甲氧隆

[size=3]近日，记者在内蒙古自治区鄂托克旗召开的“转基因克隆绒山羊培育成果通报会”上获悉，不久前，位于鄂托克旗的“内蒙古白绒山羊种羊场”诞生了目前国际上规模最大的一批转基因克隆绒山羊，这标志着中国绒山羊现代生物育种技术又有了新的突破。 　　这项研究为国家转基因生物新品种培育重大专项课题，由内蒙古大学生命科学学院实验动物研究中心研究员刘东军带领的研究团队，在中国工程院院士旭日干的指导下取得的一项具有国际先进水平的科研成果。 　　此研究团队成功构建了对绒毛生长有促进作用的转胰岛素样生长因子Ⅰ（IGF-Ⅰ）基因载体，利用该载体成功转染了绒山羊胎儿成纤维细胞，建立起转基因细胞系。再利用转基因细胞进行体细胞克隆，从而获得的转基因绒山羊。 　　2009年9月至10月，这个研究团队在位于鄂托克旗草原上的内蒙古白绒山羊种羊场开展绒山羊转基因克隆胚胎的生产和移植工作。今年2月至3月陆续获得羔羊17只，其中转基因克隆羔羊14只、体细胞克隆羔羊3只。 [/size]

[color=#DC143C]请教各位乙氧磺隆在水稻中的残留的前处理技术，包括土，稻秆，稻壳，糙米，田水等。它们的提取和净化步骤。以前从没做过这行，各位帮帮忙哈！[/color]

求助甲磺隆的残留分析方法，手上有US EPA残留报告，但是感觉不是很好

自从1996年世界上第一只体细胞克隆羊“多利”在英国诞生以来，克隆技术似乎变得越来越普及，各国很多科学家都掌握了这种技术，更有许多科学家雄心勃勃，朝着克隆动物产品产业化的目标进发。　　在中国，已经有数家科研机构有能力克隆动物，并让不少的克隆动物存活下来。中国科学院动物所首席研究员陈大元、2007年12月刚当选为中国工程院院士的中国农业大学李宁教授等，都已经成功培养出克隆牛，中国工程院院士、上海医学遗传研究所所长曾溢滔也在克隆牛和羊的工作上稳步前进。　　药物也好，牛排也好，克隆技术最终的目标，都是制造产品送进人的身体里，所以，“克隆离餐桌有多远”这个问题，永远吸引人们的关心。美国FDA认可了部分克隆动物食品的安全性以后，中国大众也开始讨论克隆食品能不能吃的问题。　　关于克隆食品的安全性，中国农业大学李宁教授介绍说，目前国内还没有相关的标准出台，有关部门领导碰面时会提及标准问题，但距离正式的探讨还有距离。“中国与美国的情况不同，美国的产业部门会向FDA提出制定克隆动物食品标准的要求。”李宁教授说，产业部门的呼吁已有五六年之久，FDA关于安全性的标准和认可姗姗来迟。为此，产业部门极为不满。他在国外参加学术会议时，常常听到国外专家的抱怨。但在国内，动物产品生产的各个环节分属不同部门管理，很难有部门主动“应战”。　　但李宁教授认为，目前中国克隆动物产品距离产业化还有“漫长的道路”，原因并不在于缺乏安全性审查的标准，因为安全性标准完全可以参照国外既有的标准。他认为，真正的距离在于技术。“个别的科研团体能够克隆，是不可能实现产业化的。”　　陈大元教授同样不够“乐观”。他自己带领的克隆牛研究，就还没有达到理想的“效率”。2002年陈大元的团队培养出第一批克隆牛，14头成功克隆的牛最后只存活下5头牛犊，第一头克隆牛在出生不久以后夭折。2003年在新疆成功的31头克隆牛，也只有12头存活。不久前，中科院一个研究小组培育的克隆牛，全部存活，这几乎是克隆实验中的“奇迹”，陈大元介绍说，这次“例外”的原因，科研人员正在研究当中。　　尽管有“例外”发生，克隆动物存活率低的问题，仍然是目前克隆技术产业化的瓶颈，如果没有新的方法解决，对产业化的期待，也许还为时尚早。不过，陈大元认为，最近日本和美国实现了“诱导多能干细胞”技术，如果尽快把这一技术应用到克隆中，那么产业化也许可以早点到来。“只要是健康存活下来的克隆动物，作为食物就跟传统动物没有两样，是安全的，问题在于我们的技术还没有能力批量地生产克隆动物产品。”陈大元说。　　“1980年初，外国哺乳动物克隆研究走得很快，中国科学界直到1990年才追上克隆技术的步伐。”陈大元说。不过，上世纪90年代以后，中国克隆技术的进步，立即进入加速度，兔、鼠、猪、牛、羊等等动物的克隆，都被中国的科学家实现。陈大元把这个时期形容为“登峰造极”。2000年以后，随着克隆技术的成熟，世界各地的科学家开始探索克隆产业化，中国的科研工作者也加入了实现产业化的努力当中。在很多国外研究者看来，中国人的智慧和勇气，常常能制造轰动性的成果，在克隆动物产品产业化的领域，中国的表现也值得期待。

