当前位置: 仪器信息网 > 行业主题 > >

测氧测爆仪

仪器信息网测氧测爆仪专题为您提供2024年最新测氧测爆仪价格报价、厂家品牌的相关信息, 包括测氧测爆仪参数、型号等,不管是国产,还是进口品牌的测氧测爆仪您都可以在这里找到。 除此之外,仪器信息网还免费为您整合测氧测爆仪相关的耗材配件、试剂标物,还有测氧测爆仪相关的最新资讯、资料,以及测氧测爆仪相关的解决方案。

测氧测爆仪相关的论坛

  • 天津爆炸事件后,某公司出的爆炸物相关检测标样汇总

    8-12天津港爆炸事件后,大家应该对此事非常关心本人也想酝酿写一点东西,因为这个事情,可能会对试剂生产/销售领域有不可预知的影响昨天收到某公司邮件,把他们可以提供的跟爆炸物检测相关的标样做了一个汇总,不错不错,反应很快,赞一个上传上来,供大家参考

  • 流式细胞仪检测细胞增殖方法有哪些?

    [font=宋体][font=宋体]在生物学和医学研究中,细胞增殖是一个关键过程,对于理解生命活动的基本规律以及疾病的发病机理具有重要意义。随着科技的发展,流式细胞仪作为一种高效、灵敏的分析工具,广泛应用于细胞增殖的检测。流式细胞仪通过快速分析单个细胞,可以对细胞周期、细胞增殖活性、细胞凋亡等多个方面进行研究。本文将探讨流式细胞仪在检测细胞增殖方面的主要方法,包括但不限于溴脱氧尿苷([/font][font=Calibri]BrdU[/font][font=宋体])掺入法、细胞周期蛋白检测法以及细胞大小分析法等,以期为读者提供全面的技术应用概览。流式细胞仪检测细胞增殖方法:[/font][/font][b][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]3H[/font][font=宋体](氚离子)掺入法[/font][/font][/b][font=宋体][font=宋体]原理:是在细胞[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]合成时,用[/font][font=Calibri]3H[/font][font=宋体]脱氧胸腺嘧啶核苷代替普通的脱氧胸腺嘧啶核苷掺入新合成的[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]中,增殖的细胞因为掺入[/font][font=Calibri]3H[/font][font=宋体]而具有放射性,通过定量检测样品细胞的放射性大小而反映细胞的增值活性[/font][/font][font=宋体][font=宋体]缺点:[/font][font=Calibri]1[/font][font=宋体])使用的是具有放射性的同位素,操作较为复杂,同时需要采取放射性保护措施 [/font][font=Calibri]2[/font][font=宋体])低比例高活跃增殖和高比例低活跃增殖可能得到的是相同的结果,用此方法无法进行鉴别 [/font][font=Calibri]3[/font][font=宋体])此方法无法进一步得到具有活性的增值细胞用于下一步的研究 [/font][font=Calibri]4[/font][font=宋体]) 此方法时间较短,无法检测加入前细胞的增殖情况,而且检测到放射性只能说明细胞[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]合成,而不能提供合成[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]的细胞是否进入增殖阶段的信息[/font][/font][b][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]、相对计数法[/font][/font][/b][font=宋体]原理:将对照组和各实验组控制在相同条件下直接计数然后比较计数结果得到增殖结论[/font][font=宋体]注意点:[/font][font=宋体][font=宋体]对照组与实验组每种细胞所加浓度必须相同,每组至少设置[/font][font=Calibri]3[/font][font=宋体]个复孔,这样每个孔可以得到[/font][font=Calibri]1[/font][font=宋体]个细胞数,将[/font][font=Calibri]3[/font][font=宋体]个复孔取平均值后就是这个组的结果。如果同时需要得到每孔目标细胞增殖后的绝对参数,在每孔细胞中加入[/font][font=Calibri]1*105PE[/font][font=宋体]标记的人工微球作为内参[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]收集各组的细胞于[/font][font=Calibri]EP[/font][font=宋体]管中,注意必须尽量将各组的所有细胞都收集起来。标记需要计数细胞的标志表型的荧光素偶联抗体,[/font][font=Calibri]4[/font][font=宋体]℃静置[/font][font=Calibri]30min[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]PBS[/font][font=宋体]洗涤一次,洗去游离的抗体[/font][/font][b][font=宋体][font=Calibri]3[/font][font=宋体]、示踪染料标记法[/font][/font][/b][font=宋体][font=宋体]示踪染料与细胞结合的方式:[/font][font=Calibri]1[/font][font=宋体])能够与细胞内的蛋白质上的氨基发生非特异性的共价结合 [/font][font=Calibri]2[/font][font=宋体])能够非特异性地嵌入细胞膜的脂质双分子层中与细胞发生非共价性结合[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]原理:示踪染料的荧光信号都很强,当细胞分裂时,母细胞内的染料会被平均分配到子细胞中,细胞荧光信号会被减弱一半,所以通过检测减弱的、发射示踪染料荧光信号的细胞比例就可以判断细胞增殖的强弱。当荧光强度减弱到标记时的[/font][font=Calibri]1/2[/font][font=宋体]以及以下的细胞都是增殖后的细胞,这些细胞所占比例越高则代表细胞增殖越活跃[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]标记方法:[/font][font=宋体][font=宋体]①纯化增殖反应的目标细胞,将细胞的浓度调整为[/font][font=Calibri]1*106/ml[/font][font=宋体],加入[/font][font=Calibri]CFSE[/font][font=宋体],其标记浓度为[/font][font=Calibri]5[/font][font=宋体]微摩尔[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]升。置于[/font][font=Calibri]37[/font][font=宋体]℃水浴中标记[/font][font=Calibri]15min[/font][font=宋体],在标记过程中每隔一段时间混匀细胞一次[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]②加入预冷、含有血清的培养基终止标记,在[/font][font=Calibri]4[/font][font=宋体]℃冰箱中静置[/font][font=Calibri]5min[/font][font=宋体],离心沉淀[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]③用培养基再洗涤一次,尽量洗净未结合的游离的[/font][font=Calibri]CFSE[/font][font=宋体],然后将目标细胞静置在增殖体系中[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=Calibri]4[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]BrdU[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]EdU[/font][font=宋体]掺入法[/font][/font][/b][font=宋体][font=Calibri]BrdU[/font][font=宋体]:[/font][font=Calibri]5-[/font][font=宋体]溴脱氧尿嘧啶核苷是胸腺嘧啶核苷的类似物,其特点是胸腺嘧啶环上[/font][font=Calibri]5[/font][font=宋体]位[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]连接的甲基被溴取代,在细胞增殖[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]合成时可以与内源性的胸腺嘧啶核苷竞争掺入到新合成的[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]中,而[/font][font=Calibri]BrdU[/font][font=宋体]抗体可以特异性的识别[/font][font=Calibri]BrdU[/font][font=宋体],不与胸腺嘧啶核苷结合,所以可以用于检测细胞增殖[/font][/font][font=宋体][font=宋体]适用范围:适用于体内检测目标细胞的增殖,一般将[/font][font=Calibri]BrdU[/font][font=宋体]掺入小鼠的应用水中或经腹腔注射,经过一段时间后,取出目标细胞制成单细胞悬液然后用多聚甲醛固定细胞,后用打孔剂皂苷在细胞膜上打孔,最后标记荧光素偶联抗[/font][font=Calibri]BrdU[/font][font=宋体]抗体,目标细胞的[/font][font=Calibri]BrdU[/font][font=宋体]阳性细胞就是增殖的细胞,阳性比例越高,增殖越活跃。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=Calibri]5[/font][font=宋体]、其他方法[/font][/font][/b][font=宋体][font=宋体]细胞周期法检测细胞增殖:流式细胞术能够检测细胞内[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]的含量,所以可以检测细胞周期。处于[/font][font=Calibri]S[/font][font=宋体]期的细胞,[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]的量处于二倍体和四倍体之间[/font][font=Calibri] [/font][font=宋体]处于[/font][font=Calibri]G2/M[/font][font=宋体]期时,[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]量为四倍体。处于[/font][font=Calibri]S[/font][font=宋体]期和[/font][font=Calibri]G2/M[/font][font=宋体]期的细胞比例越高说明细胞增殖越活跃[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]PCNA[/font][font=宋体]检测细胞增殖:[/font][font=Calibri]PCNA[/font][font=宋体](增殖细胞核抗原),在细胞核合成且只存在于细胞核内,是[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]聚合酶的辅助蛋白,所以与细胞[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]的合成关系密切,是反映细胞增殖状态的良好指标[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Ki-67[/font][font=宋体]检测细胞增殖:是一种与细胞增殖特异相关的核抗原[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]CD71[/font][font=宋体]检测细胞增殖:是转铁蛋白受体,表达于细胞的表面,该受体广泛表达于各种恶性肿瘤细胞表面,正常细胞表达较少,与肿瘤细胞的增殖密切相关[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供[url=https://cn.sinobiological.com/services/flow-cytometry-service][b]流式细胞检测技术服务[/b][/url],更多关于流式细胞仪检测细胞增殖详情欢迎咨询,详情可以关注:[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/flow-cytometry-service[/font][/font][b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州:蛋白与抗体的专业引领者,欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b]

