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啶氧菌酯

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啶氧菌酯相关的论坛

  • 志贺氏菌检验新国标厌氧增菌装备适用性分析

    志贺氏菌检验新国标厌氧增菌装备适用性分析

    常见的厌氧培养方法1. 厌氧袋培养法:塑料袋透明而不透气,内装气体发生管(有硼氢化钠的碳酸氢钠固体以及5%柠檬酸安瓿)、美兰指示剂管、钯催化剂管、干燥剂。放入已接种好的平板后,尽量挤出袋内空气,然后密封袋口。先折断气体发生管,后折断美兰指示剂管,使袋内在半小时内造成无氧环境。如不突变表示袋内已达厌氧状态,于生化培养箱中培养。厌氧袋对于志贺氏菌厌氧增菌的缺陷:1、很难实现GB4789.5-2012中所需的大量250ml或500ml三角烧瓶的厌氧培养2、无法实现操作过程的厌氧环境,明显降低厌氧菌的检出率3、操作繁琐,易引起实验失败4、培养灵活性较差5、一次性耗材成本高2.厌氧罐培养法:塑料或不锈钢密封罐,内置钯颗粒催化剂,将培养皿、厌氧指示袋(条)以及开封后的厌氧产气袋一同置于罐内,罐盖封闭后抽真空,30分钟后达到厌氧状态,观察厌氧指示袋(条)如无颜色产生,则将厌氧罐于生化培养箱中培养。厌氧罐对于志贺氏菌厌氧增菌的缺陷:1、很难实现GB4789.5-2012中所需的大量250ml或500ml三角烧瓶的厌氧培养2、无法实现操作过程的厌氧环境,明显降低厌氧菌的检出率3、操作繁琐,易引起实验失败4、培养灵活性较差5、一次性耗材成本高3. 传统厌氧培养箱培养法:样品置于传输舱内,抽真空/充氮气3次循环(约26分钟),打开内门进入厌氧操作室。厌氧环境下进行接种等操作后,再转移至培养室内培养。箱内厌氧是在钯催化剂的作用下箱内剩余的O2与混合气中的H2生成水,再通过干燥剂去除多余水分,形成厌氧培养环境。传统厌氧培养箱对于志贺氏菌厌氧增菌的缺陷:1、样品转移所需的抽真空/充氮操作复杂,耗时过多2、无强制对流循环系统,箱内环境很难达到均一稳定,厌氧恢复速度很慢3、无厌氧状态指示,无泄漏报警4、不支持UV紫外消毒,密封材料易老化而产生泄漏5、无生物脱毒能力4. 厌氧增菌培养设备选择建议1、兼具培养与操作功能的厌氧工作站能为增菌所需的三角烧瓶提供宽敞的培养空间;2、内腔强制对流系统,确保箱内环境均一稳定,厌氧氛围快速恢复;3、无抽真空/充氮繁琐操作,有效提高操作效率并节省气体消耗;4、支持UV紫外消毒,抗密封材料而避免泄漏;5、具有生物脱毒能力,保证内腔气体洁净;6、标配厌氧状态指示系统,能随时让用户了解内腔厌氧状态。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/07/201207162327_378019_1821047_3.jpg