经过抗体测定的阳性孔，可以扩大培养，进行克隆，以得到单个细胞的后代分泌单克隆抗体。克隆的时间一般说来越早越好。因为在这个时期各种杂交瘤细胞同时旺盛生长，互相争夺营养和空间，而产生指定抗体的细胞有被淹没和淘汰的可能。但克隆时间也不宜太早，太早细胞性状不稳定，数量少也易丢失。克隆化的阳性杂交瘤细胞，经过一段时期培养之后，也还会因为细胞突变或特定染色体的丢失，使部分细胞丧失产生抗体的能力，所以需要再次或多次克隆化培养。克隆化次数的多少由分泌能力强弱和抗原的免疫性强弱而决定。一般说，免疫性强的抗原克隆次数可少一些，但至少要3～5次克隆才能稳定。克隆化的方法很多，包括有限稀释法、显微操作法、软琼脂平板法及荧光激活分离法等。一、有限稀释法1．材料① 微量培养盘，盘内各孔于克隆化前一天培养小鼠腹腔细胞（即饲养细胞）每孔2万～4万。② HT培养基2．操作方法① 取出抗体阳性孔细胞，用HT培养液制成细胞悬液。并取样进行台盼兰染色，计数。② 用HT培养液将细胞稀释成200个/ml、40个/ml、20个/ml和的悬液。③ 用吸管将细胞悬液分别种入微量培养盘，每孔0.05ml，细胞含量分别为10个/孔、2个/孔、1个/孔和0.5个/孔。④ 5％CO2饱和湿度，37℃培养。⑤ 每天用倒置显微镜观察克隆生长情况，选择只有一个集落生长的孔，弃掉两个以上和没有细胞生长的孔。⑥ 克隆大量繁殖后，布满孔底的1/3～1/2时，测培养液抗体。⑦ 抗体阳性孔细胞，移到有饲养层的组织培养瓶中，并传2～4代就可以脱离饲养细胞，建成克隆株。二、软琼脂克隆化借助撒在软琼脂上单个细胞定位生长，而达到克隆化，具体操作如下：1．配2.5％的琼脂糖30ml，水浴溶化后，移入45℃水浴中。2．将117ml完全DMEM液和3ml 10倍浓度的DMEM液混合，置45℃水浴预热。3．将琼脂糖与DMEM液混合，即为含0.5％琼脂糖的完全DMEM液，并加75×108 脾细胞。4．每块平皿加10ml，于室温中凝固。5．DMEM中的细胞与DMEM―琼脂1:1混合，将细胞琼脂混合物2ml铺于凝固的平板上，使其全部覆盖。6．放入CO2箱饱和湿度，37℃培养10天。7．用PBS配制0.6％琼脂糖，于沸水浴溶解后，置45℃，在保温情况下取一试管，迅速加入0.1ml 25％羊红血球，0.2ml豚鼠补体，2.7ml 0.6％琼脂糖。8．用3ml琼脂糖―羊红血球混合液覆盖克隆。于37℃CO2箱孵育1h~2h。从克隆上部溶解羊红血球的溶血范围，可筛选抗羊红血球Ig。三、显微镜操作法在直径6cm培养皿中，加入1ml 1.0×108 细胞悬液放置5％CO2饱和湿度，37℃温箱中放置30min以上，倒置显微镜下，寻找那些与周围相距甚远的单个细胞，将毛细管口（一头有直角弯头毛细管，一头连接一尺长乳胶管，用口控制液体进入）水平置放于液面上，左右微动，直到看见管口，对准细胞，吸入毛细管，将管中细胞移到预先加有2.0×104~5.0×104 饲养细胞96孔板内，培养后，即可获得单个细胞形成的克隆。四、荧光激活分离法用一种荧光激活细胞分类器（Fluorescein Activafed Cell Sorter，FACS）。其基本原理是：将细胞经荧光抗体染色后，经喷嘴形成单个细胞的线形液滴，在莱塞光激发下，荧光素发射荧光，此信号由光电倍增管接收，再结合细胞形态大小产生光散射信号，经电脑处理，产生信号并与预定的信号对比，根据细胞荧光强度及细胞大小不同，将细胞分成不同级别，在电场中发生偏离，而分别收集于不同容器中。

