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刀豆蛋白

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  • 【金秋计划】片仔癀通过调节肠道菌群和记忆调节性T细胞减轻刀豆球蛋白A诱导的自身免疫性肝炎

    [b][size=15px][color=#595959]自身[/color][/size][size=15px][color=#595959]免疫[/color][/size][size=15px][color=#595959]性肝炎(AIH)[/color][/size][/b][size=15px][color=#595959]是一种以淋巴细胞浸润和自身抗体产生为特征的界疾病,然而其病因尚不清楚。有研究发现,在AIH患者的外周血中维持免疫稳态的必需因子调节性T (mTreg)细胞的频率降低,表明Treg细胞数量不足和Treg细胞功能异常可能在AIH的发病过程中起重要作用。AIH的治疗通常采用高剂量的类固醇以抑制免疫系统。有研究表发现,复合益生菌可调节[b]肠道菌群[/b]和肠道通透性,降低辅助性T细胞1型(Th1)和Th17细胞水平,提高Treg细胞水平,抑制[b]TLR4/核因子-κB (NF-κB)通路[/b]的激活,调节AIH的发生。因此,对于AIH患者,Treg细胞与肠道微生物群的相互作用可能提供一种可行的治疗策略。[/color][/size][size=15px][color=#595959]中药常用[b]片仔癀(PTH)[/b]含有牛黄、麝香、三七、蛇胆等成分,常用于治疗肝脏疾病,包括AIH。研究发现,PTH通过控制NF-κB信号通路和NLRP3炎性小体,减少血液中IL-1、IL-6和IL-17的产生,减轻胶原性[/color][/size][b][size=15px][color=#595959]关节炎[/color][/size][/b][size=15px][color=#595959]小鼠的关节炎症。然而,PTH治疗AIH的确切机制尚不完全清楚。[/color][/size][align=center] [/align] [size=15px][color=#595959]通过测定AIH小鼠肠道菌群结构和[b]记忆调节性T (mTreg)细胞[/b]功能水平的变化,探讨PTH在AIH小鼠模型中的作用机制。[/color][/size] [align=center] [/align] [size=15px][color=#595959]给予PTH预防10 d后,用刀豆球蛋白A(Con A)诱导AIH小鼠模型。流式细胞术检测小鼠mTreg细胞水平,16S rRNA分析小鼠肠道菌群,western blotting检测[b]toll样受体(TLR)2、TLR4/核因子-κB (NF-κB)和CXCL16/CXCR6信号通路[/b]的激活情况。[/color][/size] [align=center] [/align] [size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959]PTH减轻AIH小鼠肝脏病理损伤,降低辅助性T - 17细胞数量和干扰素-γ、[/color][/size][b][size=15px][color=#595959]肿瘤[/color][/size][size=15px][color=#595959]坏死[/color][/size][size=15px][color=#595959]因子[/color][/size][/b][size=15px][color=#595959]- α、白细胞介素(IL)-1β、IL-2、IL-6、IL-21的表达。同时,[b]PTH刺激有益菌的丰度[/b],促进TLR2信号的激活,从而增加Treg/mTreg细胞数量产生IL-10,抑制TLR4/NF-κB和CXCL16/CXCR6信号通路的激活。[/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size] [align=center] [/align] [b][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959]PTH调节肠道菌群平衡,恢复mTreg细胞,减轻实验性AIH,与TLR/CXCL16/CXCR6/NF-κB信号通路密切相关[/color][/size][/b][size=15px][color=#595959]。这些发现提示PTH可能通过平衡肠道菌群,干扰mTreg细胞调节Treg细胞分化,是AIH的一种天然替代疗法。[/color][/size]

  • 什么是大豆分离蛋白?

    [size=10.5pt][color=#0000ff][font=微软雅黑]什么是大豆分离蛋白?[/font][/color][/size][size=10.5pt][font=微软雅黑]大豆分离蛋白是以低温脱溶大豆粕为原料生产的一种全价蛋白类食品添加剂。大豆分离蛋白中蛋白质含量在90%以上,氨基酸种类有近20种,并含有人体必需氨基酸。其营养丰富,不含胆固醇,是植物蛋白中为数不多的可替代动物蛋白的品种之一。[/font][/size][b][size=12pt][font=微软雅黑]喷雾干燥在大豆分离蛋白中的应用-生产工艺[/font][/size][/b][size=10.5pt][font=微软雅黑]大豆分离蛋白(Soy Protein Isolate,简称 SPI)是指干基蛋白质含量≥90%的粉状大豆制品,大豆分离蛋白的制取工艺有多种,如碱溶酸沉法、膜分离法等,其中碱溶酸沉法生产大豆分离蛋白是目前世界上最常用的工艺,它以低温脱脂脱溶豆粕为原料,通过碱溶及等电点沉淀将脱脂豆粕中的可溶性和不溶性碳水化合物除去。[/font][/size][size=10.5pt][font=微软雅黑]工艺流程:低温豆粕-碱液提取-离心分离-酸沉-离心分离-中和-杀菌-喷雾干燥-大豆分离蛋白。[/font][/size]

  • 大豆分离蛋白有什么特性呢?

