黄酮哌酯

化妆品中补骨脂特征成分补骨脂素、异补骨脂素、新补骨脂异黄酮和补骨脂二氢黄酮的检测方法1 适用范围　　本方法规定了用高效液相色谱法定性检测化妆品中补骨脂特征成分补骨脂素、异补骨脂素、新补骨脂异黄酮和补骨脂二氢黄酮的方法。　　本方法适用于化妆品中补骨脂特征成分补骨脂素、异补骨脂素、新补骨脂异黄酮和补骨脂二氢黄酮的定性测定。2 方法提要　　样品在经过提取后，经高效液相色谱仪分离，二极管阵列检测器检测，经与平行操作的补骨脂素、异补骨脂素、新补骨脂异黄酮和补骨脂二氢黄酮对照品及补骨脂对照药材比较，以保留时间和紫外光谱图定性，鉴别补骨脂特征成分补骨脂素、异补骨脂素、新补骨脂异黄酮和补骨脂二氢黄酮的存在。本方法对补骨脂素、异补骨脂素、新补骨脂异黄酮和补骨脂二氢黄酮的检出限和取样品0.5 g时的检出浓度见表1。 表1 4种补骨脂特征成分的检出限和检出浓度化合物检出限（ng）检出浓度（μg/g）补骨脂素0.30.6异补骨脂素0.30.6新补骨脂异黄酮0.30.6补骨脂二氢黄酮0.30.63 试剂和材料　　除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为实验室用一级水。3.1 乙腈，色谱纯。3.2 补骨脂素，纯度≥99%。3.3 异补骨脂素，纯度≥99%。3.4 新补骨脂异黄酮，纯度≥98%。3.5 补骨脂二氢黄酮，纯度≥99%。3.6 补骨脂，中国食品药品检定研究院，供鉴别用。3.7 补骨脂特征性成分混合标准溶液（=0.1 μg/mL）：分别称取补骨脂素（3.2）、异补骨脂素（3.3）、新补骨脂异黄酮（3.4）、补骨脂二氢黄酮（3.5）对照品各5 mg（精确到0.1 mg），置500 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，配制成质量浓度各为10 μg/mL的标准溶液。精密量取各标准溶液0.1 mL置10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得0.1 μg/mL的混合标准溶液。3.8 补骨脂标准储备溶液：取补骨脂对照药材0.2 g，置50 mL三角瓶中，加30 mL 70%乙醇回流提取1h，滤过，滤液置100 mL量瓶中，加70%乙醇稀释至刻度，摇匀，即得。4 仪器4.1 高效液相色谱仪：具二极管阵列检测器。4.2 分析天平：感量为0.1 mg。4.3 移液器。4.4 涡旋振荡器。4.5 超声波清洗仪（功率不低于200W）。4.6 高速离心机：转速不小于10000 r/min。

植物性食物是黄酮类物质的优秀来源，尤其是洋葱、欧芹、紫甘蓝、浆果、柑橘、茶叶、豆类及豆制品中，黄酮类物质含量很丰富，大家可适当多吃。物是黄酮类物质的优秀来源，尤其是洋葱、欧芹、紫甘蓝、浆果、柑橘、茶叶、豆类及豆制品中，黄酮类物质含量很丰富，大家可适当多吃。

[size=5][font=宋体]准确称取于120℃干燥至恒重的无水芦丁(作黄酮标准对照)9.5 mg,用60%的乙醇定容于50mL容量瓶中,摇匀,得到浓度为[color=#fe2419]0.19 mg/mL[/color]的标准品溶液,作为贮备液备用。准确量取此液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0 mL于25 mL容量瓶中,分别加5%亚硝酸钠和10%硝酸铝溶液各[color=#fe2419]0.3mL[/color],放置6 min。[color=#fe2419]加1 mol/mL氢氧化钠溶液4.0mL,分别用30%的乙醇稀释至刻度,混匀,放置16min。[/color]用紫外分光光度计在510 nm处测定吸光度。如上述显色实验，为什么要配置浓度为[color=#fe2419]0.19 mg/mL[/color]的标准品溶液，而不是其他浓度（多少浓度范围内遵循朗伯比尔定律？）。别加5%亚硝酸钠和10%硝酸铝溶液各[color=#fe2419]0.3mL[/color],放置6 min。[color=#fe2419]加1 mol/mL氢氧化钠溶液4.0mL, [/color][color=#000000]显色原理是什么，各溶液用量有什么要求？ 各溶液用量之间是否有内在关系？ 显色时间有什么要求？ 还有就是[/color][color=#fe2419]混匀,放置16min [/color][color=#000000]为什么要放置16min？如何放置？在容量瓶中放置？容量瓶塞需打开还是塞上？还有就是在做实验中 植物黄酮提取，显色后，进紫外分光光度计测量时，分光度总是跳动不稳定。老师说需离心，究竟离心的目的是什么？难道是沉淀Al(no3)3? 不过离心后 含试样的溶液 会有好多沉淀，而参比液几乎没有沉淀，沉淀是什么物质，是否含有大量黄酮类物质，从而影响实验准确度？ 究竟 如何解决A值跳动的症状（紫外分光光度计没问题）？还有就是显色溶液是否要现用现配，是否用量，及其浓度都要精密控制？ 还有就是吸光度测量的重复试验，每份重复三次，指的是需重新取样提取黄酮物质，再显色测吸光度，还是显色过后，取试液与三比色皿中，测量三次吸光度？ 还有就是稳定性实验，为什么要做？[/color][color=#fe2419]我是一名学生，刚刚入手实验，有很多不明白的地方，请各位前辈不吝赐教，还有就是想各位前辈能给些此类光谱测定的参考资料及经验，十分感谢！[/color][/font][/size]