自克隆牛问世以来，不少人担心食用克隆牛的肉是否安全的问题。不久前，日本鹿儿岛县的肉用牛改良研究所，对体细胞克隆牛的最新解剖结果表明，克隆牛的肉质无异常之处，与一般菜牛的肉质没有什么两样，人们可以放心地食用，不必担心。据日本的这家畜牧科研机构向新闻界发布的消息说，被解剖的克隆牛，是该所"神高福1号"和"神高福2号"两头体细胞克隆牛。它们都是1998年12月出生的，分别是该所的第6头和第7头体细胞克隆牛。这两头克隆牛，都经过催肥后被宰杀、解剖。研究人员对其检验后确认，它们的肉质以及内脏器官，均与一般菜牛无差异，人们食用后，不会产生不良影响。 在日本，对体细胞克隆牛进行解剖，该研究所尚属首次。去年6月，日本厚生劳动省曾发表报告指出，对用克隆动物生产的食品的安全性表示担心是没有科学根据的。该所对克隆牛的解剖，已证实了这一论断。从而，为克隆动物生产的食品走向市场，创造了条件。 美国食品和药物管理局召开新闻发布会，宣布了一条重要消息：经过安全评估，来自于克隆猪、牛、羊的肉和奶，与普通肉类和奶制品一样安全，消费者可以放心食用。 美国食品和药物管理局食品安全的负责人在发布会上宣布的这一结论，为克隆家禽相关产品进入市场，扫清了最后的障碍。此前，美国出于食品安全考虑，一直要求克隆动物的肉制品和奶制品暂缓进入市场销售。全美许多大的食品公司也都对克隆食品持谨慎的态度，主要是考虑到普通消费者对克隆食品的技术，还存在信心不足的问题。 布鲁斯耐特，美国农业部副部长：随着美国食品和药物管理局所发表的申明##食品安全问题已不存在了##现在只是一个市场接受度的问题了 上个月，美国肉类及乳制品生产商宣布，他们将会在对外销售的克隆家禽上套上电子认证的标签，让消费者自己做决定。但是这一计划并不是强制性的。此前欧盟食品安全局也表示，克隆动物的肉和奶，离欧盟超市货架又近了一步，因为克隆食品是安全的，可以食用。就这一问题，欧洲食品安全局将同欧盟成员国进行磋商，并在5月份，就克隆食品销售提出最后的意见。

来自中科院广州生物医药与健康研究院，浙江大学，深圳华大基因研究所等多处国内研究机构组成的研究组获得了诱导多能干细胞iPSCs研究的最新突破性机制：成功培养出了四头iPS克隆猪。这是首次在世界上获得成活的iPS克隆猪，有助于在大动物上应用iPS技术的发展。相关成果以letter的形式公布在Cell Research杂志上，目前论文免费。　　文章的通讯作者分别为广州生物医药与健康研究院赖良学研究员，浙江大学干细胞与转基因动物实验室肖磊教授，以及华大基因研究所杜玉涛研究员。　　去年诺贝尔生理/医学奖花落重编程培养研究领域，其中诱导多能干细胞研究尤为受人瞩目，这一技术具有和胚胎干细胞(ESC)类似的特征和功能，却极大程度避免了ESC研究和应用中面临的伦理和排斥等诸多障碍，因此给基于干细胞的个性化治疗和再生医学带来了光明的前景。　　2009年周琪和高绍荣等人首次利用iPS细胞克隆出活体实验小鼠，从而证实了iPS细胞与胚胎干细胞一样具有全能性，是iPS研究领域的一大突破，由此也入选了《时代周刊

概念：细胞克隆形成率即细胞接种存活率，表示接种细胞后贴壁的细胞成活并形成克隆的数量。贴壁后的细胞不一定每个都能增殖和形成克隆，而形成克隆的细胞必为贴壁和有增殖活力的细胞。克隆形成率反映细胞群体依赖性和增殖能力两个重要性状。基本步骤：1、取对数生长期的各组细胞，分别用0.25%胰蛋白酶消化并吹打成单个细胞，并把细胞悬浮在10%胎牛血清的DMEM培养液中备用。2、将细胞悬液作梯度倍数稀释，每组细胞分别以每皿50、100、200个细胞的梯度密度分别接种含10mL 37℃预温培养液的皿中，并轻轻转动，使细胞分散均匀。置37℃ 5% CO2及饱和湿度的细胞培养箱中培养2～3周。3、经常观察，当培养皿中出现肉眼可见的克隆时，终止培养。弃去上清液，用PBS小心浸洗2次。加4%多聚甲醛固定细胞5mL固定15分钟。然后去固定液，加适量GIMSA应用染色液染10～30分钟，然后用流水缓慢洗去染色液，空气干燥。4、将平皿倒置并叠加一张带网格的透明胶片，用肉眼直接计数克隆，或在显微镜（低倍镜）计数大于10个细胞的克隆数。最后计算克隆形成率。克隆形成率 =（克隆数/接种细胞数）×100%平板克隆形成试验方法简单，适用于贴壁生长的细胞。适宜底物为玻璃的、塑料瓶皿。试验成功的关键是细胞悬液的制备和接种密度。细胞一定要分散得好，不能有细胞团，接种密度不能过大。

[b]什么是克隆食品？[/b]　　克隆是英文clone的音译，简单讲就是一种人工诱导的无性繁殖方式。 　科学家把人工遗传操作动物繁殖的过程叫克隆，这门生物技术叫克隆技术。克隆食品，简单地说，就是指克隆动物生产的肉和奶。 美国食品和药物管理局(FDA)于2008年宣布，经过克隆的牛、猪和山羊以及它们的后代均可以安全食用，克隆牛产的奶也可安全食用。 FDA称，科学家就克隆技术安全性问题在全球各地进行了数十次相关研究，研究结果显示，从生物角度来说，以上克隆动物以及它们的后代与按传统方式繁殖的同类没有什么不同，它们的肉和人们今天食用的肉也没什么两样。 据报道，随着美国批准克隆动物的奶制品和肉制品上市销售，我国在未来也许会允许克隆食品的销售。

