亲和素

目前国内市场上流通的检测产品多为检测单一毒素的亲和柱和固相萃取柱，这些产品进行净化处理时存在操作繁琐、污染大、定量差、耗时长的特点，尤其是目前流行使用的免疫亲和柱净化成本高，操作繁琐，造成企业和国家质检机构的检测成本居高不下。针对这一问题，Pribolab公司的技术研发人员已经研究出了同时高效准确的处理多种毒素的多毒素免疫亲和柱，可同时检测黄曲霉毒素、赭曲霉毒素、玉米赤霉烯酮、呕吐毒素、伏马毒素和T2毒素等11种毒素(aflatoxins, ochratoxin, zearalenon, deoxynivalenol, fumonisins and T2-Toxin)，一次过柱，得到多种毒素。这样可以更加省时省力省心。

检测黄曲霉毒素M1、B1、B2、G1、G2时，样品前处理均要使用到免疫亲和柱，查了下月旭的免疫亲和柱有如下的几种：黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2：免疫亲合柱（Welchrom®Aflatoxin G1 G2 B1 B2 货号：01140-00031 ） 免疫亲和柱：Welchrom® Immunoaffinity Column (3 mL) （以下部分简写为Welchrom® IAC）（中药材） Welchrom® Aflatoxin M1乳制品中M1： 黄曲霉毒素免疫亲和柱：Welchrom® IAC (1ml，25支[/si

为了方便广大产品用户使用Pribolab霉菌毒素免疫亲和柱，总结了各类柱子的使用方法1. 取样，处理样品。2. 过柱，样品经过PriboFast®霉菌毒素免疫亲和柱处理。3. 冲洗，清洗免疫亲和柱除去杂质。4. 洗脱，用纯甲醇清洗吸附的霉菌毒素（推荐分两次清洗，详见说明书）。5. 检测。各类毒素经免疫亲和柱处理结果均符合国内外的标准。

本产品的测定的基础是抗原抗体反应，黄曲霉毒素单克隆抗体连接在柱内凝胶上，样品中的黄曲霉毒素经过提取、过滤、稀释，然后将样品提取液缓慢的通过黄曲霉毒素免疫亲和层析柱，在免疫亲和柱内，毒素与抗体结合，之后洗涤免疫亲和柱除去没有被结合的其他物质。用甲醇洗脱黄曲霉毒素，然后注入到分析仪器中用于检测。操作程序：符合GB/T 18979-2003 国标方法----将免疫亲和柱连接于泵流操作架的10mL 注射器下。准确移取10mL 样品提取液注入注射器；1.富集:将空气压力泵与注射器连接，调节压力使提取液以约2-3mL/min(1 滴/3 秒)流速缓慢通过免疫亲和柱，直至2-3mL 空气通过柱体；2.洗涤: 用10mL PH7.0 PBS 清洗，再以10mL 水淋洗柱子2 次，弃去全部流出液，并使2-3mL 空气通过柱子3.洗脱可采取以下方式之一进行: 优选2 A.洗脱1: 准确加入1.0mL 色谱级甲醇洗脱,孵育30秒以上(孵育即甲醇在柱子中浸泡),然后以流速为1-2mL/min 过柱，收集全部洗脱液供检测用。 B.洗脱2: 为保证洗脱充分,建议以1.5mL 色谱甲醇分两步进行洗脱，流速为1-2mL/min(1 滴/秒,重力即可) 。首先，加入0.5ml 甲醇洗脱，重力过柱，当溶剂通过柱子后，等待30 秒后再加入1ml 甲醇进行洗脱，过柱前孵育30 秒以上(孵育即甲醇在柱子中浸泡)。收集全部甲醇洗脱液供检测用。注：1.如样品处理后仍然很粘稠，请加大离心力及离心时间，或选择减少加入亲和柱中的样品量，避免出现亲和柱堵塞。2.如样品本底复杂，洗涤步骤可全部采用PBST 清洗。3.亲和柱可短期内于常温保存，长期保存建议2-8℃储存(5-6℃最佳)，不可冻存;4.使用前，免疫亲和层析柱需回至室温（22-25℃）。

