亚型

继不久前成功研制出快速检测甲型H1N1流感病毒试剂盒后，中国军事医学科学院军事兽医研究所又研制出一种新型基因芯片，借助这种芯片能在5小时内获得检测结果。 　　据介绍，使用这种基因芯片能够用来检测1-16种亚型甲型流感病毒，并可以对当前流行的甲型H1N1流感病毒进行特异性检测，还可以对H1、H3、H5、H7、H9亚型流感病毒进行分型检测。该检测方法可同时对12个样品进行快速、灵敏、特异性检测(阳性样品显示特异荧光)，并在3.5-5小时内获得检测结果。 　　军事兽医研究所工作人员表示，与试剂盒检测相比，基因芯片具有用时短、一次性检测样品多等优点，将为中国应对潜在疫情提供有力的技术支持。

iPSC简介2006年Takahashi和Yamanaka突破性发现使终末分化、谱系受限的成体细胞：如皮肤活检来源的成纤维细胞、外周血来源的T淋巴细胞、毛囊细胞等，通过转录因子OCT4、SOX2、KLF、c-MYC、NANOG和LIN28的强制异位表达直接将其重编程为多能状态的细胞，这些细胞被称为诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells, iPSC)。iPSC与胚胎干细胞(Embryonic Stem Cells, ESC)有相似的基因表达、表观遗传谱和分化潜能，可产生任何类型的体细胞。并且避免了ESC基于使用胚胎来源细胞和可能导致异常发育的体外受精胚胎的伦理问题，因此iPSC在医疗领域里具有更好的应用和产业化发展前景。iPSC应用和挑战描述任何人类疾病和药物发现的病因学和病理生理学的主要关键组成部分是需要一个生理相关的疾病实验模型，无论是体外还是体内或两者，需要忠实地概括各自的病理生理学和临床表现。因此基于人类iPSC的疾病模型可以无限供应临床相关的表型细胞、以及它们具有的衍生潜力，可以加速阐明生物医学研究中疾病的病因机制，应用于新药发现、药物效价测试、预测药物安全性药理学/毒理学研究，以及基于iPSC的再生细胞疗法，有望治疗心脏病、帕金森、视网膜和角膜疾病、肝脏衰竭、糖尿病、脊髓损伤等疾病。然而将iPSC治疗方法真正有效转化为临床环境，保证患者安全，还需解决：临床级iPSC的衍生和通用细胞系的生物库建立；需要定义iPSC及其差异化治疗细胞产品可接受质量属性；致瘤性问题；免疫排斥反应；选择同种异体或自体 iPSC 以获得更有效的细胞治疗的难题；iPSC 谱系表型细胞和细胞系变异的异质性；基于iPSC的多基因、散发性和迟发性疾病的患病模型的挑战；需要大量的患者iPSC以实现更有效的病因学和临床转化；iPSC衍生的表型细胞缺乏成熟度；遗传的不稳定性等挑战。iPSC-CM研究和面临的问题心血管疾病(cardiovascular disease，CVD)作为全球主要的死因之一，每年会导致约1790万人死亡，所以迫切需要可以延缓疾病进展并且可以改善心脏功能和预防衰竭的治疗方法。而目前的药物、介入或手术方法可能会改善临床结果，但由于无法促进心脏组织修复和再生，因此使这种治疗方法的成功率得不到提升。人类诱导多能干细胞(hiPSC)技术的出现以及随后在培养物中分化和建立心肌细胞（cardiomyocytes，CMs)的能力，为实现人类心脏再生疗法创造了可能性。作为分化CMs的连续和生物学相关来源，hiPSC-CM是心血管研究界的宝贵工具，不仅可用于治疗CVD，还可用于模拟人类心脏发育和疾病、研究潜在机制以及筛选具有疗效和心脏毒性的新药。由于hiPSC-CM由不同的细胞亚群组成，这些细胞亚群是异质的、未成熟的、表达胎儿基因表达谱，并且与成人心肌细胞相比收缩力减少，因此hiPSC-CM疾病模型的准确性和实用性仍然有限。此外，随着hiPSC-CMs的成熟和蛋白质表达动态的波动，大量样品分析的分辨率变得不足。由于其异质性导致心室样、心房样和节点样亚群，需要严格表征hiPSC-CM，并应对其成熟度、身份和功能进行筛选。为此，需要进行单细胞分析模式以了解这种异质性。细胞异质性研究方法虽然单细胞测序技术在分析单细胞转录组学和基因组信息的通量和规模方面取得了进步，但由于任何一个细胞中存在的蛋白质含量非常低，因此难以满足对定量、单细胞蛋白质组学技术的需求。此外，蛋白质组的复杂性和广泛的浓度范围（fM到高nM）带来了额外的挑战。为了在单细胞水平上进行生化蛋白质表征分析，高灵敏度工具是必不可少的。来自ProteinSimple的单细胞蛋白质分子技术：Milo是一种基于微流体的芯片电泳技术。可以克服单细胞蛋白质组学方法面临的障碍。Milo操作流程将细胞悬浮液加载到Milo芯片上，这样单个细胞就可以安放在芯片上的各个微孔中。然后Milo裂解细胞，产生单细胞裂解物，通过分子量电泳分离每个单细胞裂解物中的蛋白质，然后使用紫外线在Milo芯片中捕获蛋白质。然后，对目标蛋白进行一级抗体和荧光二级抗体进行免疫荧光捕获。通过使用开放格式的微阵列扫描仪对芯片进行成像，并使用Scout™ 软件对图像进行分析，以进行定量的自动数据分析。Milo追踪定量不同iPSC-CM亚型与免疫荧光和流式细胞术等其他单细胞分析系统不同，单细胞Western Blot技术Milo可以提供分子量大小信息，以及在单细胞水平测量蛋白质表达时的免疫结合信息，赋予额外的特异性。这种分子量分级步骤可以分辨不同物种的不同蛋白质亚型或区分脱靶抗体结合。为了表征CMs亚型标志物，通过Milo检测了肌球蛋白调节轻链2心房亚型（MLC2A或MYL7）及其心室亚型（MLC2V或MYL2）的蛋白质表达。可以观察到Milo鉴定了三个亚群，这些亚群由MLC2A或MLC2V的单一表达或共表达组成。Milo检测到hiPSC-CM亚型特异性心室和心房标记物MLC2V和MLC2A，在45秒的电泳运行时间内，迁移到总泳道长度的60%（图A）。使用Milo-Scout™ 软件通过找到典型峰形与源自原始荧光图像的一维强度图的卷积的局部最大值来识别峰中心。检测到的MLC2A、MLC2V和GAPDH峰的峰中心位置也由泳道指数显示（图B），显示出单个Milo芯片上所有孔的峰迁移的均匀性。为了评估芯片位置（图C）是否影响峰面积量化，比较了空间不同块之间计算的峰面积方差：每个块区域之间的差异小于2.5%（图D）。应用优化的Milo的检测方法研究hiPSC-CM随时间的异质性，观察整个分化时间线中蛋白质表达的变化。在第17、23和30天从培养物中提取hiPSC-CM细胞，检测MLC2A和MLC2V蛋白质表达。结果显示，共表达MLC2A和MLC2V阳性细胞的比例在整个分化过程中增加，而仅表达MLC2A(MYL7+)的细胞比例随时间减少。且三个亚群中每个亚群中的细胞百分比在所有芯片中一致重现。为了了解在整个分化过程中每个标记物的表达水平在hiPSC-CM亚群中的变化，在hiPSC-CM分化的第17、23和30天对MLC2V和MLC2A的表达进行了量化。随着分化的进行，MLC2A的总水平略有增加。然而，MLC2V表达在第23天和第30天之间增加了近三倍（图C）。为了了解驱动MLC2V表达增加的细胞亚群，三个亚群（MLC2A+、MLC2V+和共表达MLC2A+和MLC2V+）被进一步分层（图D）。MLC2V的水平在共表达MLC2A+和MLC2V+亚群中显着增加，以及在单独的MLC2V+亚群中增加。为了进一步了解导致hiPSC-CM分化过程中MLC2V表达显着增加的机制，对先前从三个iPSC系产生的hiPSC-CM进行了Milo分析，其中转录因子NR2F2 (NR2F2GE)、TBX5 (TBX5GE) 的外显子)和HEY2 (HEY2GE) 被CRISPR/Cas9编辑删除。利用这些品系来验证NR2F2、HEY2或TBX5缺陷在单细胞蛋白质水平上对MLC2V表达的影响。结果显示，TBX5GE和HEY2GE hiPSC-CM中MLC2V的单细胞表达显着降低（图E）。此外，MLC2V表达的显着下降归因于共表达MLC2A和MLC2V亚群（图F）。鉴于共表达MLC2A和MLC2V的亚群增加了MLC2V的表达，推测单独表达MLC2A的未成熟hiPSC-CM会随着时间的推移共同表达MLC2V，从而变得更像心室。同时使用预测调节MLC2V（HEY2或TBX5）的转录因子缺陷的两种细胞系时，我们仅观察到MLC2V在共表达MLC2A和MLC2V亚群中表达降低。这可能表明单独表达的MLC2V群体代表了一个独特的细胞亚群，并且该亚群中MLC2V的表达受替代转录因子的调节。结论：随着在基础和转化心脏研究中的应用，hiPSC-CM正被用于心血管疾病和心脏发育研究。然而，由于hiPSC-CM由不同的细胞亚群组成，并且hiPSC-CM蛋白表达动力学随着成熟而波动，一些蛋白分析方法可能因为分辨率不足而无法检测单细胞蛋白异质性，因此hiPSC-CM的单细胞蛋白质组学可能受到依赖抗体结合检测而无法评估脱靶结合技术的限制。单细胞蛋白质分析技术Milo，通过靶点分子量差异和抗体识别特异性蛋白标记物，避免了抗体脱靶结合的现象，同时能够跟踪单细胞亚群蛋白表达随时间的变化，从而能够识别并量化hiPSC-CM中不同的异质性亚群，应用于疾病建模和再生医学治疗研究。参考文献：1 Current Challenges of iPSC-Based Disease Modeling and Therapeutic Implications.2 Human induced pluripotent stem cell-derived cardiomyocytes: insights into molecular, cellular, and functional phenotypes.3 Single-cell protein expression of hiPSC-derived cardiomyocytes using Single-Cell Westerns.

许多白血病的致病机制尚不清楚，其中慢性中性粒细胞白血病（Chronic Neutrophilic leukemia）及非典型慢性髓性白血病（BCR-ABL1-negative atypical Chronic Myeloid Leukemia）的诊断通常仅仅基于粒细胞的恶性增殖，以不含有其他白血病的基因标记作为诊断标准，而缺乏对其本身驱动基因的认识。 近期在新英格兰杂志上发表的一篇文章1对这类白血病的分子机制进行的深入研究。作者对27例慢性中性粒细胞白血病以及非典型CML骨髓或血液样本进行了部分基因定向高深度测序，分析基因突变的情况，发现一个基因CSF3R的突变在这个类群病人中的尤其常见。而CSF3R基因的功能正是细胞生长因子的受体，可以刺激中性粒细胞分化和增殖，这与这类病人的临床表型一致。 同时对病人分离的肿瘤细胞进行tyrosine kinase&ndash specific small interfering RNAs 或 small-molecule kinase inhibitors筛选实验。对于突变进行体外细胞转化实验验证，并用原始细胞克隆进行药敏试验。这些实验验证了这一基因的突变改变下游信号通路，也可造成细胞的增殖。药敏试验也证实了该基因的多种突变可对不同的下游通路中的抑制剂敏感，尤其一个病人在接受相应的抑制剂治疗后临床症状得到改善。作者认为，CSF3R突变在CNL及atypical CML的常见，而在其他白血病亚型中相对罕见，可用于慢性中性粒细胞白血病及非典型慢性髓性白血病白血病分型的重要分子诊断参考。 在CSF3R基因突变的发现过程中，主要利用NimbleGen的定制型序列捕获芯片，对1683个基因的外显子序列进行富集后，再进行二代测序仪进行深度测序。突变分析结果中，这一病人群体中的59%携带CSF3R突变，可活化这一受体，突变主要分布在CSF3R的两个独立区域内，分别导致CSF3R下游的SRC family-TNK2或者JAK Kinase的活化。 图：显示不同CSF3R基因突变对于细胞通路的影响。1 随着生物技术的发展，将为越来越多疾病的致病机制探索提供更加有效地手段，其中之一是利用高深度的定向测序方法寻找疾病相关基因。通过NimbleGen序列捕获芯片，可对人类全外显子组序列，或者所感兴趣的部分基因进行高效富集，衔接二代测序，可以更加经济有效地进行研究工作，同时也减少的数据分析的压力，这方法已经为国内外越来越多的研究人员所采用。 1.Oncogenic CSF3R mutations in chronic neutrophilic leukemia and atypical CML. Maxson JE, Gotlib J, Pollyea DA, Fleischman AG, Agarwal A, Eide CA, Bottomly D, Wilmot B, McWeeney SK, Tognon CE, Pond JB, Collins RH, Goueli B, Oh ST,Deininger MW, Chang BH, Loriaux MM, Druker BJ, Tyner JW.N Engl J Med. 2013 May 9 368(19):1781-90. doi: 10.1056/NEJMoa1214514.