  • 培养基的制备与灭菌

    一、实验目的1、了解并掌握培养基的配制、分装方法;2、掌握各种实验室灭菌方法及技术。二、实验原理 培养基是供微生物生长、繁殖、代谢的混合养料。由于微生物具有不同的营养类型,对营养物质的要求也各不相同,加之实验和研究的目的不同,所以培养基的种类很多,使用的原料也各有差异,但从营养角度分析,培养基中一般含有微生物所必需的碳源、氮源、无机盐、生长素以及水分等。另外,培养基还应具有适宜的pH值、一定的缓冲能力、一定的氧化还原电位及合适的渗透压。琼脂是从石花菜等海藻中提取的胶体物质,是应用最广的凝固剂。加琼脂制成的培养基在98~100℃下融化,于45℃以下凝固。但多次反复融化,其凝固性降低。任何一种培养基一经制成就应及时彻底灭菌,以备纯培养用。一般培养基的灭菌采用高压蒸汽灭菌。三、实验材料 1、器皿及材料 天平、称量纸、牛角匙、精密pH试纸、量筒、刻度搪瓷杯、试管、三角瓶、漏斗、分装架、移液管及移液管筒、培养皿及培养皿盒、玻璃棒、烧杯、试管架、铁丝筐、剪刀、酒精灯、棉花、线绳、牛皮纸或报纸、纱布、乳胶管、电炉、灭菌锅、干燥箱。 2、药品试剂 蛋白胨、牛肉膏、NaCl、K2HPO4、琼脂、NaNO3、KCl、MgSO4、FeSO4、蔗糖、麦芽糖、木糖、葡萄糖、半乳糖、乳糖、土豆汁、豆芽计、磷酸铵、5%NaOH溶液、5%HCl溶液。 3、流程 称药品→溶解→调pH值→融化琼脂→过滤分装→包扎标记→灭菌→摆斜面或倒平板。 四、实验步骤 1 培养基的制备 1.1 称量药品 根据培养基配方依次准确称取各种药品,放入适当大小的烧杯中,琼脂不要加入。蛋白胨极易吸潮,故称量时要迅速。 1.2 溶解 用量筒取一定量(约占总量的1/2)蒸馏水倒入烧杯中,在放有石棉网的电炉上小火加热,并用玻棒搅拌,以防液体溢出。待各种药品完全溶解后,停止加热,补足水分。如果配方中有淀粉,则先将淀粉用少量冷水调成糊状,并在火上加热搅拌,然后加足水分及其它原料,待完全溶化后,补足水分。 1.3 调节pH 根据培养基对pH的要求,用5%NaOH或5%HC1溶液调至所需pH。测定pH可用pH试纸或酸度计等。 1.4 溶化琼脂 固体或半固体培养基须加入一定量琼脂。琼脂加入后,置电炉上一面搅拌一面加热,直至琼脂完全融化后才能停止搅拌,并补足水分(水需预热)。注意控制火力不要使培养基溢出或烧焦。 1.5 过滤分装 分装时注意不要使培养基沾染在管口或瓶口,以免浸湿棉塞,引起污染。液体分装高度以试管高度的1/4左右为宜。固体分装装量为管高的1/5,半固体分装试管一般以试管高度的1/3为宜;分装三角瓶,其装量以不超过三角瓶容积的一半为宜。 1.6 包扎标记 培养基分装后加好棉塞或试管帽,再包上一层防潮纸,用棉绳系好。在包装纸上标明培养基名称,制备组别和姓名、日期等。 1.7 灭菌 上述培养基应按培养基配方中规定的条件及时进行灭菌。普通培养基为121℃20min,以保证灭菌效果和不损伤培养基的有效成份。培养基经灭菌后,如需要作斜面固体培养基,则灭菌后立即摆放成斜面,斜面长度一般以不超过试管长度的1/2为宜;半固体培养基灭菌后,垂直冷凝成半固体深层琼脂。1.8 倒平板 将需倒平板的培养基,于水浴锅中冷却到45~50℃,立刻倒平板。2、灭菌方法 灭菌是指杀死或消灭一定环境中的所有微生物,灭菌的方法分物理和化学灭菌法两大类。本实验主要介绍物理方法的一种,即加热灭菌。 加热灭菌包括湿热和干热灭菌两种。通过加热使菌体内 蛋白质凝固变性,从而达到杀菌目的。蛋白质的凝固变性与其自身含水量有关,含水量越高,其凝固所需要的温度越低。在同一温度下,湿热的杀菌效力比干热大,因为在湿热情况下,菌体吸收水分,使蛋白质易于凝固;同时湿热的穿透力强,可增加灭菌效力。 2.1 湿热灭菌 煮沸消毒法 :注射器和解剖器械等均可采用此法。先将注射器等用纱布包好,然后放进煮沸消毒器内加水煮沸。对于细菌的营养体煮沸约15~30min,对于芽孢则需煮沸约1~2h。 高压蒸汽灭菌法:高压蒸汽灭菌用途广,效率高,是微生物学实验中最常用的灭菌方法。这种灭菌方法是基于水的沸点随着蒸汽压力的升高而升高的原理设计的。当蒸汽压力达到1.05kg/cm2时,水蒸气的温度升高到121℃,经15~30min,可全部杀死锅内物品上的各种微生物和它们的孢子或芽孢。一般培养基、玻璃器皿以及传染性标本和工作服等都可应用此法灭菌。 2.2 操作方法和注意事项 加水:打开灭菌锅盖,向锅内加水到水位线。立式消毒锅最好用已煮开过的水,以便减少水垢在锅内的积存。注意水要加够,防止灭菌过程中干锅。 装料、加盖:灭菌材料放好后,关闭灭菌器盖,采用对角式均匀拧紧锅盖上的螺旋,使蒸汽锅密闭,勿使漏气。 排气:打开排气口(也叫放气阀)。用电炉加热,待水煮沸后,水蒸气和空气一起从排气孔排出,当有大量蒸汽排出时,维持5min,使锅内冷空气完全排净。 升压、保压和降压:当锅内冷空气排净时,即可关闭排气阀,压力开始上升。当压力上升至所需压力时,控制电压以维持恒温,并开始计算灭菌时间,待时间达到要求(一般培养基和器皿灭菌控制在121℃,20min)后,停止加热,待压力降至接近“0”时,打开放气阀。注意不能过早过急地排气,否则会由于瓶内压力下降的速度比锅内慢而造成瓶内液体冲出容器之外。 灭菌后的培养基空白培养:灭菌后的培养基放于37℃培养箱中培养,经24h培养无菌生长,可保存备用;斜面培养基取出后,立即摆成斜面后空白培养;半固体的培养基垂直放置凝成半固体深层琼脂后,空白培养。 2.2 干热灭菌法 通过使用干热空气杀灭微生物的方法叫干热灭菌。一般是把待灭菌的物品包装就绪后,放入电烘箱中烘烤,即加热至160~170℃维持1~2h。 干热灭菌法常用于空玻璃器皿、金属器具的灭菌。凡带有胶皮的物品,液体及固体培养基等都不能用此法灭菌。 2.2.1 灭菌前的准备 玻璃器皿等在灭菌前必须经正确包裹和加塞,以保证玻璃器皿于灭菌后不被外界杂菌所污染。常用玻璃器皿的包扎和加塞方法如下:平皿用纸包扎或装在金属平皿筒内;三角瓶在棉塞与瓶口外再包以厚纸,用棉绳以活结扎紧,以防灭菌后瓶口被外部杂菌所污染;吸管以拉直的曲别针一端放在棉花的中心,轻轻捅入管口,松紧必须适中,管口外露的棉花纤维统一通过火焰烧去,灭菌时将吸管装入金属管筒内进行灭菌,也可用纸条斜着从吸管尖端包起,逐步向上卷,头端的纸卷捏扁并拧几下,再将包好的吸管集中灭菌。 2.2.2 干燥箱灭菌 将包扎好的物品放入干燥烘箱内,注意不要摆放太密,以免妨碍空气流通;不得使器皿与烘箱的内层底板直接接触。将烘箱的温度升至160~170℃并恒温1~2h,注意勿使温度过高,超过170℃,器皿外包裹的纸张、棉花会被烤焦燃烧。如果是为了烤干玻璃器皿,温度为120℃持续30分钟即可。温度降至60~70℃时方可打开箱门,取出物品,否则玻璃器皿会因骤冷而爆裂。 用此法灭菌时,绝不能用油、蜡纸包扎物品。 [/siz

  • 求助,致病菌检测和真菌培养

    请问。致病菌检测增菌之后划线需要在安全柜内进行吗,能否在安全柜旁边放置一个培养箱?还是划线之后通过传递窗放到培养室?真菌培养技数过程是不是也需要在安全柜进行?我们的培养室没有空调出风口,温度大概30度以上。这个培养箱的记录温湿度应该怎么写,万分感谢。困扰好几天了,以前做过相关实验。说实话一直没有在生物安全柜进行过。????

