简易洗脱器

梯度洗脱的目的是为了去除杂质干扰吗，梯度洗脱设置规律如何呀，本人做化妆品检测，因为不同家的产品配方不一样，导致检测方法不适合所有家的样品，有干扰的一般还得复测，想请问大家有啥好的建议

安捷伦LC1100 无法实现梯度洗脱，以前曾重装过一次程序，不是硬件问题，按工程师建议，重新修复软件，依然不能，请各位大侠指教啊

示差检测器能不能使用梯度洗脱呢 书上说不能 那参比池不能扣除梯度洗脱的不同之处吗

大家好！在[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/3p][color=#3333ff]离子色谱[/color][/url]中，为了尽快把各成分都洗脱出来，我们会使用梯度洗脱的方式进行洗脱。然而，为了抑制基线受到梯度影响而漂移，也为了追求好的信噪比，我们会加一定抑制电流于抑制器。不过，抑制电流的大小选择是个技术活。太大，会损坏抑制器，仪器也会自动停止 报错。太小，就起不到很好的作用。尤其在梯度差距很大时，这种影响特别明显。大家在日常使用中，有什么好的方法来设置抑制电流呢？我用的ADES 600抑制器

[size=3][/size]我用ASE100提取土壤中的多氯联苯跟有机氯农药，提取剂用的是1：1的丙酮：正己烷，手动过佛罗里希柱，5ml正己烷活化柱子，10ml正己烷：二氯甲烷 1：1的混合液洗脱，回收率才20％多一些，我的过柱的样品只有3ml左右，我不知道该用多少洗脱液来淋洗，请做过的帮忙找下愿意你是不是洗脱的问题。多氯联苯跟有机氯农药的回收率都是这样，旋转蒸发出去的溶剂中没有被测物质，加载样品洗脱前流出的液体中也没有被测物质，初步判断为样品吸附在了柱子上。 我准备做过柱不过柱的对比，不过柱出杂峰但是不对其积分应该也可以吧，做多氯联苯用质谱检测，有杂峰也影响不到。过柱的那部分，分次过柱，我看用多少体积过柱才能使得最后的洗脱液中检测不到被测物质。 有什么好的建议请多多指教

HPLC有等强度(isocratic)和梯度(gradient)洗脱两种方式。等度洗脱是在同一分析周期内流动相组成保持恒定，适合于组分数目较少，性质差别不大的样品。梯度洗脱是在一个分析周期内程序控制流动相的组成，如溶剂的极性、离子强度和pH值等，用于分析组分数目多、性质差异较大的复杂样品。采用梯度洗脱可以缩短分析时间，提高分离度，改善峰形，提高检测灵敏度，但是常常引起基线漂移和降低重现性。 梯度洗脱有两种实现方式：低压梯度（外梯度）和高压梯度（内梯度）。 两种溶剂组成的梯度洗脱可按任意程度混合，即有多种洗脱曲线：线性梯度、凹形梯度、凸形梯度和阶梯形梯度。线性梯度最常用，尤其适合于在反相柱上进行梯度洗脱。 在进行梯度洗脱时，由于多种溶剂混合，而且组成不断变化，因此带来一些特殊问题，必须充分重视： ①要注意溶剂的互溶性，不相混溶的溶剂不能用作梯度洗脱的流动相。有些溶剂在一定比例内混溶，超出范围后就不互溶，使用时更要引起注意。当有机溶剂和缓冲液混合时，还可能析出盐的晶体，尤其使用磷酸盐时需特别小心。 ②梯度洗脱所用的溶剂纯度要求更高，以保证良好的重现性。进行样品分析前必须进行空白梯度洗脱，以辨认溶剂杂质峰，因为弱溶剂中的杂质富集在色谱柱头后会被强溶剂洗脱下来。用于梯度洗脱的溶剂需彻底脱气，以防止混合时产生气泡。 ③混合溶剂的粘度常随组成而变化，因而在梯度洗脱时常出现压力的变化。例如甲醇和水粘度都较小，当二者以相近比例混合时粘度增大很多，此时的柱压大约是甲醇或水为流动相时的两倍。因此要注意防止梯度洗脱过程中压力超过输液泵或色谱柱能承受的最大压力。 ④每次梯度洗脱之后必须对色谱柱进行再生处理，使其恢复到初始状态。需让10~30倍柱容积的初始流动相流经色谱柱，使固定相与初始流动相达到完全平衡。

