凝乳酶

想找提取胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶的文献，先谢谢各位了！1、猪胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶的分离和纯化，中国生化药物杂志，1988年 03期：1-5 2、胰岛素-胰酶联产工艺研究初报，生化药物杂志，1986年 04期：56-573、猪胰脏蛋白酶的生产，生化药物杂志，1984年 04期：1-44、亲和层析和离子交换组合技术分离胰脏中的蛋白酶及其抑制剂，生化药物杂志，1989年，1期：26-29。

[font=SimSun, STSong, &]凝乳是食品原料吗 可以直接直接在配料表中写凝乳吗[/font]

请帮查找一下这几篇文章 万分感谢1、Factors affecting the stability of rennin 《Journal of Dairy Science》 Mickelson R 1963 / 46 / P 613 2、Rapid and large scale isolation of chymosin by pepstatin-aminohexylagarose 《Agricultural and Biological Chemistry》 Hideyuki K 1987 / 42 / P 2227-2231 3、皱胃酶提取工艺的研究 Extraction of calf rennet [中国乳品工业 China Dairy Industry] 卢蓉蓉 , 张国农 , 方民 , 黄艳艳 4、小牛皱胃酶提取技术的研究 Studies on extraction technology of calf rennet [西北农林科技大学学报（自然科学版） Journal of Northwest Sci-Tech University of Agriculture and Forestry] 张富新 5、羔羊皱胃酶提取工艺研究 Studies on the extracting techniques of kid rennet [河南农业科学 Journal of Henan Agricultural Sciences] 赵胜娟 , 陈树兴 , 张富新 , ZHAO Sheng-juan

乳清粉是生产干酪或干酪素时所得的天然副产品，其主要成分有乳糖、乳清蛋白、矿物质等。牛奶中维生素和矿物质也都存在于乳清中，具有很高的营养价值，乳清是液态的，将乳清直接烘干后就得到了乳清粉。乳清粉的种类及用途：乳清粉属于全乳清产品根据来源不同分为甜乳清粉和酸乳清粉根据脱盐与否可分为非脱盐乳清粉（non-demineralized whey power)和脱盐乳清粉(demineralized whey power)根据蛋白分离程度可分为高、中、低蛋白乳清粉甜性乳清粉：从生产硬质干酪、半硬质干酪、软干酪和凝乳酶干酪素获得的副产品称为甜乳清，其PH值为5.9~6.0。（分高、中、低蛋白乳清粉）酸性乳清粉：盐酸沉淀法制造干酪素而得到的乳清粉即为酸性乳清粉，其PH值为4.3~4.6高蛋白乳清粉：指未添加任何防腐剂的新鲜乳清，经巴士杀菌并干燥后，得到蛋白含量为11.0~14.5的乳清粉。高蛋白乳清粉的用途：在乳品、冷冻食品、焙烤、休闲食品、糖果和其他食品中用作经济的乳固形物来源。在高温蒸煮和焙烤中强化色泽的形成，对优质面包膨松起重要作用。低蛋白乳清粉（渗析乳清粉）：指从未添加任何防腐剂的新鲜乳清经提取部分蛋白后的高乳糖产品再经巴士杀菌并干燥后，得到蛋白质含量为2.0~4.0%的产品。低蛋白乳清粉的用途：用于饲料配方中，提供高含量的乳糖，在仔猪消化道内可产生大量的乳酸，降低PH值，帮助乳的消化，抑制致病菌的生长，这对仔猪健康有主要意义；乳清粉中含有的高质量乳清蛋白在小猪体内有高消化率、良好的氨基酸形态、无抗营养因子的优点，也含有白蛋白及球蛋白（血清蛋白），对肠道同样具有正面的影响，特别是免疫球蛋白，对肠道具有保护效果，能对抗大肠杆菌。

披萨拉丝所有的奶酪或者说是芝士，名字叫做马苏里拉。[color=#333333]是意大利南部坎帕尼亚（Campania）和那布勒斯（Naples）地方产的一种淡味奶酪，真正的马苏里拉Mozzarella奶酪是用水牛奶制作的。材料是：[color=#333333]新鲜牛乳、嗜热链球菌和保加利亚乳杆菌、食盐、凝乳酶。[/color][/color][color=#333333][color=#333333]但是还有一种叫做再制马苏里拉，[color=#262626]是相对于[/color][color=#262626]天然奶酪[/color][color=#262626]而言的。这并不是说再制奶酪不“天然"，而是表明再制奶酪是对天然奶酪进行再加工的产物。加工，赋予了它天然奶酪所没有的特性。[/color][/color][/color][color=#333333][color=#333333][color=#262626]美国FDA规定，再制奶酪的原料至少51%是天然奶酪，剩下的不到49%的成分里，有添加剂，有水，也有其他奶类原料，比如奶粉（dry milk），无水奶油（anhydrous milkfat）和乳清成分（whey solids）。再制奶酪的添加剂含量的确比天然奶酪高一些，额外加入添加剂是有目的，为了使它的风味给丰富，而且拉丝的效果也会更好。[/color][/color][/color][color=#333333][/color]

乳制品（dairy products）由奶制成的各种食品，用动物的奶加上其它辅料制成的食品，也叫奶油制品。 乳制品分类乳制品　　以生鲜牛（羊）乳及其制品为主要原料，经加工制成的产品。包括：液体乳类（杀菌乳、灭菌乳、酸牛乳、配方乳）；乳粉类（全脂乳粉、脱脂乳粉、全脂加糖乳粉和调味乳粉、婴幼儿配方乳粉、其他配方乳粉）；炼乳类（全脂淡炼乳、全脂加糖炼乳、调味/调制炼乳、配方炼乳）；乳脂肪类（稀奶油、奶油、无水奶油）；干酪类（原干酪、再制干酪）；其他乳制品类（干酪素、乳糖、乳清粉等）。杀菌乳　　以生鲜牛（羊）乳为原料，经过巴氏杀菌处理制成液体产品，经巴氏杀菌后，生鲜乳中的蛋 乳制品白质及大部分维生素基本无损，但是没有100%地杀死所有微生物，所以杀菌乳不能常温储存，需低温冷藏储存，保质期为2—15天。酸乳　　以生鲜牛（羊）乳或复原乳为主要原料，添加或不添加辅料，使用保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌的菌种发酵制成的产品。按照所用原料的不同，分为：纯酸牛乳、调味酸牛乳、果料酸牛乳；按照脂肪含量的不同，分为：全脂、部分脱脂、脱脂等品种。灭菌乳　　以生鲜牛（羊）乳或复原乳为主要原料，添加或不添加辅料，经灭菌制成的液体产品，由于生鲜乳中的微生物全部被杀死，灭菌乳不需冷藏，常温下保质期1—8个月。乳粉　　以生鲜牛（羊）乳为主要原料，添加或不添加辅料，经杀菌、浓缩、喷雾干燥制成的粉状产品。按脂肪含量、营养素含量、添加辅料的区别，分为：全脂乳粉、低脂乳粉、脱脂乳粉、全脂加糖乳粉、调味乳粉和配方乳粉。配方乳粉　　针对不同人群的营养需要，以生鲜乳或乳粉为主要原料，去除了乳中的某些营养物质或强化了某些营养物质（也可能二者兼而有之），经加工干燥而成的粉状产品，配方乳粉的种类包括婴儿、老年及其他特殊人群需要的乳粉。炼乳　　以生鲜牛（羊）乳或复原乳为主要原料，添加或不添加辅料，经杀菌、浓缩，制成的粘稠态产品。按照添加或不添加辅料，分为：全脂淡炼乳、全脂加糖炼乳、调味/调制炼乳、配方炼乳。干酪　　以生鲜牛（羊）乳或脱脂乳、稀奶油为原料，经杀菌、添加发酵剂和凝乳酶，使蛋白质凝固，排出乳清，制成的固态产品。干酪素　　以脱脂牛（羊）乳为原料，用酶或盐酸、乳酸使所含酪蛋白凝固，然后将凝块过滤、洗涤、脱水、干燥而制成的产品。乳清粉　　以生产干酪、干酪素的副产品——乳清为原料，经杀菌、脱盐或不脱盐、浓缩、干燥制成的粉状产品。乳糖　　以生产干酪、干酪素的副产品——乳清为原料，经分离、浓缩、结晶、干燥，制成的晶体粉状产品。乳脂肪　　以生鲜牛（羊）乳为原料，用离心分离法分出脂肪，此脂肪成分经杀菌、发酵或不发酵等加工过程，制成的粘稠状或质地柔软的固态产品。按脂肪含料不同，分为：稀奶油、奶油、无水奶油。地方特色乳制品　　使用特种生鲜乳（如水牛乳、牦牛乳、羊乳、马乳、驴乳、骆驼乳等）为原料加工制成的各种乳制品，或具有地方特点的乳制品（如奶皮子、奶豆腐、乳饼、乳扇等）。 　　稳定可控奶源基地：系指自建牧场、合建牧场、参股小区及签订购销合同的合法生鲜乳收购站等。复原乳　　又称“还原乳”或“还原奶”，是指以乳粉为主要原料，添加适量水制成与原乳中水、固体物比例相当的乳液。

