层析色谱仪

色谱层析和活性碳层析柱的区别

在公司上班一直用的是层析柱.在这里看到的都是色谱/我想问的是层析和色谱是同一概念么?不同的话有什么区别么?在学校没好好学,麻烦大家了

柱色谱用的硅胶可以用来做薄层层析吗？做这两个工作需要哪些仪器设备和试剂？请各位贵人相助。谢谢！

美国如何买层析柱（玻璃柱）：做色谱层析分离用的

上世纪60、70年代是色谱/层析技术快速发展的时代，首先是层析介质有了飞速的发展，各种人工合成的介质出现，如硅胶、聚苯乙烯二乙烯基树脂、琼脂糖、葡聚糖、聚丙烯酰胺等树脂或凝胶的出现，极大地拓展了层析技术的应用领域和范围，基于不同介质的层析方法也如雨后春笋般不断涌现。如Bio-Rad公司于上世纪50年初推出的分析级离子交换树脂AG系列，广泛用于各种分子物质的分离纯化，包括无机离子、有机酸、核酸以及糖类等。值得一提的是，上世纪4、50年代正是DNA、RNA研究如火如 荼的时期，而Bio-Rad推出的AG系列树脂在核酸纯化方面具有极其出色表现，受到众多研究人员的欢迎与好评。 http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2014/01/A1388734846.JPG_small.jpg http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2014/01/A1388734847.JPG_small.jpg Bio-Rad AG系列树脂 此外，因为马丁（Martin）和辛格（Synge）的钻研与畅想，他们的预言分别在1952年及20世纪60年代被人们所应证。而马丁（Martin）和辛格（Synge）两人也于1952年被授予诺贝尔化学奖。 http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2014/01/A1388734849.JPG_small.jpg Bio-Rad专家介绍：其中设想1“流动相可用气体代替液体，因为与液体相比，分离时候，物质间作用力更小，对分离也就更有好处”也就是气相色谱仪(GC)，即以气体作为流动相的色谱法，1952年诞生，目前，该法已被广泛应用于分离和分析复杂的多组分混合物。特别是挥发性物质，我们都知道挥发性物质在实验或分离时会受到干扰，而气相色谱仪的产生给挥发性的化合物的分离测定带来了划时代的变单。 http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2014/01/A1388734850.JPG_small.jpg 设想2“若能够使用非常细的颗粒填料，并在色谱柱两端施加较大的压差，从而增加了理论培板数，这将会大大提高分离效率。”也就是高效液相色谱HPLC，20世纪60年代末诞生，现在高效液相色谱HPLC已成为化学、生物化学与分子生物学、医药学、农业、环保、商检、药检、法检等学科领域与专业最为重要的分离分析技术，是分析化学家、生物化学家等用以解决他们面临的各种实际分离分析课题必不可少的工具。高效液相色谱的优点是：检测的分辨率和灵敏度高，分析速度快，重复性好，定量精度高，应用范围广。适用于分析高沸点、大分子、强极性、热稳定性差的化合物。其缺点是：不能很好地兼容生物缓冲系统，因为HPLC系统通常采用不锈钢材质，因此具有良好的有机溶剂耐受性以及高压力承受。但是生物缓冲系统往往涉及到各种不同浓度的盐溶液，比如最常用的磷酸盐缓冲液等，而不锈钢系统不能耐受盐腐蚀，因此为了满足生物研究中样品的快速分析、分离，蛋白质快速层析技术应运而生。蛋白质快速液相层析（Fast Protein Liquid Chromatography），基于HPLC技术，但又有别于HPLC，它的主要液体接触部件均采用生物盐溶液耐受的塑料或者橡胶，这样能够极大地降低缓冲盐对系统的腐蚀，如Bio-Rad最早一代层析系统Biological LP，正是为了满足70-80年代间快速发展的生命科学领域内对未知组分、物质的分离、纯化的需求应运而生。在其诞生之初，风靡北美。下期，伯乐生命bio-rad专家将为大家带来21世纪层析法特点及先进层析系统，敬请关注！如今的色层分析法经常用于分析、分离无色的物质，已没有颜色这个特殊的含义，但色谱法或色层分析法这个名字仍保留下来沿用。http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2014/01/A1388734851.JPG_small.jpg 现在我们简称为色谱法、层析法或色谱技术、层析技术。

请问一下,有没有用过国产液相色谱层析仪来纯化蛋白质的?仪器的性能如何?上海沪析好象有,但以前用的是pharmacia的AKTA,不知道国产的能不能用,不敢买,大家给提供一下意见吧

纸色谱中需要用中速层析用滤纸进行层析，然后测发光，所以这个色谱纸还是很重要，可是这个中速层析用滤纸到底是什么规格的呢？有人知道吗？很多资料上说对于色谱纸分好几类，不知道他们的区别在哪里？

胶体金的原理上和薄层色谱比较相似，那现在的胶体金层析技术算不算是薄层色谱的一种呢？

[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=81329]薄层色谱分析在层析分离过程中的应用[/url]

主要是做反应中间产物的分离和鉴定。把反应体系中的有机物提出来，进行核磁、红外等分析，确定最后的物质结构。需要的量不多，我想也就是几十毫克，顶多100毫克级别的吧。查了下文献，发现可以用半制备色谱，也有用自动层析仪的。由于对这些仪器都没有什么概念，也不知道如何选择。自动层析仪好像也就2-3万左右，我们这有一台闲置的LC100分析性液相色谱，如果要改造成半制备性，可能也要往里投钱。所以想请有经验的能否指导一二。非常感谢！