  • 【分享】杀菌剂唑菌胺酯(吡唑醚菌酯)介绍

    95%。制剂有效成分含量为250g/L(23.6%WAV).外观为暗黄色.有萘味液体。稳定性:纯品在水溶 液中光解半衰期0.06d(1.44h);制剂常温贮存:20~C时2年稳定。化学名称:N—f2一『1一(4一氯苯)一1H-吡唑- 3-基氧甲基』苯卜N一甲氧氨基甲酸甲酯吡唑醚菌酯是巴斯夫公司最新型甲氧基丙烯酸酯类的杀菌剂。纯品为白色至浅米色无味结晶体。作用机理为线粒体呼吸抑制剂。使线粒体不能产生和提供细胞正常代谢所需能量,最终导致细胞死亡。它能控制子囊菌纲、担子菌纲、半知菌纲、卵菌纲等大多数病害。对孢子萌发及叶内菌丝体的生长有很强的抑制作用,具有保护和治疗活性。具有渗透性及局部内吸活性,持效期长,耐雨水冲刷。被广泛用防治小麦、水稻、花生、葡萄、蔬菜、马铃薯、香蕉、柠檬、咖啡、果树、核桃、茶树、烟草和观赏植物、草坪及其他大田作物上的病害。该化合物不仅毒性低,对非靶标生物安全,而且对使用者和环境均安全友好,已被美国EPA列为“减小风险的候选药剂”。另外,吡唑醚菌酯能对作物产生积极的生理调节作用,它能抑制乙烯的产生,这样可以帮助作物有更长的时间储备生物能量确保成熟度;能显著提高作物的硝化还原酶的活性,意味着可以减少土壤中氮肥的使用,从而进一步减少对地下水的影响;当作物受到病毒袭击时,它能加速抵抗蛋白的形成――与作物自身水杨酸合成物对抗逆蛋白的合成作用相同。吡唑醚菌酯是在醚菌酯基础上改进后的高效线粒体呼吸抑制剂,是以N-对氯苯基吡唑基替换了醚菌酯分子结构中的邻甲基苯基,而开发的又一甲氧基丙烯酸酯类广谱杀菌剂。它活性更高,是目前同类杀菌剂的3倍。而醚菌酯在实际应用1年后就有关于小麦白粉病抗性发生的报道,到2000年抗性孢子(2%-99%)在德国的北部、法国的北部和英国已有大量报道。在国内目前对白粉病的防效已有所下降。

  • 【讨论】实验室、QC问题-检定菌

    检定菌管理● 检定菌的购入:不提倡企业直接从中国药品生物检定所购入冷冻干燥品(0代),自己复苏后接种。应直接由省级药品检验所购入斜面琼脂保存的菌种(1代),并了解所提供的菌种系第几代。至于买0代还是买1代,其实无所谓,买1代的话,药品检验所会赚的更多。如果是进口菌种的话,要是有好几个单位共同买一支0代分装会便宜很多,毕竟单独买还是很贵的,但分装合不合法不是很清楚[em09501][em09501]。● 检定菌保管:检定菌应专人管理,管理人员必须具备微生物基础知识,和一定的菌种保存经验。 保管人在收到检定菌后,应在保存容器外贴上标签,内容为:名称、编号、购买日期,并及时在检定菌领用台帐上登记。检定菌按储存条件,存放于4-6℃之间冰箱内保存,并加锁保管,做好温度记录。标识是很重要的,4-6℃??这个说法有问题吧?一般不都是2-8℃嘛......还有,要加锁哦~~~~● 检定菌的传代:检定菌传代次数不超过五代,从菌种保管中心获得的冷冻干燥的菌种为0代,冷冻干燥的原始菌种开启后转种至斜面琼脂为第1代,故企业的传代应从第二代开始,建议检定菌每月传代一次。每月传代一次依据不可考............又是浪费钱..........● 检定菌的使用:使用检定菌时,操作人员应按要求穿戴好工作衣帽、口罩,操作前后用肥皂洗手后,再用0.1%新洁尔灭浸泡影2分钟。发生菌液或培养液污染台面或地面时,应立即以3%来苏尔或5%石炭酸等消毒液倾覆其上,半小时再进行洗涤。工作衣帽受到菌液污染时应立即脱去,经热压灭菌后洗涤。0.1%新洁尔灭、3%来苏尔、5%石炭酸或其他消毒液.......有吗?有的话,是不是照此执行呢??呵呵.........●废弃物处理:废弃的培养物应经热压灭菌后洗涤,带菌的实验用品应浸泡于5%来苏尔溶液中,24小时后取出冲洗。效期已过的检定菌或检验后的带菌物品必须经过灭活处理后方可排入下水道。其实只要材质可以,均可以121℃30min过灭后再处理。● 注意事项(1)培养基的外包装若标明阴凉处储存,应在20 ℃以下保存。(2)培养基应按购入批号分批作培养基灵敏度试验,并做好记录。药典上有规定的,按药典规定方法操作;如未规定则在第一次做生测试验时,多做一支阳性对照,作为培养基的灵敏度试验。灵敏度试验啊............促生长............做起来好麻烦。这里是说按照购入批号,可问题是有的是干粉、也有是成品,成品也就算了,要是干粉该如何是好?毕竟,一批干粉可出好几批培养基啊,是不是隐含意思配一批做一次?更甚至,灭菌一锅做一次................(3)2005年药品检验操作规程P316页讲到检定菌在4℃左右保存,我们认为不便操作,故还是要求在4-6℃之间保存。 P325页要求作微生物限度检查应有单独无菌室,每个无菌室应有独立的空气净化系统,企业可用通过全送全排、不回风来解决。P313页要求缓冲间和操作室设置紫外灭菌灯(2-2.5W/M3),还要求定期检查幅射强度,要求在操作面上达到40μW/cm2。我们认为此说法有待商榷,因为WHO在1992年对紫外线灭菌有明确规定:紫外线灭菌照射的高度小于2米,照射角度小于30 度,对需灭菌的对象照射时间应大于20分钟。生测的无菌室背景为万级,空气在无菌室停留的时间为3分钟,故本人认为,可以不设紫外灯。4℃左右竟然理解为4-6℃!!不知道有卖这种冰箱、冷藏柜的厂家吗,汗一个!紫外灯还是设一个吧......换种思考,是不是紫外杀菌时应该是停止通风,把现有环境内的菌杀灭,30分钟后通风,默认进入的是无菌风。毕竟,超净台开紫外时就是不通风的。有不符合现有标准、规定的,大家说说啊~~~~~

