磷酸化酶

生命活动与蛋白质的动态变化密切相关, 很多情况下某些蛋白质是通过各种翻译后修饰来完成或改变其功能。在数量众多的蛋白质翻译后修饰中，蛋白质磷酸化修饰无疑是最重要的一类，它是指通过蛋白激酶（Protein kinase，PK）介导的酶促反应把磷酸基团从一个化合物转移到另一个化合物上的过程（Figure 1所示），是生物体内存在的一种普遍的调节方式。现今发现的所有人类蛋白质中超过30%可被磷酸化修饰，这一修饰在细胞信号的传递过程中占有极其重要的地位，与生命活动的许多过程都密切相关，对此的研究已经成为蛋白质科学的热点之一。 http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2012/09/1346918444_small.jpg磷酸化多肽（主要指肽链中的酪氨酸、丝氨酸和苏氨酸残基的侧链羟基被磷酸化生成酸式磷酸酯的修饰多肽）是研究蛋白质磷酸化过程的必不可少的工具，它可作为磷酸酶模型底物，或作为可产生抗磷酸化蛋白抗体的抗原，也可以在确定磷酸化蛋白的物理参数时作为参考化合物等。因此磷酸化多肽的合成在过去的几年中吸引了相当大的兴趣，目前已确定了较为成熟的合成路线，使磷酸化多肽的合成趋于常规。目前磷酸化多肽的合成主要有两个策略：后磷酸化法（Global phosphorylation）和单体法（Building block approach），如Figure 2所示。前者是在多肽序列合成结束后再在固相载体上对丝氨酸、苏氨酸或酪氨酸的侧链羟基进行磷酸化，可以在同一次合成中同时得到带有和不带有磷酸化位点的多肽；而后者则将适当保护的磷酸化氨基酸直接引入到多肽序列中，操作较前者更为简单，现已成为磷酸化多肽合成的首选策略。在采用单体法构建磷酸化多肽时，目前广泛采用的原料为侧链单苄基保护的氨基酸：Fmoc-AA(PO(OBzl)OH)-OH (AA = Ser, Thr or Tyr)。这类保护的磷酸化位点由于侧链磷酸化基团的离子化而产生较大的位阻效应，并且磷酸化位点的引入往往能促进肽链二级结构的形成，故而磷酸化位点及其后的氨基酸的引入会比较困难。这些问题在合成含有多个磷酸化位点的多肽时将会变得尤为严重，往往会使最终产物的组成非常复杂，难以进行纯化，甚至直接导致合成的失败。http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2012/09/1346918477_small.jpg一般来讲，增加投料量和延长反应时间都能促使连接反应趋于完全，但增加投料量无疑会提高合成成本，对于较昂贵的带有保护的磷酸化氨基酸更是这样，而延长反应时间则可能增加其它副反应发生的风险，故而在合成磷酸化多肽时，需要对氨基酸投料量、反应方法以及反应时长等进行优化调整以期达到更理想、更经济的合成效果。我们有针对性地对磷酸化多肽合成条件进行了探索和调整，采用最终的优化条件成功合成了含有多达六个磷酸化丝氨酸残基的多肽：FAM-Ahx-X(pS)XX(pS)X(pS)X(pS)XX(pS)X(pS)-NH2（客户肽，详细序列未给出；其氨基端标记FAM以进行荧光检测），经过RP-HPLC纯化后最终纯品的纯度高达95%（见Figure 3）。http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2012/09/1346918493_small.jpg参考文献：1. P. Cohen, “The Role of Protein Phosphorylation in Neural and Hormonal Control of Cellular Activity”, Nature, 1982, 296 (5858): 613-620.2. From: http://en.wikipedia.org/wiki/Protein_kinase.3. L. A. Pinna, A. Donella-Deana, “Phosphorylated Synthetic Peptides as Tools for Studying Protein Phosphatases”, Biochim. Biophys. Acta., 1994, 1222 (3): 415-431.4. W. C. Chan, P. D. White, “Fmoc Solid Phase Peptide Synthesis-A Practical Approach” (2000), Oxford University Press.

磷酸化蛋白质及多肽相关研究的技术进展 摘要磷酸化修饰是一种重要的蛋白质化学修饰,对蛋白质功能的完成或改变起到重要作用。该领域的研究存在很多技术难点,对该领域研究形成了挑战。近年来相关技术有了很多突破,磷酸化研究也取得了很多新的成就。文章将从磷酸化蛋白的检出、磷酸化蛋白质和肽段的富集、生物质谱技术的改进以及磷酸化蛋白和多肽的定量与比较几个方面介绍该研究领域的技术进展。关键词磷酸化蛋白磷酸化肽生物质谱定量分析生命活动与蛋白质的动态变化密切 摘要 磷酸化修饰是一种重要的蛋白质化学修饰, 对蛋白质功能的完成或改变起到重要作用。该领域的研究存在很多技术难点, 对该领域研究形成了挑战。近年来相关技术有了很多突破, 磷酸化研究也取得了很多新的成就。文章将从磷酸化蛋白的检出、磷酸化蛋白质和肽段的富集、生物质谱技术的改进以及磷酸化蛋白和多肽的定量与比较几个方面介绍该研究领域的技术进展。 关键词 磷酸化蛋白 磷酸化肽 生物质谱 定量分析