为答谢广大客户对安谱实验beacon免疫亲和柱的支持，现针对黄曲霉毒素亲和柱系列产品进行买二赠一活动，活动产品种类任意搭配，等您来组合！ 附件：[url=http://www.anpel.com.cn/UpFile/Tech/00922/%E9%BB%84%E6%9B%B2%E9%9C%89%E6%AF%92%E7%B4%A0%E5%85%8D%E7%96%AB%E4%BA%B2%E5%92%8C%E6%9F%B1%E4%BF%83%E9%94%802018.5.pdf][color=#337fe5][u]Beacon黄曲霉毒素免疫亲和柱年中大促.pdf[/u][/color][/url][align=center][img]http://www.anpel.com.cn/UpFile/Admin/image/20180516/20180516125243_1475.jpg[/img][/align]

感觉坛子里做黄曲霉毒素检测的很少啊，做过的都是用什么检测方法？试剂盒免疫亲和柱-HPLC-荧光检测器免疫亲和柱-荧光光度计，等等方法各有优劣，大家来讨论讨论，用过什么方法，哪种方法比较好？

我们现在在使用的肝素免疫亲和柱是用注射器推样子的那种，想找找有没有能直接插在固相萃取装置上的小柱，不用注射器一个一个推，这样样品才可以成批处理。。。。各位大神请赐教！！！谢谢大伙！

Pribolab霉菌毒素免疫亲和柱使用方法 1.取样，处理样品。 2.过柱，样品经过PriboFast®霉菌毒素免疫亲和柱处理。 3.冲洗，清洗免疫亲和柱除去杂质。 4.洗脱，用纯甲醇清洗吸附的霉菌毒素（推荐分两次清洗，详见说明书）。 5.检测。各类毒素经免疫亲和柱处理结果均符合国内外的标准。

黄曲霉毒素免疫亲和柱和净化柱有什么差别啊，看到了北京泰乐祺科技有限公司提供MycoSep226 多功能净化柱，还有MycoSep228 多功能净化柱，还有MycoSep227多功能净化柱，还有MycoSep112多功能净化柱，请问他们有什么区别啊，是填料不同还是有什么具体说法？还是根据什么分的，那个效果更好啊

现在在用的肝素免疫亲和柱，是用注射器推样子的那种，没办法大批处理，大家有没有好用的免疫亲和柱，比如有没有那种能插在固相萃取装置上的小柱，求个厂家。。。或者有没有其他的好方法

用于亲和色谱的理想载体应具有下列特性：⑴不溶性：不溶于水；⑵渗透性：疏松网状结构，容许大分子自由通过；⑶有一定硬度，最好为均一的珠状；⑷具有大量可供反应的化学基团，能与大量配基共价连接；⑸非特异性吸附能力极低；⑹能抗微生物和酶的侵蚀；⑺有较好的化学稳定性；⑻亲水性。选择配基根据对纯化大分子的特异性的全面认识。　　选择也的配基有两条标准：第一是蛋白质和配基之间必须有强的亲和力，解离常数在5mM以上不是好配基； 相反亲和力太高也是有害的，因为在解离蛋白质──配基复合物时所需的条件就要强烈，样可能使蛋白质变性。例如用抗生物素蛋白作配基纯化含生物素的羧化酶时，生物素──抗生物素蛋白复合物的解离常数达10-15M，解离时需要pH1.5，6M盐酸胍，在这种条件中。羧化酶数已经变性。选择配基的第二标准是，配基必须具有适当的化学基团，这种基团不参与配基与蛋白质之间特异结合，但可用于活化和载体相连接，同时又不影响配基与蛋白质之间的亲和力。 琼脂糖凝胶亲水性强，理化性质稳定 （商品名：Sepharose）；聚丙烯酰胺凝胶理化性质稳定，耐有机溶剂及去污剂， 抗微生物能力强，特别适应用配基与提取物亲和力比较弱的物质。葡聚糖凝胶： 有良好的化学及物理性质，孔经小。 纤维素非特易吸附严重，廉价，易得。