Varian 提供各种规格的Bond Elut SPE柱，吸附剂的质量从50mg至100g不等。小柱床的吸附剂通常用于样品体积有限，或者需要特别小的洗脱体积去洗脱目标分析物，以达到最大的分析物浓度。非极性吸附剂和极性吸附剂 吸附剂的容量定义为：给定质量的吸附剂，在最佳条件下可以保留分析物的总质量。不同的键合硅胶吸附剂，其保留容量也有很大不同。对于极性和非极性硅胶基质的吸附剂而言，其保留容量常常小于吸附剂质量的1% (尽管有时也会超过5%)，例如500mg C18吸附剂至多可以保留25mg目标分析物和干扰物质。在某一个处理过程中，对给定吸附剂需要选择所需用量时，不但要考虑对目标分析物的保留容量，还要考虑样品中可能会发生共保留的样品干扰组分。很明显，在决定所需要吸附剂的容量时，这些干扰组分与目标分析物相比，影响因素更大。因此建议：在不同应用中分别测试一下柱容量。 一般较大的吸附剂质量，保留容量也会很大，但是所需要的洗脱溶剂量也会加大，与小柱床体积吸附剂的SPE柱相比，最终洗脱液中的分析物浓度也会偏低。 最小洗脱体积定义为2个柱床体积的洗脱溶剂量。一般典型的柱床体积为120μl/100mg吸附剂。有些情况下，所用洗脱体积会小于2个柱床体积。但是此种萃取过程，一般受流速和其它因素的影响较大，很难得到重复性较好的萃取结果，因此一般不建议采用小体积洗脱萃取方法。

[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]梯度洗脱所用的溶剂纯度要求更高，以保证良好的重现性。进行样品分析前必须进行空白梯度洗脱，以辨认溶剂杂质峰，因为弱溶剂中的杂质富集在色谱柱头后会被强溶剂洗脱下来。用于梯度洗脱的溶剂需彻底脱气，以防止混合时产生气泡。

洗脱蛋白一定是在等电点处洗脱能力最强吗?肯定不是离子交换柱， 蛋白的pi为4.7 ，流动相在ph8时洗脱峰面积最大， 怎么解释这种现象？

我们公司的高效液相是安捷伦1200，配备单泵，但是《中国药典》里面的方法是需要双泵梯度洗脱，因此我公司无法按此法检测，现在老板不愿意再买一台泵，要求我从流动相的配比上面来解决单泵洗脱达到双泵梯度洗脱效果的问题，各位专家有什么高招，在此讨论讨论

HPLC有等强度(isocratic)和梯度(gradient)洗脱两种方式。等度洗脱是在同一分析周期内流动相组成保持恒定，适合于组分数目较少，性质差别不大的样品。梯度洗脱是在一个分析周期内程序控制流动相的组成，如溶剂的极性、离子强度和pH值等，用于分析组分数目多、性质差异较大的复杂样品。采用梯度洗脱可以缩短分析时间，提高分离度，改善峰形，提高检测灵敏度，但是常常引起基线漂移和降低重现性。梯度洗脱有两种实现方式：低压梯度（外梯度）和高压梯度（内梯度）。两种溶剂组成的梯度洗脱可按任意程度混合，即有多种洗脱曲线：线性梯度、凹形梯度、凸形梯度和阶梯形梯度。线性梯度最常用，尤其适合于在反相柱上进行梯度洗脱。在进行梯度洗脱时，由于多种溶剂混合，而且组成不断变化，因此带来一些特殊问题，必须充分重视：①要注意溶剂的互溶性，不相混溶的溶剂不能用作梯度洗脱的流动相。有些溶剂在一定比例内混溶，超出范围后就不互溶，使用时更要引起注意。当有机溶剂和缓冲液混合时，还可能析出盐的晶体，尤其使用磷酸盐时需特别小心。②梯度洗脱所用的溶剂纯度要求更高，以保证良好的重现性。进行样品分析前必须进行空白梯度洗脱，以辨认溶剂杂质峰，因为弱溶剂中的杂质富集在色谱柱头后会被强溶剂洗脱下来。用于梯度洗脱的溶剂需彻底脱气，以防止混合时产生气泡。③混合溶剂的粘度常随组成而变化，因而在梯度洗脱时常出现压力的变化。例如甲醇和水粘度都较小，当二者以相近比例混合时粘度增大很多，此时的柱压大约是甲醇或水为流动相时的两倍。因此要注意防止梯度洗脱过程中压力超过输液泵或色谱柱能承受的最大压力。④每次梯度洗脱之后必须对色谱柱进行再生处理，使其恢复到初始状态。需让10~30倍柱容积的初始流动相流经色谱柱，使固定相与初始流动相达到完全平衡。

