酶底物

酶底物法中用到的科立得试剂，方便携带外出，我想知道科立得一旦加入可以保存多久呢？如果说路程较远，当天来不及回来，我可以放在车载培养箱中，但是回来后还要倒入97孔定量板中，想知道科立得粉末保存时间有没有限制。

酶底物法相比多管发酵法、滤膜法的优势特点优势特点：酶底物法为GB5750-2006收录的用于大肠杆菌检测标准方法，酶底物法是目前水中大肠杆菌检测的最先进方法，目前以其方便快捷，假阳性低，适用大量样品快速检测等优点正逐步被国内检测部门所认可。相对于多管发酵和滤膜法，酶底物法检测步骤大大减少，而且对实验环境要求不高，检测时间可减少到24小时，在日常水样监测及应急监测中具有很好的应用前景，可及时检测，预防，最大限度的减少重大公共安全事故的发生几率。 以GB5750-2006中总大肠菌群测定为例，比较三种方法，如表所示。 多管发酵法 滤膜法 酶底物法 检测时间 3-5天 2-3天 1天 假阳性 — 23-26% 1% 检测范围 2-1600MPN/100mL — 1-2419.6MPN/100mL 环境要求 洁净实验室 洁净实验室 无特殊要求 实验人员要求 有专业基础、操作熟练 有专业基础、操作熟练 简单培训即可 定量标准 MPN表 直接计数 MPN表 定量方法 15管 菌落计数 51或97孔板

粪大肠菌群，需用酶底物法的标准，国标、行标或是ＥＰＡ均可

想求教各位专家，酶底物法最后得出的结果是和表中数值比对，得出结果是MPN/100ml，但国标上要求的是个/L，这样需要乘10换算成个/L么？这样乘后结果肯定就超过国标限值了，请高手帮忙解决下我的疑惑，谢谢了

检测植酸酶时使用的植酸钠（肌醇六磷酸钠，sigma P3168）可用哪种型号的底物替代？

环境水体粪大肠菌群用酶底物法和纸片法测量，结果相差较大。请问有比较过的吗？原因是什么？

如题，大家都知道微生物测定现在大多用酶底物法测定总大和大肠，结果是查表得出来的结果，多数为带一位小数的结果，那出报告的时候，是原封不动呢，还是修约一下变成整数报出呢？大家所在的实验室都是怎么规定的，尤其是CMA认证过的实验室，最主要是有啥明确的依据不，欢迎大家讨论~

小编为你解忧，采用酶底物法对地表水水样进行不同倍数的稀释后进行培养检测,观察地表水结果变化。结果表明:地表水水样稀释倍数越小,结果越准确。采用酶底物法测定地表水中的粪大肠菌群具有快速、简便的特点,准确掌握水样稀释倍数对测定结果就越准确。【工作原理】加入含有总大肠菌群细菌的水样，放入程控定量封口机中，目标细菌在Minimal Medium ONPG-MUG培养基中36℃培养，总大肠菌群细菌产生的特异性生物酶β一半乳糖苷酶能分解MinimalMedium ONPG-MUG培养基中的色源底物ONPG,使培养呈现黄色；同时水样中大肠埃希氏菌产生特异性的β一葡萄糖醛酸酶分解Minimal Medium ONPG-MUG培养基中的荧光底物MUG，产生特征性荧光。同样原理，耐热大肠菌群(粪大肠菌群)在44.5℃培养时会分解Minimal Medium ONPG-MUG培养基中的色源底物ONPG，使培养基呈现黄色。程控定量封口机9900Z SEALER PLUS:智能程控定量封口机配合51孔定量盘或97孔定量盘提供简单、快速、准确的定量检测总大肠菌群、大肠埃希氏菌、粪（耐热）大肠菌群、肠球菌和绿脓假单胞菌的实验方案。捷骋牌51孔定量盘和97孔定量盘是基于传统方法最大可能数 (MPN) 统计模型而设计的半自动定量方法。· 通过9900Z sealer PLUS程控定量封口机自动将样品／试剂混合液分配到独立孔中。· 培养结束后，阳性孔数可以转化为 MPN 值。· 51孔定量盘可检测每 100 mL 水样中 1-200MPN 值。· 97孔定量盘可检测每 100 mL 水样中1-2,419 MPN 值。· 整个检测过程手工操作时间小于 1 分钟。【使用方法】定性测试：第一步、在100ml水样中加入试剂，溶解，36℃培养24h；第二步、结果判读 无色=阴性 黄色=总大肠菌群阳性 黄色+荧光=大肠埃希氏菌群阳性注：耐热大肠群菌（粪大肠菌群）需44.5℃培养24h后，观察黄色为阳性定量检测第一步、在100ml水样中加入试剂，溶解；第二步、倒入51孔定量检测盘（定量孔板）或97孔定量检测盘（定量孔板）中；第三步、用程控定量封口机对定量检测盘（定量孔板）进行封装，36 ℃培养24h；第四步、51孔定量检测盘（定量孔板）结果判读： 无色=阴性 黄色格子=总大肠菌群阳性黄色+荧光格子=大肠埃希氏菌群阳性查对照MPN表计数注：耐热大肠群菌（粪大肠菌群）需44.5℃培养24h后，观察黄色格子为阳性结果，查对照MPN表计数。97孔定量检测盘（定量孔板）结果判读无色=阴性 黄色格子=总大肠菌群阳性黄色+荧光格子=大肠埃希氏菌群阳性查对照MPN表计数注：耐热大肠群菌（粪大肠菌群）需44.5℃培养24h后，观察黄色格子为阳性结果，查对照MPN表计数

