荧光胺

最近在想一个问题，怎么用荧光做生物胺？请做过的人来一起谈谈啊。测定条件，效果，重复性，线性，测得是总量还是每种生物胺的量？等等问题

核 酸 的 定量测定在生物分析化学中是一个十分重要的课题川.利用核酸对小分子荧光探针的荧光增强或碎灭作用来研究小分子探针和DNA的相互作用或进行核酸的定量分析，方法比较简单，应用较广Ir1.我们观察到阳离子荧光染料甲苯胺蓝与DNA相互作用时，荧光被碎灭.基于此原理，建立了高灵敏荧光分光光度法测定DNA和RNA的新方法.所用试剂简单、操作简便，且受背景荧光干扰小.

请问用荧光素FITC怎么衍生脂肪胺，应该怎么保存，能存放多久？

我们的Waters 液相 e2695-2489紫外检测器可以做莱克多巴胺吗？好像国标说用荧光检测器。弱弱问一句，我们能用紫外检测器做饲料中莱克多巴胺的检测吗？主要做原料血浆蛋白粉的检测。如果不行，那我们还需要买荧光检测器吗？那检测器大致多少钱？我们的液相是waters的e2695的，配的是2489UV检测器。谢谢！急急急急！

SL 327.2- 2005 水质 汞的测定 原子荧光光度法6.2.1 重铬酸钾一过硫酸钾消解法 此法适用于地表水、地下水和污水。 取摇匀的 1. 0-5. OmL污水 (或 lOmL较清洁净地表水、地下水)置于25mL比色管中，稀释至10. OmL，加人 0. 3mL硫酸 (见 5.27, 0. 3mL硝酸 (见 5.3),混匀。再加人 1. OmL重铬酸钾溶液(见 5. 6 )，应保持至少 15min不退色，否则应予适量补加。然后加人 1. OmL过硫酸钾溶液 (见 5.7),在水浴锅中闭塞保持近沸 1h，取下冷却。使用前，逐滴加人盐酸经胺溶液 (见 5.9)，直至溶液退色，再稀释至刻度按此方法消解，但是加入盐酸经胺（配的5%的，用它试过加入高锰酸钾溶液能褪色，证明是有效的），但是不管加入多少盐酸经胺，溶液就是不褪色啊，还是黄色的？有没有前辈指点下是什么原因。

