离子交换是温和条件下分离蛋白质混合物的一个非常有用的技术,最常见的是应用增加盐浓度的缓梯度溶液进行洗脱。pH 梯度洗脱使用频率较低(除专属应用外,例如色谱聚焦),并且需要复杂的缓冲液体系。尽管如此,如今的四元液相色谱系统完全能够利用常规缓冲盐实现pH 梯度洗脱。本篇应用报告中,我们展示了pH 梯度洗脱在分离单克隆抗体带电异构体时的优势。本文的工作使用了Agilent Bio mAb 色谱柱、安捷伦1260 Infinity 生物惰性四元液相色谱系统和安捷伦缓冲液顾问软件。
SPE 柱净化(Copure® PA,500 mg/6 mL)活化:聚酰胺小柱使用前用 6 mL 甲醇、6 mL 水活化。上样和洗脱:在聚酰胺小柱上加入 10 mL 待净化样品,控制流速在 1-2 滴 / 秒,弃去流出液。依次用 6 mL 甲醇、6 mL 水淋洗,弃去流出液,抽干。然后用 6 mL 10%氨化甲醇进行洗脱,控制流速在 1-2 滴 / 秒,收集洗脱液。重新溶解:洗脱液于 45℃氮吹至干,加 1 mL 水定容,混匀,过 0.45 µ m 水系滤膜,待上机测试。注:建议使用 PTFE 亲水材质滤膜过滤,避免其他材质滤膜对色素有吸附造成回收率偏低现象。