佐剂肽

关于动物免疫，在多抗制备一部分里有一些讲解（点击这里查看），这里只简要讲述一下单抗制备中需要注意的几个问题。在概述部份已经讨论过，用来制备单抗的动物主要有小鼠、大鼠和兔，由于小鼠易饲养、小鼠单抗技术成熟、路线简单，因此是制备单抗使用的主流动物，这里主要以小鼠单抗制备展开讲述。免疫途径和周期：单抗制备中，免疫动物的方式一般第一针采用皮下免疫，后面的加强免疫采用腹腔免疫、腘内免疫、皮下免疫或者脾内直接免疫。首次免疫和加强免疫结束后，在融合前三天一般还要进行一次冲击免疫，以增加脾脏内浆细胞的数量。下面这张表列出了常见的免疫途径和周期：http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2013/11/A1384840870png_small.jpg 说明：FCA，弗氏完全佐剂；FIA，弗氏不完全佐剂；Quickantibody，北京康碧泉公司研制的佐剂。上表中第四种免疫方法产生的抗体大部份都为IgM，存在亲和力弱等缺点，慎用。关于操作的问题，这里只作一下简单的介绍，具体如何进行，需要在有相关经验的实验员指导下进行，也可以在网上找到相关视频进行学习。（1）皮下注射。皮下注射的操作有点像给人接种疫苗，即挑取动物的皮肤，将混好佐剂的抗原直接注射。一般皮下注射每个注射点注射30-50ul左右混有佐剂的抗原，每只小鼠注射6-8个点为宜。（有的资料上称这种方法为皮内免疫，造成这种概念上的混淆可能是由于早期工作者们的翻译过程出了问题），皮下操作一般由两人进行，一个协助固定小鼠，另一个进行免疫操作。（2）腹腔注射。腹腔注射比较简单，只需要一人操作，操作者由左手抓住小鼠尾巴和颈部皮肤，将小鼠翻转过来，腹部向上，将抗原直接注射到腹腔。如果抗原混有弗氏佐剂，建议注射在左侧腹腔，如果采用右侧腹腔注射，则在免疫过程中，很容易导致小鼠脾脏与腹膜粘连的情况，造成后期取出脾脏麻烦。（3）尾静脉注射。个人觉得尾静脉注射是技术要求最高的一种注射方式，操作者需要固定小鼠，然后将抗原注射到小鼠尾部静脉（正中间那根血管）。小鼠尾静脉比较细小，一般新手很难操作成功，需要在其它小鼠身上多次尝试才可以进行免疫操作（站长自己尝试了十多次都未成功）。静脉注射抗原对抗原的要求更高，抗原必须不含去垢剂和其它有毒成份，否则极容易引起动物死亡，而且免疫剂量也不宜过大。（4）脾内注射。脾内注射是效果最好的免疫方式，因为这种方式使得脾细胞直接与抗原接触，所以很容易引起免疫应答反应。但是很多人都认为这种方式操作复杂，而且死亡率高，但是参考了一些文献，加上自已实践操作，站长自己总结出了一套比较好的办法，成功率基本上在百分之百。具体操作方法：先用乙醚或戊巴比妥钠进行麻醉，乙醚麻醉过程比较简单，技术含量低，对于初学者比较适用，推荐。事先准备一块棉花，将少量乙醚倒在棉花上，用一烧杯倒扣住，将小鼠也扣在烧杯下，一般在一分钟内小鼠就可以晕到，此时将小鼠取出，用胶带固定在木板或实验台上（腹部向下，背面向上。无需无菌），用手术剪刀剪开背部左侧皮肤（大至就是脾脏所在的位置，不要剪开内膜），剪开小口后，用手将剪口撕大看到腹膜内脾脏即可将用注射器刺穿腹膜，插入脾脏，直接注射抗原，抽出注射器。然后用胶水（推荐AB胶，五金店有卖的）将剪口周围的毛粘好，胶干后在伤口周围涂上抗生素即可，无需要无菌操作。由于需要用到胶水，所以手术前不要用酒精消毒。（5）小腿肌肉注射。这是康碧泉公司的Quickantibody佐剂独有的免疫方法，具体操作是：先抓紧小鼠，用无名指固定一只后腿，将小腿部分用酒精消毒，将混好佐剂的抗原（根据佐剂说明书抗原与佐剂等体积混合）直接注入到小腿肌肉，稍稍停顿后拔出注射器即可。完成首次免疫和加强免疫后，可以取出少量血清进行效价检测（参见多抗制备中的血清采集与检测），达到足够高的效价后即可进行冲击免疫，冲击免疫完成后，应在96小时内完成细胞融合，否则相应的B细胞数量会下降到未冲击前的水平。在单抗制备过程中，除了通过免疫动物得到可分泌抗体的B细胞外，还可以将未免疫的小鼠脾脏取出，在体外进行免疫，从而大大加快制备周期，其基本方法是：取出未免疫小鼠的脾脏，处理成为单个细胞，然后在完全培养基中培养，同时加入一定浓度的抗原刺激其产生抗体。需要注意的是，这种方法由于不存在完整的免疫应答路径，所以只能产生出亲和力不成熟的IgM型的抗体，大部分实验中基本不能使用这种抗体（除非是专门研究IgM抗体特性）。

公司建厂时采购了几台上海宝尔纯水设备公司生产的超纯水机，现在想更换里面的滤芯（还是叫渗透膜？），但又不知道滤芯的材质、型号、接口大小等具体参数，设备型号是BRAIT-DOC-Purico-14,知道一个电话是021-64040161，同事打说是家庭座机，担心联系到骗子，大家谁知道哪里有做这个代理或者上海宝尔公司电话的请提供帮助！谢谢！大家如果有更好的解决滤芯的办法请留下您宝贵的墨痕！非常感谢！