主要是做反应中间产物的分离和鉴定。把反应体系中的有机物提出来，进行核磁、红外等分析，确定最后的物质结构。需要的量不多，我想也就是几十毫克，顶多100毫克级别的吧。查了下文献，发现可以用半制备色谱，也有用自动层析仪的。由于对这些仪器都没有什么概念，也不知道如何选择。希望这个功能实现，比较方便，不用操作那么麻烦。因为我们的主要核心研究不是 这个有机物提取。我们主要做有机物的质谱分析的。自动层析仪好像也就2-3万左右，我们这有一台闲置的LC100分析性液相色谱，如果要改造成半制备性，可能也要往里投钱。所以想请有经验的能否指导一二。

我在做柱色谱分析实验时，所用填料为硅胶（100-200目）2.5g，洗脱剂为（1）乙酸乙酯：甲醇=1:1，（2）甲醇，先用1系统20ml淋洗,再用2系统80ml淋洗，收集2系统洗脱液，但是最后结果都是2系统中所要成分大部分都在1系统的洗脱液中，但有时又能收集到合格的2系统洗脱液，造成结果很难重现。因为是注册的方法，没办法变操作大步骤，希望有人能指导一下层析柱的操作注意事项。 我正常的操作：①装柱子是用1系统浸润硅胶，湿法装柱，装的过程中会敲打或将柱子在台面上墩实、并使之平整。 ②然后用1-2ml 1系统液体溶解样品上样（尽量2-3次溶完样品洗进柱子），③再之后就是先把样放到柱子里，④再加1系统洗脱液20ml,洗脱，没有过多控制流速，因为流速已经很慢了（1秒1-0.5滴）。⑤流完1系统洗脱液至近干（弃去），缓慢小心加入80ml 2系统洗脱液（怕冲坏柱子），然后收集流出液。。。。 不知道有什么不妥的地方，请各位老师交流指正。

我在做柱色谱分析实验时，所用填料为硅胶（100-200目）2.5g，洗脱剂为（1）乙酸乙酯：甲醇=1:1，（2）甲醇，先用1系统20ml淋洗,再用2系统80ml淋洗，收集2系统洗脱液，但是最后结果都是2系统中所要成分大部分都在1系统的洗脱液中，但有时又能收集到合格的2系统洗脱液，造成结果很难重现。因为是注册的方法，没办法变操作大步骤，希望有人能指导一下层析柱的操作注意事项。 我正常的操作：①装柱子是用1系统浸润硅胶，湿法装柱，装的过程中会敲打或将柱子在台面上墩实、并使之平整。 ②然后用1-2ml 1系统液体溶解样品上样（尽量2-3次溶完样品洗进柱子），③再之后就是先把样放到柱子里，④再加1系统洗脱液20ml,洗脱，没有过多控制流速，因为流速已经很慢了（1秒1-0.5滴）。⑤流完1系统洗脱液至近干（弃去），缓慢小心加入80ml 2系统洗脱液（怕冲坏柱子），然后收集流出液。。。。 不知道有什么不妥的地方，请各位老师交流指正。

我要测土壤中的抗生素含量，目前计划流程是这样的：提取——HLB固相萃取——凝胶层析——LC/MS/MS检测因为腐植酸会对色谱影响很大，所以有人建议我用分子排阻滤掉大分子，但是我能查到的资料都是用凝胶色谱测定大分子的，想知道如果我只是要层析分离不用测定，是不是也要用专门的凝胶色谱柱？还是买了填料自己做个层析柱就可以？自己做的话怎么控制洗脱时间？从来没接触过凝胶，还请大大们指点！