黄曲霉毒素M1、M2检测所用免疫亲和柱(GB 5009.24～2016)要求对其柱容量进行验证应该怎么做？

[font=宋体]链接：[/font]https://bbs.instrument.com.cn/topic/7752272问题描述：[font=宋体]亲和色谱有哪些用途？[/font]解答：a)[font=宋体]亲和色谱（[/font]affinitychromatography[font=宋体]）是将生物活性配体（如酶、抗体、激素等）键合到多孔微粒固体基质为固定相，不同[/font]pH[font=宋体]的缓冲溶液为流动相，依据生物分子与固定相配体间的特异、可逆的相互亲和作用力差异，形成可解离的配位复合物，实现分离和纯化。[/font]b)[font=宋体]亲和色谱的用途很广泛，可以用来从细胞提取物中分离纯化核酸、蛋白，还可以从血浆中分离抗体。分离重组蛋白就经常使用亲和色谱，通过基因修饰为蛋白加上一些人为的特性，这些特性使蛋白选择性地与配体结合，从而达到分离的目的。亲和色谱的另一大用途是从血浆中分离抗体。[/font]以上内容来自仪器信息网《样品前处理实战宝典》

大家在用免疫亲和柱-高效液相色谱法测定黄曲霉毒素和呕吐毒素等真菌毒素时，有没有一些技术要点可以一起分析下，比如前处理过程、净化过程等。新人刚接触这块，希望大家能多指导，十分感谢！

今天做了黄曲霉毒素B1的检测，用的是免疫亲和柱，回收率只有50%，加标是在称完样品之后加的之后加70%甲醇水提取

目前国内市场上流通的检测产品多为检测单一毒素的亲和柱和固相萃取柱，这些产品进行净化处理时存在操作繁琐、污染大、定量差、耗时长的特点，尤其是目前流行使用的免疫亲和柱净化成本高，操作繁琐，造成企业和国家质检机构的检测成本居高不下。因此多毒素共同净化检测产品的研发迫在眉睫，可喜的是部分公司已经研究出了同时高效准确的处理多种毒素的多毒素免疫亲和柱，例如PribolabCombiAOZDFT-IAC可同时检测黄曲霉毒素、赭曲霉毒素、玉米赤霉烯酮、呕吐毒素、伏马毒素和T2毒素(aflatoxins, ochratoxin, zearalenon,deoxynivalenol, fumonisins and T2-Toxin)，这样可以更加省时省力省心。相信在不久的将来针对多毒素同时检测方式的研究会更上一层楼。