各有关单位：根据《团体标准管理规定》和《云南省实用新技术协会团体标准管理办法》的相关规定，由云南省畜牧兽医科学院申报的《禽流感病毒H5、H7、H9亚型多重实时荧光定量RT-PCR检测方法》团体标准提案，经审核符合立项条件，同意立项。请各起草单位按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》、《云南省实用新技术协会团体标准管理办法》有关要求，严格把控标准质量关，切实提高标准制定的质量和水平，增加标准的适用性、实效性和创新性，按期完成标准编制的相关工作。联系人：云南省实用新技术协会标准化工作部 李君 电话0871-65862852 15987195358 邮箱：ynsyxjs001@163.com地址：昆明市五华区小康大道德润中心B座1913 云南省实用新技术协会2023年6月30日禽流感病毒H5、H7、H9亚型多重荧光定量RT-PCR检测方法立项文件.pdf

一、项目基本情况项目编号：N5120012023000052项目名称：亚行项目中国牙谷科创园公共研发孵化中心实验室建设采购方式：公开招标预算金额：49,447,660.00元采购需求：详见采购需求附件合同履行期限：采购包1：自合同签订之日起210日本项目是否接受联合体投标：采购包1：接受联合体投标二、获取招标文件时间：2023年05月18日至2023年06月15日，每天上午00:00:00至12:00:00，下午12:00:00至23:59:59（北京时间）途径：项目电子化交易系统-投标（响应）管理-未获取采购文件中选择本项目获取招标文件方式：在线获取售价：0元三、对本次招标提出询问，请按以下方式联系。1.采购人信息名称：资阳高新技术产业园区管理委员会地址：四川省资阳市雁江区现代大道二段联系方式：137789826612.采购代理机构信息名称：中仪国际招标有限公司地址：北京丰台区西营街1号院通用时代中心C座8楼810联系方式：010-81168424、010-811691073.项目联系方式项目联系人：张经理、单经理电话：010-81168424、010-81169107

p style=" text-align: left line-height: 1.5em text-indent: 2em margin-bottom: 10px " & nbsp EBV (Epstein–Barr virus)感染在世界各地普遍存在，它与鼻咽癌在内的多种癌症的发生发展相关，其中就包括鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma，NPC)。但EBV病毒基因变异在NPC病程发展及其在华南地区广泛流行中的重要作用尚不清楚。来自中山大学、新加坡基因组研究院等单位的研究团队通过对270个EBV分离株进行大规模全基因组测序和关联分析，成功鉴定BALF2基因上的两个非同义突变SNP与华南地区鼻咽癌高风险相关，与83%华南地区鼻咽癌高风险人群有关，对于鼻咽癌的早期发现和预防具有重大意义，该成果于2019年6月17日发表在顶级期刊《Nature Genetics》上。 /p p style=" text-align: center line-height: 1.5em text-indent: 0em margin-bottom: 10px " span id=" _baidu_bookmark_start_142" style=" line-height: 0px display: none " ? /span span id=" _baidu_bookmark_start_148" style=" line-height: 0px display: none " ? /span /p p style=" text-align: center " img width=" 600" height=" 311" title=" 微信图片_20190620094717.jpg" style=" width: 600px height: 311px max-height: 100% max-width: 100% " alt=" 微信图片_20190620094717.jpg" src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201906/uepic/cc70be6e-b209-4619-8b19-f58af5cab939.jpg" border=" 0" vspace=" 0" / /p p style=" line-height: 1.5em margin-bottom: 10px " 　　值得一提的是， Agena MassARRAY核酸质谱技术作为验证性技术参与了该项研究，在全基因组测序结果验证和全基因组关联分析发现的重要SNP扩大样品验证中起着举足轻重的作用，接下来请跟随小编一探究竟吧。 /p p style=" line-height: 1.5em margin-bottom: 10px " 　　一、EVB全基因组测序及结果验证 /p p style=" line-height: 1.5em margin-bottom: 10px " 　　作者通过高通量测序技术对270个EBV分离株进行了全基因组测序，并通过不同的技术对测序结果及变异calling准确性进行了验证，结果显示，Agena MassARRAY与WGS结果的一致性最高，达99.99%。 /p p style=" text-align: center line-height: 1.5em text-indent: 0em margin-bottom: 10px " /p p style=" text-align: center " img width=" 600" height=" 272" title=" 转载1.jpg" style=" width: 600px height: 272px max-height: 100% max-width: 100% " alt=" 转载1.jpg" src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201906/uepic/0311ad5d-f4a2-49c1-a1e0-3585a0f2b807.jpg" border=" 0" vspace=" 0" / /p p style=" line-height: 1.5em margin-bottom: 10px " 　　二、SNP与鼻咽癌全基因组关联分析 /p p style=" line-height: 1.5em margin-bottom: 10px " 　　作者从270个分离株中选取了203株(Case ：156，Control：47)来自鼻咽癌高发区的广东、广西两地的病人及健康对照，通过multi-SNP对全基因组测序结果进行分析，发现了3个具有显著差异的SNP位点，分别为162215C& gt A，SNP162476T& gt C和SNP163364C& gt T，并通用MassARRAY在扩大样品中进行验证。　 /p p style=" text-align: center " & nbsp span id=" _baidu_bookmark_start_119" style=" line-height: 0px display: none " ? /span /p p style=" text-align: center " img width=" 600" height=" 313" title=" 2.jpg" style=" width: 600px height: 313px max-height: 100% max-width: 100% " alt=" 2.jpg" src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201906/uepic/cc8bfc6b-acfa-4df8-8595-63d5527c608e.jpg" border=" 0" vspace=" 0" / /p p style=" text-align: center line-height: 1.5em margin-bottom: 10px " & nbsp /p p style=" line-height: 1.5em margin-bottom: 10px " 　　结果展示：通过 EBV变异体全基因组关联分析鉴定的3个与鼻咽癌高风险相关SNP /p p style=" text-align: center " img title=" 3.jpg" style=" max-height: 100% max-width: 100% " alt=" 3.jpg" src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201906/uepic/9942c0d2-fd43-4ac4-8962-9f5b0ec7e915.jpg" / /p p style=" line-height: 1.5em margin-bottom: 10px " 　　这些鼻咽癌高危型EBV毒株的发现对减少NPC的发生可能具有非常重要的理论和应用价值，特别是在华南地区的NPC高发区，通过检测这些EBV高危亚型能够更早识别出高危个体，以便有针对性地尽早实施常规临床监测，尽早发现鼻咽癌，通过开发针对高危EBV突变体毒株的疫苗，有望在华南地区大大减少癌症的发病率。 /p

人类大多数肿瘤是异质性的，由具有不同性质的细胞克隆组成，呈现出不同的特点。高度异质性肿瘤具有较差的临床疗效，但其潜在机制仍不清楚。肿瘤的转移性是大多数癌症患者死亡的原因。因此，了解转移进程的驱动因子是改善临床结果的关键。癌症基因组测序研究已经确定了原发性和转移性肿瘤之间具有极小的遗传差异，并显示原位肿瘤和远处转移病灶具有显著的亚克隆异质性。最近的一些研究表明：微观环境变化是肿瘤转移传播和生长的主要媒介，从而突出了在肿瘤进展中的非细胞自发因子的作用。本期IVIS视角小编带您探究一下Nature最近发表的论文：《亚克隆合作通过修饰局部和全身的免疫微观环境驱动肿瘤转移》本文揭示了表达IL11和FIGF (VEGFD)的乳腺癌细胞的小亚克隆协同作用促进转移进展并产生了驱动性和中性亚克隆组成的多克隆转移。单克隆、多克隆原发灶和转移灶的上皮细胞及基质细胞表达谱分析显示了这种协同作用是间接的，是通过局部和系统微环境介导的。作者确定中性粒细胞为主的白细胞群受表达IL11小亚克隆的调节，敲除中性粒细胞的表达，可以阻止肿瘤转移的生长。来自原发性肿瘤、血液和肺的CD45阳性细胞群的单细胞RNA-seq显示IL11作用于骨髓间充质基质细胞，可诱导产生致瘤性和转移性中性粒细胞前体。本文结合IVIS活体成像系统研究发现了非细胞自发因子和小亚克隆在肿瘤转移中起着关键作用。探究驱动转移的亚克隆协同作用分子机制本文用人类乳腺癌细胞系(MDAMB-468)的肿瘤（来源于异质性肿瘤异种移植模型），研究亚克隆在肿瘤表型之间的相互作用。作者之前已经证实一个小的亚克隆通过非细胞自主的相互作用可以驱动肿瘤生长。本文测试了18个亚克隆，每一种表达一种与转移和血管再生有关的分泌蛋白。并发现具有全部18个亚克隆的多克隆肿瘤生长最快（上图a）。相反只有白细胞介素11 (IL11) 和趋化因子 (C-C motif) 配体5在单克隆肿瘤能够促进肿瘤生长。我们还确定了表达IL11和低聚果糖诱导生长因子（FIGF也被称为VEGFD）的亚克隆两者的混合物在很大程度上能够复制肿瘤这种生长特点。克隆之间合作导致多克隆转移Nature Cell Biology :Published: 01 July 2019https://www.nature.com/articles/s41556-019-0346-xIL11缺失的多克隆肿瘤阻止了肿瘤的生长，揭示了IL11和FIGF因子在肿瘤生长中的协同作用。此外，多克隆肿瘤和仅包括IL11和FIGF亚克隆的肿瘤具有高度的转移性（上图b）。本文首先验证含有IL11+和FIGF+驱动因子的原发性转移瘤MDA-MB-468的克隆能力，像中性子亚克隆。单克隆或绿色荧光蛋白 (GFP)的多克隆混合物荧光素酶表达亲本细胞，红色荧光蛋白 (RFP)植入v5标记的IL11+细胞、RFP+FIGF+细胞植入到免疫缺陷NOG小鼠的乳腺脂肪垫。我们每周用卡尺测量原发肿瘤的生长情况并通过每周生物发光观察转移病灶成像。多克隆肿瘤（含5% IL11+、5%的FIGF+RFP+细胞和90%的GFP+亲本细胞）生长较快，转移性更强与单克隆和亲本肿瘤相比（如下图a）。中性粒细胞的系统性表达降低抑制了由IL11+和FIGF+亚克隆驱动的多克隆肿瘤的转移扩散(或生长)，因此，中性粒细胞的表型和功能特点取决于宿主环境。CD45+细胞群的单细胞分析鉴于作者之前的结果表明，中性粒细胞促进肿瘤转移。作者比较了DOX+或DOX-诱导小鼠血液和肺中性粒细胞单细胞转录组特点。IL11和FIGF诱导上调了几个信号通路如：TGFβ和JAK-STAT信号通路，它们与中性粒细胞的免疫系统中肿瘤预生成和预转移有关，这些特征来自肺部，而不是来自血液。尽管中性粒细胞在肺部有变化，作者通过single-cell RNA-seq没有检测到IL11或GIGF受体的表达。然而，IL11RA的细胞转录本在单独的细胞组中明显存在，这些细胞不能归为中性粒细胞或其他白细胞亚群。这些IL11RA阳性细胞表达编码GP130和SATA3的IL6ST基因，GP130是IL11信号通路中所必需的共同受体。STAT3是LI11下游的作用因子。基于细胞群中基因表达情况，其中还包括细胞外基质和发育相关蛋白，作者将该群体标记为和IL11反应的间充质基质细胞 (MStrCs)。虽然这个群体没有表达典型的间充质干细胞 (MSC)标记物，但其表现了普遍存在于干细胞相关基因的显著特征，这表明它可能是一种未特征化的间充质干细胞前体。之前的研究已经描述过间充质干细胞与白细胞之间的相互作用由多种细胞因子和趋化因子调节的。在本文的研究中，作者着重于研究两个分泌因子，选择的基础是基于作者之前的数据，它是由较小的亚克隆表达的且协同作用促进转移。IL11属于IL6家族的细胞因子，并在多种癌症的耐药性进展中起着重要的作用，包括前列腺癌和结肠癌。在乳腺癌中，IL11被认为和治疗的耐药性和骨转移相关，以及作为不良预后的标志物。FIGF是VEGFR2和VEGFR3的配体，可以刺激血管生成和淋巴管生成。本文发现白细胞可能不是IL11直接作用的细胞靶点，但可通过间充质基质细胞分泌因子（MStrCs）间接影响IL11。有趣的是，这些基质细胞也表达PLXDC2和ANTXR1，这在肿瘤相关的内皮细胞中是高表达的。因此，这些IL11RA阳性的间充质基质细胞可能是产生多种细胞类型的祖细胞。对中性粒细胞亚型的进一步认识和开发导致肿瘤转移的中性粒细胞靶向工具结合抗肿瘤细胞靶点的药物，有可能被用于预防乳腺癌转移研究。PerkinElmer IVIS小动物活体成像系统在该研究中提供了支持，如需了解详情欢迎与我们的工程师取得联系。点击链接了解IVIS小动物活体成像系统：https://url.cn/5fSl2r4关于珀金埃尔默：珀金埃尔默致力于为创建更健康的世界而持续创新。我们为诊断、生命科学、食品及应用市场推出独特的解决方案，助力科学家、研究人员和临床医生解决最棘手的科学和医疗难题。凭借深厚的市场了解和技术专长，我们助力客户更早地获得更准确的洞见。在全球，我们拥有12500名专业技术人员，服务于150多个国家，时刻专注于帮助客户打造更健康的家庭，改善人类生活质量。2018年，珀金埃尔默年营收达到约28亿美元，为标准普尔500指数中的一员，纽交所上市代号1-877-PKI-NYSE。了解更多有关珀金埃尔默的信息，请访问www.perkinelmer.com.cn。

中新网4月27日电 世界卫生组织25日宣布，墨美两国的猪流感疫情已构成“国际关注的公共卫生紧急事态”，所有国家应加强监控非正常爆发的流感类疾病和严重肺炎。香港《文汇报》27日报道称，目前猪流感有向世界各地扩散迹象，亚太区、欧洲以至中东均出现怀疑病例，10名新西兰中学生最近到墨西哥游学回国后不适，检验后证实对流感病毒呈阳性反应，可能感染猪流感。 　　世卫组织在声明中说，根据应对猪流感疫情紧急委员会的提议，世卫组织总干事陈冯富珍已确定目前的情况构成“国际关注的公共卫生紧急事态”，她因此建议各国加强对非正常爆发的流感类疾病和严重肺炎的监控。理论上，世卫将就旅游、贸易限制和关闭边境发出不具约束力的建议。 　　不过，世卫组织紧急委员会尚不能确定是否应调整目前的流感大流行“三级警告”水平，需要收集更多信息。世卫组织的流感大流行警告共分六级，“三级警告”意味着一种新的亚型流感病毒正在使人发病，但还没有发展到在人与人之间有效和持续扩散。 　　新西兰10师生疑游学中招 　　新西兰卫生部长赖亚尔26日称，来自奥克兰朗伊托托学院一个墨西哥游学团，25日回国后有13名学生和一名老师出现疑似流感征状，需在家中隔离接受检测，其中一人病情较严重，曾送院治疗，现已出院。测试结果证实10名学生对甲型流感病毒呈阳性反应，而猪流感正是甲型流感其中一种。 　　赖亚尔说：“这些学生尚未证实感染猪流感，但有这个可能。他们当中无人病情严重，大部分都逐渐康复。”受感染学生的样本已被送往澳洲墨尔本的世卫实验室，作进一步测试。 　　朗伊托托学院校长霍奇称，该校22名介乎15至18岁的高年级学生和3名老师，早前到访墨西哥3星期，大部分时间留在墨西哥城进行西班牙语游学行程。当地传媒报道，奥克兰另一中学也有学生刚从墨西哥回国，但无出现不适。

