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佩西立文

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  • [分享]如何建立文件的识别编号?

    如何建立文件的识别编号?——文件的编号分为文件的识别编号(即文件代号)和文件的发放编号。识别编号反映该文件的种类、属性及版本,发放编号则反映该文件的发放对象,即所有权人(有时是部门),这两种编号都应是惟一的。有了识别编号,在提及该文件时,可以不必再叙述名称,而以识别编号代之。有了发放编号,就不必再在文件上标注使用人姓名,文件使用人变更(例如人员调离、退休)时也不需重新标注发放编号,而只需要在文件发放清单上做好使用人变更的记录和发放、回收的登记即可。 由于国家有关部门(或国际组织)在批准发布技术文件时,已给出文件的识别编号,实验室无需对外来技术文件重新给出识别编号。需要建立文件识别编号的,大多是实验室制定的文件。文件识别编号可用英文字母和阿拉伯数字的组合来表示,例如:XXXX/XX XXX—XXXX。代号最前面是用英文缩写表示的机构代号,“/”后面的第一、二位用英文字母表示文件类型识别,不同的字母组合分别代表质量手册、程序文件、作业指导书(可细分为检测/校准实施细则、操作规程、测量不确定度评定书、期间核查办法、型式评价大纲等)、表格、质量计划、记录、网格文件等。“/”后面的第三、四、五位用阿拉伯数字表示文件序号,如该测量不确定度评定书是实验室的第8份测量不确定度评定书,则表示为“008”。“一”后面的四位阿拉伯数字表示文件批准的年份。

  • 【原创】如何建立IP体系?

    IP体系建立需采取两方面的措施:组织措施:(1) 受控供应链中所有参与方的承诺(2) 建立文件体系(3) 进行员工培训(4) 采取控制措施(5) 对不利事件的管理(6) 供应商资质的审查物理措施:(1) 隔离(2) 可追溯性(3) 代表性取样和分析

  • 【分享】实验室管理认证体系的26类档案

    1、组织管理:至少应有法人任命文件、机构成立文件、营业执照、组织机构代码、组织机构框图、各类人员任命文件、人员一览表、检测能力一览表(法人授权证明)。2、外来文件:上级各部门的文件,按时间记录。3、内部文件:包括任命文件、所开展的活动文件等。4、质量体系:各种版本的质量体系文件。5、内部审核:审核计划表、内审员委派表、内审记录表、审核报告、不符合报告。6、管理评审:评审计划表、评审报告、评审签到表。7、人员培训:培训计划表、培训记录表、培训考核计划表、培训考核记录表。8、人员技术档案:每人一个档案,应有学历证明、培训考核证明、资质证明、继续教育证明等。

  • 各类记录是管理体系文件吗?

    各类记录究竟算不算文件,纠结啊纠结!1.认可准则4.3文件控制——建立文件控制程序 中的三条内容包括注释,都没有提到记录,而且 4.13记录的控制 专门把记录拿出来讲,没有一句话说记录是文件。只是在4.13.2.1的注2中提到:技术记录可包括表格、合同、工作单、工作手册、核查表、工作笔记、控制图、外部和内部的检测报告及校准证书、客户信函、文件和反馈。出现了关于客户资料的文件。2.在CCAI的实验室内审员培训教材中。对4.2管理体系 的4.2.1的条文释义与理解把管理体系文件分为三或四个层次,记录就被涵盖在第四个层次的文件中了。这样子是不是又把记录算作管理体系文件啦?还是我理解有误,管理体系文件本来就包括各类记录的啊?