乳制品（dairy products）由奶制成的各种食品，用动物的奶加上其它辅料制成的食品，也叫奶油制品。乳制品分类乳制品　　以生鲜牛（羊）乳及其制品为主要原料，经加工制成的产品。包括：液体乳类（杀菌乳、灭菌乳、酸牛乳、配方乳）；乳粉类（全脂乳粉、脱脂乳粉、全脂加糖乳粉和调味乳粉、婴幼儿配方乳粉、其他配方乳粉）；炼乳类（全脂淡炼乳、全脂加糖炼乳、调味/调制炼乳、配方炼乳）；乳脂肪类（稀奶油、奶油、无水奶油）；干酪类（原干酪、再制干酪）；其他乳制品类（干酪素、乳糖、乳清粉等）。杀菌乳　　以生鲜牛（羊）乳为原料，经过巴氏杀菌处理制成液体产品，经巴氏杀菌后，生鲜乳中的蛋 乳制品白质及大部分维生素基本无损，但是没有100%地杀死所有微生物，所以杀菌乳不能常温储存，需低温冷藏储存，保质期为2—15天。酸乳　　以生鲜牛（羊）乳或复原乳为主要原料，添加或不添加辅料，使用保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌的菌种发酵制成的产品。按照所用原料的不同，分为：纯酸牛乳、调味酸牛乳、果料酸牛乳；按照脂肪含量的不同，分为：全脂、部分脱脂、脱脂等品种。灭菌乳　　以生鲜牛（羊）乳或复原乳为主要原料，添加或不添加辅料，经灭菌制成的液体产品，由于生鲜乳中的微生物全部被杀死，灭菌乳不需冷藏，常温下保质期1—8个月。乳粉　　以生鲜牛（羊）乳为主要原料，添加或不添加辅料，经杀菌、浓缩、喷雾干燥制成的粉状产品。按脂肪含量、营养素含量、添加辅料的区别，分为：全脂乳粉、低脂乳粉、脱脂乳粉、全脂加糖乳粉、调味乳粉和配方乳粉。配方乳粉　　针对不同人群的营养需要，以生鲜乳或乳粉为主要原料，去除了乳中的某些营养物质或强化了某些营养物质（也可能二者兼而有之），经加工干燥而成的粉状产品，配方乳粉的种类包括婴儿、老年及其他特殊人群需要的乳粉。炼乳　　以生鲜牛（羊）乳或复原乳为主要原料，添加或不添加辅料，经杀菌、浓缩，制成的粘稠态产品。按照添加或不添加辅料，分为：全脂淡炼乳、全脂加糖炼乳、调味/调制炼乳、配方炼乳。干酪　　以生鲜牛（羊）乳或脱脂乳、稀奶油为原料，经杀菌、添加发酵剂和凝乳酶，使蛋白质凝固，排出乳清，制成的固态产品。干酪素　　以脱脂牛（羊）乳为原料，用酶或盐酸、乳酸使所含酪蛋白凝固，然后将凝块过滤、洗涤、脱水、干燥而制成的产品。乳清粉　　以生产干酪、干酪素的副产品——乳清为原料，经杀菌、脱盐或不脱盐、浓缩、干燥制成的粉状产品。乳糖　　以生产干酪、干酪素的副产品——乳清为原料，经分离、浓缩、结晶、干燥，制成的晶体粉状产品。乳脂肪　　以生鲜牛（羊）乳为原料，用离心分离法分出脂肪，此脂肪成分经杀菌、发酵或不发酵等加工过程，制成的粘稠状或质地柔软的固态产品。按脂肪含料不同，分为：稀奶油、奶油、无水奶油。地方特色乳制品　　使用特种生鲜乳（如水牛乳、牦牛乳、羊乳、马乳、驴乳、骆驼乳等）为原料加工制成的各种乳制品，或具有地方特点的乳制品（如奶皮子、奶豆腐、乳饼、乳扇等）。　　稳定可控奶源基地：系指自建牧场、合建牧场、参股小区及签订购销合同的合法生鲜乳收购站等。复原乳　　又称“还原乳”或“还原奶”，是指以乳粉为主要原料，添加适量水制成与原乳中水、固体物比例相当的乳液。

实验原理有些细菌具有合成淀粉酶的能力，可以分泌胞外淀粉酶。淀粉酶可以使淀粉水解为麦芽糖和葡萄糖，淀粉水解后遇碘不再变蓝色。细菌产生的脂肪酶能分解培养基中的脂肪生成甘油及脂肪酸。脂肪酸可以使培养基pH下降，可通过在油脂培养基中加入中性红做指示剂进行测试。中性红指示范围为pH6.8（红）～8.0（黄）。当细菌分解脂肪产生脂肪酸时，则菌落周围培养基中出现红色斑点。某些细菌分泌蛋白酶分解明胶，产生小分子物质。如果细菌具有分解明胶的能力，则培养基可由原来固体状态变成液体状态。牛乳中主要含有乳糖、酪蛋白等成分。细菌对牛乳的利用主要是指对乳糖及酪蛋白的分解和利用。牛乳中常加入石蕊作为酸碱指示剂和氧化还原指示剂。石蕊中性时呈淡紫色，酸性时呈红色，碱性时呈蓝色，还原时则部分或全部脱色。细菌对牛乳的利用可分三种情况：（1）酸凝固作用：细菌发酵乳糖后，产生许多酸，使石蕊牛乳变红，当酸度很高时，可使牛乳凝固，此称为酸凝固。（2）凝乳酶凝固作用：某些细菌能分泌凝乳酶，使牛乳中的酪蛋白凝固，这种凝固在中性环境中发生。通常这种细菌还具有水解蛋白质的能力，因而产生氨等碱性物质，使石蕊变蓝。（3）胨化作用：酪蛋白被水解，使牛乳变成清亮透明的液体。胨化作用可以在酸性条件下或碱性条件下进行，一般石蕊色素被还原褪色。实验材料1、活材料：大肠杆菌（E. coli）、枯草杆菌（Bacillus　subtilis）、金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、产气肠杆菌（Enterobacter aerogenes）、黏乳产碱杆菌（Alcaligenes viscolactis）、铜绿假单胞菌（Psudomonas aeruginosa）、普通变形杆菌（Proteus vularis ）。2、培养基：淀粉培养基：牛肉膏蛋白胨培养基加0.2%的可溶性淀粉；油脂培养基：牛肉膏蛋白胨培养基加花生油10mL、0.6%中性红水溶液1mL；明胶液化培养基：蛋白胨5g，明胶100～150g，水1000mL, pH7.2～7.4，115℃灭菌20min。石蕊牛乳培养基：牛奶粉100g、石蕊0.075g、水1000 mL、pH6.8，121℃灭菌15 min 。3、试剂：卢哥氏碘液。实验用品平皿、接种环、酒精灯、试管、接种针等。实验方法（一）淀粉水解试验1、准备淀粉培养基平板：将熔化后冷却至50℃左右的淀粉培养基倒入无菌平皿中，待凝固后制成平板。2、接种：用记号笔在平板底部划成两部分，在每部分分别写上菌名，用接种环取少量的待测菌，点接在培养基表面的相对应部分的中心，其中一个菌种应是枯草杆菌做对照菌。★你能解释原因吗？3、培养：将接种后的平皿置于28℃恒温箱培养24h。4、检测：取出平板，打开平皿盖，滴加少量的碘液于平板上，轻轻旋转，使碘液均匀铺满整个平板。菌落周围如出现无色透明圈，则说明淀粉已经被水解，表示该细菌具有分解淀粉的能力。可以用透明圈大小说明测试菌株水解淀粉能力的强弱。（二）油脂水解试验1、将装有油脂培养基的三角瓶置于沸水浴中熔化，取出并充分振荡，使油脂均匀分布，再倾入无菌平皿中，待凝固成平板。2、接种：于同一平皿的两边接种，其中一种是金黄色葡萄球菌作为对照菌。置于37℃恒温箱培养24h，取出后观察平板菌苔颜色，如果出现红色斑点，即说明脂肪被水解了，此反应为正反应。红色斑点大小说明测试菌株水解脂肪能力的强弱。（三）明胶液化试验1、接种：用穿刺接种法接种大肠杆菌或产气肠杆菌于明胶培养基中。2、培养：放20℃恒温箱中培养48h。若细菌在20℃下不长，则应放在最适温度下培养。3、观察结果：观察培养基有无液化情况及液化后的形状。因明胶在低于20℃时凝固，高于25℃时自行液化，若是在高于20℃下培养的细菌，观察时应放在冰浴中观察，若明胶被细菌液化，即使在低温下明胶也不会再凝固。（四）石蕊牛乳试验1、接种：将黏乳产碱杆菌和铜绿假单胞菌接种入石蕊牛乳培养基中。2、培养：将接种后的试管于37℃恒温培养7d，另外保留一支不接种的石蕊牛乳培养基作为对照。3、结果观察：取出培养物，以不接种任何细菌的试管为对照，观察接种不同细菌生长后的变化情况。