多管发酵法的话直接灭菌就可以了，但是这个纸片法和酶底物法做完过后废弃物都有塑料的，说实话原来就直接扔了，但今天领导提到以后要考虑无害化处理，傻眼中。 大家一般怎么处理呢？难道当医废一样送处理中心？有没有什么办法可以自己做无害化处理呢？纸片法的话用消毒液还有可能，酶底物法那个板子是密封的，怎么搞定呢？

农残检测的霉试剂，显色剂，底物对身体有害吗？

我要较快的方法检测发酵产生的多酚氧化酶的酶活,底物也是复合型的茶多酚类物质,有较好的思路吗?

不知道各位现在使用的是什么方法检测大肠总大肠菌群、粪大肠菌群（耐热大肠菌群）及大肠埃希氏菌，还是传统的多管发酵还是滤膜法呢，下面我为大家推荐一种新的方法——酶底物法。水质大肠菌群酶底物法检测系统：由LK-2014程控定量封口机、51或97孔定量检测盘、100mL定量瓶、酶底物检测试剂四部分组成。检测水样范围:饮用水、源水、瓶装水、中水、二次供水、管网水、废水、食品水、畜牧用水、医疗用水等。该检测方法采用大肠杆菌产生β-半乳糖苷酶分解色源底物-ONPG(Ortho-nitrophenyl-β-D-galactopyranoside) 使培养液呈黄色。大肠埃希氏菌产生β-葡萄糖醛酸酶（β-glucuronidase）分解MUG（4 - methyl-umbelliferyl-β-glucuronide）使培养液在波长366 nm 紫外光下产生荧光的原理,来定性定量水中总大肠菌群、粪大肠菌群（耐热大肠菌群）及大肠埃希氏菌。序号指标名称技术指标1名称程控定量封口机2用途用于GB5750-2006酶底物法检测水质总大肠菌群、大肠埃希氏菌，粪大肠菌群3可靠性无漏液,无破孔4稳定性可检测40,000个样品以上，使用寿命大于5年5方便性开/关及退格键有定量数显窗口,有保洁窗口6快捷性无需无菌室,24h检测水中总大肠菌群\大肠埃希氏菌\耐热大肠菌群7重量≤16kg8尺寸39cm 长 X 27cm 宽 X 30cm 高9预热时间≤14min10噪音50dba11外罩温度40oC12封口速度 13工作电压AC 220V±10％,50HZ14封口速度51孔、97孔定量检测盘封口时间≤12秒/个15工作环境温度-10oC-50oC16检测范围配合51孔定量检测盘检测范围0-200MPN/100ml(水样不稀释）配合97孔定量检测盘检测范围0-2419MPN/100ml(水样不稀释） 该检测方法是国际上发达国家普遍采用的检测方法,相比我国标准的检测方法,如多管发酵及滤膜法具简便快捷，其选择性培养基具有抑制杂菌的作用，假阳性低，定量准确。由于该方法的方便快速，在实验室日常检测中能提高效率，缩短检测时间，在应急监测中能及时报出数据，避免造成大的公共安全事故。

