氯舒隆

各位大侠，求助啊!这几天天天加班呀，农残分析真是太麻烦了，马上要做利谷隆和绿麦隆的残留分析了，现在没有方法，谁有呀？能提供吗？谢谢啦！

求：杀鼠剂 溴鼠灵（大隆）质谱图和质谱特征离子M/z

[size=16px]克隆形成实验[/size][size=16px]及划痕实验[/size][size=16px]、[/size][size=16px]流式细胞术[/size][size=16px]操作步骤[/size]软琼脂克隆形成实验检测单细胞克隆形成能力软琼脂克隆形成实验适用于悬浮生长的细胞。1. 配胶液：用蒸馏水和琼脂糖粉配制浓度为 0.3% 的琼脂糖液，高压灭菌，置于42℃ 水浴锅中，目的是为了使其保持融化状态。2. 配制含 20% FBS 的 2×1640 培养基，用 0.22 ?m 的滤器过滤除菌。3. 铺下层胶：将 0.6% 的琼脂糖胶液与 2×1640 培养基等体积混合，以每孔 1.5mL 加至 6 孔板中，室温等其凝固。4. 细胞计数：将细胞用 PBS 洗一遍，离心，加入新的培养基混匀稀释，计数。H69-NC、H69-shMSI1-1、H69-shMSI1-2、H82-NC、H82-shMSI1-1、H82-shMSI1-2、H526-NC、H526-shMSI1-1、H526-shMSI1-2 均以 1×104/孔铺入 6 孔板。5. 铺上层胶：将 0.3% 的琼脂糖胶液与 2× 培养基 1：1 混合，加入 100 μL 细胞悬液，混匀后，每孔加入 1.5 mL 混合液。6. 放入 37℃，5%CO2 培养箱培养，约 2-3 周后终止培养。7. 比较细胞克隆形成能力的差异，利用 Graphpad prism5 作图计算两种细胞克隆形成能力的差异。平板克隆形成实验检测单细胞克隆形成能力平板克隆形成实验适用于贴壁生长的细胞。1. 细胞处理：将 SW1271-NC、SW1271-shMSI1-1、SW1271-shMSI1-2 细胞，用 PBS洗一遍，用胰酶消化并计数。2. 接种细胞： 将细胞接种于 6 孔板中， SW1271-NC 、SW1271-shMSI1-1 、SW1271-shMSI1-2 接种密度为 3×103/孔，注意一定让细胞均匀分布。于 37℃，隔离CO2 静置培养 2-3 周（终止培养时间以不小于 2 周且克隆之间不发生融合为标准）。3. 出现肉眼可见的克隆时，终止培养。弃去旧培养基， 用 PBS 清洗 2 次，用 4% 多聚甲醛固定液固定 20 min，吸除固定液，用蒸馏水清洗 2 次后加适量结晶紫染色15-20 min，用蒸馏水洗去结晶紫，自然风干，用扫描仪扫描成图片。4. 在低倍镜下计数大于 50 个细胞的克隆数。5. 计算克隆形成率。细胞划痕实验1. 用记号笔在 12 孔板底部划两条平行线做为标记。2. 将 SW1271-NC、SW1271-shMSI1-1、SW1271-shMSI1-2 细胞接种至 6 孔板。3. 待细胞汇合度为 90% 左右时，用 10μL 枪头垂直于两条平行标记线进行划痕。4. 吸除培养基，1xPBS 漂洗 2 次，并换用无血清培养基培养。5. 分别在划痕后培养 0h，12h，24h，48h，72h 观察细胞迁移情况并拍照。流式细胞术1. 收集 H69、H82、H526、SW1271 的对照组和实验组细胞(包括培养上清中的细胞)，收集 1 - 10 ×105 个细胞，用预冷 PBS 离心洗涤。用双蒸水稀释 5 ×Binding Buffer为 1 × 工作液，取 500 μl 1 × Binding Buffer 重悬细胞。2. 每管加入 5 μl Annexin V-APC 和 10 μl 7-AAD。3. 轻柔涡旋混匀后，室温避光孵育 5 分钟。4. 上机进行分析。

[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=72385]高效液相色谱法同时测定灭鼠毒饵中杀鼠灵、溴敌隆、大隆的含量[/url]

HG2168-1991绿麦隆原药

我在做免疫分析的时候想通过聚电解质静电吸附方法来固定单克隆抗体，想请教一下小鼠抗人单克隆IgG等电点一般多少？邮箱： lgs005@126.com谢谢，望不吝指教！