    [size=10.5pt][font=微软雅黑]大豆分离蛋白有什么特性呢?[/font][/size][size=10.5pt][color=#0000ff][font=微软雅黑]一、乳化性[/font][/color][/size][size=10.5pt][font=微软雅黑]大豆分离蛋白是表面活性剂,它既能降低水和油的表面张力,又能降低水和空气的表面张力。易于形成稳定的乳状液。在烤制食品、冷冻食品及汤类食品的制作中,加入大豆分离蛋白作乳化剂可使制品状态稳定。[/font][/size][size=10.5pt][font=微软雅黑]大豆分离蛋白沿着它的肽链骨架,含有很多极性基,所以具有吸水性、保水性和膨胀性,分离蛋白的吸水力比浓缩蛋白要强许多,而且几乎不受温度的影响,分离蛋白在加工时还有保持水份的能力,最高水分保持能力为14g水/g蛋白质。[/font][/size][size=10.5pt][color=#0000ff][font=微软雅黑]二、吸油性[/font][/color][/size][size=10.5pt][font=微软雅黑]分离蛋白加入肉制品中,能形成乳状液和凝胶基质防止脂肪向表面移动,因而起着促进脂肪吸收或脂肪结合的作用,可以减少肉制品加工过程中脂肪和汁液的损失,有助于维持外形的稳定,分离蛋白的吸油率为154%。[/font][/size][size=10.5pt][color=#0000ff][font=微软雅黑]三、凝胶性[/font][/color][/size][size=10.5pt][font=微软雅黑]它使分离蛋白具有较高的粘度、可塑性和弹性,既可做水的载体,也可做风味剂、糖及其它配合物的载体,这对食品加工极为有利。[/font][/size][size=10.5pt][color=#0000ff][font=微软雅黑]四、发泡性[/font][/color][/size][size=10.5pt][font=微软雅黑]大豆蛋白中,分离蛋白的发泡性能最好,利用大豆蛋白质的发泡性,可以赋予食品以疏松的结构和良好的口感。[/font][/size][size=10.5pt][color=#0000ff][font=微软雅黑]五、结膜性[/font][/color][/size][size=10.5pt][font=微软雅黑]当肉切碎后,用分离蛋白与鸡蛋蛋白的混合物涂在其纤维表面,形成薄膜,易于干燥,可以防止气味散失,有利于再水化过程,并对再水化产品提供合理的结构。[/font][/size]

  • 下面这个是大豆与羊毛动物纤维,蚕丝二组分混合物分析方法,溶解大豆蛋白,利用蛋白含量来确定大豆蛋白复合纤维含量,有点不可理解?

    下面这个是大豆与羊毛动物纤维,蚕丝二组分混合物分析方法,溶解大豆蛋白,利用蛋白含量来确定大豆蛋白复合纤维含量,有点不可理解?

    下面这个是大豆与羊毛动物纤维,蚕丝二组分混合物分析方法,溶解大豆蛋白,利用蛋白含量占大豆蛋白复合纤维的比例来确定大豆蛋白复合纤维含量,有点不可理解?大豆蛋白复合纤维,目前是大豆蛋白和聚乙烯醇复合,仅仅用蛋白溶解后,剩余的聚乙烯醇的含量来‘推算’出来大豆蛋白复合纤维的含量,是有点欠妥,虽然规定了大豆蛋白复合纤维的蛋白含量,但是实际的大豆蛋白复合纤维中,大豆蛋白和聚乙烯醇含量的比例不一定的,也就是说比例不是那么固定的,这样的检测方法对检测公司来说是没有任何问题的,也是标准的一个进步,但对生产企业来说,确实是致命的,没有规定大豆蛋白复合纤维的配比必须是多少,这个检测很可能每批次大豆与羊毛动物纤维,蚕丝产品的标示和实际检测结果是不合格的。而实际生产添加的各成分是标准的?比如填充,大豆与羊毛动物纤维,蚕丝混合,生产企业是烘干后,按照回潮率计算,按重量比添加混合的,这样企业就根据这样的比例进行标示,这个是最准确的,也是最合理的?大家认为呢?[img=,690,172]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/10/201710250916_01_2154459_3.png!w690x172.jpg[/img][img=,690,138]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/10/201710250913_01_2154459_3.png!w690x138.jpg[/img]

  • 关于‘大豆拉丝蛋白’标识问题

    [font=SimSun, STSong, &]大豆拉丝蛋白在食品标签配料上该如何标识才算规范?若执行的标准是SB/T10453-2007《膨化豆制品》,该如何在产品中标识?[/font]