环境标准《水质 总大肠菌群、粪大肠菌群和大肠埃希氏菌的测定 酶底物法》已编制完成，目前开始征求意见，附件是该标准的征求意见稿。

求电子版NY/T 1665-2008 畜禽饮用水中总大肠菌群和大肠埃希氏菌的测定 酶底物法。谢谢！

据我所知目前只有多管发酵法和膜过滤法两种国标，上一段时间疾控南京会上美国爱德士公司提出一种新的酶底物法，听说很快就会出来的，大家可否有相关消息？

[align=left]为贯彻《中华人民共和国环境保护法》，保护生态环境，保障人体健康，规范生态环境监测工作，现批准《水质 粪大肠菌群的测定 滤膜法》等五项标准为国家环境保护标准，并予发布。[/align][color=#000000][/color][align=left]　　标准名称、编号如下。[/align][color=#000000][/color][align=left]　　一、[url=http://kjs.mee.gov.cn/hjbhbz/bzwb/jcffbz/201901/t20190104_688590.shtml]《水质 粪大肠菌群的测定 滤膜法》（HJ 347.1-2018）；[/url][/align][color=#000000][/color][align=left]　　二、[url=http://kjs.mee.gov.cn/hjbhbz/bzwb/jcffbz/201901/t20190104_688592.shtml]《水质 粪大肠菌群的测定 多管发酵法》（HJ 347.2-2018）；[/url][/align][color=#000000][/color][align=left]　　三、[url=http://kjs.mee.gov.cn/hjbhbz/bzwb/jcffbz/201901/t20190104_688594.shtml]《水质 细菌总数的测定 平皿计数法》（HJ 1000-2018）；[/url][/align][color=#000000][/color][align=left]　　四、[url=http://kjs.mee.gov.cn/hjbhbz/bzwb/jcffbz/201901/t20190104_688595.shtml]《水质 总大肠菌群、粪大肠菌群和大肠埃希氏菌的测定 酶底物法》（HJ 1001-2018）；[/url][/align][color=#000000][/color][align=left]　　五、[url=http://kjs.mee.gov.cn/hjbhbz/bzwb/jcffbz/201901/t20190104_688596.shtml]《水质 丁基黄原酸的测定 液相色谱-三重四极杆串联质谱法》（HJ 1002-2018）。[/url][/align][color=#000000][/color][align=left]　　以上标准自2019年6月1日起实施，由中国环境出版集团出版，标准内容可在生态环境部网站（kjs.mee.gov.cn/hjbhbz/）查询。[/align][color=#000000][/color][align=left]　　自以上标准实施之日起，《水质 粪大肠菌群的测定 多管发酵法和滤膜法（试行）》（HJ/T 347-2007）废止。[/align][color=#000000][/color][align=left]　　特此公告。[/align][color=#000000][/color][align=right]　　生态环境部[/align][color=#000000][/color][align=right]　　2018年12月26日[/align]

如标题，我的酶在与底物溶液反应时，可以长时间剧烈震荡嘛，比如在摇床中300-400转，反应几个小时，我的酶会变质嘛，因为之前看到过有人说酶剧烈震荡会变质，而我现在想要酶与它能降解的底物溶液反应，剧烈震荡可以吗

为什么大多数酶联免疫试剂盒中的底物缓冲液和底物液不直接放在一起？一般是先加底物缓冲液再加底物液，再震荡混匀后孵育。可是原因是什么呢？缓冲液中含有过氧化物，用于底物液中显色剂的氧化，如果提前放在一起会导致变色反应，很多企业还没研制出可以阻断缓慢氧化的稳定剂，所以只好分开盛放。一些医院检验科为了图方便，提前将两种液体混合，造成的数据错误，在投诉中占有很大比例。一般敞口盛放的底物液放置8个小时后就应该开新瓶了，因为空气中的氧气以及实验室中的消毒水气味也会造成底物液（注意这里说的仅仅是底物液，而非两种的混合液）变色。