我是Omicron，中文名奥密克戎病毒，来自南非的新变种，都听说了吧，如果你没听过我的名号，你可能就有点out了。图源：网络，侵删全球各地都有我的身影，国内呢，我正在香港、深圳、苏州等地晃悠，人类给我总结的特点就是快，传播快呀~图源：网络，侵删听说新冠自2019年末被发现至今已累计感染超4亿人，新冠达到1亿确诊时是在2021年1月，之后只用了7个月就达到2亿，而翻倍达到4亿则只用了6个月，特别是3亿到4亿只用了1个多月的时间。这主要归因于我奥密克戎变异株的高传染性和快速传播性。图源：网络，侵删根据新冠病毒数据库GISAID目前共享的信息显示，我奥密克戎变异株的突变位点数量明显多于近2年流行的所有新冠病毒变异株，而最近的感染分析发现，奥密克戎毒株现有感染中也出现了进一步变异的分支亚型，带R346K变异的BA.1和BA.2。BA.1+ R346K亚型占现今全球奥密克戎序列的约40%，在新西兰、英国和美国这一比例则为35-60%。BA.2亚型占全球奥密克戎序列的约10%，其流行率正在上升，并且在丹麦、印度和南非已占主导地位。我和之前的新冠病毒相比已经改变得面目全非。图源：网络，侵删通过人们的研究，对不同分支亚型的治疗分析发现，同属奥密克戎的不同亚型对不同中和抗体的反应也并不相同。谢晓亮团队在《nature》的文章表明，奥密克戎RBD上的单个突变会影响不同类别抗体的有效性（该文章筛选了247种人类抗体，且将其分为6类）。例如，奥密克戎可利用突变K417N、G446S、E484A和Q439R逃逸A类至D类的抗体，这些抗体的表位与ACE2结合基序有重叠。Davide Corti团队在《nature》发表的文章也表明奥密克戎免疫逃逸能力或强于之前新冠病毒谱系，研究中测试的8种治疗性单克隆抗体中，大部分完全失去了对奥密克戎的中和活性，扩大筛选范围后，入选的36种中和抗体，只有6种对奥密克戎依然具有强效的中和活性，而在29种靶向RBD特定区域（受体结合基序）的单克隆抗体中，有26种对奥密克戎的中和活性出现了显著下降。这些结果都提示我们，未来对新冠病毒的分型将是一个非常重要的工作，不但会影响我们的疫情防控工作，也会影响到我们针对新冠肺炎治疗药物的研发和不同患者的针对性治疗。我的秘密被暴露了，好像找到了方法对付我。图源：网络，侵删让我看看是啥方法~原来是naica® 微滴芯片数字PCR一次快速鉴别Omicron新冠病毒变异株刺突（Spike）蛋白6个突变位点，并实现绝对定量，获得鉴定和监控。应用亮点：▶ 6个核心突变位点快速检测。▶ 可视化微滴溯源单个阳性微滴，确保结果真实可靠。▶ 阳性微滴定性分析，同时给出定值，便于监测监控。(翻译成中国话就是：检测位点多、灵敏、还能监控我~）方法描述：试剂：Omicron（奥密克戎）新冠病毒变异株鉴定试剂盒（珠海辉睿公司）仪器：naica® 微滴芯片数字PCR系统（北京深蓝云生物科技有限公司）数据分析：数字PCR通过阳性微滴直接判读阳性结果。▲ 图1：阈值判读直观阳性位点扩增明确这样奥密克戎很容易就分型了。图源：网络，侵删新冠病毒已在全球肆虐了2年多的时间，且仍处于不断变异过程中，随着人们对其认识更加深入，人们对其危害的认知也越来越清晰，各种后遗症的发现，各种新出现亚型不断挑战疫苗和治疗手段组成的防线。我们是否应该针对病毒不同亚型展开更有针对性的治疗方案研究？我们是否应该针对病毒不同亚型的感染特点采取更加有效的防控措施？我们是否应该针对感染进行更精细化，更个人化的分析和治疗？

近日，湖南大学谭蔚泓院士团队与浙江大学医学院附属第一医院黄河教授团队开发了一种基于核酸适体的质谱流式技术，用于单细胞的细胞表面蛋白分析，旨在为疾病的精准分子分型提供一个新的平台技术。该方法不仅能够实现培养细胞的分子分型和分类，还能结合机器学习，实现临床样本亚型的分类。该方法极大地扩展了核酸适体的应用领域，并为疾病的分类和诊断提供了新方法。　　背景介绍：　　高度异质性是恶性肿瘤的重要特征，同一疾病的不同亚型可能对临床治疗有着完全不同的反应。因此，疾病的精准分子分型对其诊疗研究具有重要意义。虽然基因组测序和转录组测序已经成为最常用的分类策略，但它们无法提供蛋白质的表型和功能数据。单细胞水平的膜蛋白分析将为疾病分型提供重要信息。流式细胞术提供了高通量的单细胞测量技术。然而，由于荧光光谱重叠问题，限制了荧光流式细胞术的多元分析能力。质谱流式作为一种先进的替代方法，具有信号重叠小和细胞背景噪声低等优点，已展现出在一次实验中同步测量超过40个细胞参数的能力。尽管质谱流式技术在多路复用单细胞分析中的巨大潜力，但其在肿瘤分类中的潜力受到识别探针种类不足的限制。　　核酸适体作为一种新型的识别配体，具有特异性高、合成简单、免疫原性低、修饰方便等优势。此外，以完整的活细胞为筛选对象，可以通过Cell-SELEX（指数富集配体进化技术）获得大量能够特异性识别细胞膜蛋白标志物的核酸适体。　　本文亮点：　　基于以上研究背景，湖南大学谭蔚泓院士团队联合浙江大学医学院附属第一医院黄河教授团队设计、合成了一种由二乙烯三胺五乙酸（DTPA）基元组成的聚合物，用于螯合多个金属离子。然后，选择了一系列识别不同细胞表面生物标志物的核酸适体，每个适体分别与螯合了不同金属离子的聚合物偶联（Apt-MICP）。最后，评估了基于Apt-MICP的细胞表面蛋白分析在培养细胞和临床样本中用于血液恶性肿瘤（HM）精确分类的潜力（图1）。图1. 基于核酸适体的质谱流式分析技术用于血液恶性肿瘤的分子分型作者首先对聚合物进行了设计与合成，并通过点击化学将其与核酸适体相连（图2a）。利用琼脂糖凝胶电泳和高效液相色谱对产物进行表征，证明了sgc8c-MICP的成功合成（图2b，c）。同时，在核酸适体上修饰上荧光基团，利用荧光流式验证了sgc8c-MICP仍然能够靶向CEM细胞，而不会结合Ramos细胞（图2d，e）。图2. sgc8c-MICP的合成与表征　　在证明了该策略的有效性之后，作者挑选了15条相关的核酸适体，将其连接上螯合了不同金属离子的聚合物，得到15条Apt-MICP。将15条核酸适体联用，依次对8种血液恶性肿瘤细胞系进行结合，通过质谱流式进行分析。将得到的结果进行归一化，并用热图进行展示（图3a）。利用viSNE降维分析方法对分型结果进行分析，实现8种细胞的区分（图3b）。结合无监督的主成分分析方法，实现血液恶性肿瘤细胞系更精确的区分（图3c）。图3. 血液恶性肿瘤细胞系的细胞表面特征分析及分类　　利用上述合成的15条Apt-MICP，结合五种相关的抗体，实现了31例血液恶性肿瘤临床样本（包括AML、ALL、B淋巴瘤以及CML四种亚型）的分子分型（图4a）。由于临床样本的异质性高，作者利用机器学习的方法进行PLS-DA建模，并成功将四种亚型的样本区分开来（图4b），总体准确率达到了100%（图4c）。图4. 临床样本训练集的分子分型和分类　　为了进一步验证该模型的有效性，作者又收集了15例临床样本，得到了分子图谱（图5a）。将分型结果输入到模型当中，实现对每个样本亚型的判定，总体准确率达到了80%（图5b）。图5. 临床样本测试集的分子分型和分类　　总结与展望：　　综上所述，该研究开发了一个基于核酸适体的质谱流式检测平台，用于精确的癌症分类。作者合成了一系列核酸适体-金属标签探针，并证明了它们在细胞类型特异性结合以及质谱流式检测方面的良好性能。通过用15个核酸适体探针分析细胞表面特征，可以很好地区分8个HM细胞系。此外，通过结合机器学习（PLS-DA），对HM临床样本的四个亚型构建了一个高质量的分类模型，在训练集中分类总准确率为100%，在测试集中分类总准确率为80%。基于这些结果，基于核酸适体的质谱流式平台有望在其他疾病的分类和诊断中得到广泛应用。该工作以Research Article的形式发表在CCS Chemistry。

人肾上腺素受体是G蛋白偶联受体，是重要的药物靶标。目前已知肾上腺素受体有三类（α1, α2和β）九种亚型（α1A, α1B, α1D, α2A, α2B, α2C, β1, β2和β3）。2007年，β2肾上腺素受体的非激活这是第一个人源G蛋白偶联受体的晶体结构，是G蛋白偶联受体结构解析的重大突破。2011年，β2肾上腺素受体和G蛋白的复合物结构获得解析，该工作获得了2012年诺贝尔化学奖。这些结构的解析极大地推动了人们对G蛋白偶联受体（特别是β肾上腺素受体）机理的理解。然而，三类肾上腺素受体偶联的G蛋白不同：α1, α2和β类分别偶联Gq、Gi和Gs。通过序列比对，也可以发现三类受体的配体结合口袋也有明显区别。对肾上腺素受体下游信号选择的多样性以及配体的亚型选择性的理解，一直受制于缺乏α类受体的三维精细结构。2019年12月3日，上海科技大学赵素文和钟桂生课题组在Cell Reports上共同发表两篇论文，报道了两个α类受体的三个晶体结构，阐释了肾上腺素受体多样性和配体特异性的机理。在“Structural Basis of the Diversity of Adrenergic Receptors”一文中，作者通过解析α2A受体与部分激动剂和抑制剂的复合物结构，辅助细胞信号实验和计算生物学，分析阐明了在肾上腺素受体家族中序列多样性是如何导致功能多样性的。α2A受体的两个结构整体非常相似，而配体结合口袋的多个残基（包括在肾上腺素受体中不保守的F4127.39）则发生了剧烈的构象变化。通过观察结构和突变实验，研究人员解释了影响配体选择性的重要氨基酸F4127.39的功能：F4127.39是配体结构口袋的“盖子”，它与口袋中的另外三个芳香氨基酸一起形成了一个芳香笼来结合配体中的正电基团，使配体结合时空间和能量效应俱佳。突变F4127.39会使α2A受体的完全激动剂和部分激动剂均丧失效力。α2A受体具有双重药理学效应：激动剂浓度较低时，α2A受体主要和Gi偶联；激动剂浓度较高时，与GS的偶联占据更主导的地位。相应地，在临床中，α2A受体部分激动剂的效果比完全激动剂要好，如用于降压的可乐定(Clonidine)和用于ICU镇静（在我国也广泛用于手术麻醉）的右美托咪定(Dexmedetomidine)都是α2A受体的部分激动剂。为了更好地理解α2A受体的部分激活性(partialagonism)，研究人员对多个已知的α2A受体完全激动剂和部分激动剂进行了分子对接，他们发现可以用配体与Y3946.55形成氢键与否，来区分α2A受体的部分激动剂和完全激动剂。作者还发现了三个氨基酸（Y3946.55，I13934.51和K14434.56，第一个位于配体结合口袋，后两个位于G蛋白结合口袋）对α2A受体的G蛋白选择性具有重要作用。精心设计的三个突变体Y3946.55N，I13934.51A和K14434.56A，在细胞信号实验中对部分激动剂的刺激均表现出Gi通路的偏好性，而Gs通路的活性遭到削弱甚至完全被抑制。图1：α2A受体中对配体结合（紫色）和G蛋白通路偏好性（红色）起关键作用的残基而在“Molecular mechanism for ligand recognition and subtype selectivity of α2C adrenergic receptor”文章中，作者展示了α2C受体的三维结构，并通过分子对接、功能实验等手段揭示了α2亚型受体的结构特异性，为相关药物研发提供了分子基础。通过将α2C受体与α2A受体的结构进行对比和巧妙的嵌合体设计，作者发现α2C与α2A的结构主要差异存在于胞外域。在α2C受体口袋边沿，D206ECL2-R409ECL3-Y4056.58形成氢键-盐桥互作网络，特异地影响了α2C受体选择性拮抗剂JP1302和OPC-28326的作用。而在α2A受体口袋上方，由Y98ECL1、R187ECL2、E189ECL2和R4057.32形成的互作网络直接遮盖了部分入口，使得JP1302和OPC-28326这些较大的分子可能被阻挡在外。细胞信号实验结果也显示，破坏Y98ECL1-R187ECL2-E189ECL2-R4057.32互作网络并添加D206ECL2-R409ECL3-Y4056.58相互作用得到的α2A嵌合体对JP1302和OPC-28326有着很好响应。图2：α2CAR-RS79948复合物的结构和决定α2肾上腺素受体亚型选择性的胞外域这两篇文章很好地阐述了肾上腺素受体的多样性和α2受体的配体选择性，为基于精细三维结构的下一代α2受体药物开发奠定了基础。在这两篇论文中，均使用珀金埃尔默的EnVision微孔板检测仪对GPCR的cAMP实验进行定量测定。同时，在α2受体的配体结合实验中，珀金埃尔默提供了从放射性受体拮抗剂、耗材(UniFilter GF/B)到放射性微孔板检测仪MicroBeta的整体解决方案。珀金埃尔默为中国科学家药物研发加油助力。扫描下方二维码，或点击文末“阅读原文”，即可查看论文原文。

导读在女性恶性肿瘤中，宫颈癌的发病率仅次于乳腺癌，而大多数宫颈癌是由人乳头瘤病毒(HPV)感染所致。目前已分离出的HPV达100多型，其中至少14型可导致宫颈癌或其他恶性肿瘤。全球范围内，大多数的宫颈癌中可测出高危型HPVl6和18亚型，其中HPV16亚型诱发癌变的潜力最大。东西分析基于飞行时间质谱技术平台成功开发出40多种HPV分型的应用方案，为临床提供早期宫颈癌的精准诊断，并为治疗提供准确的参考建议。人乳头瘤病毒(HPV)，是一种乳头瘤空泡病毒，女性患病率通常高于男性。部分类型的HPV感染是宫颈癌的高危因素。感染后主要累及人体的皮肤和黏膜，可分为低危型和高危型。高危致癌型HPV分布于α属第5,6,7,9,11五个种。高危型HPV感染是宫颈癌、口腔癌、直肠癌、食道癌等恶性疾病的危险因素之一。而在在女性恶性肿瘤中，宫颈癌的发病率仅次于乳腺癌，大多数宫颈癌是由HPV感染所致。已分离出的HPV达100多型，其中至少14型可导致宫颈癌或其他恶性肿瘤。全球范围内，大多数的宫颈癌中可测出高危型HPVl6和18亚型，其中HPV16亚型诱发癌变的潜力最大。HPV基因分型检测的意义HPV的感染在治疗前后，可能存在型别的差异，这可以作为医生治疗效果的评估指标；连续两次HPV分型检测显示单一型别的高危亚型的感染，显示宫颈癌发生的可能性增大；HPV的感染在不同的地区，占主要地位的型别有所不同，分型检测有利对于各地研究、使用疫苗进行HPV感染的预防控制。因此，HPV基因分型检测能够：确认感染危险程度 极高危型HPV16型感染会在几年内发展为宫颈上皮内瘤变三级（CIN3）+至浸润性癌，而非致癌型HPV61的感染，持续很长时间也不会发展为癌。确认是否持续感染高危型持续感染是导致宫颈癌的最主要因素。大多数HPV感染在1-2年内可清除，当间隔一年以上、连续两次以上检测出同一种或组HPV基因型时，被认为是持续性感染。若第一次HPV检测结果阳性，很难确定感染的时间。从感染HPV到发生宫颈癌最少需要8-10年的潜伏时间，连续检测可以有效避免错过治疗纠正的机会。识别传染源人所感染的HPV与感染源的基因型相同。可以使用安全措施及共同治疗和检测进行，有助于持续性感染纠正。疫苗接种指导 只要没有感染疫苗覆盖的类型，接种都是有益的。目前HPV 技术检测面临的问题L1靶标基因整合后脱落漏检现有的技术平台，几乎所有的HPV检测产品均以L1为靶点。无法避免病毒进入细胞后从游离态变为整合态，L1基因脱落，导致恶变样本漏检。动态范围窄，高危低载量出现漏检以目测法和荧光法定性的检测，动态范围窄。当多基因型混合感染时，无法检出高危低载量HPV病毒，导致高危致癌型漏检。致癌高中危型未全覆盖，造成漏检目前试剂盒无法同时检测IARC在2012年提出的2B类以上27个致癌HPV基因型，从而导致中危致癌型漏检。应用核酸质谱技术进行人乳头瘤病毒(HPV)分型检测的优势对高危型采用致癌基因E6，极高危HPV 16/18型采用E6/L1双基因，从而避免病毒基因整合造成的假阴性，能够最大限度避免出现漏检；高灵敏度：可扫描超过40种HPV基因型。特异性PCR扩增+探针单碱基标记，以分子量分型，灵敏度达个位拷贝，超宽动态范围超过9个数量级。能够防交叉反应以及防扩增污染，从而有效避免假阳性。高通量：每天可检测上千个样本。东西分析经过多年的开发，基于飞行时间质谱技术平台成功开发出40多种HPV分型的应用方案---能够同时快速检测出超过20种高危和低危致癌及常见致疣HPV型以及超过20种可能致癌和低危致疣HPV型。能够有效避免恶变样本漏检和假阳性，从而为临床提供早期宫颈癌的精准诊断，并为治疗提供准确的参考建议。Ebio Reader 3700 Plus飞行时间质谱仪操作简单无需复杂的样品前处理。性能稳定长寿命固体激光器；飞行管随环境温度、湿度的变化小，保证检测的稳定 ；高效网筛离子源，提高仪器的灵敏度 ；PIE高压脉冲电源控制，实现离子的延迟推斥，提高整体仪器的分辨能力。软件智能基于神经网络聚合分类法的人工智能软件；拥有强大数据库，实现对菌种的实时鉴定；具备聚类分析功能，可进行T-test等数据分析；具有自建库功能，可根据用户实际情况建立自有菌种库 ；可根据用户具体需求，进行相应升级，用于疾病蛋白标志物和核酸基因分型的检测。应用范围广广泛用于临床、疾控、食品安全、农业、工业、出入境检疫等领域。往期回顾BREAK AWAY核酸质谱之漫话一：什么是核酸质谱核酸质谱之漫话二： 核酸质谱法鉴定结核病及其耐药性

