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活体基因仪

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活体基因仪相关的论坛

  • TERESA——全球领先的活体基因导入专家

    TERESA®活体基因导入仪是目前国内唯一获准进入人体临床试验的活体电穿孔基因导入装置,系上海交通大学国家“863”成果转化项目,由上海塔瑞莎公司进一步深度开发,其独具的特异性技术参数可以显著提高DNA、RNA等核酸及蛋白、化学小分子物质的导入效率,增强基因表达水平及免疫反应。有别于传统基因导入装置,本产品高效、安全、便携且易于操作,特别适合于动物模型中的活体基因导入研究。(最新发表文章:Jingying Zhou, Allen K.L. Cheung,Zhiwei Chen, et al. PD1-based DNA vaccine amplifies HIV-1 GAG-specific CD8+ Tcells in mice. J Clin Invest.2013, doi:10.1172/JCI64704影响因子:15.43Jingying Zhou, Allen K.L. Cheung,Zhiwei Chen, et al. Potentiating Functional Antigen-specific CD8+ T CellImmunity by a Novel PD1 Isoform-based Fusion DNA Vaccine. Molecular Therapy ,2013, doi:10.1038/mt.2013.63)影响因子:7.04公司简介:上海塔瑞莎生物技术有限公司是坐落于上海张江国家自主创新高科技园区的高科技企业,专注于电脉冲导入技术平台开发近15年,与美国洛克菲勒大学、英国纽卡斯尔大学、中国科学院、清华大学等国内外顶尖科研单位开展了广泛合作,先后申请和获得专利等知识产权近40项,获得“国家十一五和十二五重大科技专项”、及“上海市科委国际合作项目基金”等资助。产品已广泛应用于HIV、HBV、结核、流感、肿瘤、糖尿病等多领域的动物、人类疾病防治研究。

  • 活体电穿孔法介绍

    1、什么是活体电穿孔活体电穿孔法(in vivo electroporation) 是将外源基因通过电场作用,导入动物目标组织或器官。由于这种方法能有效导入外源基因,可在多种组织器官上应用,并且效率较高。活体电穿孔法的原理很简单,在直流电场作用的瞬间,细胞膜表面产生疏水或亲水的微小通道105~115μm ,这种通道能维持几毫秒到几秒,然后自行恢复。在此期间生物大分子如DNA 可通过这种微小的通道进入细胞。近年来活体电穿孔法用于转基因研究的报道不断增多,在基因治疗方面的优势也日趋显著,是一种很好的活体基因导入方法。活体电穿孔法可用于检测瞬时表达系统中载体的表达状况。大量的研究表明活体电穿孔法在基因治疗方面有非常好的应用前景。因此目前国内外对活体电穿孔法介导外源基因转移的研究越来越多。2、活体电穿孔的法的特点 活体电穿孔法基因导入和表达效率较高,它的特点主要在以下几个方面:首先,靶器官的选择面广,理论上任何组织和器官都可以作为活体电穿孔的靶器官。 在用于基因治疗方面,要考虑到靶器官组织生理特性。如果所选择的局部组织细胞不能把所转移基因的表达产物分泌到外周血液循环中,则在某种意义上说已失去了基因导入的价值,这在基因治疗中是关键性的问题。当使用组织特异性表达载体时,研究人员应根据所构建的表达载体来选择基因转移和表达的靶器官组织。例如鱼精蛋白21 启动子可指导外源基因在精母细胞中特异性表达,以小鼠的睾丸作为靶器官将含有鱼精蛋白21启动子的表达载体导入,获得外源基因的表达量远远高于该基因在肝脏和骨骼肌中的表达。其次,对导入的外源基因片段的大小没有限制,从几KB 或十几KB 的表达载体, 到100~200KB 的YAC、BAC基因组 ,都有成功导入并获得表达的报道。此外活体电穿孔法操作简单快速,电穿孔的时间只有几秒钟,而且DNA片段不需要特殊的纯化操作。但电穿孔法也存在一些的缺点:首先,外源基因表达持续的时间很短,虽然外源基因导入后最快可在215 小时有表达,但大多1~2 月后表达量降至很低。外源基因表达的时间主要由于所构建的表达载体和基因导入的靶细胞组织器官不同而存在巨大差异。由于应用不同的表达载体,Muramatsu 在小鼠肝脏进行电穿孔7天后则检测不到外源基因的表达,而Heller 21 天后还可以检测到外源基因的表达。如果选择代谢和酶活动旺盛的组织器官如肝脏,则表达持续时间会较短,表达时间在1 个月以内,但以骨骼肌为靶组织,表达可持续15个月。3、 活体电穿孔法与其他活体基因导入方法的比较 到目前为止,非病毒载体的活体基因导入方法有直接注射法、脂质体法、基因枪法、电穿孔法等。每一种方法都有其各自的特殊性,因此很难将这几种方法进行简单的比较。直接注射法:可将外源基因直接注射到靶位点或血管中,但此种方法不适合以肌肉作为靶器官,它的外源基因表达效率极低,仅为电穿孔法的百分之一。脂质体法:活体基因转移法中脂质体法更适宜较大面积组织的基因导入,但无法避免DNA浓度变低,在出血的情况下会使本来不高的DNA浓度更加降低,往往造成基因导入效率低。基因枪法:适合于DNA较易接触到的质地较坚韧的组织如皮肤,而视网膜、胚胎和禽类的胚盘等组织会由于机械刺激和出血造成器质性损伤或发育停滞,因而不能用基因枪法完成。DNA包裹的金属颗粒从基因枪发出到达组织表面大多只几百微米的距离,较深层的组织不易操作, 表达效率也较低。Muramatsu报道在材料一致的情况下,电穿孔法的基因导入和表达效率明显高于其它方法,而且电穿孔法适合多种组织的操作 。4 、活体电穿孔法施加条件的研究 波型的选择在电穿孔过程中方波较指数衰减波更能获得较高的基因表达。同时方波只要要求控制电压和时间,十分直观,而指数衰减波需要控制的电压、电容、电阻等参数,这样的条件摸索过程中,方波较指数衰减波更易得到高表达。

  • 机器人可自动探查活体脑细胞内部运作

    中国科技网讯 据物理学家组织网近日报道,美国麻省理工学院和佐治亚理工学院研究人员开发出利用机器人操纵来自动发现和记录活体大脑中神经元信息的方法,即用一种全细胞膜片钳制动一个微小的空心玻璃针,在神经细胞的膜上开孔,以记录其内部电活性。该研究成果刊登在5月6日《自然·方法》期刊上。 这种深入大脑中神经元内部运作的方式可提供大量有用的信息,如电活性模式、细胞内部状况、甚至基因在某一时刻被闭合的剖面。然而,能够实现这个入口非常困难,目前世界上只有极少数实验室在进行尝试,这种自动发现和记录活体大脑中神经元信息的最新方法有望改变该领域研究现状。研究人员证明,在一个细胞检测的计算机程序的引导下,与人工相比,该自动装置识别和记录活老鼠大脑中的神经元信息具有更好的精度和速度。 采用新型自动化装置消除了对活体细胞的活动进行数月定向和长期搜索的需要。采用这种技术,科学家可将大脑中数千个细胞划分成不同类型,还可绘制其彼此之间的连接,并从正常细胞中找出病变细胞。 研究人员称,该方法在研究大脑疾病方面将会尤其有用,如精神分裂症、帕金森氏症、自闭症和癫痫。科学家们一直难以描述这些疾病中一个细胞与其具有电活回路和性能的分子集成。描绘出疾病如何改变活体大脑内特定细胞分子,将会更好地发现药物的靶标。 如果通过人工对这种精密仪器进行操作,需花上4个月的训练时间,最终还可能不是很精准,于是研究人员将这项任务交与机器人来操作,其机械手臂由计算机程序做指导。研究人员说,在神经科学中使用机器人来研究有生命的动物还仅仅是个开始,而像这样的机器人可能被用于在大脑中有目标点地注入药物,或提供基因治疗载体,希望新方法也能激励神经学家追求各类机器人自动化,例如在光遗传学方面,利用光有针对性地干扰神经回路和确定神经元在大脑功能中发挥的因果作用。(记者 华凌) 《科技日报》(2012-05-11 二版)