[font=SimSun, STSong, &]对于低温长时间灭菌，如85℃、20min。此类灭菌方式属于什么，相较于95℃、30min，哪些灭菌方式不会导致奶在低温长时发酵不会有杂菌风险，且能够出现凝乳.另外据我所查，高温灭菌有单独计算公式，但是又会导致蛋白变性等，从而影响发酵乳无法凝乳等情况。那么我应该参考一个什么样标准去设计灭菌时间和温度来确保37℃、48h长时间发酵不会有染菌风险。如灭完菌初始菌数、芽孢等要求，求助各位专家[/font]

实验原理有些细菌具有合成淀粉酶的能力，可以分泌胞外淀粉酶。淀粉酶可以使淀粉水解为麦芽糖和葡萄糖，淀粉水解后遇碘不再变蓝色。细菌产生的脂肪酶能分解培养基中的脂肪生成甘油及脂肪酸。脂肪酸可以使培养基pH下降，可通过在油脂培养基中加入中性红做指示剂进行测试。中性红指示范围为pH6.8（红）～8.0（黄）。当细菌分解脂肪产生脂肪酸时，则菌落周围培养基中出现红色斑点。某些细菌分泌蛋白酶分解明胶，产生小分子物质。如果细菌具有分解明胶的能力，则培养基可由原来固体状态变成液体状态。牛乳中主要含有乳糖、酪蛋白等成分。细菌对牛乳的利用主要是指对乳糖及酪蛋白的分解和利用。牛乳中常加入石蕊作为酸碱指示剂和氧化还原指示剂。石蕊中性时呈淡紫色，酸性时呈红色，碱性时呈蓝色，还原时则部分或全部脱色。细菌对牛乳的利用可分三种情况：（1）酸凝固作用：细菌发酵乳糖后，产生许多酸，使石蕊牛乳变红，当酸度很高时，可使牛乳凝固，此称为酸凝固。（2）凝乳酶凝固作用：某些细菌能分泌凝乳酶，使牛乳中的酪蛋白凝固，这种凝固在中性环境中发生。通常这种细菌还具有水解蛋白质的能力，因而产生氨等碱性物质，使石蕊变蓝。（3）胨化作用：酪蛋白被水解，使牛乳变成清亮透明的液体。胨化作用可以在酸性条件下或碱性条件下进行，一般石蕊色素被还原褪色。实验材料1、活材料：大肠杆菌（E. coli）、枯草杆菌（Bacillus　subtilis）、金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、产气肠杆菌（Enterobacter aerogenes）、黏乳产碱杆菌（Alcaligenes viscolactis）、铜绿假单胞菌（Psudomonas aeruginosa）、普通变形杆菌（Proteus vularis ）。2、培养基：淀粉培养基：牛肉膏蛋白胨培养基加0.2%的可溶性淀粉；油脂培养基：牛肉膏蛋白胨培养基加花生油10mL、0.6%中性红水溶液1mL；明胶液化培养基：蛋白胨5g，明胶100～150g，水1000mL, pH7.2～7.4，115℃灭菌20min。石蕊牛乳培养基：牛奶粉100g、石蕊0.075g、水1000 mL、pH6.8，121℃灭菌15 min 。3、试剂：卢哥氏碘液。实验用品平皿、接种环、酒精灯、试管、接种针等。实验方法（一）淀粉水解试验1、准备淀粉培养基平板：将熔化后冷却至50℃左右的淀粉培养基倒入无菌平皿中，待凝固后制成平板。2、接种：用记号笔在平板底部划成两部分，在每部分分别写上菌名，用接种环取少量的待测菌，点接在培养基表面的相对应部分的中心，其中一个菌种应是枯草杆菌做对照菌。★你能解释原因吗？3、培养：将接种后的平皿置于28℃恒温箱培养24h。4、检测：取出平板，打开平皿盖，滴加少量的碘液于平板上，轻轻旋转，使碘液均匀铺满整个平板。菌落周围如出现无色透明圈，则说明淀粉已经被水解，表示该细菌具有分解淀粉的能力。可以用透明圈大小说明测试菌株水解淀粉能力的强弱。（二）油脂水解试验1、将装有油脂培养基的三角瓶置于沸水浴中熔化，取出并充分振荡，使油脂均匀分布，再倾入无菌平皿中，待凝固成平板。2、接种：于同一平皿的两边接种，其中一种是金黄色葡萄球菌作为对照菌。置于37℃恒温箱培养24h，取出后观察平板菌苔颜色，如果出现红色斑点，即说明脂肪被水解了，此反应为正反应。红色斑点大小说明测试菌株水解脂肪能力的强弱。（三）明胶液化试验1、接种：用穿刺接种法接种大肠杆菌或产气肠杆菌于明胶培养基中。2、培养：放20℃恒温箱中培养48h。若细菌在20℃下不长，则应放在最适温度下培养。3、观察结果：观察培养基有无液化情况及液化后的形状。因明胶在低于20℃时凝固，高于25℃时自行液化，若是在高于20℃下培养的细菌，观察时应放在冰浴中观察，若明胶被细菌液化，即使在低温下明胶也不会再凝固。（四）石蕊牛乳试验1、接种：将黏乳产碱杆菌和铜绿假单胞菌接种入石蕊牛乳培养基中。2、培养：将接种后的试管于37℃恒温培养7d，另外保留一支不接种的石蕊牛乳培养基作为对照。3、结果观察：取出培养物，以不接种任何细菌的试管为对照，观察接种不同细菌生长后的变化情况。

一、在护肤美容用品中的应用 　　各种护肤美容用品是由油脂、水与表面活性剂组成的油包水或水包油的分散体系。有膏、霜、奶、乳、液等多种形式。对皮肤有着保湿、清洁、美容、润肤等多种作用，目前经常在化妆品中加入诸如维生素、氨基酸、激素、酶等营养剂，对皮肤进行滋润营养保健，有时也加入防晒剂，保护皮肤免受过量紫外线的侵害。在护肤美容用品中，使用的微胶囊主要有以下几种形式：1.酶微胶囊 　　加在护肤化妆品中能对皮肤起着营养、保健作用的酶主要有以下几种： 　　⑴木瓜蛋白酶：是一种从热带水果番木瓜中提炼出来的植物性肽链水解酶，它对皮肤有增加柔软、弹性和滋润作用。 　　⑵胃蛋白酶：是存在于胃液中的肽链水解酶，对皮肤有美容保健作用。 　　⑶凝乳酶：是从动物胃液中分离制得的一种蛋白酶。它可以改进人体肌肉的韧性，加强皮肤的柔软及光滑感，是一种很好的皮肤柔软剂。 　　⑷溶菌酶：是从鸡蛋清中分离制取的。加在化妆品中有很好的清疮、抗炎、杀菌作用。也可以作化妆品的防腐剂。 　　⑸超氧化物歧化酶(SOD)：这种酶一般是从动物血细胞中分离纯化而制得。具有很强的抗氧化能力，是活性氧自由基的有效清除剂。而活性氧自由基在体内引起多种有害的反应，将它及时清除有益于人体健康。超氧化物歧化酶具有抗辐射污染和消炎作用，且极易透过皮肤被吸收，它对酪氨酸酶诱发的黑色素有重要的抑制作用，因此，对老年斑和雀斑、面部黄褐斑等皮肤色素沉淀症有显著疗效。超氧化物歧化酶是目前化妆品行业中研究最多、应用最广的一种生物酶。 　　⑹蛋白水解酶：它能使皮肤表面的细胞蛋白质分子肽键断裂水解，有利于除去皮肤表面老化的组织。如与解脂酶合用，其作用则更强烈、快速。蛋白水解酶有利于消除由于风吹、日晒、体力劳动或其它因素所造成的皮肤伤害。 　　⑺谷光甘肽过氧化酶(GSH-Px)：它可在不同条件下防止脂质量过氧化物产生。硒元素是谷光甘肽过氧化酶中活性组分，含有这种酶的化妆品，在治疗脂质过氧化物引起的皮肤炎症及抗皮肤衰老方面有着重要作用。 　　⑻鞘磷脂酶：它存在于配糖鞘磷脂中，是一种能平衡皮肤保湿性能的酶。如将其包敷在脂质体微胶囊中，则能渗透到皮肤的深层，有很好的滋润作用。 　　⑼脂肪酶：它能促使脂肪水解。在化妆品中添加脂肪酶，有益于粉刺等含脂肪物质的消除。 　　⑽胶原酶：是一种对防止皮肤疤痕生成有特殊作用的酶。 　　另外，在化妆品中使用的酶，还有α-淀粉酶、胰脂肪酶、胰蛋白酶、尿素酶、尿酸酶、α-糜蛋白酶等。它们对皮肤的抗炎、清疮都有一定功效。 　　由于酶这种生物催化剂的活性很易受到外界环境的影响，利用微胶囊技术把酶保护起来就可以保持其活性。应指出的是，近年来用脂质体做皮肤化妆品中各种酶的包覆材料的研究正在不断深入，实践证明做成脂质体微胶囊形式，更有利于酶在皮肤上的吸收利用，有利于更好发挥酶的护肤保健功能。2.药物微胶囊(略)3.功能性颜料微胶囊4.香料微胶囊