自2020年首款国产HPV疫苗正式上市以来，全国多地发布HPV疫苗接种政策。2020年8月，鄂尔多斯市率先在准格尔旗为全旗近万名13周岁以上中小学在校女学生免费接种二价HPV疫苗。2021年，济南、成都、广东、江苏、河北、浙江等地相继发布相关政策，启动适龄女孩HPV疫苗免费接种。2022年海南省将为全省7.1万在校适龄女生免费接种HPV疫苗，成为全国第一个在全省范围内推行适龄女生免费HPV疫苗接种的省份。HPV感染的预防为何受到如此重视？HPV（human papilloma virus），即人乳头瘤病毒，属于乳多空病毒科乳头瘤空泡病毒A属，是球形DNA病毒，能引起人体皮肤黏膜的鳞状上皮增殖。症状表现为寻常疣、生殖器疣（尖锐湿疣）。在女性恶性肿瘤中，宫颈癌的发病率仅次于乳腺癌，而大多数宫颈癌是由HPV感染所致。目前已分离出的HPV达100多型，其中至少14型可导致宫颈癌或其他恶性肿瘤。全球范围内，大多数的宫颈癌中可测出高危型HPVl6和18亚型，其中HPV16亚型诱发癌变的潜力最大。低危型HPV6和11亚型则与绝大多数生殖器尖锐湿疣和几乎所有复发性呼吸道乳头状瘤相关。WHO2018年发布，全球宫颈癌发病率为每10万人中有约13人患病，死亡率为每10万人中有约7人因宫颈癌死亡，2018年全球新发宫颈癌病例约56.9万例，死亡病例约31.1万例。同时，全球的数据表明新发宫颈癌的平均发病年龄降低，有年轻化的趋势。由此可见，HPV感染的筛查与预防对女性健康至关重要！禾信仪器解决方案禾信仪器2021年推出基于MALDI-TOF技术平台的全自动核酸质谱检测系统NucMass 2000，可用于多点位、多种病毒同时检测，非常适用于HPV的快速分型检测。核酸质谱是将PCR（聚合酶链式反应）、单碱基延伸技术与质谱技术相结合的一种基因快速分型检测方法，其检测HPV的原理是，首先通过PCR引物对含待检SNP的目标片段进行扩增；然后在反应液中加入SNP延伸引物，根据不同的SNP模板可得到不同的延伸产物；最后，反应液与基质在靶板上结晶，进行质谱检测并得到图谱。由于各延伸产物分子量不同，因此可以在各自的分子量位置查看是否出现检测峰，然后判断该样品的SNP分型。禾信仪器提供专业化的HPV核酸质谱检测成品试剂盒，配合NucMass 2000核酸质谱检测系统，可实现一个孔位同时鉴定20种HPV分型类别，多结果互不干扰。每个样本只需约100nL的延伸产物溶液即可完成鉴定分型。专用分析软件软件囊括引物信息、孔位布局、分型检测、分型分析四大功能与一体，直接给出分型结果，操作简便，分型准确，结果直观。关于NucMass 2000全自动核酸质谱检测系统NucMass 2000是禾信仪器在全面掌握核心技术和先进制造工艺下，历时5年，完全自主、正向开发的一款基于基质辅助激光解吸电离法（MALDI）的质谱检测系统，主要应用于SNP基因分型检测、遗传病检测（单基因突变）、CNV基因拷贝数变异分析、DNA甲基化检测、耐药基因检测、病原微生物检测，具有检测通量大、准确可靠、经济快速、样品耗费量少与操作简单等优势。

近日，中国科学院合肥物质院安光所光电子中心生物医学光学团队在微流控CRISPR分子诊断新方法研究方面取得新进展。相关成果以《SEDphone: 空间编码离心式微流控芯片-智能手机平台联合RT/LAMP-CRISPR/Cas12a体系用于流感病毒分型检测》为题发表于化学类TOP期刊Sensors and Actuators: B. Chemical上。流感病毒是一种严重的公共卫生威胁，每年都会引起流行病，发病率和死亡率较高，特别是季节性流感爆发时，大批患者涌入社区和医院门诊，给医疗机构带来巨大压力。同时，流感病毒极易发生变异，表现出多种亚型，不同亚型需要采取不同的临床干预措施。因此，迫切需要开发一种准确、快速和便携的解决方案来区分不同流感病毒亚型，控制病毒传播及指导临床合理用药。CRISPR/Cas分子诊断技术，由于其特异性强、反应效率高和便携性好的特点，被称为最有可能替代PCR的下一代分子诊断技术。团队将LAMP等温扩增技术和CRISPR/Cas12a技术进行“双剑合璧”，靶标序列经过LAMP扩增后被CRISPR/Cas12a识别，并激活其反式切割的活性，进而切割报告探针，释放荧光信号。该方法既保证了检测的高灵敏度，又弥补了LAMP扩增过程中假阳性的问题。为了便于不同靶标的应用，研究人员基于LAMP-CRISPR/Cas12a系统开发了一个通用的设计过程模型。经优化后，可在45分钟内同时检测H1N1、H3N2、H5N1、H7N9和乙型流感病毒(IBV) 5种流感分型，检测限达到10拷贝/μL，达到金标准水平。另外，为了实现LAMP扩增及CRISPR检测的一体化操作，研究人员设计并制备了具有空间编码功能的离心式微流控芯片，开发了基于智能手机的便携式床旁检测（point of care testing, POCT）设备SEDphone，实现了多种流感分型的“同时扩增，同时检测”。同时，采用双温区设计，克服了RT/LAMP与CRISPR/Cas12a技术反应温度差异的问题。采用临床样本验证了LAMP-CRISPR/Cas12a流感病毒快速分型方法及SEDphone平台的临床实用性。该项研究为多种病原体的高灵敏、准确、快速、即时检测提供一种新思路，有望用于发热门诊或是家庭自检，可最大限度地降低了不必要的交叉感染风险，缓解医疗压力。博士研究生尹雪儿为论文第一作者，朱灿灿副研究员、朱灵研究员和刘勇研究员为论文通讯作者。该项工作得到国家重点研发计划、中国科学院青促会优秀会员及合肥物质院院长基金高技术创新项目支持。图 SEDphone流感病毒检测平台工作流程示意图图 LAMP- CRISPR/Cas12a检测不同流感病毒分型特异性及灵敏度评估

H1N1病毒结构图 H1N1病毒显微结构 流感病毒的一般结构 　 　 　据国外媒体报道，美国疾病控制和预防中心发布的信息显示，这次爆发的H1N1亚型猪流感病毒是新型变异病毒，是人类流感病毒、北美洲禽流感病毒，以及北美洲、欧洲和亚洲猪流感病毒的混合体。 　　猪流感是一种由A型猪流感病毒引起的猪呼吸系统疾病，该病毒可在猪群中造成流感暴发。通常情况下人类很少感染猪流感病毒。但是，与过去发生的猪流感相比，这次猪流感病毒似乎更容易在人与人之间传播.之前医学研究显示，猪对人类流感和禽流感病毒均非常易感，流感病毒还可能在猪体内发生基因重新排列，从而产生新的易传播流感病毒。世界卫生组织负责卫生安全和环境事务的助理总干事福田敬二指出，疫情的不可预测性还表现在猪流感病毒株可能继续变异，既有可能变得更危险，也有可能变异后减小对人类健康构成的风险。

科技部5月19日公布《甲型H1N1流感科研进展摘要》，以下为《摘要》全文： 一、病毒和检测 1. 5月6日，加拿大完成对3个甲型H1N1流感病毒样本的基因测序工作，这是世界上首次完成对这种新病毒的基因测序，将为研制疫苗打下基础。 2. 5月7日，我国军事医学科学院军事兽医研究所研制出甲型H1N1流感病毒检测芯片，这种基因芯片可同时对12个样品进行快速、灵敏、特异性检测，能够检测的项目包括1-16种亚型甲型流感病毒、当前流行的甲型H1N1流感病毒、以及H1、H3、H5、H7、H9等亚型流感病毒，5小时内便可获得检测结果。 3. 目前，美国食品药品管理局(FDA)批准法国一家新的流感疫苗生产厂投产，该厂不仅生产季节性流感疫苗，必要时还可用来生产甲型H1N1流感疫苗。 另外，甲型H1N1流感疫苗有望被纳入WHO疫苗计划。法国流感病毒参照中心主任利纳表示，鉴于甲型H1N1流感病毒正在世界各地扩散，针对它的疫苗有望被纳入WHO疫苗计划。利纳表示，WHO每年都会根据当年的情况，预测出季节流感病毒的种类，并针对病毒的特性决定生产何种疫苗。 二、疫苗研发方面 在疫苗研发方面，美国已启动识别出甲型流感病毒毒株疫苗项目。美国国家过敏症和传染病研究所主任福奇表示，分离出病毒毒株后，疫苗研发进入培育种子病毒阶段。种子病毒可用于临床试验的疫苗开发。但他警告，当前科学界对甲型流感的了解尚处在非常初步的阶段，这种病毒会造成什么影响目前还很难讲。 WHO专家小组将于5月14日开会，就是否建议药厂全力以赴生产甲型H1N1流感疫苗提出建议，并将把讨论结果呈交WHO 总干事，由其宣布WHO 的决定。 三、预防方面 我国中医药管理局给出5套中医方案预防甲型流感，主要针对成人和儿童。专家委员会成员刘清泉表示，在甲型H1N1 疫苗没有研发出来的情况下，中医经典的预防方法可以借鉴，但不建议大量服用药物。 四、病毒检测和病原学研究 我国研制的病毒检测试剂盒香港验证成功，三小时内获得结果。由达安基因股份有限公司与广州华生达救援生物技术有限公司协作研制出的新发人甲型(H1N1)流感病毒核酸检测试剂盒和通用型甲型流感病毒核酸检测试剂盒在香港大学成功获得验证。病例验证结果表明，上述两种试剂盒具有良好的特异性和灵敏性，并能够在三个小时的时间内获得结果。 五、药物研制 我国自主研发抗病毒一类新药正开展Ⅱ期临床试验。国家食品药品监督管理局近日指出，中国自主研发的注射剂“帕拉米韦三水合物”为抗病毒一类新药，2008 年6月被SDA批准进行临床试验。目前已完成了I期临床试验，正在开展Ⅱ期临床试验。此外，国际公认流感治疗药物“达菲”在中国上市。我国两家企业(广东东阳光药业公司和上海制药集团)已被授权生产“达菲”。 另外，我国国家食品药品监督管理局已经做好启动抗流感药物特别审批准备。目前，国家食品药品监督管理局紧密跟踪抗流感药物生产和研发情况，根据疫情变化情况以及世界卫生组织(WHO)对甲型流感警戒级别的调整变化情况，依法进行特殊审批和特别审批程序预案的制定，做好应急药品和医疗器械生产和进口审批准备工作。

偏头痛是一种影响极为广泛的神经系统疾病，在全球范围内波及超过10亿人口，造成了巨大的社会经济负担。据统计，欧洲每年因偏头痛造成超过270亿欧元的经济损失，在中国约每11个成人中就有1人遭受偏头痛的困扰。此外，偏头痛还会伴随包括抑郁症、焦虑症、癫痫、肥胖和其它慢性疼痛等一系列病症，给患者及其家庭带来沉重负担。 　　5-羟色胺(5-HT)家族受体是偏头痛、抑郁症、精神分裂症等中枢神经疾病的重要靶点。其中，5-HT1B、5-HT1D和5-HT1F三种亚型与偏头痛的治疗密切相关。多年以来，靶向5-HT1B/1D的激动剂曲普坦类药物被广泛用于偏头痛的治疗。然而，该类药物的血管收缩特性给患有冠心病、脑血管疾病或高血压病史的患者带来了一定的治疗风险。2019年，美国FDA批准了一种高选择性靶向5-HT1F的新型急性偏头痛治疗药物——拉米替坦(Lasmiditan)。拉米替坦能有效地避免曲普坦类药物在心血管方面的副作用，然而其选择性靶向5-HT1F受体的机理尚不明确。5-HT1F作为极具前景的抗偏头痛靶点，对其结构、功能以及选择性药物的作用机制的研究具有重要意义。 　　近日，中国科学院上海药物研究所徐华强课题组利用冷冻电镜技术，首次解析了5-HT1F受体结合G蛋白以及抗偏头痛药物拉米替坦的复合物结构，揭示了拉米替坦选择性结合5-HT1F受体的结构基础。 　　冷冻电镜技术，也叫冷冻电子显微镜技术，是在低温下使用透射电子显微镜观察样品的显微技术，即把样品冻起来并保持低温放进显微镜里面，用高度相干的电子作为光源从上面照下来，透过样品和附近的冰层，受到散射。研究人员再利用探测器和透镜系统把散射信号成像记录下来，最后进行信号处理，得到样品的结构。 　　冷冻电镜技术作为一种重要的结构生物学研究方法，它与X射线晶体学、核磁共振一起构成了高分辨率结构生物学研究的基础。这项技术获得了2017年的诺贝尔化学奖。获奖理由是“开发出冷冻电子显微镜技术(也称为低温电子显微镜技术)用于确定溶液中的生物分子的高分辨率结构”，简化了生物细胞的成像过程，提高了成像质量。 　　徐华强课题组的成果以“Structural basis for recognition of anti-migraine drug lasmiditan by the serotonin receptor 5-HT1F–G protein complex”为题，于2021年7月8日在《细胞研究》(Cell Research)上在线发表。 5-HT1F属于5-HT1亚家族成员，但在同源性和配体激活效应上与该亚家族的其它亚型差别相对较大，这也使得5-HT1F成为具有潜力的选择性抗偏头痛靶点。研究团队经过纯化、冷冻制样和数据处理等条件摸索，突破了5-HT1F受体-G蛋白复合物表达量低、复合物组装不稳定的技术瓶颈，最终获得高质量的复合物结构。5-HT1F受体的胞外区附近结构相对其他5-HT亚型受体具有显著的构象变化，这也是药物拉米替坦能够高选择性结合5-HT1F受体的结构基础。a-b. 5-HT1F-Gi-拉米替坦复合物的电镜密度图(a)和原子模型(b)； c. 拉米替坦的结合口袋示意图； d. 拉米替坦与5-HT1F受体的相互作用模式图； e. G蛋白招募实验显示拉米替坦对5-HT1F受体具有高度选择性。 徐华强课题组长期致力于在5-羟色胺家族受体的结构与功能研究，并取得了一系列系统性的重要成果。该研究团队于2013年在Science上发表首个5-HT1B受体的晶体结构1；于2018年在Cell Discovery上发表了首个拮抗状态的5-HT1B受体结构2；于2021年3月在Nature上发表3个不同亚型的5-HT受体与G蛋白复合物的冷冻电镜结构，并首次揭示了5-HT受体的脂质调控、组成型激活以及与抗精神分裂症、抗抑郁药物阿立哌唑的作用机制3。该团队在5-HT1F受体和抗偏头痛药物的作用机制上取得的成果，进一步实现了5-HT受体系统研究领域的重要突破。 　　上海药物所和上海科技大学联合培养博士生黄思婕、上海药物所博士生徐沛雨和研究助理谭阳霞为文章的共同第一作者；上海药物所徐华强研究员和蒋轶研究员为文章的共同通讯作者。该研究获得了国家重点研发计划、中国科学院战略性先导科技专项、上海市市级科技重大专项、国家自然科学基金和国家科技重大专项的资助。

