荧光定量计

qPCR扩增曲线一般分成四个阶段：基线期、指数期、线性期和平台期。那么每个阶段PCR产物量的变化都有什么区别呢？哪个阶段最重要呢？小编这就一一道来。基线期PCR起始时，刚开始前几个循环的荧光信号还没有发生变化，接近一条直线，将其称之为基线，一般是3-15个循环。在基线期内，扩增的荧光信号被背景荧光信号所掩盖，无法判断PCR产物量的变化。指数期扩增的荧光信号高于背景荧光信号，扩增曲线起峰，开始进入指数期。在指数期内，每个循环积聚的产物准确加倍（假定100%反应效率）。该阶段的PCR反应具有高度特异性和精确度。因为所有试剂均充足，反应的动力学推动反应有利于扩增子加倍，所以产物出现指数级扩增。只有在这个阶段，Cq值与初始模板量的对数之间存在线性关系，所以在此阶段进行定量分析最合适。线性期（高变异性）随着PCR反应体系各成分的消耗，其中的一种或者多种成分限制反应，导致反应开始减缓，并且每个循环的PCR产物不再加倍，该阶段不再是指数级扩增。平台期反应停止，不再产生更多产物，并且如果放置时间够长，PCR产物将开始降解。因为每个样品具有不同的反应动力学，所以每支试管或每个反应将在不同的时间点进入平台期，最终的产物含量也各不相同。由于线性期和平台期的扩增产物已不再呈指数级的增加，PCR的产物量与初始模板量之间没有线性关系，所以也不能通过这两个阶段的PCR产物量计算出初始模板量。想要知道初始模板量的多少，还要依赖指数期的Cq值进行计算。▲ 图1. qPCR 反应的重要阶段如图所示，标准的扩增曲线是呈现S型的。曲线是否符合标准，不仅跟样本起始量、qPCR体系配制、反应程序等相关，更依赖于一套高品质的实时荧光定量PCR系统。对于实时荧光定量PCR系统来说，高度检测灵敏度、高度重复性和高度稳定性，是每一台qPCR仪的追求。高性能的Azure Cielo™ 实时荧光定量PCR系统完全符合以上要求，该系统来自美国Azure Biosystems公司，融合了高品质的帕尔特温度模块和基于光纤传输的光学检测系统，为您的科学研究提供高精准、高灵敏可靠结果。提供Azure Cielo-3通道和Azure Cielo-6通道，可根据实验需求灵活配置。同时配有10.3”触控系统，主机本身可独立运行、连接、远程交互，让您随时随地知悉实验进程和及时获得实验结果。▲ 图2. Azure Cielo™ 实时荧光定量PCR系统高度的灵敏度使用探针法，同时在Azure Cielo™ 实时荧光定量PCR系统和其他品牌产品上检测GAPDH基因，结果表明：A）Azure Cielo™ 实时荧光定量PCR系统对单拷贝基因的检出率更高。B）Azure Cielo™ 实时荧光定量PCR系统的Cq平均值要低于2个Cq。▲ 图3. 单拷贝基因检测对比(n=96)高度的重复性源于优异的孔间均一性。105拷贝数GAPDH模板，GAPDH引物扩增，96孔重复结果。Cq平均值=19.1，变异系数（Cv）=0.002。▲ 图4. 96孔重复扩增曲线 A）线性图 B）对数图 高度的稳定性稳定可靠的温度模块和光学系统，确保仪器连续运行1000轮qPCR实验，数据依然稳定可靠，重复性高度一致。对GAPDH进行检测并连续计算Cq值得出平均值和Cq值的标准偏差。Cq值=22.4+0.01。▲ 图5. 长时间连续工作数据稳定

JJF 1070-2023《定量包装商品净含量计量检验规则》（以下简称《检验规则》）将于2024年10月12日正式实施。现将有关修订内容解读如下：问题一：《检验规则》的修订背景是什么？解答：为扎实推进民生计量工作，确保定量包装商品净含量计量准确，更好维护人民群众切身利益，营造公平有序的市场竞争环境，市场监管总局于2023年3月发布了《定量包装商品计量监督管理办法》。为使《检验规则》与《定量包装商品计量监督管理办法》保持一致，充分发挥计量技术支撑作用，保护消费者权益，引导企业规范经营，提升计量质控能力，践行企业责任，提高国际竞争力，需要对《检验规则》进行修订。问题二：《检验规则》的修订意义是什么？解答：一是维护消费者权益。首先，《检验规则》对定量包装商品净含量标注等提出更具体的要求，使消费者对商品净含量的理解更加容易、准确。其次，优化了计量检验抽样方案，采用科学的抽样和检验方法，使抽样检验置信概率达到99.5%，从而保证净含量计量检验结果能够更加真实地体现定量包装商品的实际含量。二是强化企业主体责任。《检验规则》充分考虑企业实际需求，引导企业更加规范地标注定量包装商品净含量，同时对企业定量包装技术能力和诚信经营提出了更高要求。《检验规则》的实施，可以进一步维护市场秩序，促进企业公平竞争，推动构建全国统一大市场。三是加强与国际规则接轨。积极采用国际法制计量组织（OIML）R79号国际建议《预包装商品的标签要求》（2015版）和R87号国际建议《预包装商品的量》（2016版），推动我国定量包装商品更加适应国际化市场要求。问题三：《检验规则》的主要修订内容有哪些？解答：一是《检验规则》的适用范围发生变化。《检验规则》与《定量包装商品计量监督管理办法》的适用范围一致，并修订了定量包装商品的定义。《定量包装商品计量监督管理办法》第二条第二款规定：“本办法所称定量包装商品是指以销售为目的，在一定量限范围内具有统一的质量、体积、长度、面积、计数标注等标识内容的预包装商品。药品、危险化学品除外。”对定量包装商品的范围设定了排他性条款。二是《检验规则》细化对净含量标注的构成要求。对净含量标注中的数字部分，推荐不超过3位有效数字，引导企业为消费者提供更为清晰的净含量信息。例如：某企业生产的食用油，净含量标注为5.436L，若将其标注改为不超过三位有效数字，如：5.5L，则能让消费者更简洁、清晰地理解该商品净含量。三是《检验规则》对净含量标注提出“应清晰可见”等显著性要求。《检验规则》明确规定净含量标注“应清晰可见，商品包装主展示面或商品标签的显著位置，与商品包装的背景底色有明显区别”。目的就是要求企业为消费者提供更为清晰、准确的净含量信息。四是《检验规则》细化了净含量标注计量单位的选择。净含量标注计量单位的选择与《定量包装商品计量监督管理办法》附件1要求相一致，《检验规则》修订了“表1 法定计量单位的选择及检查方法”，将体积（容积）标注商品分为容积（液体）商品和体积（固体）商品，分别进行标注。液体商品可以使用质量单位标注，也可以使用体积单位标注。五是《检验规则》净含量标注类别（方式）选择应基于消费者的使用和贸易习惯。以体积、长度、面积单位标注的商品，标注的净含量应当是在参考温度20℃时商品的量；对于冰冻商品的量，其温度应当以制造商要求的、以维持商品稳定可用的温度为准。六是增加“介质”“包装材料”概念与定义。介质是非天然地存在于商品之中，且和商品内容物一起放入包装内的液体或气体。这些液体或气体的作用是用来容纳、保护、保存商品内容物。天然地存在于商品内容物之中的液体不属于介质。包装材料是在商品内容物使用（或食用）后，预期被抛弃的所有包装物。天然地与商品内容物生长在一起的皮、核或壳不属于包装材料。例如：核桃的壳、西梅的核等，不属于包装材料。明确“介质”“包装材料”的定义，可使检验人员、企业和消费者清晰地理解皮重的概念（皮重是指除去商品内容物后的所有包装材料的重量），有利于统一对《检验规则》检验方法的理解，减少误解。七是优化计量检验抽样方案。通过合理增加检验样本量，减少由于抽样数量较少造成的检验误判，有效降低企业风险。例如：检验批量为60件时，《检验规则》要求抽取的样本量为35件，而原《检验规则》抽取的样本量仅为13件。八是引入有限群体修正因子。通过引入有限群体修正因子，使净含量计量检验结果能够更加真实地体现实际含量，在更大程度上维护消费者权益。例如：检验批量为60件时，《检验规则》要求样本平均实际含量的修正因子为0.30，而原《检验规则》样本平均实际含量的修正因子为0.848。九是增加禁止误导性包装商品的附录。《检验规则》附录R“误导性定量包装商品的禁止”采纳R87号国际建议附录E的内容，对误导性定量包装商品进行了原则性要求，定量包装商品不应当以误导或欺骗消费者的方式进行构造或填充。问题四：《检验规则》的适用范围是什么？解答：《检验规则》的实施，可以在商品的生产、销售等全领域对定量包装商品进行科学的抽样和检验，确保消费者购买的定量包装商品净含量计量准确。《检验规则》适用于对定量包装商品净含量的计量监督检验和仲裁检验，委托检验可参考进行。生产和销售定量包装商品的单位亦可参照《检验规则》进行自控检验。接受计量检验的定量包装商品应是生产者自检合格的产品，或者是销售者进口、经销的商品。问题五：《检验规则》中对多件组合商品的标注有何要求？解答：《定量包装商品计量监督管理办法》第七条规定：“同一包装内含有多件同种定量包装商品的，应当标注单件定量包装商品的净含量和总件数，或者标注总净含量。同一包装内含有多件不同种定量包装商品的，应当标注各种不同种定量包装商品的单件净含量和各种不同种定量包装商品的件数，或者分别标注各种不同种定量包装商品的总净含量。”多件组合商品的标注应当遵守《定量包装商品计量监督管理办法》的规定，且符合《检验规则》的要求。对于同一包装内含有多件不同种定量包装商品的，强调的是“分别标注”各种不同种定量包装商品的净含量。例如：某包装内含有多件不同种定量包装商品，其净含量标注为：“净含量：200克（A产品40克×3，B产品40克×2）”，是合格的；如果其净含量标注为：“净含量：200g（5件）”，未按照《检验规则》对不同内含商品的净含量信息进行更明确标注，其标注为不合格。问题六：如何在线查阅《检验规则》全文？解答：登录http://jjg.spc.org.cn/，进入“国家计量技术规范全文公开系统”，输入“JJF 1070-2023”或“定量包装商品”等关键字查询，点击“在线预览”，即可查阅《检验规则》文本。