  • 活体荧光寿命光度测量系统

    [url=http://www.f-lab.cn/microscopes-system/tcspec.html][b]活体荧光寿命光度测量系统[/b][/url]能够同时[b]测量活体荧光寿命和光度值[/b],它采用时间[b]相关单光子计数TCSPC[/b]技术,非常适合动物活体荧光寿命测量和组织荧光寿命测量和光度测量。采用皮秒激光器和单光子计数探测器,集成高速电路,光学和光纤探测器,有力保证了荧光寿命测量。活体荧光寿命测量系统配备了灵活软件,使得用户随意移动动物,也可测量荧光寿命并记录光度值。而配备了4个光纤探测器确保了整套荧光寿命测量系统可以重复,长时间并且同时测量样品。[img=活体荧光寿命光度测量系统]http://www.f-lab.cn/Upload/tcspec.jpg[/img][b]活体荧光寿命测量系统特点[/b]采用TCSPC时间分辨单光子计数技术,时间通道宽度降低到813飞秒采样间隔高达10微秒皮秒脉冲激光光源可提供445nm, 473nm, 488nm, 515nm, 和640nm 波长供选择配备4个单光子计数探测器覆盖450-700nm能够与其它动物行为记录仪器和电生理学以及基因仪器同步使用方便移动,配备手推车[img=活体荧光寿命光度测量系统]http://www.f-lab.cn/Upload/fluorescence-lifetime-1.JPG[/img][b]活体荧光寿命测量的意义[/b]荧光强度揭示发光样品的相对丰度,而荧光寿命能够反映出直接生化环境(比如氧化,还原,PH值),分子交互作用(比如通过FRET释放小分子)以及分子内部变化。通过定量分析荧光寿命图像和光谱数据,就可知道功能荧光分子或荧光蛋白,这对于探索常规组织的活体生化化学,疾病机理以及研究药物对于组织影响非常重要。活体荧光寿命测量光度系统领先的技术这款活体荧光寿命测量系统结构紧凑,具有超高的时间分辨率,非常适合活体生物化学信号采集分析,广泛用于生命科学,医学,动物学,用于人类疾病临床前研究和药物研发以及生命科学和医学研究。这套系统采用时间分辨单光子计数技术,具有超高的时间分辨率(皮秒到纳秒),能够记录实时动态荧光信息,结合FRET技术和仪器,可提供2-8nm 尺度的超高孔径分辨率[img=活体荧光寿命光度测量系统]http://www.f-lab.cn/Upload/fluorescence-lifetime-2.JPG[/img][b]活体荧光寿命测量光度系统典型应用[/b]脑科学研究行为科学研究动态钙记录疾病机理研究神经学研究电生理学研究自由移动动物学研究[b]活体荧光寿命测量光度系统[/b]:[url]http://www.f-lab.cn/microscopes-system/tcspec.html[/url]

  • 活体细胞内实现DNA可擦写数据存储 或可成为研究癌症、衰老和有机体发展的强大工具

    中国科技网讯 据物理学家组织网5月21日报道,斯坦福大学生物工程系的科学家创建了一种新系统,能够重复编码、擦写和储存活体细胞DNA中的数据。他们表示,可编程的数据存储在活体细胞的DNA内,或可成为研究癌症、衰老和有机体发展等的强大工具。相关研究报告发表在同日出版的美国《国家科学院学报》上。 虽然基因物质本身就具备天然的数据存储介质,但支持科学家可靠且可逆地将信息写入活体DNA的工具仍十分匮乏。以前的研究虽可通过单个酶的表达朝一个方向翻转基因序列,但这一过程并不可逆,而科研人员需要不断翻转基因序列以创建可完全重复使用的数据存储器。 科学家坦言,虽然翻转DNA的截面至两个方向之一并不困难,但获取蛋白质水平的平衡却非易事。为了使新系统正常工作,研究团队需要精确控制微生物内两个对立蛋白质、整合酶和切除酶的动态。 他们经过3年多达750次的尝试,最终成功创建了相当于1比特(1位)的基因物质。相关人员解释说,如果DNA的截面指向一个方向,它就是0,如果指向另一个方向,其就是1。由此,科研人员能计算出细胞分裂的次数,这或将赋予科学家制止细胞癌变发生的能力。 研究小组将这款设备命名为“重组酶可寻址数据”模块(RAD)。RAD可借助改编自噬菌体的丝氨酸和切除酶来按需翻转和还原特定的DNA序列。这将形成类似于计算机领域的“永久性数据存储”,能在无功耗的情况下保留信息。随后,科研小组在单个微生物内对RAD模块进行了测试,其在缺乏基因表达的情况下也能被动存储信息,十分可靠。此外,它们能重复切换而不使性能发生退化,使科学家目睹细胞分裂100余次,这对支持组合化的数据存储十分重要。 研究人员表示,他们未来的目标是尽快创建可扩展的、可靠的生物位,实现1字节的可编程基因数据的存储,随后再逐步挖掘基因数据存储更广泛的应用范围。(记者 张巍巍) 《科技日报》(2012-05-23 二版)

  • 近红外活体荧光成像系统介绍

    [url=http://www.f-lab.cn/vivo-imaging/fluobeam-imaging.html][b]近红外活体荧光成像系统[/b][/url]是开放式[b]活体荧光成像系统[/b]和[b]体内荧光成像系统[/b],是非侵入性[b]活体荧光成像系统品牌[/b]中具有适中的[b]活体荧光成像系统价格[/b],也可用于术中荧光成像.[b]近红外活体荧光成像系统[/b]fluobeam提供各种活体动物实时荧光图像和荧光成像视频,适合各种大小活体动物无创荧光成像,也可用于及手术或切除手术术中荧光成像.[b]近红外活体荧光成像系统[/b]fluobeam超级小巧而紧凑,适用于各种实验室研究,广泛兼容各种荧光探针,适用于不同的活体研究领域。[b]近红外活体荧光成像系统[/b]应用领域包括:• 肿瘤学淋巴结定位• 的分布和发展• 靶向探针• 心血管研究• 免疫学和传染病 [img=近红外活体荧光成像系统]http://www.f-lab.cn/Upload/fluoptics_system_imaging.jpg[/img][b]近红外活体荧光成像系统[/b]fluobeam不同波长选择:• fluobeam800• fluobeam700• fluobeam650• fluobeam600• fluobeam500[img=近红外活体荧光成像系统]http://www.f-lab.cn/Upload/fluobeam-results.png[/img]近红外活体荧光成像系统:[url]http://www.f-lab.cn/vivo-imaging/fluobeam-imaging.html[/url]

  • 双波长活体荧光成像系统特点

    [url=http://www.f-lab.cn/vivo-imaging/lab-flare.html][b]双波长活体荧光成像系统[/b][/url]是最先进的开放空间[b]近红外荧光成像系统[/b],能够真正同时获得彩色视频和两种不同波长的[b]近红外荧光图像,[/b]广泛用于[b]体外近红外荧光成像分析,活体近红外荧光成像分析,荧光造影剂研发,低温荧光层析成像[/b]等应用。双波长活体荧光成像系统是实验室近红外荧光成像研究的理想仪器,它提供A/D、D/A、TTL输入和输出,使复杂的重复实验自动化完成双波长活体荧光成像系统采用2个紧凑荧光成像头通过长距离六自由度运动支架和电磁制动臂连接到可移动的小车上,方便移动使用,并具有多种无菌操作和减少反射伪影的附件也可供使用。双波长活体荧光成像系统应用体外近红外荧光成像分析活体近红外荧光成像分析新型近红外荧光造影剂的研制低温荧光层析成像[img=双波长活体荧光成像系统]http://www.f-lab.cn/Upload/flare-open-imaging-R1.JPG[/img]双波长活体荧光成像系统规格参数视场 从0.9厘米到25.3厘米不等。工作距离 从12"到18"[b]不等[/b]分辨率 从50微米到500微米光照波段 3(彩色视频,近红外通道# 1、近红外通道# 2)同时成像通道 3通道(彩色视频,近红外通道# 1、近红外通道# 2)无菌使用 通过专有的悬垂/盾牌组合。见附件标签。可移植性好 4医用个人脚轮刹车运输 可重复使用,防水,防火,防震运输箱声明 仅用于实验室研究使用。不用于人类或动物诊断。[img=双波长活体荧光成像系统]http://www.f-lab.cn/Upload/FLARE-OPEN-imagin_300x239.png[/img][img=双波长活体荧光成像系统]http://www.f-lab.cn/Upload/FLARE-OPEN-imagin_300x239.png[/img]双波长活体荧光成像系统:[url]http://www.f-lab.cn/vivo-imaging/lab-flare.html[/url]

  • 拉曼光谱仪无创活体检测

    请教一下各位老师学者,有没有做过用拉曼光谱仪进行人体活体检测的实验,例如,眼前房的房水葡萄糖浓度的在体测量,有的话不吝赐教!

  • 活体显微镜

    [url=http://www.leica-microsystems.com/cn/%E4%BA%A7%E5%93%81/%E5%85%89%E5%AD%A6%E6%98%BE%E5%BE%AE%E9%95%9C/%E7%94%9F%E5%91%BD%E7%A7%91%E5%AD%A6%E7%A0%94%E7%A9%B6/%E5%80%92%E7%BD%AE%E6%98%BE%E5%BE%AE%E9%95%9C/the-leica-dmi8]活体显微镜[/url]用于对小动物活体进行观察,其可对小动物活体进行细胞级的研究。该显微镜可以将探头以满足微创的方式插入到动物体内任何部位进行观察,有些甚至可以在动物清醒的时候进行实验。该显微镜避免了做解剖切片的繁琐步骤,可以一直对同一动物进行研究,免除了因不同动物个体差异给实验带来的误差,简化并优化了实验步骤。目前该显微镜已应用于肿瘤,周围和中枢神经系统,心血管,干细胞,消化道以及药物研究等多个领域,很多著名高校和知名研究院所已经配备了这种高级显微镜。