层析法又称色层分析法或色谱法（Chromatography），它是在1903-1906年由俄国植物学家M. Tswett首先系统提出来的。他将叶绿素的石油醚溶液通过CaCO3管柱，并继续以石油醚淋洗，由于CaCO3对叶绿素中各种色素的吸附能力不同，色素被逐渐分离，在管柱中出现了不同颜色的谱带或称色谱图（Chromatogram）。如图3－1 所示： 当时这种方法并没引起人们的足够注意，直到1931年将该方法应用到分离复杂的有机混合物，人们才发现了它的广泛用途。随着科学技术的发展以及生产实践的需要，层析技术也得到了迅速的发展。为此作出重要贡献的当推英国生物学家Martin和Synge。他们首先提出了色谱塔板理论。这是在色谱柱操作参数基础上模拟蒸馏理论，以理论塔板来表示分离效率，定量的描述、评价层析分离过程。其次，他们根据液－液逆流萃取的原理，发明了液－液分配色谱。特别是他们提出了远见卓识的预言：一、流动相可用气体代替液体，与液体相比，物质间的作用力减小了，这对分离更有好处；二、使用非常细的颗粒填料并在柱两端施加较大的压差，应能得到最小的理论塔板高(即增加了理论塔板数)，这将会大大提高分离效率。前者预见了[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]的产生，并在1952年诞生了[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱仪[/url]，它给挥发性的化合物的分离测定带来了划时代的变革；后者预见了高效液相色谱（HPLC）的产生，在60年代末也为人们所实现，现在HPLC已成为生物化学与分子生物学、化学等领域不可缺少的分析分离工具之一。因此, Martin和Synge于1952年被授予诺贝尔化学奖。如今的色层分析法经常用于分离无色的物质，已没有颜色这个特殊的含义。但色谱法或色层分析法这个名字仍保留下来沿用。现在我们简称为层析法或层析技术。 层析法的最大特点是分离效率高，它能分离各种性质极相类似的物质。而且它既可以用于少量物质的分析鉴定，又可用于大量物质的分离纯化制备。因此，作为一种重要的分析分离手段与方法，它广泛地应用于科学研究与工业生产上。现在，它在石油、化工、医药卫生、生物科学、环境科学、农业科学等领域都发挥着十分重要的作用。层析的基本理论 层析法是一种基于被分离物质的物理、化学及生物学特性的不同，使它们在某种基质中移动速度不同而进行分离和分析的方法。例如：我们利用物质在溶解度、吸附能力、立体化学特性及分子的大小、带电情况及离子交换、亲和力的大小及特异的生物学反应等方面的差异，使其在流动相与固定相之间的分配系数（或称分配常数）不同，达到彼此分离的目的。 对于一个层析柱来说，可作如下基本假设： 1. 层析柱的内径和柱内的填料是均匀的，而且层析柱由若干层组成。每层高度为H，称为一个理论塔板。塔板一部分为固定相占据，一部分为流动相占据，且各塔板的流动相体积相等，称为板体积，以Vm表示。 2. 每个塔板内溶质分子在固定相与流动相之间瞬间达到平衡，且忽略分子纵向扩散。 3. 溶质在各塔板上的分配系数是一常数，与溶质在塔板的量无关。 4. 流动相通过层析柱可以看成是脉冲式的间歇过程（即不连续过程）。从一个塔板到另一个塔板流动相体积为Vm。当流过层析柱的流动相的体积为V时，则流动相在每个塔板上跳越的次数为n:n = 5. 溶质开始加在层析柱的第零塔板上。根据以上假定，将连续的层析过程分解成了间歇的动作，这与多次萃取过程相似，一个理论塔板相当于一个两相平衡的小单元。层析的基本概念1. 固定相： 固定相是层析的一个基质。它可以是固体物质（如吸附剂，凝胶，离子交换剂等），也可以是液体物质（如固定在硅胶或纤维素上的溶液），这些基质能与待分离的化合物进行可逆的吸附，溶解，交换等作用。它对层析的效果起着关键的作用。 2. 流动相： 在层析过程中，推动固定相上待分离的物质朝着一个方向移动的液体、气体或超临界体等，都称为流动相。柱层析中一般称为洗脱剂，薄层层析时称为展层剂。它也是层析分离中的重要影响因素之一。3. 分配系数及迁移率（或比移值）： 分配系数是指在一定的条件下，某种组分在固定相和流动相中含量（浓度）的比值，常用K来表示。分配系数是层析中分离纯化物质的主要依据。 K=Cs/Cm 其中Cs: 固定相中的浓度，Cm: 流动相中的浓度。 迁移率（或比移值）是指：在一定条件下，在相同的时间内某一组分在固定相移动的距离与流动相本身移动的距离之比值。常用Rf来表示。（Rf大于或等于1）可以看出：K增加，Rf减少；反之，会减少，Rf增加。 实验中我们还常用相对迁移率的概念。相对迁移率是指：在一定条件下，在相同时间内，某一组分在固定相中移动的距离与某一标准物质在固定相中移动的距离之比值。它可以小于等于1，也可以大于1。用Rx来表示。不同物质的分配系数或迁移率是不同的。分配系数或迁移率的差异程度是决定几种物质采用层析方法能否分离的先决条件。很显然，差异越大，分离效果越理想。 分配系数主要与下列因素有关：①被分离物质本身的性质；②固定相和流动相的性质；③层析柱的温度。对于温度的影响有下列关系式： lnK = －(DG0/RT) 式中： K为分配系数（或平衡常数） DG0为标准自由能变化 R为气体常数 T为绝对温度 这是层析分离的热力学基础。一般情况下，层析时组分的DG0为负值，则温度与分配系数成反比关系。通常温度上升20°C, K值下降一半，它将导致组分移动速率增加。这也是为什么在层析时最好采用恒温柱的原因。有时对于K值相近的不同物质，可通过改变温度的方法，增大K值之间的差异，达到分离的目的。 4. 分辨率（或分离度） 分辨率一般定义为：相邻两个峰的分开程度。用Rs来表示。图3－2 是计算分辨率的示意图。 分辨率： 由上式可见，Rs值越大，两种组分分离的越好。当Rs = 1时，两组分具有教好的分离，互相沾染约2%，即每种组分的纯度约为98%。当Rs=1.5时，两组分基本完全分开，每种组分的纯度可达到99.8%。如果两种组分的浓度相差较大时，尤其要求较高的分辨率。 为了提高分辨率Rs 的值，可采用以下方法： ⑴ 使理论塔板数N增大，则Rs上升。 ① 增加柱长，N可增大，可提高分离度，但它造成分离的时间加长，洗脱液体积增大，并使洗脱峰加宽，因此不是一种特别好的办法。 ② 减小理论塔板的高度。如减小固定相颗粒的尺寸，并加大流动相的压力。高效液相色谱(HPLC)就是这一理论的实际应用。一般液相层析的固定相颗粒为100mm；而HPLC柱子的固定相颗粒为10mm以下，且压力可达150kg/cm。它使Rs大大提高，也使分离的效率大大提高了。 ③ 采用适当的流速，也可使理论塔板的高度降低，增大理论塔板数。太高或太低的流速都是不可取的。对于一个层析柱，它有一个最佳的流速。特别是对于[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]，流速影响相当大。 ⑵ 改变容量因子D（固定相与流动相中溶质量的分布比）。一般是加大D，但D的数值通常不超过10，再大对提高Rs不明显，反而使洗脱的时间延长，谱带加宽。一般D限制在1 ￡ D ￡ 10，最佳范围在1.5-5之间。我们可以通过改变柱温（一般降低温度），改变流动相的性质及组成（如改变pH值，离子强度，盐浓度，有机溶剂比例等），或改变固定相体积与流动相体积之比（如用细颗粒固定相，填充的紧密与均匀些），提高D值，使分离度增大。 ⑶ 增大a（分离因子，也称选择性因子，是两组分容量因子D之比），使Rs变大。实际上，使 a 增大，就是使两种组分的分配系数差值增大。同样，我们可以通过改变固定相的性质、组成，改变流动相的性质、组成，或者改变层析的温度，使 a 发生改变。应当指出的是，温度对分辨率的影响，是对分离因子与理论塔板高度的综合效应。因为温度升高，理论塔板高度有时会降低，有时会升高，这要根据实际情况去选择。通常，a 的变化对Rs影响最明显。 总之，影响分离度或者说分离效率的因素是多方面的。我们应当根据实际情况综合考虑，特别是对于生物大分子，我们还必须考虑它的稳定性，活性等问题。如pH值、温度等都会产生较大的影响，这是生化分离绝不能忽视的。否则，我们将不能得到预期的效果。5. 正相色谱与反相色谱 正相色谱是指固定相的极性高于流动相的极性，因此，在这种层析过程中非极性分子或极性小的分子比极性大的分子移动的速度快，先从柱中流出来。 反相色谱是指固定相的极性低于流动相的极性，在这种层析过程中，极性大的分子比极性小的分子移动的速度快而先从柱中流出。 一般来说，分离纯化极性大的分子（带电离子等）采用正相色谱（或正相柱），而分离纯化极性小的有机分子（有机酸、醇、酚等）多采用反相色谱（或反相柱）。