  • 【原创】GC入门应用、高级维修及相关分析方法建立文献资料打包下载

    [img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=108837]GC资料及文献书刊打包下载![/url][color=#00008b][color=#00ffff][color=#dc143c]水中月版主提示大家[/color][/color][/color]有如下的内容毛细管色谱柱常见故障排除指南色谱柱和色谱系统的故障排除幻灯片关于[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]填充柱的老化处理.doc毛细管[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]分析条件的选择.doc毛细管柱应用范围及使用温度.doc[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱仪[/url]检测器的灵敏度和检测限测量结果不确定度的评定.caj[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]常用知识浅谈[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱仪[/url]的操作技巧[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱仪[/url]使用气体的纯度和选择原则分析型[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]方法通则[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱仪[/url]维修要点峰型看问题[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]法—内标法[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]进样方式的选择[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]的进样系统概述[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]顶空进样器的参数优化影响静态顶空色谱分析的因素热解吸进样低温吹扫捕集技术裂解进样装置浅谈[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]系统的影响因素氮磷检测器[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]氮磷检测器的使用与维护[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]TCD检测器常见故障的检修方法及原因分析色谱检测器的噪声和漂移氢焰系统常见故障的判断和检查常见[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱仪[/url]的清洗及保养[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱仪[/url]器故障排除方法(保留时间不重复)等等,资料非常好,不需要积分下载,其中还包括刘虎威的[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]检查方法一书

  • 质量管理体系详解与案例文件汇编书籍免费送!