1、光学系统：最高六通道的配置，可灵活配置成1-6通道中的任意一种通道数，而且使用过程中可以随时进行通道数升级，以满足未来更多的检测需求2、滤光片组：有12 种激发/检测滤光片组可供自由组合，包括滤光片错配的FRET检测组合和专用于蛋白熔解曲线分析的滤光片组3、光源：采用蓝色、绿色、红色、白色（RGBW）四个高强度长寿命LED固态光源，确保在整个光谱检测范围内都有很强的光强，提高检测灵敏度，而且不发热，使用寿命长，终身免维护4、检测器：高灵敏度的通道式光电倍增管，有效降低背景噪音信号，检测灵敏度高5、检测方式：高性能的16道光纤扫描系统，16孔同时检测，检测快速，而且收集信号准确，无需ROX校正，但也可选择使用内参校正6、检测灵敏度：能检测到单拷贝DNA模板，能清晰区分1000拷贝和2000拷贝的质粒DNA7、检测线性范围：10个数量级8、检测样品量：384个样品，可使用标准的384孔PCR板9、样品反应体系：推荐最适反应体积2-30μl10、升温速率：最大4 ℃/s 11、温度均一性：±0.15 ℃12、温度准确性：±0.1 ℃ 13、线性温度梯度：独特的24列线性温度梯度功能，能帮助用户快速找到最精准的退火温度14、热模块： Peltier加热控温，热传导性好，耐腐蚀抗氧化15、检测速度：十六道光纤扫描，快速检测16、热盖：最高温度可达110℃，自动调节接触压力和高度，最大可达30kg/板17、仪器是专为定量PCR仪的一体化设计，不是从普通PCR仪上升级而来18、控制系统：通过电脑软件控制19、软件功能：具有绝对定量、双标准曲线法相对定量、双Delta Ct法相对定量（结合扩增效率分析）、熔解曲线、等位基因分型/SNP分析、终点法分析、扩增效率计算等分析方法 20、具有中文软件界面，方便中国用户的使用21、软件免费提供，可以无限制安装在多台电脑上，无需付费购买使用权限，终身可免费升级22、软件可以提供符合MIQE标准的实验报告，实现实验报告信息化管理和溯源23、静音技术：运行时最大的工作噪音不超过45 dB24、电脑连接：USB，可与LIMS系统连接 创新点：德国耶拿新品UVP GelSolo的最大创新点在于可以进行不同波长的选择。根据客户的应用需求，可以选择单波长（302nm）、双波长（302nm和365nm）、三波长（254nm、302nm和365nm）。302nm满足客户核酸的快速成像，365nm适用于胶回收，254nm可用于灭菌。独有的三开门设计，仪器前面和两侧都设有窗口，可直接观察凝胶，也可非常方便安全地进行切胶等操作，操作者不会直接暴露在紫外光照射下。 耶拿荧光定量PCR qTOWER384G

根据《计量法》《定量包装商品计量监督管理办法》，上海市市场监督管理局组织制定了《2024年上海市定量包装商品净含量计量监督抽查实施细则》，现予以发布，自发布之日起开始实施。具体文本详见附件《2024年上海市定量包装商品净含量计量监督抽查实施细则》。附件：SHSSXZJL3001-2024上海市计量监督抽查实施细则 [上海市定量包装商品净含量计量监督抽查]审批终版.doc

半导体&液体循环制冷|Archimed Mini 16 医用荧光定量PCR仪获证2023年2月7日，鲲鹏基因自主研发的Archimed Mini 16 医用荧光定量PCR仪获得国家药品监督管理局批准的第三类医疗器械注册证，注册证编号：国械注准20233220149。快速获取检测结果是现场即时检测的重要应用需求，为满足这类实际需求，Archimed Mini 16特采用创新型Peltier半导体结合液体循环散热技术，在保证均一且精确控温性能的同时，实现超快速变温，最大样本变温速率大于5.4℃/秒。在同等试剂及运行条件下，相比市场通用性（96孔）定量PCR，实验耗时至少缩减30%。这是继Archimed X系列医用荧光定量PCR仪获证后，鲲鹏基因再次在分子诊断设备领域获得的临床诊断相关资质。自此，鲲鹏基因荧光PCR产品线涵盖了从高通量96孔通用型定量PCR（Archimed X4/X6）到快速便携式定量PCR（Archimed Mini 16）的多用途、多场景方案构成。将满足包括三甲医院、区县级医院、基层卫生服务机构、各级CDC以及检验科、门/急诊、临床科室等各类医疗卫生机构的全场景需求。Archimed Mini J 军用荧光定量PCR系统新品发布为了满足复杂多变的战场环境，实现即时检测的需求，鲲鹏基因推出一款符合军规标准的超快速便携式军用荧光定量PCR仪Archimed Mini J，系统采用鲲鹏基因创新型第二代控温技术、搭配操作简易的软件、轻巧便携的军绿色一体式机身及超强的环境适应能力，从容应对各类野外环境，快速准确地完成定量PCR相关应用。技术亮点：快速获取检测结果且具有较强的环境适应力是野外现场即时检测的重要应用需求，为满足这类实际需求，Archimed Mini J 特采用独特的Peltier控温方式，结合创新性VC均热技术及防水风冷设计，在保证均一且精准控温性能的同时，实现超快速变温控制，最大速率达8℃/秒。配备铝制外壳和防水导电胶条封边，提高电磁兼容性的同时实现防振动、防冲击、防淋雨、防霉菌、防盐雾，快速精准完成定量 PCR 相关应用。

荧光定量PCR技术是将常规的PCR和荧光检测技术相结合，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，以此实现对初始模板的定量分析。荧光定量PCR技术作为当今生物学研究的重要手段之一，在基础科学、生物技术、医学研究、法医学、诊断学等多方面具有广泛的应用前景。说到荧光定量PCR技术，我们经常会问类似于“你的实验是染料法还是探针法”，“你用的探针是什么类型”等之类的问题，这其实是对荧光标记的选择。根据荧光标记的不同，可以将荧光定量PCR实验分为探针法和染料法两大类。染料法染料法利用能与DNA双链结合的染料来实现，如SYBR Green I。该染料在游离状态下呈现微弱的荧光，一旦与双链DNA的双螺旋小沟结合，其绿色荧光增强约1000倍。因此其总的荧光强度与双链DNA含量成正比，利用这一关系可以反映生成的PCR产物的量（图 1）。SYBR Green I的最大吸收约在497 nm，发射波长最大约在520 nm，与FAM荧光分子的光谱性质类似，因此在所有的荧光定量PCR设备中都是第一通道检测，即“FAM/SYBR Green I”通道。▲ 图1 染料法原理图理论上，所有能与双链DNA结合的染料都可以用于qPCR检测，如溴化乙锭EtBr，碘化丙啶PI，吖啶橙、Cy3等。而选择用于qPCR反应的染料通常会从信号强度、生物安全性、检测简便性和经济适用性这几个因素考虑。例如EtBr可能存在潜在的致癌性。综合考虑下来，SYBR Green I成了比较理想的选择。目前，使用Evagreen的实验者也越来越多，Evagreen作为一种新型的染料，其光谱性质与SYBR Green I类似，其优势在于：▶ 对PCR反应的抑制程度小。高浓度SYBR Green I会强烈抑制PCR反应，因此要控制其使用浓度，一定程度上降低了DNA检测的灵敏度。▶ 与DNA结合密度高。单位长度的DNA双链上Evagreen的密度更高，为饱和型染料，消除了SYBR Green I存在的“染料重分布”的缺陷，提高检测灵敏度的同时也可用于高分辨率溶解曲线HRM。▶ 化学性质更稳定，适合长期保存。TaqMan 探针TaqMan 探针基本可以满足60%以上的qPCR实验，如常规的基因表达和拷贝数变异CNV实验。TaqMan 荧光探针是一种寡核苷酸探针，荧光基团连接在探针的5' 末端，而淬灭剂则在3' 末端（图2）。PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收 PCR扩增时, Tag酶的5' -3' 外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成,实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。常用的荧光基团是FAM，TET，VIC，HEX。▲ 图2 Taqman探针MGB探针对于要分辨单碱基差异的SNP实验，采用对碱基错配容忍度更低的MGB探针，在淬灭基团后加入了DPI3基团（图3），从而提高了与靶标结合的亲和力；而且可以对靶点碱基进行化学修饰，如PeptideNucleic Acid和Locked Nucleic Acid。▲ 图3 MGB探针双杂交探针Taqman探针对探针的长度有比较严格的要求，双杂交探针则消除了这一“缺陷”。双杂交探针是由两条寡核苷酸单链组成，一条的3’端带有供体荧光分子，另一条的5’端带有受体荧光分子（图4）。游离状态下荧光供体会发出荧光，但当两条单链都匹配到模板链上时，就会发生荧光共振能量转移FRET，受体荧光分子就可以发出荧光，其荧光强度与生成的产物的量成正比。双杂交探针的优势有两点：摆脱了探针长度的限制，较长的探针可以提高与模板匹配的成功率；只有上下游两条探针都正确匹配后才能检测到受体荧光分子发出的荧光，特异性有所提高。▲ 图4 双杂交探针分子信标探针游离状态下，分子信标探针是一种茎环结构，其环状部分的15-30个碱基可以与靶标区域相结合匹配，下端的配对区域（左右一般各5-6个碱基）则由重复的GC组成，从而将5’的荧光分子和3’的淬灭基团紧紧聚在一起，荧光发生淬灭；当退火时，分子信标探针解开环并与模板靶标杂交，这样荧光分子和淬灭基团的物理距离就变大了，荧光淬灭的前提就打破了（图5）。除了MGB探针，分子信标探针也非常适合用于SNP检测。▲ 图5 分子信标探针除了上述几种类型的探针之外，还有尝试将引物和探针功能相结合的技术，如Amplifluor、LUX等，在设计难度上有所提高，但使用时更简便。各有其应用的侧重点和设计上的利弊，在此不多赘述。那么在荧光定量PCR实验中，我们应该如何进行选择呢？在这里，给大家总结了一些两种方法的区别，供大家参考。表1 染料法和探针法的区别