固相萃取的时候分活化，过样品，洗样品，洗脱4步，在洗脱的时候利用外力让洗脱液快速通过柱子会不会影响洗脱效果？比如用吸耳球把萃取柱中的洗脱液打下来。还有过样品，洗样品的时候同样的操作会不会影响萃取效果？

我们有一个样品，梯度洗脱的分析方法，对单个杂质有要求，经常出现甲苯残留现象，不容易洗脱出来，甲苯是生产过程中的溶剂，大家有没有什么好的建议。

我们单位的仪器是HPLC-ICPMS 安捷伦7500 没有自动进样 有一个老师说不能梯度洗脱 原因是没有自动进样 是这样的吗？

低压梯度比高压成本低很多，即使加上在线脱气装置，成本还是低，既然这样为什么又有人去买高压梯度洗脱呢？高压梯度应该有其特点，不知道在应用上与低压有什么不同，原理大家都懂。

采用Agilent的zobrax SAX （强阴离子柱）4.6*150。蛋白样品：BSA 分子量约60kDa，pI=4.8。上样浓度1mg/ml，进样50ul，流速：0.8ml/min，280nm紫外检测。流动相 A 20mM，pH7磷酸钠buffer，B：A+1M NaCl。程序0～15min：100％A；15～45min：梯度B至100％；45～50min：100％B没有蛋白样品峰我尝试过pH6.5，6.0的buffer，也尝试过pH8.0的Tris－HClbuffer，B的洗脱盐尝试过1M硫酸铵。以上条件均无法洗脱出蛋白峰。直接0.5M NaOH再生柱子可以从柱子上洗脱出峰。离子交换一般用NaCl或者硫酸铵即可。很奇怪，BSA上样后没有洗脱峰，不知诸位版友有和建议？

请教各位高手，多组分分析时梯度洗脱的作用，相对等度洗脱（的谱图）怎样设置梯度洗脱？

想用超高效液相--蒸发光散射监测器测二硝托胺及代谢物，用乙腈：0.1%甲酸水（75：25）等度洗脱时，两者出峰时间基本重合了；梯度洗脱还没弄出来，我该怎样设梯度程序呢 大神指导， 注：代谢物极性大

请教老师们，做蔬菜农残用CarbNH2小柱净化，看到介绍是用乙腈、甲苯3:1洗脱，可以换用其他洗脱液吗？比如丙酮、正己烷之类的？

求助各位大神，刚接触液相，现在有两种物质需要测试，一种物质有机相高时出峰，出峰时间较早，另一种物质水相多时出峰，出峰时间较晚，现在需要同时测定两种物质，老师建议用梯度洗脱，可是我没接触过梯度，按照他们等度出峰的条件评感觉设了几个梯度程序，效果很不好，基本没变化，基线还出现下移现象。不知道建立梯度有没什么流程，什么比较好的方法，或者设置的原则，求解呀~~