  • 【原创大赛】维纶基牛奶蛋白纤维和维纶基大豆蛋白纤维定性分析的研究

    维纶基牛奶蛋白纤维和维纶基大豆蛋白纤维定性分析的研究维纶基大豆蛋白纤维是迄今为止我国获得的唯一完全知识产权的纤维发明,在纺织行业得到了快递的发展,广泛的应用,但与维纶基大豆蛋白纤维一样由我国企业自主研发的维纶基牛奶蛋白纤维也申请到专利好几年了,但迟迟没有相关标准的出台,使这一我国自主研发的新型纤维得不到有效利用新型纤维的不断推出,为我们提供了更多的纤维原料,但同时由于国家标准的相对滞后,给检测工作者带来了很大的难题,下面就目前市场上两种新型蛋白复合纤维给予试验,进行定性分析。主要原理是在观察了维纶基牛奶蛋白纤维与维纶基大豆蛋白纤维显微结构和燃烧性状后,研究两者在常用化学试剂中的溶解性。试验结果表明,维纶基牛奶蛋白纤维与维纶基大豆蛋白纤维在88%甲酸和浓硝酸中都能够部分溶解;在沸腾水浴中,维纶基牛奶蛋白纤维与维纶基大豆蛋白纤维能够完全溶解于75%硫酸和98%硫酸牛奶蛋白纤维是再生蛋白质纤维,是以牛奶为原料经脱水、脱脂、分离、纯化、浓缩制成牛奶酪蛋白,与高分子化合物共混、共聚制成纺丝液,再经湿法纺丝而成;牛奶酪蛋白与聚乙烯醇制得的纤维称为维纶基牛奶蛋白纤维;牛奶酪蛋白与纤维素共聚制得粘胶基牛奶蛋白纤维。牛奶蛋白纤维含有多种氨基酸,具有良好的亲肤性和吸湿导湿性,抗菌防蛀,服用性强,受到消费者的青睐。维纶基牛奶蛋白纤维呈浅黄色,是由牛奶酪蛋白和聚乙烯醇大分子共混、共聚、醛化、揉和、脱泡,湿法纺成的纤维,克服了合成纤维吸湿性差和天然纤维强度低的不足,其比电阻介于天然纤维和合成纤维之间,吸湿性也优于聚乙烯醇纤维,在直接染料、弱酸性染料、活性染料和中性染料中都有良好的上染能力。本文在观察维纶基牛奶蛋白纤维和维纶基大豆蛋白纤维显微结构和燃烧性状后,研究两者在常用化学试剂中的溶解性,为纤维检测提供参数。大豆蛋白纤维属于再生植物蛋白纤维类,是以榨过油的大豆豆粕为原料,利用生物工程技术,提取出豆粕中的球蛋白,通过添加功能性助剂,与腈基、羟基等高聚物接枝、共聚、共混,制成一定浓度的蛋白质纺丝液,改变蛋白质空间结构,经湿法纺丝而成. 其有着羊绒般的柔软手感,蚕丝般的柔和光泽,棉的保暖性和良好的亲肤性等优良性能,还有明显的抑菌功能,被誉为“新世纪的健康舒适纤维”。大豆纤维是以脱去油脂的大豆豆粕作原料,提取植物球蛋白经合成后制成的新型再生植物蛋白纤维,是由我国纺织科技工作者自主开发,并在国际上率先实现了工业化生产的高新技术,也是迄今为止我国获得的唯一完全知识产权的纤维发明。1 试验1. 1试验材料、仪器和试剂纤维细度成分显微分析仪,万分之一电子天平;SHA-C水浴振荡器;鼓风恒温烘箱; 索氏萃取器;酒精灯;具塞三角瓶若干。甲酸(88%);硫酸(75%);浓硫酸(98%);浓硝酸;1MOL/L次氯酸钠溶液;石油醚(馏程为40℃~60℃)。1.2试验方法显微结构试验:用纤维细度成分显微分析仪观察纤维的显微结构。 以下试验维纶基牛奶蛋白纤维与维纶基大豆蛋白纤维同一方法分别做一次燃烧性状试验:点燃酒精灯,用镊子夹取10mg左右纤维束,徐徐靠近火焰,观察试样对热的反应情况。将纤维移入火焰,观察纤维的燃烧情况;然后离开火焰,观察纤维的燃烧情况,并用鼻子闻试样燃烧刚熄灭的气味。最后,待试样熄灭冷却,观察残留物灰分的状态。预处理:取纤维5g左右,用定量滤纸包好,置于索氏萃取器中,用石油醚萃取1h,每小时至少循环6次,待试样中的石油醚挥发后,把试样浸入冷水中浸泡1h,再在(65±5)℃的水中浸泡1h,浸泡过程中时时搅拌。水(mL)与试样(g)之比为100:1。然后抽吸脱水,晾干。溶解性试验:准确称取试样1g置于具塞三角瓶中,加入100mL化学试剂,在搅拌条件下观察不同温度下纤维和试剂随时间的变化情况。待一定时间后,洗涤,抽吸排液,烘干。2 试验结果2.1显微结构在显微镜下观察维纶基牛奶蛋白纤维与维纶基大豆蛋白纤维的横截面呈腰圆形或哑铃形,纵向有沟槽,两种纤维在显微镜下几乎无差别,无法区分这两种纤维。2.2燃烧性状维纶基牛奶蛋白纤维与维纶基大豆蛋白纤维靠近火焰时现象都是熔融并卷曲;进入火焰,熔融、卷曲并燃烧;离开火焰,燃烧,有时会自然熄灭。燃烧过程中散发出蛋白质燃烧时所特有的臭味。纤维燃烧的一端形成黑褐色硬块。两种纤维在燃烧情况下,火焰颜色,气味几乎无差别,无法区分这两种纤维。2.3溶解性取维纶基牛奶蛋白纤维与和维纶基大豆蛋白纤维分别置于88%甲酸、75%硫酸、浓硫酸、浓硝酸和1MOL/L次氯酸钠溶液中进行溶解性试验, 品名/溶液88%甲酸[/ali

  • 【求助】豆血红蛋白含量的测定方法

    最近要做大豆豆血红蛋白含量的测定,方法我已经知道,最后要比色,可是我查不到有关测定豆血红蛋白含量标线的方法!!!!太早的文献真的很难找到,希望各位大侠能多多指教,给与帮助!我将万分感谢 !

  • 【讨论】又是一起投毒事件?输日青刀豆敌敌畏超标3.45万倍!

    10月12日,日本一女性消费者购买烟台北海食品有限公司出口日本的冷冻青刀豆,食用后感到不适。经日本方面检测,其食用的豆角中最高含有[color=red]6900PPM[/color]的敌敌畏成分,是标准值的[color=red]3.45万倍[/color]。然而其他未开封豆角未检出敌敌畏成分。 [size=4][color=red]又是一起中毒事件,离上次的"饺子事件"刚过去7个多月,如今的青刀豆又出现含量严重超标!是有人故意破坏,故意投毒?还是本身的含量的确如此?为何输入日本的农产品以及副食品经常出现问题?!如何避免这样的事件再次发生?您对这样的事件持什么观点?[/color][/size]