近年来，以光场显微镜为代表的一系列计算成像技术，因其低光毒性、快速三维成像能力等优势备受注目，在活体显微成像领域取得了突破性的成果【1】。由于光场成像技术可以在单次拍摄下获取样本的高维信息，在长时动态观测方面具有独特的优势，例如观测血流、大规模神经活动、细胞内以及细胞间长期相互作用等等。而在复杂的活体成像环境下，光场系统采集的高维目标信号与无序散射光以及高强度背景光深度杂糅，极大限制了穿透深度与信号的定量程度。近日，清华大学的研究团队提出了一种基于非相干散射理论的多尺度量化模型（QLFM），可通过充分挖掘光场数据的高维特性和准确的物理建模，从而实现计算光学层析能力。该研究显著减少了背景荧光与散射光子的影响，同时也提升了单光子成像在复杂活体环境下的穿透深度，推动光场显微技术进入定量荧光显微时代。相关研究成果于 2021 年 11 月 4 日在线发表在 Nature Communications 杂志，题为：Computational optical sectioning with an incoherent multiscale scattering model for light-field microscopy。在复杂的成像环境下，由于背景光、散射光以及系统像差等多种因素的干扰，传统的光场成像模型无准确求解成像反问题。这一特性极大限制了光场显微成像技术在活体观测中的应用。在此基础上，QLFM提出了多尺度精确量化模型，在完备空间下剥离信号光、背景光以及散射光分量，实现了光学计算层析，显著提升了成像穿透深度。通过此方式，科学家在400μm的成像深度下，将图像的信背比 (signal-to-background ratio, SBR) 提升了20dB。该方法被用于观测等斑马鱼脑、果蝇脑、果蝇卵、小鼠脑等多种活体生物样本，并在多种成像环境下成功解析了高SBR的三维动态信息。此外，由于不需要额外的硬件支撑，该方法广泛适用于各种相空间成像系统。图1 | QLFM 概念与原理示意在传统的光场成像模型中，大量的背景光极易将目标荧光信号淹没，极大制约了成像深度。QLFM首先提供了一种多尺度的完备空间模型，利用光场不同角分量下点扩散函数 (point spread function, PSF) 的不同特征，分离出大尺度范围内的背景光分量，并将其在成像反问题求解过程中剔除。另外，为了提升计算效率，QLFM提供了一个基于非均一分辨率的多尺度采样机制。这种采样方式极大的节约了计算成本，将重建速度提升了两个数量级，为长时间活体三维观测提供了基础。图2 | 在斑马鱼心脏成像实验中，QLFM 与传统模型的对比除了背景光，杂乱无序的散射光也是一个需要考虑的因素。在传统成像模式下，由于散射光与信号光深度杂糅，不能通过常规的光学层析将散射光剔除。但在光场成像模式下，相空间分量准确描述了目标的高维光场分布，这为解析散射光提供了可能。基于上述理论，QLFM还提出了一种相空间下非相干散射传播模型，对目标体中的散射光进行逐层建模，并将此模型融合到相空间成像反问题求解算法中，通过反复优化迭代，最终获得分离的散射光和信号光分量。另外，系统畸变造成高维PSF畸变也是导致成像质量下降的一个因素。QLFM提供了一个基于向相位恢复算法的PSF矫正模型，通过反复迭代拟合，使得仿真PSF的强度分布收敛到与实采PSF一致，同时又保证了更高的信噪比。使用矫正后的PSF进行反问题求解可以显著缓解近焦面的伪影，同时在整个成像范围内都提升了空间分辨率。QLFM 利用精确数学建模获得了光学计算层析能力，极大程度削弱了背景光的干扰，剔除了活体样本中散射光的影响并消除由系统像差引入的畸变，由此从高维光场信号中准确求解复杂成像反问题，显著提升了光场显微系统的实用性与在活体环境下的定量荧光观测能力。同时QLFM也进一步提示了复杂物理模型在反问题求解过程中的重要性。如何准确地从数据中可解释地挖掘出真实世界的定量本真信息将是未来发展的一个重要趋势。清华大学自动化系博士生张亿、卢志、清华大学自动化系助理教授吴嘉敏为该论文的共同第一作者，清华大学自动化系、脑与认知科学研究院、北京科学信息与技术国家研究中心戴琼海教授、季向阳教授、吴嘉敏助理教授为论文共同通讯作者。原文链接：https://doi.org/10.1038/s41467-021-26730-w

前言吾日三省吾身，定量实验做对照了吗？在荧光定量PCR实验中遇到没有曲线、曲线异常等情况，我们总是会在第一时间去看阳性对照和阴性对照的扩增情况来分析原因。由此可见，实验中做对照的重要性不言而喻。在荧光定量PCR实验中，我们通常会按照如下的流程进行实验：样品采集，运输，样品处理，核酸提取，反转录（RNA 病毒），扩增 ，结果读取。为了提高实验结果的精准度，我们通常会通过设置对照的方式对检测的各个环节进行监控。阴性对照荧光定量PCR的灵敏度较高，对实验室的污染也非常敏感，阴性对照可以用来监控和发现污染的发生。常用的阴性对照包括以下几种：无模板对照（No Template Control, NTC）使用水代替荧光定量 PCR反应中的核酸，其它试剂按比例正常加入，用于监控扩增反应体系中的污染。正常情况下，NTC孔不会有扩增；当NTC出现扩增，则预示体系中有污染。在SYBR Green实验中，引物二聚体的形成也可能导致NTC出现扩增。阴性样本对照（Negative Sample Control）阴性样本对照指不含有目的基因或者靶序列的样本，也可以是样本保存液。和含有目的基因的样本一起进行核酸提取等过程。如果出现扩增，则说明实验过程中存在污染，结合NTC结果进行判断。无逆转录酶对照（No Reverse-Transcriptase Control, No RT）当进行RNA定量实验时，如果引物和探针设计在同一个外显子上，扩增有可能来源于未去除干净的DNA，此时可以设置无逆转录酶对照。无逆转录酶对照中不加逆转录酶。由于没有cDNA，DNA聚合酶无法扩增mRNA，则不应发生扩增。如果检测到扩增，则样本中可能含有未去除干净的DNA。阳性对照阳性对照必然是阳性的结果，用于排除假阴性。如果检测出来了这个样本不是阳性，则说明实验有问题，不可靠。阳性样本对照（Positive Sample Control）阳性内对照虽然可以在一定程度上反应核酸提取效率，但是却很难反馈提取流程中对核酸释放的效率。为了能更好的反映提取效率，可以选择已知阳性的样本或者保存在相似基质中已知浓度的病原体，作为单独的样本进行提取和后续的RT-PCR，通过Ct值评断实验流程。内参基因（Endogenous Control）内参基因可以用于反应样本本身的质量，比如拭子是否刮取到样本、RNA在运输和保存过程中是否有严重的降解等问题。内参基因一般选择在取样组织或细胞中均有足量表达的基因，且其表达量不受环境、实验处理条件和取样时间等因素影响，常用内参基因如表1所示。没有某个内参基因是万能的，内参基因需要根据样本类型和实验处理方式进行评估和选择。实验中通过内参基因的Ct值来判断取样和样本降解情况。在相对定量实验中，内参基因亦可用于对取样量进行均一化。▲ 表1: 已报道的部分物种qPCR内参基因扩增对照（Amplification Control）可使用含有扩增片段的质粒、假病毒或者基因组DNA/cDNA作为扩增阳性对照，监控荧光定量PCR的体系是否正常。当扩增对照没有扩增，或者Ct值大于预期，则说明定量PCR体系存在问题。内部阳性对照（Internal Positive Control, IPC）如果想监控每一份样本的整个实验过程，可以在提取之前在每个样本中加入一段外源DNA或RNA（不含目的片段），并在定量PCR时进行单管多重PCR，同时检测目的基因和这段序列。在每个样本中加入特定拷贝数的IPC，进而从该段序列的Ct值判断对应样品孔中的核酸富集和扩增效率。

实时荧光定量PCR数据中的基本概念：在整个扩增过程中会出现基线期，指数期，线性期和平台期。其中在基线期和指数增长期，扩增产物都是以指数级增长，但是在基线期我们没办法检测；而到了线性期和平台期之后，由于不同基因，或者不同条件下其扩增效率差别很大，因此没有办法计算模板的含量。因此，在指数增长期的CT值就成了计算模板含量的关键值。▲ 图一：线性图谱▲ 图二：对数图谱为什么知道CT值就能够得到最初的目标基因含量呢？如图三，表示一个基因单次扩增曲线。N为扩增产物的分子数，模板的分子数乘以1+扩增效率的n次方，n代表循环次数。也就是说，如果扩增效率为100%，产物的分子数就等于模板数乘以2的n次方。但是在线性增长期和平台期，扩增效率不可能是100%，因此PCR理论方程只在指数期成立，也就是图三绿色框的部分。▲ 图三数据处理：以下三张图分别表示我们在做荧光定量PCR时提到的三个名称：扩增曲线、标准曲线、溶解曲线。1、绝对定量：使用一系列稀释的已知浓度的标准品与未知样本同时进行测定，根据系列浓度标准品的CT值与起始模板量之间的线性比例关系。注意事项：☑ 标准品必须来源可靠，浓度已知。☑ 标准品要和待测样品同时在仪器中扩增。☑ 只能根据标准品覆盖的浓度范围进行待测样本浓度的推测。2、相对定量：是用来确定经过不同处理的样品之间的表达差异或目标在不同时相差的表达差异，也就是倍数差异。Azure Cielo™ 实时荧光定量PCR系统来自美国Azure Biosystems公司，以创新服务于生命科学为愿景。Azure Cielo™ 实时荧光定量PCR系统融合了高品质Peltier温度模块和基于光纤传输的光学检测系统，为您的科学研究提供高精准、高灵敏的可靠结果。Azure Cielo 3/6检测通道，可根据实验需求灵活配置。同时配有10.3触控系统，主机本身可独立运行、连接、远程交互，让您随时随地知悉实验进程和及时获得实验结果。

标准曲线线性不佳、熔解曲线杂峰多、基因表达数据不知如何分析、多重定量PCR如何设计引物……相信每一个荧光定量PCR的工作者都会遇到这样那样的问题。 为了给大家提供一个技术交流的机会，让有经验的人能和大家分享其成功的经验，让更多的人尽快从定量PCR的实验困惑中走出来，德国耶拿分析仪器股份公司携手上海生工共同举办“荧光定量PCR达人秀”活动，邀请“身经百战”的您秀出您完美的解决方案！ 活动细则： 您只需要将您曾经碰到过的定量PCR实验中最头疼的问题以及最后的解决方案填写后发给我们，就可以参加此次活动。 评选流程： 9月16日至10月16日：文章投递有效期。 10月17日，从收集到的所有文章中评选出20篇优秀文章进入最终PK，于网上公布 10月18至10月30日，20篇文章网络公开投票，截止于10月30日24点，欢迎大家踊跃投票 10月31日公布获奖名单 网络投票及获奖名单公布网站：www.sangon.com/DM/vote01.aspx 奖品设置： 一等奖：1名，参观德国耶拿分析仪器股份公司总部，体验德国异地风情 二等奖：2名，Apple公司iPad平板电脑一台 三等奖：6名，名牌自行车一辆 您是荧光定量PCR达人吗？还在犹豫什么？快来参加吧！ 详情请联系： 德国耶拿分析仪器股份公司 生工生物工程（上海）有限公司 电话：021-54261977 电话：021-37772430 网址：www.analytik-jena.com.cn 网址：www.sangon.com 文章投递请登录以下网址：http://www.sangon.com/vote.aspxhttp://www.ebiotrade.com/custom/analytik-jena/110921/index.htm