  • 【原创大赛】POCT仪器之——便携红外人体血氧饱和度监测仪揭秘

    【原创大赛】POCT仪器之——便携红外人体血氧饱和度监测仪揭秘

    POCT仪器之——便携红外人体血氧饱和度监测仪揭秘 随着电子技术和传感器技术的发展,医院许多大型检测仪器实现了小型化,护士常常进行床边检测(又称“即时检验”Point-of-care Testing,POCT)。 人体除心率、血压、呼吸频率和温度外,脉搏血氧(PO)被认为是排在第5位的最关键健康状况指标。血红蛋白(Hb)是血细胞的重要组成部分,它负责将氧气从肺部输送到身体的其它组织。血红蛋白在任一时刻所含的氧气量被称为氧饱和度。氧饱和度以百分比表示,它是血红蛋白的含氧量与血红蛋白携氧能力之比。血氧饱和度是反映人体呼吸功能及氧含量是否正常的重要生理参数,它是显示人体各组织是否健康的一个重要生理参数,严重缺氧会直接导窒息、休克、死亡等悲剧的发生。 人体血氧饱和度仪应用在以下几个方面:病人在急救和转运过程中、消防抢险、高空飞行必须监测血氧;心脏病、高血压、糖尿病人,特别是老人都会有呼吸方面的问题,监测血氧指标可很好地了解自己的呼吸、免疫系统是否正常,血氧饱和度已成为普通家庭日常监测的重要生理指标;医护人员在查房和出诊是也将血氧作为必监测项目,使用数量有压过听诊器的趋势;呼吸疾病患者特别是长期打鼾的、使用呼吸机和制氧机的患者,在日常生活中使用血氧仪来监测治疗效果;户外动者、登山爱好者、体育运动者在运动时都使用血氧仪,及时知道自己的身体情况,并采取必要的保护措施。下面将市售的一款便携式人体血氧饱和度监测仪进行解析,揭开内部结构的神秘面纱。一、外观 血氧仪像一个大夹子:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/12/201312170137_482364_1807987_3.jpg电池仓在背面,使用两只7号电池。该仪器非常省电,不使用8秒钟后自动关机,两节电池可用30小时:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/12/201312170137_482365_1807987_3.jpg手指槽的上端有发射窗,下端有光信号接收窗:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/12/201312170137_482366_1807987_3.jpg将手指放进去,几秒钟后,显示出血氧饱和度、脉搏值:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/12/201312170137_482367_1807987_3.jpg二、系统结构原理便携式人体血氧饱和度监测仪结构原理见下图,开机后,电源提供1.8V和3V、12V三组直流电给电路使用,嵌入式微处理器(MCU)向光头驱动电路发出控制信号,使双发光二极管(红光、红外光)交替发出调制光,该两组光线穿过手指,被另一面的光电池接收,信号通过前置放大、整理电路,输入MCU进行分析、计算,结果由LED数字显示板显示出来。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/10/201410271513_520299_1807987_3.jpg血氧饱和度监测原理:无创脉搏血氧饱和度测量是以朗伯 - 比尔定律,血液中还原血红蛋白 (Hb )和氧合血红蛋白(HbO2 )对光的吸收特性不同为基础的。通过两种不同波长的光(660nm红光和940nm近红外光)分别照射人手指组织后,再由光电检测器转换成电信号。在该波长处,氧合血红蛋白和还原血红蛋白的吸收差别较大,组织中的其他成分吸收光信号是恒定的, 经过光电检测器后得到直流分量 DC,而动脉血中的 HbO2 和Hb对光信号的吸收是随着脉搏搏动作周期性变化, 经过光电检测器后得到交流分量 AC, 由于 HbO2 和 Hb对同一种光线的吸收率各不相同, 微处理器计算所吸收的这两种光谱的比率,并将结果与存在存储器里的饱和度数值表进行比较,从而得出血氧饱和度。三、拆解主电路板可用指甲从上端缝隙处,将上盖分开:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/12/201312170138_482369_1807987_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/12/201312170138_482370_1807987_3.jpg电路板正面的元件不多,显示采用LED数字显示板,占据了电路板主要面积:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/10/201410271514_520300_1807987_3.jpg电路板上的集成电路ULN2003A,74HC164:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/12/201312170138_482372_1807987_3.jpgULN2003A是高耐压、大电流反相器,内部由七个硅NPN 达林顿管组成的驱动芯片,电路框图如下:[im

  • 测爆仪线路故障

    日本理研GX-2003B测爆仪显示“线路板故障”,怎样进行维修?还有,里面吸气小泵里的橡胶膜有没有地方单独买?

  • 有没有哪位版友做过烟花爆竹的检测

    又是一年春节时,很多地方都放开了烟花爆竹的燃放,对大气的污染还是挺大的,有没有哪位版友做过烟花爆竹的检测,其中除了二氧化硫、三氧化硫等之外,还有哪些有毒有害物质?