概念：细胞克隆形成率即细胞接种存活率，表示接种细胞后贴壁的细胞成活并形成克隆的数量。贴壁后的细胞不一定每个都能增殖和形成克隆，而形成克隆的细胞必为贴壁和有增殖活力的细胞。克隆形成率反映细胞群体依赖性和增殖能力两个重要性状。基本步骤：1、取对数生长期的各组细胞，分别用0.25%胰蛋白酶消化并吹打成单个细胞，并把细胞悬浮在10%胎牛血清的DMEM培养液中备用。2、将细胞悬液作梯度倍数稀释，每组细胞分别以每皿50、100、200个细胞的梯度密度分别接种含10mL 37℃预温培养液的皿中，并轻轻转动，使细胞分散均匀。置37℃ 5% CO2及饱和湿度的细胞培养箱中培养2～3周。3、经常观察，当培养皿中出现肉眼可见的克隆时，终止培养。弃去上清液，用PBS小心浸洗2次。加4%多聚甲醛固定细胞5mL固定15分钟。然后去固定液，加适量GIMSA应用染色液染10～30分钟，然后用流水缓慢洗去染色液，空气干燥。4、将平皿倒置并叠加一张带网格的透明胶片，用肉眼直接计数克隆，或在显微镜（低倍镜）计数大于10个细胞的克隆数。最后计算克隆形成率。克隆形成率 =（克隆数/接种细胞数）×100%平板克隆形成试验方法简单，适用于贴壁生长的细胞。适宜底物为玻璃的、塑料瓶皿。试验成功的关键是细胞悬液的制备和接种密度。细胞一定要分散得好，不能有细胞团，接种密度不能过大。

2009年10月7日，美国发布通报，美环保署拟制定杀虫剂Meptyldinocap、氯吡嘧磺隆、多杀菌素的许可限量。 本最终法规规定葡萄内/表Meptyldinocap，2-(1-methylheptyl)-4,6-dinitrophenyl (2E)-2-butenoate及按Meptyldinocap表示的2,4-DNOP, 2,4-dinitro-6-(1-methylheptyl)phenol混合残留的许可限量为：0.20 ppm。 本最终法规规定大豆种内的氯吡嘧磺隆(Halosulfuron-methyl)及其代谢物及降解物残留许可限量为：0.05 ppm。许可限量合格性将通过检测产品内/表氯吡嘧磺隆(Halosulfuron-methyl, methyl3-chloro-5-[[[[(4,6-dimethoxy-2-pyrimidinyl)amino]carbonyl]amino]sulfonyl]-1-methyl-1H-pyrazole-4-carboxylate来确定。 本最终法规规定以下作物内/表两种相关活性成分：Spinosyn A (Factor A CAS#131929-60-7)或2-[(6-deoxy-2,3,4-tri-O-methyl-[alpha]-L-manno-pyranosyl)oxy]-13-[[5-(dimethylamino)-Tetra-hydro-6-methyl-2H-pyran-2-yl]oxy]-9-ethyl-2,3,3a,5a,5b,6,9,10,11,12,13,14,16a,16b-tetrad-cahydro-14-methyl-1H-as-Indaceno[3,2-d]oxacyclododecin-7,15- dione 及Spinosyn D (Factor D CAS#131929-63-0) 或2-[(6-deoxy-2,3,4-tri-O-methyl-[alpha]-L-manno-pyranosyl) oxy]-13-[[5- (dimethyl-amino)-tetrahydro-6-methyl-2H-pyran-2-yl]oxy]-9-ethyl-2,3,3a,5a,5b,6, 9,10,11,12,13,14,16a,16b-tetradecahydro-4,14-methyl-1H-as-Indaceno[3,2-d]Oxacy-clododecin-7,15-dione组成的多杀菌素(Spinosad)残留许可限量：杏壳：19 ppm；坚果树14组：0.10 ppm；开心果：0.10 ppm；酸枣：0.10 ppm及石榴：0.30 ppm。 2009年9月24日，美国发布通报，美国环保署拟制定杀虫剂乙草胺的许可限量。 本最终法规规定了以下作物内/表杀虫剂乙草胺(Acetochlor) ，包括其代谢物及降级物的许可限量：轧棉副产品：4.0 ppm 未去纤维棉籽：0.6 ppm 大豆粉：1.2 ppm及大豆种：1.0 ppm。这些残留限量标准合格性只能通过检测乙草胺(acetochlor)、2-chloro-2''''-methyl-6-ethyl-N-ethoxymethylacetanilide及其含半EMA及半HEMA的代谢物来确定。（信息来源：中国技术性贸易措施网）