FT-PCR非洲猪瘟荧光定量pcr仪品牌{实时荧光定量PCR仪}非洲猪瘟检测仪怎么用FT-PCR非洲猪瘟荧光定量pcr仪品牌{实时荧光定量PCR仪}非洲猪瘟检测仪怎么用：非洲猪瘟病毒检测是非洲猪瘟防控工作的重要举措，意义重大。为进一步提高非洲猪瘟病毒检测结果准确性，规范非洲猪瘟病毒诊断制品生产、经营和使用行为，2021年1月1日起，各有关部门和单位在动物检疫或疫病监测、诊断中，对生猪及其产品开展非洲猪瘟病毒检测，应当使用已取得农业农村部核发的产品批准文号的非洲猪瘟病毒诊断制品，确保检测结果准确。风途非洲猪瘟PCR检测仪(实时荧光定量PCR仪支持变温检测)用于运行病毒检测实验，并对实验数据进行分析 仪器既可在实验室内操作，又可用于野外科学实验，配合相应试剂，对取自待检测样本的分析物或其他分析物中的目标核酸进行快速、准确的定性检测。　　风途非洲猪瘟检测仪配套非洲猪瘟病毒荧光pcr检测试剂盒、非洲猪瘟病毒荧光pcr核酸检测试剂盒均已经获得农业农村部产品批准，可以满足非洲猪瘟核酸现场快速检测需求。可定量快速畜牧类疾病诊断如非洲猪瘟、禽流感、猪瘟、猪蓝耳、伪狂犬等疾病，广泛应用于养殖场、屠宰场、食品加工厂、肉产品深加工企业、农业农村部、畜牧局、检验检疫单位使用。　　实验员需要经过实验室技术和仪器、软件操作的专门培训，具备熟练的相关操作技能。　　二、仪器特点　　1.体积小，重量轻，易于携带。轻松满足外出实验的需求。　　2.内置10寸高清电容屏PDA，触屏操作，简便快捷。　　3.Marlow高品质Peltier制冷片，结合德国高端PT1000温度传感器以及电性电阻加热补偿边缘的温度控制模式，最大升温速度7℃，最大降温速度5℃，大大缩短实验时间。　　4.整板3s快速采光模式，保证实验结果孔位一致性。　　5.简洁直观的软件引导，轻松开启检测实验。　　三、非洲猪瘟PCR检测仪应用领域　　□ 基础科学研究　　□ 病原体检测　　□ 肉制品掺假　　□ 转基因检测　　□ 食品安全检测　　□ 药物开发及合理用药　　□ 基因表达　　□ 水体监测　　四、技术参数　　样品容量：16x0.2ml、支持8联管　　适用耗材：常见透明PCR 耗材，8x0.2ml 排管，0.2ml 单管　　反应体系：5-120ul反应模式体系　　加热/制冷模块：进口半导体热电模块　　温度控制范围：4°C-99℃　　升降温平均速率≥2°C/秒　　温控精度：≤±0.1°C　　温度均匀性：≤± 0.2°C　　温控区域数量：多点（2 点）　　梯度数：0 个　　梯度温度范围：无　　梯度孔数：无　　激发光源：免维护led　　激发光波长范围：400-700nm　　检测部件：进口光电检测器　　检测通道数：标配 1通道（FAM）、高配（选配）（FAM、VIC）　　适用染料和探针：FAM/SYBR Green I, VIC/HEX/CY3（选配）, ROX/Texas Red(选配), Cy5,TAMARA(选配)　　软件功能：荧光定量 PCR 系统软件；　　实时扩增反应曲线功能；　　特定标本实时反应曲线显示；　　数据分析功能；　　阴阳结果自动判定功能；　　图形化显示功能。　　噪音：45 dB　　屏幕尺寸：10 英寸(HD)　　触摸屏：电容式　　外接USB：支持数据导入导出　　热盖：自动压力调节　　外观尺寸：290（W）*308(L)*130(H)　　箱子尺寸：75长*38宽*19高cm　　净重：约3Kg

仪器信息网讯 2011年3月23日德国耶拿分析仪器有限公司在中国科学院遗传与发育生物学研究所举办了“高速实时荧光定量PCR体验交流会”。来自高校和科研院所的专家和技术人员50余人参加了这次体验交流会。出席体验交流会的还有德国耶拿公司中国区总经理赵泰先生、生命科学中国区经理诸建先生等。 　　在体验交流会之前，诸建先生首先向大家介绍了德国耶拿公司的历史及发展现状。耶拿公司的原子吸收光谱仪、紫外可见分光光度计、元素分析仪、总有机碳分析仪等产品在中国市场上有着广泛的知名度，并且占据了很大的市场份额，尤其2004年耶拿公司在世界上首次推出连续光源火焰原子吸收光谱仪，只需一个高能量氙灯光源，即可测量元素周期表中67个金属元素，是原子光谱仪划时代的革命性技术。 德国耶拿分析仪器有限公司生命科学中国区经理 诸建先生 　　但大家对德国耶拿公司的生命科学仪器产品的认识并不多，在诸建先生的介绍中大家进一步了解了耶拿公司的生命科学仪器的发展历史以及其技术特点。德国耶拿公司在2000年级开始了生命科学业务，2002年推出了第一款生命科学类仪器。尤其在2009年，德国耶拿公司收购了Cybio和Biometra公司，德国Biometra公司是欧洲最大的一家专业生产分子生物学仪器厂家，所提供的产品中包括高端PCR仪。所以此次体验会主要展示的仪器高速实时荧光定量PCR仪qTOWER的设计中就融合了Biometra公司的一些先进技术。 德国耶拿分析仪器有限公司中国区总经理 赵泰先生 　　据赵泰先生介绍，2010年，德国耶拿公司在中国组建了生命科学团队，开始在中国市场大力向生化仪器领域扩张。此次举办的高速实时荧光定量PCR体验会即是该系列市场拓展活动之一。“百闻不如一见”，将仪器拿到现场展示给用户，让用户亲眼目睹实际样品的测定过程，会引起用户浓厚的兴趣，进一步展示德国耶拿仪器的高品质和独特性能。 　　在体验交流会上，首先由德国耶拿公司的工程师吴潇韫女士详细介绍了高速实时荧光定量PCR仪qTOWER和全自动液体处理工作站FasTrans的性能、构造和特点等。 德国耶拿分析仪器有限公司 吴潇韫女士 　　高速实时荧光定量PCR仪qTOWER可以解决当今定量PCR实验面临的挑战，即缩短定量PCR检测时间、降低定量PCR实验成本、确保定量PCR实验结果的可靠性。 　　对比传统的实时荧光定量PCR，qTOWER的实验速度提高10倍 　　qTOWER采用低缘紧凑型的镀金纯银样品槽，其高效的热传导功能使热能利用率高。通过高效、长寿命的peltier元件控温，能够实现12°C/sec的升温速率和8°C/sec的降温速率。 　　SAC专利技术，使样品管壁能够向皮肤一样和样品槽紧密贴合，使模块的温度与反应管中液体的温度保持一致，热传导效率高达90%以上。综合以上多项技术，最快可在20分钟内完成40个循环的96孔四通道荧光定量PCR反应。 　　qTOWER的能耗大约是其它同类产品的五分之一 　　qTOWER整个PCR反应体系只需5-20ul样品，最低5ul体系即可进行荧光定量PCR检测，可实现微量样品的检测。另外，qTOWER不需要特殊的荧光定量PCR试剂，用户可自由选择常规的各种荧光定量PCR试剂。节约了样品和试剂，尤其节约了较昂贵的荧光定量PCR试剂，qTOWER大大降低了实验成本。 　　由于qTOWER高效的能量利用效率、节省的工作时间、样品体积少等特点，其耗电量最多能够减少95%，所以它每年只消耗100KWh (一年220天计算，每天运行4个程序)。 德国耶拿分析仪器有限公司工程师Matthias先生现场演示仪器的操作并进行相关实验 　　在大家详细了解了qTOWER的技术特点之后，由来自德国的工程师Matthias先生现场演示了qTOWER以及全自动液体处理工作站FasTrans的操作并进行相关实验。 　　通过这一次的高速实时荧光定量PCR体验交流活动，让更多的生命工作者了解德国耶拿的生命科学产品和先进技术，让更多的实验室对德国耶拿公司的qTOWER等先进生命科学仪器产生了兴趣，在应用实时荧光定量PCR技术上又添新选择。 用户对德国耶拿公司的产品非常感兴趣 体验交流会最后举行了抽奖活动 　　德国耶拿公司举行的“高速实时荧光定量PCR体验会”系列活动的首站于2011年3月16日在上海展开，16日-18日期间分别在中科院上海生命科学研究院、复旦大学和上海交通大学成功举办了三场。3月22日，“高速实时荧光定量PCR体验会”来到了北京，在中国农业大学成功举办了北京站的首次活动。23日在中国科学院遗传与发育生物学研究所体验会结束后，将转战天津进行本系列活动的最后一站。德国耶拿公司的“高速实时荧光定量PCR体验会”系列活动吸引了大批生命科学工作者的参与，取得良好的效果。 在中国农业大学成功举办“高速实时荧光定量PCR体验会”的现场