  • 【资料】实用哺乳动物细胞培养手册

    分享一个手册,既有原理也有具体操作![img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=122083]实用哺乳动物细胞培养手册[/url]实用哺乳动物细胞培养手册细胞培养基本概念细胞培养目的与用途细胞培养基本条件细胞培养基种类与基本成分细胞培养环境细胞培养无菌操作基本技术培养细胞生长过程:潜伏期→指数增生期→停滞期培养细胞基本形态细胞培养所用玻璃及塑料制品的清洗与消毒细胞培养常用物品哺乳动物细胞冷冻保存

  • 【分享】臭氧检测仪的特征及功能

    臭氧检测仪是一种可连续检测可燃气体浓度或者有毒气体浓度的本质安全型设备。臭氧检测仪具有体积小、重量轻、便于携带、反应灵敏、抗干扰能力强、数字显示浓度值、可随时对现场进行监测等优点。该仪器具有非常清晰的大液晶显示屏,声光报警提示,保证在非常不利的工作环境下也可以检测危险气体并及时提示操作人员预防。 臭氧检测仪采用进口电化学式传感器,具有信号稳定、具有极好的灵敏度、出色的重复性和精度高等优点。内部采用干电池供电,超低功耗电路设计,可完成对测量气体泄漏的精确检测。臭氧检测仪采用嵌入式微机控制,操作简单、功能齐全、可靠性高,具有多种自适应能力;采用单片机系统,具备声、光两种报警方式,具备电量欠压显示、欠压报警、电源保护功能、测量精度高、性能稳定,抗干扰能力强等特点。臭氧检测仪具有开机自检测功能,并具有先进的自诊断和自修复功能,还具有数据记忆功能,可将数据存储在计算机上便于查阅。 臭氧检测仪用于对防爆、有毒气体泄漏抢险、地下管道或矿井等场所,能有效保证工作人员的生命安全不受侵害,生产设备不受损失。臭氧检测仪应用于热气球和航天器测量、远程监测网络、城市环境检测、个人暴露和工作环境检测、工业加工应用,广泛用于煤矿、冶金、化工、油田、液化气站、交通等行业。

  • 【分享】二氧化氮检测仪的特征及用途

    二氧化氮检测仪是一种可连续检测作业环境中有毒有害、易燃易爆气体浓度的仪器。二氧化氮检测仪结构体积小巧,具有重量轻、防水、防尘、防爆、防震的功能,具有高精度、高分辨率、响应迅速的优点。 二氧化氮检测仪采用电化学传感器,具有极好的灵敏度、较高的准确度和出色的重复性;采用嵌入式微控制技术,菜单操作简单,功能齐全,可靠性高;二氧化氮检测仪采用特殊材质及工艺,不易磨损、易清洁,具有防高浓度气体冲击的自动保护功能,自动跟踪零点、满量程、温度补偿;采用模块化设计,具有维护方便的特点。 二氧化氮检测仪能够测量相关的温度、湿度、VOC的浓度,可以控制设备以保证优良的生活环境,二氧化氮检测仪广泛使用于冶金、电厂、化工、石油、石化、、轻工、焦化、市政、煤气、制药、污水处理、矿井、隧道、坑道、地下管线等场所,有效地预防中毒事故的发生。

  • 免费参加网络研讨会《发酵及细胞培养中的溶氧监测》

    免费参加网络研讨会《发酵及细胞培养中的溶氧监测》

    会议名称:发酵及细胞培养中的溶氧监测 http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/04/201404281143_497619_271_3.jpg会议时间:2014年05月23日 14:30:00,持续约2小时会议主讲人:张亚杰,,就职于梅特勒-托利多过程检测部,从事生化制药行业发酵细胞培养应用研究工作,有丰富的实践经验。会议内容简介:电化学氧气测量系统是适用于诸多应用的可靠且易用的解决方案。然而,市场上对于光学解决方案的兴趣日益浓厚,这是因为光学技术在生物技术发酵这样的苛刻应用中具有明显优势。与电化学测量相比,光学技术具有明显的优势,如使用寿命长、耗材少、无需进行预先极化、漂移小、响应快,噪音波动非常小,信号比较平稳,对低溶氧有更灵敏、更精确的响应等。我们需要对其充分了解,才能最大限度提高由电化学向光学测量转换所带来的收益。人数限制:120人环境配置:只要您有电脑、外加一个耳麦就能参加。(需要进行音频交流的用户需准备麦克)报名地址:http://www.instrument.com.cn/webinar/meeting/meetingInsidePage/1001

  • 细胞拉曼光谱检测

    求助各位大侠,有没有测过细胞的拉曼光谱。我们用的雷尼绍的仪器,785nm激发光,背景信号太强,一点细胞的信号都测不出,怀疑激光没有聚焦在细胞上。1. 细胞测量前要怎么处理?2. 细胞放在什么样的载玻片上测量,怎样减小背景影响?3. 仪器参数设置上有什么需要注意的么?怎样确定把光聚焦到细胞上?老板逼得紧,谢谢各位啊!

  • 【原创】防爆型水中油在线监测仪技术参数

    ZDA-OW01型 防爆型水中油在线监测仪防爆型水中油在线监测仪,是利用光学传感器实现对水体中的水中油、水温实时连续监测。系统可根据用户需要扩展配置其它水质监测传感器,实现对水体中的UV254值、COD、TOC、DOC、BOD、O3、硝氮、浊度、PH、悬浮物的连续在线监测。系统分为采样系统、预处理系统、清洗系统、防爆传感器、防爆控制器五部分,整体系统均为防爆设计,符合国家防爆现场应用要求。所有监测传感器采用免试剂监测方法,配备连续监测清洗池,可快速、快捷的实现对水体中的污染物浓度的在线连续监测,对超标水体,系统将自动记录超标数据,并根据报警设置进行现场声光报警。该仪器的开发可大大提高了防爆场所污染排放及水质监测效率,减少人工采样频率,降低监测工作量。填补了国内防爆场所水质在线监测市场的空白,是石油、化工企业水质在线监测、监督、监控、污染排放监测及工艺过程控制的最佳装备。该设备可广泛应用于石油、化工行业排放水质连续监测;采油厂回注水连续监测;石油化工企业工业过程水质在线监测;石油化工企业厂区地表径流监测;油库排放废水连续监测;含有可燃性气体的水质在线监测。正大环保此监测系统通过国家防爆产品认证,防爆认证编号:CNEx14.2042。技术特点:1.全防爆设计,全彩触摸屏操作,监测传感器(发明专利),采样预处理(实用新型专利技术);2.原装进口美国AB控制器,防爆气动阀控制,运行可靠稳定;3.全光学传感器同时监测水温、水中油,可根据用户后期要求选择扩展配置监测水体中的UV254值、COD、TOC、DOC、BOD、O3、硝氮、浊度、氨氮、PH、悬浮物等,所有传感器采用免试剂监测方法,配套采样、预处理系统,维护简单,人工干预周期长;4.采用高性能UV LED做为光源,使用寿命长,采用独特的光学和电子滤光技术,可消除环境光对测量的影响;5.监测传感器须通过国家防爆产品认证,可应用于含有微量可燃性气体或易燃、易爆水体中水中油的监测。6.可设置监测报警值,对可疑水体或异常水体可自动报警,并保存监测数据;7.系统采取射流清洗技术(实用新型专利),保持传感器的清洁,减少现场维护量。技术参数:1.测量参数:水中油(原油、精炼油)、温度2.测量原理:紫外荧光法3.量程:0-2500ppb(出厂可选)4.温度范围:(0~50)℃5.测量精度:水中油:≤±10%读数6.重复性:水中油:≤7%读数7.分辨率:0.2ppb8.传感器标定周期:6个月9.清洗方式:射流清洗10.功耗:150W(不包含气源功率)11.防爆等级:ExdmbIIBT5 Gb12.外形尺寸:1700mm × 600 mm× 400 mm13.重量:150Kg

  • 质谱检测器一直饱和怎么办

    直接进样进了一个未知样品之后一直显示检测器饱和,跑了好几次空样还是这样。而且清洗了离子源和进样瓶、擦了进样杆都还显示检测器饱和。到底是哪里出问题了呢?