化妆品中补骨脂特征成分补骨脂素、异补骨脂素、新补骨脂异黄酮和补骨脂二氢黄酮的检测方法

黄酮具有强抗氧化作用,对食物中脂肪、蛋白质、矿物质及其它微量元素有很好的分解消化吸收作用。黄酮的特性包括利肺、润肺、养肺，提升人体免疫力等。黄酮能被人体迅速吸收，能通过血脑屏障，能时入脂肪组织，进而体现出如下功能：帮助人体防御辐射、消除疲劳、保护血管、防动脉硬化、扩张毛细血管、疏通微循环、活化大脑及其他脏器细胞的功能、抗脂肪氧化、抗衰老。

红芪是豆科植物多序岩黄芪Hedysarum polybotrys Hand. -Mazz.的干燥根，具有补气升阳、固表止汗、利水消肿的功效，临床主要用于治疗中气下陷、表虚自汗、气虚水肿及气虚血衰等[1]。现代药学研究表明红芪主要活性成分为多糖、黄酮和皂苷等[2-3]，具有抗氧化、调节免疫力、抗肿瘤、降血糖等药理作用，目前研究多集中在红芪多糖类、红芪黄酮类成分，而药理作用研究较少，但红芪黄酮类成分是除红芪多糖外主要的活性成分之一，具有抗肿瘤、抗氧化、改善肺纤维化、抗骨质疏松、降低骨骼肌损伤等药理作用[4]，且在抗氧化和改善肺纤维化方面的疗效优于黄芪。基于此，本文通过总结红芪黄酮类成分的药理作用及机制，为红芪黄酮类成分的进一步研究及临床应用提供理论依据。 1 抗氧化 自由基过氧化对于人体健康有直接或间接的影响，通过提高机体抗氧化能力，为人体氧化损伤疾病提供理论依据。研究表明黄酮类化合物能抑制脂质过氧化，有效清除自由基，具有良好的抗氧化作用[5]。赵沙沙等[6]研究表明，与其他红芪提取溶剂相比，95%乙醇提取物抗氧化活性最高，其中芒柄花素、美迪紫檀素、芒柄花苷单体的含量在95%乙醇提取物中达到2.2 mg/g，且芒柄花苷含量与提取物抗氧化活性存在一定量效关系。杨秀娟等[7]通过优化红芪总黄酮提取工艺，表明红芪黄酮类化合物具有较强的体外抗氧化活性。袁菊丽等[8]用正交法优化红芪总黄酮超声提取工艺，以其抗氧化活性为指标，发现红芪总黄酮溶液1～10 mg/mL具有良好的体外抗氧化能力，且呈一定的量效关系。 除具有良好的体外抗氧化活性，红芪黄酮类化合物还具有显著的体内抗氧化活性。红芪总黄酮对H2O2诱导的脐静脉内皮细胞损伤具有保护作用，且各剂量均可显著抑制丙二醛损伤，降低乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase，LDH）释放及细胞内丙二醛含量，提高LDH和超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）活性，其作用机制可能与清除氧自由基，提高脐静脉内皮细胞的抗氧化能力有关[9]。王伟等[10]研究表明红芪黄酮荭草素5 μmol/L通过促进核因子E2相关因子2（nuclear factor E2 related factor 2，Nrf2）的表达与移位，激活Nrf2发挥较好的抗氧化作用，使细胞中血红素氧合酶-1（heme oxygenase-1，HO-1）表达量处于较低水平，保持较低的氧化应激水平，进而达到抗氧化作用。综上，红芪黄酮类成分具有显著的体内、外抗氧化活性，其作用机制可能与调控LDH、SOD和丙二醛等多种酶的含量及抗氧化相关因子的表达有关。具体机制见图1。 图片 2 改善肺纤维化 肺纤维化是一类极为复杂难治的呼吸系统疾病，其最重要的病理特点是成纤维细胞增殖、大量细胞外基质聚集、肺组织结构破坏。目前，临床上常用的改善肺纤维化药物多为激素类药物，这些药物不良反应多，价格昂贵[11-13]。研究表明，中医药在防治肺纤维化方面具有独特的优势，单味中药及其有效成分或中药复方可靶向调节相关信号通路而改善肺纤维化[14]。大量研究表明红芪黄酮类化合物具有显著的改善肺纤维化作用，并且红芪黄酮类化合物改善肺纤维化作用优于黄芪黄酮，其作用机制为减少细胞外基质沉积和抑制胶原纤维增生等。 2.1 减少细胞外基质沉积 张毅等[15]通过观察红芪总黄酮对博莱霉素5 mg/kg诱导的肺间质纤维化模型大鼠转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1，TGF-β1）蛋白表达及肺组织超微结构的影响，发现红芪总黄酮7.5、15.0、22.5 mg/kg均能抑制TGF-β1表达，显著改善肺纤维化大鼠的病理损伤、减少细胞外基质沉积，且以红芪总黄酮高剂量组效果作用最为明显。李娟等[16]通过观察红芪黄酮对博莱霉素5 mg/kg诱导肺间质纤维化模型大鼠肺功能的影响，表明红芪总黄酮7.5、15.0、30.0 mg/kg均能改善肺纤维化核型大鼠肺功能，且对肺的动态顺应性指标、容量指标及体积流量指标等均有不同程度的改善作用，提示红芪黄酮具有一定的抗肺纤维化的作用，其机制仍有待进一步深入探讨。 