p style=" text-indent: 2em " 曾有研究表明，线粒体缺陷与乳腺癌的发生存在着一定关联，但科学家们依旧无法确定线粒体DNA改变与TNBC转移和化疗拮抗的关系。 /p p 　　近期，宾夕法尼亚大学研究人员将不同乳腺肿瘤亚型的代谢图谱进行比较，确定TNBCs的侵袭性亚群，并指出了更准确的风险评估方式，从而有助于为TNBC患者提供个性化治疗方案。该研究成果以“Aggressive triple negative breast cancers have unique molecular signature on the basis of mitochondrial genetic and functional defects”为题发表在《Molecular Basis of Disease》上。 /p p style=" text-align: center " img title=" 1.jpg" src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201802/insimg/5bcb73c5-7c32-4cb4-bf00-467e03bb5b72.jpg" / /p p 　　宾夕法尼亚州兽医学院的研究助理Manti Guha教授表示：“目前尚无有效手段来预测TNBC患者对化疗药物的不良反应。我们对缺陷的线粒体DNA进行了相关分析，发现了新的分子标志物，从而确定了TNBCs的侵袭性亚群，指出了更准确的风险评估方式，有助于为TNBC患者提供个性化治疗方案。” /p p 　　费城儿童医院线粒体和子代医学中心主任、Guha的导师兼合作者Douglas Wallace表示：“现代医学常常忽略线粒体在疾病中的作用，此项研究通过对比三阴乳腺癌的线粒体能量系统与其他乳腺癌的线粒体能量系统，确定了危险性较低的TNBCs形式，并找出了治疗这类乳腺癌的新靶点。因此这项工作对于危险性较低的TNBCs的治疗具有良好的前瞻性。” /p p style=" text-align: center " img title=" 2.jpg" src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201802/insimg/38e0553f-c2e3-40f7-86cc-83a4b2f96b7c.jpg" / /p p style=" text-align: center " TNBC中线粒体代谢基因的变化 /p p 　　此前，Guha及其同事通过实验诱导线粒体功能障碍，发现线粒体功能障碍的情况下乳腺癌细胞会重新编程并且开始转移。Guha说：“众所周知，肿瘤会损害线粒体的功能并导致代谢重编程。我们研究了乳腺癌亚型之间的线粒体特征的差异性以及患者肿瘤细胞线粒体DNA和功能的差异，实现了对有转移风险的患者的早期发现。” /p p 　　研究人收集了825例不同乳腺癌亚型患者的基因组数据，分析了不同的线粒体DNA拷贝数，他们发现晚期乳腺癌患者体内mtDNA(线粒体DNA)拷贝数最低，并且TNBCs的拷贝数最少。不仅如此，他们还建立了不同乳腺癌亚型之间mtDNA拷贝数的完整模型。这项研究结果显示，TNBCs中某些特定的mtDNA序列十分不稳定，通过这种特殊的mtDNA序列失衡状况，研究人员将乳腺癌患者分成了不同的风险类别。 /p p style=" text-align: center " img title=" 3.jpg" src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201802/insimg/e16b9098-2751-42a4-b277-30728828a925.jpg" / /p p style=" text-align: center " 原发性乳腺癌中mtDNA的相对丰度 /p p 　　研究人员同时指出，TNBCs和其他亚型之间存在耗氧量的差异，表明TNBCs患者的线粒体功能受损，从而导致细胞呼吸链破坏。他们分析了代谢有关的84个基因，发现了这些基因对线粒体功能具有调节作用，因此，他们认为这些基因可以作为TNBCs潜在的治疗靶点，也有望成为鉴定TNBCs侵袭性的生物标志物，并可用于改善化疗疗效。 /p p style=" text-align: center " img title=" 4.jpg" src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201802/insimg/eac95047-2f4e-4540-ae03-3f294114c3d6.jpg" / /p p style=" text-align: center " 乳腺癌细胞系中的线粒体功能缺陷 /p p 　　为了对这些发现进行验证，在FDA批准下，目前，Guha及其同事正对TNBCs的靶向代谢途径的治疗方案的有效性进行研究。希望我们可以看到这项研究的成果。 /p p 　　参考资料： /p p 　　1.Study uncovers therapeutic targets for aggressive triple-negative breast cancers /p p 　　2.Aggressive triple negative breast cancers have unique molecular signature on the basis of mitochondrial genetic and functional defect /p

人类真皮成纤维细胞是皮肤的细胞成分，由于它们的动态细胞特性而表现出细胞间表型异质性。因此，单个真皮成纤维细胞可以有不同的细胞特性，负责伤口修复、纤维化或细胞外基质的重塑。脂质代谢在具有不同表型的成纤维细胞中是否存在不同的形态，以及脂质成分是否参与成纤维细胞亚型的建立尚不清楚。　　2022年4月，洛桑联邦理工学院的Laura Capolupo等人在Science上发表了题为“Sphingolipids control dermal fibroblast heterogeneity”的研究成果，通过空间分辨代谢组学和单细胞转录组学研究方法，通过研究单个细胞的脂质组成，揭示了鞘脂在成纤维细胞状态确定中的驱动作用。研究背景　　外部信号(例如激素、细胞因子和生长因子)和细胞自主特性(例如单个细胞的转录和代谢状态)共同决定细胞命运的决定。尽管在数十年的深入研究中，外部信号的作用方式已经得到了广泛的详细说明，但细胞自主对命运决定的分子基础仍难以捉摸。脂质参与能量代谢，负责生物膜的组装，充当信号分子，并与蛋白质相互作用以影响其功能和细胞内分布。脂质组成因细胞类型而异，并在分化事件中重新编程。然而，脂质组重塑是否以及如何帮助改变细胞特性尚不清楚。　　研究思路　　研究结果　　1. 通过空间代谢组学揭示脂质异质性的组织原理，单细胞分析显示脂质协同调节　　图1和图2展示了研究人员首先对原代真皮人成纤维细胞 (dHF) 进行了空间代谢组学解析，结合电喷雾电离液相色谱-质谱(ESI-LC/MS)和基于多反应监测(MRM)的脂质组学分析，发现dHF 中存在两个共存的脂质变异轴。一个轴与细胞内组织有关，另一个轴与脂质相关的细胞间异质性有关，其中鞘脂途径受到高细胞间变异性的影响。随后的单细胞脂质组根据脂质组成对细胞进行分组，产生了不同的细胞簇。当考虑鞘脂的水平时，某些鞘脂在特定的细胞簇中富集，表明 dHF 以不同的鞘脂代谢状态存在。　　研究人员随后用可识别不同鞘脂头部基团的荧光标记的细菌毒素对细胞进行染色，验证了这一结果，发现dHF 以亚稳态鞘脂代谢配置存在，与给定的表型状态相对应，并在细胞世代中持续存在，研究人员将这些脂质代谢状态称为lipotypes。　　图1 | dHFs的单离子空间代谢组学分析　　(A)空间代谢组学检测方法示意图　　(B)正离子模式检测的部分脂质成像图　　(C)每个像素的PCA坐标显示　　(D)前10种脂质的贡献度展示　　图2 | 单细胞脂质组学分析　　(A)空间代谢组数据单细胞分析方法示意图　　(B)显示通过257个细胞计算的脂质CV的条形图　　(C)脂质协变网络　　(D)单细胞脂质组学数据的t-SNE图　　(E)鞘脂染色t-SNE分布图　　(F)鞘脂前体和负责鞘脂的成像图　　2. 单细胞转录组测序对细胞类型进行分类并对应不同脂型结合分析　　研究人员接着对dHF 进行了单细胞 RNA 测序 (scRNA-seq)，并将转录组定义的亚型与鞘脂定义的亚型联系起来，发现特定的lipotypes与普遍的细胞状态有关，表明lipotypes是 dHF 细胞状态的标志物。此外，dHF lipotypes还反映在不同真皮区域的成纤维细胞亚型上，如真皮较深区域的网状成纤维细胞与较浅区域的乳头状成纤维细胞会呈现差异化的lipotypes，且与皮肤癌的相关性不同。由此，lipotypes可以在体内标记特定的 dHF 群体。　　图3 | 脂肪类型映射到转录细胞的状态　　(A)通过指定聚类对5652个单独DHF的scRNA序列进行UMAP嵌入分析　　(B)聚类标记基因的基因表达点图　　(C)A中单个dHF细胞的扩散图，突出了不同细胞状态之间转录变异轴　　(D)DHF的sRNA序列数据PAGA轨迹分析图　　(E)每个FACS分类的脂肪型群体的富集基因的平均基因表达热图　　(F)不同的脂型基因特征分数UMAP图　　(G)不同簇细胞的平均脂型z分数点图　　(H)ShTxB2e+、ShTxB1a/2e+、ChTxB+和triple+的PAGA轨迹分析图　　(I)成纤维细胞(ACTA2)和基底细胞(LMNA)的两种典型标记物的UMAP图　　(J)几种染色细胞的共焦显微照片　　3. 鞘脂扰动对细胞状态的影响　　研究人员最后探究了鞘脂扰动对细胞状态的影响，发现lipotypes异质性通过使原本相同的细胞对细胞外刺激的反应多样化来影响细胞特性，并且操纵鞘脂组成足以将细胞重新编程为不同的表型状态。此外，鞘脂还能整合到参与细胞状态确定的调节回路中，这些回路解释了代谢和转录成纤维细胞的异质性。具体来说，研究人员观察到鞘脂调节成纤维细胞生长因子2 (FGF2) 的信号传导，其中globo系列鞘脂Gb3/Gb4 充当正调节剂，而神经节苷脂GM1 充当负调节剂。反过来，FGF2 信号通过维持导致Gb3/Gb4 产生的替代代谢途径来抵消 GM1 的产生。　　图4 | 鞘脂扰动对FGF信号的影响　　相关讨论　　该研究通过将高分辨率质谱成像与单细胞转录组学相结合，测量了单个人类真皮成纤维细胞的脂质组和转录组，发现特定脂质代谢途径的细胞间变化有助于建立参与皮肤结构组织的细胞状态如图5所示。这为细胞间异质脂质代谢在多细胞系统的自组织中发挥指导作用提供了证据。图5 |鞘脂控制真皮成纤维细胞异质性

做为中国著名的粒度仪品牌，百特在国内外已经有8000多家用户，其中东南亚是国外用户比较集中的一个区域。前不久，百特亚洲区销售经理孙霖带领百特回访组走访了东南亚四国用户，为代理商和用户送去了最新技术和信心。在泰国曼谷，回访组拜访了老朋友Peter Mills先生，一位材料学专家，一位在泰国工作生活了40多年的英国人，现任泰国多家粉体材料企业的技术顾问。他对百特仪器优良的性能有深刻的了解，他所服务的公司都已经配备百特激光粒度仪，他是百特的老朋友和合作伙伴。在距离曼谷不远的榴莲之乡罗勇，回访组拜访了8年前购买百特激光粒度仪的用户——EPG INNOVATION CENTER。尽管当地气候炎热，湿度很大，仪器使用频繁，八年来百特激光粒度仪一直在运行正常，从未出现故障，测试结果也很稳定准确，用户对他们的产品很放心。他们对百特仪器良好的质量和准确性赞不绝口。告别泰国，回访组飞赴越南胡志明市，此行的目的一是访问百特越南代理商HIEN LONG，二是参加在这里举行的越南造纸机械、橡塑及涂料展览会。HIEN LONG是百特在东南亚最早的代理商，现在百特粒度仪在越南市场影响力越来越大，HIEN LONG做了大量的工作。回访组此次与HIEN LONG进行了深入的产品、技术、市场和应用的交流，使他们对百特仪器优良性能有了更全面的了解。在同期参加的展览会上，回访组接待了很多粉体材料厂家的参观咨询，其中不仅有越南厂家，还有马来西亚、印尼、新加坡等东南亚国家的厂家。在越南期间回访组还拜访了一些老用户，为他们提供了零备件及仪器保养服务，包括陶瓷、涂料、制药等行业的用户。他们的很多产品都销往欧洲、美国等国际市场，百特仪器为他们的产品质量提供了可靠的保证。展会和访问取得了圆满成功，HIEN LONG设宴款待回访组，并邀请英国、马来西亚以及越南的合作伙伴一起参加，大家喝茅台酒，品越南美食，对百特粒度仪及在越南的市场潜力充满信心。告别越南，回访组来到马来西亚吉隆坡，回访百特马来西亚代理商Kromtek公司。Kromtek公司的实验室是百特东南亚代理商中规模最大、仪器品种最多的实验室。这里有多台百特激光粒度仪、显微图像颗粒分析系统，还有麦克比表面、Zeta电位分析仪等仪器。这里每周都能接待2-3批参观的用户，是推广百特仪器的良好平台。在马来西亚期间，回访组还拜访了十几家用户。Zantant是一家大型大集团公司，他们的技术高管专门了解和研究过百特粒度仪，在对一种新的混合物粉体材料进行粒度分析时，他们发现百特Bettersizer3000 plus激光粒度仪具有测量折射率的功能正适合新材料研究，能解决不知道折射率无法准确测量粒度的问题。此外，从吉隆坡槟城，回访组和代理商驱车数百公里，先后拜访了9个客户， 带回了22个样品。通过拜访近距离了解马来西亚用户的需求和关注点，为今后更有效地开展工作奠定了基础。马来西亚是榴莲的故乡，世界上最好的榴莲都出产在这里。来到马来西亚怎么可以不吃榴莲？代理商请回访组一行品尝了榴莲自助餐。各种口味的榴莲应有尽有，令人流连（榴莲）忘返。此次东南亚行程的最后一站是印度尼西亚，主要目的是在代理商召开的百特仪器推介会上向用户展示百特公司、仪器和技术。在雅加达知名的Mini Park里，百特仪器推介会如期举行，在全天的会议上，回访组从百特公司，到百特仪器，到百特技术一一进行了介绍，同时结合操作演示，使与会者对百特公司、仪器和技术有了充分完整的了解。许多与会者亲自测试自己带来的样品，大家对准确的粒度结果和简便的操作流程感到非常满意，对百特粒度仪一键操作、折射率测量、超声波防干烧等技术感到惊讶，对良好的重复性和准确性给予高度赞赏。会议结束后还向与会代表颁发了培训证书。本次东南亚之行历时一个多月，先后访问了泰国、越南、马来西亚和印尼，拜访了34家用户及代理商。访问期间，回访组广泛介绍了百特公司、仪器和技术，听取了用户和代理商的意见和建议。此访进一步扩大了百特仪器在东南亚市场的影响力，了解了东南亚用户和代理商的需求和愿望，丰富了百特开发国际市场的经验，坚定了百特开发国际市场的信心。此访是一次成功的访问，是一次有益的尝试。（本文作者：百特公司国际部 孙霖）

