血浆解冻仪

采集的小鼠血样因为当天离心机坏了不能离心分出血浆，就在-20℃的冰箱里冻了一晚上。第二天解冻后离心发现不能分离出血浆，跟没离心一样。是不是因为冷冻全部溶血了？这样的血浆还有什么方法分析其中的药物浓度？

本人正在使用岛津HPLC做一条肽的药代动力学，用的C18硅胶柱，流动相是水和乙腈梯度洗脱（都含有千分之一三氟乙酸），求做过多肽血浆样品的高手给一些血浆处理方法的建议，目前使用乙腈沉淀法发现峰几乎检测不到，加了点甲酸好一点。参考文献中做万古霉素的方法，血浆样品加入25%三氯乙酸酸与乙腈（2:1），药品的峰还是特别小。使用乙酸乙酯萃取法也做了，提取下层水层，也是没有峰，而且血浆中杂蛋白特别多。多肽药做血浆样品是不是不能用乙腈沉淀法呢？调整乙腈的比例会出现理想的效果吗？最近几天测纯样品（当天解冻的)不加到血浆里发现目标峰面积表小很多，内标就比较正常，不清楚是柱效问题还是紫外检测器问题。以上问题求高手给一些建议，感激涕零！

血浆速冻技术的新进展血浆是抗凝全血经物理方法分离制备的一种血液成分，其临床应用是现代成分输血的重要组成部分，尤其是新鲜冰冻血浆（PPT），在临床治疗中更有其重要的作用。血浆是多种血浆蛋白质的混合物，其中包含白蛋白、免疫球蛋白和凝血因子类蛋白。为了有效的保护血浆内的有效成分，特别是凝血因子，并随着我国成分输血技术的发展，新鲜冰冻血浆及冷沉淀的制备技术及应用随之也越来越广泛。目前我国《血站基本标准》实施细则中第92条规定：制备新鲜冰冻血浆时，抗凝剂为CPD、CP2D、CPDA-1的血液应在8小时内分离并速冻；抗凝剂为ACD的血液应在6小时内分离并速冻。其质量要求： 含有全部凝血因子。血浆蛋白为6~8g/%;纤维蛋白原0.2~0.4g%;Ⅷ因子含量：≥0.7 IU/ml 规格。可以看出，时间和温度是制备出质量合格的新鲜冰冻血浆两个关键点，尤其是对于活性很高的凝血因子VIII和V，时间和温度是影响其活性的重要因素。中国医学检验杂志1995年3月第18卷第2期《血浆凝血因子测定的影响因素探讨》，作者通过对比经过不同温度和时间后FVIII含量发现：32℃条件下6小时活性只有48%，24小时5%4℃条件下6小时活性有95%，24小时剩29%。由于在血浆结冰过程中，凝血因子VIII含量与时间呈指数下降关系，所以速冻时间越短，凝血因子VIII和V的损失也就越小。国际上通用的标准是1个小时内速冻完成，如果能在30分钟内完成速冻，那么效果将会更好。因此要保证新鲜冰冻血浆及冷沉淀等成分的疗效，必需在采供血过程中控制好冷链和时间链，其中血浆速冻技术是其中一个重要环节，速冻的时间和效果将直接关系到血浆及冷沉淀产品的质量和疗效。 随着《中华人民共和国献血法》的实施和无偿献血的深入开展，血站的采血方式已由有偿献血时代的站内采血为主转向站外无偿流动采血。要达到采血后6h（或8 h）内分离血浆并冻结有时存在一定的困难。因此为保证临床使用新鲜冰冻血浆、血浆冷沉淀的质量尽可能的缩短血浆速冻的时间就显的尤为重要了。我国血站采用的血浆速冻技术主要经过了以下几个发展阶段：1、用超低温冰箱来进行血浆速冻。此种方法的主要不足在于：冰箱内空间有限，将血浆叠加在一起，上下接触不均匀。冰箱制冷效率有限，速冻时间较长（通常需要6-8h）。显然是达不到要求的。2、强制对流型速冻机。最初的血浆速冻设备我们称为强制对流型速冻机（blast freezer）。该类设备的设计思路来源于普通冰箱，也是使用空气作为冷媒。通过更强的制冷功率来得到低温空气，并且使冷空气快速的流动，加快冷空气与溶液的热交换来实现快速冻结的目的，因此，也称之为“冷风制冷”。由于这类设备内冷空气流动速度比冰箱内空气流动速度有了很大提高，使得制冷效果得到提高，缩短了血浆冻结的时间。对于超低温冰箱来说，这种方式使得速冻的时间已经得到了大大的缩短，但由于关键技术的不足，其速冻时间通常都需要2h。3、平板接触式速冻机。这类设备是根据最新的平板接触制冷技术制造而成。它通过改变传统的“空气”冷媒，用特制不锈钢作为冷媒，加快血浆热交换实现速冻，从而达到缩短速冻时间的目的。今天，我们来讲讲血浆速冻技术的新进展：平板接触式血浆速冻技术。平板接触式速冻（contact plate freezing）。该技术通过高效压缩机使金属板稳定在-50℃的温度，血浆袋通过与-50℃的低温金属板直接接触进行热传递，由于空气的热传导率仅为0.28 w/m•k，而金属的热传导率为58.02w/m•k是空气的上百倍。因此使得降温效率得到极大的提高，降温过程所需时间更少，因此可以得到更多的凝血因子，得到更好质量的新鲜冰冻血浆。平板接触式速冻技术，虽然出现的时间不长，但是它已经以其强大的技术优势已经在国际上占据了血浆速冻市场40%的份额。