  • 【转帖】转基因生物与食品

    转基因生物在联合国公约《生物安全议定书》上,各个国家全部都接受的一个概念,称做“改性活生物体” Living Modified Organisms ,简称 LMOs ,或者叫“遗传饰变生物” Genetically Modified Organisms , GMOs 。 LMOs 或 GMOs 就是指凭借现代生物技术获得的遗传材料新异组合的活生物体。实际上就是将外源 DNA 导入生物体基因组,引起了遗传改变,改变了遗传组成的生物,就是转基因生物。 这里强调活生物体,活体就是能够遗传或者复制遗传材料的生物实体。比如说种子就是一个活体。现代生物技术主要是讲试管核酸技术, DNA 重组或者核酸导入细胞或细胞器,或者是超分类学科的细胞融合,这就是现代生物技术。   转基因食品是转基因生物的产品或者加工品,它可以是活体的,也可以是非活体的。比如说转基因动植物直接产品,转基因的油菜籽,转基因的番茄,还有一些大豆油、大豆,包括豆腐。这些转基因食品主要来源于植物性的转基因生物。目前市场上的转基因动物还不多,几乎没有商业化的生产,主要是转基因的植物。转基因植物从 1996 年开始大面积的推广。   目前全世界转基因的生物的种植,主要集中在四个国家。其中美国与阿根廷两个国家占了 90% ,还有加拿大与中国。这四个国家加在一起占了 99% 。在作物方面主要集中在四种作物。其中大豆与玉米占了 80% ,加上棉花、油菜加在一起达到 99% 。当然,商业化生产已经有几十种转基因的植物,比较大的有小麦、水稻,转基因的鱼等,这些都还有待于环境释放,还没有正式的批准,但是作为转基因的作物品种,都是已经成功了的。   从转的基因来讲,具有三个特性。一个是耐除草剂的基因。耐除草剂的基因占了 77% ,主要是用于大豆 -- Roundup Ready ,中文叫农达。农达实际上就是一种除草剂,草甘膦。转了这种基因以后,使用草甘膦除草剂的时候,所有其它杂草都死,就大豆不死。因此可以省功。此外,抗虫的基因占 15% ,主要是抗虫玉米,抗虫棉花。比如中国种的抗虫棉,可以抗棉铃虫,把一种抗虫的基因转到棉花里面,棉花就能够表达毒性的蛋白质,虫子吃了以后可以致死。另外还有一种双价的,所谓双价就是既耐除草剂又抗虫的,大约占 8% 。   所有这些转基因作物的来源,主要来源于美国的孟山都公司,还有先正达公司,阿凡迪斯公司,这三家公司比较大。其中孟山都公司提供了 91% 的转基因植物的品种。美国也是一个最大的转基因生物释放、生产的国家,它每年要批准 1000 多个商业化申请。   从 80 年代末期以后,国际社会对这方面比较关注。 1992 年在巴西的里约热内卢开的联合国高峰会议,通过了一个叫做《 21 世纪议程》,提出了要重视发展中国家,对环境无害化生物技术的应用。因为发展中国家没有能力来处理转基因的技术。包括一些转基因生物的引进,引进以后,万一发生了环境灾害,它没有能力来处理。所以发展中国家特别关注。因此, 1992 年在高峰会议上通过了一个公约,这个公约就叫《生物多样性公约》。在《生物多样性公约》里面的第 8 条、第 19 条都提到,要各个国家制定能够管制、管理和控制生物技术改变、可能对生物多样性保护和持续利用以及人体健康产生不利影响的活生物体在释放当中产生的风险,公约里面特别强调了要制定一项议定书。目前这个《议定书》有 103 个国家签署了,有 46 个国家已经批准加入,等到 50 个国家批准的时候,这个《议定书》就要生效。中国也在批准手续进行当中。《议定书》的焦点就是关于要控制越境转移,转基因生物出口到另外一个国家,需要进口的国家同意,才能够进口。另外,对进口的转基因生物要进行风险评估、风险管理,还要进行标识,还要提供资料,将这方面涉及的所有的有关资料都要提供给进口的国家。还包括责任与赔偿,发生环境灾害或者对人体健康产生危险以后要有个说法,国家之间要有一个协议,如何进行赔偿。

  • 活体光学成像技术专栏| 活体成像中荧光染料的选择与成像

    活体光学成像技术专栏| 活体成像中荧光染料的选择与成像

    [font='Times New Roman'][font=宋体]上期文章中,[/font][/font][font=宋体]我们介绍了活体成像实验中荧光蛋白的选择方法,荧光蛋白[/font][font=宋体]在[/font][font=宋体]肿瘤细胞株[/font][font=宋体]筛选[/font][font=宋体]、病毒载体[/font][font=宋体]表达[/font][font=宋体]、转基因小鼠[/font][font=宋体]构建[/font][font=宋体]等[/font][font=宋体]应用中被广泛使用[/font][font=宋体]([/font][font=宋体]链接[/font][font=宋体])[/font][font=宋体]。在药物分布、纳米颗粒示踪、干细胞追踪等实验中,往往需要使用荧光染料对材料或细胞进行标记。[/font][font=宋体]本期将为大家介绍[/font][font=宋体]活体成像实验中[/font][font=宋体]常用的荧光染料![/font][font=宋体][color=#ff0000]Cy5.5[/color][/font][font=宋体][color=#ff0000]([/color][/font][font=宋体][color=#ff0000]Ex/Em[font=宋体]:[/font][font=Times New Roman]678/701 nm[/font][/color][/font][font=宋体][color=#ff0000])[/color][/font][font=宋体][color=#ff0000][font=宋体]和[/font]Cy7[/color][/font][font=宋体][color=#ff0000]([/color][/font][font=宋体][color=#ff0000]Ex/Em[font=宋体]:[/font][font=Times New Roman]749/776 nm[/font][/color][/font][font=宋体][color=#ff0000])[/color][/font][font=宋体][color=#ff0000]是[/color][/font][font=宋体][color=#ff0000]对分子标记的[/color][/font][font=宋体][color=#ff0000]最优选择[/color][/font][font=宋体][color=#ff0000]之一;[/color][/font][font=宋体][color=#ff0000][font=宋体]而[/font]DiD[/color][/font][font=宋体][color=#ff0000]([/color][/font][font=宋体][color=#ff0000]Ex/Em[font=宋体]:[/font][font=Times New Roman]644/663 nm[/font][/color][/font][font=宋体][color=#ff0000])[/color][/font][font=宋体][color=#ff0000][font=宋体]、[/font]DiR[/color][/font][font=宋体][color=#ff0000]([/color][/font][font=宋体][color=#ff0000]Ex/Em[font=宋体]:[/font][font=Times New Roman]748/780[/font][/color][/font][font=宋体][color=#ff0000])[/color][/font][font=宋体][color=#ff0000]染料则常用于活体成像实验中对细胞进行标记。[/color][/font][font='Times New Roman'][color=#ff0000]Cy5.5 [/color][/font][font=宋体][color=#ff0000][font=宋体]、[/font]Cy7[/color][/font][font='Times New Roman'][font=宋体]避开[/font][/font][font=宋体]了[/font][font='Times New Roman'][font=宋体]可见光区[/font][/font][font=宋体],[/font][font='Times New Roman'][font=宋体]在生物组织中的穿透深度较大。水和血红蛋白[/font][/font][font=宋体]对[/font][font='Times New Roman']700[font=宋体]~[/font][font=Times New Roman]900 nm[/font][font=宋体]的[/font][/font][font=宋体]光[/font][font='Times New Roman'][font=宋体]吸收都很少,[/font][/font][font=宋体]使得[/font][font='Times New Roman'][font=宋体]近红外光可以[/font][/font][font=宋体]穿透[/font][font='Times New Roman'][font=宋体]组织内部多达[/font]15 cm[font=宋体]。同时,这类染料还拥有紫外光区染料和同位素标记无法具备的生物安全性。[/font][/font][font='Times New Roman'][font=宋体][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/10/202010261000471506_4987_1887_3.png!w575x363.jpg[/img][/font][/font][align=center][font=宋体]DiD[/font][font=宋体]、[/font][font=Times New Roman]DiR[/font][font=宋体]细胞膜荧光探针[/font][/align][font='Times New Roman'][/font][font='Times New Roman'][color=#191919]DiD[/color][/font][font=宋体][color=#191919][font=宋体](红色荧光染料)[/font][/color][/font][font='Times New Roman'][color=#191919][font=Arial]是亲脂性荧光染料家族成员之一,它可以用来[/font][/color][/font][font=宋体][color=#191919][font=宋体]标记[/font][/color][/font][font='Times New Roman'][color=#191919][font=Arial]细胞膜和其它脂溶性生物结构。当[/font]DiD[font=Arial]与细胞膜结合后其荧光强度大大增强,这类染料有着很高的淬灭常数和激发态寿命。一旦对细胞染色,这类染料在整个细胞膜上扩散,最佳浓度时可以使整个细胞膜染色。[/font][font=Times New Roman]DiD[/font][font=Arial]可以用来对活细胞进行成像和流式分析。[/font][/color][/font][font='Times New Roman'][color=#191919]DiR[/color][/font][font=宋体][color=#191919][font=宋体](近红外荧光染料)[/font][/color][/font][font='Times New Roman'][color=#191919][font=Arial]是一个亲脂性[/font][/color][/font][font=宋体][color=#191919][font=宋体]的[/font][/color][/font][font='Times New Roman'][color=#191919][font=Arial]花青[/font][/color][/font][font=宋体][color=#191919][font=宋体]染料[/font][/color][/font][font='Times New Roman'][color=#191919][font=Arial]。常用于标记细胞质膜。[/font]DiR [font=Arial]的两个[/font][font=Times New Roman]18-[/font][font=Arial]碳链插入到细胞膜,从而进行特定的、稳定的细胞染色,几乎不会发生细胞间的染料转移。[/font][/color][/font][font=Arial][color=#191919]DiR[font=Arial]和其他细胞膜荧光染料如 [/font][font=Times New Roman]DiI[/font][font=Arial](橙色荧光),[/font][font=Times New Roman]DiO[/font][font=Arial](绿色荧光),[/font][font=Times New Roman]DiD[/font][font=Arial](红色荧光)配合使用,为多色成像和流式细胞分析提供了有效的工具。[/font][/color][/font][font=Arial][color=#191919][font=Arial][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/10/202010261001339140_6935_1887_3.png!w572x222.jpg[/img][/font][/color][/font][font=Arial][font=宋体][font=宋体]当我们对分子或细胞成功标记后,需要选择合适的仪器进行成像获取实验数据。[/font][/font][/font]