荧光定量PCR(qPCR)是以荧光为基础的定量分析技术，应用非常广泛，可以用于定量RNA丰度(RT-qPCR)，验证芯片或测序的数据，确定病原体的载量，进行基因分型等等。 　　荧光定量PCR仪负责监控反应体系中荧光强度的变化，记录检测荧光达到阈值时的循环数(被称为Ct或Cq值)。从理论上说，每一个qPCR循环会使目标序列翻倍，因此人们可以在Ct值的基础上对样本进行定量。 　　在进行荧光定量PCR时，我们往往会面临众多选择，每一步选择都影响着实验的最终结果。好在市面上的qPCR产品也种类繁多，可以满足我们的各种需求。 　　染料法VS探针法 　　荧光定量PCR主要分为染料法和探针法两种。染料法一般采用DNA染料SYP® Green(或Promega的PYT® Green等)，这种方法不仅使用简单，成本也最低。不过染料法检测的是体系中的所有双链DNA，不具有序列特异性。为此，一些厂商提供ROX作为内部荧光参考标准，用来校正背景。 　　染料法 　　成本低是染料法qPCR的一个主要优势，DNA染料相对比较便宜，而且适用于任何序列。不过染料法无法在同一个样本中检测多个指标，也难以鉴定扩增得到的序列，会受到脱靶效应(如引物二聚体)的影响。在这种情况下，就需要进行熔解曲线分析，判断扩增所得产物是否只有一种。 　　据安捷伦的Surekha Karudapuram介绍，熔解曲线分析能够帮助研究者确定扩增的特异性。她还指出，理论上利用熔解曲线也可以进行多染料的反应，甚至可以粗略定量那些峰值。 　　市面上可供选择的染料法master mix非常多，例如：安捷伦的Pilliant III Ultra-Fast SYP® Green QPCR & QRT-PCR master mixes，Bio-Rad的SsoAdvanced™ SYP® Green Supermix，Life Technologies的SYP® Select Master Mix，Promega的GoTaq® qPCR Master Mix，Qiagen的Type-it CNV SYP Green PCR Kits，罗氏的FastStart SYP Green Master，Sigma-Aldrich的KiCqStart® SYP® Green qPCR ReadyMix™ ，以及Thermo的Luminaris Color HiGreen High ROX qPCR Master Mix等等。 　　TaqMan探针 　　探针法qPCR使用具有序列特异性的荧光寡核苷酸探针。目前最常用的是Life Technologies公司的TaqMan® 探针，该探针5’端连有荧光基团，3’端连有淬灭基团。在反应进行时，探针与正反向引物之间的模板结合，当聚合酶到达探针处时，酶的5’-3’外切活性将荧光基团切下，使其脱离淬灭基团，发出荧光。 　　探针法与染料法的最大区别在于，理论上探针法中的荧光信号只来源于目标序列。此外，人们还可以利用不同探针，在一个体系中同时检测多种指标。 　　市面上的探针法master mixes也是琳琅满目，包括：安捷伦的Pilliant III Ultra-Fast QPCR & QRT-PCR Master Mixes，Bio-Rad的SsoFast Probes Supermix，Life Technologies的TaqMan Fast Advanced Master Mix，Promega的GoTaq Probe qPCR Master Mix，Qiagen的Type-it CNV Probe PCR +qC Kit，罗氏的FastStart TaqMan Probe Master，以及Thermo的DyNAmo ColorFlash Probe qPCR Kit等等。 　　据估计，SYP Green或TaqMan的使用者占qPCR用户总数的80-90%，其他用户采用的也基本上是上述两种方法的变种，例如分子信标和Scorpion® 探针。 　　其他探针 　　分子信标是一个发夹结构的DNA探针，两头分别带有荧光基团和淬灭基团。与TaqMan一样，分子信标的序列也与扩增引物之间的模板互补。在退火阶段，这种探针的发夹结构展开与模板结合，这时荧光基团与淬灭基团分开，发出与模板丰度相对应的荧光信号。Scorpion探针将分子信标与PCR引物结合起来，在扩增阶段引物延伸形成PCR产物，产物中的序列能够与探针互补结合，使探针发夹结构打开，发出荧光。 　　此外，Promega还开发了一种新型的Plexor® qPCR系统。在Plexor系统中，引物含有经修饰的核苷酸(iso-dC)和荧光基团。随着扩增的进行，DNA聚合酶会向DNA链中引入荧光淬灭基团，使体系中的荧光逐渐减弱。其他qPCR方法记录荧光的增强，而Plexor记录的是荧光的衰减，Promega的市场经理Gapiela Saldanha解释道。 　　据Saldanha介绍，Plexor将探针法的序列特异性，与染料法的熔解曲线分析结合起来。“你可以验证目标扩增的特异性，”她说。此外，Plexor检测不同靶序列只需要两种引物，使多重分析的设计更为容易。 　　基因表达分析 　　从SNP分型、拷贝数分析到病原菌检测，qPCR应用范围非常广，不过最常见的是用qPCR进行基因表达分析。基因表达分析往往需要定量样本中的特定RNA，例如mRNA、microRNA、或长非编码转录本。进行这样的分析，首先要将RNA转变为可以扩增的DNA，进行cDNA合成。 　　RT-qPCR试剂盒主要分为一步法和两步法。一步法试剂盒将cDNA合成与qPCR合并为一步，速度更快，也更适用于自动化流程。两步法虽然需要进行两次反应，但反应的效率更高，而且可以允许用户保留cDNA样本，能够在一个RNA样本中检测多个转录本。 　　“两步法(qPCR)更有优势，其cDNA合成和qPCR反应的效率更高，”Saldanha说。安捷伦，Bio-Rad，Life Technologies，Promega，罗氏和Qiagen都提供有相应的RT-qPCR试剂盒。 　　样本的挑战 　　荧光定量PCR结果的好坏往往取决于核酸制备的质量。处理环境样本(如土壤)和植物样本比较困难，因为其中往往含有抑制PCR反应的物质。此外，FFPE样本也较难处理，其中不仅有PCR抑制剂，样本中的核酸可能也遭到了降解。 　　“这种情况对于灵敏度要求较高，因为模板量非常少。”Karudapuram说，“需要提取更纯的核酸，并且使用能扩增少量初始模板的master mix。”我们可以选用进行了相应优化的核酸提取试剂盒，例如Promega的ReliaPrep™ FFPE RNA Miniprep System或者Life Technologies的Plant RNA Reagent等等。 　　选择理想的qPCR扩增引物，也是一个不容忽视的问题。专家认为，对于相同基因的检测，最好采用已经标准化了的引物。目前，不少供应商都为研究者们准备了预先设计好的qPCR文库，例如Sigma-Aldrich公司就制备了人类、小鼠、大鼠和斑马鱼的文库。此外，Qiagen，Life Technologies，和Thermo等公司也提供有类似的工具。 　　qPCR仪与数字PCR 　　从本质上来讲，荧光定量PCR仪就是PCR仪与荧光检测仪的结合，用于记录qPCR反应时产生的数据。市面上的qPCR仪主要有以下几种：安捷伦的Mx3000P qPCR System，Bio-Rad的CFX96 Touch™ Real-Time PCR Detection System，Illumina的Eco Real-Time PCR System，Life Technologies的QuantStudio™ 12K Flex System，Qiagen的Rotor-Gene Q，罗氏的LightCycler® systems，以及Thermo的PikoReal Real-Time PCR System等。 　　荧光定量PCR已经是一个相当成熟的技术了，不过当样本间的绝对差异较小时，qPCR检测的效果并不那么理想。例如，qPCR很难区分一个基因两拷贝和三拷贝之间的差异。好在，能够进行绝对定量的数字PCR技术诞生了。 　　数字PCR将样本分为许多份，使每一份包含零或一个拷贝的模板。然后在每一份样本中运行qPCR反应，对呈阳性的孔进行计数，以此确定样本中模板分子的绝对数量。这一技术的精确性非常高，可以区分很小的拷贝数差异。Bio-Rad、Fluidigm、Life Technologies和RainDance是目前几家主要的数字PCR厂商。

采购量暴增，竞争格局剧变，在刚刚过去的2020年，中国荧光定量PCR市场发生前所未有大变化！受国家出台的相关疫情防控政策强力驱动，2020全年，特别是下半年，荧光定量PCR采购需求猛增。经仪器信息网调查研究，2020年全国通过招标采购荧光定量PCR近1.2万台，近5倍于2019年。供需关系发生反转2020年，荧光定量PCR供不应求，市场由原来的买方市场转变为卖方市场。在以往买方市场时，企业竞争更加侧重在品牌力、产品力、服务能力等；而如今处于卖方市场，有货是王道，企业间拼的是产能、渠道。市场涌入大量竞争者，格局发生极大改变供需关系反转释放出的巨大市场机会，加之荧光定量PCR产品发展成熟，技术门槛相对不高，导致市场涌入大量竞争者。根据我们统计，参与市场竞争的企业超过80家。市场格局发生极大改变，各企业销量排名和份额变化显著，国产企业获益最大。此外，各采购单位需求量也发生巨大变化。接下来，市场机会在哪里？各品牌市场份额如何？竞争对手在不同省份、机构里表现如何？各地区采购情况如何？哪些省市、机构采购需求旺盛？采购机构怎样分布？2021年市场机会主要在哪里？… … … … 仪器信息网（www.instrument.com.cn） 基于自身平台优势，对2020年国内公开采购数据进行分析，撰写了《中国荧光定量PCR仪市场研究报告（2021版）》，旨在为相关从业者进行市场分析和业务决策提供参考。本报告包含荧光定量PCR市场相关最新政策追踪、市场概况、采购机构画像、竞争情况、2021市场研判等内容。》》》欲购买完整报告，请联系李先生（17600374905，微信同号）表1 中央财政支持应急物资保障体系建设补助资金分省预算指标图1 2018~2020年荧光定量PCR仪分季度市场变化图2 2020年Q2~Q4分省采购量图3 主要机构Q2~Q4采购量变化图4 2018~2020年各类机构总市场量对比图5 县级医院采购量与机构数量比图6 各品牌进入省份数量图7 2020年荧光定量PCR仪各品牌市场占有率图8 六类机构2020年采购量及Top10品牌在不同机构市场份额图9 2018~2020年Top10品牌非医疗市场份额变化图10 2018~2020年Top10品牌医疗市场份额变化图11 2020年Top10品牌医疗市场占有率图12 2020年Q3主要品牌在各省销量比较图13 2020年Q4主要品牌在各省销量比较