根据1961年国际酶学会议规定：1个酶活力单位是指在特定条件（25℃，其它为最适条件）下，在1分钟内能转化1微摩尔底物的酶量，或是转化底物中1微摩尔的有关基团的酶量，缩写为1U或者1IU。现在一些生化产品供货商对酶用的很多都是自己的定义1unit而不是1U，那这二者之间是否可以换算得到一个转换系数？比如酸性磷酸酶A供货商的酶活定义为：One unit will hydrolyze 1.0 μmole of p-nitrophenyl phosphate per min at pH 4.8 at 37 °C. B供货商的酶活定义为：Specific activity: ~ 17 U/mg (40oC, pH 5.0, 4-Nitrophenyl phosphate). 问题：A供货商的1unit是否是1U？A供货商的1unit与B供应商的1U是否一致？另外对于国际酶活力概念中提到的“在25°C条件下，其他为最适条件”是否温度必须为25°C条件下测得才为酶活国际单位，还是比如在其他温度下入37°C或者40°C等不同温度测得的也为国际酶活力单位IU？

我试过好多从小麦中提取胆碱酯酶的方法，但是提取的酶，在用碘化硫代乙酰胆碱（BuTCI）做底物的时候，对农药的敏感性不高；而用靛酚乙酸酯做底物的时候，对农药的敏感性还可以，不知道为什么？如果我要坚持用碘化硫代乙酰胆碱（BuTCI）做底物，从哪些材料里提取会更好？欢迎有相关经验的同仁进行交流探讨！

用乙酰胆碱脂酶作农残快速检测时，出现提示：酶活性低，什么原因造成的？查看说明书，酶和底物配置好后4度可保存6天，一是酶和底物要放冰箱上里保存，二是不要超过6天。除了这两种药品外，还有什么原因会引起酶活性低？