  • 【求助】营养琼脂培养基灭菌有部分后长菌?

    上周五灭菌的营养琼脂培养基一周天后一瓶长菌了?咋回事?请教高手帮忙。 我按照厂家说明书上要求配置和灭菌,115℃灭菌30分钟,灭菌完后等待冷凝了,放在4℃的冰箱中,每次微波炉加热熔化后使用都废弃,这几次实验时,偶尔出现异常现象,查找污染原因,稀释剂没问题,最后拿剩下的两瓶未使用的培养基直接培养,其中一瓶长菌了,我真不晓得咋回事? 配制培养基那一周做过菌液配制,但是所有的玻璃容器都灭菌的,除了装营养琼脂培养基的瓶子,觉得只是倒培养基,应该不会被菌种污染,所以没有灭菌。一直配营养琼脂培养基的锥形瓶都是这几个瓶子。一直以来我们都是我按照厂家说明书上要求配置和灭菌,115℃灭菌30分钟,灭菌完后等待冷凝了,放在4℃的冰箱中,都没有发生过培养基长菌。

  • 检定菌传代标准操作规程(SOP)

    名称:检定菌传代标准操作规程(SOP)关键词:检定菌传代目的:为规范检定菌传代操作背景知识:无原理:无主体内容:1.器具和培养基1.1 营养琼脂斜面 5支1.2 接种环1.3 酒精灯1.4 酒精棉1.5 试管架1.6 菌种管2.操作步骤2.1 将菌种管放入百级层流罩内。2.2 用记号笔在营养琼脂斜面试管上,写上将要接种的菌名或菌号、日期、代次。2.3 将试管棉塞旋松,点燃酒精灯。2.4 将菌种管及待接种的斜面试管并排放置在左手的食指、中指和无名指之间,斜持试管呈45度。两个试管口要平齐,斜面朝上,用拇指按住试管的基部。2.5 右手握在接种环的胶木柄上,将镍铬丝环口和其余部分在火焰的氧化焰部位烧红,然后将接种环的金属柄也通过火焰两三次,以杀死杂菌。2.6 用右手无明指和小指及掌边先后夹住两支试管的棉塞,在火焰旁轻轻地拔开,同时将管口通过火焰两三次,然后让试管稍离火焰,应保持水平状态,以防杂菌落入管 内。2.7 将烧红的接种环伸入菌种管中,先接触无菌苔生长的培养基上,令其冷却后挑取少许菌苔移至待接种试管斜面上,自基部开始向上划致密的平行线。接种完毕,移出接环,同时将两支试管口依次过火,最后塞上棉塞,并将试管插在试管架,充分灼烧接种环。2.8 按以上步骤,接种下一支斜面。2.9 接种好的斜面竖直放在37℃培养箱中培养24~48小时。2.10 观察菌落生长情况,48小时苔菌落长出,取出置于冰箱4℃保藏,每一个月传代一次。2.11 杀灭第一代菌种,121℃蒸汽灭菌1小时。

  • 如何测定一氧化碳的日均值和小时均值

    请问大神,一氧化碳采用仪器直接读数测定,如何测定他的日均值以及小时均值,一小时内要采几次代表小时均值,一天之内要采多少次代表日均值呢,在哪儿有具体规定呢

  • 【分享】加拿大卫生部修订啶酰菌胺等4种物质的最大残留限量标准

    2011年3月14日,加拿大卫生部拟修订啶酰菌胺、赛座灭、甲磺草胺和甲基环丙烯等4种物质的最大残留限量标准。将啶酰菌胺在番杏和菠菜中的最大限量标准修订为60 mg/kg,刺菜蓟、芹菜、香芹、莴笋、大黄、唐莴苣、茴香叶(茎)中的最大限量标准修订为45mg/kg;将甲磺草胺在干制大豆中的最大限量标准修订为0.05 mg/kg,薄荷中的最大残留限量标准修订为0.3mg/kg,大白菜,山葵根和葵花籽中的最大残留限量标准修订为0.15 mg/kg,干制去壳豌豆中的最大残留限量标准修订为0.15mg/kg;将甲基环丙烯在梨中的最大残留限量标准修订为0.01mg/kg;将赛座灭在牛肉、山羊肉、绵羊肉、马肉及其副产品和牛奶等产品中的最大残留限量标准修订为0.02 mg/kg.