性状　　为白色或淡黄色粉末，无味无臭，在60℃以上的热水中完全溶解，不溶于有机溶剂。在pH9时稳定性最好，pH6以上可以高温加热，pH3．5以下时加热会发生酸水解。水溶液在有钾、钙离子存在时可生成可逆性凝胶。 使用范围　　作增稠剂、悬浮剂、凝胶剂、乳化剂和稳定剂，一般用量0．03%—0．5%。如在可可牛奶中用量为0．025%—0．035%，牛乳凝胶为0．2%—0．3%，酸乳为0．02%—0．03%，加热杀菌的饮料和牛乳凝胶选取K型。同时，卡拉胶与刺槐树胶有增效作用，可提高其凝乳强度和黏度。

革兰氏阳性芽孢杆菌和球菌，该类群中与食品关系密切的菌属如下。1．芽孢杆菌属(Bacillus)该属可形成芽孢，对不良环境条件有很强的抵抗力。需氧或兼性厌氧，绝大多数菌种产生过氧化氢酶。该菌广泛分布于土壤、植物、腐殖质及食品上。其中包括人和动物的病原性细菌炭疽芽孢杆菌(B．anthracis)、食物中毒性细菌蜡样芽孢杆菌(B．cereus)、昆虫的病原菌苏云金芽孢杆菌(B．thuringiensis)、可用于食品工业生产的枯草芽杆菌(B．subtilis)。此外，也包括一些可引起食品腐败变质和食物中毒的菌种。(1)蜡样芽孢杆菌(B．ccrcl2S)：该菌广泛分布于土壤、水、调味料、乳及咸肉中，污染牛乳后可产生卵磷脂酶，破坏脂肪球膜，使得脂肪不能很好地乳化，还可以产生类似凝乳酶的酶，使乳在酸度不高时即可发生凝固。蜡样芽孢杆菌的生长温度为10~48℃，pH值为4·9～9·3，发芽温度范围为1~59℃。该菌污染食品后，可以引起食品腐败变质，并且产生下痢性毒素、肠毒素、溶血素、呕吐毒素及肠管坏死毒素等，引起人食物中毒。(2)枯草芽孢杆菌(B．subtilis)：该菌菌落呈圆形或不规则形状，表面粗糙或有皱纹，呈奶油色或褐色，菌落形态与培养基成分有关。枯草芽孢杆菌**面粉后，可以使发酵面团产生液化黏丝状现象，使烤制的面包或馒头出现斑点或斑纹，并且伴有异味。在肉类表面可产生黏液并有异味。在肉类罐头及其他肉制品上经常可以分离到该菌，但在密封的罐头中较少引起变质。在牛乳中生长，可以使牛乳变稠，有时在不变酸时使牛乳凝固，即产生所谓的甜凝乳现象。(3)巨大芽孢杆菌(B．megaterium)：该菌可以在含氨的环境中生长，不需要生长因子，无卵磷脂酶活性。在厌氧条件下，于葡萄糖肉汤中不生长，多数菌株可在培养基中产生黄、粉红、褐或黑色色素。适宜生长温度为28~37℃。该菌可以从鲜乳、消毒乳、于酪、肉类等食品中分离到，可使浓缩乳凝固并产生干酪味和气体，使肉类罐头变质胀罐。(4)嗜热脂肪芽孢杆菌(B．stearothermophilus)：该菌菌落为圆形或不规则圆形小菌落，表面光滑或粗糙，能在49～65℃范围内生长，对热的抵抗力很强。该菌在pH值5．0以下的培养基上不生长。该菌主要可引起罐藏食品和淀粉类食品的腐败。(5)凝结芽孢杆菌(B．coagulans)：该菌菌落为不透明的小菌落，生长温度范围为18～60℃，可在酸性条件下生长。在有氧条件下于葡萄糖肉汤中生长，产生醋酸、乳酸和CO2**厌氧条件下主要产生乳酸，不产气。该菌能在pH值3．5～4．5的食品中生长，引起食品变质，罐头食品变质后外观不膨胀。在炼乳罐头中，通常使乳形成坚实凝结，偶尔呈碎片状凝结，并有乳清析出。此种变质亦常发生于含有蔗糖的乳制品中。2．梭菌属(Clostridium)该属的绝大多数种为厌氧菌，只有少数种可在大气条件下生长，但在大气中不形成芽孢。该属菌形成的芽孢多呈球形，位于菌体中央，使菌体呈梭状。对不良环境条件具有极强的抵抗力。该属菌对营养的需要因菌种不同而异。可耐受2．5％～6．5％NaCl浓度的渗透压，对亚硝酸钠和氯敏感。梭菌广泛分布于土壤、下水污泥、海水沉淀物、腐败植物、食品、人和其他哺乳动物的肠道内。该属中的一些菌种如丁酸梭菌(C．butyricum)可分解碳水化合物产生各种有机酸(乙酸、丙酸、丁酸)和醇类(乙醇、异丙醇、丁醇)，在食品加工上可用于生产某些酸、醇和酮类。一些菌种如腐化梭菌(C．putrefaciENs)分解蛋白质和氨基酸，产生H2S、硫醇、甲基吲哚(粪臭素)等具有恶臭味的腐败产物，在乳中生长时可使乳中酪蛋白完全胨化，在熟肉上生长使肉变黑，在罐头中生长时，因产气使罐头发生膨胀。肉毒梭菌(c．botulinum)在食品中增殖时可产生肉毒毒素，当人们食入含有该毒素的食品时，可发生毒素型食物中毒，早期症状为全身无力、头痛、头晕，继而出现眼睑下垂、视力模糊、瞳孔散大、吞咽困难等症状直至死亡。此外某些梭菌如破伤风梭菌(C．terni)是人和动物的破伤风病病原菌。**

1 目的要求（1）初步掌握乳酸菌活力测定的一般方法。（2）了解乳酸菌在乳发酵过程中所起的作用。2 基本原理乳酸菌的细胞形态为杆状或球状，一般没有运动性，革兰氏染色阳性，微需氧、厌氧或兼性厌氧，具有独特的营养需求和代谢方式，都能发酵糖类产酸，一般在固体培养基上与氧接触也能生长。酸乳风味的形成与乳酸菌发酵过程代谢的多种物质有关，而这些物质的产生与发酵速度等活力指标有密切关系。乳酸菌的活力可由多种参数确定，如细胞生长情况，细胞干重和光密度（OD值）等。由于乳液不透明，不能直接测OD值，可用NaOH和EDTA处理使其澄清后再测。较简便的活力测定包括凝乳时间，产酸和活菌数量等指标的检测。3 实验材料3．1样品 市售酸奶或乳酸菌饮料。3．2 培养基 MRS固体和液体培养基，复原脱脂乳培养基。3．3 实验用仪器设备 超净工作、恒温培养箱、鼓风干燥箱、高压蒸汽灭菌锅、冰箱、油镜显微镜、碱式滴定仪、天平、培养皿、移液管、试管、烧杯、量筒、温度计、酒精灯、接种针、载玻片等。4 实验方法与步骤4．1 菌种的分离（1）编号 取五支无菌水试管，分别用记号笔标明10-1、10-2～10-5。（2）稀释 将酸奶样品搅拌均匀，用无菌移液管吸取样品25mL，移入含有225mL无菌水的三角瓶中，在漩涡混合器上充分振摇，使样品分散均匀，获得10-1的样品稀释液，然后根据对样品含菌量的估计，将样品稀释至适当稀释度。（3）倒平板 选用2～3个适宜浓度的稀释液，分别吸取1mL注入平皿内，然后倒入事先溶化并冷却至45℃左右的MRS固体培养基，迅速转动平皿使之混合均匀，待冷却凝固后倒置，于40℃培养48h。（4）分离 无菌操作，从培养好的固体平皿中分别挑取5个单菌落接种于液体MRS培养基中，置40℃培养箱中培养。（5）镜检 通过镜检，确定所分离的乳酸菌是乳杆菌还是链球菌。保加利亚乳杆菌呈杆状，单杆、双杆或长丝状；嗜热链球菌呈球状，成对、短链或长链状。4．2 接种按1%的接种量，将MRS液体培养物接种于已灭菌的复原脱脂乳中，另分别接种具有较高活力的保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌作为对照。培养温度为保加利亚乳杆菌40℃， 嗜热链球菌45℃。4．3 观察与测定（1）观察： 观察并记录各试管的凝乳时间。（2）酸度测定：用NaOH滴定法，测定发酵乳液的滴定酸度。（3）计数：采用倾注平板法，测定活菌数量。