酶制剂的酶活测定方法及影响因素随着我国畜牧业的发展和生物工程技术的不断进步，酶制剂在饲料工业中的应用越来越普遍。由于酶制剂能够消除饲料中的某些抗营养因子的负面作用，提高饲料消化率，改善动物生产性能，降低生产成本，因此日益受到饲料界的重视。但是，由于酶制剂来源比较复杂、分子结构不明确，分离提纯困难等多种原因，使这类产品有国家标准的不多，即使有国标也存在一些问题。给广大养殖用户和生产企业带来很大不便。本文简要介绍一下常用的酶活测定方法及测定过程的影响因素，仅供广大饲料工作者提供参考。1 酶制剂的定义及分类所谓的酶制剂就是通过产酶微生物发酵工程或含酶的动、植物组织提取技术生产加工而成，具有一种或多种底物清楚的酶催化活性，有助于改善动物对饲料营养成分的消化、吸收等，并有功效的生物学评定依据，符合安全性要求，作饲料添加剂用的酶制剂产品（NY/T 722-2003）。工业上应用的酶制剂大多为水解酶，按作用底物的不同，可分为淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶、植酸酶、木聚糖酶、果胶酶、葡聚糖酶、纤维素酶等。按动物体内是否分泌，分为消化酶和非消化酶两大类。消化酶指动物自身能够分泌的淀粉酶、蛋白酶和脂肪酶等，在幼龄动物或特殊生理阶段时，动物也存在消化酶分泌不足需要外源供给的情况。非消化酶是指动物自身不能够分泌或很少分泌，必须由外源供给的酶，这类酶能消化动物自身不能消化的物质或降解一些抗营养因子，主要有植酸酶、木聚糖酶、果胶酶、葡聚糖酶、纤维素酶等。2 常见的酶活测定方法通常酶制剂活性的检测是采用实验室分析手段来进行评价，它可以用来筛选优质酶制剂、确定复合酶制剂的最佳组方及确定产品的最佳添加量等，酶制剂实验室评价技术是目前饲料厂家应用最为广泛的一种方法。其操作相对简单，检测所用时间短，便于生产实践应用。酶活测定结果虽不能完全反映酶的使用效果，但通过检测至少可以避免使用劣质的酶制剂。我国饲料工业标准中已经确立了饲用植酸酶（GB/T 18634）、纤维素酶（NY/T912）、β-葡聚糖酶（NY/T 911）的测定方法。另外，许多企事业单位为了生产研究的需要也制定了很多用于各种酶制剂活力的测定方法。目前测定酶制剂活性的方法主要有：2.1 比色法比色法是以反应生成有色化合物的显色反应为基础，通过比较或测量有色物质溶液颜色深度来确定待测组分含量的方法，根据原理不同可分为还原糖法和色原底物法。2.1.1 还原糖法 这种方法是通过酶作用于化学合成或从自然界提取出来的底物来进行测定的。非淀粉多糖酶与底物在特定的条件（温度、pH值和底物浓度）下反应，反应产物为还原糖，在与显色剂反应后，通过比色确定还原糖的生成量，同时制作标准曲线。酶的活性表示为单位时间产生一定浓度的产物所需要的酶量（mg 或mL）。该法可适用于大部分酶活力的测定，如淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶、植酸酶、木聚糖酶、果胶酶、β-葡聚糖酶、纤维素酶等的测定。根据显色剂的不同又可分为DNS 法、钒钼酸铵法和地衣酚法。其中DNS 法由于操作简单、显色稳定，是目前众多实验室和饲料企业在测定非淀粉多糖酶时应用最多的测定方法。2.1.2 色原底物法 原理是利用人工合成的含色原基团的底物在酶的作用下释放出有色物质，利用分光光度计比色测定有色物质的含量计算酶活。如木聚糖酶活力的测定。该法操作简单、重现性好，但酶作用于合成底物与天然底物的效果有一定区别，用合成底物测定的酶活并不能代表酶制剂在应用于天然饲料时所能发挥的酶活大小。2.2 黏度法这种方法是根据酶能够降低一定浓度的标准底物（控制pH值、温度等条件）的黏度的能力来确定酶的活性。利用的底物主要有化学合成的底物（如CMC 用于纤维素酶的测定） 和自然提取的底物（如小麦阿拉伯木聚糖用于木聚糖酶的测定）。测定的酶的活性值是通过与同时测定的标准酶活性的比较，来确定酶的活性。该法可用于木聚糖酶、β-甘露聚糖酶、β-葡聚糖酶等酶活测定。这种方法的特点是通过降低底物的粘度来反映酶的活性，这也正是酶在体内起作用的重要特征。该法虽然灵敏度较高，但重现性差，操作复杂费时，应用难于普及。2.3 免疫学法用于酶活性分析的免疫学法包括ELISA 法和免疫凝胶扩散法。这两种方法是根据酶与抗体之间发生反应，然后ELISA 法通过第二步反应，凝胶扩散法则通过印染过程来确定酶的活性。这些方法非常灵敏，能够检测到极低水平的酶蛋白。但它们的缺点是对于每个产品的酶需要特殊的抗体，另外抗体能够与非酶蛋白质发生反应。由于抗体本身所用的蛋白质是特定的，因此，由不同生产者生产的同种类型的酶之间是没有交叉性的。另外，采用实验动物的敏感性也值得探讨。2.4 凝胶扩散法这种方法是将酶作用的底物与某种凝胶混合后倒入培养皿中，凝固之后，在凝胶上切开一条凿，倒入标准酶液和测试酶液。培养一定时间后，在切开的凝胶周围能够看到水解区域，区域的大小与酶的含量成正比。在某些情况下，还可以再加入其他试剂来显示水解的区域。如木聚糖酶活力的测定。这种方法虽然简单，但培养时间长。因为这种方法是根据区域的大小来确定酶的活性，所以其准确性要低于其他非扩散的方法。2.5 比浊法以酵母或酵母细胞壁在缓冲溶液中的浊度或吸光度的降低来表示酶活力，如β-葡聚糖酶活力的测定。2.6 体外模拟消化技术酶活测定毕竟不能反映外源酶在机体内真实的作用效果，因此，对于体外法评定饲料营养价值的研究不断增加。体外法评定饲料营养价值是通过模拟消化道内温度、pH、消化酶分泌、胃肠运动和养分吸收等参数，在体外建立一套与畜禽消化道内环境接近的操作程序，对饲料及酶制剂进行营养价值预测和评定。常用的体外模拟消化技术包括：①胃蛋白酶—胰酶法；②胃蛋白酶—小肠液法；③胃蛋白酶—胰酶—瘤胃液法；④胃蛋白酶—胰酶—碳水化合物酶法。由于不同的饲料用酶是不同的微生物通过发酵过程产生的，酶产品的酶学性质差别较大。并且各种微生物所分泌的酶的最佳pH 值、温度和对底物的亲和性都不相同。而目前，饲用酶除植酸酶、纤维素酶、木聚糖酶和β-葡聚糖酶有正式颁布的国标或行标酶活测定方法外，其他饲用酶制剂目前都还没有一个统一的定义及检测标准。因此，饲料厂家在比较不同厂家的酶制剂时，在没有统一的测定方法情况下，应首先确定自己认可的检测方法，然后在完全相同的测定条件进行检测，这样得出的结论才具有可比性。3 酶制剂活性测定影响因素的分析饲用酶制剂活性测定的主要影响因素有温度、pH、作用时间、底物等4大要素以及一些非定义要素，如酶液稀释度、标准曲线、显色剂、缓冲液等，下面就这几方面进行归纳分析一下：3.1 影响饲用酶制剂活性测定的四大要素所谓的酶活性就是指在特定的系统和条件下测到的反应速度。为了确保酶制剂测定结果的一致性，饲用酶制剂活性单位定义中对影响酶活大小的主要条件进行了规定，其中包括温度、pH 值、时间和底物，这些都是酶活力测定系统中最重要的因素，对酶促反应速度影响很大。3.1.1 温度对酶活测定的影响 酶制剂对温度非常敏感，在检测过程中对温度的控制则显得非常重要。温度对酶活性影响主要表现在两个方面：一方面，是当温度升高时，酶与底物的反应速率加快；另一方面，由于随着温度的升高将使酶的稳定性下降，部分酶蛋白分子逐渐变性而失去活性，引起酶反应速率下降。温度的这两种影响的综合作用而产生酶反应的“最适温度”。对于不同的酶制剂在不同的情况下最适温度是有一定的差别。研究木聚糖酶时发现，在30℃～40℃条件下酶活较稳定，50℃后随着温度的升高，酶活力开始下降，90℃时基本失活。研究纤维素酶最适酶解条件时发现，在36℃～58℃之间纤维素酶相对酶活随着温度升高而升高，当温度在58℃～62℃之间时，相对酶活性没有明显变化，曲线近似呈水平状态，在40℃、45℃、50℃条件下，其相对酶活分别为56%、70%、80%，而当温度大于58℃以上时相对酶活不再升高。同时，酶在不同条件下适宜温度也可能要受到酶的纯度、底物、激活剂、抑制剂以及酶促反应时间等因素的影响。3.1.2 pH 对酶活测定的影响 pH 值在酶活测定时对测定结果影响很大，各种酶制剂在一定条件下都有其特定的最适酶解pH，酶的最适pH 会随着底物种类和浓度、缓冲液种类和浓度的不同而改变，因此最适pH 也只有在一定条件下才有意义。pH 影响酶活力的原因可能有以下几个方面：① 过酸或过碱可以使酶的空间结构破坏，引起酶构象的改变，也影响酶活性部位催化基团和结合基团的解离状态，酶活性丧失；② 当pH 改变不是很剧烈时，酶虽未变性，但酶活受到了影响。pH 影响了底物的解离状态，或者使底物不能和酶结合，或者结合后不能生成产物。pH 影响酶分子活性部位上有关基团的解离，从而影响与底物的结合或催化，使酶活性降低可能影响到中间络合的解离状态，不利于酶解生成产物；③ pH 影响维持酶分子空间结构的有关基团解离，从而影响了酶活性部位的构象，进而影响酶的活性；④ pH 影响底物的带电状态。这些都直接影响酶和底物的亲和力，影响酶解反应速度。有文献报道，很多酶最适酶解pH 都在3.0～6.0。研究不同pH 值对嗜热毛壳菌木聚糖酶活性的影响发现，在pH 值3.6 以下，随着pH 值的增大，木聚糖酶的活性逐渐升高；pH 值为3.6 时，木聚糖酶的活性最高，且在3.