实时荧光定量PCR （Quantitative Real-time PCR）是一种在DNA扩增反应中，以荧光化学物质测每次聚合酶链式反应（PCR）循环后产物总量的方法。通过内参或者外参法对待测样品中的特定DNA序列进行定量分析的方法。Real-timePCR是在PCR扩增过程中，通过荧光信号，对PCR进程进行实时检测。由于在PCR扩增的指数时期，模板的Ct值和该模板的起始拷贝数存在线性关系，所以成为定量的依据。qPCR 原理将标记有荧光素的Taqman探针与模板DNA混合后，完成高温变性，低温复性，适温延伸的热循环，并遵守聚合酶链反应规律，与模板DNA互补配对的Taqman探针被切断，荧光素游离于反应体系中，在特定光激发下发出荧光，随着循环次数的增加，被扩增的目的基因片段呈指数规律增长，通过实时检测与之对应的随扩增而变化荧光信号强度，求得Ct值，同时利用数个已知模板浓度的标准品作对照，即可得出待测标本目的基因的拷贝数。那在我们了解了qPCR的原理之后，我们接下来就要了解一下这几个我们在做实时荧光定量PCR的实验时，一定要清楚的知道的几个概念：CT值、扩增曲线、基线、荧光阈值和阈值循环数01Ct 值的定义在荧光定量PCR技术中，有一个很重要的概念 —— Ct值。C代表Cycle，t代表threshold，Ct值的含义是：每个反应管内的荧光信号到达设定的域值时所经历的循环数。02扩增曲线（amplification curve）是在实时荧光定量PCR中监测到的荧光信号随着循环数变化而绘制的一条曲线。在进行PCR反应过程中，通过检测系统对PCR管内的样品进行实时检测，最后将荧光信号值通过成像技术显现在计算机上。正常的扩增曲线包括四个阶段：基线期、指数增长期、线性增长期、平台期。03基线（baseline）是背景曲线的一段，在扩增反应的最初数个循环里荧光信号变化不大，接近一条直线。04荧光阈值（threshold）是在荧光扩增曲线指数增长期设定的一个荧光强度标准(即PCR扩增产物量的标准）。荧光阈值可以设定在PCR扩增的指数期。05阈值循环数表示每个PCR反应管内荧光信号达到设定的荧光阈值所经历的循环数，研究表明，各模板的CT值与该模板的起始拷贝数的对数存在线性关系，即起始拷贝数越多，CT值越小 起始拷贝数越少,CT值越大。我们利用已知起始拷贝数的标准品可做出以起始拷贝数的对数为横坐标,CT值为纵坐标的一条标准曲线。只要获得未知模板的CT值,即从标准曲线上计算出该模板的起始拷贝数。06荧光化学目前，实时荧光定量PCR技术主要通过两种方式——荧光染料或者荧光标记的探针对PCR产物进行标记跟踪，实时在线监控反应过程，并结合相应的软件对产物进行分析，计算待测样品模板的初始浓度。现将其原理简述如下：1）TaqMan荧光探针：PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，该探针为一寡核苷酸，两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时，Taq酶的5’－3’外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。2）SYBR荧光染料：在PCR反应体系中，加入过量SYBR荧光染料，SYBR荧光染料特异性地掺入DNA双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的SYBR染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步。那我们要如何选择qPCR的检测方法呢？下面我就列出他们各自的优缺点，大家可以参考一下！ qPCR和常规PCR的区别实时检测（在对数扩增时期）而不是终点检测敏感性高需要样品少特异性高精确定量qPCR常见问题分析1.无Ct值出现检测荧光信号的步骤有误: 一般SG法采用72℃延伸时采集，Taqman法则一般在退火结束时或延伸结束采集信号。引物或探针降解: 可通过PAGE电泳检测其完整性。模板量不足: 对未知浓度的样品应从系列稀释样本的最高浓度做起。模板降解: 避免样品制备中杂质的引入及反复冻融的情况。2. Ct值出现过晚（Ct38）扩增效率低: 反应条件不够优化。设计更好的引物或探针；改用三步法进行反应；适当降低退火温度；增加镁离子浓度等。PCR各种反应成分的降解或加样量的不足。PCR产物太长: 一般采用80-150bp的产物长度。3. 标准曲线线性关系不佳加样存在误差: 使得标准品不呈梯度。标准品出现降解: 应避免标准品反复冻融，或重新制备并稀释标准品。引物或探针不佳: 重新设计更好的引物和探针。模板中存在抑制物，或模板浓度过高4. 负对照有信号引物设计不够优化：应避免引物二聚体和发夹结构的出现。引物浓度不佳：适当降低引物的浓度，并注意上下游引物的浓度配比。镁离子浓度过高：适当降低镁离子浓度，或选择更合适的mix试剂盒。模板有基因组的污染：RNA提取过程中避免基因组DNA的引入，或通过引物设计避免非特异扩增。5. 扩增效率低反应试剂中部分成分特别是荧光染料降解。反应条件不够优化：可适当降低退火温度或改为三步扩增法。反应体系中有PCR反应抑制物：一般是加入模板时所引入，应先把模板适度稀释，再加入反应体系中，减少抑制物的影响。6. 溶解曲线不止一个主峰引物设计不够优化：应避免引物二聚体和发夹结构的出现。引物浓度不佳：适当降低引物的浓度，并注意上下游引物的浓度配比。镁离子浓度过高：适当降低镁离子浓度，或选择更合适的 mix 试剂盒。模板有基因组的污染：RNA提取过程中避免基因组DNA的引入，或通过引物设计避免非特异扩增。7. 同一试剂在不同仪器上产生不同的曲线，如何判断？判断标准：扩增效率，灵敏度，特异性如果扩增效率在90%-110%，都是特异性扩增，都可以把数据用于分析。8. 扩增曲线的异常？比如“S”型曲线？参比染料设定不正确(MasterMix不加参比染料时，选NONE)模板的浓度太高或者降解荧光染料的降解

4月13日，记者从济南市工信局了解到，济南企业山东博弘基因科技有限公司自主研发的“医用荧光定量PCR仪”顺利获得国家药品监督管理局（NMPA）颁发的《医疗器械注册证》（注册证号：国械注准20223220464）获批上市，这是山东省内首台获得注册证医用荧光定量PCR仪器。荧光定量PCR系统在新冠病毒检测中发挥着关键作用。根据国家卫健委《新型冠状病毒肺炎诊疗方案（试行第八版）》，新冠肺炎确诊病例在符合疑似病例标准的基础上，须同时具备包括“实时荧光RT-PCR检测新型冠状病毒核酸阳性”在内的病原学或血清学证据者。据了解，山东博弘基因科技有限公司自主研发的LEIA-X4型医用荧光定量PCR仪可对目标核酸进行快速、准确的定量、定性检测，采用独特的温控技术保证每个孔位的温控高度统一，配备专有散热片技术，可以使仪器升降温速率更快，温控更精确，设备更稳定。

小蓝：我每天兢兢业业才跑四五板定量，机器还时常约不到，还有一堆样品基因等着我。小蓝：这啥时候是个头啊，老板天天催进度，谁能帮帮我？！小艾：我懂你的烦恼，一板一两个小时确实熬人，不过qPCR早已按下了“加速键”，现在半小时就能完成实验。小蓝：真的假的？！我读书多，你可骗不了我。小艾：这不解决方案来啦，必须给您解决问题！小艾：艾普拜快速荧光定量PCR系统搭配快速试剂，可显著提高扩增速度66.6%以上，将时间缩短至20-30min。小蓝：这么快，那真的是666啊~小艾：不光速度快，灵敏度、特异性依旧保持高水准。小蓝：快给我详细介绍介绍，让我早日脱离“苦海”。（超）快速qPCR技术大大提高了扩增速度，缩短了实验时间，对于要求速度和时效的使用场景提供了极大的帮助。艾普拜提供匹配（超）快速qPCR的仪器和扩增试剂，为科研和检测助力，让您快人不止一步！ 仪器篇 Pangaea快速荧光定量PCR系统Pangaea（盘古）支持快速qPCR程序，可在30 min内完成40-45个扩增循环，提速不止一档。产品优势设备性能化：独特工业设计，先进温控系统，最大升温速率可达8.5 ℃/s，检测速率显著提高，同时稳定性、精确性保持一流水准。设备智能化：搭配国际化、智能化操作软件，简单快速设置实验。设备人性化：实验检测、结果分析一机完成，线上软件助力随时随地分析数据。设备通用化：包含3-6个荧光通道，可用于多靶标检测，荧光通道可定制。适配市面上大多数耗材。Pangaea Super 8超快速荧光定量PCR系统Super 8（速8）超快速qPCR检测速度更快，可在20 min内完成40-45个扩增循环，为您提供艾普拜速度产品优势快速：快速温控系统，最大升温速率可达12 ℃/s，样本随到随检，20min完成检测。便携：重量4kg，体积小，搬运方便。简单：软件操作简单，上手快。免校准：移动后无需校准，免维护。多机联用：提高检测效率。产品参数： DNA直提试剂篇 qPCR实验快不快，提取也是不可忽视的一部分，传统手提方式耗时耗力，一两个小时的提取时间很常见，及时用了一些常规的试剂盒，时间也要半个小时以上，艾普拜研发了植物DNA直提试剂盒，可在极短时间完成核酸提取，大大缩短提取的时间。以植物样本DNA直提试剂盒为例，仅需以下几步简单的操作，即可在10min内完成DNA提取。产品优势裂解速度快，无需额外加热，6分钟内即可完成提取过程常温保存，方便携带提取的 DNA 适用于荧光定量PCR等后续检测实验产品货号 扩增试剂篇 艾普拜研发了可支持快速qPCR程序的试剂。以Rapid qPCR PreMix（UNG）为例，可以对多靶标基因进行快速准确检测，重复性好、可信度高。试剂中引入了dUTP/UNG 防污染系统，可消除扩增产物污染对 qPCR的影响，保证结果的准确性。产品优势支持快速程序性能好、兼容性高、可信度高含UNG防污染系统产品货号

荧光定量Western Blot，绝对不是上样量越多越好。可靠的Western Blot印迹数据通过加载适当量的样品才能获得。加载过多的蛋白会导致信号饱和或用于检测的荧光基团的自猝灭。那么，您如何知道要加载多少裂解液呢？首先使用BCA或Bradford等蛋白测定方法测量裂解液样品的浓度。一旦知道样品的浓度，便可以确保每种样品的加载量相同。于此同时，您仍然需要一种方法来校准凝胶加载量和转印效率的问题。蛋白印迹定量的最佳方法和新共识是将蛋白进行归一化。许多期刊都接受了总蛋白质归一化（TPN），有些期刊（例如《JBC》）甚至要求作者在Western印迹的定量数据时使用TPN或使用验证过的看家蛋白进行归一化。在下面的实验中，加载了0.2-50µg的HeLa裂解物，以检测靶标蛋白STAT3与内参对照GAPDH和总蛋白膜染色的性能。尽管Total-PVDF膜染色线性最高至50μg裂解物，但这显然不是靶标蛋白STAT3加载的理想上样量，因为信号在12.5μg以上不再线性。上样控制GAPDH的归一化提出了一个严重的问题，因为它在裂解物的浓度低于1µg时呈线性，因此其定量用途非常有限。一般而言，我们建议不要加入超过20µg的裂解物，因为这通常会导致蛋白定量方面的问题。为了获得最佳的荧光定量Western印迹，不要忘记应用适当的归一化策略并加载适量的蛋白。Azure Imager多功能分子成像系统☑ 双激光近红外成像：激发强度大、信噪比高、光泄漏少。☑ RGB可见荧光多功能检测：可进行小鼠成像、转基因植物筛选、模式生物斑马鱼成像、培养皿成像等。☑ 同时4通道荧光成像，检测更高效。☑ 高灵敏化学发光和彩色Marker成像。☑ 彩色蛋白胶和核酸胶成像。参考文献：1. Collecting and presenting data. The Journal of Biological Chemistry.website.:http://jbcresources.asbmb.org/collecting-and-presenting-data#blot. Accessed February 4, 2019.2. Fosang AJ and Colbran RJ. Transparency Is the Key to Quality. J Biol Chem. Dec. 11 2015. 290(50). 29692–29694. PMCID: PMC4705984.