[font=SimSun, STSong, &]谷氨酰胺转氨酶（TG酶）的功效特点和使用方法[/font][font=SimSun, STSong, &]一、TG酶简介[/font][font=SimSun, STSong, &]谷氨酰胺转胺酶（Transglutaminase，简称TGase或TG），又称转谷氨酰胺酶，是一种由331个氨基组成的分子量约38000的具有活性中心的单体蛋白质酰基转移酶。[/font][font=SimSun, STSong, &]这种酶广泛存在于人体、高级动物、植物和微生物中。该酶可通过分子插入、交联反应、脱氨作用，使蛋白质分子之间或之内的交联、蛋白质和氨基酸之间的连接以及蛋白质分子内谷氨酰胺残基的水解。通过这些反应，使蛋白质分子结构发生变化，可使蛋白质分子由小变大，从而改善蛋白质的结构和功能，如提高蛋白质的发泡性、粘接性、乳化性、凝胶性、增稠性和乳化稳定特性等，进而改善富含蛋白质食品的外观、风味、口感和质构等，改善各种蛋白质的功能性质，如营养价值、质地结构、口感和贮存期等。经TG改性后，蛋白质的胶凝性、塑性、持水性、水溶性、稳定性等均会得到改善。[/font][font=SimSun, STSong, &]二、TG酶的特点[/font][font=SimSun, STSong, &]1、粘合力极强：[/font][font=SimSun, STSong, &]TG催化蛋白质之间形成的共价键在一般的非酶催化条件下很难断裂，所以用该酶处理食品组分粘合力极强。用该酶处理碎肉成形后，经冷冻、切片、烹饪处理均不会散开。[/font][font=SimSun, STSong, &]2、PH值稳定性好：[/font][font=SimSun, STSong, &]TG粗酶的最适作用pH为6-7，但在pH5.0~8.0的范围内都有较高的活性。当pH低于5时，酶活迅速降低，当pH高于8小于9时，酶活缓慢下降。这与一般蛋白质食品体系的pH值是一致的，有利于在食品生产中应用。[/font][font=SimSun, STSong, &]3、热稳定性强：[/font][font=SimSun, STSong, &]经研究发现TG粗酶的最适温度在52℃左右，在42~57℃范围内都有较高的活性。特别是在蛋白质食品体系中，该酶的热稳定性会显著提高，这一特性使其在一般的食品加工过程中，不会因为热处理而迅速失活。[/font][font=SimSun, STSong, &]4、使用安全：[/font][font=SimSun, STSong, &]由于TG广泛存在于动物组织中，人们一直食用含有TG催化形成的赖氨酸异肽键的食物，因此TG用TG生产的新型食品不仅对人体是安全的，还有利于人体的健康。[/font][font=SimSun, STSong, &]三、功效与用途[/font][font=SimSun, STSong, &]TG的主要功能因子是谷氨酰胺转胺酶，用于生产新型蛋白食品。广泛应用于肉制品、乳制品、鱼制品、豆制品和面制品中。[/font][font=SimSun, STSong, &]1、改善食品质构。[/font][font=SimSun, STSong, &]它可以通过催化蛋白质分子之间发生的交联，改善蛋白质的许多重要性能。如用该酶生产重组肉时，它不仅可将碎肉粘结在一起，还可以将各种非肉蛋白交联到肉蛋白上，明显改善肉制品的口感、风味、组织结构和营养。[/font][font=SimSun, STSong, &]2、提高蛋白质的营养价值。[/font][font=SimSun, STSong, &]它可将某些人体必需氨基酸（如赖氨酸）共价交联到蛋白质上，以防止美拉德反应对氨基酸的破坏，从而提高蛋白质的营养价值。谷氨酰胺转胺酶还可以向氨基酸组成不理想的蛋白质中引入所缺乏的氨基酸，发展中国家的人们对这一点特别感兴趣。[/font][font=SimSun, STSong, &]3、形成耐热、耐水性的膜。[/font][font=SimSun, STSong, &]经该酶交联过的酪蛋白脱水后便可得到不溶于水的薄膜，这种薄膜能够被胰凝乳蛋白酶分解，因而是一种可食用的膜，能够用作食品包装材料。用于包埋脂类或脂溶性物质。提高食品的弹性和持水能力[/font][font=SimSun, STSong, &]4、TG还具有一些独特的性质，它可以通过赖氨酸分子交联到蛋白质大分子上，保护食品中的赖氨酸免受各种加工过程的破坏；TG可用于包埋脂类和脂溶性物质，可使蛋白质形成耐热性、耐水性的膜；采用TG处理后，在蛋白质形成凝胶过程中不需要热处理。[/font][font=SimSun, STSong, &]四、TG酶的使用[/font][font=SimSun, STSong, &]1.TG的最适pH为6~7，所以使用时应尽量使TG使用的环境在pH6~7之间，最好不要超过5~8的范围。[/font][font=SimSun, STSong, &]2.TG的活性在40℃保持稳定，在超过40℃之后逐渐减弱，对于反应时间10分钟的最适温度是50~55℃，随着反应时间的延长，最适反应温度也会降低，而温度高时由于食品尤其是鱼、肉、乳制品等食品容易发生变质，所以反应温度的确定，是所有因素中最为关键也最难确定的因素，在保证产品品质的前提下，它直接影响到TG的添加量及其催化反应所需时间长短，一般地，对于鱼肉等低油易变质的产品所选反应温度都较低（1~10℃），而相应反应时间较长（2~12小时以上），一般来说，反应温度不高于40℃。[/font][font=SimSun, STSong, &]3.作用对象。首先TG的作用对象是蛋白质，催化的是其中“可反应”的谷氨酰胺残基发生反应，所以蛋白质的含量及其中“可反应”的谷氨酰胺残基含量对TG的作用效果都有很大影响，也就是说并不是所有的蛋白质或含蛋白质的食品都是TG的良好底物。[/font][font=SimSun, STSong, &]其次，要发生反应还需有赖氨酸残基的存在（否则TG的作用只能是改变蛋白质的溶解性及与之相关的性质），即“可反应”的赖氨酸残基的含量对TG的交联反应也有很大影响。[/font][font=SimSun, STSong, &]4、常见的TG的良好底物有牛奶中的酪蛋白及其钠盐，肉中的明胶及肌球蛋白、大豆蛋白中的11s球蛋白及7s球蛋白，所以为了取得很好的交联效果，可在作用对象中适当加入TG的良好底物，其中最常用的酪蛋白酸钠及明胶以及廉价的大豆蛋白，这里需要特别提出的是：[/font][font=SimSun, STSong, &]（1）有些蛋白质可通过采取适当的方法乳酶解加热变形却是本身含谷氨酰残基和/或赖氨酸残基比较多，只是由于空间结构等关系，它们不能被TG所催化反应，通过酶解或加热变性后这些残基就会暴露出来，变成“可反应”的残基，如小麦中的面盘蛋白、乳清蛋白等。[/font][font=SimSun, STSong, &]（2）可由选择地加富含可反应的谷氨酰残基或赖氨酰残基的蛋白质残多肽，如谷氨酰或赖氨肽，以补充作用对象中相关氨基酸残基的不足。[/font]