  • 请教低酸性罐头商业无菌结果怎么判定

    商业无菌结果判定该批罐头食品经审查生产操作记录正常,抽取样品经保温试验未胖听或泄漏,保温后开罐,经感官,PH或涂片镜检,或接种培养,确证无微生物增殖现象,则为商业无菌。该批罐头食品经审查生产操作记录,未发现问题;抽取样品经保温试验有一罐及一罐以上发生胖听或泄漏,或保温后开罐,经感官,PH或涂片镜检,或接种培养,确证有微生物增殖现象,则为非商业无菌请问确证无微生物增殖,怎么知道有没有增殖啊,还要做哪个样品的对比吗?经接种培养后检出芽孢杆菌,就说明是非商业无菌吗还有低酸性罐头食品的需氧厌氧培养条件怎么控制啊,本人是新手谢谢哪位大侠解答,

  • KF链球菌琼脂培养基的灭菌

    KF链球菌琼脂培养基[img]http://img.foodmate.net/bbs/static/image/smiley/default/cry.gif[/img] 称取本品71.5g加入蒸馏水或去离子水1L,搅拌加热煮沸溶解,勿高压灭菌,冷至50度左右,倾注无菌培养皿.那么请教各位大侠那这个培养基如何灭菌,是否可以直接将过滤好的滤膜放入培养基中培养.

  • 【原创大赛】大肠杆菌在扫描电镜中的制样方法

    【原创大赛】大肠杆菌在扫描电镜中的制样方法

    [color=#333333]扫描电镜(SEM)是介于透射电镜和光学显微镜之间的一种微观性貌观察手段,可直接利用样品表面材料的物质性能进行微观成像。扫描电镜的优点是,①有较高的放大倍数,20-20万倍之间连续可调;②有很大的景深,视野大,成像富有立体感,可直接观察各种试样凹凸不平表面的细微结构;③试样制备简单。目前的扫描电镜都配有X射线能谱仪装置,这样可以同时进行显微组织性貌的观察和微区成分分析,因此它是当今十分有用的科学研究仪器。[/color][color=#333333]对于扫描电镜我也仅是局限于对基本操作略知一二,其更专业的相关知识知之甚少,碰巧最近接了一个用扫面电镜观察大肠杆菌的实验,就借此机会互相讨论学习一下大肠杆菌在描电镜观察中的制样方法。[/color][color=#333333]制样过程可大体分为四步:[/color][color=#333333]1[/color][color=#333333]、[/color]取样:取大量样品离心(转速3000r-4000r),去除上清液,加入适当PH(7.2-7.4)的1[color=#333333]XPBS[/color][color=#333333]清洗三遍;清洗时,菌体温柔悬浮,离心,去上清。[/color]1、[color=#333333]固定:2.5%戊二醛固定3h(1-12都可),离心,之后用PBS清洗三遍,离心,去上清。[/color][color=#333333]2[/color][color=#333333]、脱水用乙醇水溶液按30%、50%、70%、80%、90%的浓度梯度对样品进行脱水,每步约15min,[/color]离心,之后在100%乙醇中脱水15minX2次,离心,去上清,再将样品置于乙醇和叔丁醇1:1的混合液中15min,去上清;然后用纯叔丁醇置换酒精2次,每次15min,最后吸取混匀的细菌-叔丁醇悬浮液滴在盖玻片上。3、干燥 载有样品的盖玻片置-80℃冰箱冷冻后,放入冷冻干燥机中进行冷冻干燥。4、喷金 样品充分干燥后,将盖玻片粘附到贴好导电胶带的样品台上,镀金。5、电镜下观察。附图:[align=center][img=,690,507]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709050924_01_3224499_3.png[/img][/align] [align=center][img=,690,506]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709050924_02_3224499_3.png[/img][/align][align=center][img=,690,506]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709050924_03_3224499_3.png[/img][/align][align=center][img=,690,488]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709050925_01_3224499_3.png[/img][/align]制样过程比较简单,但是比较耗时,特别是脱水的过程。制样过程有多次离心,为防止多次离心后大肠杆菌样品损失过多,离心要充分,并且倾倒上清液时要小心缓慢,防止倒出样品。另外,冷冻的叔丁醇特别容易液化,将载有大肠杆菌-叔丁醇悬浮液的盖玻片拿出低温冰箱后要迅速放入冷冻干燥机内进行冷冻干燥。通过此次实验既学到了细菌在扫面电镜观察下的制样过程,又学习了扫面电镜的使用及其操作细节和注意事项,令我受益匪浅。