我公司做薄层色谱,需大量硅胶板，因此欲求购薄层层析铺板器（手动、自动最好都有）详细信息及报价请发送至：[color=#DC143C]shboyg@126.com[/color][color=#DC143C]请可以提供本产品的供应商及时给与留言或留下联系方式！[/color]

[font=宋体]层析法无疑是下游处理中主要和常用的操作，因为层析法相比其他单元操作具有某些优势。例如层析法支持高分辨率的效率，可以分离分子性质非常相似的复杂粗制混合物。此外，层析法是生物工艺中遇到的稀释溶液中捕获分子的理想选择。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]柱色谱法[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]层析法[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]的原理是将一个大的蛋白池分离成许多小的蛋白池，其中一些富集了目标蛋白。虽然柱色谱法有昂贵的专业设备，但只需要基本的设备就可以了。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体]在所有色谱技术中，亲和层析法占主要地位。事实上，亲和层析是最特异、最有效的蛋白纯化技术，为靶蛋白纯化提供了合理的依据。它利用了生物分子识别的原理，即生物活性大分子与亲和配体形成特定的可逆复合物的能力。随着高价值蛋白的传统纯化方案被基于亲和色谱等先进的方法所取代，人们的关注重点转向了设计和选择具有高亲和力和特异性的配体。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]从用于生化表征的浓缩蛋白提取物的制备到治疗性重组蛋白的大规模生产，任何纯化过程都需要经济且足量地获得纯化蛋白。因此，下游处理面临的挑战是高产能、高分辨率和高成本效率。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]亲和层析法适用于基于高特异性相互作用的生化混合物的分离。在纯化过程中可以利用具有明确特性的靶蛋白。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-purification-by-iec][b]离子交换层析法[/b][/url]是一种常见的蛋白纯化方法，该方法基于与离子交换器的亲和力分离离子和极性分子。可溶性分子在通过色谱柱时与带相反电荷的不溶性固定相结合。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]尺寸排阻色谱法，根据分子的大小和分子量分离分子。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]疏水作用层析分离表面有疏水氨基酸侧链的靶蛋白，与疏水基团相互作用并结合在一起。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]蛋白纯化的原理为：不同蛋白质的氨基酸序列及空间结构不同，导致其在物理、化学、生物学等性质上存在差异，利用待分离蛋白质与其它蛋白质性质上的差异，即可以设计出一套合理的蛋白纯化方案。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]蛋白的纯化大致分为粗分离阶段和精细纯化阶段两个阶段。粗分离阶段主要将目的蛋白和其他细胞成分如[/font][font=Calibri]RNA[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]等分开，常用的方法为硫酸铵沉淀法。精细纯化阶段的目的是把目的蛋白与其他大小及理化性质接近的蛋白区分开来，[b]常用的方法有：凝胶过滤层析、离子交换层析、疏水层析、亲和层析等。[/b][/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]凝胶过滤层析[/b][/font][font=宋体]凝胶过滤（也叫排阻层析或分子筛）是一种根据分子大小从混合物中分离蛋白质的方法。不同蛋白的形状及分子大小存在差异，在混合物通过含有填充颗粒的凝胶过滤层析柱时，由于各种蛋白的分子大小不同，扩散进入特定大小孔径颗粒内的能力也各异，大的蛋白分子会被先洗脱出来，分子越小，越晚洗脱，从而达到分离蛋白的目的。一般来说，凝胶过滤层析柱越细、越长纯化的效果越好。凝胶过滤层析详细介绍[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]凝胶过滤层析所能纯化的蛋白分子量范围很宽，纯化过程中也不需要能引起蛋白变性的有机溶剂。缺点是所用树脂有轻度的亲水性，电荷密度较高的蛋白容易吸附在上面，不适宜纯化电荷密度较高的蛋白。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]离子交换层析[/b][/font][font=宋体][font=宋体]离子交换层析是一种依据蛋白表面所带电荷量不同进行蛋白分离纯化的技术。蛋白表面通常会带有一定的电荷，电荷的氨基酸残基均匀地分布在蛋白质的表面，在一定条件下可以与阳离子交换柱或阴离子交换柱结合。这种带电分子与固定相之间的结合作用是可逆的，在改变[/font][font=Calibri]pH[/font][font=宋体]或者用逐渐增加离子强度的缓冲液洗脱时，离子交换剂上结合的物质可与洗脱液中的离子发生交换而被洗脱到溶液中。由于不同物质的电荷不同，其与离子交换剂的结合能力也不同，所以被洗脱到溶液中的顺序也不同，从而达到分离的效果。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]亲和层析[/b][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-purification-by-ac][b]亲和层析纯化[/b][/url]是利用生物大分子物质具有与某些相应的分子专一性可逆结合的特性进行蛋白纯化的技术。该方法适用于从成分复杂且杂质含量远大于目标物的混合中提纯目标物，具有分离效果好、分离条件温和、结合效率高、分离速度快的优点。亲和层析技术可以利用配基与生物分子间的特异性吸附来分离蛋白，也可以在蛋白上加入标签，利用标签与配基之间的特异性结合来纯化蛋白。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]疏水作用层析[/b][/font][font=宋体][font=宋体]疏水作用层析是利用盐[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]水体系中样品分子的疏水基团和层析介质的疏水配基之间疏水力的不同而进行分离的一种层析方法。该法利用了蛋白的疏水性，蛋白经变性处理或处于高盐环境下疏水残基会暴露于蛋白表面，不同蛋白疏水残基与固定相的疏水性配体之间的作用强弱不同，依次用从高至低离子强度洗脱液可将疏水用作由弱至强的组分分离。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多详情可以关注：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/chromatography-purification[/font][/font]