    [b]导言[/b][color=#cd4242][b][size=33px]“[/size][/b][/color][b][size=33px] [/size]新年到[/b] 辞旧岁,贺新春,虎年快要到了,你对于新的一年有什么样的憧憬呢? 辞旧岁不仅仅意味着挥别过去,也意味着重振旗鼓,迎接新的未来。对于仪器人来说,要想在新的一年实现职业上的突破自我、稳步推进,就必须要提前储备好足够的学习能量! 不用自己苦苦寻找,仪课通精心策划了一场[color=#3daad6]免费抽奖送年货[/color]的活动,送的就是你要的[color=#3daad6]“知识年货”![/color][b]年货有什么?[/b]一等奖:价值2999元的实验室管理体系合集,中奖名额1个 本合集包含了实验室管理体系人员从[color=#3daad6]基础到进阶[/color]各个阶段所需要掌握的课程内容,[color=#3daad6]共22门课程[/color],包括了对于现行标准的[color=#3daad6]解读[/color],以及如何进行[color=#3daad6]方法选择、验证和确认[/color],如何进行[color=#3daad6]合同评审[/color]等,内容超值,广受好评。 以下是部分课程,完整课程目录在文章末尾哦![align=center][img]https://mmbiz.qpic.cn/mmbiz_png/HicNrGvuJvWKYhSGSmEN4k50qibHhPnwZosyQGPfUUtNuoKF6dWapBMibefhvoYG200NjF2Rvw3r8ic0cd745l4Fibw/640?wx_fmt=png[/img][/align][align=center]二等奖:价值699元的仪课通年度会员,中奖名额3个[/align] 课程主题集中在[color=#3daad6]热点话题[/color],内容涵盖各类仪器、各个行业的检验检测方法等,并且每门课程内容精炼,实操性强,多为饱受学员青睐的优质课程。领取即可享受[color=#3daad6]一年内免费[/color]观看仪课通平台精选精品课内容,并且课程内容[color=#3daad6]持续更新[/color]。当前课程已经上线200余门,[color=#3daad6]2022年[/color]预计上线课程达[color=#3daad6]400余门[/color]。 以下为部分更新课程,完整课程目录可以添加文章末尾客服进行咨询哦![align=center][img]https://mmbiz.qpic.cn/mmbiz_png/HicNrGvuJvWKYhSGSmEN4k50qibHhPnwZosdCDVqdnV1AkAQcMWORFUTqIqI9GGZwic96w9d6oVkGQqJ7rv9T5fpw/640?wx_fmt=png[/img][/align][align=center]三等奖:仪课通年度推荐经典书籍一本,中奖名额10个[/align] 仪课通根据学员反馈,搜集了一批经典学习资料,统统都是[color=#3daad6]纸质书籍[/color]哦,一共12种,内容包括检验检测机构资质认定培训、生态环境监测机构资质认定培训、食品安全检测技术、质量管理体系解读及案例等多方面内容,抽中还能[color=#3daad6]包邮送[/color]哦! 以下是部分书籍,完整书籍目录在文章末尾哦![align=center][img]https://mmbiz.qpic.cn/mmbiz_png/HicNrGvuJvWKYhSGSmEN4k50qibHhPnwZoOrJtucgNMicCSWCtzwpOey4RpFQgyGJZd6Kic3KX1R63GZNekLADkuIw/640?wx_fmt=png[/img][/align][align=center]四等奖:哈希新年精美台历一份,中奖名额200个[/align] 哈希专属精美[color=#3daad6]台历[/color]一份,抽中[color=#3daad6]包邮免费送[/color]哦![align=center][img]https://mmbiz.qpic.cn/mmbiz_png/HicNrGvuJvWKYhSGSmEN4k50qibHhPnwZo7WoYsgZAxgFrVhLp46SWKZaNkEXHXBD0TByfqh3tRX0p8twkRgqvMA/640?wx_fmt=png[/img][/align]五等奖:仪课通五折优惠券一张(仅限自营课程可用),中奖名额500个 仪课通五折课程优惠券,全场[color=#3daad6]自营课程[/color]均可使用,买的越多,减免的金额越多哦!想要来年好好学习、提升自己的学员赶紧参加,装满购物车都不怕![align=center][color=#b90c0c]六等奖:哈希出品水质分析系列课程,中奖名额1000个[/color][/align] 课程包含:《哈希新品方案标准讲解》、《水质实验室分析--仪器操作》、《水质实验室分析--试剂操作》三门水质分析经典课程,全部出自水质监测领域[color=#3daad6]龙头企业哈希[/color]!充分讲解水质分析检测方面的[color=#3daad6]应用方案[/color]、[color=#3daad6]仪器操作[/color]、[color=#3daad6]相关试剂[/color]使用注意事项,帮你全方位掌握水质分析。[img]https://mmbiz.qpic.cn/mmbiz_png/HicNrGvuJvWKYhSGSmEN4k50qibHhPnwZoyRXvxVLRRwFruJC1pQtAny6JBWCplDuZqJePQHoMJTy0mOAm6Yp0tQ/640?wx_fmt=png[/img][b]参与流程[/b]第一步:关注[color=#3daad6]仪课通学习社公众号[/color],并在后台回复关键词:[color=#3daad6]年货节[/color]第二步:[color=#3daad6]点击抽奖活动链接[/color],开始抽奖,[color=#3daad6]每天[/color]都能参与抽奖,邀请[color=#3daad6]1位好友参加[/color]还能获赠[color=#3daad6]1次抽奖机会[/color]哦!