从人类发明这个技术开始，单抗制备已经有37年的历史了，这37年以来，主流单抗制备的基本主线几乎没有什么改变，也就是下面这个流程： 抗原制备 动物免疫 细胞融合 克隆筛选 克隆化（亚克隆） Large-scale生产、纯化以及鉴定 但是不同的研究人员从不同的角度和细节对整个流程有了独到的视角，这里我简单地总结一下近十年以来的发展和前人的经验，基本都是站长自己道听途说，加上参阅一些文献总结出来的， 十年以前的技术革新择重点简要提一提。 抗原制备进展 抗原，基本上分三类： 蛋白、多肽和小分子化合物。 一般的制备过程没什么好说的了， 主要说多肽和小分子连载体的事。 多肽和小分子因为免疫原性弱，所以必须连接载体才能诱发免疫应答。 最常用的基本上就是KLH, BSA,OVA和GST， 但是觉得近几年以来，用多肽复合抗原肽（MAP）的比较多。其原理是把多肽或小分子连在多聚赖氨酸的骨架上，而多聚赖氨酸因为其结构具有高度重复性，所以不会像KLH等载体一样使动物产生抗体，这样就不会浪废有限的免疫系统资源。 毛病是这种形式的抗原在制备成本上贵许多，我记得一个MAP的制备报价大约在1500元人民币左右。 从获取方式来看，对于蛋白质类抗原，不仅可以重组表达（原核和真核）， 还可以直接从天然组织或细胞中分离。早期的时候人们经常干这种事，那是因为当时没有现在这么普及的分子生物学技术，很难得到重组蛋白。 但是最近20年以来，基本上都用重组蛋白了，重组蛋白生产技术非常成熟，而且生产也简单，容易扩大规模，但是慢慢地很多人意识到重组蛋白和天然的蛋白在结构上有时候有着极大的差异，所以不少人认为确实是天然蛋白免疫得到的抗体是最好的，有兴趣可以看看这篇文章：Generation and Characterization of a Panel of Monoclonal Antibodies Against Distinct Epitopes of Human CD146，一个典型的从天然组织中纯化出蛋白作为抗原制备单抗的例子。 在抗原的形式上，也是各式各样，根据自己的需要有不同的喜好，大部份人都推荐接近天然构象的蛋白，即使是重组蛋白，buffer 也尽量gentle， 另一些人则喜欢跑胶然后切胶打动物，还有的转膜后剪膜免疫动物（这一个通常和从天然组织中纯化的方法联用）。 还有人喜欢用过表达的细胞或转化的细菌作为免疫原（当然也有全细胞或者细胞组份裂解液作为免疫原的，此乃后话）。对于做免疫组化用的单抗制备，则还有更特殊的处理手段。 另一些人则认为，用DNA直接免疫也许更好。其方法是把cDNA连到真核表达载体中，然后直接注射动物，在佐剂的作用下载体就带着cDNA进入动物细胞，然后在动物细胞就有目的蛋白表达出来，这些蛋白从细胞释放出来后就可以引起免疫应答（整个理论还没有建立完整，一切都在YY中）， 这种方法免疫中，现在缺少有效的佐剂，所以免疫效果很难保证，不过在比较低的效价下，很多人也可以得到阳性克隆。 说了这么多，还是很沮丧，虽然看起来选择很多，但是能真正用到工作中的选择并不多，有时候是条件问题，有时候则是成本和精力问题。第一个话题就写这么多吧。 动物免疫 动物免疫故事比较多，简单点说。 实验动物的选择： 做单抗的动物最开始是小鼠，后来又有像epitomics这样的公司用兔子的，还有一些人用大鼠神马的，当然其它的动物的也有，据不完全统计，现在能用传统方法制备单抗的动物已经有二三十种了。 但是最主流的还是小鼠和兔子了。兔子不讨论，epitomics对其有特殊的专利，这个基本上和咱们没关系。小鼠，用得最多的还是Balb/C了，因为大多数骨髓瘤细胞（SP2/0, X63, Ag8.653,FO和NSO）都来自于Balb/C小鼠，为了使hybridomas稳定，所以实验小鼠基本上还是Balb/C。 不过有文献提到了用NZB/W小鼠制备高同源性单抗的，原因是NZB/W小鼠是一种容易发生自身免疫疾病的小鼠模型，一般在5个月以下时基本不会发病，但是对自身的蛋白仍然有潜在的排斥反应。 免疫佐剂： 这一个方向在近十几年以来倒是发展得很快。 最开始的时候Sigma的弗氏完全佐剂和不完全佐剂一直是黄金组合（铝盐佐剂也用得比较多），但是后来人们发现CFA/IFA毛病很多，诸如不利于动物健康、刺激免疫应答周期过长等等，于是各种新式佐剂层出不穷，几乎每家试剂公司都有自己独特的佐剂。而且有效成份也多种多样，如脂质体，CpG，细胞因子，分子伴侣，特殊化学药物（如左旋咪唑）， 细菌或病毒的全部组份或部份（如LPS，肽聚糖），甚至还有一些是中草药提取物（如蜂胶、皂甙，当归多糖）…… 在形式上，大部份还是延用了CFA/IFA的油乳性质，但是这两年来免乳化佐剂在国内发展比较快，如我们现在使用的Quickantibody就是，武汉这边还有另一个产品叫赛弗诺的也与其类似，同时这些新型的佐剂对抗原的使用量要求很低，而且免疫周期也短，所以比较受欢迎，毛病是商家对机理保密，用户无法获知其可能潜在缺点。 总之最后就变成了一种根据个人喜好而选择的产品。 当然另外还有人说佐剂不是必须的，不加佐剂也可以免疫得不错，站长自己没尝试过。 免疫部位：这个没什么好说的了，也基本上是根据喜好来的，皮下、腹腔、脾内、肌肉、腋下、脚垫、静脉，各种地方免疫都说得过去，而且大家都能成功，所以这个就没什么好选择的了，不过大部份人还是认为皮下是最有效的，因为皮下含有大量的DC细胞，而DC细胞是重要的APC。 这里需要提出的是有一种叫作RIMMS的免疫方式极少人用到，但是据说效果不错。 RIMMS即多位点重复免疫（repetitive immunizations multiple sites），意思是在相同的地方低剂量短间隔重复免疫，一般是在小鼠背上皮下选择四五个点，每三天左右在这些点进行低剂量免疫，一般十几天就可以完成免疫。 大家可以看这篇文献：Rapid development of affinity matured monoclonal antibodies using RIMMS和这篇：Shorter development of immunoassay for drugs application of the novel RIMMS technique enables rapid production of monoclonal antibodies to ranitidine， 不过成功的实例中，很多人都是取小鼠的淋巴结而非脾脏进行融合的，淋巴结不好取啊。 免疫周期和间隔： 大部份人基本都同意免疫周期和免疫间隔尽量长一点比较好，这样得到的抗体亲和力更高（除了上述的RIMMS外）。 甚至有人打完第一针后，再过九个月才打第二针的，作者说效果很好，这个方法显然不适合大规模免疫，不然动物管理的压力咱们是承受不起的。另外，一些新型的佐剂则强调短周期也可以得到高亲和力的抗体的， 市场上有很多佐剂宣称两周内即可完成免疫并得到高效价的血清的，实在是太快了。另外最近有文献还对白天免疫动物还是晚上免疫动物更好这一问题作出了探讨，比如这篇：The Circadian Clock Controls Toll-like Receptor 9-Mediated Innate and Adaptive Immunity ， 作者认为一些调控免疫的分子也有生物节律性，它们的表达水生是跟随生物钟有规律变化的，在这些调节分子表达水平比较高的时候进行免疫或许可以得到更好的免疫效果。