有人问到 NHS化的染料蛋白标记我有跟帖简单回答 为了更清楚说明 并让更多人了解 NHS活化的荧光探针标记反应鉴于 荧光分析于毛细管电泳联用的广阔 前景单独发个主题帖 这大都是我的经验和理解 本人不是有机专业 有关合成方面 说错的地方还请拍砖 NHS化的荧光染料 是指 N-羟基琥珀酰亚胺 酯化的荧光染料标记 即N上的羟基与荧光探针上的羧基酯化反应[IMG]http://www.sigmaaldrich.com/structureimages/16/mfcd00005516.gif[/IMG]这些荧光探针与蛋白或者小分子胺偶联的原理很简单 都是 羧基与胺基反应生成酰胺键但是 一般的羧酸更倾向于 与胺基形成 铵盐因此引入个较好的离去基团就可以使羧基活化 促进羧基与胺基的共价键形成那么琥珀酰就是个很好的离去基团将荧光探针 用NHS进行酯化后 既可以相对稳定的保存，也可以直接用于与胺基分子的偶联，降低反应动力学壁垒与蛋白分子 或是 小分子胺 的偶联，原理相同 都是最终NHS基团离去，剩下的活化羧基与蛋白的胺基反应。在了解了原理的基础上，在进行NHS酯化的荧光探针标记策略上，应当着重注意以下几点：不用过多考虑蛋白的等电点，但需记住 胺基作为亲核基团的这个反应一般在 弱碱条件（pH=8~9）下进行 [B]！[/B]考虑到蛋白的特殊性 配制缓冲液注意需要避免 1）极端pH （2）重金属污染 和（3）过大的离子强度 导致的蛋白变性 [B] ！[/B]考虑到NHS酯化物的活泼程度，NHS化的荧光染料需要现配现加，不宜配制后静置过久。 [B] ！[/B]考虑到 反应原理 ，选择缓冲液和反应容器 需要严格避免胺基或者氨基污染，避免与蛋白分子竞争反应掉荧光染料。 e.g. 常用缓冲液 有 borate buffer，NaHCO3，磷酸盐等等此外，还需注意： A.一般 的protocol都是针对 抗体的，抗体是比较 坚强的蛋白 B.虽说暴露在蛋白表面所有的侧链胺基都有可能跟羧基反应 但是 反应动力学最大的还是 Lys的那个长侧链上的e-伯胺基，因此富含lys的蛋白偶联有福啦。 C.一般来说，反应活性 伯胺＞仲胺 D.别忘了 缓冲液选择也要考虑荧光探针自身特性，如果荧光探针自己带一个 很兴奋的胺基，那么由于自体的二聚反应，这个探针用于标记可能会效率很低当然NHS酯化的商品荧光探针有限，也可以用直接用 带油羧基的荧光探针偶联 蛋白，这时一般考虑使用 NHS EDC活化体系其原理就是 EDC先与 羧基形成个 不稳定的活化中间体然后 NHS接力 替代EDC形成 较稳定的 羧基活化体接下来的 就和上述原理一样了至于 标记上的蛋白 和未标记探针的蛋白 相互分离 每家公司各有法宝 我用过 BD公司的葡聚糖柱洗脱回收 也用CZE分离过小分子胺的标记产物其他更先进的方法就要看 论坛各位大神们的功夫啦附件上传的是 Pierce的NHS化荧光素的protocol 以及 Dynal beads羧基化表面偶联抗体的protocol 本文的 参考资料 有：http://en.wikipedia.org/wiki/N-hydroxysuccinimide[~185396~][~185397~]

请教用荧光胺定量蛋白时有什么应该注意的地方？线性范围大概多少？

标准写空白和标线同样加盐酸、溴化钾–溴酸钾溶液，最后用盐酸羟胺褪色，我把标准里用的盐酸都替换成了硝酸，最后做出来空白同样的荧光值竟然是一万多，如果单测5%的硝酸载流液荧光值只有300左右，造成了我标线自动配标的浓度比较低的点扣完空白甚至是负数，直到0.4ug/L的点荧光值才变成正数。请问问题是出在硝酸上了吗？还是溴酸钾溴化钾和盐酸羟胺造成的？

怎样判断一个物质是否有荧光，是否可以用荧光检测器测定 比如二硝托胺 C8H7N3O5 谢谢了！

请教有没有氢化物-原子荧光法测水样中汞的方法。手头的都是用BR消解水样，用盐酸羟胺还原过量溴，再用氯 化亚锡还原二价汞的方法。没有氢化物发生法方便。不知有没有这类的标准可查

苯乙胺采用最新国标衍生方法衍生后（只是没有用乙醚萃取），采用荧光光度计测量荧光值，值十分小，为什么？

最近按国标GB31604.11做1,3-苯二甲胺，液相色谱荧光检测，荧光胺衍生后测量，做出来的峰形和重复性都不好，想问问大家做的情况怎样，有什么要注意的地方？谢谢。