[b][color=#cc0000]重庆武隆避暑之木里小镇 11[/color][/b][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/07/202407181329335237_6675_1841897_3.png[/img]

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自克隆牛问世以来，不少人担心食用克隆牛的肉是否安全的问题。不久前，日本鹿儿岛县的肉用牛改良研究所，对体细胞克隆牛的最新解剖结果表明，克隆牛的肉质无异常之处，与一般菜牛的肉质没有什么两样，人们可以放心地食用，不必担心。据日本的这家畜牧科研机构向新闻界发布的消息说，被解剖的克隆牛，是该所"神高福1号"和"神高福2号"两头体细胞克隆牛。它们都是1998年12月出生的，分别是该所的第6头和第7头体细胞克隆牛。这两头克隆牛，都经过催肥后被宰杀、解剖。研究人员对其检验后确认，它们的肉质以及内脏器官，均与一般菜牛无差异，人们食用后，不会产生不良影响。 在日本，对体细胞克隆牛进行解剖，该研究所尚属首次。去年6月，日本厚生劳动省曾发表报告指出，对用克隆动物生产的食品的安全性表示担心是没有科学根据的。该所对克隆牛的解剖，已证实了这一论断。从而，为克隆动物生产的食品走向市场，创造了条件。 美国食品和药物管理局召开新闻发布会，宣布了一条重要消息：经过安全评估，来自于克隆猪、牛、羊的肉和奶，与普通肉类和奶制品一样安全，消费者可以放心食用。 美国食品和药物管理局食品安全的负责人在发布会上宣布的这一结论，为克隆家禽相关产品进入市场，扫清了最后的障碍。此前，美国出于食品安全考虑，一直要求克隆动物的肉制品和奶制品暂缓进入市场销售。全美许多大的食品公司也都对克隆食品持谨慎的态度，主要是考虑到普通消费者对克隆食品的技术，还存在信心不足的问题。 布鲁斯耐特，美国农业部副部长：随着美国食品和药物管理局所发表的申明##食品安全问题已不存在了##现在只是一个市场接受度的问题了 上个月，美国肉类及乳制品生产商宣布，他们将会在对外销售的克隆家禽上套上电子认证的标签，让消费者自己做决定。但是这一计划并不是强制性的。此前欧盟食品安全局也表示，克隆动物的肉和奶，离欧盟超市货架又近了一步，因为克隆食品是安全的，可以食用。就这一问题，欧洲食品安全局将同欧盟成员国进行磋商，并在5月份，就克隆食品销售提出最后的意见。

[~150224~] 我要测土壤中氯氰菊酯、莠去津和利谷隆的含量，想用固相萃取和高效液相色谱法，但不知该如何确定HPLC的色谱条件，还有对固相萃取每一步骤中如活化、上样、淋洗、洗脱和最后定容的溶剂体积有没有具体的规定啊？我是新手，很多东西都还不懂，现在老师让我先建立起相关检测方法，希望各位高手能给于指点。谢谢！！！

我现在在做大气中水溶性离子的实验，使用特氟隆（聚四氟乙烯）滤膜对大气颗粒物进行采样的。做前处理时发现滤膜不吸水，超声萃取时几乎没有作用。请问各位大侠特氟隆滤膜收集粒子时，怎么进行前处理萃取啊？能否详细给我讲一下啊，O(∩_∩)O谢谢