[color=#454545] 我在做柱色谱分析实验时，所用填料为硅胶（100-200目）2.5g，洗脱剂为（1）乙酸乙酯：甲醇=1:1，（2）甲醇，先用1系统20ml淋洗,再用2系统80ml淋洗，收集2系统洗脱液，但是最后结果都是2系统中所要成分大部分都在1系统的洗脱液中，但有时又能收集到合格的2系统洗脱液，造成结果很难重现。因为是注册的方法，没办法变操作大步骤，希望有人能指导一下层析柱的操作注意事项。[/color][align=left] 我正常的操作：①装柱子是用1系统浸润硅胶，湿法装柱，装的过程中会敲打或将柱子在台面上墩实、并使之平整。 ②然后用1-2ml 1系统液体溶解样品上样（尽量2-3次溶完样品洗进柱子），③再之后就是先把样放到柱子里，④再加1系统洗脱液20ml,洗脱，没有过多控制流速，因为流速已经很慢了（1秒1-0.5滴）。⑤流完1系统洗脱液至近干（弃去），缓慢小心加入80ml 2系统洗脱液（怕冲坏柱子），然后收集流出液。。。。[/align][align=left] 不知道有什么不妥的地方，请各位老师交流指正。[/align]

前一段时间，没有更新，因为自己还没有对[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]不是特别理解，前一段时间，看了一下书籍，今天端午节就分享一下自己的所看所想。[b] 色谱法由来[/b] 记得在高中的时候，生物老师在给我们讲解植物色素的分离实验的时候，讲到了俄国的植物学家茨维特的实验，成功分离叶绿素a，叶绿素b,叶黄素，胡萝卜素。这次使用的是石油醚提取液在碳酸钙中分离出来，这个是柱层析法，之后陆续发展了纸层析，现在我们中学实验室使用滤纸来做分离植物色素实验，是纸层析法。[align=center][img=,500,417]http://www.gdkjfw.com/images/image/94741529378098.jpg[/img][/align][align=center]（图片来源于网络）[/align]接着又发展了薄层色谱法（TCL)，将适宜的固定相均匀的涂敷在玻璃板，铝板上面，形成一个薄层，干燥，用微量注射器或微升毛细点样管，点样，放置充满展开剂蒸汽的层析杠中。我记得大学时期曾做过一次薄层色谱法的实验，及后来做的薄层色谱实验。[align=center][img=,600,811]http://www.gdkjfw.com/images/image/87751529378098.jpg[/img][/align][align=center][img=,600,577]http://www.gdkjfw.com/images/image/88391529378098.jpg[/img][/align]这些都为色谱法的吸附与解吸附过程，由流动相（即薄层色谱法的展开剂）向上扩散带动样品向上运动，又由于薄层板上面的固定相（即上述的碳酸钙，硅胶等）对各物质的吸附力不同，从而展开了一个吸附，解吸附，再吸附，再解吸附的一个过程。吸附力是物质在流动相和固定相中的一个分配系数决定的，故每个物质有独特的吸附力，从而可以使样品得到分离。[b][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]法原理[/b] 之后发展了[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱仪[/url]，液相色谱仪，超临界色谱法，毛细管电泳法和逆流色谱法。现在主要说一些色相色谱法。 [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]法是以惰性气体为流动相，以固定液或固体吸附剂作为固定相的色谱法，以固定液为固定相的称为气液色谱，以固体吸附剂为固定相的称为气固色谱。 气液色谱是以在柱中加入惰性固体颗粒，再在柱内涂敷一层高沸点的有机化合物的液膜，也有直接在在毛细柱内壁涂敷高沸点的有机化合物的液膜。惰性气体带动样品进入色谱柱[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相[/url]中的组分会溶解在固定液中，又由于载气连续不断的通过色谱柱，又有组分挥发到载气中，在固定液和载气形成了一个样品组分的一个溶解，挥发，再溶解，再挥发的一个过程，不同样品组分在固定液中的溶解程度不一样，从而完成分离的过程。 气固色谱和上述的薄层色谱相似，是一个吸附与解吸附的一个过程。（如有不理解可以翻看大学中的物理化学书籍，了解吸附和解吸附，溶解与挥发的关系，是一个平衡关系。最后我尝试用CAD画了一幅[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]氢火焰的简易图，提供给大家理解，下次再绘画的具体详细的部件，希望大家对[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱仪[/url]有更多的理解[align=center][img=,600,385]http://www.gdkjfw.com/images/image/9151529378099.jpg[/img][/align][align=center] [/align][align=center][color=#526373][/color][/align]

