。3. 方法技术指标：免疫亲和柱净化，HPLC柱后衍生化的方法回收率(1) 2000年AOAC协同试验结果B1: 82- 109 %(添加水平：1.0- 5.0 ng/g)B2: 77- 123 %(添加水平：0.2- 0.8 ng/g)G1: 58- 93 %(添加水平：1.0- 5.0 ng/g)G2: 62- 105 %(添加水平：0.2- 0.8 ng/g)(2) 1991年AOAC协同试验结果B1: 77- 90 %(添加水平：5.8- 17.5 ng/g)B2: 55- 70 %(添加水平：0.83- 2.5 ng/g)G1: 76- 98 %(添加水平：2.5- 7.5 ng/g)G2: 36- 55 %(添加水平：0.83- 2.5 ng/g)碘衍生化方法的反应温度要70 ℃，需要单独的柱温箱，还要一个打衍生剂的泵。故可以采用以下两种方法来代替碘溶液作柱后衍生（1）过溴化吡啶溴（PBPB）衍生色谱柱：4.6×250 mm, 5 μm，C18；流动相：水-乙腈-甲醇（6+2+3）；流速：1.00 mL/min；衍生化溶液：25 mg PBPB (CAS: 39516-58-3)溶于500 mL水，室温下避光可保存5天；衍生化溶液流速：0.30 mL/min；衍生化反应管：55 cm × 0.5 mm id. 衍生化反应温度：室温。（2）电化学反应池衍生色谱柱：4.6×250 mm, 5 μm，C18；流动相：水-乙腈-甲醇（6+2+3），每升加350 μL HNO3 (5 mol/L)，同时溶解120 mg KBr；衍生化反应池：Kobra cell Rhone Diagnostics Technologies Ltd.，衍生化操作电流：100 μA。

在当今社会，食品安全越来越受到人们的关注和重视，尤其是在发生三聚氰胺和地沟油等一系列事件之后，人们更加重视食品安全问题。黄曲霉毒素这类真菌在世界不同地区都发现大量存在于食品中，它主要是由黄曲霉和寄生曲霉等真菌产生的一类有毒次生代谢物。目前，已知的黄曲霉毒素及其衍生物有20余种 , 即B1，B2，B2a，G1，G2，G2a，M1，M2等，黄曲霉毒素B1是其中毒性最大的一种，实验结果显示，其毒性是人们熟知的剧毒药氰化钾的10倍，是砒霜的68倍。黄曲霉毒素B1可诱发癌症和皮下肉瘤，并且可使动物的肝、肾、大脑和神经系统等产生病变。自20世纪60年代以来，有关黄曲霉毒素的危害被大量报道，以致黄曲霉毒素已成为最受人们关注的一种真菌毒素。因此，寻求准确、快速、简便、价廉的检测方法，对黄曲霉毒素进行高效的定性定量分析，是黄曲霉毒素研究的一个重要方面。以下对黄曲霉毒素的检测方法研究进展进行评述。【薄层色谱法】1.薄层层析（TLC）法TLC 法是测定黄曲霉毒素的经典方法，在薄层板展开后，在365 nm紫外灯下，黄曲霉毒素B1，B2，G1和G2分别显示紫色、蓝紫色、绿色和绿色荧光。TLC 法的特异性较差，灵敏度相对较差，且测定黄曲霉毒素专一性不够，经常引起测量误差。但由于此法设备简单，易于普及，所以国内外仍在使用。2.高效薄层（HPTLC）法HPTLC 法测定黄曲霉毒素采用目前国际上流行的样品处理方法——固相萃取法（SPE）中针对真菌和病毒的多功能净化（MFC）柱。采用MFC柱净化后，仅用单相展开即可达到分离测定的目的，不仅节省了工作时间，提高了工作效率，而且进一步减少了有毒有害溶剂的用量。Stroka等将免疫亲合柱净化应用于 TLC法测定，进行单相展开并用荧光密度计定量，此方法能检测含量明显低于当前欧盟标准的黄曲霉毒素。