  • 爆罐后需要检测微波泄露吗?

    设备是安东帕的mv3000微波消解仪,在做药品消解的时候因为称样量过大造成了一个内管爆罐,因为最近还要做检测,需要消解,不知道这种情况下要不要叫工程师过来检测微波泄露后再使用?

  • 石化行业应用防爆型水中油在线监测仪的必要性

    [align=center]石化行业应用防爆型水中油在线监测仪的必要性[/align][align=left] 2014年4月11日,兰州发生自来水苯超标事件,兰州市政府公布的事故调查报道显示,兰州石化公司历史积存的地下含油污水渗入自流沟,是造成自来水苯污染的直接原因之一。其后的半年时间里,兰州石化又连续发生五起环境污染事故。今年1月9日,兰州市政府再次公开斥责其环境污染问题。[/align][align=left] 石油的开采一方面带来了当地经济的发展,但是排放物的随意排放除了造成石油河的重污染之外,另一后果是城市集聚功能的严重衰退;去年8月至今,中石油兰州石化公司已经连续发生四起环境污染事故;另有新闻曝光指出:兰州自来水污染原因系原油泄漏,并将石油类污染物纳入兰州自来水月检;[/align][align=left] 面对严峻的环境形势,各方力量都在为保护环境贡献力量。 [/align][align=left] 防爆型水中油在线监测仪,是利用光学传感器实现对水体中的水中油、水温实时连续监测。系统可根据用户需要扩展配置其它水质监测传感器,实现对水体中的UV254值、COD、TOC、DOC、BOD、O[sub]3[/sub]、硝氮、浊度、PH、悬浮物的连续在线监测。系统分为采样系统、预处理系统、清洗系统、防爆传感器、防爆控制器五部分,整体系统均为防爆设计,符合国家防爆现场应用要求。所有监测传感器采用免试剂监测方法,配备连续监测清洗池,可快速、快捷地实现对水体中的污染物浓度在线连续监测,对超标水体,系统将自动记录超标数据,并根据报警设置进行现场声光报警。该仪器的开发可大大提高了防爆场所污染排放及水质监测效率,减少人工采样频率,降低监测工作量。填补了国内防爆场所水质在线监测市场的空白,是石油、化工企业水质在线监测、监督、监控、污染排放监测及工艺过程控制的最佳装备。[/align][align=left] [/align][align=left] [/align]

  • 发酵过程中细胞浓度在线检测系统-在线活细胞浓度分析仪

    发酵过程中,细胞浓度是一个非常重要的生理参数,不但可以计算比生长速率,底物消耗速率、生物量产率和维持系数等参数,还可以及时判断是否有染菌等异常情况发生。目前测量细胞浓度的方法主要有化学法(DNA/RNA分析)和物理法(干重、光密度、呼吸商等)两大类。一般来说,与物理法相比,化学法能较准确的测量有代谢活性的生物量,缺点是花费时间长,而利用物理法测量,无法区分区分处于悬浮状态的颗粒和微生物,也无法分别活死细胞。 实现在线活细胞浓度一直是发酵领域的热门话题,仅些年来出现了不少的测量方法,依据的工作原理也是五花八门,其中最具代表性的有声学,激光散色、荧光、核磁、量热或电容。 其中法国fogale公司的测量仪器,以电容法为工作原理,直接将传感器安装与发酵罐上,可承受121℃高温灭菌,理论技术也比较成熟,是目前最为理想的适合工业级别的在线活细胞传感器。工作原理:电容传感器采用活细胞的介电特性,实时连续测量活细胞的生物体积,可应用于实验室桌面型的反应器或者是工业规模的大型反应器两对对电极位于传感器的顶部,一对用于在培养基中产生交变的电场,在电场范围内,带有完整细胞膜的细胞会在培养基中发生极化现象,发生极化的细胞可以认为是极小的电容,死细胞或者其他粒子没有完整的细胞膜,所以不能形成电容型号。另一对电极用于检测培养基中的介电信号,培养基中的介电信号和细胞的浓度是精确关联的。细胞的极化率和电场的频率纯在函数关系,当频率增加时,培养基中细胞的介电常数由低频峰(最大极化)降低到高频峰(最小极化)。这种随频率增加极化率降低的现象称为β-散射。传感器采用双频测量模式:培养基的基线在10MHz左右得到,细胞的信号在临界频率区域获得,在曲线的拐点,(动物细胞和细菌在1MHz,酵母在2MHz)我们获得了最佳的信号线性。应用:这项技术可广泛应用于各种细胞培养,生物发酵过程。已被文献证实可应用的细胞如下:动物细胞:CHO, BHK, MDCK, PERC6, NSO, HEK, Hela,Hybridoma, Vero细 菌:E.Coli, Bacillus Thuringensis, Salmonella,Streptomyces, Lactic Bacteria酵 母:Pichia Pastoris, Saccharomyces Cervisiae, PolymorphaHasenula昆虫细胞:sf9, Hi-5真 菌:Absidia

  • 光谱等相关仪器是否就此爆发式增长?——重金属检测与监测仪器市场“被引爆”

    环境检测涉及方面多样化,而未来环境监测的方向又是怎样的呢?本网编辑简单汇总了下近期环境污染事件,发现重金属污染是我们一块伤病,而且伤的不轻。而重金属检测涉及的仪器主要是光谱的各类仪器以及X射线类仪器。涉猎的厂家也很多,有国内也有国外的。AFS是否就此爆发式增长?我们拭目以待~!我国重金属检测与监测仪器市场需求将大增  环保部部长周生贤在接受《中国环境报》采访时曾说到,“十二五”重金属污染防治的目标是通过未来5年内国家计划投资750亿元,建立比较完善的重金属污染防治体系、事故应急体系和环境与健康风险评估体系。重金属污染检测与监测体系作为该体系的重要组成部分,起到评估与预警的重要作用,国家自然也会在相关检测与监测仪器方面加大投入。此外,各大涉“金”企业也会在相关仪器方面增加投入。因而,预计我国重金属检测与监测仪器市场需求将大增。  当前,用于重金属污染控制的仪器大致可以分为三类:(1)实验室重金属检测仪器,包括原子吸收、原子荧光、ICP等;(2)在线重金属监测仪器,如水质重金属在线分析仪、大气重金属在线监测仪等,此类仪器的最大特点是能够进行连续自动检测,主要安装在水体或大气介质中,目前尚无可对土壤中重金属实现实时监测的相关仪器;(3)便携式重金属检测仪器,包括XRF、便携重金属分析仪等。  以上重金属检测与监测仪器供应商既有国内的,也有国外的(详情请参见附录2:部分重金属检测与监测仪器国内外生产厂商);相关仪器既有高端的,也有中低端的。各用户单位拥有很大的选择空间。详情见:http://www.instrument.com.cn/news/20110804/065922.shtml更多见:http://www.instrument.com.cn/news/subject/201003/?SubjectID=128