第三步:根据中奖情况[color=#3daad6]添加工作人员微信[/color]或者[color=#3daad6]填写收件地址[/color],我们会立即为您发奖[img]https://mmbiz.qpic.cn/mmbiz_jpg/HicNrGvuJvWKYhSGSmEN4k50qibHhPnwZoW76MJepQtTlvQcvLI7PfJibQwAFpoCM0MiaNPk47gYicoHj3WrrftJOoA/640?wx_fmt=jpeg[/img]活动中有任何疑问,可扫描以上二维码添加微信咨询 这波“年货”是不是送到你心坎里了呢?新春将至,赶紧为自己备好来年的知识“食粮”吧![align=center]附件一:[/align][align=center][/align][align=center]年度经典书籍列表:[/align][table][tr][td=1,1,549][size=13px]检验检测机构资质认定案例分析[/size][/td][/tr][tr][td=1,1,555][size=13px]现代食品安全检测技术[/size][/td][/tr][tr][td=1,1,555][size=13px]检验检测机构资质认定和实验室认可500问[/size][/td][/tr][tr][td=1,1,555][size=13px]检验检测机构/实验室设备期间核查培训教程[/size][/td][/tr][tr][td=1,1,555][size=13px]《检测和校准实验室能力认可准则》培训教程[/size][/td][/tr][tr][td=1,1,555][size=13px][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]实战宝典[/size][/td][/tr][tr][td=1,1,555][size=13px]2015新版质量管理体系详解与案例文件汇编[/size][/td][/tr][tr][td=1,1,555][size=13px]检验检测机构资质认定评审员教程[/size][/td][/tr][tr][td=1,1,555][size=13px]食品检验机构资质认定培训教程[/size][/td][/tr][tr][td=1,1,555][size=13px]机动车检验机构资质认定培训教程[/size][/td][/tr][tr][td=1,1,555][size=13px]生态环境监测机构资质认定培训教程[/size][/td][/tr][tr][td=1,1,555][size=13px]司法鉴定机构资质认定培训教程[/size][/td][/tr][/table]附件二:实验室管理体系合集课程列表:[table][tr][td=1,1,559][size=13px]实验室技术负责人、质量负责人、授权签字人任职要求及关键点解读[/size][/td][/tr][tr][td=1,1,559][size=13px]实验室风险管理过程概要[/size][/td][/tr][tr][td=1,1,559][size=13px]CNAS-CL01-A002:2020 《检测和校准实验室能力认可准则在化学检测领域应用说明》[/size][/td][/tr][tr][td=1,1,559][size=13px]RB/T 214-2017 检验检测机构资质认定和 CNAS-CL 01:2018实验室认可内审员培训班[/size][/td][/tr][tr][td=1,1,559][size=13px]ISO17025实验室检测方法确认和验证[/size][/td][/tr][tr][td=1,1,559][size=13px]记录管理与控制[/size][/td][/tr][tr][td=1,1,559][size=13px]如何进行合同评审[/size][/td][/tr][tr][td=1,1,559][size=13px]CNAS-GL040仪器验证解读及实例应用解析[/size][/td][/tr][tr][td=1,1,559][size=13px]纠正措施、应对风险和机遇的措施和改进[/size][/td][/tr][tr][td=1,1,559][size=13px]第三方检测如何进行分包管理[/size][/td][/tr][tr][td=1,1,559][size=13px]仪器设备和标准物质的期间核查[/size][/td][/tr][tr][td=1,1,559][size=13px]如何进行管理评审[/size][/td][/tr][tr][td=1,1,559][size=13px]CNAS-CL01-A001:2018《检测和校准实验室能力认可准则在微生物领域的应用说明》[/size][/td][/tr][tr][td=1,1,559][size=13px]如何进行方法选择、验证和确认[/size][/td][/tr][tr][td=1,1,559][size=13px]管理体系(CNAS&CMA)内部审核[/size][/td][/tr][tr][td=1,1,559][size=13px]检验检测机构资质认定生态环境监测机构评审补充要求条文解释[/size][/td][/tr][tr][td=1,1,559][size=13px]检验检测机构资质认定(CMA)质量管理体系文件与质量手册的编写[/size][/td][/tr][tr][td=1,1,559][size=13px]检验检测机构资质认定(CMA )作业指导书与记录文件的编写[/size][/td][/tr][tr][td=1,1,559][size=13px]检验检测机构资质认定(CMA)程序文件的编写[/size][/td][/tr][tr][td=1,1,559][size=13px]化学测量不确定度的评定[/size][/td][/tr][tr][td=1,1,559][size=13px]CNAS-CL01:2018与RB/T 214-2017标准解读[/size][/td][/tr][tr][td=1,1,559][size=13px]CNAS-CL01:2018《检测和校准实验室能力认可准则》详解专题讲座[/size][/td][/tr][/table]