采购计划编号：440606-2022-02612项目编号：JF2022(SD)WZ0031项目名称：检验科实时定量荧光PCR仪等设备项目采购方式：公开招标预算金额：1,472,000.00元采购需求：合同包1(实时定量荧光PCR仪等设备):项目标的及采购限价序号标的名称数量科室允许进口产品参与投标最高限价（万元）1实时定量荧光PCR仪4套检验科否147.22核酸扩增检测分析仪2套检验科否3全自动核酸提取仪1套检验科否详细规范请参阅招标文件中的用户需求书。投标人必须对本项目的全部内容进行投标报价，如有缺漏，将导致投标无效。如投标报价超出最高限价，将导致投标无效。本项目采购本国产品，以进口产品投标将导致投标无效。

体视荧光模块采用双色三通道设计，最多可实现3色荧光的观察需求，可选配V/B/G/Y/R在内的相关波段，配套数显屏显设计，实现定量实验的要求，对于亮度调节变得更加可控。另外扩大了通光视野范围，相比之前，与显微镜兼容匹配性更高。还可匹配各品牌伽利略光学系统体视显微镜，使普通显微镜实现荧光功能，且不改变显微镜原有光路，轻松为普通显微镜实现荧光观察功能。体视荧光模块实现定量实验的要求，使用改性沥青提升路面的耐磨耗能力和延长道路的使用寿命，已经成为我国基建的新常态。成品的改性沥青对比普通沥青优势明显，但其品质无法用肉眼观察分析，这导致很多客户在因达不到效果而与上游产生质量问题纠纷。对沥青掺杂橡胶、树脂、高分子聚合物、磨细的橡胶粉或其他填料等外掺剂，或利用轻度氧化加工等措施，使沥青或沥青混合料的性能得以改善制成的沥青结合料，就是改性沥青。性能优势：1、双色三通道结构设计，标配两个大视野荧光通道与一个明场通道；2、可根据用户需求，自由选择荧光波段、数量，波段切换稳定顺畅；3、采用LED冷光源，驱动电源、LED激发光源及荧光滤光组一体化；4、侧置通道、亮度数字化显示直观便捷；5、体视荧光模块基本可以将沥青放大到100X，对沥青的观察也十分简便。同时，它采用优异的无限远平行光路系统，LED荧光双光路照明设计。体视荧光模块应用领域：生物活体成像；线虫；果蝇；斑马鱼；胚胎；司法刑侦。体视荧光模块产品详情页：体视荧光模块 BGU-LED-ZMH

盘古快速荧光定量PCR系统可根据实际需要灵活配置3-6个检测通道，可支持ATTO390、ATTO425核酸标记荧光染料拓展检测，为做多重检测的客户提供了更多的选择。实现从近紫外UV-A（ATTO390）到近红外NIR（Cy5.5）的全光谱荧光定量PCR的应用。▲ 数据来源于珠海用户产品特点：申请试用▲扫码申请

项目编号：ZB0107-202206-ZCHW0157项目名称：武汉大学采购荧光定量pcr仪项目预算金额：120.0000000 万元（人民币）最高限价（如有）：120.0000000 万元（人民币）采购需求：序号货物名称主要规格数量交货期质保期预算（限价）是否接受进口备注1荧光定量pcr仪1.主机配备96/384双模块，可自行更换，无需校准。2.*激发荧光通道数≥5个。3.*检测荧光通道数≥5个。2套签订合同后3个月内验收合格后至少三年120万元是合同履行期限： 验收合格后至少三年本项目( 不接受 )联合体投标。

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项目编号：CG2022-WT-GK-HW-048项目名称：大连海关2022年仪器设备采购项目预算金额：204.6000000 万元（人民币）采购需求：（一）货物内容包件号序号品目名称数量单价预算（元）交货期交货地点质保期包件11生物安全柜466000产品合同签订后10日内交货。海关指定地点产品安装调试经用户验收合格当天起，质保期3年。2荧光定量PCR仪（六通道）43300003荧光定量PCR仪（四通道）13300004高压灭菌器266000（二）行业类型：工业（三）其它要求1.投标人必须对所投标包中的所有货物进行投标，不允许拆包投标。2.针对同一包，一个投标人不得提交两个或两个以上不同的投标文件或投标报价。3.各品目产品的投标报价不能超过本品目预算（品目预算详见项目需求书中的分配表），否则视为无效投标。合同履行期限：详见采购文件本项目( 不接受 )联合体投标。

基于实时荧光定量聚合酶链式反应分析(PCR)仪的核酸检测技术是《新型冠状病毒肺炎诊疗方案》中规定的新冠病毒确诊方法。因其操作便捷、相对快速高效、特异性强和较高的准确率，尤其适用于窗口期病例的及时筛查和判定，能有效防控疫情扩散。随着实时荧光定量PCR仪的频繁使用，其温度参数或光学物理参数可能产生偏差，进而影响判定结果。因此，开展实时荧光定量PCR仪全参数的计量溯源至关重要。 　　天津出现奥密克戎变异株本土确诊病例后，天津计量院高度重视，迅速建立技术团队。建标负责人，天津计量院热工室余松林博士放弃公休日积极组织撰写材料，同时为验证计量标准的准确性获取大量实验数据，与本室专业技术人员王喆赴医院加班加点开展现场实验。经过长期努力，完成了建标材料准备，并及时向上级主管部门提交了建标申请。 　　《实时荧光定量PCR仪校准装置》计量标准将为医疗机构和第三方核酸检测机构的荧光定量PCR仪计量校准提供技术支持，为坚持“外防输入、内防反弹”总策略和“动态清零”总方针贡献力量。该标准可实现实时荧光定量PCR仪温度参数，如示值误差、均匀度和升、降温速率，以及光学物理参数，如阈值循环数Ct值，溶解温度漂移和溶解温度比等全参数的计量溯源，与基于标准物质的荧光定量PCR仪计量方法相比，避免了后者可能引入的人为误差，提高了标准装置的溯源可信度。

项目编号：2022-YJFHYJ-W1001项目名称：实时荧光定量PCR仪等6型设备采购项目预算金额：777.0000000 万元（人民币）最高限价（如有）：777.0000000 万元（人民币）采购需求：包号货物名称规格型号技术要求计量单位数量交货时间交货地点预算价格（万元）1实时荧光定量PCR仪详见采购项目技术和商务要求详见采购项目技术和商务要求台/套1合同签订生效后3个月内供货。如为进口设备，收到外贸信用证后3个月。采购人指定地点602蛋白纯化仪详见采购项目技术和商务要求详见采购项目技术和商务要求台/套1合同签订生效后6个月内供货。采购人指定地点703超连续白光激光器（含紫外连续激光模块）详见采购项目技术和商务要求详见采购项目技术和商务要求台/套1合同签订生效后3个月内供货。采购人指定地点1074全自动样品预处理系统详见采购项目技术和商务要求详见采购项目技术和商务要求台/套1合同签订生效后3个月内供货。采购人指定地点955质谱成像离子源详见采购项目技术和商务要求详见采购项目技术和商务要求台/套1合同签订生效后6个月内供货。采购人指定地点1206四级杆液相色谱质谱联用仪详见采购项目技术和商务要求详见采购项目技术和商务要求台/套1合同签订生效后6个月内供货。采购人指定地点325说明1.除特殊说明外，各包均为含税价，报价方须对所报价包内所有产品和数量进行报价，否则视为无效报价。2.投标总价是包含设备制造、包装、保险及安装调试、运输、培训、进口税费等一切费用。3.供应商报价一般不得超过采购预算，否则按报价无效处理。 合同履行期限：包号 货物名称 规格型号 技术要求 计量单位 数量 交货时间 交货地点 预算价格（万元）1 实时荧光定量PCR仪 详见采购项目技术和商务要求 详见采购项目技术和商务要求 台/套 1 合同签订生效后3个月内供货。如为进口设备，收到外贸信用证后3个月。 采购人指定地点 602 蛋白纯化仪 详见采购项目技术和商务要求 详见采购项目技术和商务要求 台/套 1 合同签订生效后6个月内供货。 采购人指定地点 703 超连续白光激光器（含紫外连续激光模块） 详见采购项目技术和商务要求 详见采购项目技术和商务要求 台/套 1 合同签订生效后3个月内供货。 采购人指定地点 1074 全自动样品预处理系统 详见采购项目技术和商务要求 详见采购项目技术和商务要求 台/套 1 合同签订生效后3个月内供货。 采购人指定地点 955 质谱成像离子源 详见采购项目技术和商务要求 详见采购项目技术和商务要求 台/套 1 合同签订生效后6个月内供货。 采购人指定地点 1206 四级杆液相色谱质谱联用仪 详见采购项目技术和商务要求 详见采购项目技术和商务要求 台/套 1 合同签订生效后6个月内供货。 采购人指定地点 325说明 1.除特殊说明外，各包均为含税价，报价方须对所报价包内所有产品和数量进行报价，否则视为无效报价。2.投标总价是包含设备制造、包装、保险及安装调试、运输、培训、进口税费等一切费用。3.供应商报价一般不得超过采购预算，否则按报价无效处理。本项目( 不接受 )联合体投标。