  • 吐温80中的环氧乙烷检测

    大家好,有哪位做过辅料吐温80的检测。请问吐温80中的环氧乙烷检测所用的环氧乙烷对照品是在哪儿购买的,好像很难买啊,是易燃易爆有毒的。需要办什么手续吗?我看药典上使用的环氧乙烷浓度很大(300ul,相当于环氧乙烷0.25g),浓度约为800mg/ml另外,中间是有环氧乙烷对照品是用作医疗器械环氧乙烷检查的,不知道能不能用。而且浓度好像只有5mg/ml。药典上使用的为800mg/ml.谢谢

  • 面包中脱氢乙酸钠的检测

    脱氢乙酸钠是一种常见的食品添加剂,用于延长食品的保质期,但过量摄入会对人体造成伤害。因此,对面包中的脱氢乙酸钠进行检测至关重要。下面,我将为大家详细介绍检测过程中的操作要点以及一些常见的故障排除方法。 检测前的准备工作 选择合适的检测设备:常用的检测设备有高效液相色谱仪、气相色谱仪等。确保设备处于良好状态,并定期进行校准。 准备试剂和标准品:我们需要准备脱氢乙酸钠标准品、甲醇(色谱纯)、磷酸二氢钠等试剂。确保所有试剂均在有效期内,并严格按照说明书配制。 样品采集与处理:采集面包样品后,应尽快进行处理。常用的处理方法有粉碎、提取、净化等步骤。确保样品处理的每一步都严格按照操作规程进行,以保证检测结果的准确性。 操作要点 高效液相色谱法(HPLC): 流动相的选择:常用的流动相为甲醇和水,加入适量的磷酸二氢钠调节pH值。流动相的比例和pH值对检测结果有很大影响,需根据实际情况进行调整。 检测波长的选择:脱氢乙酸钠的最大吸收波长一般在230nm左右,选择合适的检测波长可以提高检测的灵敏度。 进样量的控制:进样量不宜过大,否则会导致色谱峰变形。一般进样量为10-20μL。 气相色谱法(GC): 衍生化处理:由于脱氢乙酸钠极性较强,需要进行衍生化处理,使其转化为挥发性较强的衍生物。常用的衍生化试剂有BSTFA(双(三甲基硅基)三氟乙酰胺)等。 色谱柱的选择:选择适合检测脱氢乙酸钠的色谱柱,如DB-5MS柱。确保色谱柱在使用前进行老化处理,以去除杂质。 进样方式:气相色谱法常用的进样方式有分流进样和不分流进样。根据样品的实际情况选择合适的进样方式。 故障排除 检测结果偏低: 检查样品处理过程:确保样品粉碎充分,提取和净化步骤操作正确。 检查仪器状态:确保仪器处于良好状态,流动相和色谱柱选择正确。 重新配制标准品溶液:标准品溶液可能因保存不当而失效,需重新配制。 检测结果重复性差: 检查进样系统:确保进样针和进样口清洁,无堵塞现象。 检查色谱柱状态:色谱柱可能因使用时间过长而性能下降,需进行老化处理或更换新的色谱柱。 优化实验条件:适当调整流动相比例、检测波长等实验条件,以提高检测结果的重复性。 出现杂峰: 检查样品处理过程:确保样品处理过程中无杂质引入。 检查试剂纯度:使用的试剂可能含有杂质,需更换高纯度的试剂。 优化色谱条件:适当调整流动相比例、流速等色谱条件,以改善峰形。 通过以上操作要点和故障排除方法的介绍,相信大家对面包中脱氢乙酸钠的检测有了更深入的了解。在实际操作中,我们应严格遵守操作规程,确保检测结果的准确性和可靠性。

  • 拟柱胞藻毒素的检测

    蓝藻(也称蓝细菌)是地球上最早出现的光合自养生物,它们利用水作为电子供体,利用太阳能将二氧化碳还原成有机化合物,并释放出自由氧。蓝藻广泛分布于淡水、咸淡水、海水和陆生环境。蓝藻能产生一系列毒性很强的天然毒素(称为蓝藻毒素,Cyanotoxin),根据化学结构可分为三类:环肽、生物碱和脂多糖内毒素。当湖泊、河流等蓝藻大量繁殖而形成水华时,其中的鞘丝藻、束丝藻、Umezakia、拟柱胞藻,主要是拟柱胞藻(Clindrospermopsis)细胞破裂,产生拟柱胞藻毒素(又称筒胞藻毒素Cylindrosperm opsin),简称CYN,分子式是C15H21N5O7S,分子量415.4,易溶于水、甲醇、二甲亚砜;是具有细胞毒性、肝毒性、神经毒性和遗传毒性的生物碱毒素,拟柱胞藻毒素是蛋白质合成的抑制剂,可能通过抑制蛋白质合成能导致肠胃炎、肝损伤、肾损伤、肠损伤,可能危及人体的健康。WHO《饮用水水质准则》对拟柱孢藻毒素表示了关注,暂时没有提出健康指导值。 我们已经完成该检测方法的确认,开始进行该藻毒素的检测了。

  • 一氧化碳检测仪的特点和应用范围

    一氧化碳检测仪是一款高亮度液晶指示,可以灵活配置多种不同气体传感器的气体检测仪器.仪器可连续检测有毒气体、氧气、易燃易爆气体浓度,随时观察现气体浓度值.它广泛用于石油、化工、煤矿、冶金、造纸、消防、市政、电信、食品、 纺织等行业。一氧化碳检测仪的检验方法,利用简便易用的紧凑型测试笔,快速而准确地测量一氧化碳含量   利用一氧化碳测试笔,通过单个的紧凑式设备即可快速而准确的测量一氧化碳的含量。   采用了最新一代的电子化学传感器,无需使用抽吸泵即可快速地检测周围环境一氧化碳浓度的变化。一氧化碳检测仪非常适合于那些需要在象工业环境、商业建筑或居民区等这样可能积聚燃烧气体的环境中测量一氧化碳浓度的技术人员和专业人士。一氧化碳检测仪特点:* 坚固的外壳和电子特性的健壮性   * 可在大的LCD显示屏上显示 0 至 1000 ppm的一氧化碳浓度   * 明亮的背光照明,即使在昏暗的环境中亦可清晰读数* 当一氧化碳的浓度增大时,蜂鸣声频率也会提高   * 最大值保持功能,可以存储和显示最大的一氧化碳浓度值   * 启动时传感器自动归零和自检序列。   * 可以将一氧化碳浓度蜂鸣器关掉。   * 20分钟不操作时,会自动光笔,延长电池寿命。   * 更换电池方便   * 可替换的探头,延长工具的生命期。   * C50 软携包,电池和说明卡。   * 稳定地电子化学一氧化碳专用传感器   * 长达三年的传感器寿命(典型值):每年校准一次。   * 碱性电池寿命为 500 小时(典型值)