  • 【转帖】科学家培育出巨鼠年老后仍拥有强健肌肉(图)

    科学家培育出巨鼠年老后仍拥有强健肌肉(图) http://i3.sinaimg.cn/IT/2010/1115/2010111575041.jpg  干细胞研究能使健美运动员弗朗哥·哥伦布和阿诺施瓦辛格永远拥有发达的肌肉。http://i1.sinaimg.cn/IT/2010/1115/2010111575016.jpg  干细胞研究已经培育出肌肉鼠,这项新突破为研制促进肌肉增长药物,预防肌肉萎缩铺平了道路。  北京时间11月15日消息,据国外媒体报道,美国科学家培养出的一种“巨鼠”,能在年老后仍拥有强健的肌肉。这项新突破为研发促肌肉增长新药物铺平了道路,该药物可增加年轻上班族的力量,降低他们在老年后摔倒和骨折的风险。  这种药物还对患有肌肉萎缩症等疾病的年轻人有好处。该试验利用干细胞技术增加老鼠的肌肉,阻止它们因衰老而发生萎缩。他们给腿部受伤的年轻老鼠植入干细胞和从健康动物体内获得的一小片肌肉。研究人员希望这些干细胞(在修复劳损肌肉时起着重要作用)能帮助它们治愈腿伤。然而其结果大大出乎意料。  不仅老鼠受伤的肌肉在几天内得到恢复,而且它迅速增大,体积达到原来的2倍多。在随后的日子里,这些肌肉并没随着时间的推移而缩小,变老的老鼠仍拥有非常结实的大块肌肉。科罗拉多大学的布拉德利·欧立文说:“我们发现植入的干细胞永久性改变和缓解了植入肌肉的衰老过程,让老年老鼠仍有大量强健的肌肉。这是一个非常激动人心的意外收获。”  干细胞是“万能细胞”,它能转变成其他类型的细胞。在这项试验中,科学家认为注入的干细胞和肌肉纤维增强了伤腿的自然修复过程。研究人员目前正在查看是否把人类干细胞注入到老鼠体内,也会产生相同效果。欧立文说:“如果这些试验产生了积极成果,将说明移植人类肌肉细胞是切实可行的。”  发表在《科学转化医学(Science Translational Medicine)》杂志里的一份报告说,达到这个目的的最简单方法,是研发一种能够启动肌肉里常见的干细胞的药物。事实还将证明,“肌肉药丸”会受到运动员热捧,不管是想要加速扭伤痊愈的业余爱好者,还是为了参加大型比赛希望身体更强健的职业运动员,他们都能从这种药物中受益。

  • 建立ISO9001质量体系工作流程

    1现有体系诊断---现有ISO9001:2008的差距,制定推行计划(确立方针、目标)2管理系统培训及体系设计---目标管理,ISO9001基础知识3建立文件化质量管理体系---质量手册的编制, 质量计划的编制, 运作程序的规划及编制4试运行---运行前新体系文件培训, 运行过程中不断的改进5内审---内审员培训(按ISO9001:2008要求),内审方式及技巧6管理评审---利用管理目标等统计资料进行数据分析寻找改进机会,检讨过去、改善未来7申请认证---国际、国内认证机构介绍及选择,申请认证8体系维护及改进---循环内审、持续改进, 企业文化的推广及培训,检讨管理目标、改善品质成本获得ISO9001证书的好处a) 表明尊重消费者和对社会负责,提高企业服务的信誉、树立良好的企业形象;b) 在同行业中参与市场投标、竞标的竞争中显示突出优势;c) 扩大产品/服务销售渠道和销售量,获得更大利润。贯彻ISO9001带来的好处a)建立体系化的、严谨的管理模式,优化组织结构,完善质量管理,建立减少、消除,特别是预防产品/服务质量缺陷的机制;b)从公司到各个部门建立可量化的质量目标,保证服务质量的稳定及工作效率提高;c)使企业的一切工作处于受控状态,优化和巩固业务流程;d) 建立高效的资源管理机制;各类生产设备、档案、资料的管理与维护得到规范化管理;e) 建立高效的人力资源管理机制,各类人员的聘用、培训绩效考核等制度得到规范化。速达成专业ISO9001认证,以最实惠的价格,最快的速度帮客户提供优质的服务。需求ISO认证时间急的客户速达成咨询公司可以15-30天内帮客户取得认证证书,解决客户难题。