请教各位大师，检测丙胺酸和缬氨酸时，用等度还是梯度？紫外还是荧光？最好有具体的检测方法。谢谢

增白剂俗称白色染料，是一种无色并在紫外光照射下能激发出荧光的有机化合物，它能提高物质的白度和光泽。增白作用是利用光学上的补色原理，使泛黄物质经荧光增白剂处理后，不仅能反射可见光，还能吸收可见光以外的紫外光并转变为具有紫蓝色或青色的可见光反射出来。黄色和蓝色互为补色，抵消了物质原有的黄色，使之显得洁白。 按化学结构可分为五类：①二苯乙烯型，用于棉纤维及某些合成纤维、造纸、制皂等工业，具有蓝色荧光；②香豆素型，具有香豆酮基本结构，用于赛璐璐、聚氯乙烯塑料等，具有较强的蓝色荧光；③吡唑啉型，用于羊毛、聚酰胺、腈纶等纤维，具有绿色荧色；④苯并氧氮型，用于腈纶等纤维及聚氯乙烯、聚苯乙烯等塑料，具有红色荧光；⑤苯二甲酰亚胺型，用于涤纶、腈纶、锦纶等纤维，具有蓝色荧光。 增白剂主要用于纺织、造纸、塑料、涂料、洗涤剂、印刷油墨、蜡、包装材料等。增白剂只是光学上的增亮补色，并不能代替化学漂白。因此，带色物不经漂白，直接用增白剂处理，不能从根本上获得洁白效果，使用时应注意。

荧光法检测海产品中的组胺在应用AOAC 977.13（荧光法）检测海产品中的组胺时，需要配制1.19mol/L H3PO4。标准中配制方法：稀释121.8ml 85%H3PO4至1L.如用其他浓度的H3PO4, 1L 1.19mol/L H3PO4所需的体积=17493/( H3PO4密度×%H3PO4)。请问：17493是怎么得出的？还有为什么需要吸取121.8ml 85% H3PO4？期待各位老师指教，不胜感激！

我们的仪器是科创海光平时做的样品是地下水、河水、污水前处理方法是100ML加入3mlKMnO4、1ml硫酸电热板上煮沸5min用盐酸羟胺还原至无色用原子荧光不点火来做空白都很大，比水样还大，不知哪位高手有好的Hg的前处理办法

大家好！我遇到这样一个难题：我的毕业论文要检测的指标是大鼠单胺类递质，要用高效液相-电化学检测法或荧光检测法才行，可是我能用的高效液相仪上却只有紫外检测器，我该怎么办？请哪位高人帮我出个主意，本人将十分感谢，或者是能帮我检测一下咱们商讨一下费用的问题，多谢！！！！！！！！！

想购买一台液相，要检测磺胺类药残，厂家说紫外检测不出来，需要荧光，不知道是不是？请教各位

本书对荧光分析法作了较全面的介绍。阐述了荧光分析法的基本概念和原理、荧光与分子结构的关系、环境因素对荧光光谱和荧光强度的影响以及溶液荧光的猝灭；介绍了荧光仪器的组件、荧光光谱的校正和荧光仪器的灵敏度以及市场上常见仪器的性能；介绍了各种荧光分析方法，其中包括常规的荧光分析法、同步荧光分析法、三维荧光光谱分析法、时间分辨和相分辨荧光分析法、荧光偏振测定、低温荧光分析法、固体表面荧光分析法、动力学荧光分析法、空间分辨荧光分析技术、单分子荧光检测、荧光免疫分析法和导数荧光分析法等；对近70种元素和脂肪族、芳族、维生素、氨基酸、蛋白质、核酸、胺类、甾族、酶、辅酶、药物、毒物以及农药等有机化合物的荧光分析法作了简要的评述。 本书内容丰富，应用面广，可作为高等院校相关专业本科生和研究生的教材或教学参考书，也可供科研和生产部门的有关科学技术人员参考。 [url=http://www.instrument.com.cn/book/shtml/20060901/1009127.shtml]点击这里[/url]了解本书详情，并可在本网订购。

因为找不到HPLC——紫外检测器检测蜂蜜中磺胺类药物的，能用水产品的代替么？不过我有找到国标配荧光检测器检测蜂蜜中磺胺类药物的，我能用这个提取方法，但是用紫外检测么？