革兰氏阳性芽孢杆菌和球菌，该类群中与食品关系密切的菌属如下。1．芽孢杆菌属(Bacillus)该属可形成芽孢，对不良环境条件有很强的抵抗力。需氧或兼性厌氧，绝大多数菌种产生过氧化氢酶。该菌广泛分布于土壤、植物、腐殖质及食品上。其中包括人和动物的病原性细菌炭疽芽孢杆菌(B．anthracis)、食物中毒性细菌蜡样芽孢杆菌(B．cereus)、昆虫的病原菌苏云金芽孢杆菌(B．thuringiensis)、可用于食品工业生产的枯草芽孢杆菌(B．subtilis)。此外，也包括一些可引起食品腐败变质和食物中毒的菌种。(1)蜡样芽孢杆菌(B．ccrcl2S)：该菌广泛分布于土壤、水、调味料、乳及咸肉中，污染牛乳后可产生卵磷脂酶，破坏脂肪球膜，使得脂肪不能很好地乳化，还可以产生类似凝乳酶的酶，使乳在酸度不高时即可发生凝固。蜡样芽孢杆菌的生长温度为10~48℃，pH值为4·9～9·3，发芽温度范围为1~59℃。该菌污染食品后，可以引起食品腐败变质，并且产生下痢性毒素、肠毒素、溶血素、呕吐毒素及肠管坏死毒素等，引起人食物中毒。(2)枯草芽孢杆菌(B．subtilis)：该菌菌落呈圆形或不规则形状，表面粗糙或有皱纹，呈奶油色或褐色，菌落形态与培养基成分有关。枯草芽孢杆菌污染面粉后，可以使发酵面团产生液化黏丝状现象，使烤制的面包**头出现斑点或斑纹，并且伴有异味。在肉类表面可产生黏液并有异味。在肉类罐头及其他肉制品上经常可以分离到该菌，但在密封的罐头中较少引起变质。在牛乳中生长，可以使牛乳变稠，有时在不变酸时使牛乳凝固，即产生所谓的甜凝乳现象。(3)巨大芽孢杆菌(B．megaterium)：该菌可以在含氨的环境中生长，不需要生长因子，无卵磷脂酶活性。在厌氧条件下，于葡萄糖肉汤中不生长，多数菌株可在培养基中产生黄、粉红、褐或黑色色素。适宜生长温度为28~37℃。该菌可以从鲜乳、消毒乳、于酪、肉类等食品中分离到，可使浓缩乳凝固并产生干酪味和气体，使肉类罐头变质胀罐。(4)嗜热脂肪芽孢杆菌(B．stearothermophilus)：该菌菌落为圆形或不规则圆形小菌落，表面光滑或粗糙，能在49～65℃范围内生长，对热的抵抗力很强。该菌在pH值5．0以下的培养基上不生长。该菌主要可引起罐藏食品和淀粉类食品的腐败。(5)凝结芽孢杆菌(B．coagulans)：该菌菌落为不透明的小菌落，生长温度范围为18～60℃，可在酸性条件下生长。在有氧条件下于葡萄糖肉汤中生长，产生醋酸、乳酸和CO2。在厌氧条件下主要产生乳酸，不产气。该菌能在pH值3．5～**5的食品中生长，引起食品变质，罐头食品变质后外观不膨胀。在炼乳罐头中，通常使乳形成坚实凝结，偶尔呈碎片状凝结，并有乳清析出。此种变质亦常发生于含有蔗糖的乳制品中。2．梭菌属(Clostridium)该属的绝大多数种为厌氧菌，只有少数种可在大气条件下生长，但在大气中不形成芽孢。该属菌形成的芽孢多呈球形，位于菌体中央，使菌体呈梭状。对不良环境条件具有极强的抵抗力。该属菌对营养的需要因菌种不同而异。可耐受2．5％～6．5％NaCl浓度的渗透压，对亚硝酸钠和氯敏感。梭菌广泛分布于土壤、下水污泥、海水沉淀物、腐败植物、食品、人和其他哺乳动物的肠道内。该属中的一些菌种如丁酸梭菌(C．butyricum)可分解碳水化合物产生各种有机酸(乙酸、丙酸、丁酸)和醇类(乙醇、异丙醇、丁醇)，在食品加工上可用于生产某些酸、醇和酮类。一些菌种如腐化梭菌(C．putrefaciENs)分解蛋白质和氨基酸，产生H2S、硫醇、甲基吲哚(粪臭素)等具有恶臭味的腐败产物，在乳中生长时可使乳中酪蛋白完全胨化，在熟肉上生长使肉变黑，在罐头中生长时，因产气使罐头发生膨胀。肉毒梭菌(c．botulinum)在食品中增殖时可产生肉毒毒素，当人们食入含有该毒素的食品时，可发生毒素型食物中毒，早期症状为全身无力、头痛、头晕，继而出现眼睑下垂、视力模糊、瞳孔散大、吞咽困难等症状直至死亡。此外某些梭菌如破伤风梭菌(C．terni)是人和动物的破伤风病病原菌。

第一节 概 述一. DNA的限制性内切酶酶切分析限制性内切酶能特异地结合于一段被称为限制性酶识别序列的DNA序列之内或其附近的特异位点上，并切割双链DNA。它可分为三类:Ⅰ类和Ⅲ类酶在同一蛋白质分子中兼有切割和修饰(甲基化)作用且依赖于ATP的存在。Ⅰ类酶结合于识别位点并随机的切割识别位点不远处的DNA，而Ⅲ类酶在识别位点上切割DNA分子，然后从底物上解离。Ⅱ类由两种酶组成: 一种为限制性内切核酸酶(限制酶)，它切割某一特异的核苷酸序列; 另一种为独立的甲基化酶，它修饰同一识别序列。Ⅱ类中的限制性内切酶在分子克隆中得到了广泛应用，它们是重组DNA的基础。绝大多数Ⅱ类限制酶识别长度为4至6个核苷酸的回文对称特异核苷酸序列(如EcoRⅠ识别六个核苷酸序列:5'- G↓AATTC-3')，有少数酶识别更长的序列或简并序列。Ⅱ类酶切割位点在识别序列中，有的在对称轴处切割，产生平末端的DNA片段(如SmaⅠ:5'-CCC↓GGG-3');有的切割位点在对称轴一侧，产生带有单链突出末端的DNA片段称粘性未端， 如EcoRⅠ切割识别序列后产生两个互补的粘性末端。5'…G↓AATTC…3' →5'… G AATTC…3'3'…CTTAA↑G …5' →3'… CTTAA G…5'DNA纯度、缓冲液、温度条件及限制性内切酶本身都会影响限制性内切酶的活性。大部分限制性内切酶不受RNA或单链DNA的影响。当微量的污染物进入限制性内切酶贮存液中时，会影响其进一步使用，因此在吸取限制性内切酶时，每次都要用新的吸管头。如果采用两种限制性内切酶，必须要注意分别提供各自的最适盐浓度。若两者可用同一缓冲液，则可同时水解。若需要不同的盐浓度，则低盐浓度的限制性内切酶必须首先使用，随后调节盐浓度，再用高盐浓度的限制性内切酶水解。也可在第一个酶切反应完成后，用等体积酚/氯仿抽提，加0.1倍体积3mol/L NaAc和2倍体积无水乙醇，混匀后置-70℃低温冰箱30分钟，离心、干燥并重新溶于缓冲液后进行第二个酶切反应。DNA限制性内切酶酶切图谱又称DNA的物理图谱，它由一系列位置确定的多种限制性内切酶酶切位点组成，以直线或环状图式表示。在DNA序列分析、基因组的功能图谱绘制、DNA的无性繁殖、基因文库的构建等工作中，建立限制性内切酶图谱都是不可缺少的环节，近年来发展起来的RFLP(限制性片段长度多态性)技术更是建立在它的基础上。构建DNA限制性内切酶图谱有许多方法。通常结合使用多种限制性内切酶，通过综合分析多种酶单切及不同组合的多种酶同时切所得到的限制性片段大小来确定各种酶的酶切位点及其相对位置。酶切图谱的使用价值依赖于它的准确性和精确程度。在酶切图谱制作过程中，为了获得条带清晰的电泳图谱，一般DNA用量约为0.5-1μg。限制性内切酶的酶解反应最适条件各不相同，各种酶有其相应的酶切缓冲液和最适反应温度(大多数为37℃)。对质粒DNA酶切反应而言， 限制性内切酶用量可按标准体系1μg DNA加1单位酶，消化1-2小时。但要完全酶解则必须增加酶的用量，一般增加2-3倍，甚至更多，反应时间也要适当延长。二. 凝胶电泳琼脂糖或聚丙烯酰胺凝胶电泳是分离鉴定和纯化DNA片段的标准方法。该技术操作简便快速，可以分辨用其它方法（如密度梯度离心法）所无法分离的DNA片段。当用低浓度的荧光嵌入染料溴化乙啶(Ethidium bromide， EB)染色，在紫外光下至少可以检出1-10ng的DNA条带，从而可以确定DNA片段在凝胶中的位置。此外，还可以从电泳后的凝胶中回收特定的DNA条带，用于以后的克隆操作。琼脂糖和聚丙烯酰胺可以制成各种形状、大小和孔隙度。琼脂糖凝胶分离DNA片度大小范围较广，不同浓度琼脂糖凝胶可分离长度从200bp至近50kb的DNA片段。琼脂糖通常用水平装置在强度和方向恒定的电场下电泳。聚丙烯酰胺分离小片段DNA(5-500bp)效果较好，其分辩力极高，甚至相差1bp的DNA片段就能分开。聚丙烯酰胺凝胶电泳很快，可容纳相对大量的DNA，但制备和操作比琼脂糖凝胶困难。聚丙烯酰胺凝胶采用垂直装置进行电泳。目前，一般实验室多用琼脂糖水平平板凝胶电泳装置进行DNA电泳。琼脂糖主要在DNA制备电泳中作为一种固体支持基质，其密度取决于琼脂糖的浓度。在电场中，在中性pH值下带负电荷的DNA向阳极迁移，其迁移速率由下列多种因素决定:1、DNA的分子大小:线状双链DNA分子在一定浓度琼脂糖凝胶中的迁移速率与DNA分子量对数成反比，分子越大则所受阻力越大，也越难于在凝胶孔隙中蠕行，因而迁移得越慢。2、琼脂糖浓度一个给定大小的线状DNA分子，其迁移速度在不同浓度的琼脂糖凝胶中各不相同。DNA电泳迁移率的对数与凝胶浓度成线性关系。凝胶浓度的选择取决于DNA分子的大小。分离小于0.5kb的DNA片段所需胶浓度是1.2-1.5%，分离大于10kb的DNA分子所需胶浓度为0.3-0.7%， DNA片段大小间于两者之间则所需胶浓度为0.8-1.0%。