  • 【原创大赛】维纶基牛奶蛋白纤维和维纶基大豆蛋白纤维定性分析的方法研究

    【原创大赛】维纶基牛奶蛋白纤维和维纶基大豆蛋白纤维定性分析的方法研究

    维纶基牛奶蛋白纤维和维纶基大豆蛋白纤维定性分析的方法研究 维纶基牛奶蛋白纤维与维纶基大豆蛋白纤维都是由聚乙烯醇和蛋白共混制得,所以化学性质及其相似,一直以来由于维纶基牛奶蛋白纤维没有相关的检测方法,检测机构对维纶基牛奶蛋白纤维出具的检测报告都是维纶基大豆蛋白纤维 维纶基大豆蛋白纤维的成分定量分析方法是先用次氯酸钠溶液溶解掉蛋白质,然后用盐酸溶解聚乙烯醇,同样维纶基牛奶蛋白纤维也是可以用这种方法进行溶解,下面看看常规的检测方法能不能分析出这两种纤维1.维纶基牛奶蛋白纤维与维纶基大豆蛋白纤维,其纤维成分定性的基本方法:①.显微镜法: 在显微镜下观察维纶基牛奶蛋白纤维与维纶基大豆蛋白纤维的横截面呈腰圆形或哑铃形,纵向有沟槽;②.燃烧: 维纶基牛奶蛋白纤维与维纶基大豆蛋白纤维靠近火焰时现象都是熔融并卷曲;进入火焰,熔融、卷曲并燃烧;离开火焰,燃烧,有时会自然熄灭。燃烧过程中散发出蛋白质燃烧时所特有的臭味;③.溶解法:共同的维纶基,加上都是蛋白质,化学性质非常接近,在75%硫酸、浓硫酸、浓硝酸和0.1MOL/L次氯酸钠溶液中,溶解现象和状态都是一样的,都无法将两者定性2.个人通过研究和分析认为,只有通过两者氨基酸的组分不同进行定性,从而确定纤维牛奶中氨基酸的组成表”取自《乳与乳制品的生理功能特征》一书。“大豆蛋白质的氨基酸组成表”取自《大豆制品工艺学》一书。大豆蛋白质的氨基酸组成可以参考“全酸沉淀蛋白”的氨基酸组成,做为比较的依据。因为大豆蛋白纤维使用的是大豆分离蛋白,即是酸沉蛋白。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/09/201309121130_463904_2154459_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/09/201309121130_463905_2154459_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/09/201309121130_463907_2154459_3.jpg3.维纶基牛奶蛋白纤维与维纶基大豆蛋白纤维的通过测其氨基酸的组成不同,可以定性出大豆蛋白与牛奶蛋白,如果是大豆蛋白复合纤维,然后用GB/T2910.101-2009大豆蛋白复合纤维和其他纤维的混合物-定量化学分析进行测试。完全溶解,则为维纶基大豆蛋白纤维,如果是维纶基牛奶蛋白纤维,也可以用此方法进行定量法定性,相关详细步鄹如下:3.1 试验3.1.1试验材料、仪器和试剂万分之一电子天平;SHA-B水浴振荡器;鼓风恒温烘箱;索氏萃取器,离心机,具塞三角瓶,1MOL/L次氯酸钠溶液,氢氧化钠,20%盐酸溶液等3.1.2目前行业内认为定性牛奶蛋白纤维的最好方法:牛奶蛋白纤维在2.5%NaOH 溶液下,100℃恒温加热30分钟,即可出现牛奶蛋白特有的现象。状态:在整个溶解的过程下,纤维体积膨胀渐呈冻胶状,颜色会从本色逐渐变成深红色,然后再有深红色褪色至浅黄色。此方法经试验,并不是所有的牛奶蛋白复合纤维都出现此特有现象,有时不是很明显,只能作为判断的一种辅助方法,不能作为定性的标准方法。3.1.3在显微镜下观察牛奶蛋白复合纤维或大豆蛋白复合纤维,能确定是其中的一种,然后用1MOL/L次氯酸钠溶液,常温下振荡溶解30分钟,此时,蛋白全部溶解,剩余纤维抽滤,冲洗干净,取少量纤维在显微镜下查看,初步判定为聚乙烯醇,然后燃烧,根据味道和燃烧现象,确定其为维纶基蛋白纤维3.2需要确定蛋白质纤维为何种纤维,经初步试验分析,常规方法无法准确定性,下面是维纶基牛奶纤维的专利拥有者在相关国家检测机构取得的检测报告http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/09/201309121131_463909_2154459_3.jpg以上报告可能确定是维纶和牛奶蛋白复合,但其报告检测依据个人不是特别认同,也咨询过相关人员,没有给予明确答复,检测的具体方法没有明确,国家并没有发布相关的检测标准,不能作为判断纤维的依据,所以目前情况下仍然不能使该纤维大面积推广使用。3.3个人认为,只有通过两者氨基酸的组分不同进

  • 大豆蛋白纤维和牛奶蛋白聚乙烯醇纤维怎么定性定量?

    大豆蛋白纤维也是一种复合纤维,是大豆蛋白和聚乙烯醇复合纤维,牛奶蛋白也有一种牛奶蛋白和聚乙烯醇复合的纤维,其中大豆蛋白纤维在市场上比较普遍,但最近两年牛奶蛋白聚乙烯醇纤维在市场上也比较多见,其中显微镜和燃烧法,大豆蛋白纤维和牛奶蛋白聚乙烯醇纤维都比较相似,化学性质也相似,不知大家有没有遇到这两种纤维,怎么来定性,定量?

  • 【求助】关于大豆酶解蛋白检测三聚氰胺的问题

    部分冷冻饮品在生产过程中往往会添加大豆酶解蛋白,我们公司要求凡是涉及到蛋白的原料和成品在进厂和出库的时候都必须进行三聚氰胺的检测,但是我用日立L-2000液相检测时检测出有,而且很大,送到比较权威的机构用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质[/color][/url]检验,就没有检测出来,有一个奇怪的现象就是这个原料的出峰时间比标准样品要延后,我们判定那是一个杂质峰,但是加标回收做的时候也做不出来,因为这个峰很接近标准品的峰。请问各位大侠,这个样品的前处理应该怎么做,才能把那个杂质峰给分开?