2.2 抑制胶原纤维增生 蔺兴遥等[17]通过研究红芪总黄酮37.41 mg/kg给药及气溶胶（气溶胶浓度3.5～4.0 mg/m3，给药时间40 min）给药方式对肺纤维化的影响，发现各红芪总黄酮给药组都具有改善肺纤维化的作用，肺组织中透明质酸及层黏连蛋白（laminin，LN）的含量显著下降，且气溶胶给药组疗效更为明显。并且比较了黄芪总黄酮15 mg/kg和红芪总黄酮15 mg/kg对肺间质纤维化疾病大鼠模型肺功能的影响，发现二者均具有抑制大鼠肺间质纤维化的作用，且红芪总黄酮疗效优于黄芪总黄酮[18]。苏韫等[19]在红芪有效部位对肺间质纤维化模型大鼠肺组织胶原面积、透明质酸及LN的影响研究中发现，红芪总黄酮7.5、15.0、22.5 mg/kg均能通过减轻肺泡炎症，抑制胶原纤维增生、沉积，进而降低肺组织中透明质酸及LN的含量，来改善肺纤维化，其中红芪总黄酮疗效优于红芪多糖和红芪皂苷。王艺等[20]研究发现红芪总黄酮7.5、15.0、30.0 mg/kg均能通过降低肺组织中透明质酸、LN、羟脯氨酸（hydroxyproline，HYP）水平抵抗博来霉素诱导的大鼠肺间质纤维化，均可不同程度的改善大鼠肺间质纤维化。舍雅莉等[21]和李娟等[22]研究发现红芪总黄酮7.5、15.0、22.5 mg/kg可通过抑制肺纤维化大鼠微血管新生相关促进因子来改善肺纤维化，且呈剂量相关性。苏韫等[23]采用气管内滴注博莱霉素法建立肺纤维化模型，通过ig红芪总黄酮7.5、15.0、22.5 mg/kg 28 d，在第7、14、28天分3次采集标本并进行相关指标检测，结果发现红芪总黄酮可通过抑制基质金属蛋白酶2（matrix metalloproteinase 2，MMP2）及基质金属蛋白酶抑制剂-1（tissue inhibitor of metalloproteinase-1，TIMP-1）蛋白表达，使MMPs/TIMPs趋于平衡，来抑制肺纤维化进程。具体机制见图2。 图片 3 抗肿瘤 癌症是我国最难治愈的疾病之一，随着科技的不断发展，治疗癌症的手段也越来越多，但其治疗手段对人体的不良反应较大，而癌症又是一项治疗难度较大的疾病，故优化防治癌症的手段尤为重要。红芪异黄酮类是红芪的主要活性成分之一，且与红芪的生物特性息息相关[1]，其中毛蕊异黄酮、芒柄花素成分是红芪药材质量评价的重要指标性成分[24]，且对肝癌[25]、胃癌[26]、非小细胞肺癌[27]、宫颈癌[28]等均有治疗作用。研究表明，红芪黄酮类成分对胃癌、白血病、肺癌和前列腺癌等均有显著防治作用，其抗肿瘤的作用机制可能是通过抑制细胞生长增殖、诱导细胞凋亡和干扰细胞周期等。 3.1 抑制细胞增殖 红芪异黄酮类成分芒柄花素60 μmol/L通过在体外诱导细胞周期停滞，呈剂量相关性抑制前列腺癌细胞增殖，同时显著下调细胞周期蛋白D1（cyclin-dependent 1，cyclin D1）和细胞周期蛋白依赖激酶4（cyclin-dependent kinase 4，CDK4）的表达，对小鼠的肿瘤生长有明显的抑制作用[29]。王雅莉等[30-31]通过研究红芪总黄酮80 μg/mL对人慢性髓原白血病K562细胞增殖的影响，发现红芪总黄酮对K562细胞的生长具有显著的抑制作用，使K562细胞周期蛋白依靠性激酶抑制剂P21基因表达升高，增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen，PCNA）表达降低，从而发挥抗肿瘤作用。 3.2 诱导细胞凋亡 红芪异黄酮类成分毛蕊异黄酮50 μmol/L可通过降低胃癌细胞外信号调节激酶、上游核因子-κB（nuclear factor-κB，NF-κB）及信号转导和转录激活因子3（signal transducer and activator of transcription 3，STAT3）的表达，升高细胞色素C和B淋巴细胞瘤-2（B-cell lymphoma-2，Bcl-2）相关的细胞死亡激动剂、降低抗凋亡蛋白Bcl-2的表达，诱导细胞凋亡，达到抗胃癌的作用[32]。红芪异黄酮类成分芒柄花素25 μmol/L可通过激活半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（cystein-asparate protease，Caspase）级联的死亡受体介导外源性及依赖线粒体的内源性凋亡途径使咽鳞癌细胞凋亡进而发挥抗肿瘤作用[33]。Hu等[34]研究发现红芪异黄酮类成分芒柄花素50 mg/kg可能通过增加人骨肉瘤U2OS细胞Bcl-2相关X蛋白（Bcl-2 associated X protein，Bax）和凋亡蛋白酶活化因子-1（apoptotic protease activating factor-1，Apaf-1）的阳性细胞，同时，升高U2OS荷瘤小鼠的阳性细胞和Bax、Caspase-3和Apaf-1蛋白，下调雌激素受体α亚型（estrogen receptor alpha，ERα）、磷酸化蛋白激酶B（phosphorylated protein kinase B，p-Akt）阳性细胞和蛋白质水平，促进细胞凋亡，发挥抗肿瘤作用。 