近日，新型食品及其加工咨询委员会（ACNFP）在一次公开会议上，评价了由克隆牛及其后代加工成的肉乳制品的安全性，并在《新型食品法规》基础上决定是否批准克隆肉乳制品。 新型食品及其加工咨询委员会（ACNFP）指出： 克隆肉乳制品同普通的肉乳制品在成分上是一致的，因此克隆肉乳制品不可能导致食品安全风险。 有关肉乳制品在成分上的证据较为有限，进一步表明肉乳产品受动物喂养环境的影响证据是必需的。 消费者可能希望由克隆动物及其后代加工成的产品具有明确的标识。 针对以上观点，食品标准局首席科学家安德鲁。维奇（Andrew Wadge）表示，由克隆牛及其后代加工成的肉乳制品同普通的肉乳制品没有本质的区别，因此克隆肉乳产品不可能导致食品安全风险。 食品标准局委员会将在12月的会议继续讨论克隆肉乳制品的安全性，该委员会将认真考虑ACNFP的观点、欧洲委员会对克隆肉乳产品的禁令以及其它的意见，最终将其建议提供给部长。

甲基二磺隆、甲基碘磺隆钠盐的残留分析方法，最好是液相的 我们这没有[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质联用[/color][/url]，现在新的残留分析方法 几乎都爱上[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质联用[/color][/url]，可苦了好多单位 ，如果实在没有 能否有相关的，如磺酰脲类，英文的也行 谢谢大家

各位大侠，我用紫外检测器做烟嘧磺隆和吡嘧磺隆农药样品， 标样都没有问题，出峰很好。但是将农药制剂稀释后进样，完全没有峰了。也将标样直接添到制剂中再稀释，但是仍然没有峰出来。用液质质进样，该样品吡嘧磺隆是没有问题的，烟嘧磺隆也能出峰但有一定干扰，请教一下，液相紫外检测器做不出该农药样品这到底是什么问题呢？

[size=3]嫁接的水果是不是克隆？？？？？？？看了下面帖子6楼的回复，仔细想了想，把自己想糊涂了。不想了。还是发帖让大家投票决定吧。[/size][b]回帖参与讨论有奖！！[/b][url]http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20100515/2556327/[/url]