  • 光镊技术成功捕获活体动物细胞

    为活体研究和临床诊断提供了一种全新的技术手段2013年05月09日 来源: 中国科技网 作者: 吴长锋 最新发现与创新 中国科技网讯 中国科学技术大学光学与光学工程系李银妹课题组,近日与上海交通大学魏勋斌教授合作,采用活体动物内的细胞,发展了动物体内细胞三维光学捕获技术。日前,国际著名学术期刊《自然·通讯》在线发表了这项研究成果,网站还以《医学研究:用光清除血管被堵塞的血管》为题对该研究工作进行报道。 在活的动物体内研究细胞生长、迁移、细胞及蛋白质间相互作用等生物学过程,对生命科学、医学研究及临床诊断具有重大意义,因此体内研究技术一直是活体研究热点之一。 李银妹课题组利用光镊技术,首次对活体动物内的细胞实现光学捕获。研究表明,光镊可以直接深入到活体内,对细胞进行有效操控。研究人员用光镊穿过小鼠耳朵真皮层,到达深度约50微米毛细血管中,捕获和操控血管中的红细胞。将光镊固定在血管中心,血管中快速流动的细胞经过光阱时被逐渐减速,直到一个细胞停留在光阱中,光镊将细胞捕获,并实现了三维操控。 课题组还利用光陷阱的作用聚集红细胞,人为制造出血管堵塞;针对血管中已聚集的细胞团簇,拖拽其中一个细胞引导疏通,使聚集的细胞逐渐疏散开,恢复正常血液流动,从而实施非接触手术式的血管疏通。 过去,光镊技术在生物医学领域的应用仅限于体外的单分子和细胞研究。李银妹课题组的这项研究技术能直接深入到动物活体内,对细胞进行实时观察、操控与测量,实施非接触式手术的实验取证,从而开拓了光镊技术研究活体动物新领域,为活体研究和临床诊断提供了一种全新的技术手段。(记者 吴长锋) 《科技日报》(2013-5-9 一版)

  • 日实现活体生物体内蛋白质状态的可视化 有助于高等生物嗅觉信息传递机制的研究

    新华社东京7月10日电(记者蓝建中)日本九州大学和东京大学的一个联合研究小组日前说,他们利用长约1毫米的线虫进行的实验中,首次成功看到活体生物体内蛋白质变化的情况。 九州大学助教广津崇亮等研究人员对线虫头部嗅觉神经中负责传递气味信号的Ras蛋白质进行了研究。他们通过基因操作,将一种发光颜色会随Ras蛋白质状态变化而变化的分子引入线虫的嗅觉神经细胞。这种分子在Ras蛋白质被激活后会发出黄色荧光,未被激活时发蓝光。 研究人员给线虫施加气味刺激,并拍摄了荧光分子的发光情形。结果发现,在施加刺激后Ras蛋白质立即被激活,约3秒钟后迎来活性峰值,之后恢复非活性化状态。 研究人员施加刺激时使用了大肠杆菌产生的一种气味物质。这种大肠杆菌是线虫的食物。此前的研究表明,线虫在寻找食物时,每隔约3秒钟会摆动一下头部,并朝气味强烈的方向前进。研究人员由此认为,Ras蛋白质参与控制了这种行动。 Ras蛋白质是一类能与鸟苷三磷酸结合的蛋白质,参与细胞内的信号转导。由于哺乳动物体内也有这类蛋白质,研究人员认为此次发现将成为弄清高等生物嗅觉信息传递机制的线索。 此外,由于这类蛋白质还与癌症和心脏病等众多疾病的发病相关,所以这一成果还将促进相关的医学研究。 相关论文发表在9日的英国在线科学杂志《科学报道》上。

  • 活体光学成像技术专栏| 活体成像中荧光蛋白的挑选指南

    活体光学成像技术专栏| 活体成像中荧光蛋白的挑选指南

    [font='Times New Roman'][font=宋体]引言[/font][/font][i][font='Times New Roman'][font=宋体]无数科学家的努力下,蛰居在水母的绿色荧光蛋白已经被导入到病毒、放线菌、酵母、植物、果蝇、线虫、小鼠、大鼠、人类细胞等几乎所有的模式生物,荧光蛋白的发现与应用被认为是点亮了生命科学,让黑暗中的生命活动被可视化的展示在科学家眼前。[/font][/font][/i][font='Times New Roman'][font=宋体]上期文章中,我们对比了活体光学成像的两种技术,生物发光和荧光成像的不同点。随着荧光标记技术的进一步发展,荧光成像的应用范围已经大大超过了生物发光,荧光成像已经可以满足绝大多数情况下的实验需求。[/font][/font][font='Times New Roman'][color=#ff0000][font=宋体]荧光成像需要对检测的细胞或分子进行荧光标记[/font][/color][/font][font='Times New Roman'][font=宋体]。目前,主要有两种标记方法,第一种利用[/font][/font][font='Times New Roman'][color=#191919][font=Arial]内源荧光信号[/font][/color][/font][font='Times New Roman'][color=#191919][font=宋体],在细胞中表达荧光蛋白进行标记。第二种利用荧光分子对细胞、药物或纳米颗粒等分子进行标记。[/font][/color][/font][font='Times New Roman'][font=宋体]本期将为大家介绍荧光蛋白[/font][/font][font=宋体][font=宋体]的[/font][/font][font='Times New Roman'][font=宋体]选择方法![/font][/font][align=center][img=,581,228]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/09/202009271417587236_9957_1887_3.png!w581x228.jpg[/img][font='Times New Roman'][color=#191919] [/color][/font][/align][align=center][font='Times New Roman'][color=#191919]Rainbow of fluorescent proteins [Tsien lab][/color][/font][/align][align=center][font='Times New Roman'][color=#191919][font=Arial]选择荧光蛋白建议考虑的参数[/font][/color][/font][/align][font='Times New Roman'][color=#191919]1. [/color][/font][font='Times New Roman'][color=#191919][font=Arial]激发波长[/font]/[font=Arial]发射波长[/font][/color][/font][font='Times New Roman'][color=#191919][font=Arial]:每一种荧光蛋白都有其独特的激发波长和发射波长,因此,选择的荧光蛋白必须是使用的[/font][/color][/font][font='Times New Roman'][color=#191919][font=宋体]成像[/font][/color][/font][font='Times New Roman'][color=#191919][font=Arial]系统能够激发和检测到的。比如,使用的[/font][/color][/font][font='Times New Roman'][color=#191919][font=宋体]成像系统只有两个激发光源:[/font][/color][/font][font='Times New Roman'][color=#191919]488 nm[font=Arial]和[/font][font=Times New Roman]561 nm[/font][/color][/font][font='Times New Roman'][color=#191919][font=宋体]。[/font][/color][/font][font='Times New Roman'][color=#191919][font=Arial]那就不能够选择远红外荧光蛋白。[/font][/color][/font][font='Times New Roman'][color=#191919][font=宋体]同时[/font][/color][/font][font='Times New Roman'][color=#191919][font=Arial]使用超过一个荧光蛋白时,必须确保发射波长没有重叠。[/font][/color][/font][font='Times New Roman'][color=#ff0000][font=宋体]荧光蛋白应用于活体成像实验时,尽量选择红色或近红外的荧光蛋白,这类荧光蛋白的发射波长较长,具有更好的[/font][/color][/font][font=宋体][color=#ff0000][font=宋体]组织[/font][/color][/font][font='Times New Roman'][color=#ff0000][font=宋体]穿透[/font][/color][/font][font=宋体][color=#ff0000][font=宋体]能力。[/font][/color][/font][font='Times New Roman'][color=#191919]2. [font=Arial]寡聚反应[/font][/color][/font][font='Times New Roman'][color=#191919][font=Arial]:[/font][/color][/font][font='Times New Roman'][color=#191919][font=宋体]早期开发的[/font][/color][/font][font='Times New Roman'][color=#191919][font=Arial]荧光蛋白易于寡聚化,[/font][/color][/font][font='Times New Roman'][color=#191919][font=宋体]与[/font][/color][/font][font='Times New Roman'][color=#191919][font=Arial]目的基因融合表达时可能会影响目的基因蛋白的生物学功能。[/font][/color][/font][font='Times New Roman'][color=#ff0000][font=宋体]因此[/font][/color][/font][font='Times New Roman'][color=#ff0000][font=Arial]建议使用单体的荧光蛋白,比如[/font]mCherry[font=Arial]。[/font][/color][/font][font='Times New Roman'][color=#191919]3[/color][/font][font='Times New Roman'][color=#191919]. [font=Arial]亮度[/font][/color][/font][font='Times New Roman'][color=#191919][font=Arial]:荧光蛋白的亮度值由消光系数与量子产率的乘积计算得出。在许多情况下,将荧光蛋白的亮度与[/font]EGFP([font=Arial]设定为[/font][font=Times New Roman]1)[/font][font=Arial]进行比较,有一些荧光蛋白非常暗淡(例如[/font][font=Times New Roman]TagRFP657[/font][font=Arial],其具有亮度只有[/font][font=Times New Roman]0.1[/font][font=Arial])[/font][/color][/font][font='Times New Roman'][color=#191919][font=宋体]。[/font][/color][/font][font='Times New Roman'][color=#ff0000][font=Arial]因此[/font][/color][/font][font='Times New Roman'][color=#ff0000][font=宋体]活体成像实验时,[/font][/color][/font][font='Times New Roman'][color=#ff0000][font=Arial]亮度也需要考虑。[/font][/color][/font][font='Times New Roman'][color=#191919]4[/color][/font][font='Times New Roman'][color=#191919]. pH[font=Arial]稳定性[/font][/color][/font][font='Times New Roman'][color=#191919][font=Arial]:如果计划在酸性环境中表达荧光蛋白,则此参数非常重要,一些荧光蛋白具有不同的[/font][/color][/font][font='Times New Roman'][color=#191919][font=宋体]激发[/font]/[font=宋体]发射[/font][/color][/font][font='Times New Roman'][color=#191919][font=Arial]光谱(例如[/font]mKeima[font=Arial])或在[/font][font=Times New Roman]pH[/font][font=Arial]变化时荧光强度会发生改变(例如[/font][font=Times New Roman]pHluorin[/font][font=Arial],[/font][font=Times New Roman]pHTomato[/font][font=Arial])。[/font][/color][/font][font=宋体][color=#191919]5.[font=宋体]避免自发荧光:[/font][/color][/font][font=宋体][color=#191919][font=宋体]生物体自身的很多物质具有较强的自发荧光,如指甲、毛发具有强烈的绿色背景信号,因此活体成像时需要对动物进行完全的脱毛处理或尽量避免绿色荧光蛋白,可选[/font][/color][/font][font='Times New Roman'][color=#191919]RFP[font=宋体]、[/font][font=Times New Roman]dsRed, mCherry, mTomato[/font][/color][/font][font=宋体][color=#191919][font=宋体]等荧光蛋白。[/font][/color][/font][b][font='Times New Roman'][color=#ff0000] [/color][/font][font='Times New Roman'][font=Arial]在选择好了荧光蛋白后,后续就是做实验、拿数据、发文章了![/font][/font][/b][font='Times New Roman'][font=Arial]可[/font][/font][font='Times New Roman'][color=#191919][font=Arial]是选用什么成像[/font][/color][/font][font=Arial][color=#191919][font=Arial]设备[/font][/color][/font][font='Times New Roman'][color=#191919][font=Arial]好呢?[url=http://dwz.date/cwes]点击了解更多详情![/url][/font][/color][/font]