原创与否转贴82岁高龄的袁隆平，自称是“80后”。他说，等自己成了“90后”时，超级稻亩产1000公斤的目标一定能够实现。3月4日晚，全国政协委员驻地——北京国际饭店，袁隆平接受了《中国经济周刊》的专访。在铺着地毯的套间里，“80后”袁隆平光着脚，扑在一桌子的文件和资料里，手舞足蹈地讲起了超级稻、粮价和转基因问题。直言不讳的袁隆平并不担心自己的言语会“得罪人”，“我怕什么，我这么大把年纪了，还不能说几句实话？憋死人咯！”补石油不如补农民今年两会，袁隆平的提案是《关于粮价的建议》。提案上说，根据湖南省物价局调查统计，2011年农民种植每亩水稻，除去国家的粮食补贴，纯收益只有7.5元。“七块五啊！太少了，农民多穷啊，农民多可怜啊！”袁隆平激动地说，“种地拿不到钱，农民就不种了，抛弃耕地到城里打工去了，种田的人越来越少，粮食从哪里来呢？”从2010年起，袁隆平走访了湖南的多个县乡和农村，他发现，大量耕地被荒废，甚至被用来作为建筑用地和垃圾场。“耕地多宝贵啊，现在全国的耕地越来越少，以后粮食不够了可怎么办呢？到哪里去种呢？”袁隆平担心，18亿亩的耕地红线有被突破的可能。“现在的耕地面积已经很少了，如果得不到好的保护，耕地面积一年年减少，我们就没有退路了。”最让袁隆平担心的还是粮价问题。“粮食是宝中之宝，粮价是百价之基。”一方面，粮食价格一旦上涨，就会牵一发而动全身，导致整个物价的上涨，甚至会引起社会动乱。“所以大家都说粮价涨不得。”但另一方面，“粮价偏低则谷贱伤农，影响农民种粮的积极性，甚至影响国家的粮食安全。”因此，袁隆平建议，政府要以较高的价格收购农民的粮食，“大大提高农民种粮的积极性和收入，保住农民的基本利益，保住耕地。”然后再以平价出售粮食，“保障民生，保证老百姓的日常生活水平，保证国家粮食的安全和价格的平稳。”如果由政府来补贴其中的差价，就能“两头兼顾”了。在全国政协无党派界别小组讨论会上，袁隆平第二个发言，“总理的政府工作报告提到，今年要继续提高稻谷最低收购价，平均每100斤提高16元，这非常好，但我觉得还不够，应该每100斤提高50元，我们的政府现在有这个财力。”虽然自1982年起，中共中央陆续出台了11个“一号文件”，力求“惠农利农”，扶持和完善农业发展，但袁隆平认为，“力度还不够大，种粮农民的收入依然相当微薄。”根据现行的种粮补贴政策，“按田亩算补贴，是很不合理的，高产田与低产田没有差别，不种粮的田地也能得到补贴，甚至抛荒田也能得到补贴，这样会影响农民积极性，大家都不好好种粮食了。”“国家每年拿上亿的钱来补贴石油企业更不合理。”袁隆平对此很不解，“石油那么贵，都是高价、高利润的垄断企业，做石油的人都是有钱人，都是开小车的人，哪里还需要国家的补助呢？国家补贴他们干什么？为什么不拿这个钱来补贴农民呢？农民辛辛苦苦种一亩地得了100块钱，就是很多有钱人的两包烟钱。”有人提醒袁隆平，为农民争取补贴可以，但是不要“抨击”别人，但袁隆平还是直言不讳，“我怕什么，我那么大把年纪了，还不能说几句实话？憋死人咯！”“90后”的1000公斤目标2011年，袁隆平在湖南隆回的超级稻百亩试验田里交出了新的成绩单——亩产926.6公斤。“这不算啥子，等我变成了‘90后’，亩产1000公斤一定能实现。”他使劲地挥挥手，并不满足于这个数字。袁隆平的目标很清晰，“希望今年达到940公斤至950公斤，明年970公斤至980公斤，再有一年，力争达到1000公斤，从科学上讲，杂交水稻还是有这个潜力的。”“安徽省六安市很重视杂交稻亩产1000公斤攻关，现在已经选定了3个百亩千公斤攻关片。前两天我派了几个助手、也是专家选了几个品种过去，帮他们策划，肯定能搞出来。”袁隆平说。袁隆平笑称自己是“80后”，尚且年轻，等再过几年到了“90后”，“那家伙更厉害。”“我管这叫‘矮子爬楼梯，一步一步走’，大家一齐努力。”2011年初，袁隆平就与黑龙江农垦集团开展合作攻关，计划在2015年培育出比当地祖代品种单产高15%左右的寒地杂交粳稻品种。“我们计划是通过2011年到2015年的联合攻关，建立一个技术体系平台，培育出来强优势杂交粳稻品种，如果研究出来了，‘北大仓’就又屯上粮了，我们的国家储备就不愁了。”