虽然没有什么迹象，但相信江苏对垄断药品实施降价的行动已是酝酿多时、深思熟虑的结果。曾有多次，人们都对国家发改委实施的药品成本价调查及后续可能实施的“反垄断”寄予厚望，但打响此役第一枪的却并非来自国家发改委，而是江苏省。江苏打响垄断药品降价第一枪9月26日上午，江苏省物价局召开新闻发布会，宣布调整(事实上降价)奥拉西坦注射剂等13种药品，27个规格化学药品最高零售价格。据新闻通稿，这些药品的特点是这些药品不少涉及部分独家生产、市场缺乏竞争性、临床用量大的高价药品。比如“注射用复合辅酶”是日治疗费用超过100元的独家品种。不少是抗肿瘤药品，像“紫杉醇脂质体”是单支价格过千元，价格比较高。有媒体测算，像“注射用复合辅酶”，降价后可减轻全社会医药费用负担超过3000万元/年；“紫杉醇脂质体”是单支价格过千元的抗肿瘤药品，降价后减轻医药费用负担超过2300万元/年。此次价格调整是2006年以来省管药品价格降价力度最大的一次。此番江苏剑指高价垄断药物，大幅降价平均25%、最高达40%，是2006年省管药品价格以来，史上最大的降幅。新闻稿称，这次江苏省物价局区别情况，突出重点，从严控制涨价品种，实行分类降价，对日治疗费用高的辅助性药品加大降价力度、对日治疗费用高的治疗性药品合理降价，逐步缩小了不合理价差。谁的部署、授意这场力度有点大的降价行动所涉及的药品，在对外宣传中是被定义为“不少涉及部分独家生产、市场缺乏竞争性”，意思再明显不过，就是“垄断的药品”。而打破药品价格垄断，近年来一直是一个热点话题。不少行业人士普遍对专利药、原研药的高定价感到不满，多次呼吁取消其“超国民待遇”，而为外资药企提供“庇护”的一些组织，则通过发布报告等各种途径，推出“同药不同质”的论断，以维护专利、原研药品相对高的价格体系。虽然没有争论双方没有特别明显的代表人，但争论持续已久、甚至一度有点火热。在此背景下，国家发改委2013年10月像往常一样启动药品成本价调查时，却被很多媒体进行了深度解读，认为是将对大型药企进行反垄断的准备。但直到如今，也没有看到什么动静，或许人们对此事也已经淡忘了。直到9月初，商务部有关人士证实，反垄断局副局长郑文带队赴上海就经营者集中反垄断审查工作进行调研，深入了解半导体、医疗器械等相关行业的市场竞争状况。医疗器械反垄断的说法又甚嚣尘上。只是这次，也不是发改委，而是商务部。至此，人们不禁疑问，医药行业的反垄断，到底是哪个部门在主导？我们知道，江苏实施本次价格调整的是省物价局，属于地方发改委系统的机构。但发改委体系并不是自上而下的垂直管理系统，而是隶属于地方政府。不妨分析，如果是国家发改委上层的授意，那江苏此次降价行动可能是一个“试点”，未来扩大到各省的可能性在很大程度上是存在的。如果是江苏发改委自身的行为，从召开新闻发布会这件事本身来看，更多的着眼点可能在于向百姓传递一种“有作为”的积极形象，那向各省蔓延的可能性要小一些。但对省管其它高价垄断药品再进行降价的可能性却很大。无论是谁的授意，都会给其它省一个思考：“江苏省这么发达，百姓消费能力这么强都降价了，我们是不是也要降啊？”从这个角度看，打响垄断药品降价，江苏可能只是第一枪。未来，留给未来却验证了。无论如何，从社会效益看，都要给江苏物价局充分肯定。药品垄断产生的致命性影响曼昆在其《经济学》第十五章里曾有研究药品垄断的案例：当一个企业开发了一种新药时，专利法使企业垄断了那种药品的销售，通过生产边际收益等于边际成本的产量，并收取大大高于边际成本的价格使利润最大化。所以，发改委才会启动药品成本价调查，希望从成本核算中分析药品价格是否合理。国家工信部旗下杂志今年2月曾撰文分析药品垄断带来的危害：医药企业的垄断行为不仅会对医药企业、整个医药产业产生影响，并将严重伤害到消费者本身。由于医药行业是国家经济的重要行业，整个医药行业的不健康发展终会影响到整个国家经济发展。文章称，由于国内医药企业在某些产品的研发、资金和技术方面相对薄弱，使得外资药企在某些产品方面具有一定的市场支配地位，而外资医药企业可能会利用自己在技术上的优势，滥用市场支配地位。从产业层面来看，一旦外资药企在国内市场上进行垄断，必将会挤压国内医药企业的生存空间，而国内医药企业的资金、技术、人才的来源可能会被外资企业占据，从而影响国内医药企业长远的发展。。一位不愿透露姓名的业内人士认为，目前国内依然存在着部分医院以药养医、利用药品销售创收的情况，这是中国医药垄断行为产生的根源之一。此外监管缺失、体制的不完善造成医院垄断药品销售、滥用市场支配地位，排除、限制竞争的重要原因。无论是专利药垄断还是曲线手法获得市场支配地位，这种紊乱市场生态、有悖商业精神的行为对中国医药行业所产生的负面影响是致命性的。(by 浮米网)