3.3 干扰细胞周期 邓婉蓉[35-36]通过研究红芪总黄酮80 μg/mL对人体白血病的影响，发现红芪总黄酮可通过调控c-fos基因表达，抑制白血病干细胞G0/G1期DNA合成，从而抑制白血病细胞的增殖，达到红芪总黄酮抗肿瘤作用，并且结果表明其抑制作用具有量效关系。红芪异黄酮类成分芒柄花素150 μmol/L可增加非小细胞肺癌细胞的p21蛋白表达，降低细胞周期调节蛋白如cyclin A和cyclin D1的表达，促进Caspase-3和促凋亡蛋白Bax的表达，降低抗凋亡蛋白Bcl-2表达，诱导G1期非小细胞肺癌细胞周期停滞和凋亡而成为肺癌治疗的潜在预防药物[37]。具体机制见图3。 图片 4 抗骨质疏松 随着人口老龄化的加重和生活水平的提升，我国骨质疏松发病率逐年上升。骨质疏松症是一种以骨量减少、骨质量下降和骨微结构退化为特征的全身性骨病，其成因是破骨细胞活性大于成骨细胞，导致骨吸收大于骨形成[38]。由于老年人的生理结构和各项生命指征呈下降趋势，故较易发病，严重影响其生活质量[39]。目前临床上用于治疗骨质疏松的药物不良反应较大[40]。而中药具有不良反应小、疗效确切等特点[41]，其中，植物活性成分已经被证明是预防骨质疏松新方法的潜在来源[42]，如多糖、黄酮等活性物质，这些活性物质通过调节骨特异性基质蛋白、转录因子、信号通路、靶点等发挥作用，通过自身特性治疗骨质疏松症[43]，可以最大程度的减少不良反应。目前关注度较高，患者易接受[44]。红芪黄酮类化合物对于多种原因诱导的骨质疏松均有显著防治作用，其机制可能是促进成骨细胞的增殖和分化，降低钙流失等，增大骨密度，维持骨平衡，增强骨质量来防治骨质疏松。 4.1 促进成骨细胞增殖、分化 方瑶瑶等[45-46]通过研究红芪多糖和黄酮类成分对大鼠骨髓间充质干细胞（rat bone marrow stromal cells，rBMSCs）和大鼠颅骨成骨细胞（rat calvarial osteoblasts，ROBs）成骨分化的影响，发现红芪异黄酮类成分毛蕊异黄酮通过激活胰岛素样生长因子-1受体（insulin-like growth factor-1 receptor，IGF-1R）/磷脂酰肌醇3-激酶（phosphoinositide 3-kinase，PI3K）/Akt信号通路发挥作用，其中毛蕊异黄酮1 μmol/L可显著促进rBMSCs和ROBs细胞的成骨分化作用，并且优于红芪多糖。另外在5种黄酮类化合物毛蕊异黄酮、芒柄花素、芒柄花苷、异甘草素和美迪紫檀素（0.001、0.010、0.100、1.000、10.000 μmol/L）对rBMSCs和ROBs细胞活性和成骨相关因子的变化研究中发现，5种不同黄酮类化合物均能促进rBMSCs和ROBs的增殖，提高碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）活性，增加Ca含量，增加钙化结节面积和数量，达到抗骨质疏松的作用。陈宇等[47]在红芪活性组分抗骨质疏松作用的谱效关系研究中发现，红芪异黄酮类成分毛蕊异黄酮10 μmol/L可以提高成骨细胞ALP活性，促进成骨细胞分化，进而发挥抗骨质疏松作用。吴虹[48]通过观察红芪异黄酮类成分毛蕊异黄酮15、30 mg/kg对去卵巢大鼠骨质疏松的防治作用，发现毛蕊异黄酮对去卵巢大鼠具有显著的骨保护效应，并存在一定的剂量效应关系，其作用弱于雌激素。槲皮素是一种植物类黄酮，也是红芪中的黄酮醇类成分，具有雌激素作用，Pang等[49]和Li等[50]用槲皮素2.5 μmol/L处理骨髓间充质干细胞，研究发现槲皮素可以增强ALP活性，促进细胞外基质的产生和矿化，并且上调Runt相关转录因子2（Runt-relatedtranscription factor 2，RUNX2）、成骨细胞特异性转录因子和骨桥蛋白等骨母细胞特异性标记基因的表达。此外，槲皮素还可通过雌激素受体调节骨母细胞特异性基因的表达，并且激活骨形态发生蛋白（bone morphogenetic protein，BMP）/Smad信号通路。表明槲皮素可以通过雌激素受体介导的途径刺激BMSC分化为成骨细胞，并且BMP/Smad信号通路在其中具有重要作用。Zhang等[51]发现槲皮素5 μmol/L可通过抑制微小RNA-206（microRNA-206，miR-206）通路的表达和上调连接蛋白43的表达，从而促进骨髓间充质干细胞增殖和成骨分化。 