中科院武汉病毒研究所粘膜免疫学科组在防龋疫苗研究中又取得新进展。该学科组继Journal of Dental Research（JDR）2012年91卷第3期正式发表龋齿疫苗粘膜佐剂研究进展后，又一防龋疫苗研究结果即将在最新一期（JDR，2012年91卷第10期）正式发表。 龋齿是人类最常见的细菌性慢性感染疾病之一，主要由变形链球菌附着和定植于牙齿表面，从而导致牙齿局部脱矿和钙化组织的破坏而形成。龋齿的发病率很高，可以发生在人的任何年龄段，给患者带来难以忍受的疼痛并严重影响身体健康。武汉病毒所鄢慧民研究员带领的研究团队致力于细菌鞭毛素蛋白（flagellin）相关的粘膜佐剂研究和应用，通过该蛋白与防龋DNA疫苗联合鼻腔免疫，成功诱导了较高水平的特异性血清抗体应答和唾液分泌型IgA应答，有效抑制了口腔变形链球菌的定植和龋齿的形成，证明了重组鞭毛素蛋白是一种有效的防龋粘膜免疫佐剂（JDR March 2012,vol. 91 no. 3,pp.249-254）。 在此基础上，该学科组采用了融合蛋白表达技术，将鞭毛素蛋白佐剂和龋齿疫苗抗原PAc融合表达为一个既包含粘膜佐剂又包含疫苗目标抗原的单个重组蛋白，并通过鼻腔粘膜免疫诱导产生了高效的特异抗体应答，尤其是口腔特异IgA抗体应答。实验证明，8.5微克剂量的重组蛋白疫苗滴鼻免疫即可让大鼠患龋程度降低64.2%，免疫保护效应比以往各种防龋疫苗大大提高，成为一个具有应用价值的新型防龋粘膜疫苗(JDR October 2012,vol.91 no.10 pp.941-947)。 该研究得到了国家科技支撑计划（No. 2007BAI28B04）的支持。 论文链接http://www.cas.cn/ky/kyjz/201209/W020120919663882902083.jpg图：融合蛋白flagellin-rPAc疫苗滴鼻免疫大鼠后免疫应答效应和抗龋效应

http://www.ema.europa.eu/ema/index.jsp?curl=pages/news_and_events/news/2010/12/news_detail_001159.jsp&murl=menus/news_and_events/news_and_events.jsp&mid=WC0b01ac058004d5c1&jsenabled=true12月7日消息 - 前沿医学资讯网据欧洲药品管理局网站报道，赛诺菲巴斯德已正式向欧洲药品管理局（EMA）提请撤回Emerflu的集中上市许可申请。Emerflu是一种大流行流感疫苗（裂解病毒、灭活、佐剂）A/Vietnam/1194/2004 NIBRG-14，30μg凝血素+氢氧化铝佐剂，混悬注射。该药原计划在正式宣布流感大流行期间用于流感预防。根据模拟疫苗程序，核心文件在正式宣布流感大流行期间提交用于预防流感。该公司于2007年4月27日向EMA提交了Emerflu上市许可申请。2009年3月19日，收到人用药品委员会（CHMP）对Emerflu的否定意见。提请撤回申请时，欧洲委员会尚未决断。在其官方信函中，赛诺菲巴斯德表示，基于CHMP的顾虑——所提供的数据不能使委员会作出肯定的效益/风险平衡的结论，该公司决定撤回其申请。关于Emerflu和其撤回时的科学评估声明的更多信息参见问答文件。CHMP下一次会议将于2010年12月13-16日召开，会后此文件与该公司的撤回函将在EMA网站上将公布。（前沿医学资讯网）