大批量样品进行前处理时，会将样品破碎放冷冻柜里，做时拿一部分解冻进行前处理，一般会提前一天拿出，比如明天早上要做20个样品，今天下班时从冰柜里拿出样品，放室温下解冻，可是当周一要处理样品时，需要周日下午来单位拿出样品，有什么好的方法吗？

水质营养盐测定前，水样是冷冻的，如何快速解冻啊，我解冻了一天也还是不行

小窍门：肉如何快速解冻2009年02月09日13:55 来源：人民网-《生命时报》解冻肉类，恐怕是每个人都遇到过的难题。现在，就为您支几招，让肉类快速解冻。[IMG]http://shipin.people.com.cn/mediafile/200902/09/P200902091356552191730938.jpg[/IMG]　　 　　冷冻前先将肉切成小块或将其压成“饼状”。中国农业大学食品科学与营养工程学院副教授范志红在接受《生命时报》采访时建议，将肉类切成小而薄的小块，够一顿饭的分量就单独装一袋；或者将排骨等带骨的肉类平铺为“饼状”，再放入冰箱。这样就能增加冻肉的受热面积，可避免受热不均的现象，以此加快解冻速度。　　用铝盆解冻冻肉。先把一个铝盆底朝上放在桌上，然后把冻肉放在铝盆的底上，接着再把另一个铝盆底部朝下，轻轻地压在冻肉上。大约压5分钟左右，即可解冻。这是利用了铝制品极强的导热性，把冻肉两端紧贴在铝锅上时，冻肉就通过铝盆迅速和周围空气做热交换，不停的热交换后，冻肉就会在很短的时间化开了。如果家中没有铝锅，铝盖、铝盆同样可以。　　用盐水或醋解冻。把冻肉先放在冰箱冷藏室1—2个小时，就能让冻肉变软。这是因为冷藏室的温度一般在0摄氏度左右，可以先软化冻肉。然后可将肉放在盐水里彻底解冻。这是因为，盐水可以加速冰的融化，而且不会孳生细菌。范志红提醒，自来水不适宜解冻冻肉。此外，还可以将叉子蘸点醋叉入肉中，也可以加快解冻速度。　　微波炉解冻用最低档。范志红提示用微波炉解冻时，一定要用最低档，而且要逐步加热。一开始要先加热两分钟左右，然后根据肉解冻的程度再确定加热时间，直到完全解冻。切忌一开始就加热10分钟。（生命时报 江大红）

冷藏室解冻是最推荐的解冻方式。把要解冻的食物提前从冷藏室取出，用保鲜盒或保鲜袋装好后，放在冷藏室下层解冻。这不仅能最大限度地保留食物的营养和美味，还规避了微生物大量滋生的问题。