Kamimura 等用HPTLC方法测定玉米、花生、荞麦等样品，并与通过公职分析化学家协会（AOAC）认证的分析花生及花生制品中黄曲霉素的官方方法CB（Contamination Branch）法和 BF（Best Foods）法进行比较，4种主要黄曲霉毒素的检测限均不高于0.2μg／kg，回收率与CB法一样均高于BF法。3.高压薄层色谱（OPTLC）法高压薄层色谱于1979年由Tyihak提出，它结合了经典薄层色谱法、高效薄层色谱法与高效液相色谱法的优点，是一种能够提高薄层分离效率的平面液相色谱技术。随着实验技术的不断成熟，OPTLC 法在饲料和食物中黄曲霉毒素的检测方面的应用越来越多。Eszter Papp等发展了一系列适合检测玉米和小麦中黄曲霉毒素的OPTLC方法。【高效液相色谱（HPLC）法】由于具有稳定、准确、灵敏等优点，HPLC法已成为当前进行黄曲霉毒素定量研究的首选方法。分析黄曲霉毒素的液相色谱方法包括正相液相色谱方法（NPLC）和反相液相色谱方法（RPLC）。反相高效液相色谱(RP-HPLC)系统易操作，流动相具有低毒性，可同时分离、分析样品中黄曲霉毒素B1，B2，G1，G2且不受样品沸点、热稳定性、和分子量限制，所以目前使用荧光检测器的反相HPLC法已经成为检测黄曲霉毒素的主要测定方法。Chiavaro等根据不同环式糊精增强黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1荧光释放的不同效果，发展了将环式糊精加入到流动相中的高效液相色谱法，黄曲霉毒素 B1，B2，G1，G2 的检测限均在0.3μg／kg以下，M1的检测限在0.0005μg／kg以下，几种黄曲霉毒素都呈线性反应关系。这种方法也被用于测定自然污染及人工添加样品。【免疫学方法】黄曲霉毒素的免疫学检测方法是将生物大分子的免疫学特性与化学特性结合起来的检测方法。该方法具有快速、灵敏、对样品纯度要求不高的特点，特别适合于大批量样本的检测。用于检测黄曲霉毒素的免疫学方法有酶联免疫吸附测定法、放射免疫测定法、亲和层析法、荧光偏振免疫测定法及免疫层析法。1.酶联免疫吸附测定(ELISA)法ELISA法是在免疫学和细胞工程学基础上发展出来的一种微量检测技术，分为直接法、间接法、双抗体夹心法和竞争法，其优点是对黄曲霉毒素B1的检测定性定量准确而且检测速度快（比薄层法提高了近 200倍），特异性强，荧光物质、色素、结构类似物对结果无干扰，回收率高，提取方法简单，成本较低，特别适合于对黄曲霉毒素Bl污染监测控制中大量样品的筛查。缺点是ELISA法中酶的活性易受反应条件影响，测定结果重复性较差，测定结果易出现假阳性问题；此外ELISA试剂寿命短，需要低温保存，葡萄酒类、含盐量高的酱油、含脂量高的花生油在提取时要进行调节pH 值、脱盐、脱脂等特殊处理。2.亲和层析法亲和层析法利用免疫化学反应原理，采用大剂量的单克隆抗体，选择性吸附提取液中的抗原物质黄曲霉毒素。由于抗原-抗体反应具有高灵敏、高选择、高特异性等特点，从而大大提高了试样的净化效果及检测灵敏度，同时可显著减少有毒有害试剂的使用，有利于操作人员的身体健康和环境保护。3.放射免疫(RIA)法RIA法与ELISA法基本相似，不同的是它们所使用的标记物不同，ELISA 法的标记物为酶，RIA法所用的标记物一般为放射性元素氚(3H)。该方法是将毒素 -3H标记物与样品加抗体进行竞争性结合，除去未结合的部分，测定其放射性，放射性强则说明样品中毒素含量低，反之毒素含量高。实验证明 ELISA比RIA灵敏度更高且更简便，并且RIA需要特殊设备，有放射性元素污染问题，人员需要安全防护，现在已经很少使用。4.荧光偏振免疫测定法荧光偏振免疫测定法的主要原理是荧光标记的毒素在样品缓冲液中与未荧光标记的毒素对特异性抗体的竞争性结合。分子质量越大，分子旋转速度越慢，荧光偏振值越大。