袁隆平高兴地说，“我们在加劲儿呢，这一天一定会早点来到。”人民不是小白鼠2月21日，两会前夕，国务院法制办公布了由国家发改委、国家粮食局会同有关部门起草的《粮食法征求意见稿》，其中第十二条特别提出，“转基因粮食种子的科研、试验、生产、销售、进出口应当符合国家有关规定。任何单位和个人不得擅自在主要粮食品种上应用转基因技术。”这次表态被视为“转基因争议”的一次里程碑事件。自2009年11月，中国政府颁发了两种转基因水稻的安全证书之后，关于转基因所涉及的食品安全、种子安全、粮食安全和经济利益之争等系列问题就引发了持久性的大讨论。作为举足轻重的农业专家，袁隆平自称是“中间派”。“转基因有两派，一个是反对派，一个是赞成派，我是中间派，因为反对派和赞成派都很有道理。”他分析说，“反对派的道理在于转基因抗病抗虫的功能来自于毒蛋白基因，虫吃了是要死的，人吃了怎么办？会不会威胁健康？”赞成派也有站得住的理由，“他们解释说，昆虫的死亡是因为气孔闭塞了，但这跟人的消化道完全是两码事。”虽然袁隆平自称是“中间派”，但他仍认为，在没有实验结果作为根据的前提下，将转基因用于主粮生产是“要慎重的”。“他们赞成转基因的，是用小白鼠做的实验，可是小白鼠和人能一样吗？他们有人类食用转基因的实验结果吗？”袁隆平坦言，“人民不是小白鼠，不能这样用那么多人的健康和生命安全做实验，来冒险。”他说，“我愿意吃转基因食品，来亲自做这个实验，但是问题是我已经没有生育能力了，转基因对性能力和遗传性的影响是需要实验证明的，如果有年轻人自愿做实验，吃转基因食品在两年以上，不影响生育和下一代的健康，那才安全。”即使袁隆平对转基因的普及仍存有疑虑，但他也表示，“从科学的角度，转基因是发展方向，不能一概而论。现在我们正在把玉米的基因转到水稻上来，提高水稻的光合效应，这样的转基因有什么问题？一点问题都没有。”袁隆平一直笃信一句话——没有调查就没有发言权。“没有亲自实验过，也就没有发言权，所以不要轻易地肯定或否定，也不要猜测和推论，要用事实说话。”倡议成立“中国生命科学学会”两会前，厉以宁、钟南山、袁隆平等国内著名的院士曾集体发出倡议——成立“中国生命科学学会”。两会期间，这一倡议又出现在他们的提案议案之中。据了解，“中国生命科学学会”是一个汇聚了众多领域顶级专家的“智库”，主要目标是为国家的重大决策提供科学依据与智力支撑，被称为“混搭型高级智囊团”。“我是一个研究农业的人，农业主要是为了解决人的吃饭问题，吃饭问题可以说是最大的民生。”袁隆平介绍说，他的倡议与中国“吃饱饭的问题”紧密相关。“虽然，现在绝大多数人都能吃饱饭了，但潜在的危机仍然严重。”按照袁隆平的估算，“我们这样的一个13亿人的国家，不久将变成14、15、16亿，而国家的土地却不会再增加，按目前的发展水平，人口压力越大，农业供给的压力越大，因此，人要吃饭，只能依靠进口粮食。”一旦依靠进口，中国便丧失了粮食安全上的主动立场。“小国依靠进口粮食还没什么大问题，像中国这样的大国，粮食始终是重要的战略物资，如果没有足够粮食，别人就会掐住我们的脖子。”袁隆平对此很担忧。因此，袁隆平倡议成立“中国生命科学学会”，“对粮食问题进行战略层面的研究，比如，如何加大国家对农业生产方面的投入，如何提高我们的农业技术和科技水平，如何提高我们的粮食产量，保证供给，如何解决好‘三农’问题等，都需要从宏观政策层面有更全面、更准确、更清晰的考虑。”最重要的是，现代农业的发展已经暴露出了诸多问题。“现在在农业生产过程中，为了防治病虫害、增加产量，农药与化肥被广泛使用，甚至是滥用，已经造成了一些不良后果。”在袁隆平看来，这种滥用“简直就是给耕地下毒药”。另外，家禽、家畜的传染病，如禽流感、SARS等，已经变成了威胁人类生命的重大传染病。“怎么保证人民的健康和生命安全？怎么控制人口的增长？怎么处理好经济发展和环境保护之间的关系？我们需要多领域的专家好好坐在一起商量出个对策，并且递交给中央，为国家出力。”袁隆平期望着，“中国生命科学学会”能尽早获批成立，成为他“大器晚成”的重要一步。