最好用微波炉解冻肉，将功率调到低火；其次是提前将肉放在冰箱冷藏室，让它慢慢自行解冻；再次是用流水冲泡冻肉；最不建议的方式是用非流水泡肉解冻。

为什么不建议泡水里解冻？把冷冻食物放进水里，操作容易，而且比肉类在室温中化冻要有效率的多。但是，很多人也发现了，水泡解冻的肉类，口感上远不及自然化冻的肉。这是为什么呢？1. 冷水解冻与空[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相[/url]比，水的热量传导能力更强，所以会比室温解冻花的时间更少，操作起来也方便。但这种方法的缺点也不少：（1）冷水中的细菌多，泡久了容易变质。（2）水很容易带走肉类中的肉汁，使得营养流失更快。（3）水太多容易让肉类的细胞破裂，使得外层的肉变软发白，降低品质和营养。当然，很多生活妙招会建议大家泡盐水来解冻。这虽然可以在一定程度上降低水中微生物的影响，也不容易让细胞破裂，但是盐的浓度比较难控制，要想获得绝佳口感，操作起来比较有难度。2. 热水解冻热水其实可以分两种：60℃以上或60℃以下。如果用60℃以上的，很容易外面熟了，里面还是冰的。如果用60℃以下的，解冻速度确实会快很多，但流失的营养也多，而且这个温度下特别容易滋生细菌。除了省时间外，并不是很理想。3. 流水解冻流水的热量传导效果更好，化冻时间也更短。相比冷水浸泡，流水可以带走一部分细菌，让食材更卫生，但同时也会加速营养流失。而且，这种方法十分浪费水，故而并不提倡。

冻品（肉制品、水产品、豆制品等）解冻后售卖还标榜宣传为鲜品，比如解冻肉制品分切穿串后冷藏当鲜串售卖，个人认为这就是虚假宣传，既不是热鲜也不是0～4℃的冰鲜，冻转鲜还标榜鲜品合法合规么？？？

血清冷冻后又解冻产生的絮状沉淀是什么物质，怎么产生，如何分离，对血液中药物浓度的检测有怎样的的影响？检测时取样，如何避免取到絮状沉淀，若无法避免，取样量将怎样折算？求大神指教，拜托( ??? ? ??? )