4.2 减少骨流失 袁真等[52]发现山柰酚、芦丁、槲皮素（浓度分别为50 mg/kg）3种活性成分均可以降低尿液中的Ca、P丢失，改善骨微结构并增加骨密度，且山柰酚效果最好。Kim等[53]研究表明高良姜素、淫羊藿苷、山柰酚和槲皮素等（0～50 μmol/L）黄酮类化合物可以增加人SV40转染成骨细胞的增殖，其中高良姜素、淫羊藿苷、山柰酚、槲皮素可减少唑来膦酸钠诱导的细胞损伤，尤其高良姜和山柰酚对唑来膦酸具有显著的细胞保护作用。另有研究发现槲皮素100 mg/kg可改善维甲酸诱导的骨质量系数、骨长、骨径、骨灰分含量和钙磷含量的降低，降低维甲酸诱导的氧化应激和骨质流失[54]。见图4。 图片 5 降低骨骼肌损伤 骨骼肌对于维持人体姿态和运动是必不可少的，但同时骨骼肌损伤也极为常见[55-56]。目前多用非甾体类抗炎药减轻肌肉损伤后的疼痛及炎症反应以恢复肌肉功能，治疗方案较为单一[57]。红芪黄酮类降低骨骼肌损伤的作用机制可能是减缓运动后大鼠骨骼肌中丙二醛、LDH和一氧化氮含量积累，有效清除氧自由基，提高SOD活性及抑制骨骼肌细胞凋亡。 5.1 提高相关酶活性 袁书立[58]研究发现红芪黄酮荭草苷40 mg/kg可有效减轻运动性骨骼肌损伤大鼠的骨骼肌炎症和氧化应激，与空白组相比，实验组的骨骼肌p38丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinases，MAPK）的磷酸化水平降低（P＜0.05），此外，荭草苷可促进运动性骨骼肌损伤大鼠骨骼肌Nrf2的转录和转位，抑制Kelch样ECH关联蛋白1（Kelch-like ECH-associated protein 1，Keap1）的转录和表达。其机制可能与p38 MAPK通路和Nrf2/ Keap1通路有关。与肌肉损伤组相比，槲皮素/β-环糊精凝胶可降低脂质过氧化、SOD和过氧化氢酶活性，降低骨骼肌炎症和氧化应激，从而达到降低骨骼肌损伤的作用[59]。红芪总黄酮0.2 mg/kg可延缓离心运动后大鼠骨骼肌活性氧、丙二醛及LDH含量的积累并提高SOD活性，表明红芪总黄酮对高强度运动后氧化应激所导致的骨骼肌损伤有明显的防治作用[60]。段云燕等[61]发现红芪总黄酮0.2 mg/kg对于离心运动后大鼠骨骼肌中一氧化氮含量的下降有一定减缓作用，推测红芪总黄酮可有效清除氧自由基、下调丙二醛及LDH含量、提高SOD活性进而达到降低骨骼肌损伤的作用。 5.2 抑制细胞凋亡 杨雅丽等[62]等研究表明一次离心力竭运动可激活大鼠骨骼肌细胞NF-κB信号分子，启动细胞的凋亡程序，而红芪总黄酮0.2 mg/kg可降低高强度运动引发的应激反应，从而延缓离心运动后骨骼肌疲劳和损伤的发生，其机制可能与降低骨骼肌组织NF-κB、Bcl-2/Bax、细胞色素C、Caspase-3表达水平、抑制骨骼肌细胞凋亡有关，见图5。 图片 6 抗动脉粥样硬化 动脉粥样硬化作为引起冠心病、缺血性脑血管病等疾病的常见病因，严重威胁人们的身体健康与生命安全，且近年来发病呈逐渐增高[63]。流行病学研究发现黄酮类化合物可通过抗氧化、防止血栓形成、改善内皮功能、调节血脂和调节糖代谢等作用发挥抗动脉粥样硬化作用[64-65]。 6.1 改善内皮功能 红芪黄酮类化合物二氢黄酮柚皮苷100 mol/L可以通过调节蛋白激酶Hippo-YAP蛋白下调人脐静脉内皮中促炎因子的表达恢复内皮屏障细胞的完整性，发挥抗动脉粥样硬化作用[66]。 6.2 调节相关酶活性 类黄酮通过调节NF-κB途径来调节抑制因子κB激酶或在NF-κB与脱氧核糖核酸结合的水平上发挥抗炎作用[67]，如槲皮素100 μmol/L可通过p38激酶抑制作用影响NF-κB活化，并抑制小鼠的动脉粥样硬化[68]。 6.3 防止血栓形成 有研究证明黄酮类化合物槲皮素2 mmol/L、芦丁能够阻断血小板膜糖蛋白GPIIb/IIIa受体，抑制血小板活化及钙离子载体的促聚集作用，表明黄酮类化合物相关的抗血小板活性[69]。最新研究也发现槲皮素1.5 mmol/L对环氧合酶的抑制率高达90%，主要通过改变花生四烯酸的代谢来干扰血小板聚集[70]。通过不同细胞模型对柑橘黄酮类化合物进行抗动脉粥样硬化作用评估，结果发现在人肝癌细胞中柚皮素75 μmol/L可抑制胆固醇酯转移蛋白和微粒体甘油三酯转移蛋白，从而限制胆固醇酯和三酰甘油在脂蛋白形成中的可用性[71-72]。 7 防治肝纤维化 肝脏纤维化是一种损伤愈合反应，各种原因造成的肝损伤均可以导致肝纤维化的启动，肝损伤造成的肝细胞坏死、凋亡、炎症细胞浸润和细胞外基质的改变会刺激肝纤维化的形成。肝纤维化进一步会发展为肝硬化甚至肝癌，严重影响人类的健康[73]，由于肝纤维化早期是可逆的，而肝硬化是不可逆的，抑制或逆转肝纤维化是治疗慢性肝病的重要手段之一，因此肝纤维化的防治是国内外研究的热点问题。