迈克尔塞德尔（Michael Seidel）• 如果要在一个样品中测定多种分析物，分析微阵列是理想的解决方案。基于流的分析系统的优势在于它们可以在现场以自动化的形式快速、定量地分析样品。• 近年来，基于流式化学发光 (CL) 微阵列的微阵列芯片读取器 (MCR) 分析平台不断优化，其在各种生物分析应用中的实用性得到了证明。• GWK Präzisionstechnik 公司以原型开发的形式进一步优化了最新一代设备。该设备提供了使用泵和阀门控制实现全自动测定性能的可能性，并通过集成的高灵敏度 CCD 相机进行后续测量图像采集，非常适合长达 2 分钟的采集时间。由于要建立各种生物分析试验进行研究，该仪器被命名为 MCR-Research (R)（图 1）。• 在下文中，将简要描述各个微阵列检测类型以及应用程序。图 1：用于 SARS-CoV-2 抗体检测的基于流式 CL 微阵列的 MCR-R 微阵列分析平台示例。 检测血液中针对 SARS-CoV-2 的抗体检测针对 SARS-CoV-2 的抗体的问题是在大流行开始时提出的，由巴伐利亚研究基金会资助。重组抗原（SARS-CoV-2 蛋白，包括刺突蛋白 (S1) 和核衣壳 (N) 蛋白以及受体结合结构域 (RBD)）固定在微阵列芯片上。血液样本中的抗体可以与这些重组抗原结合。然后，带有辣根过氧化物酶 (HRP) 标记的抗人 IgG 抗体通过泵系统通过流通式微阵列芯片，在随后的步骤中通过添加鲁米诺和过氧化氢来观察结合的抗体。基于流动的微阵列免疫测定 (MIA) 原理的一个主要优点是使用间接非竞争性 MIA 非常快速和同时测定针对不同抗原的抗体（图 2）。因此，例如，可以将疫苗衍生抗体与 SARS-CoV-2 感染后的抗体区分开来。 图 2：血清和血液中 SARS-CoV-2 抗体的间接非竞争性 MIA 流程图。此外，可以确定针对不同 SARS-CoV-2 变体的抗体，或者可以通过其他呼吸道病原体扩展抗体组，例如，检测针对流感的抗体。此外，MCR 的多功能性与相关的流通微阵列芯片和程序选项也提供了建立的可能性，例如，通过竞争性 MIA 对中和抗体进行定量分析。在这里，可以确定哪些抗体实际上可以阻止病原体进入细胞，从而在预防感染方面特别有效。CL-MIA 只需不到 15 分钟，可用于现场分析，例如医疗实践。使用 CL-MIA 和 MCR 检测 SARS-CoV-2 抗体的第一个结果已经发表 [1,2]。 基于抗体的蒸发冷却系统嗜肺军团菌检测和亚型分析媒体多次报道军团菌爆发，通常可以追溯到蒸发冷却系统。这些系统可以产生含有军团菌的生物气溶胶，这取决于致病菌株，在吸入可吸入的嗜肺军团菌后，会在人体中引发轻度庞蒂亚克热或严重的肺炎，即军团病。为此，成立了第 42 届 BImSchV，负责规范蒸发冷却系统、冷却塔、湿式分离器的安全技术运行以及冷却水中军团菌的定期控制。如果超过测量值（冷却塔每 100 毫升 50,000 个军团菌，其他需要报告的系统每 100 毫升 10,000 个军团菌），则必须立即采取措施大幅降低病原体浓度。此外，必须进行血清分型。代替使用凝集试验（血清组 1 和血清组 1-15 之间的区别）对嗜肺军团菌进行常规血清分型，甚至使用大量 ELISA 微量滴定板对嗜肺军团菌血清组 1 进行亚型分型，也可以使用 MCR。根据该申请，原型设备被称为 Legiotyper。此外，在军团病爆发的情况下，尽快确定源头很重要。这也可以通过仪器实现。一组单克隆抗体固定在流通式微阵列芯片上。样品手动注入系统，然后是全自动 CL-SMIA（图 3）。单克隆抗体对L. pneumophila血清群 1的不同血清和亚群表现出不同的亲和力和选择性。图 3：CL-SMIA 示意图：(1) 样品注射，(2) L. pneumophila SG1 亚型与特异性捕获抗体的结合，(3) 抗 SG1 检测抗体与已经结合的军团菌的结合，(4 ) CL 反应和图像采集。细菌与流通式微阵列芯片上的相应单克隆抗体特异性结合。夹心是由对血清组 1 特异的生物素标记的多克隆抗体形成的。加入 CL 试剂后，进行 CL吸收。通过将单个菌落悬浮在缓冲液中并在大约 30 分钟内使用该仪器执行 CL-SMIA，在培养后的所有情况下都可以进行血清分型和亚型分型。在由德国联邦经济和技术部资助的 WIPANO 项目 LegioRapid 中，首次建立了用于蒸发冷却系统快速卫生评估的独立培养方法的标准化方法，该方法在测量后定量确定治疗成功率值已超过。除了 qPCR 和与免疫磁分离 (IMS) 相结合的流式细胞术之外，Legiotyper 被用作第三种方法。定量测量结果通过qPCR和IMS流式细胞仪从100 mL中100军团菌的浓度获得，其中100 mL水样通过聚碳酸酯过滤器（孔径=0.22µm）过滤，洗脱液直接用于定量测定。只有在样本中发现最低浓度为106个细胞/100 mL时，才能使用Legiotyper进行血清或亚型。对于培养样本，这个最低浓度不是问题。对于不依赖培养的方法，样品体积必须增加到至少 10 L 才能达到至少 10 4的浓缩系数。正在对合适的过滤方法进行研究 [3]。对于气溶胶中嗜肺军团菌的分析，可以使用相同的 CL-SMIA，但在样品制备方面存在差异。必须首先使用气溶胶收集器对气溶胶进行采样，科里奥利 µ 旋风收集器适用于该收集器。在这里，细菌以液体形式分离，其中可以直接取样和测量。在 AIF 项目 LegioAir 中，首次表明在生物气溶胶中进行血清分型是可能的。 使用 haRPA对军团菌进行分子生物学检测微阵列芯片阅读器不仅可用于基于抗体的检测，还可用于分子生物学。课题组开发了异质不对称重组酶聚合酶扩增（简称haRPA，图4）[4,5]，可用于军团菌属。通过在 39°C 下加热流通式微阵列芯片在系统上进行检测。对于 haRPA，军团 菌属特异性引物在空间上固定在 DNA 微阵列芯片上。图 4：可以在 MCR-R 上执行的 haRPA 原理。(1) 带有固定反向引物的 DNA 微阵列，(2) 添加 DNA 提取物后，重组酶打开双链靶 DNA，(3) 聚合酶延伸反向引物直到 (4) 单链结合蛋白分离, (5) 生物素化的正向引物与固定的双链结合，直到 (6) 第二条 DNA 链被聚合酶延伸。(7) 最后，固定化的扩增子通过链霉亲和素-HRP 进行标记，并使用 CL 进行可视化。 等温核酸扩增可扩增基因组 DNA 的靶序列。通过第二个生物素标记的引物，形成的扩增子被标记并用作链霉亲和素-HRP 的锚点，该链霉亲和素-HRP 通过流通式微阵列芯片。最后，与其他测定一样，通过使用集成 CCD 相机记录 CL 反应生成 CL 图像。信号的强度取决于样品中 DNA 的初始量。扩增允许对非常少量的初始 DNA 进行定量。haRPA 的原理还允许通过将不同的引物固定在微阵列表面上进行多重分析。这样，样品可以在 45 分钟内区分军团 菌。以及对人类最危险的军团菌属嗜肺军团菌，它可以更好地评估潜在的健康风险。 地表水中的藻类毒素的监测MCR-R 也用于环境监测。AIF-ZIM 项目 MARCA 关注为即将到来的藻华开发早期预警系统。它是基于云的监测系统的重要组成部分，可用于预测藻类大量繁殖和地表水中蓝藻毒素的形成等。由于水体富营养化和气候变化，被称为藻华的蓝藻大量繁殖变得越来越频繁。在这种现象期间，水变得非常浑浊，水中的蓝藻毒素含量急剧增加。其后果是水生大型植物的退化和对生物体、人类和动物的危害。为了预测藻华并在早期采取预防措施，正在开发一种预警系统，该系统能够使用 Triton 水传感器系统持续监测可能指示藻华的化学和物理参数。这些是温度、电导率、总溶解固体 (TDS) 和总悬浮固体 (TSS)、浊度、溶解氧、溶解硝酸盐和总硝酸盐。此外，该仪器还监测水中的蓝藻毒素浓度。这可以通过再生间接竞争 CL-MIA（图 5）实现，并且由系统在 7 分钟内完全自动执行。例如，微囊藻毒素-LR 的检测限为 4.8 µg/L，因此低于 WHO 的 10 µg/L（对于微囊藻毒素）的限值，低于该限值可假设对健康产生不利影响的可能性较低。图5：再生间接竞争性MIA的示意图：（1）样品（抗原）与一级抗体的孵育，（2）未结合的一级抗体与固定化毒素的结合，（3）检测抗体结合，（4）CL反应和图像采集，以及（5）下一次测量的再生。细菌亲和过滤用亲和粘结剂的筛选微阵列芯片阅读器可用于定量或定性检测，以及研究新的亲和性结合物及其对细菌的结合行为。例如，这些是抗菌多肽、酶或抗体。生物素化细菌通过流通微阵列芯片自动进入设备，在该芯片上固定待研究的亲和力粘合剂。随后，链霉亲和素HRP与结合的生物素结合并催化CL反应，这被捕获为图像。用适当的缓冲液洗脱细菌后，获得第二个CL图像。因此，细菌的结合和洗脱行为可以得到快速而全面的评估。与无标签生物传感器相比，生物素标签可以更精确地跟踪这种反应。这种筛选策略的另一个优点是可以同时固定多个亲和结合物。这为一次测试许多亲和结合物提供了一种快速的方法，也允许细菌、亲和结合剂和洗脱缓冲液之间的组合具有高度的多样性。总结这里描述的例子令人印象深刻地展示了MCR-R分析平台在仪器生物分析中的广泛应用。因此，各种高度相关的领域都可以受益于生物分析方法的使用，因此必须在未来继续推动其扩展。参考文献[1] Klüpfel, J. Koros, R.C. Dehne, K. Ungerer, M. Würstle, S. Mautner, J. Feuerherd, M. Protzer, U. Hayden, O. Elsner, M. Seidel, M. Automated, flow-based chemiluminescence microarray immunoassay for the rapid multiplex detection of IgG antibodies to SARS-CoV-2 in human serum and plasma (CoVRapid CL-MIA). Analytical and Bioanalytical Chemistry, 2021, 413, 5619–5632. https://doi.org/10.1007/s00216-021-03315-6 .[2] Klüpfel, J Paßreiter, S. Weidlein, N. Knopp, M. Ungerer, M. Protzer, U. Knolle, P. Hayden, O. Elsner, M. Seidel, M. Fully automated chemiluminescence microarray analysis platform for rapid and multiplexed SARS-CoV-2 serodiagnostics. Analytical Chemistry, 2022, 94, 6, 2855-2864. https://doi.org/10.1021/acs.analchem.1c04672 .[3] Wunderlich, A. Torggler, C. Elsaesser, D. Lück, C. Niessner, R. Seidel, M. Rapid quantification method for Legionella pneumophila in surface water. Analytical and Bioanalytical Chemistry, 2016, 408(9), 2203-2213. https://doi.org/10.1007/s00216-016-9362-x .[4] Kunze, A. Dilcher, M. Abd El Wahed, A. Hufert, F. Niessner, R. and Seidel, M. On-chip isothermal nucleic acid amplification on flow-based chemiluminescence microarray analysis platform for the detection of viruses and bacteria. Analytical Chemistry, 2016, 88, 898-905. https://doi.org/10.1021/acs.analchem.5b03540 .[5] Kober, C. Niessner, R. Seidel, M. Quantification of viable and non-viable Legionella spp. by heterogeneous asymmetric recombinase polymerase amplification (haRPA) on a flow-based chemiluminescence microarray. Biosensors and Bioelectronics, 2018, 100, 49-55. https://doi.org/10.1016/j.bios.2017.08.053 . 关于作者Michael Seidel德国加钦慕尼黑工业大学水化学研究所分析化学和水化学系主任Michael Seidel在斯图加特大学学习技术生物学，并在图宾根大学获得物理化学博士学位。在Miltenyi Biotec GmbH担任项目负责人后，他在分析化学主席处成立了一个微阵列研究小组，由Reinhard Niessner教授领导。2014年，他以化学发光微阵列为主题，学习分析化学。直到现在，他还是由Martin Elsner教授领导的分析化学和水化学主席“生物分析和微分析系统”小组的负责人。他的研究兴趣在于建立创新的（生物）分析方法和仪器、生物传感器、分析微阵列、超顺磁性纳米颗粒、浓缩和分离方法，以快速或自动分析药物、毒素、生物标记物、蛋白质、病原菌和病毒，或在水质监测、食品分析或体外诊断领域的抗生素抗性基因。原文：Flow-based analytical microarraysQuantitative and qualitative determinations with selective biological probesWiley Analytical Science，2 September 2022供稿：符 斌