想跟大家请教一下，以硫酸根为例，它在色谱柱中的出峰时间较长，为什么短时间内洗脱不下来，随着时间的增长会洗脱下来呢，难道淋洗液中的阴离子对硫酸根的作用力是会随着时间而累积的吗？请指教一下具体原因，谢谢！

问一下 同一个样品，假如在20%乙腈浓度下洗脱下来的峰保留时间是10分钟，之后在50%乙腈下洗脱下来的峰保留时间是20分钟，如果我直接用纯乙腈洗脱，那么这些峰的保留时间还没有没先后次序？

[color=#444444]是这样的我在使用梯度洗脱时把参数设置好，其中A泵却运行不了，设置好参数后外控灯是一直亮着的，不像B泵那样一闪一闪的，能运行，也不敢随便去动它，希望前辈们能给我提供点处理的方法与建议，在此先感谢了[/color]

n 淋洗n 分析物得到保留后，通常需要淋洗固定相以洗掉不需要的样品组分，淋洗溶剂的洗脱强度是略强于或等于上样溶剂。淋洗溶剂必须尽量地弱以洗调尽量多的干扰组分，但不能强到可以洗脱任何一个分析物的程度。n 注意：淋洗时不宜使用太强溶剂，否则会将强保留杂质洗下来。使用太弱溶剂，会使淋洗体积加大。可改为强、弱溶剂混用；但混用或前后使用的溶剂必须互溶 n 洗脱n 淋洗过后，将分析物从固定相上洗脱。溶剂必须进行认真选择，溶剂太强，一些更强保留的不必要组分将被洗出来；溶剂太弱就需要更多的洗脱液来洗出分析物，这样固相萃取柱的浓缩功效就会削弱难道淋洗和洗脱不是一个过程吗

求求大家分享一下林可霉素和红霉素的洗脱液和洗脱梯度吧，我用的20762这个标准，林可霉素的加标回收率一直很低

由于样品需要，使用两种不同能力洗脱剂洗脱，氢氧化钠和醋酸钠洗脱方式是前30分钟氢氧化钠后面用醋酸钠洗脱20分钟，发现一个问题，我单单用氢氧化钠洗脱需要物质时，洗脱峰型很好，但是后面再加上醋酸钠时，每个氢氧化钠洗脱时的样品就会影响，这是什么问题？醋酸钠会对之前氢氧化钠洗脱能力影响吗？醋酸钠洗脱后我都平衡至基线平稳了。

实验室有液相色谱，用的是荧光检测器，老师在考虑要装梯度洗脱，但是目前只有一个泵，型号是岛津LC-20AD，还需要配置哪些配件才能使用梯度洗脱呢？一定要两个泵吗？？？之前有一个工程师说可以装四元低压梯度阀就可以了，请教各位有没有比较好的方案~求助！谢谢！

柱色谱所选择的洗脱剂为什么要先用弱极性的,然后再使用较强极性的洗脱剂？

SPE技术处理复杂基质样品的洗脱原理是通过固体填料的选择性吸附和淋洗液洗脱将液体样品中的目标化合物与干扰杂质分离，以达到富集、分离、净化样品的目的。SPE是一个包括[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相[/color][/url]和固相的物理萃取过程，在固相萃取过程中，固体填料对目标化合物的吸附力大于样品母液，当样品通过SPE柱时，目标化合物被吸附在固体填料表面，其他组分则随样品母液通过柱子，之后再用适当的溶剂将目标化合物洗脱并收集，然后进行色谱分析。固相萃取的填料主要分为两部分，一部分是基质，另一部分是作用基团。按照基质分类，SPE小柱可以分为硅胶基质小柱，聚合物基质小柱和吸附型小柱。顾名思义，硅胶基质小柱就是以硅胶为支撑基质的固相萃取填料，它的基本骨架是利用硅-氧-硅键相连；而聚合物基质小柱是以高分子聚合物作为基质交联而成；吸附性小柱包括佛罗里硅土，石墨化碳，氧化铝等小柱。聚合物基质相对于硅胶基质有较大的优势，其应用pH适用范围广，可以在全pH值范围内使用，同时具有超强的作用位点，因此具有相对宽泛的应用领域。