亲和层析过程中的注意事项1.上样亲和层析纯化生物大分子通常采用柱层析的方法。亲和层析柱一般很短，通常10cm左右。上样时应注意选择适当的条件，包括上样流速、缓冲液种类、pH、离子强度、温度等，以使待分离的物质能够充分结合在亲和吸附剂上。一般生物大分子和配体之间达到平衡的速度很慢，所以样品液的浓度不易过高，上样时流速应比较慢，以保证样品和亲和吸附剂有充分的接触时间进行吸附。特别是当配体和待分离的生物大分子的亲和力比较小或样品浓度较高、杂质较多时，可以在上样后停止流动，让样品在层析柱中反应一段时间，或者将上样后流出液进行二次上样，以增加吸附量。样品缓冲液的选择也是要使待分离的生物大分子与配体有较强的亲和力。另外样品缓冲液中一般有一定的的离子强度，以减小基质、配体与样品其它组分之间的非特异性吸附。生物分子间的亲和力是受温度影响的，通常亲和力随温度的升高而下降。所以在上样时可以选择适当较低的温度，使待分离的物质与配体有较大的亲和力，能够充分的结合；而在后面的洗脱过程可以选择适当较高的温度，使待分离的物质与配体的亲和力下降，以便于将待分离的物质从配体上洗脱下来。上样后用平衡洗脱液洗去未吸附在亲和吸附剂上的杂质。平衡缓冲液的流速可以快一些，但如果待分离物质与配体结合较弱，平衡缓冲液的流速还是较慢为宜。如果存在较强的非特异性吸附，可以用适当较高离子强度的平衡缓冲液进行洗涤，但应注意平衡缓冲液不应对待非特异性洗脱。2.洗脱亲和层析的另一个重要的步骤就是要选择合适的条件使待分离物质与配体分开而被洗脱出来。亲和层析的洗脱方法可以分为两种：特异性洗脱和非特异性洗脱。（1）特异性洗脱特异性洗脱是指利用洗脱液中的物质与待分离物质或与配体的亲和特性而将待分离物质从亲和吸附剂上洗脱下来。特异性洗脱也可以分为两种：一种是选择与配体有亲和力的物质进行洗脱，另一种是选择与待分离物质有亲和力的物质进行洗脱。前者在洗脱时，选择一种和配体亲和力较强的物质加入洗脱液，这种物质与待分离物质竞争对配体的结合，在适当的条件下，如这种物质与配体的亲和力强或浓度较大，配体就会基本被这种物质占据，原来与配体结合的待分离物质被取代而脱离配体，从而被洗脱下来。例如用凝集素作为配体分离糖蛋白时，可以用适当的单糖洗脱，单糖与糖蛋白竞争对凝集素的结合，可以将糖蛋白从凝集素上置换下来。后一种方法洗脱时，选择一种与待分离物质有较强亲和力的物质加入洗脱液，这种物质与配体竞争对待分离物质的结合，在在适当的条件下，如这种物质与待分离物质的亲和力强或浓度较大，待分离物质就会基本被这种物质结合而脱离配体，从而被洗脱下来。例如用染料作为配体分离脱氢酶时，可以选择NAD+进行洗脱，NAD+是脱氢酶的辅酶，它与脱氢酶的亲和力要强于染料，所以脱氢酶就会与NAD+结合而从配体上脱离。特异性洗脱方法的优点是特异性强，可以进一步消除非特异性吸附的影响，从而得到较高的分辨率。另外对于待分离物质与配体亲和力很强的情况，使用非特异性洗脱方法需要较强烈的洗脱条件，很可能使蛋白质等生物大分子变性，有时甚至只能使待分离的生物大分子变性才能够洗脱下来，使用特异性洗脱则可以避免这种情况。由于亲和吸附达到平衡比较慢，所以特异性洗脱往往需要较常的时间和较大的洗脱条件，可以通过适当的改变其它条件，如选择亲和力强的物质洗脱、加大洗脱液浓度等等，来缩小洗脱时间和洗脱体积。（2）非特异性洗脱非特异性洗脱是指通过改变洗脱缓冲液pH、离子强度、温度等条件，降低待分离物质与配体的亲和力而将待分离物质洗脱下来。当待分离物质与配体亲和力较小时，一般通过连续大体积平衡缓冲液冲洗，就可以在杂质之后将待分离物质洗脱下来，这种洗脱方式简单、条件温和，不会影响待分离物质的活性。但洗脱体积一般比较大，得到的待分离物质浓度较低。当待分离物质和配体结合较强时，可以通过选择适当的pH、离子强度等条件降低待分离物质与配体的亲和力，具体的条件需要在实验中摸索。可以选择梯度洗脱方式，这样可能将亲和力不同的物质分开。如果希望得到较高浓度的待分离物质，可以选择酸性或碱性洗脱液，或较高的离子强度一次快速洗脱，这样在较小的洗脱体积内就能将待分离物质洗脱出来。但选择洗脱液的pH、离子强度时应注意尽量不影响待分离物质的活性，而且洗脱后应注意中和酸碱，透析去除离子，以免待分离物质丧失活性。对于待分离物质与配体结合非常牢固时，可以使用较强的酸、碱或在洗脱液中加入脲、胍等变性剂使蛋白质等待分离物质变性，而从配体上解离出来。然后再通过适当的方法使待分离物质恢复活性。分离物质与配体的结合有明显影响，以免将待分离物质同时洗下。

SN/T 1771-2006 进出口粮谷中T-2毒素的测定 免疫亲和柱-液相色谱法2006-04-25发布，2006-11-15实施。[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=98911]SN/T 1771-2006 进出口粮谷中T-2毒素的测定 免疫亲和柱-液相色谱法[/url]