九肽做核磁应用几百兆的就可以了？请多多指教

[font=宋体][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/hybridoma-technology][b]杂交瘤技术[/b][/url]又称细胞融合技术，是将两个或多个细胞融合成一个。[/font] [font=宋体]融合后形成的杂交瘤细胞承袭了两亲本细胞的特征。[/font] [font=宋体]自发的细胞融合很少发生，当加入一种融合剂，如：聚乙二醇（常用）、仙台病毒或溶血卵磷脂后，两种细胞就可发生融合。[/font] [font=宋体]首先是质膜互相融合，形成具有两个或多个核的异核体，细胞进一步分裂时，核互相融合，形成了杂交细胞。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]杂交瘤技术优缺点：[/font][/b][font=宋体]优点：与传统的免疫动物方法制备抗体相比，利用杂交瘤技术可以制备出高纯度的单抗，并且可以进行单克隆抗体的大量生产。[/font][font=宋体][font=宋体]缺点：[/font][font=Calibri]a.[/font][font=宋体]操作步骤繁琐。[/font][font=Calibri]b.[/font][font=宋体]利用杂交瘤技术生产出的单克隆抗体多为鼠源性，而鼠源性抗体在应用中有诸多问题，例如被人类免疫系统所识别，产生人抗鼠抗体[/font][font=Calibri]( HAMA[/font][font=宋体]）反应、在人体循环系统中很快被清除等。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]杂交瘤技术应用：[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]①诊断应用：单克隆抗体在疾病诊断中发挥了重要作用，其优点在于诊断准确且无交叉反应，例如在乙型肝炎及潜伏的乙型肝炎病毒的诊断中，单克隆抗体能显著减少假阴性的漏诊。[/font][font=宋体]②治疗载体：单克隆抗体也可作为治疗疾病的载体。通过与抗肿瘤药物结合，单克隆抗体能在体内选择性集中攻击肿瘤细胞，具有靶向性，从而减少对正常组织的损伤并减轻抗癌药物的副作用。因此，载药单克隆抗体被誉为“生物导弹”。[/font][font=宋体][font=宋体]③异种蛋白质问题：目前大多数单克隆抗体为鼠[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]鼠型，对于人体来说属于异种蛋白质，容易引起排异反应，限制了其在治疗中的应用。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]④人[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]人型单克隆抗体的研究：为了解决排异问题，研究者正在努力研发人[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]人型单克隆抗体，以利于其在治疗中的广泛应用。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]杂交瘤技术常见问题解析：[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]①电融合和[/font][font=Calibri]PEG[/font][font=宋体]融合的区别？[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]PEG[/font][font=宋体]化学融合是利用聚乙二醇分子能够改变细胞膜结构的特性来实现细胞融合的过程。聚乙二醇可以使两个细胞接触点质膜的脂质分子发生疏散和重组，两个细胞接触部位的质膜由于相互亲和以及彼此的表面张力作用，从而发生细胞融合。电融合则是先通过高频交流电压，使细胞成串珠状排列，实现点接触；然后施加方波脉冲，击穿两个细胞接触部位的质膜，质膜脂质分子发生重组，同时由于细胞表面张力作用，完成细胞融合。电融合法比[/font][font=Calibri]PEG[/font][font=宋体]融合法有明显的优点：细胞融合率高，有利于杂交瘤的筛选；电脉冲击穿对细胞的损伤小，有利于融合后细胞的生长增殖；可直接观察融合过程；便于有目的地控制选择融合条件。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]②为什么要推荐进行[/font][font=Calibri]2~3[/font][font=宋体]轮有限稀释获得稳定的杂交瘤细胞株？[/font][/font][font=宋体][font=宋体]阳性单克隆细胞的获得通常进行至少[/font][font=Calibri]2[/font][font=宋体]轮有限稀释，原因主要考虑两点。第一，有限稀释过程中，大多数是通过实验者在显微镜下观察细胞团状态来判定是否是单克隆，存在一定的主观经验值，至少进行两轮有限稀释可以增加判断的准确性；第二，杂交瘤细胞由两个细胞融合而成，存在基因的不稳定性，连续[/font][font=Calibri]2[/font][font=宋体]轮有限稀释，客观上增加了筛选中细胞培养时间，有利于淘汰不稳定的杂交瘤细胞株。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]③为什么要使用核酸免疫？[/font][font=宋体]重组蛋白由于免疫靶向明确、剂量可控等优势，通常作为动物免疫阶段的首选免疫原。但有些重组蛋白因为表达纯化困难，很难大量获得并用于动物免疫；另外，重组蛋白与天然样本之间存在或多少的结构差异。而核酸免疫，跳过了蛋白表达纯化的过程，成功避开了蛋白生产的难题，通过核酸体内表达的蛋白结构也更加接近天然蛋白，故而可以作为重组蛋白免疫的有效补充手段。但核酸免疫的免疫剂量很难判断，整体免疫效价也会普遍低于蛋白和多肽免疫。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]④除弗氏佐剂之外，免疫佐剂还有哪些？[/font][font=宋体][font=宋体]免疫佐剂是指那些同抗原一起或预先注入机体内能增强机体对抗原的免疫应答能力或改变免疫应答类型的辅助物质。佐剂的免疫生物学作用是增强免疫原性、增强抗体的滴度、改变抗体产生的类型、引起或增强迟发超敏反应等。除经典的弗氏佐剂外，各类不同功能的佐剂也层出不穷，比较常见的有：[/font][font=Calibri]1[/font][font=宋体]）无机佐剂，如磷酸铝佐剂、氢氧化铝佐剂；[/font][font=Calibri]2[/font][font=宋体]）生物类佐剂，如以细菌胞壁或产物为主要组成的佐剂；[/font][font=Calibri]3[/font][font=宋体]）具有佐剂活性的细胞因子类，如[/font][font=Calibri]GSF[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IL1[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IL2[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IFN -[/font][font=宋体]γ等；[/font][font=Calibri]4[/font][font=宋体]）人工合成佐剂，如[/font][font=Calibri]cpG[/font][font=宋体]等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]⑤杂交瘤融合后主克隆接种[/font][font=Calibri]96[/font][font=宋体]孔细胞培养板数量通常是多少？[/font][/font][font=宋体][font=宋体]融合后的主克隆细胞接种[/font][font=Calibri]96[/font][font=宋体]孔细胞培养板的数量与融合效率和脾细胞多少有密切关系。[/font][font=Calibri]PEG[/font][font=宋体]化学融合后的主克隆，通常一只小鼠的脾细胞可以接种[/font][font=Calibri]8-15[/font][font=宋体]块[/font][font=Calibri]96[/font][font=宋体]孔细胞培养板；电融合因为融合效率大大提高，通常一只小鼠的脾细胞可以接种[/font][font=Calibri]30~50[/font][font=宋体]块[/font][font=Calibri]96[/font][font=宋体]孔细胞培养板。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多[url=https://cn.sinobiological.com/services/platform/hybridoma-development][b]杂交瘤开发平台[/b][/url]详情可以关注：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/platform/hybridoma-development[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]义翘神州：蛋白与抗体的专业引领者，欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b]