  • 【求助】植物活体取样 内吸杀虫剂

    老板最近产生了个新想法,想做活体检测蔬菜果实内的活内吸活体杀虫剂的残留。小弟不是分析科班出身,老板也没做过,非常迷茫。希望各位大侠帮帮忙。搜了搜文献,倒是有用微透析做取样的,但看上去挺麻烦,有没有人能给俺指条明路呢。。。

  • 活体叶面积测定仪对花生不同播种期是怎么测定的?

    活体叶面积仪对花生不同播种期是怎么测定的? 绿叶是花生进行光合作用的重要的也是主要的载体,叶片面积的大小是生物量和产量高低的重要参考指标和影响因素。对于不同密度、施肥量或者是播种时期的变化都会引起花生产量的变化。为了提高产量在种植的过程中应该注重这些方面的控制和把握,应用活体叶面积仪及时测定叶片面积的大小,做好以上工作使得花生绿叶进行适合的光合作用。  叶面积指数随生育进程呈抛物线变化,在苗期发展缓慢,进入开花下针期以后,叶面积发展加快,到结荚期达到高峰,以后缓慢下降。不同施肥水平间叶面积指数差异明显,处理植株生长缓慢,发育迟缓,因而叶面积指数较小;处理由于施肥量较大,虽然田间叶面积指数较大,但由于叶片相互郁闭,不通风、不透光,因而出现功能叶片过早衰落而影响产量。密度过大或过小对合理叶面积指数动态发展不利。密度为16.5万株/hm2时,叶面积指数最高为4.25,未能充分利用光能,群体产量低;当密度为19.5万株/hm2时,活体叶面积测定仪测定计算最高叶面积指数为5.96,且能保持较长时间,能充分利用光能,通风透光良好,因而产量最高。密度为21.0万株/hm2时,结荚期的叶面积指数达7.39,然后到饱果成熟期迅速下降,这是由于密度过大,遮荫严重,导致下部叶片过早衰落的结果。对不同的播种期,活体叶面积测定仪每个时期的测量值具有一定的差距,同时随着播期的时间的推迟,叶面积指数自然也会跟着降低,但是成熟时随播期的推迟反而会越来越大,这主要是因为成熟时期花生的叶片已经基本上失去光合作用的能力,因此叶面积会逐渐的减少。

  • 硝酸还原酶活力测定(活体法)

    一、原理硝酸还原酶(NR)是植物氮素同化的关键酶,它催化植物体内的硝酸盐还原为亚硝酸盐,产生的亚硝酸盐与对–氨基苯磺酸(或对–氨基苯磺酰胺)及α–萘胺(或萘基乙烯二胺)在酸性条件下定量生成红色偶氮化合物。其反应如下: http://tong.dxy.cn/upload/asset/2009/10/26/1256434988.jpg生成的红色偶氮化合物在540nm波长下有最大吸收峰,可用分光光度法测定。硝酸还原酶活性可由产生的亚硝态氮的量表示。一般以Nμg·g-1·h-1为单位。NR的测定可分为活体法和离体法。活体法步骤简单,适合快速、多组测定。离体法复杂,但重复性较好。二、仪器与用具分光光度计;真空抽气泵(或20ml注射器筒);天平;单面刀片;保温箱(或恒温水浴);刻度试管(15ml);移液管(5ml×2,2ml×8,1ml×2)。三、试剂1. 亚硝酸钠标准液 称取分析纯NaNO2 0.1000g水溶后定容至100ml,吸取5ml用水稀释定容至1000ml,即为每ml含NaNO2 5μg(亚硝态氮近似1μg/ml)的标准液。2. 0.1mol/L pH7.5的磷酸缓冲液:K2HPO4 19.24g,KH2PO4 2.2g,加水溶解后定容至1000ml。3. 1%(W/V)对-氨基苯磺酸溶液:称取1.0g加入25ml浓HCl中,用蒸馏水定容至100ml。4. 0.2%(W/V)α-萘胺溶液:称取0.2gα-萘胺溶于25ml冰醋酸中,用蒸馏水定容至100ml。5. 30%三氯乙酸溶液:75.0g三氯乙酸水溶后定容250ml。6. KNO3(0.1mol/L)、异丙醇(1% V/V)、磷酸缓冲液(0.1mol/L)混合液:称3.03g KNO3溶于300ml 0.1mol/L的磷酸缓冲液中,再加3ml异丙醇混匀。四、方法1. 标准曲线制作取7支洁净烘干的15ml刻度试管按表13-1顺序加试剂,即配成0-2.0μg的系列标准亚硝态氮溶液。摇匀后在30℃保温箱或恒温水浴中保温30min,然后在540nm波长下比色。以亚硝态氮(μg)为横坐标,光密度值为纵坐标绘标准曲线或建立回归方程。表13-1 各试剂加入顺序 http://tong.dxy.cn/upload/asset/2009/10/26/1256434989.jpg