尼龙材质的滤膜属于通用系列的滤膜吗?都可以用于水相或有机相的吗?

[font=宋体][font=宋体]单克隆抗体是由单一[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞克隆产生的高度均一、仅针对某一特定抗原表位的抗体，称为单克隆抗体。通常采用杂交瘤技术来制备，杂交瘤[/font][font=Calibri](hybridoma)[/font][font=宋体]抗体技术是在细胞融合技术的基础上，将具有分泌特异性抗体能力的致敏[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞和具有无限繁殖能力的骨髓瘤细胞融合为[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞杂交瘤。[b]下面为大家讲解[url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/monoclonal-antibody-production]制备单克隆抗体[/url]药物的工艺流程步骤[/b]：[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、抗原提纯与动物免疫[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]对抗原的要求是纯度越高越好，尤其是初次免疫所用的抗原。如为细胞抗原，可取[/font][font=Calibri]1[/font][font=宋体]×[/font][font=Calibri]107[/font][font=宋体]个细胞作腹腔免疫。可溶性抗原需加完全福氏佐剂并经充分乳化，如为聚丙烯酰胺电泳纯化的抗原，可将抗原所在的电泳条带切下，研磨后直接用以动物免疫。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]选择与所用骨髓瘤细胞同源的[/font][font=Calibri]BALB/c[/font][font=宋体]健康小鼠，鼠龄在[/font][font=Calibri]8[/font][font=宋体]～[/font][font=Calibri]12[/font][font=宋体]周，雌雄不限。为避免小鼠反应而不佳或免疫过程中死亡，可同时免疫[/font][font=Calibri]3[/font][font=宋体]～[/font][font=Calibri]4[/font][font=宋体]只小鼠。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]免疫过程和方法与多克隆抗血清制备基本相同，因动物、抗原形式、免疫途径不同而异，以获得高效价抗体为最终目的。免疫间隔一般[/font][font=Calibri]2[/font][font=宋体]～[/font][font=Calibri]3[/font][font=宋体]周。一般被免疫动物的血清抗体效价越高，融合后细胞产生高效价特异抗体的可能性越大，而且单克隆抗体的质量（如抗体的浓度和亲和力）也与免疫过程中小鼠血清抗体的效价和亲和力密切相关。末次免疫后[/font][font=Calibri]3[/font][font=宋体]～[/font][font=Calibri]4[/font][font=宋体]天，分离脾细胞融合。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]、骨髓瘤细胞及饲养细胞的制备[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]选择瘤细胞株的最重要的一点是与待融合的[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞同源。如待融合的是脾细胞，各种骨髓瘤细胞株均可应用，但应用最多的是[/font][font=Calibri]Sp2/0[/font][font=宋体]细胞株。该细胞株生长及融合效率均佳，此外，该细胞株本身不分泌任何免疫球蛋白重链或轻链。细胞的最高生长刻度为[/font][font=Calibri]9[/font][font=宋体]×[/font][font=Calibri]105/ml[/font][font=宋体]，倍增时间通常为[/font][font=Calibri]10[/font][font=宋体]～[/font][font=Calibri]15h[/font][font=宋体]。融合细胞应选择处于对数生长期、细胞形态和活性佳的细胞（活性应大于[/font][font=Calibri]95[/font][font=宋体]％）。骨髓瘤细胞株在融合前应先用含[/font][font=Calibri]8-[/font][font=宋体]氮鸟嘌呤的培养基作适应培养，在细胞融合的前一天用新鲜培养基调细胞浓度为[/font][font=Calibri]2 [/font][font=宋体]×[/font][font=Calibri]105/ml[/font][font=宋体]，次日一般即为对数生长期细胞。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]在体外培养条件下，细胞的生长依赖适当的细胞密度，因而，在培养融合细胞或细胞克隆化培养时，还需加入其他饲养细胞（[/font][font=Calibri]feeder cell[/font][font=宋体]）。常用的饲养细胞为小鼠的腹腔细胞，制备方法为用冷冻果糖液注入小鼠腹腔，轻揉腹部数次，吸出后的液体中即含小鼠腹腔细胞，其中在巨噬细胞和其他细胞。亦有用小鼠的脾细胞、大鼠或豚鼠的腹腔细胞作为饲养细胞的。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]在制备饲养细胞时，切忌针头刺破动物的消化器官，否则所获细胞会有严重污染。饲养细胞调至[/font][font=Calibri]1[/font][font=宋体]×[/font][font=Calibri]105/ml[/font][font=宋体]，提前一天或当天置板孔中培养。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3[/font][font=宋体]、细胞融合[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]细胞融合是杂交瘤技术的中心环节，基本步骤是将两种细胞混合后加入[/font][font=Calibri]PEG[/font][font=宋体]使细胞彼此融合。其后吧培养液稀释[/font][font=Calibri]PEG[/font][font=宋体]，消除[/font][font=Calibri]PEG[/font][font=宋体]的作用。将融合后的细胞适当稀释，分置培养板孔中培养。融合过程中有几个问题应特别注意。①细胞比例：骨髓瘤细胞与脾细胞的比值可从[/font][font=Calibri]1:2[/font][font=宋体]到[/font][font=Calibri]1:10[/font][font=宋体]不等，常用[/font][font=Calibri]1:4[/font][font=宋体]的比例。应保证两种细胞在融合前都具有较高活性。②反应时间：在两种细胞的混合细胞悬液中，第[/font][font=Calibri]1min[/font][font=宋体]滴加[/font][font=Calibri]4.5ml[/font][font=宋体]培养液；间隔[/font][font=Calibri]2min[/font][font=宋体]滴加[/font][font=Calibri]5ml[/font][font=宋体]培养液，尔后加培养液[/font][font=Calibri]50ml[/font][font=宋体]。