急 想买台做塑化剂的GPC大概多少钱啊

前几天听说现在有用一台微波即做消解又做萃取的？主要是玩具，能不能用一台微波即做重金属消解又做邻苯二甲酸脂的萃取。什么牌子什么型号！谢谢

大家的仪器的都是单纯做一种基体的吗？我们买的4460做三种基体，纯铜、纯金、纯银，由于生产需要有的时候每天激发台要更换好几次，大家有没有类似情况的？是否需要每次更换基体都要标准化？我现在的铜总是做不稳，更换激发台以后TePbSbZnNi这几个元素经常会出现比较大的波动，请各位老师给分析一下原因

韩国水产品新加项目：萘啶酮酸、二氟沙星、头孢氨苄、交沙霉素、吉他霉素、氟苯尼考、庆大霉素、新霉素、泰妙菌素、甲氧苄胺嘧啶、林可霉素、吡喹酮、苯并芘、一氧化碳、组胺，那个机构能够全做的，请回帖或者联系我座机：0532-83101695！谢谢、

[font=宋体]在生物医学领域，[url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/pab-development][b]多克隆抗体[/b][/url]是一种非常重要的工具。多克隆抗体是由免疫动物产生的一类具有识别多种抗原表位的抗体，具有广泛的应用价值。制备多克隆抗体的方法有多种，其中最常用的是免疫接种和杂交瘤技术。本文将介绍多克隆抗体的制备方法及流程。[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]多克隆抗体的制备方法[/font][/b][font=宋体]主要是通过动物免疫，刺激宿主产生大量抗体。通常选用兔子和山羊作为免疫动物，因为动物反应良好，能提供足够数量的血清。用于免疫的动物应适龄、健壮、无感染性疾病、最好为雄性，此外还要注意动物的饲养，以消除动物的个体差异以及在免疫过程中死亡的影响。一般采用皮下或背部多点皮内注射免疫原，多次免疫之后，激发动物机体免疫系统产生抗体，最后获取动物高免血清获得抗体；进一步通过纯化及验证后才可以使用。[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]利用兔子制备多克隆抗体涉及[/font][font=Calibri]4[/font][font=宋体]个关键步骤，具体概述如下[/font][/font][/b][font=宋体]：[/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [font=宋体]步骤[/font][font=Calibri]1[/font][font=宋体]：抗原制备[/font][/font][font=宋体][font=宋体]蛋白抗原或多肽抗原合成是多抗制备的第一步。目标抗原的纯度对于抗体来说很关键，直接影响最终多克隆抗体的质量。抗原中的杂质（＜[/font][font=Calibri]1%[/font][font=宋体]）也可能具有免疫原性（例如许多细菌抗原），可能导致抗体识别杂质，而不是目标抗原。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州拥有重组蛋白表达平台，在[/font][font=Calibri]CHO[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]HEK293[/font][font=宋体]和大肠杆菌中有着丰富的重组蛋白表达经验，可提供专业高效的抗原制备服务。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [font=宋体]步骤[/font][font=Calibri]2[/font][font=宋体]：动物免疫[/font][/font][font=宋体][font=宋体]多克隆抗体制备时，如何选择动物取决于这[/font][font=Calibri]3[/font][font=宋体]个方面：所需抗血清的数量、抗原物种与免疫动物之间的亲缘关系以及免疫原制备的经验。兔子通常是多抗制备的首选，体积大，每次可抽取多达[/font][font=Calibri]25mL[/font][font=宋体]的血清，对兔子本身无显著的不良影响。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]免疫佐剂是多抗制备时用于增强机体免疫应答的辅助物质。弗氏佐剂是一种最常用的免疫佐剂，分为完全弗氏佐剂和不完全弗氏佐剂。在佐剂存在的情况下，将蛋白抗原通过肌肉注射、皮内注射或皮下注射的方式注入选定种类的动物体内。初次免疫的[/font][font=Calibri]4~8[/font][font=宋体]周后，开始进行加强免疫，并每隔[/font][font=Calibri]2~3[/font][font=宋体]周进行[/font][font=Calibri]1[/font][font=宋体]次。初次免疫和每次加强免疫之后，都需要进行动物采血并测定抗体效价。当抗体效价达到预期水平时，即可放血制备抗血清。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [font=宋体]步骤[/font][font=Calibri]3[/font][font=宋体]：抗体纯化[/font][/font][font=宋体]对于多克隆抗体的制备，亲和纯化是一种高效的纯化方法。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]蛋白[/font][font=Calibri]A/G[/font][font=宋体]亲和纯化可从抗血清富集免疫球蛋白[/font][font=Calibri]G[/font][font=宋体]（[/font][font=Calibri]IgG[/font][font=宋体]），并且除去大量不需要的蛋白。但产品仍然有大量非特异性[/font][font=Calibri]IgG[/font][font=宋体]的存在，可能导致在各种[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]、免疫组织化学和蛋白质免疫印迹等免疫检测中背景偏高。