  • 求助一篇原创立文档

    [b]【序号】:1【作者】:【题名】:【期刊】:【年、卷、期、起止页码】:【全文链接】:[url]https://max.book118.com/html/2017/0524/108866377.shtm[/url][/b]

  • 【求助】寻无锡附近的金相培训

    有没有谁知道无锡附近有金相培训的? 要有培训资质, 培训后考试合格可获得国家认可的资质证书.无锡没有的话江苏或长三角也行.最好有机构的联系方式.

  • 关于体系年度培训

    群里的各位大神们:做了四五年质量负责人,突然觉得有点迷惘了,特别是对于体系培训这部分。前几年老板一直都很推体系,所以我做体系培训也特别有劲。从手册和程序文件、CNAS-CL01和RB/T 214到CNAS相关的文件,比如能力验证规则,认可标识和认可状态的使用、报告相关要求(EL13)。目前来说我们实验室体系运行上轨道,就觉得好像该培训都培训完了,不知道该讲点什么了。以前不管大家听不听得懂,我做PPT都特别带劲,还做公正保密教育培训举了各种案例。今年突然觉得好像没什么好讲的了。有没有大神指点一二,让我豁然开朗一下。

  • 赛默飞世尔“5年内成为中国第一、2020年成为世界第一的色谱质谱公司”

    赛默飞世尔“5年内成为中国第一、2020年成为世界第一的色谱质谱公司”

    2010年12月,赛默飞世尔科技宣布以21亿美元收购戴安公司。2011年5月,赛默飞正式完成对戴安公司的收购。到现在为止,赛默飞和戴安公司的正式合并已经过去了四个多月。戴安公司的加入对于赛默飞的发展有哪些影响?带着这些疑问,仪器信息网编辑在BCEIA 2011召开期间采访了赛默飞色谱质谱部亚太区商务运营副总裁Murray Wigmore先生、质谱与微量化学分析中国商务运营总监裴立文先生、液相色谱/离子色谱及样品前处理产品中国商务运营总监杜平先生。采访中,Murray Wigmore先生说到“赛默飞有一个很好的愿景,5年内将赛默飞打造成为中国第一的色谱质谱公司,2020年成为世界第一的色谱质谱公司。”您认为,赛默飞这一愿景的可实现度有多少呢?文章链接:"2020年赛默飞将成为世界第一色谱质谱公司"——访赛默飞色谱质谱产品亚太区商务运营副总裁Murray Wigmore先生http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/11/201111171216_331285_1755058_3.jpg

  • 体系培训

    请问各位友们有没有什么好的17025培训班值得推荐的?最好是送体系文件模板的

  • 【公告】分析数据处理与分析质量控制 培训

    仪器信息网将于9月17日-21日在秦皇岛燕山大学举办《分析数据处理与分析质量控制 》培训班,请有培训需求的本网用户点击 http://www.instrument.com.cn/training/100174/查看详细信息,网上直接报名可优惠100元。

  • 【讨论】做原吸时不能佩戴环形的金属首饰,你怎么理解?

    刚接触原吸时,看说明书上罗列了一大堆的注意跟不可以,其中有一项,不可以佩戴环形的金属首饰,当时只是照着做了,现在因为实验室中女性越来越多了,所以想要请教下,这个原理是怎么样的?如果佩戴了,又有什么危害呢?我原来的理解是仪器使用时会产生磁场,环形的金属会切割磁力线,从而产生电流,但是不会达到电到人的程度吧,不知道是不是有什么细节被我忽视了!