  • 【求助】急急急!!有谁用SDS-CGE方法做过乳蛋白和大豆分离蛋白,我出现问题了想请教?

    我用SDS-CGE方法分离了乳蛋白和大豆分离蛋白,仪器是贝克曼的,柱子也是贝克曼的未涂层的空柱子,方法都是按照说明书的处理方法,即标准蛋白样品用样品缓冲液(含SDS)和水溶解后水,再水浴后上机的。可是图谱的效果和说明书的不一致,而且其他样品图谱也不对,并不是一种成份一个峰,而且很多响应值较高的峰,峰形倒是好,但是图谱明显不对,没有那么多成分阿,我反复做过,结果都是这样,很烦恼,望赐教!!! 这是我上传的我做的图谱![img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=33845]我用SDS-CGE方法分离的乳蛋白和大豆分离蛋白的图谱[/url]

  • 【分享】生物质谱在糖蛋白结构分析中的应用

    【分享】生物质谱在糖蛋白结构分析中的应用

    生物质谱在糖蛋白结构分析中的应用项目完成人:桑志红 蔡 耘项目完成单位:国家生物医学分析中心 随着人们对糖蛋白参与生命活动机理的日益深入了解,对天然糖蛋白及重组糖蛋白类药物的分析越来越受到重视。重组糖蛋白类药物的质量控制更是直接关系到药物的疗效及至人类的健康。九十年代以来,随着带有反射功能的基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)和纳升电喷雾串联质谱(nano-ESI-Q-TOF)等具有软电离方式的现代质谱 技术的发展,质谱以其高灵敏度和强有力的分析混合物的能力,提供了生物大分子的分子量、序列、一级结构信息以及结构转换、修饰等方面的信息,使糖基化分析有了重要的进展。 通常研究糖蛋白的方法是把蛋白链上的寡糖切下来,分别研究蛋白部分和寡糖部分的结构,因此无法研究与两部分共同相关的结构问题,也不能区分不同糖基化位点上切下来的寡糖。自90年代初,国外有人开始用质谱法研究糖蛋白的结构,同时描述了各个位点的不均一性。我们用建立的现代生物质谱技术研究糖蛋白一级结构的方法,将其应用与基因重组糖蛋白的结构分析。为糖蛋白结构分析及基因重组糖蛋白类药物的质量控制提供新的手段。一、 生物质谱研究糖蛋白结构方法的建立实验所用仪器为:1.德国BRUKER 公司的REFLEXIII型基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱仪,N2激光器,波长337nm,线性飞行距离150cm,加速电压2kv。2.英国Micromass 公司Q-TOF型电喷雾串联质谱仪。源温80°C,气体流速40L/h,枪头电压650V,检测频率2.4S,氩气碰撞池压力6*10-5mbar。1. 基质的选择,在MALDI-TOF-MS分析中,基质起着相当重要的作用。不同的基质对不同类的物质响应不同,a-氰基-4-羟基肉桂酸用于测定糖蛋白核糖核酸酶B效果相对较好。2. 糖蛋白分子量的测定,糖蛋白核糖核酸酶B由124个氨基酸组成,在34位Asn处连有一个高甘露糖型N-糖链。由于糖链的微不均一性,与普通蛋白质及核酸不同,其分子离子峰在MALDI-TOF-MS 质谱图上表现为一簇峰,各峰之间约相差一个糖基。正是由于这种微不均一性,使得其分子离子峰变宽,灵敏度降低。糖链分子量越大,峰越宽,灵敏度越低,所以一般只有糖链较短,蛋白的质量不太大的糖蛋白才能测定其平均分子量。用MALDI-TOF可直接测定糖蛋白核糖核酸酶B的平均分子量为 15208.6Da。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/03/201103211511_284179_1604317_3.jpg3. 糖含量的测定,采用O聚糖酶及内糖苷键酶F分别作用于核糖核酸酶 B,只有内糖苷键酶F能够是其分子量发生变化,表明核糖核酸酶B分子中不存在O-连接糖链存在着N-连接糖链。内糖苷键酶F切断N-糖链五糖核心最内侧的GlcNAc-GlcNAc糖苷键,得到含一个GlcNAc的肽链,减去GlcNAc,可以计算出准确的肽链分子量T=13695.6,与糖蛋白平均分子量之差为糖链的平均分子量G=1513.4,平均糖含量为:(糖链大小/糖蛋白分子量)×100%=9.95%。4. 糖基化位点的确定,研究糖基化类型及糖基化位点的策略:采用蛋白酶酶解与糖苷内切酶酶解相结合的方法,通过酶切前后含糖肽片的位移,结合网上数据库检索,可以确定糖基化类型和糖基化位点。以不同类型的糖苷内切酶作用于糖蛋白(N-糖苷键酶或O-糖苷键酶),在MALDITOF-MS 上观察其质量的变化,可以直接确定糖蛋白中是否含有响应类型的糖链,这是我们确定糖蛋白中糖苷键类型的基础。我们采用先将核糖核酸酶B还原烷基化,加Glu-C酶切,产物再用内糖苷肩酶F酶切,可观察到含糖肽段出现位移,将核糖核酸酶B的肽质量指纹图进行数据库检索,证实发生位移的肽段中含有N-糖链特异连接位点,由此确定34位Asn为糖基化位点。另外我们采用内糖苷键酶F及肽-N-聚糖酶F两种酶进行差位酶切法对含糖肽段进行验证,两种酶酶切后分子离子峰的差值除以GlcNAc的质量,结果就是N-糖基化位点的个数5. 质谱测定氨基酸序列, 我们对核糖核酸酶B肽质量指纹谱中的含糖肽段进行了串联质谱测定,首先在一级质谱图中选择离子4972.23,在串联质谱的碰撞活化室以氩气与其碰撞产生碎片,从碎片的质荷比推算出此肽片中的一段氨基酸序列,检索结果为核糖核酸酶B,从而判断其理论序列是否一致。6. 糖链结构的研究,凝集素对糖肽的亲和提取,进一步分析糖肽序列及糖链结构的关键是含糖肽段的提取。核糖核酸酶B中糖链为高甘露糖型,我们选用对其有特异性吸附的伴刀豆球蛋白对其进行提取利用这种简捷的亲和质谱的方法,对糖肽段进行了分析。建立了亲和质谱分析糖肽类物质的方法,为今后糖肽序列分析及糖链结构分析奠定了基础。二、基因重组糖蛋白人促红细胞生成素(rhEPO)的结构分析。 利用以上建立的方法,我们对样品重组人促红细胞生成素进行了分析,断定此样品为非完全糖基化,样品中只存在N-连接的糖链,无O-糖链。应用酶切法用肽-N-聚糖酶处理后,得到两个含糖肽段,进行数据库检索,测得38位及83位为N-糖基化位点,与文献报道相符,结果可靠。因此,该项课