柱色谱与高压液相色谱相比，制备样品的成本低，操作方便。但柱效不高。 我是从事有机合成的，但事实上大多数时间在与柱子打交道。所以我也一直在想办法提高柱色谱的效率。层析技术 在我刚开始进实验室做实验时，从上一手继承下来的方法：200-300目层析用硅胶 常压层析 柱直径 1.2cm 高 30cm许多人都用这种条件过柱。这种方法柱效很差。速度很慢。如果在薄层上有两个组分很近。那只能用很小极性的溶剂慢慢洗脱，有时一天都走不完。因为市面上200-300目层析用硅胶都是无定形产品。多空隙，溶质会泄留在空隙中难以交换到移动相中。其传质速度慢，色谱峰拖尾严重，柱效仅为每米2-50个塔板（文献值）。 根据高压液相特点，应使用粒度小的硅胶，大流量，合适的移动相才能提高效率。后来本人改用薄层层析硅胶H（青岛海样产，建议不要用硅胶G），柱直径1.2cm，湿法装柱40cm，用氮气钢瓶压柱流量一定要大于3mL/min，在上述条件下可达到与薄层一样的效率。如果在薄层上正好基线分离的两组分（Rf约为0.5）在上述条件用同样的展开剂在90分钟内（不包括装柱时间）即能正好分离。检测收集技术 我试用四种方法：点板检测法、检测器法、标样试管法、估算保留值1. 点板检测法 你要不停的取样点板，你的眼睛就是检测器。这个方法不方便，误差大。这里不推荐使用。而且这个办法根本无法和我上述的色谱条件配合使用。因为流量大，分离速度很快。你可能没检出来就把两个很近的组分收在一个瓶子里了。 2. 检测器法 要是有条件的话可以用液相上的紫外检测器检测。这是最合适的方法，配合记录仪还可以得到组分的色谱峰面积。但是钱的问题.... 3. 标样试管法 找一个有颜色物质作为标样加到样品中一起上柱。根据标样的位置可以估量组分所在位置。说来很巧，上次分离一个样品，我用了两个标样。一个是2,4-二硝基苯肼，另一个是2,4-二硝基苯肼与苯甲醛反应得到的苯腙。而我要分离的两组分正好夹在这两个标样中间，移动相是4:1石油醚乙酸乙酯。这两个组分在板上正好基线分离，很近很近。当苯腙洗脱下来时换用小试管收集，每试管收10mL，直到苯肼被洗脱时结束。共收了15个试管。15个试管再并排跑一下板分析，15个试管里只有一试管相混。弃去这一个试管。得到两个组分的纯品，一个为100mg，另一个为120mg。 2,4-二硝基苯肼价格便宜，而且其衍生物合成很方便。很合适作为中小极性样品的标样。我自己就合成了好几种不同的腙，留作标样用。 4. 估算法 在一定范围内，组分的Rf值与柱上的折合保留体积成线性关系。如果你已知某一组分在柱上的折合保留体积和在板上的Rf值。你就可以得到柱板关系因数a。之后用板上其它组分Rf值就可以计算出折合保留体积。再根据柱常数（柱体积和相比率）就可以计算出保留体积。（移动相与板上相同） 但此方法很不准。最主要的问题就是柱常数很难测准，相比率更是个不定因数。而且这个关系只在柱不过载的情况下有效。而制备时往往为了节省成本，当然一次要尽可能多的进样。所以计算值和实测值有时会差100mL！（试验下来最大差距为120mL，不过不过载而且柱不重装，重复性还可以）。从装柱上节省时间时间是宝贵的。可以告诉大家。我二个星期装柱一次。一般装好的柱子可以用20次左右。要提高柱的复用率，要和液相一样保护一下柱子。要知道，装柱要用40分钟。要是我一天走两次柱，我要用一个多小时装柱。1. 样品要处理。不能把有强极性和不溶的都进样进去。我用的方法就是用干法装一个只有4cm的小柱子（直径1.2cm)。用200-300目硅胶。装这样一个柱子只要5分钟。而且这个柱子也能反复用的。把样品倒进去，用手工压柱。之后用乙酸乙酯冲下来。你要其中极性更大的可以用乙醇冲下来。这样一来，即过滤了也去除了强保留的组分。2. 浓缩后可以用板分析，之后就可以上柱分离了。3. 分离结束后，用乙酯乙酯冲柱，再用石油醚冲柱。要用二个小时。不过，这个不占用你的时间。用氮气钢瓶压着就行了。这二个小时你可以点板把组分从试管中分类合并，蒸去溶剂得到产品。回头来柱也冲好了。就可以准备下次分析了。 如果有较强极性的物质，就要用乙醇冲柱，然后用石油醚。要是你使用乙腈或卤代烷（二氯甲烷等）用作移动相，则必须用乙酸乙酯冲过，否则最多只能用10次。4. 结束后，记住让柱身被石油醚泡着，不要空了。