所谓亚克隆就是对已经获得的目的DNA片段进行重新克隆，其目的在于对目的DNA进行进一步分析，或者进行重组改造等。亚克隆的基本过程包括：(1)目的DNA片段和载体的制备；(2)目的DNA片段和载体的连接；(3)连接产物的转化；(4)重组子筛选。 一、试剂准备1．LB液体培养基：胰化蛋白胨（细菌培养用）10g，酵母提取物（细菌培养用） 5g，NaCl 10g，加ddH2O 至1000ml，完全溶解，分装小瓶，15lbf/in2高压灭菌20min。2．1.5%琼脂LB固体培养基: 称取1.5g琼脂粉放入300ml锥形瓶,加100ml LB，15 lbf/in2 高压灭菌20min，稍冷却，制备平皿。3．IPTG、X-Gal4．0.1M MgCl2 ：15 lbf/in2高压灭菌20min，0℃冰浴备用。5．0.1M CaCl2（以20%甘油水溶液配制）：15 lbf/in2高压灭菌20min，0℃冰浴备用。6．限制性核酸内切酶、T4 DNA连接酶。二、目的DNA片段和载体的制备选择适宜的限制性核酸内切酶，消化已知目的DNA和载体，获得线性DNA，用于重组。根据目的DNA和载体的具体情况，选择一种或者两种适当的限制酶切割，分别产生对称性粘性末端（用一种限制性内切酶进行消化而产生带有互补突出端）、不对称粘性末端（用两种不同的限制性内切酶进行消化而产生带有非互补突出端）、平端。在亚克隆时，首选不对称相容末端连接，次选对称性粘性相容性末端连接，由于平末端连接效率较低，通常很少采用。但有时目的片段的末端与载体不匹配 ，一般先将不匹配末端补平，然后再以平末端连接。（实验操作同前述） 三、利用T4 DNA连接酶进行目的DNA片段和载体的体外连接（一）连接要求和结果外源DNA片段末端性质 连接要求 连接结果 不对称粘性末端 两种限制酶消化后，需纯化载体以提高连接效率 载体与外源DNA连接处的限制酶切位点常可保留；非重组克隆的背景较低；外源DNA可以定向插入到载体中。 对称性粘性末端 线形载体DNA常需磷酸酶脱磷处理 载体与外源DNA连接处的限制酶切位点常可保留；重组质粒会带有外源DNA的串联拷贝；外源DNA会以两个方向插入到载体中。 平端 要求高浓度的DNA和连接酶 载体与外源DNA连接处的限制酶切位点消失；重组质粒会带有外源DNA的串联拷贝；非重组克隆的背景较高 。 带有相同末端(平端或粘端)的外源DNA片段必须克隆到具有匹配末端的线性质粒载体中,但是在连接反应时,外源DNA和质粒都可能发生环化,也有可能形成串联寡聚物。因此，必须仔细调整连接反应中两个DNA 的浓度，以便使“正确”连接产物的数量达到最佳水平，此外还常常使用碱性磷酸酶去除5’磷酸基团以抑制载体DNA的自身环化。利用T4 DNA连接酶进行目的DNA片段和载体的体外连接反应，也就是在双链DNA 5’磷酸和相邻的3’羟基之间形成新的共价键。如载体的两条链都带有5’磷酸（未脱磷），可形成4个新的磷酸二酯键；如载体DNA已脱磷，则只能形成2个新的磷酸二酯键，此时产生的重组DNA带有两个单链缺口，在导入感受态细胞后可被修复。（二）T4 DNA连接酶对目的DNA片段和载体连接的一般方案1．连接反应一般在灭菌的0.5ml离心管中进行。2．10μl体积反应体系中：取载体50-100ng，加入一定比例的外源DNA 分子（一般线性载体DNA分子与外源DNA分子摩尔数为1∶1-1∶5），补足ddH2O 至8μl。3．轻轻混匀，稍加离心，56℃水浴5min后，迅速转入冰浴。4．加入含ATP的10×Buffer 1μl，T4 DNA连接酶合适单位， 用ddH2O 补至10μl，稍加离心，在适当温度（一般14-16℃水浴）连接8-14hr。四、连接产物的转化1.感受态细胞的制备⑴ 保存于-70℃的DH5α（或其他菌种）用接种环划菌于1.5%琼脂平板上，37℃恒温倒置培养至单菌落出现（约14-16 hr）。⑵ 挑取单菌落，接种于2.0ml LB液体培养基中，37℃恒温，250g振荡培养过夜（约12hr）。⑶ 取0.5ml 过夜培养液，接种于100ml LB液体培养基中，37℃振荡培养2-2.5hr，至OD600为0.4-0.5时，放置于4℃冰箱冷却1-2hr。（注：以下操作均应在冰浴中进行。）⑷ 将培养液分入两个50ml离心管中，4℃离心，4000g×10min，弃去上清，用冰浴的0.1M MgCl2 25ml悬浮30min。⑸ 4℃离心,4000g×10min，弃去上清，加入冰浴的0.1M CaCl2-甘油溶液1ml悬浮。⑹ 以100μl/管分装入1.5ml离心管中，-70℃冻存备用。注：此法制备感受态细胞，可使每微克超螺旋质粒DNA产生5×106-2×107个菌落，这样的转化效率足以满足所有在质粒中进行的常规克隆的需要，制备的感受态细胞可贮存于-70℃，但保存时间过长会使转化效率在一定程度上受到影响，一般三个月以内转化效率无多大改变。2. 连接产物的转化⑴ 取100μl贮存于-70℃钙化菌，冰浴化开；⑵ 加入适量连接产物（一般不超过10μl，轻轻混匀，冰浴20min；⑶ 于42℃热休克90s，迅速转移至冰浴中，继续冰浴2-3min；⑷ 加入LB液体培养基200μl，于37℃缓摇孵育45min；⑸ 将培养物适量涂于1.5%琼脂LB平板（根据质粒性质添加抗生素或/和X-Gal/IPTG），待胶表面没有液体流动时，37℃温箱倒置培养12-16hr。