我们都知道免疫亲和柱是一种采用先进的单克隆抗体技术开发的一系列免疫亲和柱产品。 拥有高特异性和高亲和力;符合国内外霉菌毒素限量标准；用于ELISA法，高效液相色谱法，应光光度法等；并且可以用于复杂样品的检测，包括食品、饲料、调味品等复杂基质； 我们也知道，使用一般的免疫亲和柱时，需要再使用一个转换头，令实验的操作非常复杂。 不用担心，这里就有一款不再需要转换头的免疫亲和柱，可直接与泵流操作架联接，使用起来非常的简便，解放了操作人员的双手，减轻了实验的负担！

我了解到PriboMIPTM固相亲和柱是通过聚合物聚合过程构建一个三维网络来识别模板分子的形状及功能位点而得到一个固定相。PriboMIPTM固相亲和柱的选择性来自源于合成技术中运用到的分子印记聚合物技术。而且每个PriboMIPTM展青霉素固相亲和柱包含有100mg的吸附剂.但是谁知道普瑞邦固相亲和柱使用过程中都有哪些需要注意的事项？？？

现在用免疫亲和小柱柱后衍生法测定板栗中的黄曲霉毒素，以前是G2、G1、B2、B1效果都挺不错，不过最近发现板栗在G2的时间一直都有峰，一开始怀疑是污染了，我就从头做到尾的做了试剂的空白，并且做了一个花生油的空白样品，结果发现两者都是阴性，基本上应该不是前处理过程的污染，同时还有个奇怪的现象是，用板栗做加标回收实验，加标中G2竟然每次都比样品要低，其余三种加标正常.......，不知道是什么原因，请各位高手指点一二....,是不是板栗的基质问题，但前段时间做板栗也没有出现这种现象，我对黄曲霉G2的性质也不太了解，是不是又什么物质与G2的荧光有相似，但G2一起时，又能相互抵消呢，还是本来就是最近的板栗原料就有问题啊.....请各位不吝赐教·····谢谢........

原理是里面的抗原抗体的结合，然后萃取出毒素，再进行测定。免疫亲和柱我在网上搜了一下，也通过朋友问了一下，有个普瑞邦的柱子还不错，其实测定的时候还会用到光化学柱后衍生器。为了解决样品过柱时的繁琐，解放双手提高效率，Pribolab公司推出了一款简单、好用的免疫亲和柱架体系——泵流操作架，用于辅助免疫亲和柱的使用。该产品采用坚固、耐化学腐蚀的结构和材料，含有8个操作位，可同时处理8支免疫亲和柱，其中含2个大体积30ml，满足不同样品需要，大大提高了处理效率。采用正压，不会出现流速过快，流速控制开放式，容易清洁，而且能够很好的配合普瑞邦免疫亲和柱，无需转接头。操作架的可拆卸性和便携性也给了实验操作更多更灵活的空间。现在检测真菌毒素也挺多的，各种产品琳琅满目，但真正好用的，老牌的进口的都很贵，而且他们也没有专业的实验室，普瑞邦在国内有总代理，而且又专业的实验室，