一、在护肤美容用品中的应用　　各种护肤美容用品是由油脂、水与表面活性剂组成的油包水或水包油的分散体系。有膏、霜、奶、乳、液等多种形式。对皮肤有着保湿、清洁、美容、润肤等多种作用，目前经常在化妆品中加入诸如维生素、氨基酸、激素、酶等营养剂，对皮肤进行滋润营养保健，有时也加入防晒剂，保护皮肤免受过量紫外线的侵害。在护肤美容用品中，使用的微胶囊主要有以下几种形式：1.酶微胶囊　　加在护肤化妆品中能对皮肤起着营养、保健作用的酶主要有以下几种：　　⑴木瓜蛋白酶：是一种从热带水果番木瓜中提炼出来的植物性肽链水解酶，它对皮肤有增加柔软、弹性和滋润作用。　　⑵胃蛋白酶：是存在于胃液中的肽链水解酶，对皮肤有美容保健作用。　　⑶凝乳酶：是从动物胃液中分离制得的一种蛋白酶。它可以改进人体肌肉的韧性，加强皮肤的柔软及光滑感，是一种很好的皮肤柔软剂。　　⑷溶菌酶：是从鸡蛋清中分离制取的。加在化妆品中有很好的清疮、抗炎、杀菌作用。也可以作化妆品的防腐剂。　　⑸超氧化物歧化酶(SOD)：这种酶一般是从动物血细胞中分离纯化而制得。具有很强的抗氧化能力，是活性氧自由基的有效清除剂。而活性氧自由基在体内引起多种有害的反应，将它及时清除有益于人体健康。超氧化物歧化酶具有抗辐射污染和消炎作用，且极易透过皮肤被吸收，它对酪氨酸酶诱发的黑色素有重要的抑制作用，因此，对老年斑和雀斑、面部黄褐斑等皮肤色素沉淀症有显著疗效。超氧化物歧化酶是目前化妆品行业中研究最多、应用最广的一种生物酶。　　⑹蛋白水解酶：它能使皮肤表面的细胞蛋白质分子肽键断裂水解，有利于除去皮肤表面老化的组织。如与解脂酶合用，其作用则更强烈、快速。蛋白水解酶有利于消除由于风吹、日晒、体力劳动或其它因素所造成的皮肤伤害。　　⑺谷光甘肽过氧化酶(GSH-Px)：它可在不同条件下防止脂质量过氧化物产生。硒元素是谷光甘肽过氧化酶中活性组分，含有这种酶的化妆品，在治疗脂质过氧化物引起的皮肤炎症及抗皮肤衰老方面有着重要作用。　　⑻鞘磷脂酶：它存在于配糖鞘磷脂中，是一种能平衡皮肤保湿性能的酶。如将其包敷在脂质体微胶囊中，则能渗透到皮肤的深层，有很好的滋润作用。　　⑼脂肪酶：它能促使脂肪水解。在化妆品中添加脂肪酶，有益于粉刺等含脂肪物质的消除。　　⑽胶原酶：是一种对防止皮肤疤痕生成有特殊作用的酶。　　另外，在化妆品中使用的酶，还有α-淀粉酶、胰脂肪酶、胰蛋白酶、尿素酶、尿酸酶、α-糜蛋白酶等。它们对皮肤的抗炎、清疮都有一定功效。　　由于酶这种生物催化剂的活性很易受到外界环境的影响，利用微胶囊技术把酶保护起来就可以保持其活性。应指出的是，近年来用脂质体做皮肤化妆品中各种酶的包覆材料的研究正在不断深入，实践证明做成脂质体微胶囊形式，更有利于酶在皮肤上的吸收利用，有利于更好发挥酶的护肤保健功能。

我们经常喝的那些乳品的类型 巴氏杀菌乳是指以牛乳（或羊乳）为原料，经巴氏杀菌制成的液体产品。包括全脂巴氏杀菌乳、部分脱脂巴氏杀菌乳与脱脂巴氏杀 菌乳等。　　灭菌乳是指以牛乳（或羊乳）或复原乳为原料，脱脂或不脱脂，添加或不添加辅料，经起高温瞬时灭菌、无菌灌装制成的产品。包括灭菌纯牛（羊）乳与灭菌调味乳等。　　酸牛乳是指以牛（或羊）乳或者复原乳为原料，脱脂、部分脱脂或不脱脂，添加或不添加辅料，经发酵制成的产品。包括纯酸牛乳、调味酸牛乳、果料酸牛乳等。　　乳粉是指以牛（或羊）乳为主要原料，添加或不添加辅料，经加工制成的粉状产品。　　炼乳是指以牛乳为主要原料，添加或不添加白砂糖，经浓缩制成的粘稠状液体产品。包括全脂无糖炼乳和全脂加糖炼乳。　　奶油是指以牛乳稀奶油为原料，经发酵或不发酵，加工制成的固态产品。　　干酪是指以牛乳为原料，经巴氏杀菌、添加发酵剂、凝乳、成型、发酵等过程而制得的产品。

谁能告诉我血液样品（抗凝全血）做微量元素（如铜、锌、钙、镁、铁）的样品处理方法和方式？有几种处理方法吗？

天天在喝奶，天天检测奶，你知道奶的真面目吗？现在就揭开它神秘的面纱吧，http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/brow/em09502.gif、看看食品安全一直关注，但仍旧问题不断的奶是什么东东，就从液态奶开始吧...鲜牛乳中含有大约87％的水分，在水分中溶解着各种可溶性盐类、碳水化合物、维生素和一小部分蛋白质，同时在水中还分别分散着两个胶体系统。其一是脂肪球，每个脂肪球都由极薄的脂肪球膜包围着；另一个是酪蛋白胶束，其由蛋白质分子和不溶性盐(主要是磷酸钙络合物)构成。两种胶体系统在正常情况下是稳定的，从而使乳能够形成均匀的胶体乳状液。其中的一个系统即脂肪相对于机械搅拌作用很敏感(例如利用搅拌制造奶油的生产过程)脂肪密度低于水相，静置后即可上浮，奶皮奶油；另一个系统即酪蛋白相对于酶的作用很敏感(例如利用凝乳酶制造干酪的生产过程)。正因为牛乳中有这两种胶体系统，所以用它能够生产出许多种类的产品作为人类的重要食品，而且还在不断寻求更加新颖的产品。下表所示是乳的内在性成分，除此之外还至少含有三种外在性成分，这就是尘埃杂质、细菌和白细胞。其含量的多少往往根据奶牛场的卫生管理水平而有很大的变动幅度。较大的尘埃杂质颗粒可以通过过滤而除去，小的尘埃颗粒、一部分细菌和白细胞可以由离心分离而除去，绝大部分细菌或全部细菌只能由加热处理的办法杀死，以达到杀菌和灭菌的目的。乳可以看作是一种生物胶体，其脱脂乳部分是亲液胶体，由分散相(胶体分散系统中的溶质颗粒)和分散介质(胶体分散系统中的溶剂)构成。这里分散相为酪蛋白复合物，分散介质是乳浆，在大地的万有引力场中是稳定的，但在离心加速度作用下会分离。这些分散相和分散介质在正常情况下都具有极为重要的生理作用和生物功能，借助外界的力可以制成许多类型的乳制品。胶体相乳脂肪主要是甘油三酯的混合物，主要包含磷脂，甾醇，游离脂肪酸，脂肪酸等特点为：1.碘值低 2.挥发性脂肪酸多 3.不饱和脂肪酸少 4.低级脂肪酸多 5.皂化值高。乳蛋白质中，酪蛋白占83%，乳白蛋白占13%，乳球蛋白和脂肪球膜蛋白占4% 1 脂肪 占乳之 3.8％ (1)脂肪球(直径0.1～lOum) 其中甘油三酯 99.5％ 甘油二酸酯、脂肪酸、脂溶性维生素等 0.5％ (2)脂肪球膜(厚度O.Olum)，包围在脂肪球外 其中蛋白质(包括酶类) 占脂肪球膜之 49％ 磷脂 28％ 甘油酯 14％ 其他脂质 8％ (3)脂溶性维生素 若干 2酪蛋白胶束(直径0．005～0.3um) 占乳之 2.6％ (1)酪蛋白 93％ 其中asl一酪蛋白 43％