1983年PCR技术的诞生，打开了分子生物学研究的热潮，划开了生命科学研究的后时代，为生命科学研究和临床检测带来极大便利。在我国，PCR技术开始兴起于上世纪90年代。当时作为新兴技术的PCR曾因为假阳性事件频发，被卫生部命令禁止用于临床诊断，这一禁就是4年。2002年，卫生部医政司发布《临床基因扩增检验实验室管理暂行办法》，宣布对PCR技术的临床应用开始解禁，国内PCR技术迎来大解放！2005年，一批被严格掌握在外企手中的PCR核心专利大规模到期，国内厂商迎来时机。2017年，罗氏最后一批PCR核心专利到期，PCR市场为广大厂商敞开大门。20余年以来，PCR市场发展稳步进行，国内PCR仪器市场以约3%~4%的增速稳定增长。到了2020年，新冠疫情突然爆发，在国家政策要求的常态化疫情防控形势下，PCR市场迎来超级爆发。各路资本争相涌入该细分领域，仪器研发厂商也纷纷涉足PCR和核酸提取领域，市场仍在不断涌入新玩家。据仪器信息网不完全统计，当前国内PCR市场已有超过80家品牌。在当前国内疫情缓和的大背景下，PCR市场的声量和舆论似乎大发消减，后疫情时期的PCR市场是否会回归新冠前“不温不火”的状态？答案是否定的。这个细分行业是精准医疗的重要基础，上半年以来PCR产品推陈出新，荧光定量PCR国标即将发布，有企业IPO上市，还有众多优质资本加码布局PCR黄金赛道。经过2020年的野蛮生长与洗礼，2021年的PCR圈收敛了，但领域前进的脚步无疑更稳健，市场展现出更蓬勃地生命力。拒绝野蛮生长 荧光定量PCR即将迎来国标时代长期以来，实时荧光定量PCR仪被国外品牌所垄断，近年来随着我国科技不断创新，制造水平逐步提升，国产化的实时荧光定量PCR仪开始占领国内市场。现行的行标或国标缺乏一个能对实时荧光定量PCR仪评价的统一标准，不利于行业的发展以及日常检测工作的开展。根据国标委发【2019】40 号文“国家标准化管理委员会关于下达 2019 年第四批国家标准制修订项目计划的通知”，其中项目代号 20194004-T-604 的《实时荧光定量 PCR 仪性能评价通则》为国家标准制定项目。在今年1月份，全国工业过程测量控制和自动化标准化技术委员会和分析仪器分技术委员会发布成立“实时荧光定量PCR 仪性能评价通则”国家标准起草工作组的通知，正式开始荧光定量PCR国家标准的制定。为进一步有力推动国产仪器市场化规范的实施，加快国产自主研发仪器的市场推广的健康发展，全国工业过程测量控制和自动化标准委员会分析仪器分技术委员会（TC124/SC6)秘书处于2021年7月10日~14日在苏州组织召开了《实时荧光定量PCR仪性能评价通则》标准工作组第四次会议并邀请多家仪器厂商一同进行了新一轮的实时荧光定量PCR仪性能评价方法验证工作。这是我国第一个关于荧光定量PCR仪性能评价的国家标准，天隆科技、杭州博日、鲲鹏基因，苏州雅睿、上海宏石、百源基因、杭州晶格、安徽皖仪、圣湘生物、安图实验仪器、华大智造、科源电子、谱尼测试等企业参与制定。　　该标准的制定，旨在建立实时荧光定量PCR仪性能评价通则，将目前分散于行业标准、地方标准中的有关方法进行整理和验证，对目前缺乏规范的方法进行研制，最终形成针对实时荧光定量PCR仪性能评价的通用方法标准。新品推出、产品获批 医疗市场准入产品又多了几家永诺生物在仪器信息网举办的第四届基因测序网络会议上重磅发布数字PCR新品ＭicroDrop-20微滴式数字PCR系统。新品具有的优势：基因突变灵敏度0.1%，绝对定量CV永诺生物MicroDrop-20数字PCR系统鲲鹏基因科技有限责任公司自主研发的Archimed X 系列-时间分辨逐孔扫描荧光定量PCR系统成功获得欧盟CE-IVD认证，符合欧盟相关要求和市场准入资格，成功取得进入欧洲等海外市场的“护照”。 Archimed时间分辨荧光定量PCR系统致善生物全自动一体化医用PCR分析系统Sanity2.0，日前获批国家药品监督管理局三类医疗器械注册证。厦门致善一体机Sanity2.0基于实时荧光PCR检测原理，一键启动，即可全自动完成核酸提取、配制反应体系、PCR扩增检测、报告结果。国际上崭露头角的医用PCR一体机企业主要有美国赛沛、生物梅里埃、罗氏等，致善生物此次获批的PCR一体机，是中国内地罕有拥有自主知识产权的全自动一体化医用PCR分析系统，可以说打破了国际头部生物科技公司的技术垄断，填补了国内PCR检测一体机赛道的空白。老牌企业高调露出：博日IPO进行时，天隆科华资本角力近日两家国产老牌的PCR企业相继高调露面，一家是想要上市注入资本力量，另一家是陷入仲裁纷争。博日IPO进行时：6月，杭州博日科技股份有限公司向港交所递交了上市申请，计划在主板挂牌上市，由中金公司担任独家保荐人。博日科技成立于2002年，专注于分子诊断仪器、试剂等产品研发、生产和销售并拓展到分子诊断服务领域。目前博日科技已开发并量产实时荧光定量PCR分析仪、全自动核酸纯化仪、各类PCR检测试剂等多类产品，销售网络遍布全球121个国家和地区。2020年博日营收达12.337亿，国内销量以18.5%的市场份额位居中国PCR设备市场的前列，海外销量排名也非常靠前。天隆要求母公司科华支付105亿投资款：7月中旬，科华生物发布重大仲裁公告。公告涉及西安天隆和苏州天隆创始人彭年才等四位申请人，要求科华生物按照2018年收购天隆的投资协议执行约105亿人民币的剩余投资价款以及约10亿人民币违约金。天隆科技还申请，若科华生物不能支付以上价款，则请求天隆科技股东彭年才、李明等四位申请人以约4.28亿人民币回购西安天隆62%股权，以约3300万人民币回购苏州天隆62%股权。科华生物在收到仲裁通知后，包括西安天隆科技有限公司的股权等会部分财产被法院冻结，而科华生物副总裁李明职务也被董事会解除。受益于相较于其他IVD技术的显著优势、广阔的市场需求及因技术快速迭代升级带来的应用范围拓展及成本下降，以及伴随而来的政策支持，分子诊断市场规模快速增长。作为核心的分子诊断技术，PCR技术也在不断更新迭代，PCR行业迎来全新机遇。仪器信息网网络讲堂将于2021年8月2日-5日举办第四届先进体外诊断技术网络会议（iConference on In-Vitro Diagnosis，iCIVD 2021）。在8.3日的分子诊断专场，将有3位PCR专家带来最热门、前沿的话题讨论。》》》点击此处免费占座

无论是临床诊断，还是动物疫病检测，小巧便携的检测设备都能为您的工作带来便利。天隆智造基于多年技术积累，结合用户现场及快速检测需求，推出Gentier mini便携式荧光定量PCR仪。该款产品小巧便携，操控灵活，荧光检测高效，温控卓越，让PCR荧光定量检测走出实验室，在更多场所发挥作用，为您的工作带来无限便利！贴心设计3.2KG小巧身材，单手轻松拎起；7英寸高清LCD电容屏，带来流畅顺滑操作体验；专利设计，搬动后无需荧光校准；瞬时断电保护，重启继续运行无惧突发状况。 检测高效1秒16孔位双色荧光扫描，为结果争分夺秒；独立温控模块，支持降落PCR、长片段PCR；定性定量、熔解曲线、SNP位点分析，软件功能依然强大。 操控灵活特有快捷模式，预设程序让检测更便捷；网口、USB、WiFi多种方式互联；单机/电脑/平板电脑操控模式，满足多场景应用。 快捷模式——仅需5步点击即可启动实验随着动物疫病的精准检测需求日益增加，动物疾病预防和诊疗相关国家标准逐步颁布与细化，在犬细小病毒病诊断、犬瘟热诊断、非洲猪瘟诊断等国家标准中都提出应用PCR检测技术。PCR检测技术凭借其高灵敏性，高特异性等优点，正在逐步成为动物疫病检测的推荐方法。继承天隆荧光定量PCR仪优良性能的Gentier mini应运而生，专为移动实验室、小型实验室或现场检测而设计，不仅可以解决小型养殖场或宠物医院检测场地受限，样本零散等问题，同时能够为结果的快速出具及分析提供保障，助力动物疫病的精准、快速检测。谁说荧光定量检测仪“提不动”？天隆智造家族新成员Gentier mini，让荧光定量PCR检测随心而动，您值得拥有！

96孔荧光定量PCR仪已成为分子生物学实验室的必备工具，但对于基因表达分析、基因分型研究（SNP/CNV）、病原体检测、核酸药物开发、测序文库定量、作物育种等细分领域，依然存在更高通量的荧光定量检测需求。为此，酷搏科技于2023年夏天推出全新产品——Quantagene q900系列384孔荧光定量PCR系统，以更全面的功能、更快速的检测、更准确的定量结果助力用户更高效的实验室研究。产品特点一台优秀的荧光定量PCR仪，需要在运行快速、操作简便的基础上最大程度实现每个反应孔温度、光学性能的一致，从而得到准确的检测结果。为了实现这一目标，q900的热循环系统设计了3组独立输出的Peltier模块，分别对加热模块的 3个区域独立控制，确保不同区域间的温度均一性。反应体积5µ l，全部384孔使用完全一致的反应溶液时Tm值的分布。图中Tm最大与最小值之差为0.18°C，Tm平均值为80.52°C。另一方面，q900 采用独特的双重反射静态光学模组阵列技术。每个光学通道配置独立的长寿命 LED光源、滤光片组和CMOS相机，双重反射的设计在小体积的机身中延长光路，降低孔板中心和边缘的荧光信号差异。左：在q900MX上使用四种探针（蓝色：FAM，绿色：HEX，黄色：ROX，红色：Cy5）分别进行7个浓度10个梯度稀释（n=6）的一步法四重RT-qPCR实验。右：双重反射静态光学模组阵列结构示意图。性能展示优秀的384孔整板Ct一致性得益于均一的热循环系统和稳定的光学系统，q900可以轻松实现整板Ct标准差小于0.05，有效消除边缘效应，在任何孔位进行实验都可以获得相同的准确结果。实验一实验二实验三仪器编号123Ct平均值17.77517.78317.580Ct 标准差0.0220.0200.031Ct CV0.12%0.11%0.18%使用q900进行整板实验的全384孔归一化扩增曲线图及Ct值附近局部放大图大范围浓度精准定量q900可以在100-1010拷贝/反应范围内进行定量检测，稳定均一的温控系统确保全浓度范围高效扩增，为文库定量、基因表达定量等应用提供更准确的数据结果。仪器型号q225q900扩增效率100.1%100.1%R20.99960.9996使用q225及q900进行连续2倍梯度稀释实验，反应体积5μl，每一浓度三个平行反应。在Ct值为4-30的区间范围内，q900均可以进行准确定量，且结果与q225实验结果高度一致。1-25μl反应体积均可适配考虑到操作方便性，q900推荐反应体积为5-10μl。而对于样本或试剂较为珍贵的情况，在q900上使用低至1μl的反应体系，依然可以获得相同准确性的测试结果，配合拟合算法计算Ct值，使得相同反应体系在不同反应体积下可以获得完全一致的Ct结果。反应体积Ct平均值Ct标准差20μl17.9180.05010μl17.9150.0075μl17.9330.0092μl17.9390.0271μl17.9540.026新品试用活动已开启，诚邀您来体验q900系列384孔荧光定量PCR仪的高效、准确与便捷。详询北京酷搏科技有限公司或各地销售伙伴。

2023年5月23日发布的GB/T 42753-2023《实时荧光定量PCR仪性能评价通则》将于12月1日正式实施。近年来随着我国科研仪器制造水平的不断提升，国产化实时荧光定量PCR仪已逐步占领国内外市场。特别是新冠疫情以来，国产PCR仪市场总体呈现爆发式增长，但相应标准的缺失制约了行业的发展。本次标准的发布将有助于不同领域核酸检测工作的开展以及生物分析行业的健康发展，对提升我国产品的整体质量和核心竞争力具有重要的推动作用。《实时荧光定量PCR仪性能评价通则》由中国检验检疫科学研究院、北京市科学技术研究院分析测试研究所（北京市理化分析测试中心）、苏州百源基因技术有限公司、中国计量科学研究院、上海市计量测试技术研究院、西安天隆科技有限公司、苏州雅睿生物技术股份有限公司、上海宏石医疗科技有限公司、杭州博日科技股份有限公司、鲲鹏基因（北京）科技有限责任公司、杭州晶格科学仪器有限公司、圣湘生物科技股份有限公司、安图实验仪器（郑州）有限公司、深圳华大智造科技股份有限公司、上海科源电子科技有限公司、安徽皖仪科技股份有限公司、黑龙江省计量检定测试研究院、麦成长（北京）生物技术有限公司、中国疾病预防控制中心营养与健康所、谱尼测试集团股份有限公司、甘肃国研检验检测有限公司共同起草。文件规定了实时荧光定量PCR仪的要求、评价方法和评价报告。在升温速率（≥1.5℃/s）、降温速率（≥1.5℃/s）、温度波动性（≤±0.2℃）、温度示值误差（≤±0.5℃）、温度均匀度（≤1℃）以及温度持续时间误差（≤±5℃）方面进行了温度控制性能的要求；在荧光强度重复性（相对标准偏差≤2%）、荧光强度均匀性（相对标准偏差≤5%）、荧光强度线性（r≥0.990）方面对荧光检测性能提出了要求。在评价方法中对整机性能进行评价时需要具备DNA标准物质和荧光定量PCR检测试剂，其中，DNA标准物质是国家有证标准物质，包括线性标物和样本标物，且线性标物应为10倍浓度梯度的DNA标准物质系列溶液；荧光定量PCR检测试剂中的Taq DNA聚合酶需要符合GB/T 35542的要求，引物探针需要符合GB/T 34797的要求。