Nasir等报道了用基于荧光偏振的装置检测不同谷物中的黄曲霉毒素。5.免疫层析（IC）法IC法是20世纪80年代初发展起来的一种快速免疫分析技术，其操作简单，快速，人员不用培训，且不需特殊的仪器设备，非常适用于现场测试和进行大量样品的初筛。免疫学与仪器结合方法近年来，随着黄曲霉毒素在食品中的检出标准越来越严格，很多人采取了免疫学与仪器结合的方法来检测黄曲霉毒素，发展了黄曲霉毒素的检测方法。1.免疫亲和柱净化荧光光度法张艺兵等提出了一种以免疫亲和柱净化结合荧光光度法检测黄曲霉毒素的新方法，此法利用抗原抗体——对应的特异吸附特性，以黄曲霉毒素单克隆抗体为填充柱，特异性、选择性地吸附黄曲霉毒素，再以甲醇为流动相将结合的黄曲霉毒素洗脱下来然后通过溴溶液衍生，所得衍生物可发射荧光，再通过荧光光度计分析即可以测定毒素含量。此方法克服了TLC法和HPLC法在操作过程中使用剧毒的真菌毒素作为标定标准物和在样品预处理过程中使用多种有毒、有异味的有机溶剂对操作人员造成身体伤害和污染环境的缺点，所需仪器设备轻便易携带，自动化程度高，操作简单，灵敏度可达1μg／kg，回收率在85％以上。一个样品只需10～15 min便能直接读出测试结果，比传统方法快几个小时甚至几天时间。缺点是此法只能测定黄曲霉毒素的总量且对试剂要求比较高，检测中药材黄曲霉毒素的含量时结果会出现一些假阳性。2.免疫亲和柱高效液相色谱法免疫亲和柱（IAC）是将特异性的黄曲霉毒素单克隆抗体与载体蛋白偶联并填柱而成。由于抗原抗体有一一对应的特异性吸附关系，所以IAC能特效性地、高选择性地吸附黄曲霉毒素，而让其它杂质通过柱子，使样品得以纯化，吸附的黄曲霉毒素可以被极性有机溶剂洗脱，再用HPLC法进行定量检测，其优点是具有高度特异性，可除去绝大多数干扰物质，检测限达1ng／g，还具有快速、溶剂使用少、可以自动化和再生利用的特点。缺点是柱成本高，商品化 IAC 仅适合几种毒素，有时需要加预柱净化。3.多功能净化柱高效液相色谱法Wilson和Romer开发了独特的真菌毒素多功能净化(MFC)柱，MFC柱提供一种快速的一步萃取纯化方法，工作原理和操作过程与其它净化柱相反，它含有亲脂性(非极性)和电荷活性成分(极性)，当样品提取液通过柱时，MFC柱保留样品液中的干扰物质如脂肪、蛋白质类化合物和碳水化合物等，而待测组分黄曲霉毒素不被吸附而直接通过，从而一步完成净化过程，除去90％的杂质，减少了传统净化方式淋洗杂质和洗脱待测样品的步骤，从而达到净化目的，这一点是IAC 和普通SPE净化柱所不具备的，并且与IAC相比净化效果同样理想，回收率高，灵敏度高，检测限低。【超光谱（HS）法】一直以来，黄曲霉毒素的检测都用化学方法，并且有些化学方法的检测结果非常准确，但是化学方法都要耗费大量的检测时间，检测费用较高且损坏检测样品，所以研究一种快速、准确、无损样品的检测方法对粮食产业是至关重要的，超光谱法检测黄曲霉毒就是这样一种方法。它的原理是首先通过光源激发待测样品，再通过设备捕捉成像，然后对成像进行特征抽取和特征排列，最后实现区别受黄曲霉毒素污染和未受黄曲霉毒素污染的样品。Haibo Yao等利用超光谱法分析了长波紫外线激发下的玉米粒的光谱BGYF 响应，首先用中心激发波长为365nm的紫外线光照射检测样品，被检测到黄绿色荧光的玉米粒，手动挑选出来，结果显示，在500～515 nm波长范围具有较强的黄绿色荧光发射光谱峰，选取500～515 nm有较强黄绿色荧光的玉米粒作为阳性组，用高效液相色谱法测定，与正常组对比，呈黄绿色荧光成像的黄曲霉毒素浓度的平均水平浓度是5.114μg／g。这个实验证明了玉米只有在感染黄曲霉毒素多的时候才会发出黄绿色荧光