脊髓性肌萎缩症（SMA）脊髓性肌萎缩症（SMA），是一类由脊髓前角运动神经元变性导致肌无力、肌萎缩的疾病。由运动神经元功能基因(SMN1) 隐性突变引起，属常染色体隐性遗传病，临床并不少见。主要临床表现为进行性、对称性，肢体近端为主的广泛性弛缓性麻痹与肌萎缩，智力发育及感觉均正常。SMN1基因编码存活运动神经元（SMN）蛋白 ——一种遍布全身的蛋白质，对于运动神经元细胞的结构维持和功能至关重要。大脑和脊髓中的运动神经元控制整个身体的肌肉运动。如果没有足够的功能性SMN蛋白，那么运动神经元就会死亡，导致衰弱且通常致命的肌肉无力。由SMN1基因突变引起的SMA通常根据发病年龄和严重程度分为几种亚型；其中婴儿发病的SMA是最严重和最常见的亚型。患有这种疾病的儿童头部抬头，吞咽和呼吸都有问题。这些症状可能在出生时出现，也可能在6个月后出现。近十年来，在针对SMA患者的治疗策略方面取得了显著进展：2016年12月Nusinersen反义寡核苷酸疗法迅速获得FDA批准用于所有年龄的SMA患者，可提高SMN蛋白表达并改善轻度SMA儿童和青少年的运动功能；2019年5月批准的静脉注射表达SMN1 cDNA (scAAV9-SMN)的 重组腺相关病毒基因疗法onasemnogene abeparvovec-xioi用于提高2岁及以下婴儿的生存和运动机能。因为SMN水平无法在活着的患者的中枢神经系统中测量，有关疾病相关的SMN表达水平变化和与疾病相关的数据很少。了解SMN在正常和患病人群、以及发展治疗过程中的动态表达变化将有助于进一步优化临床治疗。来自约翰霍普金斯大学医学院的研究人员对临床SMA患者进行分组，对分离的人的脑、脊髓、髂腰肌、隔膜、肝等组织中SMN mRNA和蛋白水平分别进行了量化动态检测。其中，采用HTRF® （均相时间分辨荧光，Homogeneous Time-Resolved Fluorescence）检测技术进行不同组织的SMN蛋白定量检测。研究发现围产期全组织SMN蛋白水平正常下降，这支持临床上在出生后要尽快开始SMN诱导治疗；部分患者由于ASOs（反义核苷酸）在脊柱和大脑吻侧区域的分布有限，可能限制了这些区域的运动单元对这些患者的临床反应。这些结果对SMA患者的优化治疗具有重要意义，并为进一步研究提高鞘内注射ASOs的生物利用度提供了依据。文章技术路线：HTRF定量脊髓标本中SMN蛋白的表达数据(对照组为75例 n = 16例SMA，患者年龄从15周妊娠(GA)到168个月不等)，如下图所示：HTRF实验方法:HTRF® （均相时间分辨荧光，Homogeneous Time-Resolved Fluorescence）技术基于时间分辨荧光（TRF）和荧光共振能量转移（FRET）两大技术原理。将荧光的灵敏性、均相免洗和低背景等特点结合在一起。广泛用于GPCRs，激酶，细胞因子，磷酸化蛋白，表观遗传，生物大分子（抗体）等靶点的检测和定量。HTRF SMN assay kit：将10 μL细胞裂解液转移到96/384浅孔板中，加入5μL的荧光供体（Donor）和5 μL的荧光受体(Acceptor)。孵育过夜后，直接在EnVision多模式读板仪(PerkinElmer)或其他HTRF® 兼容的酶标仪上进行读值即可。珀金埃尔默公司一如既往的为用户提供客制化高灵敏度检测试剂和高品质的检测设备：EnVision多标记微孔板读板仪长按识别二维码获取详细产品信息EnSight多标记微孔板读板仪 Victor Nivo多标记微孔板读板仪参考文献1. Ramos, Daniel M., et al. "Age-dependent SMN expression in disease-relevant tissue and implications for SMA treatment." Journal of Clinical Investigation 129.11 (2019): 4817-4831.

FDA授予阿斯利康单抗MEDI8852治疗A型流感感染的快车道地位英国制药巨头阿斯利康（AstraZeneca）及旗下全球生物制剂研发部门MedImmune近日宣布，FDA已授予单克隆抗体MEDI8852用于治疗A型流感病毒住院患者的快车道地位（Fast Track designation）。FDA的快车道项目，旨在加速开发及审查用于治疗严重疾病并填补未满足医疗需求的新药。目前，MEDI8852正处于Ib/IIa期临床开发，调查单剂量静脉注射MEDI8852作为单药疗法或联合奥司他韦（oseltamivir），用于由A型流感病毒导致的急性、无并发症流感成人患者的疗效和安全性。最近，在健康成人受试者中成功完成的一项I期研究表明，MEDI8852具有可接受的安全性和药代动力学属性，支持了该药用于流感患者治疗的进一步临床开发。此次快车道地位，也是自2014年以来，阿斯利康在感染性疾病治疗领域收获的第4个快车道地位，突显了该公司在该领域的研发实力。目前，旗下MedImmune在感染性疾病领域正在推进的大多数临床开发项目均获得了此荣誉。2015年4月，FDA授予MEDI8897快车道地位，这是一种单抗药物，用于预防婴儿中由呼吸道合胞病毒（RSV）引发的严重呼吸道疾病。2014年9月，FDA授予MEDI3902快车道地位，该药用于预防由铜绿假单胞菌（P.aeruginosa）引起的医院获得性肺炎，这是一种高度耐药菌，可在住院患者中导致严重的疾病。2014年底，FDA授予MEDI4893快车道地位，该药用于ICU患者预防由金黄色葡萄球菌（S.aureus）引发的肺炎，该病菌也往往是多药耐药菌。MEDI8852是一种实验性人IgG1κ单克隆抗体（mAb），通过输液给药。MEDI8852的前驱分子由Humabs BioMed公司从人的记忆B细胞中分离获得，MedImmune进行了进一步的优化，增强了其中和能力。MEDI8852能够结合至血凝素蛋白（hemagglutinin）茎部的一个区域，这在A型流感病毒所有亚型中均高度保守。目前，MEDI8552正开发用于因A型流感住院的患者。尽管该药正在开发作为一种季节性流感的治疗药物，但可以预期的是，它也有望用于预防流感大流行。当前，流感病毒感染仍然是全球健康和世界经济的一个严重威胁。每年的流行病学调查结果显示，在全球范围内，大约300-500万严重病例，25-50万死亡病例，而在流感大流行期间，死亡率可能更高。鉴于耐药性的出现，抗病毒药物较短的治疗窗口，以及广泛的交叉保护性疫苗的缺乏，对能够有效治疗流感方面的新药方面，仍存在着重要的远未满足的医疗需求。

近日，国际权威肿瘤学杂志Cancer Research（IF=12.701）在线发表了厦门大学医学院抗癌研究中心占艳艳副教授团队的最新研究成果“The HNF4α-BC200-FMR1 positive feedback loop promotes growth and metastasis in invasive mucinous lung adenocarcinoma”。该论文揭示了核受体HNF4α在浸润性黏液型肺腺癌（invasive mucinous lung adenocarcinoma，IMA）生长和转移过程中的作用及相关分子机制，并从FDA批准上市药物库筛选到能有效抑制IMA生长和转移的新型HNF4α拮抗剂，为IMA治疗提供新靶点和策略。△ 图1国际权威肿瘤学杂志Cancer Research（IF=12.701）IMA是一种恶性程度较高的肺腺癌亚型，因初期极易被误诊为肺炎、肺结核等而耽误治疗，确诊时常处于中晚期。此时手术切除可能性低，常以放化疗为主要手段，毒副作用大，疗效差。近年来，分子靶向抗肿瘤药物在肺腺癌临床治疗中取得可喜的疗效，代表性药物如EGFR抑制剂易瑞沙和泰瑞沙等。这类药物具有特异性强、用药量低、毒副作用小、人体耐受性好等优点，应用前景广泛。但肺腺癌可细分为原位腺癌、微浸润腺癌、IMA、实体型腺癌等十余种分型，具有高度的组织学和遗传学异质性，必须进行个体化精准治疗。例如，IMA无EGFR突变却常具KRAS突变（非KRAS G12C）；对其而言，EGFR抑制剂不适用，但以KRAS突变为靶标又难以成药。因此，更多新的IMA分子靶点及相应靶向药物亟需研发。核受体HNF4α在人正常肺组织中不表达，而在约90%IMA中出现异常表达，可作为IMA辅助诊断标志物。然而，HNF4α在IMA发生发展中的作用及机制尚不清楚。本研究中，他们发现IMA细胞系及临床样本中表达的是由P2启动子驱动的HNF4α，并通过细胞水平和小鼠模型证实HNF4α依赖于其转录激活活性促进IMA的生长、侵袭和迁移。进一步研究发现，HNF4α转录激活lncRNA BC200的表达；而BC200作为HNF4α的下游分子，介导了HNF4α促IMA生长和转移的作用。在IMA细胞质中，BC200作为“桥梁”促进mRNA结合蛋白FMR1与肿瘤相关基因如EGFR和Twist等的mRNA的结合来调节这些mRNA的稳定性，从而促进IMA的生长、侵袭和迁移。反过来，BC200还能通过介导HNF4α mRNA与FMR1的结合来增强其稳定性，从而正反馈调控HNF4α的表达。基于上述发现，他们还从FDA批准上市药物库中筛选出了HNF4α新型拮抗剂前药霉酚酸酯（MMF），并通过体外及体内实验证实MMF的活性代谢物霉酚酸（MPA）能通过拮抗HNF4α来抑制BC200的表达和IMA生长及转移，具备开发成IMA靶向药的潜力。△ 图2 文章提出的HNF4α-BC200-FMR1反馈环在IMA生长和转移中的作用模型△ 图3 M和N分别为每组裸鼠肺内荧光素酶表达的图像和定量结果。文章中，体内验证MMF在IMA中的抗生长和抗转移作用的活体成像实验，使用了AniView100多模式动物活体成像系统进行拍摄。论文链接https://cancerres.aacrjournals.org/content/81/23/5904.abstract

【研究背景】血管生成是指从现有血管中内皮细胞生长而生成新的血管，一旦血管开始生成，被称为细胞的特殊内皮细胞就会开始发芽过程。由此，血管芽内皮细胞的长出标志着血管生成的开始，这一过程在生理学和病理生理学过程中至关重要。然而，细胞外基质（ECM）的机械特性如何调节细胞的形成在一定程度上被忽视了。细胞的特性是血管生成和组织工程的关键，它可以定向迁移到无血管区域，对终形成的血管形态起决定作用。迄今为止，各种生化信号分子因素如 MST1-FOXO1等多见报道，然而功能血管的建立需要生化和生物力学信号线索的结合，后者取决于组织工程和再生医学中使用的生物材料的特性。近期，北京大学口腔医学院的郭亚茹博士以作者在Bioactive Materials发表了题为：Matrix stiffness modulates tip cell formation through the p-PXN-Rac1-YAP signaling axis的研究文章。文章报道了基质硬度通过p-PXN-Rac1-YAP信号轴调节细胞形成，这项工作不仅有助于在组织工程和再生医学中寻找佳材料，也为肿瘤治疗和病理性血管再生提供了新的治疗策略。在生物材料设计和治疗一些病理情况方面具有特殊意义。邓旭亮教授为本文通讯作者。【研究概述】在这项研究中，作者研究了基质硬度对细胞形成的影响，并探索了基础机制。在肝癌细胞的外层发现CD31表达更高，组织硬度也更高。基质的硬度增加可以显著增加血管的生成和细胞富集基因的表达。硬度较大的基质增加了FAK和p-PXN的局灶黏附，提高了活性Rac1的水平，进而导致细胞骨架组织和细胞刚度增加。随后，YAP作为下游的力效应因子被激活并易位入核，上调靶基因的表达，终促进细胞的形成。p-PXN还可以减少细胞间的连接，从而促进细胞的形成。由此表明：基质硬度可通过p-PXN-Rac1-YAP信号轴调节细胞的形成。 【研究结果】硬度的增加还可以促进血管的生成（图1D），从三维（3D）EC球体（图1E）的芽入侵距离增加可证明这一点。与GM60和GM30凝胶（图1F）相比，硬凝胶（GM90）中球体的芽数量增加了2倍。qPCR分析表明，细胞富集基因，包括CD34、VEGFR2、DLL4、CXCR4、EFNB2和IGF2，在GM90基质（图1G）中显著上升。同时，更硬的凝胶中芽的宽度更厚，矩阵中含有更多和长的纤维状体（图1H和I）。由此数据表明，基质硬度增加可以促进血管生成和细胞的形成。图1. 基质硬度增强血管生成和细胞在体外和体内的形成。 在EC球形发芽模型中，从球体中产生的外层细胞和以下细胞分别被定义为细胞和茎细胞。未爬出球体的细胞被定义为密集细胞（图2A）。通过原子力显微镜（AFM），我们检测到每个细胞的16个位置，并制作了典型的力学热图（图2B）。细胞的刚度在数量上是茎细胞的两倍，是咽细胞的四倍（图2C）。此外，免疫荧光染色表明，细胞显示长应力纤维的增强组装，而在茎和密集细胞作用捆绑是相对较短的，并限制在细胞外围（图2D）。研究人员发现细胞中的YAT显示出明显的核定位，而YAT在咽细胞（图2D和E）中成为细胞质。通过免疫荧光、多功能单细胞显微操作系统FluidFM技术和原子力显微镜AFM，发现细胞扩散区域增加（图3A），粘附力（图3B和C）和细胞硬度（图3D），这表明 EC-ECM 连接增加，并通过 ECM 硬化提升细胞机械特性。另外，VP（YEP抑制剂）治疗显著降低了EC球体的延伸次数和芽入侵距离（图2F和G）。细胞富集基因也被VP（图2H）抑制。因此，可以推断基质硬度调节了ECs的细胞机械感知和机械传输，促进了YAC活化，终增强了细胞的形成。图2. 细胞、茎细胞和密集细胞的机械特性差异。图3. FluidFM粘附力检测过程示意图。 在确定了血管生成和细胞形成中EC亚型之间的机械差异后，作者探讨了ECM刚度通过PXN磷化调节细胞的形成，验证了 p-PXN 在硬 ECM 诱导细胞规范中的参与程度，进而推断，通过基质硬化强加的细胞形成需要PXN磷酸化。随后，作者验证了p-PXN-Rac1-YAP激活在ECM僵硬诱导细胞形成和血管生成体内的作用，研究人员通过在裸鼠体内皮下注射 HepG2 细胞创建肿瘤模型，并从 8 天起每天使用 VP 治疗一次（图4F）。4周后，在肿瘤胶囊（图4G）上发现发芽较少的血管，CD31、CD34和VEGF强度（图4H，图4I ）。VP治疗减少肿瘤体积（图4J）。这些数据表明p-PXN-Rac1-YAP信号轴与ECM硬化促进的细胞形成和血管生成有很大关系。图4. p-PXN-Rac1 通过激活 YAP 促进细胞的形成和血管生成。 图5. 发芽血管生成受ECM硬度影响的潜在机制的示意图。 综上，基质的硬度增加可以显著增加血管的生长、发芽和细胞富集基因的表达。硬度较大的基质增加了FAK和p-PXN在局灶黏附，提高了活性Rac1的水平，进而导致细胞骨架组织和细胞刚度增加。随后，YAP作为下游的力效应因子被激活并易位入核，上调靶基因的表达，终促进细胞的形成。 【研究意义】本研究加深了我们对细胞形成和血管生成机理的理解，有助于优化组织工程和再生医学的生物材料设计，为一些病理情况提供新的治疗策略。无论是组织工程还是血管再生，都应考虑机械特性，如针对细胞形成的刚度，以设计佳功能生物材料。此外，ECM可以在许多病理状态下变硬，如癌症的发展过程，随着变硬癌周围细胞数量的增加，迫切需要靶向p-PXN、Rac1或YAP的药物来有效防止肿瘤的生长和转移。 【研究利器】——FluidFM技术在生物活性材料领域的创新应用本实验研究人员采用了多功能单细胞显微操作系统——FluidFM技术，实现了单个细胞的分离，单个细胞粘附力的测量。瑞士Cytosurge公司多功能单细胞显微操作系统——FluidFM，是集原子力系统、微流控系统、细胞培养系统为一体的单细胞操作系统。主要功能包括单细胞注射、单细胞提取、单细胞分离、单细胞粘附力的测定、生物3D打印等。实验中FluidFM探针以3 μm/s靠近细胞，设定力为100 nN。当探针连接到到达设定点的细胞时，在探针中施加-650 mbar 的力，并保持5 s，以确保细胞被探针完全抓取。然后，在保持-650 mbar的压力，以1 μm/s的速度将探针抬高至100 μm的高度，从而将细胞从基板上完全分离。FluidFM系统完全记录了每个单细胞的Z轴高度和力距离曲线，并分析其粘附强度。每个条件下至少测量并获得20个力距离曲线。所有细胞粘附测量实验过程都是在 37 °C在5% CO2细胞培养环境下进行。图6. FluidFM进行单细胞分离示意图。 图7. FluidFM进行单细胞力谱测定示意图。 【文末小视频】 本研究实际DEMO视频【联系方式】为了更好的服务客户，Quantum Design中国子公司也为大家提供样品测试、样机体验机会，还在等什么？赶快联系我们吧！ 电话：010-85120277/78 邮箱：info@qd-china.com，期待与您的合作！【参考文献】[1] Y. Guo, F. Mei, Y. Huang, S. Ma, Y. Wei, X. Zhang, M. Xu, Y. He, B.C. Heng, L. Chen & X. Deng. Matrix stiffness modulates tip cell formation through the p-PXN-Rac1-YAP signaling axis. (2021) Bioactive Materials.