  • 马丁氏培养基的配制

    一、目的要求 通过对分离真菌用的马丁氏(Martin)培养基配制,掌握对选择培养基的配制方法,并明确选择的原理。 二、基本原理 马丁氏培养基是一种用来分离真菌的选择性培养基。此培养基是由葡萄糖、蛋白胨、KH2PO4、MgSO4•7H2O、孟加拉红(玫瑰红,Rose Bengal)和链霉素等组成。其中葡萄糖主要作为碳源,蛋白胨主要作为氮源,KH2PO4和MgSO4•7H2O作为无机盐,为微生物提供钾、磷和镁离子。而孟加拉红和链霉素主要是细菌和放线菌的抑制剂,对真菌无抑制作用,因而真菌在这种培养基上可以得到优势生长,从而达到分离真菌的目的。 马丁氏培养基配方如下: KH2PO4 1g MgSO4•7H2O 0.5g 蛋白胨 5g 葡萄糖 10g 琼脂 15—20g 水 1000ml pH 自然 此培养液1000ml加1%孟加拉红水溶液3.3ml。临用时每100ml培养基中加1%链霉素液0.3ml。 三、器材 KH2PO4,MgSO4•7H2O,蛋白胨,葡萄糖,琼脂,孟加拉红,链霉素; 试管,三角烧瓶,量筒,玻棒,培养基分装器,扭力天平,牛角匙,高压蒸汽灭菌锅等。 四、操作步骤 1.称量和溶化 按培养基配方,准确称取各成分,并将各成分依次溶化在少于所需要的水量中。待各成分完全溶化后,补足水分到所需体积。再将孟加拉红配成1%的溶液,在1000ml培养液中加入1%的孟加拉红溶液3.3ml,混匀后,加入琼脂加热溶化(方法同实验十九)。 2.分装、加塞、包扎、灭菌,无菌检查与实验十九相同。 3.链霉素的加入 由于链霉素受热容易分解,所以临用时,将培养基溶化后待温度降至45℃左右时才能加入。可先将链霉素配成1%的溶液,在100ml培养基中加1%链霉素液0.3ml,使每毫升培养基中含链霉素30μg。

  • 洁净室浮游菌采样培养后,菌落里可能有致病菌吗

    [img=,690,112]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/04/202404091628166498_4458_5519762_3.png!w690x112.jpg[/img]1、给定一个洁净室,对其进行浮游菌采样,采样后TSA平皿按上述标准培养,请问培养后菌落里是否可能有致病菌?因为采样器是不分辨空气中细菌种类(全量采集),谁也不知道空气中是否有致病菌,是不是培养后有可能有致病菌。2.还有TSA培养基限制致病菌繁殖吗?3.还有菌落计数后的样品,是否不管其是否潜在涉及致病菌,都要高温灭菌后,当危险废物处理,还是确认不涉及致病菌后,计数后不高温灭菌,当危废处理?不太懂微生物,求教。

  • 【讨论】臭氧灭菌的优点,微生物检测,

    1、广谱高效  现执行的卫生部2002年版《消毒技术规范》认定臭氧是一种广谱高效杀菌剂。可杀灭细菌繁殖体和芽胞、病毒、真菌等,并可破坏肉毒杆菌毒素。实验证明,臭氧几乎对所有病菌、病毒、霉菌、真菌及原虫、卵囊都具有明显的灭活效果。  2、灭菌迅速  灭菌时间来说,臭氧具有常见灭菌方法无与伦比的速度,试验表明臭氧的灭菌速度是氯的300-600倍,紫外线的3000倍。  3、绿色环保  在我国的GMP验证中,对臭氧有一段全面的介绍:“臭氧(03)的消毒原理是:臭氧在常温、常压下分子结构不稳定,很快自行分解成氧气(02)和单个氧原子(0);后者具有很强的活性,对细菌有极强的氧化作用,臭氧氧化分解了细菌内部氧化葡萄糖所必须的酶,从而破坏其细胞膜,将它杀死,多余的氧原子则会自行重新结合成为普通氧分子(02),不存在任何有毒残留物,故称无污染消毒剂,它不但对各种细菌(包括肝炎病毒,大肠杆菌,绿浓杆菌及杂菌等)有极强的杀灭能力,而且对杀死霉菌也很有效。”  臭氧消毒在中药原生药粉灭菌中的应用  实现中药现代化,全面提升中药制剂水平,是国家“十五”科技规划中提出的任务。当前,中药制剂生产质量控制已成为实现中药现代化的瓶颈问题,而卫生指标的控制又是确保中成药尤其是以中药粉末入药制剂质量的关键问题之一。  目前广泛应用的高温灭菌方法,因消毒依赖于热效应,容易改变或影响中药里面的活性成分和改变药性,所以对大部分热敏类、含挥发油类成分药粉不适合。同时因其“热”和“湿”的问题,不便于操作和进行生产流程的布局。作为中药生产流程中药粉的灭菌受到诸多的限制。而近几年有的企业开始使用的60Co辐射灭菌方法,可致药品中维生素破坏、变色、变味,甚至可能导致药效下降及诱发致癌物质。

  • 如何管理环氧乙烷灭菌气车间?

    [font=Arial][size=12pt][back=transparent]目前,疫情影响了不少企业的生产和贸易,于是大家纷纷转型开始生产医用口罩、消毒液等产品。由于环氧乙烷的杀菌力强、杀菌谱广,对物品损害轻微,渗透能力强等优点,环氧乙烷和二氧化碳的混合气体成为目前最主要的日常低温灭菌方法之一。但是,环氧乙烷的易爆特性,和新经营者们的经验缺乏,使得这些企业的生产存在一定的安全隐患。那么,该如何管理环氧乙烷灭菌气的生产呢?[/back][/size][/font][font=Arial][size=12pt][back=transparent]环氧乙烷灭菌装置应符合相应的标准,灭菌车间的管理应执行一次性使用无菌器械产品(注、输器具)生产实施细则要求:[/back][/size][/font][size=12pt][back=transparent][font=Arial]- [/font]制定完善的经验证可行的灭菌工艺方案以及环氧乙烷存放、收发制度,专人持证上岗,严格按照操作规程运行;[/back][/size][size=12pt][back=transparent]- 环氧乙烷储存应与灭菌生产隔离开来,应设有防爆墙,储存室阴凉、通风、防晒,有易燃、易爆、有毒标志,并配备消防器材;[/back][/size][size=12pt][back=transparent]- 灭菌车间周围30-50米内不得有明火作业、变电设备及其他可发生火花的设备或操作;[/back][/size][size=12pt][back=transparent]- 灭菌过程中严禁穿有钉的鞋进入现场,严禁操作现场抽烟,以防引起爆炸事故;[/back][/size][size=12pt][back=transparent]- 操作过程中,密切注意压力、温度变化,随时进行调整;[/back][/size][size=12pt][back=transparent]- 灭菌过程结束打开灭菌器时,必须先打开门窗及通风设备,室内环氧乙烷气味很浓时,不得开启电灯照明及手电照明,防爆灯除外;[/back][/size][size=12pt][back=transparent]- 灭菌结束后排放的环氧乙烷残余气体应进行妥善处理并符合环保要求。[/back][/size][font=Arial][size=12pt][back=transparent]另外,由于环氧乙烷的毒性和易燃易爆性质,其充装、储存、经营都需要具备专门的充装及经营资质许可证,所以在选择环氧乙烷灭菌气生产商时,要注意其是否拥有以上资质。[/back][/size][/font]