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]为了从抗血清中分离出特异性多克隆抗体，通常使用抗原特异性亲和纯化。抗原亲和纯化可除去大量非特异性[/font][font=Calibri]IgG[/font][font=宋体]组分，并且富集与目标抗原发生特异性反应的免疫球蛋白组分。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [font=宋体]步骤[/font][font=Calibri]4[/font][font=宋体]：质量控制[/font][/font][font=宋体][font=宋体]纯化后，抗体需要经过一系列[/font][font=Calibri]QC[/font][font=宋体]检测，以确保多克隆抗体的质量。抗体浓度测定是在[/font][font=Calibri]280nm[/font][font=宋体]（[/font][font=Calibri]A280[/font][font=宋体]）测定其[/font][font=Calibri]OD[/font][font=宋体]值。使用[/font][font=Calibri]SDS-PAGE[/font][font=宋体]电泳用于检测多抗的纯度。[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]法可用于测定多克隆抗体的效价。根据下游检测需求，可对抗体进行标记，用于[/font][font=Calibri]IHC[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]WB[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]等实验。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]关于更多[url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/pab-production][b]多克隆抗体制备[/b][/url]详情可以关注：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/pab-production[/font][/font][font=宋体] [/font][font=Calibri] [/font]

生物制品认证要点生物制品系指以天然或人工改造的微生物,寄生虫生物毒素或生物组织及代谢产物等为起始材料,采用生物学,分子生物学或生物化学等相应技术制成,并以相应分析技术控制中间产物和成品质量的生物活性制品,用于预防,治疗和诊断传染病或其他疾病.其硬件认证要点如下.不同生产工序操作必须有效隔离,不得相互妨碍.厂房洁净室(区)内表面(墙,地面,三棚等)应平整光滑,无裂缝,接口严密,无颗粒物脱落,并能耐受清洗和消毒,无积尘,不长霉.洁净室(区)的水,电,汽,建筑管线必须暗装.生产厂房必须按生产工艺和产品质量要求划分洁净级别,洁净室(区)内空气的尘埃粒子数和微生物数应符合规定,结果须予以记录.生物制品生产环境的空气洁净度级别要求:(1)100级:灌装前不经除菌过滤的制品其配制,合并,灌封,冻干,加塞,添加稳定剂,佐剂,灭活剂等 (2)10 000级:灌装前需经除菌过滤的制品其配制,合并,精制,添加稳定剂,佐剂,灭活剂,除菌过滤,超滤等 (3)100 000级:原料血浆的合并,非低温提取,分装前的巴氏消毒,轧兽及制品最终容器的精洗等 口服制剂其发酵培养密闭系统环境(暴露部分需无菌操作) 酶联免疫吸附试剂的包装,配液,分装,干燥 胶体金试剂,聚合酶链反应试剂(PCR),纸片法试剂等体外免疫试剂 深部组织创伤用制品和大面积体表创面用制品的配制,灌装.洁净室(区)的窗户,天棚及进入室内的管道,风口,灯具与墙壁或天棚的连接部位均应密封.100级洁净室(区)和无菌制剂灌封室不得设水池或地漏.生物制品生产车间必须与青霉素类,头孢菌素类,激素类,抗肿瘤类化学药品,同位素药品生产车间严格分开.同位素类生物制剂的生产厂房须符合国家关于放射保护的要求,并应获得同位素使用许可证.10. 生物制品的生产用菌毒种与非生产用菌毒种,生产用细胞与非生产用细胞,强毒与弱毒,死毒与活毒,脱毒前与脱毒后,含牛血清与不含牛血清的制品,活疫苗与灭活疫苗,人血液制品,预防制品等加工或灌装不得同时在同一生产厂房内进行,其贮存要严格分开.不同种类的活疫苗的处理及灌装应彼此分开.强毒微生物及芽胞菌制品的区域与相邻区域应保持相对负压,并有独立的空气净化系统.卡介苗生产厂废话 结核菌素生产厂房必须与其他制品生产厂房严格分开,其生产设备要专用.芽胞菌操作直至灭活过程完成之前必须使用专用设备.炭疽杆菌,肉毒梭状芽胞杆菌和破伤风梭状芽胞制品须在相应专用设施内生产.聚合酶链反应试剂(PCR)的生产和检定试剂,在使用阳性样品时,必须有符合相应规定的防护措施和设施.生产人免疫缺陷病毒(HIV)等检测试剂,在使用阳性样品时,必须有符合相应规定的防护措施和设施.以人血,人血浆或动物脏器,组织为原料生产制品必须使用专用设备,并与其他生物制品的生产严格分开.强毒微生物以及目前尚无有效预防治疗措施的有关病原微生物的加工处理,生产制品须在严格隔离的专用生产厂房内进行,操作致病性微生物须符合生物安全等级要求.不合格,回收或退回产品必须单独存放,并有明显标志.与制品直接接触的设备必须表面光洁,平整,易清洗,耐腐蚀,不与所加工的制品发生化学变化或吸附制品.纯化水,注射用水的生产设备必须保证水质质量.贮水罐,输入管道,管件阀门必须为无毒,耐腐蚀的材料制造.贮不罐密闭,通气口必须有不脱落纤维疏水性的除菌过滤装置,输水管道线能防止滞留,并易于拆洗,消毒.生物制品生产用菌毒种,细胞须按《中国生物制品规程》要求建立菌毒种,细胞原始种子库存和生产种子库.菌毒种,细胞来源必须历史清楚,能溯源,传代谱系清楚,并有记录.有菌毒种,细胞全面检定记录,出入库数量与登记数相符,在适宜条件下分库存放.物料的贮存条件下不得使其受潮,变质,污染或发生差错.麻醉药品,剧毒药品,放射性药品的验收,贮存,保管,使用,销毁必须严格执行国家有关规定.