[font=宋体]磷酸化抗体是一种特殊的抗体，能够识别并结合到已经被磷酸化的蛋白质。磷酸化是一种重要的蛋白质修饰方式，通过将磷酸基团结合到特定的氨基酸残基上，可以改变蛋白质的结构和功能。在许多生物学过程中，磷酸化都扮演着重要的角色，因此磷酸化抗体成为了研究生物学和生物化学的重要工具。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]蛋白质磷酸化是指蛋白在激酶作用下在特定氨基酸位点（最常见的是丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸残基）发生磷酸化的过程。蛋白磷酸化是极其重要的翻译后修饰，其动态调控是信号转导中不可或缺的一环，调控着细胞生长、分化、代谢、凋亡等等过程。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]磷酸化抗体主要是针对磷酸化位点制备的，可以特异性识别磷酸化氨基酸位点，对磷酸化蛋白进行定性、定量分析，检测蛋白受刺激后磷酸化水平变化情况。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州可以为客户提供一系列具有高特异性（经内源性、磷酸化特异性等多方面验证）、高灵敏度（[/font][font=Calibri]1:200000[/font][font=宋体]稀释度）特点的磷酸化抗体，满足[/font][font=Calibri]WB[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IHC[/font][font=宋体]等应用。同时我们还可以为客户提供定制化的磷酸化抗体定制服务。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]义翘神州磷酸化抗体服务优势：[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]①专业高效的多肽设计软件及高效偶联方法，保证多肽免疫成功率[/font][font=Calibri]95%[/font][font=宋体]以上。[/font][/font][font=宋体]②多种纯化策略，正负筛选平台，确保得到高特异识别指定磷酸化位点的抗体。[/font][font=宋体]③竞争性的价格[/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供多种生物的制备服务，包括磷酸化兔多克隆抗体制备服务、磷酸化鼠单克隆抗体制备服务、磷酸化兔单克隆抗体制备服务[/font][font=宋体]……详情可以关注[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/phospho-specific-antibody-service[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]总之，义翘神州[url=https://cn.sinobiological.com/services/phospho-specific-antibody-service][b]磷酸化抗体定制服务[/b][/url]能够满足您的个性化需求，帮助您在研究领域获得更多的突破。我们致力于为您提供高质量、高效率的抗体定制服务，助力您的科研事业更上一层楼。[/font]

请问从sigma购买货号为C6780 的α-casein（α-酪蛋白）中，磷酸化的比例是多少？希望大家可以提供帮助，谢谢

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合肥国肽生物科技有限公司（简称：国肽生物TM）成立于2014年，是一家专业从事多肽产品的研发、生产和销售以及多肽技术转让的高新技术企业。BP公司成立之初，便成功收购了国内几家多肽、抗体公司，是目前国内的专业多肽合成、抗体制备、蛋白表达的规模型生产企业。国肽生物专长于荧光标记肽、同位素标记肽、人工胰岛素、药物肽、化妆品肽、长肽困难肽等产品的合成与研发，致力于学术水平的科研提升，搭建学术交流平台，促进前沿、专业的学术知识推广，推动多肽在生物医学材料等领域的研究与应用。公司产品广泛应用于药物研发，抗体的制备（包括单抗与双抗），荧光分子探针的构建以及细胞透膜研究、活体成像、新型材料研发和质谱分析等研究领域国肽生物按照客户定制要求供应高品质普通多肽。我们拥有成熟的多肽合成纯化方法，利用SPPS方法和液相合成方法为客户提供高品质多肽。我们的服务特点是:1. 纯度：我们提供粗品肽和纯度纯度为70%，75%，80%,85%,90%,95%,98%,99%的纯品多肽。2.脱盐和转盐：根据客户要求，我们可以对多肽进行脱TFA盐处理，也可以转为醋酸盐。3.交货期限：30个氨基酸之内，一般2-3周，最快1-2周。4.质量控制：每条多肽都免费提供合格的HPLC，MS和COA文件。5.售后服务：1-2周内可以提出异议，我们免费复测，不合格免费退货，1-3个月内使用不合格可以免费提供复测，样品免费保存3个月。国肽生物根据客户要求，供应各种修饰型多肽。1.磷酸化的Ser、Tyr和Thr修饰的多肽：我们提供单磷酸化和多磷酸化多肽服务，目前我们已经能够提供四个磷酸化位点修饰的多肽。2.5(6)-FAM，FITC，CY5，RhodamineB，PNA，EDNAS/dabcyl等荧光标记修饰的多肽：荧光标记修饰多肽技术是我们国肽生物的代表性多肽合成技术，我们的这项技术已经相当成熟。3.生物素Biotin，Lys(Biotin)修饰的多肽：生物素是维生素B2的组成部分，Biotin，Lys(Biotin)修饰的多肽也是客户经常定制的多肽。我们提供生物素修饰的多肽已经有将近100%的成功率。4.含有一对或多对二硫键修饰的多肽：二硫键在蛋白质的结构稳定中起到重要作用，目前我们已经能够为客户提供四对二硫键修饰的多肽。5.含有同位素C13，N15修饰的多肽：同位素标记的多肽主要应用于医学和生物学领域，通常价格较高，为了满足客户需要，我们接受微克级的同位素多肽定制。6.含有特殊氨基酸修饰的多肽：例如，D型氨基酸，氨基酸衍生物，脂肪族羧酸等等，都在我们接受的定制范围内。国肽生物提供150个氨基酸以内的长肽合成服务。多肽合成过程中，肽链过长时，经常会出现缺残基，氨基酸缩合困难等情况，基于这些现象，我们开发了三种有效提高反应成功率的方案：1. 微波合成法：对于合成过程中出现的一些难以缩合的氨基酸，我们采用微波法进行合成，该方法效果显著，并且大大缩短了反应时间。2. 片段合成法：当某些多肽用常规合成方法合成困难，我们也会采用将多肽中某一段的某几个氨基酸缩合之后作为一个整体缩合到肽链上去，这种方法也能够解决许多合成中存在的问题。3.酰肼合成法：酰肼法合成多肽的方法是将固相合成的 N末端Cys 多肽和 C末端多肽酰肼之间的化学选择性反应形成酰胺键而实现多肽的连接，该方法根据肽链中Cys的位置，将整条肽链分成多条序列分别合成，最终经过液相缩合反应得到目标肽，显著地提高了最终产物纯度，广泛适用于含有Cys的长链多肽的合成。国肽生物拥有成熟的长肽合成工艺，能够根据客户定制的多肽序列，快速有效地设计合成方案并迅速开始合成，更快更好的为客户提供所需的服务是我们不变的坚持。详情请咨询合肥国肽生物www.bankpeptide.com