  • 【原创大赛】2014年食源性致病菌志贺氏菌风险监测分析

    【原创大赛】2014年食源性致病菌志贺氏菌风险监测分析

    2014年食源性致病菌志贺氏菌风险监测分析志贺氏菌属是一类革兰氏阴性杆菌。该属的细菌(统称痢疾杆菌),是细菌性痢疾的病原菌。志贺氏菌属包括4个种群。人类对痢疾杆菌有很高的易感性,在幼儿可引起急性中毒性菌痢,死亡率甚高。它不但可以通过食物和水传播,而且可以经过人与人的接触传播。所以在食品中检测志贺氏菌也是有一定的社会意义的。笔者就此情况将2014年食品中志贺氏菌的检测情况汇总如下。1 材料与方法1.1试剂和仪器 使用的培养基有志贺氏菌增菌肉汤、麦康凯(MAC)琼脂、木糖赖氨酸脱氧胆酸盐(XLD)琼脂、三糖铁(TSI)琼脂购买于北京路桥公司,志贺氏菌显色培养基购买于郑州博赛公司,志贺氏菌诊断血清购买于宁波天润生物药业有限公司。主要仪器包括均质器,电子天平:感量0.1g,厌氧培养装置:41.5 ℃±1 ℃,VITEK-2Compact 全自动微生物鉴定系统。1.2依据和方法 根据国家食品安全风险评估中心制定的“食源性致病菌监测工作手册”要求进行增菌、分离、鉴定、菌种保存及送上级实验室复核。试验程序见图1。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/12/201412051004_525975_2433088_3.jpg

  • 医用口罩如何灭菌?环氧乙烷灭菌气最靠谱!

    医用口罩如何灭菌?环氧乙烷灭菌气最靠谱!

    [font=Arial][size=12pt][color=#000000]在疫情期间,最最紧缺的物资莫过于医用口罩,因此便传出了许多不靠谱的口罩消毒后再利用的方法。谣言众多,到底哪些才是口罩灭菌的正确方法呢?常见的灭菌方法有以下三种。[/color][/size][/font][img=,470,390]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/02/202002191347480855_3998_3471557_3.png!w690x574.jpg[/img][font=Arial][size=12pt][color=#000000]其中,由于环氧乙烷气体的杀菌力强、杀菌谱广,对物品损害轻微,渗透能力强等优点,环氧乙烷和二氧化碳的混合气体已成为目前最主要的日常低温灭菌方法之一。[/color][/size][/font][font=Arial][size=12pt][color=#000000]然而,由于环氧乙烷的易燃易爆和有毒特性,厂家在使用环氧乙烷进行灭菌时应符合相关的要求。例如,制定完善的环氧乙烷储存、操作方案,灭菌工作周边30-50米范围内不得有明火作业,残留的环氧乙烷应进行妥善处理等。除了做好自身的防范工作,厂家也应在采购环氧乙烷灭菌气时注意气体供应商是否有相关的充装和经营资质。[/color][/size][/font]

  • 霉菌培养箱的特征及作用简介

    霉菌培养箱是适合培养霉菌等真核微生物的试验设备,因为大部分霉菌适合在室温(25摄氏度)下生长,且在固体基质上培养时需要保持一定的湿度。霉菌培养箱由制冷系统、制热系统、空气加湿器和培养室、控制电路和操作面板等部分组成,并使用温度传感器和湿度传感器来维持培养室内的温度和湿度的稳定。 霉菌培养箱采用国内首创流线圆弧型设计,外壳采用冷轧钢板制造、表面静电喷塑;工作内腔采用镜面不锈钢材质。霉菌培养箱外表采用烤漆亚光镀层避免光辐射,内胆镜面不锈钢,隔板可以任意调节;观察窗采用独创的复门设计,观察内腔培养物品时可打开复门观察,不用观察时可关闭复门。霉菌培养箱具有因停电、死机状态数据丢失而保护的参数记忆,来电恢复功能;采用微电脑智能控制,液晶显示控制温度、时间,具有超温报警功能。 霉菌培养箱可以设定温度湿度随培养时间变化,是水体分析和 BOD 测定细菌、霉菌、微生物的培养、保存、植物栽培、育种实验的专用恒温、恒温振荡设备,可应用于各种霉菌、组织细胞、微生物、抗生物的培养,也可用于昆虫、小动物的饲养及其它用途的恒温试验。霉菌培养箱广泛应用于环境保护、卫生防疫、农畜、药检、水产等科研、院校实验、生产部门、生物工程、饮料等科研部门、大专院校的理想之选。