  • 悬浮培养工艺与转瓶培养工艺的比较分析

    作者: 陈文庆 王建超 刘华杰 高飞 张韧 (北京清大天一科技有限公司 102200 ) (《中国兽药杂志》 2010.44 ( 10 ): 37-41 )【摘要】 采用反应器全悬浮培养BHK21细胞生产口蹄疫病毒与微载体悬浮培养Vero细胞生产狂犬病毒分别与相应的转瓶培养工艺生产案例对比分析,比较悬浮培养工艺与转瓶培养工艺的生产效益。分析显示,与转瓶培养工艺相比,反应器悬浮培养工艺获得的细胞密度、病毒效价、产品的产量和质量明显提高,生产时的能耗和劳动力需求明显降低。结果表明悬浮培养工艺的生产效益明显高于转瓶培养工艺,适宜于国内生物制品工业化生产的升级换代。【关键词 】 细胞培养;生物反应器;悬浮培养;微载体细胞悬浮培养技术是指细胞在生物反应器中自由悬浮于培养液内生长增殖的一种培养方法。根据细胞是否贴壁,又分为全悬浮细胞培养和贴壁细胞微载体培养。国际上该项技术发展较快,已趋向成熟,是疫苗、抗体等生物制品生产的普遍生产工艺模式。与转瓶培养技术相比,该工艺具有操作简单、产率高、容易放大等优点,本文结合口蹄疫病毒和狂犬病毒的生产,分别对细胞悬浮培养工艺与转瓶培养工艺的经济效益等进行了分析和分析。1. 全悬浮培养口蹄疫病毒与转瓶培养案例对比高效、安全的病毒性疫苗是防止口蹄疫情发生的最有效方法。BHK21细胞是繁殖FMDV的理想宿主,早在1962年Capstick PB等就实现FMDV的悬浮培养。1965年Telling, R.C.等实现在不锈钢发酵罐中悬浮培养BHK21细胞生产口蹄疫疫苗。目前国外(Intervet公司、Merial公司)普遍已经采用2000~5000L反应器悬浮培养BHK21细胞生产口蹄疫苗。本文就本公司自主研发的650L生物反应器和无血清培养基进行悬浮培养BHK21细胞生产口蹄疫疫苗与转瓶培养工艺进行比较和分析。1.1主要材料细胞株:BHK21贴壁细胞株(中国兽医药品监察所)毒 株:FMDV-O型(某兽用疫苗企业)培养基:低血清MEM培养基(产品代号MD611)、BHK21细胞无血清培养基(北京清大天一科技有限公司)血 清:特级新生牛血清(杭州四季青生物工程材料有限公司)仪 器:5 L反应器(德国贝朗),120L和650LCLAVORUS ® 生物反应器(北京清大天一科技有限公司)1.2实验方法1.2.1转瓶培养BHK21细胞生产口蹄疫病毒将复苏的BHK21细胞在T75培养瓶中使用低血清培养基(含5%牛血清)培养,连续传代扩增接种15L转瓶,37 ℃培养48小时,传代比例为1:8-1:10,按常规方法接种病毒及维持液,细胞病变90%左右收获病毒液。1.2.2反应器全悬浮无血清培养BHK21细胞生产口蹄疫病毒(1)贴壁细胞悬浮驯化培养:用BHK21细胞无血清培养基在恒温摇床或者方瓶中无血清驯化贴壁BHK21细胞,可采用直接驯化或者逐级降低血清驯化等方法,每代观察细胞数量和细胞活率,直至BHK21细胞在无血清培养基中的生长增殖速率正常,细胞活率达95%以上,并可连续稳定传代,说明细胞已适应无血清悬浮培养。(2)反应器用种子细胞扩增:采用反应器罐倒罐逐级放大技术,细胞从摇瓶→5 L反应器→120 L反应器→650 L反应器进行逐级放大培养。细胞培养方式为批培养,控制反应器各参数在正常范围:温度37.0 ℃、pH7.2~7.4、溶氧(DO)20~70%、搅拌转速50~150 r/min。(3)反应器培养口蹄疫病毒:待650 L反应器中细胞达到一定密度,提高培养pH至7.5左右,按一定比例直接接种口蹄疫病毒进行病毒维持培养,控制温度、pH、DO、搅拌转速等参数在合适范围,在线无菌间隔取样判断细胞病变情况并检测病毒毒价(LD50,TCID50),确定收获的最佳时间。1.3 细胞培养结果对比分别对低血清培养基15 L转瓶培养的贴壁BHK21细胞进行观察和细胞计数,反应器全悬浮培养的BHK21细胞取样进行数量和活率检测。培养条件和结果对比见表1。