1. 糖除了供能外，还有何功用？ 糖类不只是能量的来源，它也是组织细胞的重要组成成分，如，核酸，蛋白聚糖，糖蛋白，糖脂等。2. 葡萄糖是如何在缺氧条件下转变为乳酸？有什么意义？ 葡萄糖在糖酵解途径中产生的还原当量(NADH+H+)要重新氧化为NAD+，酵解才能继续进行。因为细胞中NAD+含量甚微。因此，缺氧条件下，丙酮酸可以作为氢受体，接受氢后转变为乳酸从而再生NAD+。这样以来，糖酵解才可以继续进行下去。在剧烈运动中，肌肉供氧不足，酵解作用是重要的产能手段，而积累在肌肉中的乳酸可由血液运至肝中变为葡萄糖。无氧酵解虽然仅利用葡萄糖所储存能量的一小部分。但这种释能方式很迅速，对肌肉收缩很重要，此外，像视网膜，红细胞及脑等细胞组织，即使在有氧情况下也要产生一些乳酸，其中红细胞因无线粒体则更依赖于酵解供能。3. 试述丙酮酸脱氢酶复合体的组成和催化作用？受什么因素调节？ P129丙酮酸脱氢酶复合体由3个不同的酶组成（丙酮酸脱氢酶、二氢硫辛酰胺转乙酰酶、二氢硫辛酰胺脱氢酶）。有TPP，FAD，硫辛酸和NAD+和CoA参加。 这个酶催化的是不可逆反应。也是调节酶，受别位效应物和化学修饰调控。4. TAC中有几个调节酶？他们分别受什么物质调节？他们催化哪些反应？TAC中有四个调节酶，丙酮酸脱氢酶复合体（不属于TAC中的，是丙酮酸向乙酰CoA转化的一个步骤），柠檬酸合酶，异柠檬酸脱氢酶和α酮戊二酸脱氢酶复合体是关键的调节酶。 丙酮酸脱氢酶复合体(催化丙酮酸到乙酰CoA的转化)受其催化产物ATP，乙酰CoA和NADH，脂肪酸的有力抑制； 受AMP，NAD+，CoA，Ca2+的激活。柠檬酸合酶(催化乙酰CoA到柠檬酸的转化)： 受NADH， 琥珀酰CoA，柠檬酸和ATP的抑制， 受ADP激活。异柠檬酸脱氢酶(催化异柠檬酸到α酮戊二酸的转化)： 受ATP，NADH抑制，受Ca2+和ADP激活。 α酮戊二酸(催化α酮戊二酸向琥珀酰CoA的转化)： 受琥珀酰CoA， NADH的抑制； 受Ca2+的激活。5. 何谓磷酸戊糖途径？如何反应？有何生理意义？ 葡萄糖的主要代谢途径是糖酵解，还有其他的代谢方式，例如磷酸戊糖途径，这途径产生磷酸戊糖和NADPH。6-磷酸葡萄糖+NADP+ ====6磷酸葡萄糖酸内酯+NADPH+H+6-磷酸葡萄糖酸内酯+H2O ====6-磷酸葡萄糖酸6-磷酸葡萄糖酸+NADP+ ====5-磷酸核酮糖+CO2+NADPH+H+5-磷酸核酮糖 ----5-磷酸核糖在一些组织中，磷酸戊糖途径就止于此处，总的结果是：6-磷酸葡萄糖+2 NADP++H2O ====5-磷酸核糖 +CO2+2 NADPH+ 2H+生理意义：戊糖途径产生的磷酸戊糖核、NADPH都可供核酸和其它物质的合成。6. 试述肝如何合成糖原，又如何分解糖原？受什么因素调节？糖原是动物储存糖的形式，肝脏和肌肉是储存糖原的主要地方，肝储存糖原主要是用于维持血糖浓度，供应全身利用，而肌糖原是供予肌肉本身产生ATP作收缩用。 糖原的分解：糖原+ Pi2- ====1-磷酸葡萄糖 + 糖原(降解了一个G) 糖原磷酸化酶催化α糖苷键的磷酸解。1-磷酸葡萄糖====6-磷酸葡萄糖6-磷酸葡萄糖+H2O====葡萄糖+Pi2-糖原的合成：葡萄糖+ATP====6-磷酸葡萄糖+ADP6-磷酸葡萄糖====1-磷酸葡萄糖1-磷酸葡萄糖+ UTP====UDP-G + PPiUDP-G+ 葡萄糖n====(葡萄糖)n+1 + UDP分支链的形成：当糖原合酶以α1====4糖苷键延伸直到长度达11个葡萄糖基后，分支酶可将约7个葡萄糖残基的一段链转移到邻近糖链上以α1====6糖苷键连接。糖原的合成合代谢的调节：糖原分解代谢途径的糖原磷酸化酶和糖原合成途径中的糖原合酶都是催化不平衡的反应。这两个酶是各自代谢途径的调节酶。1，糖原磷酸化酶 受别构效应物和共价修饰调节。2，糖原合酶 别构调节和共价修饰调节。cAMP（由腺苷酸环化酶催化ATP而来）是调节糖原磷酸化酶和糖原合酶的重要细胞内信号。细胞内cAMP的增高通过两种不同的机制激活糖原磷酸化酶，也同样通过这两种机理抑制糖原合酶。

蛋白质分子量肌球蛋白甲状腺球蛋白β-半乳糖苷酶副肌球蛋白磷酸化酶a血清白蛋白L-氨基酸氧化酶地氧化氢酶丙酮酸激活酶谷氨酸脱氢酶亮氨酸氨肽酶γ-球蛋白，H链延胡索酸酶（反丁烯二酸酶）卵白蛋白醇脱氢酶（肝）烯醇酶醛缩酶肌酸激酶胃蛋白酶原D-氨基酸氧化酶醇脱氢酶（酵母）甘油醛磷酸脱氢酶原肌球蛋白乳酸脱氢酶胃蛋白酶转磷酸核糖基酶天冬氨酸氨甲酰转移酶，C链羧肽酶 A碳酸酐酶枯草杆菌蛋白酶γ-球蛋白，L链γ-blobulin,L chain糜蛋白酶原（胰凝乳蛋白酶原）木瓜蛋白酶（羧甲基）β-乳球蛋白[font=Tim