大肠埃希菌也产生血浆凝固酶，可是通常做大肠埃希菌鉴定时没有做血浆凝固酶试验。而金黄色葡萄球菌要做。是什么原因？

——胡丽涛、王治国目的 为凝血酶原时间（PT）和活化部分凝血酶时间（APTT）检测提供指南。方法 主要参考美国临床和实验室标准化研究院（CLSI）H47-A2文件相关内容，并结合具体的实际进行总结。结果 PT和APTT检测受到检验前、中和后各种变异的影响。通过检测技术的标准化提高检测的重复性，通过设定性能目标来确保检测的临床相关性。PT检测可用于检测肝素治疗，实验室应该建立肝素治疗范围。结论 对于疑似血液凝固障碍的患者评估，PT和APTT是非常重要的实验室筛查检测。在实际工作中要严格按照操作规程和厂家说明，保证结果的准确可靠，为临床提供诊疗依据。凝血酶原时间；部分活化凝血酶时间；国际标准化比值；校准 自从Quick在1953年首次描述了凝血酶原时间（PT），PT在可疑凝血障碍的患者评估方面成为了一项非常重要的实验室筛查检测，也是实验室最常见的凝血检测。尽管PT最先被描述成一种凝血酶原或凝血因子Ⅱ的特异性一步法检测，但是PT对凝血系统的共同途径和外源性途径所涉及到的任何凝血因子（凝血因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ和纤维蛋白原）及因子抑制物的定量或定性的异常都非常敏感。同时，PT也是严重肝脏疾病或慢性肝病的一项适当指标，还是用于监测维生素K治疗最常用的指标。 PT检测的主要试剂凝血活酶是一种磷脂或组织制剂，通常为人源性或动物源性或人和动物的混合材料制成的各种商业化的制剂。这些商业化的凝血活酶制剂在其减少凝血因子的反应性方面存在差异，影响了其使用，特别是在维生素K治疗的检测过程中。 APTT对内源性凝血途径和共同途径的定量和定性异常敏感。是除PT之外，常规实验室最常进行的凝血检测。APTT对内源性凝血途径凝血因子缺乏（凝血因子Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ、Ⅻ、前激肽释放酶和高分子激肽原）尤为敏感。APTT检测通常用于监测低分子肝素抗凝治疗。APTT还用于检测其他类型的病理型血液凝固抑制物，最常见的是狼疮抗凝物质（LA）。APTT用于凝血因子替代治疗。APTT的检测试剂是促凝物、磷脂和接触激活剂组成的混合物。磷脂可能来源于人、动物或者植物。激活剂的种类也很多，如硅藻土、高岭土、微粉化的硅土和鞣花酸等。 一般，当凝血因子的活性低于参考区间的95%置信限水平时APTT会延长。但是，大量的研究表明不同的APTT试剂对于轻度和中度的凝血因子缺乏的反应程度存在一定的区别，特别是Ⅷ和Ⅸ因子缺乏。有相似的报道APTT对循环狼疮抗凝物质有不同的敏感性。同样，有文献报道商品化的APTT试剂对肝素的反应性不同，使得APTT值存在显著差异。

凝固酶阳性葡萄球菌浅析炎热的夏天，你是不是经常发现食物不耐放了，早上做的糕点、八宝粥等，到了下午就有异味，而且稍不注意，还会拉肚子。这很可能就是食物受到细菌的污染，食物中的细菌产生了肠毒素，人们食用了这些含有毒素的食物，就会拉肚子，而这些产生肠毒素导致食物中毒的细菌，就包括了凝固酶阳性葡萄球菌。【了解凝固酶阳性葡萄球菌】　　葡萄球菌广泛分布于自然界，在空气、水、土壤、饲料、食品以及人和动物的体表粘膜等均有存在。大部分葡萄球菌是不致病的，也有一些致病的球菌，多数葡萄球菌致病菌株产生凝固酶，使血浆凝固。能产生加速人或兔血浆凝固的血浆凝固酶（游离血浆凝固酶）的葡萄球菌被称为凝固酶阳性葡萄球菌，可分为金黄色葡萄球菌、中间型葡萄球菌和家畜葡萄球菌。

一、实验目的1. 了解凝胶层析的原理及其应用。2. 通过测定蛋白质分子量的训练，初步掌握凝胶层析技术。二、实验原理凝胶层析又称排阻层析，凝胶过滤，渗透层析或分子筛层析等。它广泛地应用于分离、提纯、浓缩生物大分子及脱盐、去热源等，而测定蛋白质的分子量也是它的重要应用之一。凝胶是一种具有立体网状结构且呈多孔的不溶性珠状颗粒物质。用它来分离物质，主要是根据多孔凝胶对不同半径的蛋白质分子（近于球形）具有不同的排阻效应实现的。亦即它是根据分子大小这一物理性质进行分离纯化的。分离原理参见“理论部分的凝胶层析一节”。对于某种型号的凝胶，一些大分子不能进入凝胶颗粒内部而完全被排阻在外，只能沿着颗粒间的缝隙流出柱外；而一些小分子不被排阻，可自由扩散，渗透进入凝胶内部的筛孔，尔后又被流出的洗脱液带走。分子越小，进入凝胶内部越深，所走的路程越多，故小分子最后流出柱外，而大分子先从柱中流出。一些中等大小的分子介于大分子与小分子之间，只能进入一部分凝胶较大的孔隙，亦即部分排阻，因此这些分子从柱中流出的顺序也介于大、小分子之间。这样样品经过凝胶层析后，分子便按照从大到小的顺序依次流出，达到分离的目的。凝胶层析分离原理示意动画。对于任何一种被分离的化合物在凝胶层析柱中被排阻的范围均在0～100%之间，其被排阻的程度可以用有效分配系数Kav（分离化合物在内水和外水体积中的比例关系）表示，Kav值的大小和凝胶柱床的总体积（Vt）、外水体积（V0）以及分离物本身的洗脱体积（Ve）有关：Kav = (Ve－V0)/(Vt－V0) ----------- (1)在限定的层析条件下，Vt和V0都是恒定值，而Ve是随着分离物分子量的变化而改变。分子量大，Ve值小，Kav值也小。反之，分子量小Ve值大，Kav值大。有关凝胶层析柱中凝胶自身（基质）体积（Vg）、外水体积（V0）、内水体积（Vi）及柱床总体积（Vt）的参见示意图。凝胶层析柱中的几种层析峰。有效分配系数Kav是判断分离效果的一个重要参数，同时也是测定蛋白质分子量的一个依据。在相同层析条件下，被分离物质Kav值差异越大，分离效果越好。反之，分离效果差或根本不能分开。在实际的实验中，我们可以实测出Vt、V0及Ve的值，从而计算出Kav的大小。对于某一特定型号的凝胶，在一定的分子量范围内，Kav与logMw (Mw表示物质的分子量) 成线性关系：Kav ＝－b logMw + C --------- (2)其中 b,C为常数。同样可以得到：Ve ＝－b'logMw + C' --------- (3)其中 b', C'为常数。即 Ve 与 logMw 也成线性关系。我们可以通过在一凝胶柱上分离多种已知分子量的蛋白质后，并根据上述的线性关系绘出标准曲线，然后用同一凝胶柱测出其它未知蛋白的分子量。三、器材与试剂（一）器材1. 玻璃层析柱（(20mm×60cm）2. 恒流泵（或下口恒压贮液瓶）3. 自动部分收集器4. 紫外分光光度计5. 100ml试剂瓶6. 1000ml量筒7. 250ml烧杯8. 50ml、100ml烧杯9. 10ml（或5ml）刻度试管（二）试剂1. 标准蛋白（1）牛血清白蛋白：Mw=67,000（上海生化所）（2）鸡卵清清蛋白：Mw=45,000（美国SIGMA公司）（3）胰凝乳蛋白酶原A：Mw=24,000（美国SIGMA公司）（4）溶菌酶：Mw =14,3002. 未知蛋白质样品：由实验室准备3. 0.025M KCl－0.1M HAC(乙酸)（洗脱液1000ml）4. 蓝色葡聚糖－2000

请问用溶胶-凝胶法固定酶来做电极,一定要凝胶干了才能做实验吗?这样子对酶活性的影响大吗?

蕲蛇蛇毒中凝血酶样酶的分离纯化与特性[~119829~][~119828~]

蛋白质分子量肌球蛋白甲状腺球蛋白β-半乳糖苷酶副肌球蛋白磷酸化酶a血清白蛋白L-氨基酸氧化酶地氧化氢酶丙酮酸激活酶谷氨酸脱氢酶亮氨酸氨肽酶γ-球蛋白，H链延胡索酸酶（反丁烯二酸酶）卵白蛋白醇脱氢酶（肝）烯醇酶醛缩酶肌酸激酶胃蛋白酶原D-氨基酸氧化酶醇脱氢酶（酵母）甘油醛磷酸脱氢酶原肌球蛋白乳酸脱氢酶胃蛋白酶转磷酸核糖基酶天冬氨酸氨甲酰转移酶，C链羧肽酶 A碳酸酐酶枯草杆菌蛋白酶γ-球蛋白，L链γ-blobulin,L chain糜蛋白酶原（胰凝乳蛋白酶原）木瓜蛋白酶（羧甲基）β-乳球蛋白[font=Tim

【序号】：4【作者】： 苗向阳1,2潘佳2朱倩【题名】：酶促水凝胶的合成及生物传感应用研究进展【期刊】：中国科学:化学. 【年、卷、期、起止页码】：2021,51(07)【全文链接】：https://kns.cnki.net/kcms2/article/abstract?v=3uoqIhG8C44YLTlOAiTRKibYlV5Vjs7iy_Rpms2pqwbFRRUtoUImHW1l5J9gUd13n7aGe3lzrseeM3llceV8jdZ8dvOMmsPm&uniplatform=NZKPT