表1 转瓶培养和反应器全悬浮培养BHK21细胞对比http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2013/10/A1380442105_small.jpg http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2013/10/A1380442106_small.jpg http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2013/10/A1380442107_small.jpg 图1 转瓶BHK21细胞低血清培养48 hr,100X 图2 反应器全悬浮无血清培养48 hr,100X 结果显示,转瓶培养的BHK21细胞,培养48小时显微镜观察成致密单层,见图1,96小时细胞开始出现脱落死亡;反应器无血清全悬浮培养BHK21细胞48小时的细胞显微镜观察状态如图2,生长至96小时细胞密度可达5.4x106 cells/ml,活率维持在94%左右。从细胞数量比较,650L反应器培养一批的细胞数量相当于500~700个15 L转瓶培养的细胞总量。1.4 病毒培养效果对比两种不同培养工艺,细胞在满足活力要求的基础上,以同等条件分别接种FMDV病毒,取样测定病毒毒价,结果见表2。 表2 转瓶和反应器全悬浮培养BHK21细胞病毒毒价对比http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2013/10/A1380442112_small.jpg结果表明,无血清悬浮培养的口蹄疫病毒毒价(TCID50和LD50)检测不低于转瓶培养工艺。根据反应器低血清悬浮培养BHK21细胞生产口蹄疫完整病毒粒子(146S)检测较转瓶高10倍左右的情况,应用无血清悬浮培养工艺,杂蛋白含量更少,口蹄疫完整病毒粒子和口蹄疫疫苗质量均提高。1.5 反应器和转瓶经济效益估算对比依据培养BHK21细胞生产口蹄疫病毒工艺过程要求,从细胞密度、病毒毒价、产品效力、资源环境、劳动力等方面进行简单对比,借以一窥二者的经济效益差别(见表3)。 表3 反应器无血清悬浮培养与转瓶培养BHK21细胞经济效益对比http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2013/10/A1380442114_small.jpg*按照反应器无血清悬浮培养一条生产线(5L-120L-650L)、转瓶体积15 L进行对比按照目前培养BHK21细胞生产口蹄疫病毒质量要求,对悬浮无血清培养工艺的产能进行预估,一条5L-120L-650L的反应器生产线年生产病毒量约为2.1亿毫升,生产疫苗量约为4.2亿毫升。2. 人狂犬病毒微载体培养与转瓶培养的对比我国是受狂犬病危害最为严重的国家之一,近年报告狂犬病死亡人数均在2400人/年以上,一直位居我国各类传染病报告死亡数的前三位,根据有关国家成功控制狂犬病的经验,世界卫生组织提出倡议,到2020年消除人狂犬病。我国距此倡议目标还有大量工作要做,国内也对人用和兽用狂犬病疫苗的生产做了大量研究工作。下面就120L反应器微载体培养Vero细胞生产狂犬病毒效果与转瓶培养工艺和培养效果比较分析。2.1主要材料细胞株:Vero细胞株毒 株:aG株(细胞株和毒株均来自某人用疫苗企业)培养基:低血清199培养基(产品代号MD504)、 Vero细胞反应器培养用培养基(产品代号MD505), 均来自北京清大天一科技有限公司仪 器:5 L反应器(德国贝朗)、120LCLAVORUS ® 生物反应器(北京清大天一科技有限公司)血 清:特级新生牛血清(杭州四季青生物工程材料有限公司)微载体:Cytodex 1 (美国GE

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