[b]什么是磷酸化蛋白质[/b]蛋白质磷酸化是指在激酶催化作用下把ATP或者GTP的磷酸基团（P04）转移到不同种类的氨基酸上（主要包括丝氨酸S、苏氨酸T、酪氨酸Y），从而使蛋白质发生翻译后修饰的过程。该修饰是蛋白质翻译后修饰（PTM）中最为重要的形式，具有显著的生物学功能，细胞增殖和凋亡，良性发育，信号转导，新陈代谢，肿瘤发生等过程都有磷酸化蛋白质的插足，研究磷酸化蛋白质对探究生物学病变机理有着非常重要的意义。[b]富集磷酸化蛋白质重要性[/b]磷酸化蛋白质具有低丰度和高动态性的特点，因此对磷酸化蛋白质组学研究首先需要对磷酸化蛋白样品进行富集，降低样品复杂程度和提高磷酸化位点鉴定数目。固相金属离子亲和色谱法（IMAC）是磷酸化蛋白质组学研究中最常用的磷酸化蛋白质富集技术之一。[b]Welchrom Ti Poss (phosphate ester)固相金属离子亲和填料[/b]Welchrom Ti Poss (phosphate ester) 是月旭科技推出的的新一代固相金属离子亲和填料，金属离子Ti??鳌合在磷酸酯 (phosphate ester) 为配基的多级孔杂化整体材料上形成的亲和填料，利用磷酸化基团与固相化的Ti??的高亲和力来富集磷酸化蛋白质。磷酸化蛋白质上的磷酸基团中的三个氧原子分别与富集材料上的三个不同Ti??螯合以形成稳定的八面体形的配位结构，这种配位方式提供了良好的结合能力。该填料具有吸附量大、选择性好、成本低、适用范围广、操作简单特点。[b]规格参数[/b][table=521][tr][td=1,1,156]基架名称[/td][td=1,1,365]多面体低聚倍硅氧烷（POSS）作为单体所制备的多级孔杂化整体材料[/td][/tr][tr][td=1,1,156]粒径范围[/td][td=1,1,365]几十微米至几百微米[/td][/tr][tr][td=1,1,156]结合载量[/td][td=1,1,365]63.6 mg/g[/td][/tr][tr][td=1,1,156]适用样品范围[/td][td=1,1,365]所有含有磷酸基团的蛋白质和肽段[/td][/tr][tr][td=1,1,156]磷酸化肽段富集特异性[/td][td=1,1,365]97%[/td][/tr][tr][td=1,1,156]pH稳定性[/td][td=1,1,365]强酸、强碱下均可使用[/td][/tr][tr][td=1,1,156]化学稳定性[/td][td=1,1,365]常见有机溶剂下均可使用[/td][/tr][tr][td=1,1,156]保存条件[/td][td=1,1,365]干燥状态下室温保存[/td][/tr][tr][td=1,1,156]通用性操作步骤[/td][td=1,1,365]采用80% ACN/6% TFA水溶液作为富集溶液，这样可以在富集过程中，很大程度上避免疏水性非磷酸化肽段的吸附。去除上清溶液后，依次用洗涤溶液A（50% ACN/6% TFA/200 mMNaCl）和溶液B（30%ACN/0.1%TFA）进行洗涤，这样可以最da程度上洗去非特异性肽段。最后采用100 μL 10%（wt%）的氨水洗脱吸附在材料上的磷酸化肽段。[/td][/tr][/table][b]应用案例[/b][align=center][img]https://img1.17img.cn/17img/images/201910/uepic/556dc556-79d8-4012-81ef-a8a16364ff16.jpg[/img][/align]（a）β-酪蛋白酶解液直接进行分析的 MALDI TOF-MS谱图和（b）Welchrom Ti Poss材料富集后分析的MADLI TOF-MS谱图[b]实验条件：[/b]0.1μg β-酪蛋白酶解液；采用80% ACN/6% TFA水溶液作为富集溶液，去除上清溶液后，依次用洗涤溶液A（50% ACN/6% TFA/200 mM NaCl）和溶液B（30%ACN/0.1%TFA）进行洗涤，最后采用100 μL 10%（wt%）的氨水洗脱吸附在材料上的磷酸化肽段。图a中，未经过富集的β-酪蛋白酶解液样品MALDI谱图中，非磷酸化肽段的质谱信号峰非常强，严重影响了对磷酸化肽段的辨别。而经过Ti??-IMAC富集，从MADLI谱图中（图b）可以清晰的看到磷酸化肽段以及其去磷酸化肽段的信号峰，而且几乎没有出现任何非磷酸化肽段的信号峰。证实了Welchrom Ti Poss富集对磷酸化肽段具有良好的富集能力。[table=562][tr][td][align=center][b]产品名称[/b][/align][/td][td][align=center][b]规格[/b][/align][/td][td][align=center][b]货号[/b][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][b]Welchrom Ti Poss (phosphate ester)[/b][/align][/td][td][align=center][b]250mg[/b][/align][/td][td][align=center][b]ATI001[/b][/align][b][/b][/td][/tr][/table]

第九章 1,酵解（glycolysis）：由10步酶促反应组成的糖分解代谢途径。通过该途径，一分子葡萄糖转化为两分子丙酮酸，同时净生成两分子ATP和两分子NADH。 2，发酵（fermentation）：营养分子（Eg葡萄糖）产能的厌氧降解。在乙醇发酵中，丙酮酸转化为乙醇和CO2。 3，巴斯德效应（Pasteur effect）：氧存在下，酵解速度放慢的现象。 4，底物水平磷酸化（substrate phosphorlation）：ADP或某些其它的核苷-5′—二磷酸的磷酸化是通过来自一个非核苷酸底物的磷酰基的转移实现的。这种磷酸化与电子的转递链无关。 5，柠檬酸循环（citric acid cycle）：也称为三羧酸循环（TAC），Krebs循环。是用于乙酰CoA中的乙酰基氧化成CO2的酶促反应的循环系统，该循环的第一步是由乙酰CoA经草酰乙酸缩合形成柠檬酸。 6，回补反应(anaplerotic reaction)：酶催化的，补充柠檬酸循环中间代谢物供给的反应，例如由丙酮酸羧化酶生成草酰乙酸的反应。 7，乙醛酸循环（glyoxylate cycle）：是某些植物，细菌和酵母中柠檬酸循环的修改形式，通过该循环可以收乙乙酰CoA经草酰乙酸净生成葡萄糖。乙醛酸循环绕过了柠檬酸循环中生成两个CO2的步骤