粮食坚果黄曲霉毒素测定仪主要用于检测食品中的黄曲霉毒素含量，特别是针对粮食和坚果类食品。具体来说，它可以检测的物质主要包括以下几类： 　　黄曲霉毒素(AFT)： 　　黄曲霉毒素是一类化学结构类似的化合物，均为二氢呋喃香豆素的衍生物。它们主要由黄曲霉(Aspergillus flavus)和寄生曲霉(A. parasiticus)等霉菌产生，存在于土壤、动植物以及各种坚果中，特别是容易污染花生、玉米、稻米、大豆、小麦等粮油产品。 　　黄曲霉毒素的种类较多，包括B1、B2、G1、G2等，其中B1的毒性最强，也是最常见的污染物质。 　　其他真菌毒素： 　　除了黄曲霉毒素外，一些粮食坚果黄曲霉毒素测定仪还可以检测其他类型的真菌毒素，如呕吐毒素(DON)、玉米赤霉烯酮(ZEN)等。这些毒素同样可能对食品和饲料造成污染，危害人类和动物的健康。 　　其他有害物质： 　　部分高端的粮食坚果黄曲霉毒素测定仪可能还具备检测其他有害物质的能力，如农药残留、抗生素残留、重金属等。这些检测项目的加入可以进一步提高食品安全检测的全面性和准确性。 　　样品类型： 　　该类测定仪广泛适用于粮食、坚果、食用油、饲料、中药材等多种样品类型的检测。这些样品在储存、加工和运输过程中都可能受到真菌毒素的污染，因此需要进行定期检测以确保食品安全。 　　综上所述，粮食坚果黄曲霉毒素测定仪是一种专门用于检测食品中黄曲霉毒素及其他有害物质的设备。通过采用先进的生物传感技术或化学分析原理，该类仪器能够快速、准确地检测出食品中的有害物质含量，为食品安全监管和质量控制提供重要技术支持。[img=,690,690]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/08/202408191641007062_938_6238082_3.jpg!w690x690.jpg[/img]

转自色谱网，作者：Mass 食品中黄曲霉毒素的测定，主要有TLC、ELISA、HPLC 等方法，TLC法灵敏度和重现性较差；ELISA法重现性差，易受样品基质干扰假阳性率高，仅能作为筛选方法。近年来，由于HPLC法具有灵敏度和准确度高、方法重现性好等优点，现已成为黄曲霉毒素分析的主要手段。HPLC法测定黄曲霉毒素，一般使用灵敏度和选择性较好的荧光检测器。但由于黄曲霉毒素的荧光强度会受溶剂影响，正相色谱中，B1和B2的荧光强度仅稍低一点，不需衍生化；而在常用的反相色谱中，B1和G1两种异构体荧光强度很弱，需进行衍生化，提高其荧光强度，灵敏度才能满足一般食品法规的限量。衍生化的方法一般有柱前和柱后两类， 柱前衍生一般使用三氟乙酸，柱后衍生有碘液、过溴化吡啶溴以及电化学和光化学等方法。近年来，很多标准方法利用免疫亲合柱净化，HPLC柱后衍生对花生和玉米等农产品和食品中黄曲霉的含量进行了分析，方法检出限能够达到1 μg/kg以下。Q1。免疫亲和柱的填料是什么，它是怎样工作的，为什么要用它？ 免疫亲合柱对于欧们学化学的好像陌生了一点，不过你把它当成一种层析柱就行了。它的所谓填料就是固定了抗体的凝胶（黄曲霉毒素的柱子一般是单克隆抗体），基于抗原抗体反应进行工作，专一性很强，再加上另一种原理（反相或正相液相色谱）的分离，即使你把它当作确证方法也能说的过去。其实免疫亲和柱净化后的样品已经非常干净，直接加溴水也可在荧光分光光度计上进行测定，也是AOAC 991。31正式方法。现在还有一种普通霉菌毒素净化柱（不是免疫柱）要便宜一些，能做的霉菌毒素品种也多，但是专一性就差些。Q2。Kobra cell可以在线产生溴，这对分析有什么作用？是可以提高灵敏度吗？如果是，溴是如何与黄曲霉素反应的？络合？氧化？还是别的什么？ 由欧以上的论述，应该说是提高反相HPLC分析中黄曲霉毒素B1、G1的灵敏度。