  • 【原创大赛】【第十四届原创】流式细胞仪监测适配体与靶细胞的结合

    [align=center][size=24px]流式细胞仪监测适配体与靶细胞的结合[/size][/align][align=center]肖书棋 18122884967[/align][align=center][/align]本次说明是基于核酸适配体能与靶标进行特异性结合的原理,利用流式细胞仪监测适配体与靶细胞的结合状况,还能比较不同适配体与靶细胞之间的结合强度的比较;本次所使用的流式分析仪是BD FACSAria III。[font='times new roman'][size=16px]1.原理介绍:[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]1.1核酸适配体:[/size][/font]核酸适配体(Aptamer,Apt):是一段寡核苷酸序列(ssDNA或RNA),是利用指数富集的系统进化技术(the Systematic Evolution of Ligands by Exponential Enrichment,SELEX)在多样寡核苷酸序列的文库中,进行体外筛选得到。[align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/11/202111301026239049_1528_5413603_3.jpeg[/img][/align][align=center][size=13px]Aptamer结合靶标原理[/size][size=13px]图[/size][/align]如图所示,在合适的缓冲液环境下,单链寡核苷酸序列具有弯曲以及折叠成特定的三级空间结构的能力,该结构可以与靶分子特异性结合,SELEX技术就是应用该原理来进行选择的。将信息量巨大且随机的的寡核苷酸文库与靶标孵育,经过多轮的优胜劣汰和PCR扩增,最后得到能与靶标高亲和力性结合的寡核苷酸序列,即核酸适配体(Aptamer)。由于核酸适配体具有靶向特异性的特点,因此应用广泛;那么如何监测适配体靶向细胞亲和力的方法,就需要用到流式细胞术进行表征。[font='times new roman'][size=16px]1.2流式细胞仪原理:[/size][/font]流式细胞术能够快速检测细胞或者生物颗粒的特征,其检测灵敏,能够定性或者定量分析颗粒的参数,还具有细胞分选的功能,功能强大,分析参数多,实用性较强。流式细胞仪(flow cytometer,FCM)的设计应用了光学、细胞化学、电子学等技术,拥有较强大的细胞及微粒分析功能,在临床医学、免疫学、微生物学等等研究领域发挥着巨大的作用。流式分析可以检测细胞表面颗粒复杂程度、核酸以及蛋白质的含量、细胞表面积或者细胞表面的抗体、细胞受体等等,在多种研究领域起到重要作用。在本研究中应用流式分析细胞荧光强度的基本步骤原理是:(1)制备成单细胞悬液:将待测细胞预处理进行荧光标记后制成单细胞悬液,通过气压将流式管中的细胞悬液通过管道压进流动室,同时喷出的鞘液将细胞包裹,形成圆形的鞘流,细胞在鞘液的包被下单行排列,依次通过流动室检测区域。(2)形成光散射:激发光源侧向垂直射向单个细胞,含有荧光的细胞形成两种光:①前向散射光(forward scatter, FSC):激光束照射细胞时,光束偏移量较小(10°以内),散射至前方,可用于检测细胞等粒子的表面信息,颗粒体积越大,信号越强。②侧向散射光(side scatter,SSC)激光束照射颗粒,产生偏移角度为直角的散射光,可反应细胞内含物的信息。(3)光信号转化成电信号:光信号导入到计算机中,依次形成电信号,再转化为数字信息。应用FlowJo软件处理数据,可以获得相应的散点图、直方图等形式,便于直观分析。[align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/11/202111301026241158_6946_5413603_3.jpeg[/img][/align][align=center][font='times new roman'][size=13px]流式分析基本原理图[/size][/font][/align][font='times new roman'][size=16px]2.分析步骤:[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]2.1细胞预处理:[/size][/font]通过流式分析预处理,可以使细胞在特定的环境,与带有FAM荧光的适配体进行特异性结合,通过平行实验使细胞与不同的适配体文库进行标记,最终表征其荧光强度,进行亲和力的分析与比较。如表所示,流式分析条件为:[align=center][size=13px]流式细胞分析条件探寻[/size][/align][table][tr][td][align=center][size=13px][color=#000000]孵育时条件[/color][/size][/align][/td][td][size=13px][color=#000000]孵育时体积[/color][/size][/td][td=2,1][align=center][size=13px][color=#000000]孵育时浓度[/color][/size][/align][align=center][size=13px][color=#000000]细胞浓[/color][/size][size=13px][color=#000000]度 [/color][/size][size=13px][color=#000000]单链DNA浓度[/color][/size][/align][/td][td][align=center][size=13px][color=#000000]第二次洗涤用液[/color][/size][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][size=13px][color=#000000]4 ℃,30 min,BB,摇晃[/color][/size][/align][/td][td][align=center][size=13px][color=#000000]500 μL[/color][/size][/align][/td][td][size=13px][color=#000000]2.5×10^6个/mL[/color][/size][/td][td][align=center][size=13px][color=#000000]125 nM[/color][/size][/align][/td][td][align=center][size=13px][color=#000000]PBS x 2[/color][/size][/align][/td][/tr][/table]流式分析的大致步骤为:消化细胞、细胞与文库孵育、润洗重悬、上样分析。最终确定,初始的细胞悬液浓度为5×10[font='times new roman'][size=16px]6[/size][/font] 个/mL,初始文库的浓度为250 nM;孵育时体系的总体积为250 L,细胞浓度为2.5×10[font='times new roman'][size=16px]6[/size][/font]个/mL,适配体浓度为125 nM,环境为4 ℃、30 min,震荡。最后上样的细胞悬液体积为500 L,细胞浓度为2.5×10[font='times new roman'][size=16px]6[/size][/font]个/mL。[align=left][font='times new roman'][size=16px]2.1.1材料准备:[/size][/font][/align][align=center][size=13px] 流式分析主要仪器与试剂[/size][/align][table][tr][td][align=center]名称[/align][/td][td][align=center]规格/型号[/align][/td][td][align=center]作用[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]流式细胞仪[/align][/td][td][align=center]FACSAria III[/align][/td][td][align=center]对细胞进行流式分析[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]可调式混匀仪[/align][/td][td][align=center]MX-S[/align][/td][td][align=center]混悬适配体悬液[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]震荡仪[/align][/td][td][align=center]MX-M[/align][/td][td][align=center]震荡孵育体系,防止细胞贴壁[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]制冷恒温金属浴[/align][/td][td][align=center]HX-20L[/align][/td][td][align=center]热击适配体,使核酸变性恢复到自由的无规则卷曲状态[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]显微镜[/align][/td][td][align=center]DMI1[/align][/td][td][align=center]观察细胞[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]水浴氮吹仪[/align][/td][td][align=center]FY-DCY12S[/align][/td][td][align=center]加热试剂[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]电子天平[/align][/td][td][align=center]JA2003[/align][/td][td][align=center]称量药品[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]离心管[/align][/td][td][align=center]15 