③培养液的成分：对融合细胞，良好的培养液尤其重要，其中的小牛血清、各种离子和营养成分均需严格配制。如融合效率降低，应随时核查培养基情况。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]4[/font][font=宋体]、有限稀释法[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]筛选阳性株一般选用的骨髓瘤细胞为[/font][font=Calibri]HAT[/font][font=宋体]敏感细胞株，所以只有融合的细胞才能待续存活一周以上。融合细胞呈克隆生长，经有限稀释后（一般稀释至[/font][font=Calibri]0.8[/font][font=宋体]个细胞[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]孔），按[/font][font=Calibri]Poisson[/font][font=宋体]法计算，应有[/font][font=Calibri]36[/font][font=宋体]％的孔为[/font][font=Calibri]1[/font][font=宋体]个细胞[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]孔。细胞培养至覆盖[/font][font=Calibri]0[/font][font=宋体]％～[/font][font=Calibri]20[/font][font=宋体]％孔底时，吸取培养上清用[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]检测抗体含量。首先依抗体的分泌情况筛选出高抗体分泌孔，将孔中细胞再行克隆化，尔后进行抗原特异的[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]测定，选高分泌特异性细胞株扩大培养或冻存。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]5[/font][font=宋体]、单克隆抗体的制备和冻存[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]筛选出的阳性细胞株应及早进行抗体制备，因为融合细胞随培养时间延长，发生污染、染包体丢失和细胞死亡的机率增加。抗体制备有两种方法。一是增量培养法，即将杂交瘤细胞在体外培养，在培养液中分离单克隆抗体。该法需用特殊的仪器设备，一般应用无血清培养基，以利于单克隆抗体的浓缩和纯化。最普遍采用的是小鼠腹腔接种法。选用[/font][font=Calibri]BALB/c[/font][font=宋体]小鼠或其亲代小鼠，先用降植烷或液体石蜡行小鼠腹腔注射，一周后将杂交瘤细胞接种到小鼠腹腔中去。通常在接种一周后即有明显的腹水产生，每只小鼠可收集[/font][font=Calibri]5[/font][font=宋体]～[/font][font=Calibri]10ml[/font][font=宋体]的腹水，有时甚至超过[/font][font=Calibri]40ml[/font][font=宋体]。该法制备的腹水抗体含量高，每毫升可达数毫克甚至数十毫克水平。此外，腹水中的杂蛋白也较少，便于抗体的纯化。接种细胞的数量应适当，一般为[/font][font=Calibri]5[/font][font=宋体]×[/font][font=Calibri]105/[/font][font=宋体]鼠，可根据腹水生长情况适当增减。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]选出的阳性细胞株应及早冻存。冻存的温度越低越好，冻存于液氮的细胞株活性仅有轻微的降低，而冻存在－[/font][font=Calibri]70[/font][font=宋体]℃冰箱则活性改变较快。细胞不同于菌种，冻存过程中需格外小心。二甲亚砜（[/font][font=Calibri]DMSO[/font][font=宋体]）是普遍应用的冻存保护剂。冻存细胞复苏后的活性多在[/font][font=Calibri]50[/font][font=宋体]％～[/font][font=Calibri]95[/font][font=宋体]％之间。如果低于[/font][font=Calibri]50[/font][font=宋体]％，则说明冻存复苏过程有问题[/font][font=Calibri].[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]6[/font][font=宋体]、单克隆抗体的纯化[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]单克隆抗体的纯化方法同多克隆抗体的纯化，腹水特异性抗体的浓度较抗血清中的多克隆抗体高，纯化效果好。按所要求的纯度不同采用相应的纯化方法。一般采用盐析、凝胶过滤和离子交换层析等步骤达到纯化目的，也有采用较简单的酸沉淀方法。目前最有效的单克隆抗体纯化方法为亲和纯化法，多用葡萄球菌[/font][font=Calibri]A[/font][font=宋体]蛋白或抗小鼠球蛋白抗体与载体（最常用[/font][font=Calibri]Sepharose[/font][font=宋体]）交联，制备亲和层析柱将抗体结合后洗脱，回收率可达[/font][font=Calibri]90[/font][font=宋体]％以上。蛋白可与[/font][font=Calibri]IgG1[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IgG2a[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IgG2b[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]IgG3[/font][font=宋体]结合，同时还结合少量的[/font][font=Calibri]IgM[/font][font=宋体]。洗脱液中的抗体浓度可用紫外光吸收法粗测，小鼠[/font][font=Calibri]IgG[/font][font=宋体]单克隆抗体溶液在[/font][font=Calibri]A280nm[/font][font=宋体]时，[/font][font=Calibri]1.44[/font][font=宋体]（吸光单位）相当于[/font][font=Calibri]1mg/ml[/font][font=宋体]。经低[/font][font=Calibri]pH[/font][font=宋体]洗脱后在收集管内预置中和液或速加中和液对保持纯化抗体的活性至关重要。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]详情可以关注：[url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/mab-purification][b]单克隆抗体纯化[/b][/url][/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/mab-purification[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font]