黄酮类化合物广泛存在于多种植物中，临床应用的多种治疗肝纤维化中药均含有黄酮类成分[74]。红芪黄酮类化合物通过抑制肝纤维化细胞的增殖、活化和转移及胶原纤维增生等来防止肝纤维化。 7.1 抑制细胞增殖、活化和迁移 张蒙蒙[75]研究表明毛蕊异黄酮80 mg/kg可显著抑制四氯化碳诱导的小鼠肝纤维化，其机制可能是毛蕊异黄酮通过提高Janus激酶2（Janus kinase 2，JAK2）和STAT3蛋白表达，激活JAK2/STAT3通路。邓坦[76]研究结果表明，毛蕊异黄酮200 μmol/L对TGF-β1诱导的肝纤维化细胞增殖、活化和迁移具有抑制作用，该作用可能与毛蕊异黄酮结合并下调细胞内雌激素受体β5（estrogen receptor β5，ERβ5）有关。另外槲皮素8～128 μmol/L在0～72 h对肝星状细胞的增殖有明显的抑制作用，并促进其凋亡，可能与调节Wnt/β-catenin信号通路，而达到抗肝纤维化的作用[77]。 7.2 抑制胶原纤维增生 槲皮素15 mg/kg可通过降低β-连环蛋白（β-catenin）和Wnt蛋白表达量，抑制Wnt/β-catenin信号通路，阻止肝纤维化的进展且具有肝保护作用[78]。此外槲皮素50 mg/kg还可通过降低神经源性基因Notch同源蛋白1（neurogenic locus notch homolog protein 1，Notch1）表达来影响Notch1通路，进而抑制M1极化，达到抗炎、抗肝纤维化的作用[79]，柚皮苷15、30 mg/kg均可通过降低丙氨酸氨基转移酶（alanine aminotransferase，ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（aspartate aminotransferase，AST）和HYP含量，抑制胶原增生进而抗肝纤维化显著降低四氯化碳诱导的肝脏系数升高，抑制胶原增生进而抗肝纤维化[80]。见图6。 图片 8 其他 红芪黄酮类化合物除具有抗氧化、改善肺纤维化、抗肿瘤、抗骨质疏松、降低骨骼肌损伤等药理作用外，还具有抗炎降血糖抑制肾纤维化等作用。姚艺等[81]研究发现芒柄花苷50 mg/kg可显著降低糖尿病肾病（diabeticnephropathy，DN）大鼠血清血尿素氮、血肌酐和血糖水平，同时，肾小球内炎症和纤维化程度也有不同程度的改善，说明芒柄花苷可明显改善糖尿病大鼠肾功能。其机制可能是通过腺苷酸活化蛋白激酶（adenosine monophosphate- activated protein kinase，AMPK）/沉默信息调节因子1（silent information regulator 1，SIRT1）/叉头盒蛋白O1（fork head box protein O1，FoxO1）促进DN自噬，减轻肾脏损伤。此外，芒柄花苷可显著减轻DN大鼠糖代谢异常和肾脏损害，抑制肾纤维化，其机制可能与芒柄花苷激活AMPK和SIRT1表达，抑制FoxO1表达，改善肾脏氧化应激状况，抑制自噬，从而缓解DN的发生发展过程。 9 结语及展望 红芪作为甘肃的道地药材，其品质优良，产量宏丰，并有独特的采收加工方式，且已形成地理标志产物——米仓红芪。红芪主要含有多糖、黄酮、皂苷等多种活性成分，具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤、免疫调节多种药理作用。红芪黄酮类成分是除红芪多糖外主要的活性成分之一。黄酮类化合物广泛存在于自然界的植物中，是植物的次生代谢产物，中药中也广泛存在，并且种类繁多，每个种类又有不同的药理作用。中药红芪中含有多种黄酮类化合物，如异黄酮类成分毛蕊异黄酮和芒柄花素、黄酮醇槲皮素、二氢黄酮柚皮苷等，具有抗氧化、抗肿瘤、改善肺纤维等药理作用，其中毛蕊异黄酮、芒柄花素成分是红芪药材质量评价的重要指标性成分，且对肝癌、胃癌、非小细胞肺癌、宫颈癌等均有显著治疗作用。 红芪最早列为黄芪项下，后因发展需要将红芪单独列出。红芪与黄芪具有相似的活性成分及功效，但多项研究表明，红芪黄酮类成分在抗氧化和改善肺纤维方面疗效优于黄芪，目前对于红芪的研究多集中在化学成分提取分离等基础研究上，对于红芪黄酮类成分药理作用及作用机制的研究较少。红芪作为具有升阳举陷、固表止汗、利水消肿等多重功效的中药，其在临床应用及新药研发上缺乏具体研究，故应加强红芪黄酮类活性成分的研究，尤其红芪异黄酮类成分毛蕊异黄酮和芒柄花素在抗肿瘤方面的研究及红芪黄酮类成分在抗氧化和改善肺纤维化方面的优势研究。中药材中化学成分的种类和含量是表征药材质量的重要标志，也是作为临床用药的合理选择，红芪在中医临床及中西药合用方面的研究是当前乃至未来持续关注的前沿领域[82]。因此，应加强红芪药材中黄酮类单体成分药理作用及临床应用的研究，为红芪药材的大规模种植及临床用药提供理论依据。