mL×10、50mL×10[/align][/td][td][align=center]分装试剂,装载需离心的细胞[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]低吸附离心管[/align][/td][td][align=center]2 mL×20[/align][/td][td][align=center]装适配体悬液,减少适配体与细胞在管壁上的吸附[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]一次性使用吸管[/align][/td][td][align=center]3 mL×20[/align][/td][td][align=center]方便地吸取PBS[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]细胞刮刀[/align][/td][td][align=center]3010×1[/align][/td][td][align=center]刮下贴壁生长的细胞[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]PBS[/align][/td][td][align=center]50 mL×2[/align][/td][td][align=center]ScienCell[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]Cell Dissociation Solution[/align][/td][td][align=center]100 mL[/align][/td][td][align=center]消化细胞[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]0.25%Trypsin-EDTA[/align][/td][td][align=center]100 mL[/align][/td][td][align=center]Gibco[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]1×PBS缓冲液[/align][/td][td][align=center]500 mL[/align][/td][td][align=center]润洗细胞,重悬细胞[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]Cell Dissociation Solution[/align][/td][td][align=center]100 mL[/align][/td][td][align=center]消化细胞[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]0.25%Trypsin-EDTA[/align][/td][td][align=center]100 mL[/align][/td][td][align=center]Gibco[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]1×PBS缓冲液[/align][/td][td][align=center]500 mL[/align][/td][td][align=center]润洗细胞,重悬细胞[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]无酶无菌水[/align][/td][td][align=center]500 mL[/align][/td][td][align=center]溶解适配体文库[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]DMEM高糖培养基[/align][/td][td][align=center]50 mL[/align][/td][td][align=center]停止消化[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]细胞[/align][/td][td][align=center]>5×10[font='times new roman'][size=16px]6[/size][/font]个[/align][/td][td][align=center]作为目的细胞进行流式表征[/align][/td][/tr][/table]①配置Binding buffer(结合缓冲液BB):配置10 g/L BSA:称量0.1g BSA,溶于10 mL Washing Buffer,过膜;取上述溶液5 mL,加入到445 mL Washing Buffer中;再加入500 L鲑精DNA,混匀。②将U盘格式化,提前打开制冰机和金属浴(95℃);③37℃水浴:将无酶消化液、ECM、PBS(1)放入37℃水浴。④4℃冰敷:向泡沫盒中加碎冰,离心管架、温度计,准备4℃孵育环境,放入PBS和BB预冷。⑤打开显微镜(酒精擦拭载物台)。⑥打开离心机:120 g,1 min,25℃。[align=left][font='times new roman'][size=16px]2.1.2[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]计数和文库预处理[/size][/font][/align](1)细胞计数(20倍或者40倍显微镜):①采用直接计数法,在显微镜中随机选择五个点进行计数取平均值,根据视野的面积以及T75培养瓶面积计算细胞总数,推出公式:Y为总细胞数;X为视野中细胞平均数;Y=27886.12X(20倍镜下)/Y=111111.11X(40倍镜下)。为了保证流式有足够的细胞,需要保证细胞总数>5×10[font='times new roman'][size=16px]6[/size][/font]个/mL。②计算BB体积:V=Y/(2×10[font='times new roman'][size=16px]7[/size][/font])mL,用V体积的BB重悬细胞沉淀,可获得细胞浓度为5×10[font='times new roman'][size=16px]6[/size][/font]个/mL的初始细胞悬液。(2)文库预处理:①将粉末状适配体文库进行离心:4000 r,5 min,4℃;使适配体粉末聚集在离心管底部,防止打开离心管时干粉状适配体飞出。②按照说明用一定体积的无酶无菌水溶解适配体,使适配体母液浓度在5 M。③取100 L母液,并加入900 LBB,使适配体浓度在500 nM。④再去上述液体500 L,并用BB稀释至浓度为250 nM,最终得到250 nM的适配体文库悬液。⑤95℃热击3 min,热击后放在泡沫盒中冰敷。[align=left][font='times new roman'][size=16px]2.1.3[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]细胞处理[/size][/font][/align](1)消化:①PBS(37℃)润洗3次。②无酶消化液3 mL,消化9 min(等待期间准备好孵育用离心管;确认离心机参数为:120 rcf,1 min,25 ℃),吹打细胞使其从培养瓶表面脱落。直接转移至15mL离心管中,吹打混匀约20次(吹散细胞团,分离成单个细胞)。③显微镜观察确认细胞均从培养瓶上脱落,加入2-3 mL ECM至培养瓶中润洗,然后转移至上述离心管中,吹打终止消化。④离心:120 rcf,1 min,25℃。(等待期间各加入250 L待测文库至低吸附离心管中,注意要快速,吸取之前需要先混悬文库)。⑤离心之后小心倒出,用枪吸出剩下的ECM,加入2V L BB,重悬吸打混匀,获得5×10[font='times new roman'][size=16px]6[/size][/font]个/mL的细胞悬液。[align=left][font='times new roman'][size=16px]2.1.4[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]细胞与文库结合[/size][/font][/align]①孵育:分别加入250 μL上述细胞悬液至250 μL ssDNA文库中,进行孵育:4℃,30 min,打开摇床第二格。②等待期间离心机调至4℃;用密封袋装好洁净的1000 L枪头准备流式上样用;2.2.2.5 润洗重悬细胞①取出孵育好的体系,进行离心:4℃,120 g,1 min(等待期间准备好4℃ PBS)。②倒掉上清液,用枪头小心吸出管口残留的上清液,每管加500 L PBS(4℃)用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]移液枪[/color][/url][/color][/url]吸打重悬约20次。③再次离心4℃,120 g,1 min。④第二次重悬:重复①-③步骤。