东北网12月25日电 记者日前从负责转基因克隆猪项目的东北农业大学生命科学学院了解到，去年出生的3头绿色荧光克隆猪都已怀孕，明年1月份，它们就要当上“妈妈”了。据该课题组的科研人员尹智介绍，一年多来，在课题组成员和专门饲养员的精心照顾下，3头小猪生长很快。目前发育良好，体重达标，并已经通过正常与普通公猪的交配怀了孕，预产期为明年的1月份左右。选择与普通公猪交配，这也是课题组今后一个研究的方向。由于3头小猪为转基因克隆猪，在与普通公猪交配生产后，课题组将要对它们所生的小猪进行观察，观察其是否具有绿色荧光的标记特征。然后，再从中选取具有绿色荧光特征的小猪进行交配试验。这项研究将在家猪的转基因育种、人类疾病医疗模型猪的建立以及生产为人类器官移植提供器官的特殊家猪等方面有广泛应用前景，也将为畜牧业发展和医学研究开辟新的天地。2006年12月22日，东北农业大学传出喜讯，我国首例3头绿色荧光蛋白转基因克隆猪降生，这也是继美国、韩国和日本之后，世界上第四例成功通过体细胞核移植方式克隆出的绿色荧光蛋白转基因猪。3头小猪是自然分娩产出的，出生时的体重分别为1270克、1130克、1230克。因为这3只克隆猪具有绿色荧光蛋白转基因，所以在紫外线光源的照射下，它们的口、蹄及舌头可以看到明显呈现出绿色的荧光。

[size=3][font=宋体]2010[/font][font=宋体]年8月25日[/font][/size][font=宋体][size=3]美国发布通报，该法规对该文件确定和讨论的多种商品内/表氯吡嘧磺隆(Halosulfuron -methyl)规定了残留许可限量。此外，该法规还取消了多汁食荚菜豆0.05ppm的现行许可限量，由该措施规定的豌豆和带皮多汁豆类亚组6B许可限量0.05 ppm所替代。([color=#0080c0]来源：国家食品安全信息中心)[/color][/size][/font]

腾龙公司上下分【151-1870-5547】-[b]余氯对氨氮的影响[/b][font=宋体]并且做了加硫代硫酸钠和不加的比对，发现氨氮数据结果相差不是很多。那余氯多少才会影响氨氮数据？余氯的干扰是正干扰还是负干扰？另外氨氮中絮凝沉淀中写[/font][font=宋体]“必要时，需要经水冲洗中速滤纸过滤”这个必要时，是指什么大概范围呢？还是说每次都要絮凝过滤呢？（发帖还需要级别吗？级别不够不能发什么样子的帖子呢？）[/font]