查拉一些资料说是粘度的影响和跟金属离子结合的影响，感觉影响不会那么大把吧，我测的是六氟磷酸锂用水配后会生成五氟化磷然后再水中变为磷酸，测钠的结果偏高很多倍。不知道有什么好办法，实验室没坩埚烧。。。能解释下磷酸，硫酸的对原吸的确切影响最好。谢谢！

[font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]（1）磷酸化修饰。[/color][/size][/font] [font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]蛋白质磷酸化是由蛋白激酶催化的磷酸基转移反应，是最常见、最重要的蛋白质修饰方式之一。[/color][/size][/font] [font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]蛋白质磷酸化修饰的具体生物效应包括：改变被修饰蛋白质的活性、改变蛋白的亚细胞内定位、改变蛋白与其他蛋白或其他生物分子的相互作用。[/color][/size][/font] [font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]①催化蛋白质磷酸化的蛋白激酶，根据底物的磷酸化位点可分为三大类，蛋白质丝氨酸/苏氨酸激酶、蛋白质酪氨酸激酶、双专一性蛋白激酶。[/color][/size][/font] [font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]②催化蛋白质去磷酸化的蛋白磷酸酶，根据磷酸化的氨基酸残基不同可分为两类，蛋白质丝氨酸/苏氨酸磷酸酶和蛋白质酪氨酸磷酸酶。[/color][/size][/font] [font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]（2）甲基化修饰。[/color][/size][/font] [font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]蛋白质甲基化是指在甲基转移酶催化下，甲基基团由S-腺苷甲硫氨酸转移至相应蛋白质的过程。[/color][/size][/font] [font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]蛋白质甲基化修饰可产生多种不同的生物效应，包括影响蛋白质间的相互作用、蛋白质和RNA间的相互作用、蛋白质的定位、RNA加工、细胞信号转导等。[/color][/size][/font] [font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]催化蛋白质甲基化的酶：甲基转移酶。[/color][/size][/font] [font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]（3）乙酰化修饰。[/color][/size][/font] [font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]蛋白质乙酰化是指在乙酰基转移酶的催化下，在蛋白质特定的位置添加乙酰基的过程。蛋白质乙酰化修饰所产生的生物效应，主要包括促进基因转录、诱导细胞自噬、调节代谢酶的活性及代谢通路。[/color][/size][/font] [font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]催化蛋白质乙酰化的酶：组蛋白乙酰基转移酶。[/color][/size][/font] [font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]（4）类泛素化修饰。[/color][/size][/font] [font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]小泛素相关修饰物（SUMO）是类泛素蛋白家族的重要成员之一，可与多种蛋白结合发挥相应的功能。SUMO化修饰可参与转录调节、核转运、维持基因组完整性及信号转导等多种细胞内活动。[/color][/size][/font] [font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]①SUMO的分类：SUMO蛋白分布广泛，人类基因组编码了4种不同SUMO蛋白，分别为：SUMO1、SUMO2、SUMO3和SUMO4。其中，SUMO1-3在各种组织中均有表达，而SUMO4则主要在肾脏、淋巴结和脾脏中表达。[/color][/size][/font] [font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]②催化蛋白质SUMO化修饰的酶。SUMO化修饰需要一系列酶的参与，包括E1活化酶，E2结合酶以及E3连接酶。[/color][/size][/font] [font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]（5）巴豆酰化修饰。[/color][/size][/font] [font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]作为一种新型组蛋白翻译后修饰方式，蛋白质巴豆酰化是一种进化上高度保守，且在细胞生物学功能上完全不同于组蛋白赖氨酸乙酰化的蛋白质修饰方式。[/color][/size][/font] [font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]蛋白质巴豆酰化是指在巴豆酰基转移酶的催化下，在蛋白质特定的位置添加巴豆酰基的过程。组蛋白赖氨酸巴豆酰化修饰与基因的活化密切相关。此外，催化蛋白质巴豆酰化的酶是巴豆酰基转移酶。[/color][/size][/font]

耶鲁研究学者成功地对细菌的蛋白质合成机制进行遗传学改造 随着合成生物学的发展，科学家们已经掌握了相当的遗传学工具，他们已能够修改有机物的天然遗传密码，甚至重新谱写生命。在昨天的《科学》杂志上，耶鲁大学的研究学者发表论文说，他们已成功对细菌中的蛋白质合成机制进行遗传学改造。该论文的作者，细胞及分子生理学系的杰斯·莱因哈特（Jesse Rinehart）介绍说：“从本质上来说，我们已经扩展了大肠杆菌的遗传密码，这让我们能够合成以特殊形式，例如模拟天然状态或者疾病状态的蛋白质。”耶鲁研究小组的理念是, 通过修改遗传密码，用新的方式影响蛋白质的行为，使之能实现大多数的生命功能。他们并没有创造自然界不存在的东西，而是诱发了磷酸化作用（phosphorylation）。磷酸化作用是生命体中最常见的基本生理过程，它能显著改变蛋白的功能。通常，蛋白的磷酸化作用并不直接由DNA编码指导合成，而是在蛋白质合成之后才开始，而这正是耶鲁的研究人员们想要改写的：他们希望把磷酸化过程添加到大肠杆菌的遗传密码中，通过DNA第一时间就能指导蛋白磷酸化。过去，科学家们缺乏研究磷酸化状态蛋白的能力，致使对某些疾病的研究停滞不前，例如蛋白活性极高的癌症。而这项新技术实现了人类蛋白质的天然磷酸化体系，这对于理解疾病的发展至关重要。莱因哈特解释说：“我们现在做的就是运用蛋白开关——把蛋白机制打开或关闭，这让我们能以全新的方式研究疾病状态，并有望引导新药的研发。”莱因哈特他们现在打算创建与癌症、糖尿病以及高血压相关的磷酸化蛋白质，不过他们强调说，这种技术能够实现处理任何种类的蛋白质。