说起“备胎”往往给人的感觉是因为业务不精没有愿意要的而做顶替工作的，这些人往往对其他人来讲是不重要的，从而也不受重视，其实不让，实验室的“备胎”往往应该是业务精通的，才能做。下面我就讲讲我做“备胎”的那几年，其实感觉很感激那段日子，就在那是自己学到了比别人更多的知识，掌握了更广阔的经验，才对自己的业务有了更快速的发展.... 那是刚刚毕业的时候，自己因为在面试时的突出表现被科长看重在技术科当差，说起那段时间还是比较深刻的，因为刚刚入职所以很多的业务不熟悉，自然工作上比较吃力，没有办法科长给新来的员工安排了师傅。所谓的师傅就是我们的前辈，他们和我们的工作是一样的，人家也有自己的工作，同时谁也不愿意培养自己的竞争对手来熟悉业务然后来抢自己的工作，毕竟还是计件的。所以在半年的时间了作为新来的技术员也就磕磕绊绊走了过来，可是期间很多的新员工因为业务的不熟练、车间的刁难而渐渐的离开了岗位另寻它处。现在想来我是那样的坚强竟然走了过来，但是因为没有师傅真正授业，所以工作上难免出错，没办法科长让我们这些新来的有容易“犯错”的员工做了备胎。 我的第一个“备胎”工作是在车间催面料，当时的样品面料很少一次还织不了一匹布，车间往往是吃计件工资的所以谁也不愿意干这种既不挣钱还对质量要求那么高的货，产量还耽误了。所以车间主任往往会安排给新来的员工来做，那段时间是叫一个苦啊，想想两个新人做一匹样品可想而知错误的几率是多高，更何况出了错误还是技术科的责任，因为咱虽然技术不高可是挂了一个技术的名，没办法只能是晚上加班，早上早起为的是偷偷学习车间技术，因为这段时间是领导下班的点。为了这个给人家帮忙修吊扣，抗面料，最终将这一门手艺算是学到手了，可是好景不长。科里来了一个“降级使用”的中层领导，公司没法安排，总起来说这个工作还是比较轻松的所以就给安排到这个岗位了，我自然而然也去下一站当“备胎”了.... 我的第二个“备胎”工作是染整车间，因为这段时间因为有的员工辞职，新员工还没有招上来所以暂时先让我顶着这个工作，还好有了前段时间的经验，我很快与车间的兄弟姐妹（一线工人）达成了一片，在这里起码我的工作不是被动得了，车间技术员也是和我不错的，因为我们所染的面料是小批量的，专门给我们用了一台小型的染色机，从此专门跟着一个小型染色师傅学习，很快对染色的基本流程掌握了包括割绒、烘干等各个工序的流程，这段时间的工作比上一个工种还是有进步的，这是科长说的，同时科长的脸上也有了点滴的“笑容”，可是好景不长，我又要进行下一个“备胎”了，原因是公司新招的员工专业很符合，并且有五年的工作经验，我自然而然的要腾地方了... 记得当时科长找到我说：“你的专业本来就是服装设计，叫你干制造、染整有点亏了，我看你还是干老本行的好，还是做回我们的工艺员吧”，我嘴上答应可是心里暗暗打鼓，整整快两年没干了，再说原来干的也不好啊！回来了能干好吗？于是硬着头皮应下了。接下来的工作确实不好干，车间一看到原来的“出错王”回来了，没有一个给正脸的。每当去车间做样品，主任都会说都干了这么多长时间了不用工人做了，你自己做没问题，人家你哪里的谁、谁、谁都是自己干的。那里、那里、还有那里是你需要的设备，自己去做吧！好吗？车间的货又给了我自己，我暗想人家是干了几十年的老师傅了，我算是干啥的，没办法还得自己干，于是凭着学校里学的那几年登机器的本事开始干上了，开始的时候确实不熟练，登个设备和开车差不多，“呼”的一下蹿出去了，还好不是开车要不然早上天了。最终还是慢慢的把样品给“拼”其来了，虽然不好看应该能拿出手。于是，安然的回宿舍睡觉了（但是凌晨2：00多），回到宿舍细想想刚才的样品，应该没有什么问题可是怎么做的和可供的样品不太一样：坏了，领子上反了。想到这里自己吓得出了一身冷汗，连忙有爬起来向车间跑去，到了那里是早晨五点左右。上夜班的师傅看到我又回来了，细小的打趣到：“怎么又回来了，还想全程陪着我们这些老太太”，虽然这样我还是有些不好意思地说“领子上烦了”，想想那声音肯定是带着哭腔的。打趣的大姨听到后，有些不忍了，于是停下自己手中的活帮我拆了样品有重新帮我上的领，中间还想我讲述了设备如何操作才能保证样品质量的一些知识，等到样品准备玩已经是上班的时间了，还好没有耽误客户的交期。 这样磕磕绊绊又干了半年，期间干了几个月的统计员、质控员。终于我的合同也到期了，边不加思索走进了离职的行列。正好有一家公司招检测员，要求能够了解车间流程的员工，正好感觉自己的条件很适合所以应聘了检测员。从此在这一行业这个岗位干了差不多十年了，到现在位置自己也感到组长了，官虽然不大但是当有同事遇到问题的时候，我能够原原本本的分析出出原因并能够正确的给她们出谋划策，心里那份喜悦自然而生，回想起“备胎”的那段往事，自己不免庆幸和安慰！总结 有据古话叫“塞翁失马焉知非福”！不论是我们“备胎”的原因是什么，只要摆正心态，珍惜每一次学习的机会来武装自己，最终机会是属于我们有准备的人的。