反应原理欧还真的没研究，可能和柱后衍生类似（氧化？），考虑到进入精益求精的要求还是不乱猜了吧。Q3。看到书上说黄曲霉素的毒性是KCN的10倍，是砒霜的68倍。晕啊。。。操作时有没有特别的个人防护措施？这个阿胖讲得差不多了，方法也就是用次氯酸钠溶液泡器皿，当然最好不要自己称固体标样，那东东有静电，很容易飞出来，买溶液就行了。要补充的1、就是没阿胖讲的那么可怕，对欧盟出口花生及制品的检测实验室都使用免疫亲和柱净化-HPLC—RF法确证，每年可能要做上万个样品。2、HPLC法的干扰比酶免方法不知道要小多少，有的HPLC筛选方法，提取后不净化就直接进样了，也很少有干扰。采用哪种方法主要是和要求有关，如果让洋人拿着鞭子在后面抽着干，肯定是要用HPLC法；如果就骗骗中国的官僚和老百姓，那就像啊胖说的，酶免法又省钱有省事，嘿嘿。。。。3、GB/T 5009的TLC法，净化方法很差，UV灯下看上去是一条亮带，满足国标20PPB的限量都很勉强，这一点你可看看旧贴http://www.sepu.net/dvbbs/dispbbs.asp?BoardID=5&replyID=47615&id=18220&skin=0欧论述的也差不多了。1、AOAC方法简述25g均匀样品，加入氯化钠5 g和125 mL甲醇：水（7+3），均质2min，过滤。取15 mL滤液加30 mL水，再次过滤后，取10 mL过免疫亲和柱，2×10 mL水洗柱，最后用1 mL甲醇洗脱黄曲霉毒素，用水定容至2 mL，供HPLC测定。HPLC条件：色谱柱：4.6×250 mm, 5 μm，C18；流动相：甲醇-乙腈-水（1+1+3）；流速：1.0 mL/min； 柱后衍生试剂：100 mg碘溶于2 mL甲醇，加水至200 mL。流速0.3 mL/min；衍生化温度：70 ℃；衍生化时间：55 s；激发波长：360 nm；发射波长： 420 nm；进样量：50 μL。3. 方法技术指标：免疫亲和柱净化，HPLC柱后衍生化的方法回收率(1) 2000年AOAC协同试验结果B1: 82- 109 %(添加水平：1.0- 5.0 ng/g)B2: 77- 123 %(添加水平：0.2- 0.8 ng/g)G1: 58- 93 %(添加水平：1.0- 5.0 ng/g)G2: 62- 105 %(添加水平：0.2- 0.8 ng/g)(2) 1991年AOAC协同试验结果B1: 77- 90 %(添加水平：5.8- 17.5 ng/g)B2: 55- 70 %(添加水平：0.83- 2.5 ng/g)G1: 76- 98 %(添加水平：2.5- 7.5 ng/g)G2: 36- 55 %(添加水平：0.83- 2.5 ng/g)碘衍生化方法的反应温度要70 ℃，需要单独的柱温箱，还要一个打衍生剂的泵。故可以采用以下两种方法来代替碘溶液作柱后衍生（1）过溴化吡啶溴（PBPB）衍生色谱柱：4.6×250 mm, 5 μm，C18；流动相：水-乙腈-甲醇（6+2+3）；流速：1.00 mL/min；衍生化溶液：25 mg PBPB (CAS: 39516-58-3)溶于500 mL水，室温下避光可保存5天；衍生化溶液流速：0.30 mL/min；衍生化反应管：55 cm × 0.5 mm id. 衍生化反应温度：室温。（2）电化学反应池衍生色谱柱：4.6×250 mm, 5 μm，C18；流动相：水-乙腈-甲醇（6+2+3），每升加350 μL HNO3 (5 mol/L)，同时溶解120 mg KBr；衍生化反应池：Kobra cell Rhone Diagnostics Technologies Ltd.，衍生化操作电流：100 μA。