1． 缓冲液：将缓冲液试剂袋中的试剂倒出，溶于 500ml 蒸馏水中，溶解、混匀即可。2． 底物；向标有“底物”的试剂瓶中加入 2.7 ml 蒸馏水,溶解、混匀即可。0~5oC 环境下冷藏保存。3． 显色剂：按试剂瓶上的标签说明，向标有“显色剂”的试剂瓶中加入 26 ml 缓冲液，溶解、混匀即可。4． 酶试剂：酶试剂已配成溶液可直接使用。平常要在 0~5oC 环境条件下冷藏保存，切勿冷冻至结冰！！！ “酶试剂使用前请摇晃均匀。使用时用一瓶取一瓶，用完再取用新的，要防止其它物质的污染，以免溶液中毒失效，未用完的试剂可放在清洗干净的反应瓶中 0~5oC 环境条件下保存。反应瓶建议用去污粉清洗，尽可能 不用洗洁精清洗。（去污粉可在一般的日杂商站或医药化学试剂商店买到。）5．样品的抑制率 在 40-50%之间为可疑农残超标样品，抑制率大于 50%为农残超标样品。6．器具专用原则：所有用于转移试剂或样品的器具都要专用并帖上标记，以免混用而造成交叉污染。7．试剂“只出不进”原则：每次测试时，从试剂瓶中吸出（抽取）的试剂不管是否使用，只要吸出来了，即便用不上或用不了造成浪费也不要打回去。否则，容易污染整瓶试剂造成更大损失，甚至影响以后所有的测试，产生错误的测试数据。8．对照液的制备：取酶 100ul，缓冲液 2.5ml，加入专用反应瓶中，混匀，再加入显色剂100ul，底物 20ul。摇匀后立即转移到比色皿中，放入仪器进行对照测试。9．检测样品液的制备：取 2g 果蔬样品（叶菜剪成 1 厘米见方的小片，瓜果取厘米见方的横截面）放入三角瓶中，加入 10ml 缓冲液， 振荡提取２分钟后过滤，取出清液即为待测试液。取酶 100ul，待测试液 2.5ml，加入专用管制瓶中，混匀静置抑制 10 分钟后，（按仪器显示的时间计时）加入显色剂 100ul，底物 20ul 。摇匀后立即转移到比色皿中后把比色皿放入仪器中马上进行样品测试。