实验室加速老化测试和腐蚀测试被广泛用于快速评估材料在户外暴露在阳光、热、水和盐下的耐久性。测试的共同目标是找到在实验室和实际应用之间材料性能的相关性。由于材料老化和腐蚀的复杂性，以探索加速因子的形式发展加速老化试验和户外曝晒结果之间的关系是极具挑战性的，尽管户外曝晒和实验室测试相结合可以帮助实现这一目标。本次网络研讨会将讨论有关实验室加速老化和腐蚀测试的一些重要原则，以及如何开发一个测试项目以提供加速测试和户外曝晒之间好的相关性。我们将提供几个真实的案例研究，研究各种不同产品(包括油墨、涂料和建筑材料)在耐候性和腐蚀性方面与户外的相关性。网络研讨会时间：2021年8月17日（周二）上午10:00-11:00研讨会主题：Q-LAB免费网络研讨会：户外曝晒测试参与方式：网络参与，请扫下方二维码研讨会费用：免费主办单位美国Q-LAB公司：一家全球性的材料耐久性测试产品供应商。其生产的紫外老化试验机、氙灯试验机、盐雾试验机是目前国际最高端的老化实验仪器，特别是其QUV更是全球使用最广泛的老化试验机。翁开尔公司是Q-LAB在中国及东南亚行业总代理商。翁开尔公司是Q-LAB在中国及东南亚行业指定代理商。全力支持本次研讨会。主讲人瞿华盛（Kobe Qu）美国Q-LAB公司技术经理兼市场经理在耐候老化腐蚀测试领域有多年的工作经验。主要从事材料的耐候老化和腐蚀研究工作，包括测试标准的制修订，发表相关的技术文章等。帮助许多行业正确认识耐候老化和腐蚀测试的意义，建立正确的耐候老化测试方案。参与方式请扫下方二维码，注册成功后，您将受到系统发出的注册成功邮件，邮件里有唯一的参会链接，8月17日（周四）当天上午9:45后，可点击链接进入会场。期待您的参与！

星形胶质细胞是大脑中的细胞，长期以来被认为仅仅是神经元的支持细胞。近年来，对星形胶质细胞的研究日益增多，逐渐揭示了星形胶质细胞在脑功能中的重要性。Inserm、CNRS和法国生物跨学科研究中心学院的研究人员现在已经发现了它们在结束出生后大脑可塑性阶段中的关键作用，发现它们是感官和认知能力发展的关键。从长远来看，这些发现将使我们有可能设想出新的策略，在成人中重新引入大脑可塑性，从而促进脑损伤或神经发育障碍后的康复。这项研究已发表在《Science》杂志上。大脑可塑性是出生后的一个短暂的关键时期，在这一时期，大脑根据所接受的外部刺激（环境、相互作用等）重塑神经元的“线路”。这个时期的结束或“结束”标志着神经回路的稳定，与有效的信息处理和正常的认知发展有关。可塑性在未来仍然是可能的，尽管比生命开始时的水平要低得多。20世纪80年代的开创性研究表明，将不成熟的星形胶质细胞移植到成年动物的大脑中，会重新引入一段主要的可塑性时期。Inserm研究员团队和生物学跨学科研究中心从这一过程中获得灵感，揭示了迄今未知的导致可塑性闭合的细胞过程。大脑可塑期出现的问题可能会产生重大的长期后果。例如，如果一个人的眼睛状况使他不能正确地看东西，比如斜视（交叉眼），如果不及时治疗，相应的大脑线路就会永久性地改变。为了弥补这一点，研究人员试图通过确定一种治疗方法来重塑这种连接，这种治疗方法可以重新引入大脑的可塑性，即使大脑已经关闭。为了实现这一点，他们还试图更好地描述这种封闭背后的生物学机制。移植未成熟星形胶质细胞重建脑可塑性通过对小鼠视觉皮层的实验，研究人员表明，不成熟星形胶质细胞的存在是大脑可塑性的关键。随后，星形胶质细胞在可塑期参与中间神经元的发育成熟，最终导致其关闭。这种成熟过程是通过一种涉及连接蛋白30的新机制发生的，研究人员发现在成熟的星形胶质细胞中，连接蛋白30在闭合过程中水平很高。将星形胶质细胞移植到成年小鼠体内能重新引入大脑可塑性吗？为了找到答案，研究人员从幼鼠（1到3天大）的视皮层培养了不成熟的星形胶质细胞。这些不成熟的星形胶质细胞被移植到成年小鼠的初级视皮层，然后在单眼蒙蔽四天后评估视皮层的活动——这是一种用于评估大脑可塑性的标准技术。他们发现，与未接受移植的对照组小鼠不同，移植了未成熟星形胶质细胞的小鼠表现出高度的可塑性。这项研究提醒我们，在神经科学领域，我们不能只关注神经元。胶质细胞是星形胶质细胞的一个亚型，它调节着大脑的大部分功能。我们意识到这些细胞有积极的作用。神经胶质细胞比神经元不那么脆弱，因此是一种更容易作用于大脑的手段。胶质细胞占大脑细胞的一半以上。它们与神经元的细胞谱系不同，功能也有很大的不同。直到最近，它们还被认为是大脑的“清洁剂”，但研究人员意识到它们在释放分子方面也起着积极的作用。与神经元相比，它们发生在大脑发育的后期，不以同样的方式进行交流，并且占主导地位。

法国农业部12月8日表示，该国西南部的一家养鸭场发现高致病性H5N8禽流感。法国农业部在一份声明中说，国家卫生安全署（ANSES）参考实验室确认，贝内塞-马雷姆内市一家养殖场有6000只鸭子感染H5N8型病毒，并发现大量鸭子迅速死亡。法国已在三家宠物店出售的鸟类身上检测到H5N8型禽流感病毒1月6日，法国农业部后续通报，朗德省（Landes）养禽场发生22起家禽H5N8亚型高致病性禽流感疫情，5121只家鸭和珍珠鸡感染，274只死亡，2.5万只被扑杀。为保护我国畜牧业安全，防止疫情传入，海关总署、农业农村部发布关于防止法国高致病性禽流感传入我国的公告，公告规定禁止直接或间接从法国输入禽类及其相关产品，禁止寄递或携带来自法国的禽类及其产品入境，在进境运输工具（如船舶、航空器、国际列车等）上，如发现有来自法国的禽类及其产品，一律作封存处理。除了海关的严格查处，近日，国家市场监督管理总局国家标准化管理委员会也发布《高致病性禽流感诊断技术》国家标准。国家标准《高致病性禽流感诊断技术》 主要起草单位中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 、中华人民共和国北京海关 、中国动物卫生与流行病学中心。标准规定了高致病性禽流感临床诊断，样品采集、保存与运输，病毒分离与鉴定，血凝和血凝抑制剂试验，禽流感病毒RT-PCR试验和禽流感病毒荧光RT-PCR试验的技术要求。新的标准将替代GB/T 18936-2003,与前一版本标准相比，新版本标准主要技术变化如下：——增加了禽流感病毒RT-PCR试验；——增加了禽流感病毒实时荧光RT-PCR试验；——删除了琼脂凝胶免疫扩散（AGID）试验；——删除了间接酶联免疫吸附试验（ELISA）。以下是禽流感病毒RT-PCR试验详细流程：资料：《高致病性禽流感诊断技术》国家标准

中国科学技术部4月10日晚向媒体发布消息说，该部会同国家卫生和计划生育委员会已启动人感染H7N9禽流感科技应急防控研究项目，重点推进临床诊断试剂开发、疫苗研制等工作，预计在两个月内完成核酸诊断试剂的临床验证，7个月内完成人感染H7N9禽流感预防性疫苗研制。 　　新启动的人感染H7N9禽流感科技应急防控研究项目重点推进工作包括：全速推进核酸检测试剂的研发，重点开发能用于临床医院的核酸确诊诊断试剂，满足一线监测排查、临床诊断的需求 尽快完成人感染H7N9禽流感预防性疫苗研制，参照季节性流感疫苗生产工艺，力争以最快速度率先拿出产品 同步推进病原学研究，在毒力、致病力、传播力等方面拿到更多研究证据。 　　同时，紧密结合防控一线排查工作和患者救治工作，集成优势力量，协同部署人感染H7N9禽流感流行病学和溯源研究、人感染H7N9禽流感临床特征及临床预警和救治新技术的研究、人感染H7N9禽流感动物模型研究等工作。 　　“国家科技重大专项、‘863’(国家高技术研究发展计划)计划和科技支撑计划等前期部署形成的相关技术、产品、人才、能力储备，使本次疫情防控工作有了更多主动。”科技部社会发展科技司负责人介绍说，前期储备研究了不同亚型的甲型流感病毒分型核酸检测技术，为本次H7N9病例病原学的及时确认发挥重要作用 传染病重大专项在全国布局的网络实验室是当前疾病排查的主要力量 中国自主研发的磷酸奥司他韦颗粒(国产达菲)是目前临床初期救治的主要药物 超前部署的一类新药帕拉米韦三水化合物注射液(中国首个静脉给药的神经氨酸酶抑制剂)，也于4月5日正式审批通过，为重症患者、奥司他韦耐药患者的有效救治提供新产品支撑。 　　据介绍，中国“长三角”地区出现人感染H7N9禽流感疫情后，科技部迅速启动科技应对工作。4月4日成立科技应对工作组，拟定方案，组织诊断试剂、疫苗、药物、流行病学等方面的专家密切追踪疫情进展、防控一线需求和分析研判当前科技应对工作重点，并会同卫生计生委共同确定诊断试剂开发、疫苗研制、病原学研究、流行病学和溯源研究、临床救治研究、动物模型研究等重点任务和实施路径。

4月17日，在北京检验检疫局承担的国家质检总局科技计划项目“禽流感病毒H7N9亚型双重荧光RT-PCR定型技术研究”鉴定会上，专家组一致认为：该项目创新性地实现了对禽流感病毒H7N9亚型的一步快速定型，可在一次检测中确认样品中是否存在H7N9亚型禽流感病毒或其他H7亚型和N9亚型的禽流感病毒 在通用性、特异性、灵敏性上，技术优势突出。专家组同意项目成果通过鉴定，并建议在进一步扩大和完善动物临床验证实验基础上，尽快推广应用。 　　目前，在国内通用的确诊禽类中禽流感病毒H7N9亚型的检测技术中，除采用传统的鸡胚病毒分离方法外，通常采用核酸检测方法，如普通PCR方法和基于荧光RT-PCR的“二步法”，但还没有建立起采用荧光RT-PCR技术“一步法”检测禽流感病毒H7N9亚型的方法。 　　据该项目组负责人、北京局检验检疫技术中心动物实验室博士高志强介绍，项目在实验过程中，共建立了3种检测方法。最终的禽流感病毒H7N9亚型双重荧光RT-PCR检测方法是在禽流感病毒H7亚型和N9亚型单重荧光RT-PCR检测方法的基础上通过优化建立，从而实现了对禽流感病毒H7N9亚型的一步快速定型。这种方法不仅能检测最近流行的H7N9毒株，还可以用于筛查其他H7亚型毒株。此方法不仅引物特异，而且探针特异，这一“双特异”性保证了结果的准确性，同时比普通PCR检测技术要灵敏100~1000倍。 　　高志强还指出，本项目在实施过程中，制备了H7N9病毒的HA和NA基因全长的外标物质，具有均匀和稳定的特点，可在检测过程中对逆转录和PCR扩增这两个重要环节进行控制，对规范诊断检测试剂和实验室质量控制具有重要意义，使不同试剂的检测结果具有了可比性，可用于消除不同人员操作间的差异，解决了目前H7N9检测缺乏质量控制外标物质的现状。 　　鉴定会上，由来自中国农业大学、中国医学科学院、中国科学院、中国农业科学院等单位的7名专家组成的鉴定委员会审查了项目组提交的相关资料，听取了项目组的汇报，审阅了相关鉴定资料，最终同意项目成果通过鉴定。 　　北京局自2001年开始开展荧光RT-PCR检测技术研究，是国内首家将荧光PCR技术应用到检验检疫领域和动物疫病防控领域的单位，并在实践中不断发展完善荧光RT-PCR检测技术，先后建立了禽流感病毒、新城疫病毒、口蹄疫病毒等多项荧光RT-PCR检测技术，获得国内首个动物疫病荧光PCR检测新药证书。 　　据悉，自3月31日国家卫生和计划生育委员会通报上海和安徽发现3例人感染H7N9禽流感病例后，在国家质检总局有关领导的指导下，该局第一时间成立了禽流感检测技术研究应急专项小组。北京局局长齐京安号召：“疫情就是命令，我们要迅速行动、全力以赴，为保障人民群众身体健康作出检验检疫部门的贡献。”一声令下，科技人员纷纷行动起来：及时收集、查阅最新流感资料 第一时间获得此次H7N9亚型禽流感病毒的安徽株和上海株的基因序列 结合实验室多年整理保存的禽流感研究资料，重点针对HA基因和NA基因进行序列分析比对……经过一系列努力，最终找到了变异位点，确定了双重荧光RT-PCR检测技术研究方案。 　　北京局副局长李忠榜表示，该项目为禽流感病毒H7N9亚型的检测提供了快速、高效方法，能够检测到样品中微量禽流感病毒。该课题鉴定后，课题组还将做大量的验证工作，在实践的检验过程中不断完善并制定禽流感病毒H7N9亚型检测国家标准，以便将该技术尽早应用到防控工作中，为确保活禽和禽产品的进出口安全，为国内养殖企业禽流感疫情普查，为老百姓吃上放心禽产品提供服务。同时，该局会尽快将研究成果应用到检验检疫工作中，接受实践检验，为提高口岸一线的检测能力做好技术储备和技术支持工作。