测定过氧化氢用到钛试剂，就是用四氯化钛和10%盐酸配制，增量法配制。我做的时候发现四氯化钛都是烟状，要慢慢加，整个天平间都是烟雾，想问我到底应该怎么做，我查不到相关的注意事项。拜托了

如何做药品药剂的电子台帐（excel格式）？单位的药品药剂管理方面并不很完善。最近内审过后，正要整改。现在看来，是要利用电子台帐来对药品药剂进行登记、出入库管理、库存明细等方面的管理了。不知道各位大虾有没有好的建议或者有现成的模板以供参考啊？ps：单位的药品药剂也不算太多，大概总共有12个试剂试剂柜（能装满一半），加一个不锈钢柜。主要做重金属、农药残留还有肥料、土壤的常规检测。主要试剂有三大强酸、农药残留所用的乙腈等试剂，还有常规的一些盐类、指示剂。

本人是做铝 想求购一台二手光谱仪 铝基的 有的朋友可以联系我 QQ52408773

便携式pH计可以代替台式pH计做实验室pH值测定吗?

钛试剂配制！！如：在50毫升容量瓶中，加入10毫升盐酸溶液（1+9），称量后，加入约10克四氯化钛（含量为99%），再称量，用盐酸溶液稀释至刻度。由两次称量之差计算钛的含量。请问大家：这里计算的钛含量是前面提到的四氯化钛的含量么？还是计算出四氯化钛后还要经过计算得出钛的呀？不太清楚。。。第一次做，请教大家，帮帮我！！

亚甲基双水杨酸杆菌肽混剂(效价)的测定 用液相色谱法 我做不出峰 没有相关方法

正戊烷做内标 溶剂甲醇 是不是不会太准确啊，含量重复性很差，怎么解决？样品挥发性也很强。客户要求就用正戊烷。换成乙苯，含量重复性还可以。哪位大侠可以解决。

最近来了一批钛的样品，做含氢量分析的，那位大虾可以推荐一下助溶剂的选择及购买厂家，最好有联系方式，不胜感激！

现有一个小肽,约有四个氨基酸,想做核磁共振,不知选什么样的溶剂,看文献上做环肽时很多用吡啶,不知为什么?

PH计用6.86和9.18两点校准，然后测碱性PH标准物质，保证值是9.22，但测出的结果偏低。有一次测量在结果范围之外。基本可以肯定座机和电极正常。用新启用的ph计包括座机和配套电极，同样的方法测量，结果值尽管在范围内，和保证值相比还是偏低。估计用一段时间，就会在结果值范围之外。配置溶液用的是超纯水，仪器自带温度探头，进行温度补偿。我注意到，电厂的去离子水和实验室超纯水机制的的水，ph值都不到6.00。是否与此有关？求教有什么办法？因为我们时常要考ph值项目。

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振动试验台、冲击试验台在两次校准之间是否需要做期间核查？

我们的实验室初次认证，不知道化学试剂个玻璃仪器的台帐如何做，请问哪位前辈有相关的表格模板或者图片，能否发一份给我，谢谢！

有没有做轮胎试验的的同仁，想咨询一下几台重要轮胎检测设备的检定？谢谢

这几天做液相，由于溶剂太多，使所测浓度太低，于是浓缩了一下，结果太稠了，用注射器针头抽得时候很费劲，我用的是PEG400,有人用过没？鉴于这种情况，该怎么办

公司处于厦门集美区杏林，现引进一台ICP-OES（电感藕和等离子体发射光谱仪），需要建设一间实验室以配合该仪器的使用。请有实验室设计、施工资历的厂家速与我联系：座机:0592-6277051手机：15960807431E-mail:xm_xushaohui@126.com