柱层析和TLC是有机化学工作者必须下苦功夫的两项实验技术。这两项技术掌握与 否，对于提高实验的效率至关重要。常见的例子是：在柱层析时，由于层析柱中的硅胶 填料装得不均匀（没有填严实），使得柱子在淋洗过程中就因为出现太多气泡变花，导 致分离效果不好。更常见的例子是：层析柱虽然装得不错，但是由于淋洗剂选择不恰 当，结果导致几十毫克产品，用了几百毫升淋洗剂都还没有完全分离。分离同样的东 西，熟手可能只需要半个小时，而一个层析技术不过关的人可能半天都不能得到纯品。 由此可见，这两项技术掌握与否，对于提高工作效率，减轻工作量，减少有机溶剂的使用，从而对身心健康和环境保护都有明显的作用。 柱层析关键在于柱子是否装好和淋洗剂是否选择恰当。而淋洗剂的选择则是通过 TLC确定。这里要指出的一点是：TLC的作用除了跟踪反应进程，检测试剂和原料纯度 外，一个重要的用途就是为柱层析选择适当的淋洗剂。

那里有[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相[/url]层析质谱仪卖？

薄层层析是比较早发展起来的色谱技术，那平时有没有用点板（薄层层析）定性的？定量的呢？这个方法定量准确吗？定量限很低吧？

农残检测的前处理中常涉及到柱层析法和固相萃取，我的问题是：[color=#DC143C][B]（1）[/B][/color]柱层析法是不是就是吸附柱色谱法[B]？[/B]（2）从文献上得知：柱层析法的基本原理是将提取液中的农药和杂质一起通过一根适宜的吸附柱, 使它们被吸附在表面活性的吸附剂上,然后用适当极性的溶剂来淋洗, 农药一般先被淋洗出来, 而脂肪、蜡质和色素等杂质持留在吸附柱上, 从而达到分离纯化的目的。层析柱有以下几种: ①弗罗里硅土柱 ②氧化铝柱 ③硅胶柱 ④活性炭柱 固相萃取( SPE) 法是由液固萃取和柱液相色谱技术相结合发展而来的,通过使样品在吸附剂与溶剂中溶解度及功能团的相互作用最佳化来影响样品的滞留与洗脱,从而达到分离目的,它是一种柱色谱分离过程,分离机理、固定相和淋洗溶剂的选择性等方面与高效液相色谱类似。SPE柱的种类有正相SPE柱,其填料主要为硅胶、氧化铝、硅镁吸附剂等,反相SPE柱填料主要为C18 ,还有离子交换柱等。 这样看来二者原理一样啊，只是农药被淋洗顺序先后不同，那为什么柱层析法的缺点是试剂消耗量大，手续繁琐费时，对装柱技术要求高。而固相萃取所消耗试剂量明显减少，在很多方面优于柱层析法呢，能不能将二者具体比较一下？感谢大家的帮忙啊，谢谢！！！

[font=宋体]蛋白纯化介质在研究目的蛋白的结构、功能以及相互作用过程中起着至关重要的作用。亲和层析法因其出色的选择性、结合力和分辨率，成为一种常用的蛋白和抗体纯化方法。义翘神州提供的多种亲和纯化介质，不仅简单易用，而且适用于批量操作或重力驱动的纯化过程。这些介质能够高效、便捷、可靠地分离蛋白和抗体，为下游应用提供了强有力的支持，确保实验结果的可靠性和重复性。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]亲和层析法的原理[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]亲和层析法是利用生物大分子与特定分子间特异性、可逆结合的特性，实现生物大分子的分离。作为蛋白质分离的有效手段，通常仅需一步操作，即可获得高纯度的蛋白质。在亲和层析中，蛋白质的分离基于其与特定配体的特异性相互作用，而非共价结合的能力。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]凝胶过滤层析，又称分子筛层析法，是一种独特的蛋白质分离和纯化技术。当样本流经葡聚糖凝胶或琼脂糖凝胶等介质时，这些介质根据蛋白质的大小和形状进行筛选。经过这一过程，目的蛋白得以纯化，为后续的下游应用提供了高质量的原料。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]亲和层析操作步骤：[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]在进行亲和层析时，需将蛋白在适宜的条件下加载至柱子上，确保蛋白（或标签）与其配体之间能够发生特异性结合。随后，通过洗涤步骤，清除与固定相发生非特异性结合的污染蛋白，同时保持蛋白与配体之间的特异性相互作用不受干扰。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]接下来，采用含有竞争性分子的缓冲液进行洗脱，竞争性分子能够与配体结合，从而将目标蛋白从柱子上取代下来。这一步中，竞争分子通常会在后续的色谱流程或透析处理中予以去除。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]通过以上步骤，亲和层析成功实现了目标蛋白的纯化和分离，为后续的实验和应用提供了高质量的原料。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多详情请关注：[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-purification-by-ac][b]亲和层析纯化蛋白[/b][/url][/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-purification-by-ac[/font][/font][font=Calibri] [/font]