植物黄酮类化合物的分离分析方法研究

小弟在做某植物的总黄酮、总多酚类化合物的成分分析，由于实验条件限制，仅能用到的是HPLC来做成分分析。通过知网和web of science中直接搜索我的植物的黄酮类化合物的成分分析，没有能直接照搬的HPLC条件，有用UHPLC-TOF-MS做的，那应该怎么搜索HPLC条件呢？（如洗脱液、温度、流速等条件）。能否替换植物，直接在知网中搜索关键词“”黄酮类化合物成分分析-HPLC（高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]法）“”？求大神指点迷津。

黄酮总量检测和单个黄酮分析。黄酮总量分析依据到底是依据芦丁还是其他黄酮参加显色反应，测试波长410还是中510nm。而单个黄酮测试，必须用响应黄酮作标曲还是其他也可以参考。谢谢！

我的样品是枸杞，测了四个品种枸杞的总酚和总黄酮含量，三个品种总酚含量高于总黄酮（但是差的不多，大概只高1mg），另外一个品种测了几次，抽了一天同时测定，数据就是总黄酮比总酚高！！！ 但是总黄酮是总酚的一种，按理说应该总酚比较高，不知道为什么会有这种结果？ 黄酮标品是芦丁，总酚是没食子酸 还有就是，我的样品直接用80%乙醇提取就开始测定，没有进行脱脂脱色等处理，因为也只是粗略测一下进行比较，会不会是因为没有脱色导致的？但是总黄酮含量高的那个品种没有太大的颜色，反而另外三种有颜色，如果不脱色影响会很大吗？不想脱色......没有试剂没有设备

实验原理黄酮类化合物是植物的重要次生代谢产物，也是一些保健品和中药材的有效成分之一。黄酮类化合物的定量方法常用的有HPLC法和分光光度法，在实际生产和科研过程中，对于黄酮单体的定量常采用HPLC法，而对总黄酮的测定，考虑到方法的简便、快捷以及可行性，多采用在碱性介质中加铝盐显色的分光光度法。在碱性条件下黄酮类化合物与铝盐形成络合物、在500nm波长处有最大吸收峰。标准品选用芦丁。试剂和器材一、试剂芦丁标准品。5％NaNO2；10%A1(NO3)3；5％NaOH；70％乙醇。二、材料新鲜银杏叶。三、器材容量瓶10ml（×7），25ml（×1），100ml（×2）；吸管 0.5ml（×2），1ml（×2），2ml（×1），5ml（×1）；分光光度计。操作方法一、制作标准曲线精密称取芦丁标准品5mg，用70％乙醇溶解，定容于25mL容量瓶中，摇匀，得0．2mg／mL的标准溶液。精确吸取标准溶液0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2mL，分别置于10mL容量瓶中，加入 5％NaNO20.4mL，摇匀，放置6min；加入10%A1(NO3)3 0.4mL，摇匀，放置6min；加入5％NaOH4.0mL，再加水至刻度，摇匀，放置15min。以试剂空白作为参比溶液。用1cm比色皿，在500nm波长处测定吸光度，绘制标准曲线。二、总黄酮的提取把新鲜的银杏叶低温烘干，使水分小于8％，制成干粉。精确称取干粉1．0g，置于 100mL容量瓶中，加入70％乙醇30mL，浸泡24h。超声波提取30min，过滤，滤液用70％乙醇定容于100mL容量瓶中，得到黄酮提取液，待用。三、测定吸取黄酮提取液1.00mL, 置于10mL容量瓶中，加入5％NaNO30.4mL，摇匀，放置6min；加入10%A1(NO3)3 0.4mL，摇匀，放置6min；加入5％NaOH4.0mL，再加水至刻度，摇匀，放置15min。以试剂空白作为参比溶液。用1cm比色皿，在500nm波长处测定吸光度，由标准曲线法计算总黄酮含量。注意事项对于某些热敏成分的提取，采用超声波破碎法效果较为理想。由于此过程是一个物理过程，浸提过程中无化学反应，被浸提的生物活性物质在一定时间内保持不变。