冷冻之后的牛奶，解冻后检测会影响那些理化指标？一些牛奶检测，由于保质期比较短，需要封存备样，通过冷冻保存，能够到达预想的效果吗？解冻之后会改变那些理化指标呢？

液氮槽vaporphase长期储存。-20℃不可超过1小时，以防止胞内冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃冰箱中，惟存活率稍微降低一些。（2）程序降温：利用已设定程序的等速降温机以-1～-3℃/分钟之速度由室温降至（-80℃以下）-120℃，再放在液氮槽vaporphase长期储存。适用于悬浮型细胞与hybridoma之保存。3、步骤：（1）冷冻前24-48小时更换半量或全量培养基，使细胞处于指数生长期。（2）配制冷冻保存溶液(使用前配制)：另取一离心管，加入培养基、血清，逐滴加入二甲基亚砜（DMSO）至20%浓度，即制成双倍的冻存液，置于室温下待用。（3）离心收集培养之细胞，用加血清的培养基重悬起细胞，取少量细胞悬浮液(约0.1ml)计数细胞浓度及冻前存活率。（4）取与细胞悬液等量的冻存液，缓慢逐滴加入细胞悬液，并晃动试管，制成细胞冻存悬液（DMSO最后浓度为5～10％），使细胞浓度为1～5×106cells/ml，混合均匀，分装于已标示完全之冷冻保存管中，1～2ml/vial，并取少量细胞悬浮液作污染检测。严密封口后，注明细胞名称、代数、日期。然后进行冻存。4、注意事项：（1）欲冷冻保存之细胞应在生长良好(logphase)且存活率高之状态，约为80～90％致密度。冷冻前检测细胞是否仍保有其特有性质，例如hybridoma应在冷冻保存前一至二日测试是否有抗体之产生。（2）细胞在液氮中可长期冻存无限时间，而不会影响细胞活力；在-70度可保存数月。（3）注意冷冻保护剂之品质。DMSO应为试剂级等级，无菌且无色(以0.22micron　FGLP　Telflon过滤或是直接购买无菌产品，如Sigma D-2650)，以5～10ml小体积分装，4℃避光保存，勿作多次解冻。Glycerol亦应为试剂级等级，以高压蒸汽灭菌后避光保存。在开启后一年内使用，因长期储存后对细胞会有毒性。本方法中先制备双倍冻存液，可避免DMSO直接加入时释放的热量对细胞的损伤。缓慢逐滴加入细胞悬液是使细胞逐步适应高渗，可降低细胞受损。DMSO可能引起部分白血病细胞株的分化，可换用10%甘油冻存。（4）冷冻保存之细胞浓度：①normal human fibroblast:1～3×106cells/ml②hybridoma:1～3×106cells/ml，细胞浓度不要太高，某些hybridoma会因冷冻浓度太高而在解冻24小时后死去。③adherent tumor lines:5～7×106，依细胞种类而异。Adenocarcinoma解冻后须较高之浓度，而HeLa只需1～3×106cells/ml④other suspensions:5～10×106cells/ml，human lymphocyte须至少5×106cells/ml。（5）冷冻保护剂浓度为5或10％DMSO，若是不确定细胞之冷冻条件，在做冷冻保存之同时，亦应作一个backup culture，以防止冷冻失败。（6）冻存可用10%～90%的血清，一般高浓度血清有助于维护细胞活力，此处介绍20%终浓度有利于细胞悬浮而少沉积（4度时），复苏存活率在80%～90%以上，对原代培养细胞，以90%血清冻存更为有效。二、冷冻细胞活化1、冷冻细胞之活化原则为快速解冻，以避免冰晶重新结晶而对细胞造成伤害，导致细胞之死亡。2、细胞活化后，约需数日，或继代一至二代，其细胞生长或特性表现才会恢复正常(例如产生单株抗体或是其它蛋白质)。3、材料37℃恒温水槽、新鲜培养基、无菌吸管/离心管/培养瓶、液氮或干冰容器4、步骤：（1）操作人员应戴防护面罩及手套，防止冷冻管可能爆裂之伤害。（2）自液氮或干冰容器中取出冷冻管，检查盖子是否旋紧，由于热胀冷缩过程，此时盖子易松掉。（3）将新鲜培养基置于37℃水槽中回温，回温后喷以70%酒精并擦拭之，移入无菌操作台内。（4）取出冷冻管，立即放入37℃水槽中快速解冻，轻摇冷冻管使其在1分钟内全部融化，以70%酒精擦拭保存管外部，移入无菌操作台内。（5）取出解冻之细胞悬浮液，缓缓加入有培养基之培养容器内(稀释比例为1:10～1:15)，混合均匀，放入CO2培养箱培养。取0.1ml解冻细胞悬浮液作存活测试。（6）解冻后是否立即去除冷冻保护剂(例如DMSO或glycerol)，依细胞种类而异，一般而言，大都不需要立即去除冷冻保护剂。惟若要立即去除，则将解冻之细胞悬浮液加入含有5-10ml培养基之离心管内，离心1000rpm，5分钟，移去上清液，加入新鲜培养基，混合均匀，放入CO2培养箱培养。（7）若不需立即去除冷冻保存剂，则在解冻培养后隔日更换培养基。三、细胞计数与存活测试1、原理：（1）计算细胞数目可用血球计数盘或是Coultercounter粒子计数器自动计数。（2）血球计数盘一般有二个chambers，每个chamber中细刻9个1mm2大正方形，其中4个角落之正方形再细刻16个小格，深度均为0.1mm。当chamber上方盖上盖玻片后，每个大正方形之体积为1mm2×0.1mm=1.0x10-4ml。使用时，计数每个大正方形内之细胞数目，乘以稀释倍数，再乘以104，即为每ml中之细胞数目。（3）存活测试之步骤为dyeexclusion，利用染料会渗入死细胞中而呈色，而活细胞因细胞膜完整，染料无法渗入而不会呈色。一般使用蓝色之trypan blue染料，如果细胞不易吸收trypan blue，则用红色之Erythrosin bluish。计算细胞活率：活细胞数/（活细胞数+死细胞数）×100%。计数应在台盼兰染色后数分钟内完成，随时间延长，部分活细胞也开始摄取染料；因为台盼兰对蛋白质有很强的亲和力，用不含血清的稀释液，可以使染色计数更为准确。2、材料：0.4%w/v trypan blue(GibcoBRL15250-061)；Erythosin bluish stain；取0.1gram Erythrosin bluish(SigmaE-9259)及0.05gram preservative methyl paraben(SigmaH-3647)溶于100mlCa++/Mg++freesaline；血球计数盘及盖玻片(Hemocytometerandcoverslip)；计数器(counter)；低倍倒立显微镜；粒子计数器(Coultercounter,CoulterElectronics)。白细胞稀释液（4%乙酸溶液）。3、步骤：（1）取50μl细胞悬浮液与50μl trypan blue(orErythrosinbluish)等体积混合均匀于1.5ml小离心管中。（2）取少许混合液(约15μl)自血球计数盘chamber上方凹槽加入，盖上盖玻片，于100倍倒立显微镜下观察，活细胞不染色，死细胞则为蓝色(或红色-Erythrosin bluish)。（3）计数四个大方格之细胞总数，再除4，乘以稀释倍数(至少乘以2，因与trypanblue等体积混合)，最后乘以104，即为每ml中细胞悬浮液之细胞数。若细胞位于线上，只计上线与右线之细胞(或计下线与左线之细胞)。注：4大格细胞总数×稀释倍数×104/4=细胞数/ml；每一大格的体积=0.1cm×0.1cm×0.01cm=10-4ml计数板计数时，最适浓度为5～10×105细胞/ml，此范围外计数误差偏大。高浓度细胞悬液，可取出部分作稀释或连续稀释后计数。5、范例：T75 monolayer culture制成10ml细胞悬浮液，取0.1ml溶液与0.1ml trypan blue混合均匀于试管中，取少许混合液加入血球计数盘，计数四大方格内之细胞数目。活细胞数/方格：55，62，49，59；死细胞数/方格：5，3，4，6；细胞总数=243平均细胞数/方格=60.75；稀释倍数=2；细胞数/ml：60.75×104×2（稀释倍数）=1.22×106；细胞数/flask（10ml）：1.22×106×10ml=12.2×106存活率：225/243﹦92.6%