1.做标准曲线时，往标准液加酸（HCL)的作用？（因为想偷懒，不加做出来的线性不好）2.测汞用聚乙烯管还是玻璃管？（我的经验是用聚乙烯管的干扰是相当严重，工程师只是建议用玻璃管，但也说不出为什么）3.按照GB/T5750.6-2006里的做法，对水样用：溴酸钾—溴化钾消化。具体步骤（是先加1mLHCL,在加0.5mL溴酸钾—溴化钾混合液，放置20min后滴几滴盐酸羟胺使黄色褪去。）进样测定的荧光值比不消化的样品管高很多。为此，把纯水用此方法消化，测出来的结果也是很高。（因此怀疑消化液有干扰）。但是将消化液的三种试液单独进样测定，荧光值基本为0.因此不解问题出再哪里。 半个小时之后，将上述各管重新测定了一下，荧光值全都变的很低。（难道和时间有关，在这段时间里发生了什么？）求解答。4.再小小的问一下，各位平时测水中汞时，需要消化不？（因5月有计量认证，对原子荧光的相关问题比较关注，请大家帮助哈）不胜感激！！

我测量的主要是自来水，在工程师给我的方法中测量汞时不需要加溴酸钾-溴化钾溶液和盐酸羟胺溶液，但是GB5750-2006里是需要加的，起到消解转换作用。这里请问各位大佬：1、我们测量的主要是自来水，溴酸钾-溴化钾溶液和盐酸羟胺溶液是否需要加？如果不需要的话，那在什么条件下才需要加？2、玻璃器皿浸泡液是10%硝酸还是30%硝酸？

畜禽肉中沙丁胺醇作为出口畜禽肉中必检项目，但没有一个标准方法，我们用液相色谱荧光检测器，但在净化方面一直不是太理想，哪位大虾能告之如何有好的方法净化，谢谢！

求助大家想知道0.22微米滤膜能否过滤掉溶液中100nm的聚苯乙烯荧光纳米微球？ 因为想用紫外分光光度计测混溶液中的磺胺嘧啶浓度，排除一下干扰。

请教:组胺的HPLC测定可否不用衍生化,可否用紫外检测器(我们没有荧光的)??组胺在220nm左右都有吸收,应该可以用紫外检测器.只是极性太大了.

在使用原子荧光测定砷的时候出现凝固现象。1. 5%的盐酸介质，加入5%的硫脲5ml，5%抗坏血酸5ml，出现大量类似果冻状沉淀。2. 测定印制电路板酸性废液，铜、氯离子含量很高，如上述条件，出现块状沉淀。3. 测定印制电路板碱性废液，铜、铵离子含量很高，如上述条件，出现乳浊液！以上问题，请各位帮帮忙，给我点意见，看怎么能够准确的测定砷。我认为，出现沉淀是由于铜和硫脲反应生成，可以加硫氰酸钾和盐酸羟胺，煮沸，预先把铜给沉淀，但是，是否会对砷有影响？

荧光分析法（第三版） 【作 者】许金钩 王尊本 【丛 书 名】 21世纪科学版化学专著系列 【出 版 社】 科学出版社 【书 号】 7030172957 【出版日期】 2006 年7月 【开 本】 B5 【页 码】 467 【版 次】3-3 【内容简介】本书对荧光分析法作了较全面的介绍。阐述了荧光分析法的基本概念和原理、荧光与分子结构的关系、环境因素对荧光光谱和荧光强度的影响以及溶液荧光的猝灭；介绍了荧光仪器的组件、荧光光谱的校正和荧光仪器的灵敏度以及市场上常见仪器的性能；介绍了各种荧光分析方法，其中包括常规的荧光分析法、同步荧光分析法、三维荧光光谱分析法、时间分辨和相分辨荧光分析法、荧光偏振测定、低温荧光分析法、固体表面荧光分析法、动力学荧光分析法、空间分辨荧光分析技术、单分子荧光检测、荧光免疫分析法和导数荧光分析法等；对近70种元素和脂肪族、芳族、维生素、氨基酸、蛋白质、核酸、胺类、甾族、酶、辅酶、药物、毒物以及农药等有机化合物的荧光分析法作了简要的评述。.本书内容丰富，应用面广，可作为高等院校相关专业本科生和研究生的教材或教学参考书，也可供科研和生产部门的有关科学技术人员参考。... 下载地址 匿名提取文件连接 http://pickup.mofile.com/3417237278603239 或登录Mofile，使用提取码 3417237278603239 提取文件 or 荧光分析法 第三版.part1.rar (19.07MB) http://www.91files.com/?WSUGCT85ARJ4Y3AM7W9Y 荧光分析法 第三版.part2.rar (13.58MB) http://www.91files.com/?1Q3DG1ET36BWGTN6G9PQ