我们长期专注于FERMENTEK公司是全球排名前100名的以色列著名生物科技公司，长期专著于提供真菌毒素/生物毒素/神经生物学和细胞信号传导和医药中间体产品。主要有：毒素/离子通道调节剂//神经营养因子、细胞内Ca2＋及磷酸化抑制剂等高纯度信号转导研究用试剂Thapsigargin 肌浆网钙泵抑制剂(TG) Leptomycin B 细霉素BBafilomycin A1 巴佛洛霉素A1 Bafilomycin B1 巴佛洛霉素B1Geldanamycin 苯醌安莎霉索(GDM) Ionomycin, Ca salt 钙离子载体Ionomycin,free acid钙离子载体 A23187, 4-Bromo 钙离子载体 A23187, Mixed Ca/Mg salt A23187 (free acid) 　 Paclitaxel (taxol) 紫杉醇 Docetaxel(toxotere) 多烯紫衫醇 Equol 雌马酚Thapsigargin肌浆网钙泵抑制剂(TG) Staurosporine星孢菌素Bisindolylmaleimides酪氨酸磷酸化-抑制剂 Phorbol Esters佛波醇酯4α-Phorbol 　Phorbol 12,13-Dibutyrate 蛋白激酶 c的激活剂咐噼醇基酯4α-Phorbol 12,13-Dibutyrate 　4α-Phorbol 12,13-Didecanoate 　Phorbol 12-Myristate 13-Acetate 　4α-Phorbol 12-Myristate 13-Acetate 　Tyrphostins Calyculin A 花萼海绵诱癌素CA细胞凋亡相关试剂:Brefeldin A 布雷菲尔得菌素 Hypericin金丝桃素Thapsigargin肌浆网钙泵抑制剂（胡萝卜类素） Cerulenin浅蓝菌素 7Amino-Actinomycin D 7氨基放线菌素 Valinomycin缬氨霉素 Parthenolide 小白菊内酯Fumonisin B2 伏马毒素B2 Leptomycin B 细霉素BActinomycin D (dactomycin) 放线菌素D/IV Cyclopiazonic Acid 环丙阿尼酸Ionomycin 钙离子载体 K252A特异性酪氨酸激酶抑制剂 Cyclosporin A环胞霉素A细胞松弛素类试剂：Cytochalasin A 细胞松弛素A Cytochalasin B 细胞松弛素BCytochalasin C 细胞松弛素C Cytochalasin D 细胞松弛素DCytochalasin E 细胞松弛素E各类抑制剂7AAD（7-Amino-Actinomycin D） 7氨基放线菌素17AAG(17-(Allylamino)-18-demethoxy- geldanamycin) 17-丙烯胺-17-去甲氧格尔德霉素17DMAG（17-dimethylaminoethylamino-18-demethoxy-geldanamycin） Hsp90抑制剂 Cyclopamine环巴胺 A23187, 4-Bromo 钙离子载体A23187, Mixed Calcium / Magnesium salt 　A23187 (free acid) 　Actinomycin D (Dactinomycin, Dactomycin) 放线菌素D/IVacivicin 细胞毒素/γ-GTP抑制剂 Apicidin 组蛋白脱乙酰酶抑制剂Radicicol Hsp90特异性之阻断剂 Thapsigargin(TG) 肌浆网钙泵抑制剂Thiolutin 硫藤黄素 Triacsin C 脂酰CoA合成抑制剂 Trichostatin A 曲古菌素ATunicamycin N-糖基化抑制剂 Wortmannin(WT) 磷脂酰肌醇4-激酶的特异性抑制剂Bisindolylmaleimide I 蛋白激酶C-PKC抑制剂Bisindolylmaleimide I,Hydrochloride 蛋白激酶C-PKC抑制剂盐酸盐Bisindolylmaleimide VIII,Acetate salt 酪氨酸磷酸化-抑制剂Bisindolylmaleimide IX,Methanesulfonate salt 酪氨酸磷酸化-抑制剂Bisindolylmaleimide X,Hydrochloride salt 酪氨酸磷酸化-抑制剂Bisindolylmaleimide XI,Hydrochloride salt 酪氨酸磷酸化-抑制剂Tyrphostin AG 1478 酪氨酸磷酸化抑制剂

供应各种修饰型多肽。1.磷酸化的Ser、Tyr和Thr修饰的多肽：我们提供单磷酸化和多磷酸化多肽服务，目前我们已经能够提供四个磷酸化位点修饰的多肽。2.5(6)-FAM，FITC，CY5，RhodamineB，PNA，EDNAS/dabcyl等荧光标记修饰的多肽：荧光标记修饰多肽技术是我们国肽生物的代表性多肽合成技术，我们的这项技术已经相当成熟。【详情请咨询国肽生物】3.生物素Biotin，Lys(Biotin)修饰的多肽：生物素是维生素B2的组成部分，Biotin，Lys(Biotin)修饰的多肽也是客户经常定制的多肽。我们提供生物素修饰的多肽已经有将近100%的成功率。4.含有一对或多对二硫键修饰的多肽：二硫键在蛋白质的结构稳定中起到重要作用，目前我们已经能够为客户提供四对二硫键修饰的多肽。5.含有同位素C13，N15修饰的多肽：同位素标记的多肽主要应用于医学和生物学领域，通常价格较高，为了满足客户需要，我们接受微克级的同位素多肽定制。6.含有特殊氨基酸修饰的多肽：例如，D型氨基酸，氨基酸衍生物，脂肪族羧酸等等，都在我们接受的定制范围内。