[color=#444444]最近在做4cl酶反应，底物用的是对香豆酸，用hplc检测，几天前做的实验全是只有底物峰，没有产物峰。昨天把缓冲液重新配了一次，用新配的试剂反应后，经hplc检测后发现，出现一个新的峰，而且底物峰面积相对于空白组大大减少，选取新的峰，色谱显示最适吸收波长为296nm，而产物对香豆酸辅酶a的最适吸收波长应该是333nm，因为产物的标准品买不到，而且没有质谱，现在很纠结实验结果对不对TAT，求大神解答[/color]

在做体外α-葡萄糖苷酶抑制活性。具体的实验操作如下，110μLpbs（Ph6.8），各样品梯度100-200-400-800-1600-3200μg/mL各20μL，还原型谷胱甘肽（1mg/mL）10μL，20μL酶溶液，37℃反应15min后，加20μLPnpg（2.5mmol/L），继续37℃反应15min，80μL碳酸钠（0.2moL/L）终止反应。每次加完试剂后，谷胱甘肽、酶、pnpg保存在-4°的冰箱。样品组：样品+pbs+酶+底物+碳酸钠+谷胱甘肽 样品空白：不加底物 对照组：无样品 空白对照：无样品无底物。最终实验结果：大多数100-200-400分子比分母大，1减去后是一个负数，没抑制率。后面做了阿卡波糖阳性药物，在100-200-400也很难有抑制率，目前已经做了30次。认为操作没问题，是浓度太低没活性吗？

有做过溶酶体贮积症[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质[/color][/url]检测酶活的老师吗？最近在做这个实验，通过酶活反应将底物转化为产物，通过产物的量与酶的体积、反应时间等计算酶活。排查了不少因素，也仿照大量文献报道的酶反应剂都应用到实验中，而得到的酶活却与文献、NCBI上的阈值有一定出入，如果自己买到第三方校准品，自己根据自己的实验结果定正常人水平的酶活阈值可以吗？有哪些需要注意的吗？谢谢！

请问各位专业人士,[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Wp][color=#3333ff]原子吸收[/color][/url]测定金属元素时用的是哪些基底物质,我用的是干湿法:用硝酸溶解各种合金,滴定至50ml,然后用0.5g锌溶于盐酸定容至1000ml做为基底溶液,因为都是酸性溶液所以要排除相同酸性环境影响,想问下用其它金属元素做为基底物如Cu等,对它的含量有何明确要求,个人认为是定性的,重量根据自己需要来加入,另外如果不加基底物直接用蒸馏水是否对所测结果有影响