血浆加入5%甲酸置于-20℃冻存，化冻后呈果胶颗粒状，求解？是由于ph的改变，一些物质的物理状态发生了变化吗？评论区放照片，特别像果粒橙...

样品解冻后还可以复冻保存吗？

一块肉反复冷冻解冻四次，最后测得的菌落数，竟然是未冷冻前的15倍？日前，央视记者做出这样的实验结论。那么，这种结果是否有可能出现？昨天，记者采访了中国畜产品加工研究会的刘登勇博士，刘登勇博士的专业是肉品加工和质量安全控制，他告诉记者，这种情况是有可能出现的，所以肉解冻完还是最好一次吃掉。反复冷冻解冻，肉变质更快？4次解冻实验后，细菌竟然飙升15倍近日，网上流传一种说法，称肉类反复冷冻解冻后，会加快肉类腐败变质，增加细菌含量。针对这种说法，央视记者找到上海一家实验室，将从市场上买来的鲜肉，在五天中，先进行冰箱冷冻，取出后进行解冻，观察细菌生长的趋势。经过反复四次冷冻和解冻后，最后一次测得的结果，是最初没有冷冻时测试结果的15倍左右，很令人吃惊。为什么低温没把细菌杀死？解冻时细胞膜破裂，流出液体滋生细菌那么，这一实验结果是否有可能出现？对此，记者采访了中国畜产品加工研究会的刘登勇博士。刘登勇博士告诉记者，反复冷冻再解冻，是有可能出现菌落总数增加的情况的，而根据实验所处具体环境的不同，菌落总数增加的情况也会有所不同，不能说就一定会增加15倍或其他倍数。在极低温的冷冻环境下，肉品中的微生物不是应该被冻死了吗？为什么把冷冻完的肉取出来之后，细菌又会滋生呢？这其中又有哪些奥妙呢？对此，刘登勇博士告诉记者，在极低温度的情况下，肉品表面的细菌并不会被完全冻死，只是活力被暂时抑制住了。一旦肉品被从低温环境下取出，细菌就会重新获得有利于其生长的环境。而在这种过程中，有一个因素尤其有助于细菌繁殖。“在冷冻过程中，肉品中的水分会形成很多细小的冰晶，反复多次冷冻和解冻会导致冰晶不断长大，这些冰晶会刺破细胞膜，导致细胞中的液体流出来”，刘登勇博士说，这就是为什么肉解冻后会有少量液体流出来的原因，这些细胞中的水分富含营养，会让细菌繁殖得飞快，而每冷冻一次，就意味着细胞膜被多破坏一次，解冻后流出来的养分就会增加，所以细菌总数也会相应增加。