  • 活体光学成像技术专栏| 荧光成像与生物发光成像技术的比较

    [i][font='Times New Roman'][font=宋体]引言[/font][/font][/i][font='Times New Roman'][font=宋体]在上一期的专栏里[/font][/font][font=宋体],我们对荧光成像和生物发光的基本原理进行了对比。同时也留下了几个问题:[/font][font='Times New Roman'][font=宋体]针对我的课题[/font][/font][font=宋体],生物发光和荧光成像哪个好?什么情况下选择生物发光,什么情况下选择荧光成像。别急,今天将为大家解答关键问题:[/font][b][font=宋体][color=#ff0000]荧光成像和生物发光成像的优缺点是什么?[/color][/font][/b][align=center][font='Times New Roman']一、 [/font][b][font=宋体]荧光成像技术的优点[/font][/b][/align][font='Times New Roman'][font=宋体]相比生物发光成像[/font][/font][font=宋体],[/font][font='Times New Roman'][font=宋体]荧光成像技术的优势主要表现在[/font][/font][font=宋体]:[/font][font='Times New Roman']1. [/font][b][font='Times New Roman'][font=宋体]荧光蛋白及荧光染料的标记能力更强[/font][/font][font=宋体]。[/font][/b][font=宋体]荧光标记分子种类繁多,包括荧光蛋白、荧光染料、量子点标记等,可以对基因、蛋白、抗体、化合药物等进行标记。[/font][font=宋体][color=#ff0000]应用范围极广[/color][/font][font=宋体],可以对样本进行[/font][font=宋体][color=#ff0000]多色标记[/color][/font][font=宋体],一个样本同时获得多种细胞或药物的分布[/font][font=宋体]。[/font][font='Times New Roman']2. [/font][b][font='Times New Roman'][font=宋体]信号强度[/font][/font][font=宋体]高[/font][/b][font=宋体]由于荧光成像的[/font][font=宋体][color=#ff0000]光子强度较生物发光更强[/color][/font][font=宋体][font=宋体],持续时间长,对[/font]C[/font][font='Times New Roman']CD[/font][font=宋体]的灵敏度要求相对较低,不需要必须配备低温冷[/font][font='Times New Roman']CCD[font=宋体]即可获得清晰的成像结果,节省实验成本和购置成本。[/font][/font][font='Times New Roman']3. [/font][b][font='Times New Roman'][font=宋体]实验成本低[/font][/font][font=宋体],[/font][font='Times New Roman'][font=宋体]成像过程简单[/font][/font][/b][font='Times New Roman'][font=宋体]相比生物发光成像,成像前无需注射荧光素酶底物。有合适的激发光源照射就可以发出特定波长的发射光[/font][/font][font=宋体]。[/font][font='Times New Roman'][font=宋体]只要荧光基团稳定,就可实现[/font][/font][font='Times New Roman'][color=#ff0000][font=宋体]随时激发随时发光随时检测[/font][/color][/font][font='Times New Roman'][font=宋体]。[/font][/font][font='Times New Roman']4. [/font][b][font=宋体]从活体到离体均可成像[/font][/b][font=宋体][font=宋体]相比生物发光只能在活细胞内才会产生发光。荧光蛋白或荧光染料只需要保持荧光基团稳定即可稳定发光。可以在活体或离体组织器官进行观察,在实验前期荧光材料制备阶段,可以直接在[/font]E[/font][font='Times New Roman']P[font=宋体]管中进行成像观察[/font][/font][font=宋体]。[/font][font='Times New Roman']5. [/font][b][font=宋体]应用范围广[/font][/b][font=宋体]相比生物发光成像,荧光成像技术应用范围极广。在肿瘤生长与转移、药物的分布与代谢、纳米颗粒的靶向性与代谢、植物基因的表达、生物相容性材料开发、新型标记技术的开发等多个研究中均可用到荧光成像技术。([/font][font=宋体][color=#ff0000][font=宋体]点击了解[/font]FOBI[font=宋体]整体荧光成像在上述领域的应用[/font][/color][/font][font=宋体])[/font][align=center][font='Times New Roman']二、 [b][font=宋体]生物发光技术的优点[/font][/b][/font][/align][font='Times New Roman'][font=宋体]相比荧光成像[/font][/font][font=宋体],生物发光成像的主要优势表现在:[/font][b][font=宋体]1[font=宋体]、特异性强,无自发荧光[/font][/font][/b][font=宋体]以荧光素酶作为体内报告源的生物发光方法,特异性极强。由于动物本身没有任何自发光,使得生物发光具有极低的背景和极高的信噪比。[/font][b][font=宋体]2[font=宋体]、[/font][/font][font='Times New Roman'][font=宋体]高灵敏度[/font][/font][/b][font='Times New Roman'][font=宋体]由于生物体内很多物质在激发光的照射[/font][/font][font=宋体]下[/font][font='Times New Roman'][font=宋体]也会发出荧光[/font][/font][font=宋体],[/font][font='Times New Roman'][font=宋体]这些非特异性荧光背景会影响检测灵敏度[/font][/font][font=宋体],[/font][font='Times New Roman'][font=宋体]荧光成像的灵敏度最高可在动物体内检测到约[/font]10[/font][sup][font='Times New Roman']4[/font][/sup][font='Times New Roman'][font=宋体]细胞,而生物发光具有在动物体内监测[/font]10[/font][sup][font='Times New Roman']2[/font][/sup][font='Times New Roman'][font=宋体]数量级细胞的灵敏度。[/font][/font][b][font=宋体]3[font=宋体]、检测深度更高[/font][/font][/b][font='Times New Roman'][font=宋体]对于需要在深部[/font][/font][font=宋体]组织[/font][font='Times New Roman'][font=宋体]下进行的研究(检测的深度在[/font]3~4cm[font=宋体])[/font][/font][font=宋体],[/font][font='Times New Roman'][font=宋体]应用生物发光是最佳的选择[/font][/font][font=宋体]。[/font][b][font=宋体]4[font=宋体]、[/font][/font][font='Times New Roman'][font=宋体]精确定量[/font][/font][/b][font=宋体]由于荧光素酶基因是插入细胞染色体中稳定表达的,单位细胞的发光数量、发光条件相对稳定。即使标记细胞在动物体内有复杂的定位,亦可从动物体表的信号水平测量出发光细胞的相对数量。[/font][font='Times New Roman'][color=#ff0000][font=宋体]荧光成像和生物发光技术[/font][/color][/font][font=宋体][color=#ff0000],[/color][/font][font='Times New Roman'][color=#ff0000][font=宋体]是互为补充[/font][/color][/font][font=宋体][color=#ff0000],[/color][/font][font='Times New Roman'][color=#ff0000][font=宋体]分别满足不同的研究领域[/font][/color][/font][font=宋体][color=#ff0000]。对于不同的研究,可根据两者的特定及实验要求,选择合适的方法。[/color][/font][table][tr][td][font='Times New Roman'] [/font][/td][td][align=center][font='Times New Roman']优点[/font][/align][/td][td][align=center][font=宋体]缺点[/font][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][font=宋体]荧光成像技术[/font][/align][/td][td][font=Wingdings][color=#333333]2 [/color][/font][font=Verdana][color=#333333]荧光染料、蛋白标记能力强,可用于多重标记[/color][/font][font=宋体][color=#333333],[/color][/font][font=Verdana][color=#333333]信号强度大,成像速度快[/color][/font][font=宋体][color=#333333]。[/color][/font][font=Wingdings][color=#333333]2 [/color][/font][font=Verdana][color=#333333]实验成本低[/color][/font][font=宋体][color=#333333]。[/color][/font][font=Wingdings][color=#333333]2 [/color][/font][font=宋体][color=#333333]体内、体外,器官、活体均可成像。[/color][/font][font=Verdana][color=#333333] [/color][/font][font=Wingdings][color=#333333]2 [/color][/font][font=Verdana][color=#333333]应用范围极广[/color][/font][/td][td][font=Wingdings][color=#333333]n [/color][/font][font=Verdana][color=#333333]非特异性荧光限制了灵敏度,体内检测最低约[font=Verdana]104[/font][font=宋体]细胞[/font][/color][/font][font=宋体][color=#333333]。[/color][/font][font=Wingdings][color=#333333]n [/color][/font][font=Verdana][color=#333333]检测深度受限制[/color][/font][font=宋体][color=#333333],[/color][/font][font=Verdana][color=#333333]较难精确体内定量[font=Verdana] [/font][/color][/font][font=宋体][color=#333333]。[/color][/font][/td][/tr][tr][td][align=center][font=宋体]生物发光技术[/font][/align][/td][td][font=Wingdings][color=#333333]2 [/color][/font][font=Verdana][color=#333333]特异性强,无自发荧光[/color][/font][font=宋体][color=#333333],[/color][/font][font=Verdana][color=#333333]背景低[/color][/font][font=宋体][color=#333333]。[/color][/font][font=Wingdings][color=#333333]2 [/color][/font][font=Verdana][color=#333333]高灵敏度,在体内可检测到几百个细胞[/color][/font][font=Wingdings][color=#333333]2 [/color][/font][font=Verdana][color=#333333]可精确定量[/color][/font][font=宋体][color=#333333]。[/color][/font][/td][td][font=Wingdings][color=#333333]n [/color][/font][font=Verdana][color=#333333]信号较弱,检测时间较长,需要灵敏的[font=Verdana]CCD[/font][font=宋体]镜头,仪器价格贵[/font][/color][/font][font=宋体][color=#333333]。[/color][/font][font=Wingdings][color=#333333]n [/color][/font][font=Verdana][color=#333333]要求高[/color][/font][font=宋体][color=#333333],[/color][/font][font=Verdana][color=#333333]需要注入荧光素,实验成本高[/color][/font][font=宋体][color=#333333]。[/color][/font][font=Wingdings][color=#333333]n [/color][/font][font=宋体][color=#333333]只能用于细胞标记,应用范围窄。[/color][/font][/td][/tr][/table][i][font=宋体]结束语[/font][/i][font=宋体]随着活体成像技术的发展特别是荧光标记技术的发展,越来越多的生物学研究需要用到活体光学成像的方法。无论大家是选择生物发光或者荧光成像技术,苦恼总是随之而来,例如:[/font][font=宋体][color=#ff0000]生物素在体内可以维持多长时间?荧光蛋白和染料种类繁多,我该怎样选择呀?[/color][/font][font=宋体][font=宋体]别急,下期我们继续为大家介绍关于活体成像技术应用与选择的问题与难点。[/font][/font][font=宋体][font=宋体][url=http://dwz.date/cwes]点击了解更多活体成像技术的应用与仪器信息![/url][/font][/font][align=center][font='Times New Roman'][font=宋体]参考文献[/font][/font][/align][font='Segoe UI'][color=#222222]1. [/color][/font][font='Segoe UI'][color=#222222]Su, Y., Walker, J.R., Park, Y. [/color][/font][i][font='Segoe UI'][color=#222222]et al.[/color][/font][/i][font='Segoe UI'][color=#222222] Novel NanoLuc substrates enable bright two-population bioluminescence imaging in animals. [/color][/font][i][font='Segoe UI'][color=#222222]Nat Methods[/color][/font][/i][font='Segoe UI'][color=#222222] [/color][/font][b][font='Segoe UI'][color=#222222]17, [/color][/font][/b][font='Segoe UI'][color=#222222]852–860 (2020). [/color][/font][font='Segoe UI'][color=#222222]2. [/color][/font][url=#!][font='Segoe UI'][color=#222222]M.Keyaerts[/color][/font][/url][url=#!][font='Segoe UI'][color=#222222]V.Caveliers[/color][/font][/url][url=#!][font='Segoe UI'][color=#222222]T.Lahoutte[/color][/font][/url][font='Segoe UI'][color=#222222] [/color][/font][url=https://www.sciencedirect.com/science/referenceworks/9780444536334][font='Segoe UI'][color=#222222]Comprehensive Biomedical Physics[/color][/font][/url][font=等线][color=#222222] [/color][/font][url=https://www.sciencedirect.com/science/referenceworks/9780128012383][font='Segoe UI'][color=#222222]Volume 4[/color][/font][/url][font='Segoe UI'][color=#222222], 2014, Pages 245-256.[/color][/font]