论坛的各位大拿，在使用免疫亲和柱检测赭曲霉毒素时，不同厂家的IAC柱处理有那么一些差异，各位在实际应用时遇到过类似的情况吗？1笔者用的是凯斯科的小柱，它们家最明显的一点是样品中一定要加氯化钠，不加氯化钠柱效降低，我查了食品的国标和饲料的国标，食品中对于油脂、蛋白含量比较高的（如食用植物油、大豆、油菜籽等）都标明了要加氯化钠，而饲料默认都加氯化钠。氯化钠作用是降低蛋白脂类等大分子的溶解，从而降低对目标物的干扰。应用时加了氯化钠之后回收确实比不加要好很多。在使用过程中，[b][size=12px][color=#ff0000]通常对于基质复杂的样品，稀释液和淋洗液都用PBS代替水，对于降低杂质影响、减少杂峰干扰效果显著，不管哪家的产品都是这样！[/color][/size][/b]2网上查资料发现2019年CNW出过一篇免疫亲和柱条件优化的报告，主要从稀释液和淋洗液（水、PBS）进行了验证：A稀释时用纯水，淋洗分三种①20ml水（回收率24.41%）②10ml水+10mlPBS（回收率21.13%）③20mlPBS（回收率65.16%）B稀释时用PBS，淋洗分四种①20ml水（回收率70.71%）②10mlPSB+10ml水（回收率55.90%）③[color=#ff6666]20mlPBS（回收率99.34%）[/color]④[color=#ff6666]10ml水+10mlPBS（回收率82.91%）[/color]并未提到前处理时需不需要加盐。可见安谱着重点在于稀释液和淋洗液。3跟同行聊天，他们用的是美正小柱，据说厂家的技术反馈，他们家的小柱着重点在于洗脱，洗脱时在洗脱液中要需要加入乙酸（即酸化甲醇），对于目标物的解离效果最佳。公司条件有限，成本控制比较严格，无法对几个品牌进行验证，大家在应用过程中有遇到类似的问题或者困惑吗？欢迎来交流~

[font=&]免疫亲和柱其原理是将特异性抗体结合的凝胶填充到柱体中，选择性吸附样液中的待检物，从而对毒素样品起到非常针对性的纯化作用，过柱净化后的样品液可直接用于色谱或ELISA等方法对待检物的含量进行检测。[/font]免疫亲和柱的有效期是针对其中的特异性抗体设置的吗？超过有效期后免疫亲和柱还能使用吗？[font=&][size=16px][/size][/font]