[font=宋体][font=宋体]多重荧光免疫组化（[/font][font=Calibri]TSA[/font][font=宋体]技术）是一种基于酪胺信号放大技术的染色方法，利用抗原抗体反应对样本中的多种蛋白标志物进行荧光染色标记。这种技术能在同一组织切片上实现多个靶标蛋白的共染色，最多可同时标记数十种蛋白，从而揭示组织微环境中的复杂信息。通过荧光图像分析，我们可以进行定量分析、细胞分型、以及空间关系分析等多方面的深入研究。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]一、技术原理[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]酪酰胺信号放大（[/font][font=Calibri]TSA[/font][font=宋体]）技术利用辣根过氧化酶（[/font][font=Calibri]HRP[/font][font=宋体]）对靶蛋白或核酸进行高密度原位标记。在[/font][font=Calibri]H2O2[/font][font=宋体]环境下，荧光标记的酪胺分子被[/font][font=Calibri]HRP[/font][font=宋体]催化激活，产生大量酶促反应，使荧光素与抗原紧密结合部位沉积，实现信号放大。[/font][font=Calibri]TSA[/font][font=宋体]技术通过循环使用不同荧光染料，可在一张组织切片上实现多种蛋白的共染色。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]二、优势[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]①[/font][font=Calibri]TSA[/font][font=宋体]技术能够显著增强荧光放大信号，其增强幅度大约是普通荧光的[/font][font=Calibri]3[/font][font=宋体]～[/font][font=Calibri]10[/font][font=宋体]倍，使得检测更为敏感和准确。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]②在[/font][font=Calibri]TSA[/font][font=宋体]技术中，一抗抗体的种属来源不受限制。不同于普通荧光免疫组化共染的要求，[/font][font=Calibri]TSA[/font][font=宋体]技术每一轮染色后可以将上一轮的一抗和二抗洗掉，对后续染色无影响。这意味着同一种属来源的一抗并不会影响实验结果，为实验提供了更大的灵活性。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]③在[/font][font=Calibri]TSA[/font][font=宋体]技术的实验过程中，无需严格避光。这是因为荧光素具有较高的稳定性，不易淬灭。即使在实验操作过程中没有采取避光措施，也不会对实验结果产生影响。更为便利的是，染色后的玻片可以保存数月之久而不发生淬灭，方便后续重新扫描和分析。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]三、注意事项[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]①在准备染料时，要确保完全溶解并混合均匀。若试剂含有有机溶剂并出现沉淀，需先行过滤。[/font][font=宋体]②实验过程中，要防止切片干燥并注意避光，以保持荧光染料的稳定性，防止其淬灭，从而提高实验的准确性和可靠性。[/font][font=宋体]③选择高特异性的第一抗体是关键，它能更准确地识别目标蛋白，减少非特异性染色，从而提高实验的敏感性和特异性。[/font][font=宋体]④选择荧光染料时，要根据第一抗体的表达量来搭配。表达量高的应与弱光搭配，而表达量低的应与强光搭配，以平衡不同抗体间的荧光强度，使实验结果更准确可靠。[/font][font=宋体]⑤在实验前，务必制定详细的方案，包括确定染色顺序、修复条件和每一种抗体所搭配的荧光染料。通过合理的方案设计，可以确保实验的顺利进行，提高实验的一致性和可重复性。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供[url=https://cn.sinobiological.com/services/fluorescent-multiplex-ihc-services][b]多重荧光免疫组化服务[/b][/url]，详情可以关注：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/fluorescent-multiplex-ihc-services[/font][/font]