⑤每管加入500 L PBS重悬,忽略实验损失,最后得到理论细胞浓度为2.5×10[font='times new roman'][size=16px]6[/size][/font]个/mL的细胞悬液。[font='times new roman'][size=16px]2.2[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]送样分析[/size][/font]FAM荧光染色较弱,在预处理之后应尽快进行流式分析,流式分析上样程序复杂,需要正确进行开机,测样,关机的步骤,才能够得到准确的数据。[align=left](1)准备工作:[/align][align=left]准备1000 mL[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]移液枪[/color][/url][/color][/url],1000 mL 洁净枪头,流式管,质控微球。[/align][align=left]①开启液流系统:由上至下打开流式细胞仪开关;再开启计算机,打开FACSDiva软件,在“Cytometer仪器框”中确认流式细胞仪已与电脑连接,启动液流之前,确认液流系统水平,进行补充鞘液、去离子水、乙醇以及漂水,并清空废液。[/align][align=left]在“Cytometer”菜单中,点击“Fluidics Startup(启动液流系统)”,按照提示进行操作:确定气路和液路是从乙醇桶连接到了鞘液桶上:将蓝色液路管接到过滤器下方,透明气路管接到鞘液桶上;确定闭合的喷嘴是在流动检测池上。[/align][align=left]②将70 m的喷嘴放入装有超纯水的烧杯中,超声30 s,用无尘纸蘸干;抽出闭合的喷嘴;插入70 m的喷嘴(红圈朝上)。[/align][align=left]③点击“×steam”,开启液流,出现水滴状,调整使上端横线位于第二个或者第三个水滴的尾部,下端横线位于第三个或者第四个液滴的中部,调整好后关闭液流。[/align][align=left](2)做质控:[/align][align=left]①用CS&T微球,用之前一定将微球甩匀(保证取出的微球呈均匀体系)用涡旋震荡;取一支洁净的流式管加入333 L的鞘液,再加一滴微球(用之前用混悬仪混匀,正常的微球为浑浊状)。[/align][align=left]②打开液流系统,在“Cytometer”菜单下点击“CST”;展开Setup Control窗口:在Characterize菜单中中选择“Check Performence”;在Configuration流式设置中:喷嘴的大小:选择70m,点击左下角“set configuration”,再点击“OK”。[/align][align=left]③选择微球的Lot ID:与微球瓶身上编号对应:10549。[/align][align=left]④敲弹准备好的微球悬液使其混匀,进行上样,打开液流;确认激发光源没问题即可关掉页面并关掉液流。[/align][align=left](3)上样:[/align][align=left]①新建样品,并勾选FITC、SSC、FSC的H、A、W、log数据项。[/align][align=left]②作图:建立散点图,横坐标为FSC-H,纵坐标为SSC-H;再建立一个图:横坐标:FITC-H,纵坐标为:Count。[/align][align=left]③打开液流至3,选择对应样品;吹打混匀并放置样品,点击“LOAD”上样。调整FSC和SSC的电压,使散点图的中的点都集中在所圈的门中。(若散点偏右,则FSC电压过大,调整FSC电压使其变小,若散点偏上,则调整SSC使其变小。)当调整合适时点击“RECORD”记录数据。[/align][align=left]④计数完毕,调低流速,点击“unload”,选择第二个样品并重复第③步。[/align][align=left]⑤上样完毕之后,保存数据。[/align][align=left](4)关机步骤:[/align][align=left]①上一管clean液,高速冲2 min;再上一管去离子水,高速冲5 min;关闭液流,检查液路系统。[/align][align=left]②在“Cytometer”菜单中,选择“shutdown”,根据指示操作:取下70 m的喷嘴,超声清洗,安装闭合喷嘴(红色点朝上)。[/align][align=left]③把液路和气路连接到乙醇桶上,用乙醇冲洗(先拔气路再拔液路)。[/align][align=left]④装一管clean液,清洗上样针和流动池。[/align][align=left]完成上述步骤之后即可关闭界面。[/align][align=left][/align][font='times new roman'][size=16px]2.3数据处理:[/size][/font]将原始数据用Flowjo软件进行处理,得到散点图以及荧光强度直方图,接下来通过举例来说明数据如何分析:(1) 散点图分析:[align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/11/202111301026242555_5228_5413603_3.jpeg[/img][size=13px]数据处理分析散点图[/size][/align]该图为散点图,可以看出大体分为两个集团,散点图有两个集团说明体系中有两种细胞粒子,并且在该图片的左下角粒子较少,说明细胞碎片较少,在预处理时较好地保护了细胞的完整性。散点图中可以区分出整个上样的体系中主要含有两种大小的细胞颗粒,在预处理的过程中,无酶消化液的消化能力较弱,并且细胞团密度较大,细胞间黏连较多,在最后孵育结束用PBS进行重悬的时候仍然能够肉眼可见有白色细微絮状物。FSC值越大,代表颗粒的体积越大;SSC值越大,代表颗粒内部的复杂程度越高。故可初步判断,G1门中的颗粒为未消化完全的细胞团,而G2门中的颗粒为分散的单个细胞。(2) 直方图分析:[align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/11/202111301026243736_5071_5413603_3.jpeg[/img][size=13px]数据处理分析直方图[/size][/align]图中为G2门选中的样品的荧光强度,该图中有两个峰,横坐标10[font='times new roman'][size=16px]2[/size][/font]附近所产生的荧光峰可以判定是残留的细胞碎片,可视为背景值,横坐标10[font='times new roman'][size=16px]4[/size][/font]~10[font='times new roman'][size=16px]5[/size][/font]附近的峰代表四个适配体分别与细胞结合所产生的荧光强度,SYL3C-Aptamer结合偏移量最大,荧光较强,且高荧光事件次数较多,说明SYL3C-Aptamer与单个细胞的结合能力最强,并且G2门中的颗粒大多数为消化完全的单个细胞,呈现出较好的特异性。总之,该组结果对比体现出,单个细胞靶点较多,适配体与单个细胞结合能力较高,通过荧光强度波峰的偏移所反映的适配体与细胞特异性结合能力的大小依次为SYL3C-Aptamer>EP166-Aptamer>CA2-Aptamer>ARC1172-Aptamer。同时,由图中可以看出:10th-ssDNA pool与SYL3C-Aptamer在10[font='times new roman'][size=16px]4[/size][/font]~10[font='times new roman'][size=16px]5[/size][/font]荧光强度波峰较高,说明二者与单个细胞的结合能力较好,结合位点较多,呈现良好的特异性和亲和性。SYL3-Aptamer荧光波峰明显右移,与单个细胞的结合位点较多。[font='times new roman'][size=16px]三、总结[/size][/font]本次说明旨在利用带荧光的适配体靶向特异性结合目的细胞的原理,利用流式细胞仪监测适配体结合靶细胞能力的强弱,同时还可以应用于不同适配体靶向同一种细胞的结合能力强弱的比较。进一步利用流式细胞仪,还可以测定适配体的Kd值;还可以根据预处理的条件不同,与对照组比较,来测定适配体靶向细胞的受体是位于细胞膜表面还是细胞内,从而进一步测定适配体的生物学稳定性。同时,流式细胞仪还有很多方面的应用,例如鉴定细菌、检测细胞凋亡等,一些抗体-细胞复合物的结合情况也能够由流式细胞仪来进行监测。 在进行流式上样的过程中,预处理、上样以及数据处理阶段都有需要注意的细节,例如:本次所使用的细胞为贴壁生长的内皮细胞,故在细胞预处理时需要先消化细胞;在进行上样前,需要将样品进行吸打混匀,以免细胞沉积在流式管底部,导致未吸取到样品;在应用流式细胞仪的过程中,使用前的维护、质控流程十分重要,该流程会直接影响所得数据的稳定性;不同的流式细胞仪的维护程序稍有不同,本次说明中的使用方法只适用于BD FACSAria III,流式细胞仪具有强大的分析功能,其在细胞研究中具有重要的作用。[align=left][/align][align=left][/align][align=left][/align][align=left][/align]

  • ICP测样过程中的饱和会有哪些情况?

    http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/default/em09505.gif如题,大家在使用ICP测样,过程中会有哪些饱和情况?具体是如何分析处理的?我先抛砖引玉,样品浓度过大,稀释后在正常范围之内测试亲们,你还有哪些经历值得分享

Instrument.com.cn Copyright©1999- 2023 ,All Rights Reserved版权所有,未经书面授权,页面内容不得以任何形式进行复制