  • 警惕药物中的“基因毒性杂质”

    近几年频频出现药物制剂中检出基因毒性杂质残留而被召回的事件。何为基因毒性杂质呢?“基因毒性杂质”(又称遗传毒性杂质Genotoxic Impurity ,GTI),是指本身直接或间接损伤细胞DNA,产生基因突变或体内诱变,具有致癌可能或者倾向的化合物。其主要来源为原料药合成过程中的起始物料、中间体、试剂和反应副产物,此外,药物在合成、储存或者制剂过程中也可能因为降解而产生基因毒性杂质,因其特点为毒性极强,在很低浓度时即可造成人体遗传物质的损伤,进而导致基因突变并可能促使肿瘤的发生,对用药的安全性产生了强烈的威胁。化学药品中的典型基因毒性杂质包括亚硝胺类杂质和磺酸酯类杂质,它们经过代谢激活后基因毒性非常强,是药物研发过程当中最易产生且需严格把控的基因毒性杂质。因此,各国的法规机构如ICH、FDA、EMA等都对基因毒性杂质提出了明确的要求,越来越多的药企在创新药和仿制药研发过程中也更加关注基因毒性杂质的控制和检测。2020 版《中国药典》四部通则中新增了《遗传毒性杂质控制指导原则》,本指导原则对基因毒性杂质的监管策略与ICH M7指导原则几乎保持一致。2020年5月国家药监局药审中心网站发布了《化学药物中亚硝胺类杂质研究技术指导原则》,该原则为注册申请上市以及已上市化学药品中亚硝胺类杂质的研究和控制提供了指导。在理论上,大部分药物都存在残留基因毒性杂质或被基因毒性杂质污染的风险,因此建立便捷、高效的分析方法是非常有必要的。

  • Sci Rep:林科院亚林所卓仁英| Nramp金属转运体促植物Cd积累|旭月活体研究通讯213期

    [align=center][b][b]NISC文献编号:C2017-029[/b][/b][/align][align=left]植物天然抗性巨噬细胞蛋白(Nramp)家族在重金属胁迫中起着重要的作用。然而,现有研究几乎没有发现Nramps在重金属富集植物 东南景天中的功能特征。[/align][align=left]2017年,中国林科院亚热带林业研究所卓仁英研究员课题组在[b][i]Scientific Reports[/i][/b]上发表了题目为“[i]Sedum alfredii SaNramp6 [/i]Metal Transporter Contributesto Cadmium Accumulation inTransgenic [i]Arabidopsis thaliana[/i]”([b][i]Sci Rep[/i][/b][i], [/i]2017, 7(1):13318.)的文章,探究东南景天Nramp在重金属胁迫时的作用。[/align][align=left]实验以东南景天为材料,克隆并鉴定了Nramp6基因,分析其在转基因拟南芥中的功能。SaNramp6 cDNA包含一个1638bp的ORF,编码545个氨基酸。镉(Cd)胁迫可诱导SaNramp6的表达,根和叶片分别处理一周和12h后达到峰值。[/align][align=left]SaNramp6定位于拟南芥、红花烟草下表皮、洋葱表皮细胞的原生质体质膜上。在酵母突变体的异源表达实验显示,SaNramp6增加了酵母细胞中的Cd含量。此外,在Cd胁迫下,Cd浓度、易位因子、Cd2+流速的数据结果显示,SaNramp6过表达拟南芥表现出很高的Cd积累水平。[/align][align=center][b][img=,578,433]http://cdn.sky.wkepu.com/album/201808/31/132225a310e064nvnc168l.jpg[/img][/b][/align][align=center]拟南芥根部Cd2+流检测图[/align][b]其中,利用基于非损伤微测技术(Non-invasive Micro-test Technology, NMT)的[b]NMT活体生理检测仪NMT Physiolyzer [/b]检测Cd2+流速,结果显示,相比于野生型拟南芥,过表达组中Cd2+吸收速率明显提高,而突变组明显下降。[/b][align=center][b][img=,307,780]http://cdn.sky.wkepu.com/album/201808/31/132225jjw3qyujw4y5de5i.png[/img][/b][/align][align=center]各组拟南芥的Cd2+流速结果。负值表示吸收[/align][b]卓仁英研究员主要专注于林木耐盐、重金属cd抗性的育种研究。自2017年开始,已经利用非损伤微测技术,在[b][i]Front Plant Sci[/i][/b]、[b][i]Environ Exp Bot[/i][/b]等期刊,发表[b]SCI[/b]文章4篇,累计影响因子16.789。[/b][align=center][/align]

  • 第一批基因编辑猪或流入餐桌!如何正确看待食品合成生物学发展?

    不知道大家能否想象,自家附近的超市上架的不再只有普通的肉类,还有经过基因编辑的猪肉和牛肉?要早个几十年,这一切或许难以想象,但随着科技的迅速发展,基因编辑已经不再是科幻小说中的情节。英国的 Genus 公司最近就在这一领域取得了重要进展,将这一幻想推至现实的前沿。他们成功地通过基因编辑技术增强了猪和牛的病毒抗性,这些经过编辑的动物不仅能抵抗某些疾病,还有望在未来减少畜牧业对抗生素的依赖。 值得一提的是,Genus 公司预计今年年底前向美国食品药物监督管理局(FDA)提交申请,一旦获批,这些经过基因编辑的猪和牛将上市售卖,流向我们的餐桌 ……不只是猪和牛,基因编辑还被用于创制水稻雄不育系。  [color=#0070c0][b] 基因编辑是也是育种利器[/b][/color]   说到基因编辑食物,大家第一时间联想到的可能是转基因作物。事实上,作物转基因育种的历史已有 20 多年,诸如棉花、大豆、玉米等转基因作物已在多个国家种植。相比于转基因技术,因为基因编辑技术没有引入外来的基因片段而被认为具有更高的安全性,逐渐得到了许多育种学家的青睐。基因编辑技术虽然从诞生到现在不过短短十多年的时间,已经被广泛地用于分子育种,主要用于改良作物的产量和品质、提升作物的抗病和抗逆性。给大家举几个例子,基因编辑技术已经被用于降低玉米的植酸含量、增强水稻的抗白叶枯病能力、提升马铃薯的耐冷藏性。除此之外,基因编辑还被用于创制水稻雄不育系。传统的杂交水稻两系法需要光温敏核雄性不育系,但是培育一个新的不育系需要至少几年时间,而通过基因编辑技术对水稻中的相关基因进行特异性编辑可以很快地创制一批光温敏核雄性不育系,这对农业生产具有革命性意义。基因编辑不仅是育种的利器也是和医学领域的大热话题。   基因编辑在医学领域的巨大潜力在医学领域,基因编辑技术其实已经展示了其巨大的潜力。以 β 地中海贫血为例,这是一种由单一基因缺陷引起的遗传疾病,传统治疗方法包括终身进行血液输注或骨髓移植。然而,利用基因编辑技术,科学家们已经在临床试验中成功地修改了患者的基因,从而恢复了正常的血红蛋白功能,这一进展不仅为患者带来了新的希望,也可能彻底改变治疗此类遗传疾病的方法。   此外,基因编辑还在异种器官移植领域有着很大的潜力。通过基因编辑技术,科学家们可以敲除猪体内与排斥反应相关的基因位点以及猪内源性逆转录病毒基因位点。目前,异种移植治疗公司 eGenesis 已经利用基因编辑技术培育出了多个可以作为器官移植供体的基因编辑猪。   值得一提的是,今年 3 月,一位名叫理查德 斯莱曼的肾衰竭患者在麻省总医院进行了一次肾移植手术,而手术的肾脏供体正是异种移植治疗公司 eGenesis 提供的一头经过 69 处基因编辑的猪。就在前两天,猪肾移植又迎来了新突破。继世界首例猪肾活体移植患者出院还不到一个月,第二例也宣告成功!不仅如此,此次手术也是首次在活体中进行猪源胸腺与肾脏联合移植,为异种器官移植和降低人体免疫排斥提供了新的思路。截至到目前为止,患者均没有表现出器官排斥的迹象,且肾功能良好。然而,对于这样一柄利剑,怎么让其发挥作用,又不产生负面影响便值得有关方面进行探讨和深思。   基因编辑的未来:你会接受它吗?再回到前文的话题,如果有一天,经过基因编辑的猪和牛流入了市场,走上了咱们的餐桌,大家会习惯它们的存在,并且毫无顾忌地食用吗?至少对于转基因的动物,市场的接受度并不高。比如,2015 年,美国食品和药品管理局批准了一种生长快速的转基因三文鱼上市,成为全球首例获批的转基因动物食品,但市场对于这种三文鱼并不买单。   对于基因编辑的动物,比如猪或者牛,想要大众和市场能够接受,就需要让大众对这类技术的优缺点有一个深入的认知和了解。一个可能的解决途径或许是通过开放和包容的对话,让科学界、政策制定者、行业代表及公众可以共同探讨基因编辑技术的应用,确保科技进步同时带来社会价值和伦理的提升。此外,建立一个全面的监管框架同样十分重要。目前,全球多个国家和地区正在努力制定相关的法规和指导原则。例如,欧洲联盟正在研究如何更新其遗传修饰生物的监管政策,以适应 CRISPR 等新兴技术的特点。美国食品药物监督管理局(FDA)也在审查其政策,确保任何基于基因编辑的产品在上市前都经过严格的安全性和效果评估。可以确定的是,基因编辑技术如同一把双刃剑,它在带给我们前所未有的医疗和农业改进机会的同时,也带来了众多伦理和道德的挑战。未来我们如何应对这些挑战,将决定这项技术是否能够成为造福人类的工具。 资讯链接:[url]https://www.instrument.com.cn/news/20240426/715716.shtml[/url]