RT：农残分析过程中，样品经常需要冷冻，样品的冰冻和解冻稳定性跟样品、农药的性质相关？有相应的实验数据么？？期待跟帖讨论！

冻的糕点解冻多少时间做微生物检测比较好？

各位 蔬菜样品冷冻后，解冻到什么程度就可以称样了，冰碴状态还是完全解冻。因为含水分较大。总感觉完全解冻不合适。大家都说说吧，这个感觉很重要，直接关系到你的检测结果是否完全是真实的啊。

生奶冷冻以后再解冻，其测定结果和不冷冻有什么区别尤其脂肪蛋白，是不是变化比较大啊

牛奶放到冰箱冷冻，再解冻还能喝吗？

想问一下做血浆脂肪酸检测，血浆质控样品要经过怎样的处理才能混匀做成质控呀？先前涡旋三分钟定量分析有些脂肪酸RSD相差比较大？所以想问问大家是怎样做的？

[font=SimSun, STSong, &]速冻调制食品是在-18℃冷冻保存，检测时需要先解冻，这个解冻时间肯定会影响菌落总数和大肠菌群的结果，那么检测结果正常写吗[/font]

HPLC法测人血浆对乙酰氨基酚浓度及其药代动力学研究谭广山 ，王本杰，郭瑞臣(山东大学齐鲁医院临床药理研究所，山东济南250012；1．聊城市人民医院，山东聊城252000)摘要：目的 建立HPLC法测人血浆中对乙酰氨基酚浓度，并进行药代动力学研究。方法 血浆样品采用液-液萃取法取，UltimateTM XB—C18(250mm×4.6mm，5μm)色谱柱分离；流动相为乙腈：水(1O：9O，V/V)，流速：1.0mL·min；检测波长237nm。结果 对乙酰氨基酚血药质量浓度在0.025～25μg·mL-1 内的线性关系良好(r=O.9989)，血浆中低、中、高3种浓度(0.05，5，2Oμg·mL-1)的相对回收率在92.9％～92.1％之间；日内RSD≤5.77 %，日间RSD ≤4.24% 。结论本法操作简便、准确、灵敏，适用于乙酰氨基酚的药动学研究。关键词：对乙酰氨基酚 氨酚氢可酮片 药代动力学 HPLC中图分类号：R969．1 文献标识码：A 文章编号：1672—7738(2007)08—0496—03HPLC法测人血浆对乙酰氨基酚浓度及其药代动力学研究

今天给测试中心的一个老师打电话说了我的样品处理方式。我取血浆100ul，加入200ul的乙酸乙酯涡旋3min,然后高速离心12000r/min 10分钟，取上层清液进气质，测试中心的老师说这样不行，必须的衍生化，因为血浆中还有很多的甘油三酯，会污染气质，我看文献都没有衍生化呢？

五糖分子量在2000一下，想做其在血浆中的定量，已知其完全游离于血浆中不与血浆蛋白结合，用3KDa的超滤离心管离心取滤液进样但未出峰，是孔径太小还是提取方法不合适，求指教

本人用沉淀蛋白方法处理血浆样品，100ul血浆+100ul对照品（10ug/ml)+400ul乙腈沉淀后，离心取上清液吹干，100ul流动相复溶，进样20ul，用液相做的，结果发现峰面积比纯的10ug/ml对照品还要大，回收率大于100%，而空白样品中没有干扰，我就比较困惑了，不知道什么原因，请大家帮帮。多谢！

我要用液质联用技术定量检测血浆中的固醇类物质，首先向血浆中加入乙腈，有沉淀产生，需要离心取上清液吗？