  • 市场监管总局关于发布《保健食品原料 大豆分离蛋白 乳清蛋白备案产品剂型及技术要求》的公告

    根据《中华人民共和国食品安全法》《保健食品原料目录 大豆分离蛋白》《保健食品原料目录 乳清蛋白》,市场监管总局制定了《保健食品原料 大豆分离蛋白 乳清蛋白备案产品剂型及技术要求》,现予公告,自2023年10月1日起施行。[align=right]市场监管总局[/align][align=right]2023年9月27日[/align][list][/list][list][*]附件下载[*][/list][list][*][url=https://www.samr.gov.cn/cms_files/filemanager/1647978232/attach/20239/e2f114d7ad90431c9e8e24b2aaa79e6e.pdf?fileName=%E4%BF%9D%E5%81%A5%E9%A3%9F%E5%93%81%E5%8E%9F%E6%96%99%20%E5%A4%A7%E8%B1%86%E5%88%86%E7%A6%BB%E8%9B%8B%E7%99%BD%20%E4%B9%B3%E6%B8%85%E8%9B%8B%E7%99%BD%E5%A4%87%E6%A1%88%E4%BA%A7%E5%93%81%E5%89%82%E5%9E%8B%E5%8F%8A%E6%8A%80%E6%9C%AF%E8%A6%81%E6%B1%82.pdf]保健食品原料 大豆分离蛋白 乳清蛋白备案产品剂型及技术要求.pdf[/url][/list]

  • 豆浆蛋白

    对豆浆进行蛋白质的检验。同浓度的豆浆,在加入内酯之后,一个是没有定型;一个是通过加热定型成内酯豆腐。在这种情况进行取样,检验蛋白质的含量。结果表明有0.5%的差距,为什么?请朋友们赐教,谢谢!