各位高手，变色龙手动进样却按照自动进样倒计时？这个咋回事？有知道的老铁吗？

[size=16px]克隆形成实验[/size][size=16px]及划痕实验[/size][size=16px]、[/size][size=16px]流式细胞术[/size][size=16px]操作步骤[/size]软琼脂克隆形成实验检测单细胞克隆形成能力软琼脂克隆形成实验适用于悬浮生长的细胞。1. 配胶液：用蒸馏水和琼脂糖粉配制浓度为 0.3% 的琼脂糖液，高压灭菌，置于42℃ 水浴锅中，目的是为了使其保持融化状态。2. 配制含 20% FBS 的 2×1640 培养基，用 0.22 ?m 的滤器过滤除菌。3. 铺下层胶：将 0.6% 的琼脂糖胶液与 2×1640 培养基等体积混合，以每孔 1.5mL 加至 6 孔板中，室温等其凝固。4. 细胞计数：将细胞用 PBS 洗一遍，离心，加入新的培养基混匀稀释，计数。H69-NC、H69-shMSI1-1、H69-shMSI1-2、H82-NC、H82-shMSI1-1、H82-shMSI1-2、H526-NC、H526-shMSI1-1、H526-shMSI1-2 均以 1×104/孔铺入 6 孔板。5. 铺上层胶：将 0.3% 的琼脂糖胶液与 2× 培养基 1：1 混合，加入 100 μL 细胞悬液，混匀后，每孔加入 1.5 mL 混合液。6. 放入 37℃，5%CO2 培养箱培养，约 2-3 周后终止培养。7. 比较细胞克隆形成能力的差异，利用 Graphpad prism5 作图计算两种细胞克隆形成能力的差异。平板克隆形成实验检测单细胞克隆形成能力平板克隆形成实验适用于贴壁生长的细胞。1. 细胞处理：将 SW1271-NC、SW1271-shMSI1-1、SW1271-shMSI1-2 细胞，用 PBS洗一遍，用胰酶消化并计数。2. 接种细胞： 将细胞接种于 6 孔板中， SW1271-NC 、SW1271-shMSI1-1 、SW1271-shMSI1-2 接种密度为 3×103/孔，注意一定让细胞均匀分布。于 37℃，隔离CO2 静置培养 2-3 周（终止培养时间以不小于 2 周且克隆之间不发生融合为标准）。3. 出现肉眼可见的克隆时，终止培养。弃去旧培养基， 用 PBS 清洗 2 次，用 4% 多聚甲醛固定液固定 20 min，吸除固定液，用蒸馏水清洗 2 次后加适量结晶紫染色15-20 min，用蒸馏水洗去结晶紫，自然风干，用扫描仪扫描成图片。4. 在低倍镜下计数大于 50 个细胞的克隆数。5. 计算克隆形成率。细胞划痕实验1. 用记号笔在 12 孔板底部划两条平行线做为标记。2. 将 SW1271-NC、SW1271-shMSI1-1、SW1271-shMSI1-2 细胞接种至 6 孔板。3. 待细胞汇合度为 90% 左右时，用 10μL 枪头垂直于两条平行标记线进行划痕。4. 吸除培养基，1xPBS 漂洗 2 次，并换用无血清培养基培养。5. 分别在划痕后培养 0h，12h，24h，48h，72h 观察细胞迁移情况并拍照。流式细胞术1. 收集 H69、H82、H526、SW1271 的对照组和实验组细胞(包括培养上清中的细胞)，收集 1 - 10 ×105 个细胞，用预冷 PBS 离心洗涤。用双蒸水稀释 5 ×Binding Buffer为 1 × 工作液，取 500 μl 1 × Binding Buffer 重悬细胞。2. 每管加入 5 μl Annexin V-APC 和 10 μl 7-AAD。3. 轻柔涡旋混匀后，室温避光孵育 5 分钟。4. 上机进行分析。

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英国的食品安全顾问委员会说，跟传统方法饲养的牛相比，克隆牛产出的牛肉和牛奶的成分没有不同，不太可能形成食品安全风险。　　英国新食品和新工艺管理委员会说，出于对动物安全的关心，消费者可能仍旧希望来自克隆动物和它们后代的产品，能贴上明显标签。欧洲委员会最近提议，五年内禁止在欧洲把克隆动物作为食品。欧盟成员国和欧盟议会最近正就此展开辩论。不过克隆动物后代的肉类或奶制品不在禁令范围内。食品安全监督机构食品标准局今年较早时说，发现在没获当局批准的情况下，有来自克隆牛后代的牛肉进入英国的食物链和被消费者食用。伦敦大学玛丽皇后学院遗传学家柯伦说，委员会的结论与其他国家监督机构的发现一致。 您觉得安全吗？您会选择克隆牛的肉和奶吗？

我们这边用的是Thermo变色龙7软件，现在要做衍生进样，哪位老师有变色龙7的衍生进样编辑方法的教程或课件吗？麻烦发一下，谢谢

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各位前輩，有無鐵氟龍類材質樣品的測試方法(包括其前處理方法和測試儀器)，因目前我們公司要對此類材質的樣品進行測試，但我們只有一臺icp,霧化室及霧化器等均為石英材質的，擔心用酸處理後的樣品會殘留有氫氟酸類物質，故一直未有對此類樣品進行測試用XRF是可以測，但其檢出限太高聽說SGS用AAS測試，但不知道其前處理方式是怎樣的若有可否指教小妹一下呢？我的郵箱：xuliang1009@tom.com謝謝大家：)

我们在做敌草隆原药的时候要做其相关杂质3,3'4,4'-四氯氧化偶氮苯和3,3'4,4'-四氯偶氮苯的测定，能查到的文献有限，富集工作进展很慢，有人做过此方面的工作么？有做农药GLP的么？大家来交流一下经验。

反正我很气愤专家建议放弃中国龙重塑国家形象 多数网友反对 来源：法制晚报(06/12/04 14:15) 　本报讯 中国形象标志将来有可能不再是“龙”。据上海媒体报道，由上海外国语大学党委书记、上海市公共关系学会副会长吴友富教授领衔，重新建构和向世界展示中国国家形象品牌这一重要研究已正式列入上海哲学社会科学规划课题立项。　　从古到今，龙一直作为中国形象的代表性标志而被中外普遍认同，中国人也以“龙的传人”为自豪。　　然而，“龙”的英文是“Drag-on”，它在西方世界被认为是一种充满霸气和攻击性的庞然大物。“龙”的形象往往让那些对中国历史、文化了解甚少的外国人由此片面地产生一些不符合实际的联想。　　吴友富说，西方世界对东方文化认识有偏差，重塑国家形象品牌时，应挖掘传统文化中的积极元素。　　据悉，这个课题如果完成，所塑造的国家新形象标志，很可能被有关部门采用。