有机磷农药是指含有磷原子的有机磷类化合物，在生物体内与胆碱酯酶形成磷酸化胆碱酯酶，使胆碱酯酶活性受到抑制而产生毒性作用的一类农药的总称。有机磷农药大多为磷酸酯类或硫代磷酸酯类，微溶于水，易溶于有机溶剂，对光、热、氧及酸稳定，在碱性溶液中分解、解毒。GC分析时，由于进样口等位置活性位点吸附，经常出现检测结果偏差，使得定量结果不能真实反映样品中有机磷农药残留量，给检测带来一定影响。那么在GC分析有机磷类农药残留时，应注意什么？该如何避免系统中各活性点对农药的吸附？

[size=16px]1、过量施肥（特别是过量使用氮肥和酸性肥料）是造成土壤酸化的根本原因[/size][size=16px]长期盲目不合理（特别是过量）使用大化肥，会使土壤中的酸性离子累积增加、使有害金属离子游离量增多，尤其是长期盲目过量使用尿素等氮肥的农田和长期大量使用酸性肥料的农田，土壤酸化问题会特别严重。[/size][size=16px]为什么这么说呢？一方面，因为氮肥在土壤中会转化成硝酸盐，硝酸盐在土壤中流失的时候又会把土壤中的钙、镁离子、钾离子等碱性物质带走，从而造成土壤的碱性越来越低、土壤酸性越来越大，并最终导致土壤不断酸化、土壤酸化程度逐年加重。另一方面，肥料是有碱性肥料、酸性肥料、中性肥料之分的，如果大家长期在地里大量使用生理酸性的肥料，比如说氯化铵、氯化钾、硫酸铵、硫酸钾、硝酸铵、硝酸钙、过磷酸钙以及硫酸亚铁、硫酸锌、硫酸铜等都是酸性肥料，这也会造成土壤中的酸根离子逐年累积沉淀增多，进而造成土壤酸性不断加大、土壤酸化不断加重。[/size][size=16px]在这一点上，大家一定要明白：防治土壤酸化问题，首先要预防过量使用大化肥，特别是一定要避免长期过量使用各类氮肥（包括尿素、硫酸铵、硝酸铵、硝酸钙、碳酸氢铵、氯化铵等各种氮肥）以及避免长期联系使用强酸性肥料。[/size][size=16px]2、农田水分排灌不合理（特别是经常浇大水、下大雨）是造成土壤酸化的主要原因[/size][size=16px]经常进行集中大水漫灌的农田土壤，以及频繁下雨（尤其是经常下大雨）、土壤淋溶透水性强的农田土壤，这样的土壤也是非常容易发生土壤酸化问题的。这一点在雨水多、湿度大的南方地区，以及需要经常浇灌大水的瓜果蔬菜温室大棚内非常常见。[/size][size=16px]为什么这么说呢？因为经常浇灌大水农田或者天气经常下大雨的地区，土壤中的钙、镁、钾等碱性离子会大量的被流水冲刷流失（比如说耕作层中的钙镁钾等离子被水分带到更深层土壤中去），从而造成土壤碱性越来越来越低、酸性越大而形成酸化土壤。[/size][size=16px]这一点上，大家一定要明白：防治土壤酸化问题，一方面要避免经常集中大水漫灌，另一方面要注意采取避免种植的模式（比如说地膜覆膜种植、雨季搭设遮雨棚等）。[/size][size=16px]3、（腐熟）有机肥使用不足会加重土壤的酸化问题[/size][size=16px]凡是农田耕地中长期不施或少施腐熟有机肥的土壤，一般也是容易发生土壤酸化问题的。[/size][size=16px]为什么这么说呢？因为有机肥可以为土壤增加大量的有机质，而土壤中的有机质不仅能够提高改良土壤和土壤肥力，也能够大幅提高土壤对酸性的缓冲能力和土壤酸碱性的自我恢复平衡能力（保持在土壤中性状态）。如果农田长期不施或少施腐熟有机肥，就会造成土壤中的有机质含量贫瘠，不仅会造成土壤性状结构被破坏、土壤肥力不断下降、土壤的缓冲性/抗逆性/自我修复能力持续降低，而且还会造成土壤中的有益微生物存活困难而大量死亡、造成土壤中的酸性离子和有害金属离子越来越多、活性越来越强，最终会造成土壤质量不断恶化、土壤酸性不断增加、土壤酸化问题逐年加剧的局面。[/size][size=16px]在这一点上来说：防治土壤酸化问题，每年往地里大量增施腐熟有机肥补充土壤有机质含量，是防治土壤酸化问题见效最好（不是最快）、效果最稳定、对土壤作物好处最多且最不容易出现土壤酸化反弹的方式，没有之一。[/size][size=16px]4、中微量元素（特别是镁、钙、钾等碱性元素）过度消耗而补充不足会加重土壤的酸化问题[/size][size=16px]土壤中的中微量元素是相对规定，如果土壤里的中微量元素（特别是钙、镁两种元素）因为作物长期大量吸收消耗（如长期种植开花结果类瓜果蔬菜的农田），或者土壤中的钙、镁等碱性元素被雨水过度冲刷淋溶流失（如大水漫灌或频繁下大雨的农田），而咱们农民朋友又长期不往地里补充这些营养元素的肥料，那么这也会造成土壤特定养分过度消耗、土壤养分结构比例严重失衡而加重土壤酸化问题的发生。[/size]

Methods 35 (2005) 256–264[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=88153]analysis of protein phosphorylation by mass spectrometry[/url]

[color=#444444]样品是磷酸化多肽，我们的仪器是[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质联用[/color][/url]的ESI质谱，老师说拿测出来的质谱图和MALDI质谱测出来的图对照，如果找到相应的峰（去卷积后的数值和maldi的数值减去1相同），就说明测到了磷酸化多肽，我一直想不明白，有没有大神替我解释一下这是为什么？[/color]