  • 补充蛋白质首选优质蛋白

    补充蛋白质首选优质蛋白,在量上,优质蛋白质摄入量应该达到一天所需蛋白质总量的1/2到2/3,食物来源有鸡蛋、牛奶、黄豆、鱼类和瘦肉。

  • 转基因水稻胚乳可提取血清白蛋白

    如果说一个人一次献血200ml,一亩转基因水稻产出的血清白蛋白量约等于300人献的血——转基因水稻胚乳可提取血清白蛋白——转基因水稻胚乳可提取血清白蛋白2012年09月01日 来源: 中国科技网 关注转基因 白蛋白供应紧张一直困扰着人类。我国每年需求150—160吨,全球每年需求量则高达500吨,由于血浆来源紧张,我国目前从血浆中提取量仅可供应1/3,其中2/3依赖进口。 2011年10月31日,武汉大学生命科学学院教授杨代常撰写的论文《利用转基因水稻规模化生产重组人血清白蛋白》在《美国科学院院报》发表,吸引了世界的目光。 文章用翔实的科学数据证明,植物来源的重组人血清白蛋白与临床使用的血浆来源血清白蛋白,无论是在生理生化性质,还是功能用途等方面,都具有高度的等同性。 为何这项研究引发种种关注?稻米血清白蛋白是否会危及生态及人身安全?其何时能用于临床治疗?……带着这些问题,记者采访了杨代常和他的团队。 “借腹生子”:从水稻胚乳中提取血清白蛋白 植物种子生物反应器,是将植物种子作为一个蛋白质“生产车间”,利用植物作为合成蛋白质的“机器”来合成人类所需的蛋白质。“通俗地解释,便是‘借腹生子’。”杨代常说。 国外从1989年已开始利用DNA重组技术生产血清白蛋白,但由于血清白蛋白产量低、纯化工艺复杂、生产成本远高于市场成本,始终无法进入市场。 杨代常带领研究团队,从水稻基因组数据入手,根据水稻种子储藏蛋白与血清白蛋白的生化性质差异,设计出从提取到纯化的一整套工艺方案,最大限度地提取血清白蛋白,最低限度去除种子的内源蛋白,成为一项原始创新的科研成果。 “具体来说,是由表达元件组成的载体,通过遗传工程整合到水稻基因组内,在种子特异性调控元件的指导下,水稻种子在成熟过程中也不断地合成和积累人血清白蛋白,然后通过规模化种植获得原料,再经过提取、纯化等步骤获得高纯度的血清白蛋白。”杨代常介绍,目前大约每亩水稻可以产生1.5—2公斤血清白蛋白,如果说一个人一次能献血200ml,一亩转基因水稻产出的血清白蛋白量约等于300人献血。 “天然屏蔽”:可杜绝肝炎、艾滋病毒等风险 植物源重组血清白蛋白优势明显,它来源于非动物,避免了各种病毒和病原菌的污染,并由于不受血浆供应限制,可无限量供应。但是转基因农业作物安全性向来争议不断,植物源血清白蛋白有望未来直接应用于人体中,有人担心会危及生态及人身安全。 对此,杨代常解释,首先,就人血清白蛋白本身安全性而言,血清白蛋白本就是人体的蛋白质,占血浆中蛋白的30%,是一种安全的蛋白质。目前,根据获取的数据,植物来源的人血清白蛋白从生物活性、分子结构和理化性质与血浆来源的人血清白蛋白完全一致,从水稻胚乳中提取的血清白蛋白可杜绝携带如肝炎病毒、艾滋病毒等风险。研究发现,人体对植物蛋白的耐受能力大于对细菌和酵母的耐受能力。从安全性考虑,已建立高纯度符合医药级别纯度的血清白蛋白。其次,就转基因生物安全而言,由于采取地理和时间双重隔离方法,要求比美国更为严格。第三,为杜绝进入食物链,在研究中采取了专用收割机、烘干机、稻米加工设备以及专用仓库等措施,建立了严格的监管规范,能做到可管可控和可追溯。 未来预期:进入临床需4至5年 从2005年始,杨代常自主研发的水稻胚乳细胞蛋白质高效表达技术平台,填补了国际上此项技术规模化生产的空白,已获美、日、欧盟以及我国的多项专利。 杨代常说,目前,植物源重组血清白蛋白的质量已达到非临床应用标准,可替代血源人血白蛋白用于细胞培养基添加剂,成为细胞培养中血浆来源的血清白蛋白的替代品;可减少培养基中胎牛血清的使用量;还可用于高纯试剂、细胞冷冻保护剂、医疗器械包埋剂、药物载体、化妆品组分、体外诊断等。 国外已在疫苗及生物医药产品的细胞培养的稳定剂上使用。我国按照国家药监局的要求,要通过临床研究后才能进入临床应用。 通过治疗大鼠肝硬化腹水对比,进行植物源重组血清白蛋白的药效研究,发现大鼠肝硬化腹水的治疗效果在降低腹围、增加尿量和尿蛋白量等指标优于血浆来源的血清白蛋白。 “植物源重组血清白蛋白正在进行临床前研究,已完成大部分的药学研究,预计在2013年上半年可望完成临床前研究;预计进入临床研究至少需要2年时间,进入临床应用至少需要4—5年或更长的时间,这取决于临床研究的结果与进度以及国家的法规。”杨代常说。 从实验室走向产业化 去年年初,杨代常带着多年的研发成果,入驻武汉东湖国家自主创新示范区光谷生物城,一年内实现了项目产业化。 “这一过程我们走得很艰难。”杨代常说,为了让投资者更有信心,他在商业模式上从长中短期产品计划入手,将技术做好做精。在科技部转基因重大专项、国家863计划和武汉东湖国家自主创新示范区光谷生物城的支持下,加速了项目产业化进程。 “我国生物产业要走在世界前列,在心理上要打破‘奴性’思维,在政策上要突破传统观念,要敢做别人不能做或不敢做的事情。”杨代常说,“现在一谈到转基因,很多人就‘谈虎色变’。实际上,理解上存在很多误区。转基因技术是通过遗传工程的手段,将人类需要的基因(一段DNA片段)导入到植物或任何一种生物的一项高科技技术,是人类由必然王国走向自由王国的必由之路。” 近日,杨代常的科研团队又传出喜讯,在水稻中“种”出了“人抗胰蛋白酶”。目前,重组抗胰蛋白酶与重组血清白蛋白一样,有效地避免人血液中病毒病原菌感染的风险,但需要进行一系列的免疫原性、急性、毒性等相关实验和临床研究后,方能应用于临床。 杨代常透露,未来,其团队研发重心将着重原创性技术研究,建立单克隆抗体的表达平台,使我国的单克隆抗体药物的价格降到5万元左右,重组血清白蛋白进入临床应用。(记者 马爱平) 《科技日报》(2012-09-01 三版)

  • “蛋白变性”的望文生义

    现在人们是越来越注重食品健康了,于是任何关于某种食品不健康的说法都能吸引一堆眼球。有人说自己买的乳清蛋白粉不容易溶在水中,立刻有人跳出来说千万不能用热水,蛋白质会变性。于是有一堆看起来对蛋白质有一点了解的人纷纷附和,大谈如何保持蛋白不变性。 很多人看到“蛋白变性”这个词,就望文生义地想到“变质”“变坏”,仿佛“变性”了就有害健康了。最常见的还有一个例子,反对微波炉的人总是说微波炉会导致蛋白质的变性。 蛋白质通常是由20种不同的氨基酸组成的,不同的蛋白质只是各种氨基酸的组成和连结方式不同。因为各种氨基酸的理化特性不同,它们会互相影响,最后会像积木一样形成一定的空间结构。通常也就说是蛋白质的天然构象。如果因为某种原因,蛋白质分子失去了它的天然构象,被称为变性。而蛋白质被吃到肚子里,首先要被水解(消化)成一个个的氨基酸分子,才能被吸收。而在多数情况下,变性的蛋白更容易被水解。可见,蛋白质变性对于食物来说,不仅不是“变质”,而且是好事。 我们所吃的所有蛋白,比如肉、鱼、鸡蛋、牛奶、豆浆、豆腐,作熟的过程就是蛋白质变性的过程。豆浆中的蛋白质不变性是变不成豆腐的。而作为商品出售的各种蛋白粉,多数都经过了高温灭菌和干燥处理,早已经变性了。对于某些产品而言,适当的工业处理甚至能够提高蛋白质的品质。比如大豆中的蛋白,其蛋白质质量指数(蛋白质消化校正计分)是0.91 ,但是经过分离纯化高温干燥等处理之后,就能达到1了。还有相当多的蛋白质产品甚至经过了酶解处理,以获得更好的理化特性。那些蛋白质,不仅是空间构象,连化学结构都变了,更是“变性”得深入。