问题: 请问甲磺胺，氨基乙腈盐酸盐，玉嘧磺隆，嘧啶胺怎么测定其含量？

袁隆平称未来超级杂交水稻高度可能达2米中国工程院院士、国家杂交水稻工程技术中心主任袁隆平提出，超级杂交稻未来株型将走“超模”路线，身高将长到1.8米，甚至2米，三年内大面积超级稻亩产将实现超过1000公斤的目标。这是袁隆平院士第五次来印度推广杂交水稻，他向来自美国、越南、菲律宾、马达加斯加等近40个国家的农业官员和专家介绍超级杂交稻未来变化的趋势，以及超高产最新研究成果。两个月前，袁隆平院士在国家杂交水稻工程技术中心的一次专家研讨会上，将超级杂交稻的发展战略交给其科研团队讨论，其中的一个重要内容就是，超级杂交稻未来株型将达到1.8米甚至2米。9月23日晚，国家杂交水稻工程技术中心谭炎宁博士告诉记者，现在育种实行的是半低秆，也就是株高约1.2米到1.3米，高秆将是超级杂交稻发展的战略。根据“稻谷产量=生物学产量(植株全部干重)×经济系数(经济产量占生物产量的比重)”的公式，要进一步提高水稻产量，需要保持在经济系数不变的前提下，提高生物学产量；适当增加株高，可能是提高生物学产量的理想途径。对于近2米株高的水稻，稻谷品质会不会改变、稻田下杂草是不是茂盛、如何施肥、是否影响收割等系列问题，谭炎宁认为，只要模式成立的话(保持经济系数不变)，这些问题都可以解决。袁隆平院士很多年前就做过“禾下乘凉梦”，也就是水稻长得像高粱一样高，稻穗像扫帚，谷粒如花生米，他就坐在像瀑布一样的稻谷下乘凉。看来，袁隆平院士这次是想让梦想成为现实。

[size=3] 英国食品标准署8月4日发布公告说，发现有两头克隆公牛的肉制品已流入市场，另有两头克隆母牛所产的牛奶是否流入市场尚不确定。这起克隆动物食品“溜”上餐桌的事件再次引发了公众对克隆动物食品的安全、管理等问题的关注和争议。克隆动物食品（以及转基因食品）能不能放心食用？21世纪的人们究竟该怎样看待克隆（转基因）动物食品？它会给我们带来什么？本期科技文摘约请专家试图就这些热门话题作出回答，敬请读者关注。 争议： “牛奶等来自健康克隆动物的食品目前看来是安全的，但必须按规定获准才能上市。”——英国食品标准署 “克隆动物食品中所含的维生素、脂肪、蛋白质、氨基酸等含量与普通动物食品无异，经克隆食品喂养长大的实验鼠也没有出现不良反应。” ——美国FDA “现有克隆技术效率低下，会对动物造成不必要的痛苦。”——英国防止虐待动物协会 “还没有令人信服的论据证实克隆动物食品的安全性。”——欧盟下属科学与新技术伦理欧洲小组 克隆的意义，表面上是用不同于两性结合繁衍后代的方式创造生命，但更重要的是要利用克隆动物获得新的生物产品，包括肉类、乳品和蛋，这些食物就可以统称为克隆动物食品 [/size]

东北网12月25日电 记者日前从负责转基因克隆猪项目的东北农业大学生命科学学院了解到，去年出生的3头绿色荧光克隆猪都已怀孕，明年1月份，它们就要当上“妈妈”了。据该课题组的科研人员尹智介绍，一年多来，在课题组成员和专门饲养员的精心照顾下，3头小猪生长很快。目前发育良好，体重达标，并已经通过正常与普通公猪的交配怀了孕，预产期为明年的1月份左右。选择与普通公猪交配，这也是课题组今后一个研究的方向。由于3头小猪为转基因克隆猪，在与普通公猪交配生产后，课题组将要对它们所生的小猪进行观察，观察其是否具有绿色荧光的标记特征。然后，再从中选取具有绿色荧光特征的小猪进行交配试验。这项研究将在家猪的转基因育种、人类疾病医疗模型猪的建立以及生产为人类器官移植提供器官的特殊家猪等方面有广泛应用前景，也将为畜牧业发展和医学研究开辟新的天地。2006年12月22日，东北农业大学传出喜讯，我国首例3头绿色荧光蛋白转基因克隆猪降生，这也是继美国、韩国和日本之后，世界上第四例成功通过体细胞核移植方式克隆出的绿色荧光蛋白转基因猪。3头小猪是自然分娩产出的，出生时的体重分别为1270克、1130克、1230克。因为这3只克隆猪具有绿色荧光蛋白转基因，所以在紫外线光源的照射下，它们的口、蹄及舌头可以看到明显呈现出绿色的荧光。