采用回流提取的方法，并结合大孔树脂吸附分离，富集并浓缩得到总黄酮和总多糖，用分光光度法测定总黄酮和总多糖含量，通过大孔吸附树脂分别得到含量为105.2%的总多糖及含量为5.3%的总黄酮，则大枣中总黄酮含量为0.11％，总多糖含量为16.43％。运用大孔吸附树脂可以同步提取大枣中的总多糖和总黄酮，对总多糖提取率高，有利于大枣的综合利用，为其质量控制提供参考。

请问黄酮的标准溶液放置时间长了，里面的物质会发生变化吗？

艾草生长过程如何提高黄酮的含量(同一品种)？

用液相测黄酮进样6次，在class-vp工作站中如何求得平均值。

[color=#333333]甘草是一种药食同源的草本植物,广泛用于中药处方与食品工业中。现今使用的甘草主要为其根与根状茎,而地上部分却作为畜牧饲料或燃料低值化处理。目前关于甘草根及根状茎的成分及生理活性研究已相当充分,而对甘草地上部分却研究较少。本论文通过对比分析光果甘草（Glycyrrhiza glabra L.）叶与根中物质组成和生理活性,确定光果甘草叶的研究价值 通过色谱分离和光谱技术分离并鉴定了光果甘草叶中的黄酮并对其活性进行评价 优化了光果甘草叶黄酮的测定和提取方法,并通过大孔树脂对光果甘草叶黄酮进行富集研究 研究了光果甘草叶黄酮对猪肉及其制品储藏过程中油脂氧化和蛋白氧化的抑制作用,以期为甘草叶的高值利用提供理论指导。[/color]

我是用电动进样，可是谱图只检测到溶剂甲醇的峰而没有样品黄酮的峰。有人说黄酮带负电所以进样量少，那要怎么改善进样问题呢？请各位高手指点下。。。

请教以下物质应选取什么柱来制备？最好有英文名字黄酮，皂甙，多糖，生物碱

谁有黄酮纯化的资料，具体怎么做？在纯化黄酮的时候

黄芪净药材—毛蕊异黄酮葡萄糖苷梯度设置请教一下怎么设置的 为什么我的不出峰 有没有做过的 请教请教[img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/06/202106032032470096_8789_4180826_3.png[/img]

[color=#3e3e3e]异黄酮的功能与人体自然分泌的雌激素相似，能缓解更年期症状，大豆和豆制品是最佳来源，如豆粉、豆浆、豆豉、豆腐、豆皮等。[/color]

如题请问用芦丁对照品绘制标准曲线是否能用槲皮素或其他的黄酮对照品替代？由于实验室的芦丁标准品不见了，老师建议先用槲皮素替代，请问是否可行？

蜂胶标准存"漏洞" 一些行业虽然已有质量标准，但由于造假技术的不断更新，原来的标准已经不能作为判定产品合不合格的依据。曾遭曝光的"蜂胶造假"事件就是典型的例子。 在被曝光企业提供的原料蜂胶的检测报告上显示：提纯蜂胶的总黄酮含量完全符合国家标准。而事实上，造假者是在树胶里添加了芦丁、槲皮素等黄酮类物质，人为提高了总黄酮含量。前有三聚氰胺，现有蜂胶黄酮，不知道以后还有什么其他产品会曝光出来。产品标准究竟该如何订制？类似造假事件该如何处理？这些不但需要执法部门思考，也希望大家给相关部门支支招！！

[font=楷体_GB2312[size=4]]我看大部分文献是用显色反应,试剂是（亚硝酸钠，硝酸铝，氢氧化钠）第一个问题是他们与总黄酮含量关系怎样确定，及怎样的情况使显色剂过量？参比溶液一般是试剂空白（亚硝酸钠，硝酸铝，氢氧化钠）第二个问题是我觉得用乙醇，水，还是试剂空白，影响不大吧？因为在510出他们没有吸收第三个问题是参比溶液是试样空白更科学吧，既参比溶液为（样品+溶剂（水或乙醇溶液））？我看有一篇文献于村俞莎沈向红的《中草药总黄酮的提取和含量测定》他们选择的参比溶液是样品+氢氧化钠他们说考虑到某些中草药（如大黄等）遇碱也显红色，应从样品中扣除，故本法选择样品加碱作为样品空白扣除。我的疑问是在黄酮的定性上（加氢氧化钠，也是显红色），因为是在可见光驱，这样不就都扣除了，他们这样做行吗？请高人指点，谢谢[/size][/font]

我在测蜂胶黄酮时，色谱图上出了接近30几个峰，请问这些峰在相同的波长下都是黄酮类物质吗？是不是其他的物质？

请教各位有没有用保健食品检测方法做黄酮检测的。我最近做黄酮总是不太好，不知道是不是因为换了聚酰胺粉。请问有没有什么重要的注意事项，大家做回收率一般能做到多少？