  • 苏州纳米所等在硫化银近红外量子点活体成像研究中获进展

    随着生物医学影像技术的不断发展,近红外荧光成像技术在生物医学研究领域得到了越来越多的关注和应用。其中,近红外二区(1000 nm-1400 nm)荧光对生物组织穿透能力强,成像信噪比高,该区域荧光成像技术在生物活体成像领域已展现出巨大潜力。量子点(Quantum dots, QDs)作为一种新型的纳米荧光探针,具有亮度高、光稳定性强、光谱可调等传统荧光染料不可比拟的优势,在生物标记、成像与传感等方面得到了广泛应用,而开发具有近红外二区荧光发射、生物相容性好、量子产率高的QDs是当前其用于活体荧光成像所面临的重要挑战。 中科院苏州纳米技术与纳米仿生研究所王强斌研究员课题组在“单源前驱体制备Ag2S近红外量子点”(J. Am. Chem. Soc. 2010, 132, 1470–1471)的基础上,进一步优化制得了量子产率更高、生物相容性更好、尺寸均匀可控的Ag2S近红外QDs。通过与美国斯坦福大学戴宏杰教授课题组合作,利用Ag2S QDs进行了细胞成像与毒性研究。结果表明,在水溶性Ag2S QDs表面修饰不同的生物识别分子,可实现对不同细胞系的特异性标记,并且该Ag2S QDs几乎没有细胞毒性(ACS Nano 2012, 6, 3695–3702)。 在上述工作基础上,王强斌课题组与戴宏杰教授课题组继续合作,进一步将Ag2S QDs用于动物活体成像研究。结果表明,因肿瘤组织对大分子的高通透性和滞留效应(简称EPR效应),肿瘤对QDs具有很高的摄取(图2),该现象为肿瘤早期诊断以及手术的可视化提供了重要的技术基础。同时,他们对导入小鼠体内QDs的命运进行了追踪,发现除了富集于肿瘤部位的QDs外,其它QDs大部分在注射24小时后不断的随粪便和尿液排出;一周后,体内各个器官(肝和脾除外)的QDs均已基本排出(图3)。 该工作已在国际著名杂志Angewandte Chemie International Edition上发表。对Ag2S QDs的长期体内代谢、分布和毒理研究正在进行之中。 此项工作得到中科院“百人计划”、中科院先导专项、国家自然科学基金委和科技部等的大力支持。 原文链接http://www.cas.cn/ky/kyjz/201209/W020120921399246236683.gif 图1:(a)Ag2S QDs成像示意图,(b)和(c)分别为Ag2S QDs的实物和暗场中的荧光照片,(d)和(e)分别为吸收和荧光光谱,(f)为Ag2S QDs的TEM照片。http://www.cas.cn/ky/kyjz/201209/W020120921399246247360.gif图2:4T1肿瘤对Ag2S QDs的高效摄取http://www.cas.cn/ky/kyjz/201209/W020120921399246242640.gif图3:Ag2S QDs的活体滞留和排泄情况

  • 德国开发出首台可观察活体细胞的超高分辨率生物显微镜

    近日,德国IBIDI公司成功开发出一款超高分辨率生物显微镜。该公司宣称基于新型随机光学重建显微技术“(d)STORM”,利用该公司独创的特殊塑料底板“μ-Slides”可实现超高分辨率观察活体细胞。 STED,SIM,(F)PALM 和(d)STORM等新型光学显微技术可有效避免衍射极限,获得纳米级水平的超高分辨率成像。这些超高分辨率显示技术可应用到生物实验研究,观察了解组织细胞分子结构。IBIDI公司采用了创新性的含有亲水性膜涂层的塑料材质底板“μ-Slides”替代传统玻璃底板,首次实现了“活体细胞”超高分辨率观察。这种被成为“ibi-Treat”的亲水性膜涂层性能可以与标准的细胞培养瓶和培养皿相媲美。 IBIDI公司相关研发工作受到了德国联邦教研部《生命科学领域光学技术—基本细胞功能》项目的资助。

  • 基因芯片实验操作流程图

    基因芯片实验操作流程包括样本DNA或RNA制备、标记、杂交及洗涤等步骤http://img1.jiansuo.net/trademd/upload/asset/meeting/2010/12/02/1291289644.JPG 基因芯片实验操作流程图 1、样本DNA或RNA制备 芯片实验中核酸的抽提没有特殊之处,参照常规的分子生物学实验手册就可以。但对于RNA样本,由于RNA的稳定性很差,在活体内的半衰期也很短,因此取材一定要新鲜,取材后迅速保存在液氮中,在整个处理过程中要非常小心,以免降解,影响实验成功率或结果的可靠性。 2、核酸标记方式 分子生物学常用的标记方法有同位素标记和非同位素标记方法,常用的同位素有33 P、32 P、125 I及3 H等化学发光标记和荧光标记,非同位素标记方法又分为化学发光法和荧光法。常用的化学发光物质有碱性磷酸酶和辣根过氧化物酶,它们能催化相应的底物产生有颜色的沉淀物;生物素和地高辛是最常用的非同位素标记物。很多荧光染料、碱性磷酸酶和辣根过氧化物酶可直接同抗地高辛抗体及亲和素偶联。而目前常用的荧光染料种类有德克萨斯红(Texasred)、荧光系、罗丹明、Cy3、Cy5等。生物芯片中的标记方法普遍采用荧光方法,很少采用化学发光法和同位素标记方法。 核酸样本通常采用酶反应法进行标记,蛋白质样本采用化学方法或抗体―抗原间接标记的方式。核酸中常用的酶反应方法有:反转录法、随机引物法、切口平移(nicktranslation)、PCR、体外转录等。在酶反应过程中掺人带荧光的dNTP,从而标记新合成的核酸分子。如果酶反应中需要引物,如PCR、随机引物法和反转录法,也可以将荧光基团通过化学反应加到引物的末端。 3、样品标记方法 样本标记方法很多,这里仅举几种常用的方法。 (1) RNA标记方法:对于表达谱基因芯片和RNA不同剪切体的研究,是针对RNA样本进行标记。最常见的标记方式是用Cy3或Cy5荧光,通过反转录标记法,选择不同激发波长的荧光标记不同的样本。如Cy3或Cy5标记的dNTP,通过酶反应掺人到待测样品中,便可以在一张片子上同时检测两份标本的信息,做到平行性比较,数据更可靠。另外,由于反转录法所需RNA样本量大,一般需要20fig的总RNA。对于微量的组织样本很难制备足够的RNA,这时可以采用RNA线性扩增方法,最普遍采用的RNA扩增方法是RNA体外线性扩增方法。 (2) DNA样本的标记方法:当对样本进行CGH分析、SNP、分子分型或甲基化研究时,主要选用DNA作为样本。对于CGH,可以进行全基因组标记,通常采用随机引物标记方法。这种方法需要的DNA量大,一般在2pg以上的基因组DNA。虽然有人发明了全基因组DNA的线性扩增技术以减少对样本量的需求,但效果上都不很理想,很难真正做到全基因组及完全的线性扩增。对于SNP研究,可以采用类似CGH的标记方式进行全基因组标记。由于SNP检测的是DNA的“质”,而不像表达谱或CGH质检测核酸的“量”,因此不必要考虑标记时DNA的线性关系,可以采用其他的全基因组的扩增方法。但由于杂交条件的限制,一般难以做到真正意义上的高通量。因此,一般只是选择少数目的基因的少数SNP位点进行研究,可以采用多重PCR标记方法标记目的片段代替全基因组标记。甲基化研究有两种方案,一种采用SNP的检测原理,另一种类似CGH的方法。

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