关键词免疫组化，抗原，一抗，二抗目的：蛋白物质的定性、定位检测。背景知识：20世纪30年代，随着生物化学的发展和电子显微镜技术的应用，组织化学迎来了复兴时代。自从E. Takamatsu（高松英雄）和G. Gomori 1939年同时证明了硷性磷酸酶的组织化学方法，以后的30年间，酶组织化学得到了飞速发展，高松证明了磷酰胺酶、ATP酶；Gomori设计了酸性磷酸酶、脂酶、酯酶等组织化学证明法。 此间，金属盐法，硫化钴法，偶氮色素法，偶氮色素四唑盐法（tetrazolium salts method）以及磷酸化酶组织化学证明法等相继问世。特别是H. Scheldon和D. Brandes等人把电镜与酶组织化学结合起来，以金属沉淀法观察了酸性磷酸酶和硷性磷酸酶，奠定了电镜酶组织化学（electron microscope enzyme histochemistry）基础。后来A. M. Seligman(1967)提出锇黑化法（Osmification method）进一步阐述了电镜组织化学的基本原理和反应过程。 1950年A. H. Coons等人提出了荧光抗体法，从而把免疫学引入组织化学实验中，后来P. K. Nakane，S. Avrameas 和L. A. Sternberger等人以辣根过氧化物酶为标记物对酶进行观察，创立了酶标抗体法，从而为组织化学开辟了新途径。 随着分子生物学的发展，1969年人们把分子杂交技术应用到组织切片和细胞标本上，开始探索原位杂交技术，经过30年不断应用、完善和发展，特别是探针制备与标记物两大关键技术的突破，目前原位杂交技术已广泛应用于遗传学、病毒学、神经内分泌学、病理学、免疫学和发育生物学等各个领域，显示出巨大的应用潜力。 现代组织化学已经渗透和应用于生命科学的许多学科，经过近几十年的发展，产生了许多分支，如核酸与核蛋白、蛋白质与氨基酸、脂类与脂蛋白、碳水化合物与粘蛋白及粘多糖、无机物组织化学、酶组织化学电镜组织化学、荧光组织化学、免疫组织化学、同工酶组织化学、定量组织化学、原位杂交组织化学和放射自显影技术等。总之，现代组织化学的概念已经远远超过了原有范围，无论从理论、内容、技术手段、研究范围都比过去更广泛、更深入。 原理：理论基础是基于利用放射性核素和其他标记物（荧光素，酶， 重金属离子等）作为示踪剂，通过免疫亲和（抗原-抗体特异性结合）和核酸杂交（碱基配对特异性连接）途径，在组织切片或细胞涂片上，原位显示生物大分子的动态变化而建立的一门染色技术。 主体内容（一）、仪器设备1）18cm不锈钢高压锅或电炉或医用微波炉；2）水浴锅 （二）、试剂 1）PBS缓冲液（pH7.2～7.4）：NaCl 137mmol/L，KCl 2.7mmol/L，Na2HPO4 4.3mmol/L， KH2PO4 1.4mmol/L。2）0.01mol/L柠檬酸盐缓冲液（CB，pH6.0，1000ml）：柠檬酸三钠 3g，柠檬酸 0.4g。3）0.5mol/L EDTA缓冲液（pH8.0）：700ml水中溶解186.1gEDTA•2H2O，用10 mmol/L NaOH调至pH8.0,加水至1000ml。4）1mol/L的TBS缓冲液（pH8.0）：在800ml水中溶解121gTris碱，用1N的HCl调至pH8.0,加水至1000ml。 5）酶消化液： a、0.1%胰蛋白酶液：用0.1%CaCl2(pH7.8) 配制。 b、0.4%胃蛋白酶液：用0.1N的HCl配制。6）3%甲醇-H2O2溶液：用30%H2O2和80%甲醇溶液配制。7）封裱剂：a、甘油和0.5mmol/L碳酸盐缓冲液（pH9.0～9.5）等量混合； b、油和TBS(或PBS)配制。 8）TBS/PBS pH9.0～9.5，适用于荧光显微镜标本；pH7.0～7.4适合于光学显微镜标本。 [font='Helvetica Neue', Hel

改性淀粉是执行食品安全国家标准GB 31637吗？比如磷酸化二淀粉磷酸酯也是执行这个标准吗？配料表标识的时候，是标识变性淀粉，还是要标识其全名称？标准中关于“未引进新化学基团且未改变淀粉分子中的糖苷类型的变性淀粉”是如何区别和划分的？

为什么使用hilic模式时，加入盐的时候，盐浓度越大峰却往前移了？原理是什么？想不明白啊。注：分析的是磷酸化合物，峰严重拖尾请指教

硝酸细菌依靠（ ）方式产能。A 发酵作用 B 有氧呼吸 C 无氧呼吸 D 光合磷酸化正确答案是：B答案公布后请勿继续作答，谢谢合作！

请问Q-TOF和MALDI-TOF的区别？这两种质谱的特点，能不能检测出蛋白的磷酸化位点，谢谢！！！

硝酸细菌依靠____方式产能。A 发酵作用 B 有氧呼吸 C 无氧呼吸 D 光合磷酸化正确答案：B答案公布后请勿继续作答，谢谢合作！

生化中几个经典的口诀0 竟Ｋ大，非Ｖ小反竟ＫＶ都变少（第三章酶）丙酮酸脱氢酶系辅酶一句话记忆:赴美(COA)交流(TPP)时留心(硫辛酸)一下黄(FAD+)色的尼(NAD+)龙线三羧酸循环产物：领一桶壶壶锁果仙（柠檬酸，异柠檬酸，同戊二酸，琥珀先副酶A，琥珀酸，延胡索酸，苹果酸，草先乙酸）特点：4.2.1.12四次拖氢，2次拖羧，1次地物水平磷酸化，产生12个ATP起始密码:AUG,联想"哎(A)哟(U)急(G)了,开始(起始)吧“合同”——HMGCOA“合”成酶是“酮”体合成关键酶。（最易混淆的题是HMGCOA还原酶——胆固醇合成关键酶。）△真核生物RNA-Pol“Ⅱ”转录后可产生hnRNA（mRNA）m像“Ⅱ”个桥洞hn并拢就像m了！△RNA-Pol“Ⅲ”产生：“t”RNA——“t”hree“sn”RNA——拼音san“5”sRNA——“三”五香烟△经代谢转变为“牛”磺酸的是——“半”胱氨基酸“牛”字和“半”字很像。.