[b][font=宋体]问题描述：[/font][font=宋体]在用免疫亲和柱[/font]-[font=宋体]高效液相色谱法测定黄曲霉毒素和呕吐毒素等真菌毒素时，有哪些技术要点？特别是前处理过程、净化过程等方面。[/font][font=宋体]解答：[/font][/b][font=宋体]（[/font]1[font=宋体]）测定食品中黄曲霉毒素的技术要点：[/font][font=宋体]a.[/font][font=宋体]前处理过程：样品提取溶剂一般用甲醇或乙腈的水溶液。[/font]GB5009.22-2016[font=宋体]《食品安全国家标准[/font] [font=宋体]食品中黄曲霉毒素[/font]B[font=宋体]族和[/font]G[font=宋体]族的测定》提取液用的是乙腈：水（[/font][i]V/V[/i][font=宋体]）[/font]=84[font=宋体]：[/font]16[font=宋体]，提取时要让提取液和样品充分混合，通常超声[/font]20min[font=宋体]。净化首选相应的免疫亲和柱，操作步骤按照柱子使用说明即可。需要注意的是有机相洗脱时需要注意控制流速（控制[/font]2~3[font=宋体]秒[/font]/[font=宋体]滴），氮吹时气流要缓慢，不要把液体全部吹干，近干就可以，否则会严重影响回收率，最后用初始流动相定容。[/font][font=宋体]b.[/font][font=宋体]上机检测过程：黄曲霉毒素[/font]B[sub]2[/sub][font=宋体]、[/font]G[sub]2[/sub][font=宋体]本身就可以产生很强的荧光，不需要衍生。而[/font]B[sub]1[/sub][font=宋体]、[/font]G[sub]1[/sub][font=宋体]分子的二呋喃结构中碳碳双键的吸电子诱导效应，致使其分子荧光强度减弱，不衍生的话达不到标准限量要求。通过对双键衍生变成饱和碳碳单键可增强[/font]B[sub]1[/sub][font=宋体]、[/font]G[sub]1[/sub][font=宋体]的荧光强度，通常采用的衍生方法有柱前三氟乙酸衍生、柱后碘衍生和光化学衍生等，[/font]GB 5009.22-2016[font=宋体]对前两种衍生步骤做了详细说明。柱前三氟乙酸衍生优点是不需要增加额外衍生设备，但操作较为繁琐，影响因素较多，增加了前处理时间以及结果不确定度。柱后碘衍生的稳定性、重现性更好，但需要增加柱后衍生设备（泵和衍生管），同时由于衍生需要在衍生管中进行，增加了柱后死体积，易造成色谱峰变宽，且碘本身容易被氧化，每次试验都要重新配置。光化学衍生是将反应线圈绕在紫外灯外，当流动相进入反应圈时，[/font]B[sub]1[/sub][font=宋体]、[/font]G[sub]1[/sub][font=宋体]被衍生成荧光较强的物质，类似与三氟乙酸的反应，但同样需要单独购买光化学衍生设备。[/font][font=宋体]（[/font]2[font=宋体]）测定食品中呕吐毒素（脱氧雪腐镰刀菌烯醇[/font] DON[font=宋体]）的技术要点：[/font][font=宋体]a.[/font][font=宋体]前处理过程：呕吐毒素极性较强，易溶于水等极性溶剂，因此[/font]GB5009.111-2016 [font=宋体]《食品安全国家标准[/font] [font=宋体]食品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇及其乙酰化衍生物的测定》使用的提取试剂是水，不用甲醇或乙腈的原因是该标准[/font]DON[font=宋体]是使用紫外检测器在[/font]218nm[font=宋体]处测定，加入有机试剂的话会将样品中如色素等大量杂质提取出，干扰目标物检测。前处理过程也是用免疫亲和柱法，注意事项与黄曲霉毒素类似。[/font][font=宋体]b.[/font][font=宋体]上机检测过程：由于[/font]DON[font=宋体]紫外最大吸收波长在[/font]220nm[font=宋体]附近（[/font]GB 5009.111-2016[font=宋体]标准使用[/font]218nm[font=宋体]），流动相甲醇和水比例对[/font]DON[font=宋体]与样品杂质的分离度影响很大，[/font]218nm[font=宋体]波长处色谱图上会有一个很大的杂质峰（可能是与[/font]DON[font=宋体]结构性质相近的能被免疫亲和柱保留洗脱的物质）。标准上给出的甲醇：水（[/font][i]V/V[/i][font=宋体]）[/font]=20/80[font=宋体]比例是针对标准推荐的色谱柱，实验时要根据自己使用的色谱柱对流动相比例进行调节，否则很可能造成杂质峰与[/font]DON[font=宋体]分离度不好，影响定性定量。有研究表明，选择[/font]DON[font=宋体]次吸收波长（[/font]240nm[font=宋体]），虽然[/font]DON[font=宋体]响应值有所下降（能满足标准检出限要求），但该干扰杂质下降更多，也可以考虑作为备选波长。紫外相对荧光更容易受到杂质干扰，可能出现“假阳性”判定，有条件的话选用二极管阵列检测器（[/font]DAD[font=宋体]）可以进行全波长扫描，得到三维谱图，有助于排除“假阳性”样品。[/font][font='微软雅黑','sans-serif'][color=black][back=white]领取更多《实战宝典》请进：[url]http://instrument-vip.mikecrm.com/2bbmrpI[/url][/back][/color][/font][font='微软雅黑','sans-serif'][color=black][back=white] [/back][/color][/font][align=left][color=red] [/color][/align]