  • 蛋白修饰与蛋白质鉴定

    现在,在实验研究基础上,借助多方面的生物信息学方法,可以快速高通量的预测和进行蛋白质鉴定蛋白翻译后修饰。分泌蛋白和膜相关蛋白附着于细胞膜上的或将被排泄出去的蛋白质是由细胞内质网膜上附着的核糖体合成。附着有核糖体的内质网被称为糙面型内质网。这类蛋白质都含有一个N-末端(或氨基端),我们称之为信号序列或信号肽。这个信号肽通常情况下含有13-36个主要疏水性残基,同时它含有多蛋白复合物,我们称之为信号识别粒子(SRP)。这种信号肽在通过内质网膜之后会被去除。信号肽的去除过程是在信号肽酶催化作用下完成的。含有一个信号肽的蛋白质被称为前蛋白,有别于原蛋白。然而,某些用于分泌的蛋白在分泌之后会进一步被蛋白水解,因此包含有原蛋白的序列。这类蛋白质被称为前原蛋白。蛋白水解性裂解许多蛋白质在翻译之后会经历水解性裂解过程。其中最为简单的形式是去除起始蛋氨酸。许多蛋白质合成了不活跃的前体细胞,这些细胞只能在合适的生理条件下通过限制性蛋白水解过程产生活性。在凝血过程中使用到的胰腺酶和酶类就是后者的例证。多肽去除时产生活性的不活跃的前体蛋白,我们称之为原蛋白。前原蛋白的翻译后加工过程的一个复杂的例子就是脑垂体分泌合成的前阿黑皮素原的裂解过程(有关前阿黑皮素原的讨论,见肽类激素页)。这类前原蛋白经过复杂的裂解,根据合成的前阿黑皮素原的细胞定位而不同,其路径也有所不同。另一个前原蛋白的例子就是胰岛素。由于胰岛素是由胰腺分泌的,因此它有一个前肽。随着含24个氨基酸的信号肽的裂解,这类蛋白也折叠成了胰岛素原。胰岛素原进一步分裂,产生活跃的胰岛素,它包含两个肽链,由二硫键进行连接。但仍有其他的蛋白(酶类)被合成为非活跃的前体细胞,被称为酶原。酶原在蛋白水解性裂解时会产生活性,在凝血串联蛋白质链的若干蛋白质中都会发生这种现象。甲基化作用蛋白翻译后的甲基化过程主要发生在氮原子和氧原子上。活性甲基供体是活性腺苷甲硫胺酸(SAM)。最常见的甲基化作用发生在赖氨酸残基的ε-amine上。脱氧核糖核酸组蛋白中赖氨酸残基的甲基化作用可调节核染色质结构,因此可调节其转录活性。赖氨酸原本被认为是一种常设共价标记,可提供长期信号,甚至包括转录记忆时的组蛋白依赖机制。然而,最近的临床研究表明赖氨酸甲基化作用与其他共价修饰体相似,作用时间短,并能通过反脱甲基化活动进行动态调节。最近的组学研究发现表明,赖氨酸残基的甲基化作用不仅发生在核染色质层面,而且还通过修订转录因子影响基因表达。组氨酸的咪唑环,精氨酸的胍基部分以及谷氨酸盐和天冬氨酸盐的R组酰胺(R-group amides )上,都发现了额外的氮甲基化作用。谷氨酸盐和天冬氨酸盐的R组羧化物也会发生氧甲基化作用并形成甲基酯。蛋白可能在半胱氨酸的R[

  • 植物蛋白与动物蛋白

    蛋白质是一类重要的营养素,它的存在与生命的各种活动紧密联系,例如参与机体的构成及机体的代谢,参与遗传信息构成和代谢,同时也为机体提供热量。 蛋白质的种类极其繁多,不同食物来源的蛋白质,能被人体消化、吸收和利用的程度也不同,也就是说,不同种类的蛋白质其营养价值有所区别,而决定蛋白质营养价值的主要因素是蛋白质中必需氨基酸的种类和含量。氨基酸评分(AAS)是测评蛋白质中必需氨基酸种类和含量的一个常用指标。蛋白质含有的氨基酸之所以会有不同,与蛋白质的来源有很大的关系。蛋白质主要来源于动物性食物与植物性食物,动物性蛋白质和植物性蛋白质所含的氨基酸是不同的,这即意味着它们的营养价值也有差异。动物性蛋白质主要来源于禽、畜及鱼类等的肉、蛋、奶。其蛋白质构成以酪蛋白为主(78~85%),能被成人较好地吸收与利用。更重要的是,动物性蛋白质的必需氨基酸种类齐全,比例合理,因此比一般的植物性蛋白质更容易消化、吸收和利用,营养价值也相对高些。一般来说,肉类(如鱼肉、牛肉)蛋白质和奶类中的蛋白质,其氨基酸评分均在0.9~1.0的水平。植物性蛋白质主要来源于米面类、豆类,但是米面类和豆类的蛋白质营养价值不同。米面类来源的蛋白质中缺少赖氨酸(一种必需氨基酸),因此其氨基酸评分较低,仅为0.3~0.5,这类蛋白质被人体吸收和利用的程度也会差些。当然,这种不足可以通过科学的方法加以改善,例如在米面中适当加入富含赖氨酸的豆类食品,则可明显提高蛋白质的氨基酸评分。 在众多的植物性蛋白质中,营养价值最高的是豆类蛋白质(又称大豆蛋白),而且豆类食物不含胆固醇,这是动物性食物所不具备的特点。没有经过任何加工的大豆蛋白质有它的缺陷:蛋氨酸(一种必需氨基酸)含量相对较少。因此,整粒大豆的氨基酸评分大约为0.6~0.7。

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