找了很久，确实没发现有硅胶柱层析的版块，于是就到了最为相近的薄层色谱来求助了。今天主要想咨询下大家几个经验性的问题：1.硅胶在柱层析使用前，一定要活化吗？这样做有什么作用啊？2.硅胶还有所谓的吸附溶胀的现象吗？或者1g硅胶在有机溶剂中的体积大概多少？好像这叫视密度吧？3.湿法装柱一定要加压吗？因为没有加压泵，本来就会在常压下洗脱.4.洗脱的流速大概多少？比如2个柱体积每小时啊，或者线速度之类的具有一定量化标准的参考值（我准备使用15cm*1.7cm的柱子），这个对于分离影响大吗？.5.对于几个比较相近的物质，可以通过几次柱层析来实现分离吗？比如一次去掉1-2种，那么多次之后就能把杂质去掉了？不好意思，刚接触这个，问题比较多，大家多多指教！想到几个就回答几个，先谢谢大家了！

大家好，我想把0.1g的渣油（溶于四氢呋喃）准确加到层析柱上，因为样品比较粘，还容易拉丝。我用l四氢呋喃把渣油充分溶解后，再加入硅胶1）硅胶：渣油=2:1，搅拌混合后，冷风吹干，吸附样品的硅胶呈现黑褐色，但仍有一些大的硅胶颗粒（多个硅胶颗粒聚在一起，渣油本身粘附力较强可能是出现此现象的主要原因）；2）硅胶：渣油=1.5:1，搅拌混合后，冷风吹干，吸附样品的硅胶呈现黑褐色，但样品中大的硅胶颗粒（多个硅胶颗粒聚在一起）数量多于硅胶：渣油=2:1时得到的样品。请问大家，硅胶：渣油=2:1时得到的样品（吸附了沥青后的硅胶）加入层析柱后，空隙较小，样品面相对平整，但样品层较厚，而硅胶：渣油=1.5:1时得到的样品加入层析柱后，空隙较大，样品面不平整，但样品层的高度相对较低！ 不知道该选哪一种比例（硅胶：渣油）？请问各位有什么好的建议（除了湿法上样）？补充：今天下午试了试（硅胶：渣油=1.5:1），向柱子中加入了吸附有渣油的硅胶后，从外观上看，还算平整。但是加入淋洗液后，样品层收缩，样品层左右侧出现了空隙，导致出现沟流，色谱带重叠现象严重，分离效果极差。请问诸位该怎么解决呀？分析可能是加入的硅胶量太少，硅胶吸附样品的效果不是很好，但现在（硅胶：渣油=1.5:1）样品层已经比较厚了，请教各位该怎么办？

气相色谱仪的基本构造有两部分，即分析单元和显示单元。前者主要包括起源及控制计量装 置﹑进样装置﹑恒温器和色谱柱。后者主要包括检定器和自动记录仪。色谱柱（包括固定相）和检定器是气相色谱仪的核心部件。 1）操作要点 ：1. 参照所属仪器的说明书摆放好仪器，将有关插头对号入座，接地线要牢固接地。 2. 将层析柱接入气路，检查气路是否漏气，熟悉高压气瓶的用法；开总压阀－调节减压阀（使压力为2×10Pa）－调节稳压阀﹑针形阀，使载气流速达到所需要求。 　　 3. 加热层析柱至所需温度（波动值 0.5℃)。加热进样器，使其温度稍高于样品组分的最高沸点。加热检定器，使其温度与柱温相同或稍高，切勿低于柱温，以防样品蒸气冷凝污染鉴 　　定器。 　　4. 打开检定器温压开关，开动记录仪放大部件（对氢火焰离子化检定器是启动直流色谱仪放大器）。调节检定器，使基线稳定，定好零点，即可开始进样分析。 　　5. 样品为液体时，可直接用微量注射器由进样口注入，若样品为气体时，即可用气体六通阀或直接用注射器进样。 　　、2）条件的选择 　　在选好色谱柱的前提下，还应注意下述各点： 　　1. 载气流速。用氢作载气时，一般填充柱之载气流速为5～10厘米/秒的线性速度。适当的流速，有利于提高分辨率。 　　2. 柱温。通常采用与样品平均沸点相等或高出10度的柱温为宜。但是，在气液色谱中，流动相以恒温进入色谱柱时，将使相似化合物早馏出峰互相重叠，晚馏出峰宽度增加。若改为单阶 　　梯式或多阶梯式线性程序升温方式，则可大大提高其分辨率。在选择初步（化合物中最低沸点）升温速率（0.5～6℃/分)和最终温度（化合物中最高沸点，但不高于固定相的沸点）的 　　基础上，经过试验就可找出与理想分辨率有关的柱温。 　　3. 进样的体积与速度。普通填充柱的气体样品进样量为0.1～1毫升，液体样品为0.1～2毫升。进样体积过大，会使峰形扁平甚至重叠，有时还会出现畸形峰，不利于测量面积。此外，氢 　　火焰离子化检定器的进样量应比热导池检定器小。至于进样速度，原则上要求越快越好，这样可提高分离效果，降低进样误差。