  • 【分享】霉菌培养箱的作用及日常维护办法

    培养箱是培养微生物的主要设备,可用于细菌、细胞的培养繁殖。原理是应用人工的方法在培养箱内造成微生物和细胞、细菌生长繁殖的人工环境,如控制一定的温度、湿度、气体等。霉菌培养箱的运用范围: 霉菌培养箱一般应用于医疗卫生、生物制药、农业科研、环境保护等研究应用领域, 是水体分析、BOD测定,细菌、菌种、微生物的培养、保存和植物栽培、育种实验生物培养的专用设备。 日常维护办法: 1、用霉菌培养箱底部调节螺钉调节高度,使箱体安置平稳。 2、插上电源插座(电源应有良好接地),按下电源开关,显示屏亮,此时显示屏所显示的是培养箱室内的实际温度和湿度。 3、加湿器的安装:将加湿器的电源插头插在仪器背面的电源插座上,再将仪器的加湿管与加湿器相连,相连处一定要紧密连接。加湿器水箱里加水一定要按说明书上正确操作。 4、温度调节:按下温度设定按钮,数字显示即为设定值,旋转温度调节电位器到所需温度值,松开按钮,数字显示即为培养室内的实际温度。此时如培养箱内的实际温度比设定温度小,加热指示灯亮,加热器开始加热;如培养箱内的实际温度比设定温度大,制冷指示灯亮,制冷系统开始制冷;如加热指示灯与制冷指示灯均暗,则培养箱处于恒温状态。

  • 我国首次制定食品致病菌限量标准,你觉得有些项目合理吗

    各种肉类、巧克力、饮料等内含沙门氏菌、金黄色葡萄球菌的限量值,首次有了明确的标准。昨日,卫生部发布征求食品安全国家标准《食品中致病菌限量》的征求意见稿,该标准拟自正式发布后6个月施行,这是我国首次制定食品中致病菌限量标准。可是这次制定标准跟以往还是有很大的区别的。1、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌、单核细胞增生李斯特氏菌、大肠埃希氏菌等几种主要致病菌,以前是不得检出,现在金黄色葡萄球菌在各类食品中的限量则均为100CFU/g2、乳制品不含在该标准3、本次标准制定中梳理分析的标准共计562项。我国首次制定食品致病菌限量标准,你觉得有些项目合理吗?金黄色葡萄球菌的指标放大,食品安全风险如何?

  • 霉菌培养箱技术特点

    上海产霉菌培养箱是一种常用的培养箱产品,但它不是生化培养箱、也不是隔水式培养箱,是水体分析和 BOD 测定细菌、霉菌、微生物的培养、保存、植物栽培、育种实验的专用恒温振荡[u]设备[/u]。今天我们主要来介绍一下霉菌培养箱的特点及使用注意事项,希望可以帮助用户更好的应用产品。霉菌培养箱的特点1、本机温控系统采用微电脑单片机技术,控温精度高 2、具有温度、时间调节控制,触摸式键盘设定调节 3、带有超强的紫外灭菌功能,保证纯净的培养环境 4、机体外壳采用喷塑处理,整机造型美观大方 5、内胆均为镜面不锈钢材料制成 6、工作室内装照明装置,大视角保温真空钢化玻璃,便于观察。霉菌培养箱的使用注意事项1、此[u]控制器[/u]的特点是,先控制温度,待温度基本稳定后再控制湿度,故刚开机或重新设定温度后,既无加湿也无除湿是正常现象,待温度达到设定温度,加湿和除湿才会工作。2、对于加湿器的使用,先将加湿器雾量控制旋钮顺时针旋到中间处,不宜过大防止湿度过冲,若加湿器通过连续加湿20分钟也达不到所设定的湿度值,此时才可渐渐将加湿器雾量控制旋钮顺时针旋至最大。3、对于箱体加热和制冷功率的匹配,一般250L的箱体,加热功率建议选用500W左右,制冷功率建议选用180W左右 150L的箱体,加热功率建议选用350W左右,制冷功率建议选用140W左右。

  • 【原创大赛】2014年食源性致病菌蜡样芽孢杆菌风险监测分析

    2014年食源性致病菌蜡样芽孢杆菌风险监测分析 人类对蜡样芽孢杆菌致病性的认识过程进展缓慢,但是大量证据证明,从1898年起,就有蜡样芽孢杆菌造成泌尿系统感染及胃肠炎的记载,有些感染的病例很严重,甚至造成死亡,蜡样芽孢杆菌也可以引起牛的口蹄炎。Lubenau 1906年描述了发生在一家医院的严重的食物中毒事件,300名医务人员及病人用餐后出现急性胃肠炎,对剩余的食物进行检验,发现含有大量的好氧芽孢杆菌,尽管从原文中的描述分析,该污染菌应为蜡样芽孢杆菌,但原作者将其定名为B.peptonificans。Seitz 1913年从一例患肠炎和腹泻的病人中分离出蜡样芽孢杆菌。按照当今的流行病学标准来衡量,有关芽孢杆菌引起食物中毒的早起报道很粗略。很少有人对食物等病检标本的污染菌做过计数,对污染菌的鉴定、命名也不确切,从而造成了不少混乱。正是由于分类学的进展,Hauge经过对4起食物中毒事件的认真调查,于1955年首次确认蜡样芽孢杆菌是一种可引起食物中毒的致病菌。因为蜡样芽孢杆菌在自然界分布广泛,常存在于土壤、空气、水和尘埃中,所以不可避免地会进入到食品中。现将2014年本地蜡样芽孢杆菌的检测情况作如下总结。1 材料与方法1.1试剂和仪器 使用的培养基有磷酸盐缓冲液(PBS)、甘露醇卵黄多粘菌素(MYP)琼脂、胰酪胨大豆多粘菌素肉汤、营养琼脂购买于北京路桥公司。主要仪器包括均质器,电子天平:感量0.1g,VITEK-2 Compact 全自动微生物鉴定系统。1.2依据和方法 根据国家食品安全风险评估中心制定的“食源性致病菌监测工作手册”要求进行增菌、分离、鉴定、菌种保存及送上级实验室复核。试验程序见图2。

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