【综述】 亲和膜色谱法研究进展（作业都贴上来啦） 膜亲和色谱是人们将亲和色谱和膜技术结合起来研制的，以膜为基质的亲和色谱，其基本原理是将微滤膜或超滤膜经表面改性活化处理后，偶联上合适的配基，使固定在膜载体上的配基特异性地与待分离的生物大分子结合成复合物，再经洗脱是生物大分子得以分离纯化。因此亲和膜色谱技术即具有膜技术分离快，处理量大的特点，又具有亲和色谱特异性高的优点。目前亲和膜色谱法已成为分离纯化生物大分子的重要手段之一。链接到膜基质上的配体分为两大类：生物特异性配体和基团特异性配体，后者又称为通用性配体。以此为依据，可以对膜亲和色谱法进行分类，常见的有生物亲和色谱，免疫亲和色谱，金属螯合亲和色谱等。 生物亲和色谱中连接到基质上的配体是存在特异性相互作用的生物大分子，如酶与底物，酶与抑制剂，激素与受体等，因而具有高度的选择性。但是这类生物大分子通常价格昂贵且不易连接到基质上，限制了它们在大规模工业生产中的应用。 免疫亲和色谱是将抗原抗体中的一方连接到基质上来吸附纯化另一方的色谱分离技术。随着可利用的单克隆抗体技术的发展，免疫亲和色谱的应用日益广泛，期工业化应用前景广阔。 金属螯合亲和色谱又称固定化金属螯合亲和色谱，是Porath等首先提出来的。在上世纪70年代他们将铜离子、锌离子通过螯合剂亚氨基二乙酸交联到Agatose上，利用金属离子与蛋白质表面组氨酸等的配位作用选择性的分离对金属离子有亲和里的蛋白质。期理论基础是不同条件下配位键的形成和解离，即过渡金属离子（铜，铁，锌，镍等）与蛋白质表面的组氨酸，色氨酸，半胱氨酸等电子供体形成配位复合物，因而连接上这些金属离子的载体就能选择性的吸附含有咪唑基或巯基的肽类或蛋白质。吸附力的大小在很大程度上取决于蛋白分子表面咪唑基或巯基的稠密程度。此外，不同的金属离子对亲和力大小也有影响。80年代，人们又提出用微孔的膜作支撑基质，充分发挥了膜过程设备简单，易放大，成本低，分离速度快，可连续操作等优点，是生物工程产品的工业化大规模分离纯化得以实现。 近年来，利用固定化金属螯合亲和膜分离纯化蛋白质的研究取得了很大进展。美国cuno公司曾报道用以木纤维为原料的复合纤维素离子交换机金属螯合膜色谱分离纯化人尿激酶；鲍时翔等人采用ProteinA中空纤维膜成功的 从人血清中分离出免疫球蛋白。另据报道，Iwata等在聚丙烯膜上接枝甲基丙烯酸缩水甘油酯，制得铜离子亲和膜用于吸附含有组氨酸-亮氨酸的多肽以及牛血清蛋白。Klaus等则以化学改性的聚砜作为膜材料，制得金属离子螯合亲和膜，用于组氨酸，苯丙氨酸，苏氨酸和丙氨酸等小分子氨基酸混合物的分离；Ruckenstein等开展了用聚乙酰氨基葡萄糖亲和膜分离溶菌酶的研究。 随着研究的深入，科学家又提出通过遗传学的重组技术，在待分离的蛋白质表面连接上对金属离子有亲和性的氨基酸残基（如组氨酸，半胱氨酸，色氨酸等），以促进蛋白质的分离和纯化，使固定化金属螯合亲和膜分离纯化蛋白质的应用前景更加广阔。【参考文献】魏琪，姚汝华，鲍时翔。固定化金属螯合亲和膜制备及性能研究柴红，陈欢林，刘茉娥。固定化金属离子亲和膜分离技术方法和原理Porath，J,Carlsson J,Olsson I et al。Nature【J】1975,258：598-599张亚辉，杨严俊。纤维素金属螯合亲和膜用于蛋清中功能性蛋白的分离纯化。鲍时翔，石国君，姜炜。蛋白中空纤维膜吸附分离单克隆抗体大连工学院无机化学教研室编。无机化学：下册。北京高等教育出版社，1985,182-186陶慰孙编著，蛋白质分子基础。北京，人民教育出版社，1982.252-260seraficaGC，pimbley J，BelfortG.Protein Fractionation using fast flow immobilized metal chelate affinity membranes。Biotech and Bioeng，1994，43:21-36

原理：在破坏的果汁或果浆中有展青霉素的抗原不稳定，然后做成人工合成的亲和柱。优点:常温保存 优化的萃取过程 操作简单，类似IAC，时间30分 适合用于不同样品 高特异性富集，净化展青霉素，并可移除干扰物

黄曲霉毒素检测有用到免疫亲和柱和净化柱，这两者具体有什么区别么，从原理和操作各方面来讲有这方面的专家么，给我们分享一下