京尼平苷酸

【名词解释】此处采用最通俗的说法，书上那些复杂的定义，这里不讲究；苷：在母核上，连接一个或多个糖，一般就叫苷，极性较大；苷元：单纯地母核，或者母核去掉一个或多个或所有的糖，就称其为相应苷的苷元，极性较小；比如A结构＝B结构+糖，那么B就是A的苷元形式，A就是B的苷；【发贴背景】1. 分到了化合物就需要对其进行活性测试（没有活性发不了SCI）；2. 一般来说，苷元的活性比苷的活性要好，而我分到的都是些苷；3. 综合第1点和第2点，我要将苷进行水解，得到苷元成分；【如何水解】1. 水解分很多种，酸水解，碱水解，酶水解，等等；2. 酸水解我嫌麻烦，碱水解我不乐意，酶水解我才喜欢；【为何选择酶水解】1. 我有相应的水解酶（β-D-葡萄糖水解酶）；2. 它干净，不需要用到其它试剂；3. 它专一，基本没有其它副产物；4. 它速度，几个小时就可以完成了；5. 最重要的：我很喜欢，我说了算；【水解反应】样品处理：1g样品用少量甲醇溶解后加入200ml水稀释，后加入250mg酶；反应条件：放入40度水浴锅恒温加热，搅拌，全程监测；下图，左为京尼平苷，右为苷元：京尼平；http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/10/201110221338_325732_1745326_3.jpg【仪器试剂】水：重蒸水 甲醇：色谱纯，天津大茂 HPLC：Waters 高效液相Waters 996 DAD检测器Waters Model 600 controller液相色谱【色谱条件】 色谱柱：Ultimate XB-C18柱（5μm, 4.6x250mm）流动相：40%甲醇/水（V：V）流速：1.0ml/min柱温：常温（约25度）；检测波长：全波长检测；进样量：5微升；【实验过程】这是京尼平苷反应前的色谱图http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/10/201110221353_325734_1745326_3.jpg反应开始后，大约是半小时（没有确切时间）后取样过滤后进针通过进行峰面积比较，京尼平苷：京尼平＝77：23http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/10/201110221354_325736_1745326_3.jpg反应又进行了一段时间（没记时）通过进行峰面积比较，京尼平苷：京尼平＝62：38http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/10/201110221355_325737_1745326_3.jpg反应又进行了一段时间（真没记时）通过进行峰面积比较，京尼平苷：京尼平＝55：45http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/10/201110221356_325738_1745326_3.jpg反应又进行了一段时间（我真的没记时）通过进行峰面积比较，京尼平苷：京尼平＝17：83http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/10/201110221356_325739_1745326_3.jpg反应又进行了一段时间（我真的没记时，反正到午饭的时间点了）已经全部转化完毕了，干燥后等着交样品测活性吧http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/10/201110221358_325740_1745326_3.jpg【结果与讨论】1. 酶水解，简单、快速、方便、低廉、干净；前提：你有相应的酶（葡萄糖苷酶还是很容易得到的）；2. 由于糖没有紫外吸收，所以所有的谱图均未看到糖信号，利用示差应该是可以检测到的（不过40%的流动相，出峰会很早）；示差我们是有的，但是平衡太麻烦我不乐意开，最重要的是，糖能否检测到跟本实验关系不大；3. 比值为77：23那张图，好像显示一些其它双紫外吸收的小杂质，后来几张图没有了，应该也被水解了；4. 取的样品没有考虑量的多少，吸收基本都在1.0以上（很大），倾向的重点是转化的过程；5. Ultimate XB-C18，很多人问我极限的柱子到底怎么样，看图说话嘛，上面好多图啊，呵呵；6. 另外，这款柱子，其实跟某日本知名品牌柱子（为避免不必要的麻烦，不透露品牌）分离效果差不多，但是呢，柱压要低30%左右，这是最普通最形象的比较结果。7. 价格比较？那得问小S小卢了，反正我是试用。。

1. 发贴背景 京尼平苷——最为典型的环烯醚萜类化合物之一，事实上，去掉最后“之一”两个字，也不为过。 京尼平苷具有众多的药理活性，像什么保肝利胆，像什么抗炎镇静等等，甚至最近的研究表明，它还具有一定的抗老年痴呆活性等等。这么多药理活性，你信么？好吧，我要告诉你，药理作用就是扯淡，平时说着玩一玩是可以的，正式场合。。。还是谈点正经地比较好。 不管怎么样，给个京尼平苷的结构吧。。2. 仪器与试剂 甲醇：天津大茂产的色谱甲醇 水：娃哈哈纯净水 HPLC：忘了抄型号了，汗3. 色谱条件 流动相：A泵甲醇、B泵水溶液； 流速：A泵0.2ml/min、B泵0.8ml/min； 柱温：柱温箱30度恒温； 检测波长：230nm； 进样量：5微升； 色谱柱：Ultimate XB-C18柱(5μm， 4.6x250mm) 某色谱柱一（国产品牌）(5μm，4.6x250mm) 某色谱柱二（国产品牌）(5μm，4.6x250mm) 某知名色谱柱三（国外品牌）(5μm，4.6x250mm)4. 样品处理 京尼平苷标准品由本人提取分离纯化得到，纯度99.5%以上。取少量用甲醇溶解，过滤备用。5. 实验结果某国产品牌一分析结果如图所示http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/06/201106131606_299641_1745326_3.jpg某国产品牌二分析结果如图所示http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/06/201106131606_299642_1745326_3.jpg某国外品牌分析结果如图所示：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/06/201106161328_300126_1745326_3.jpgUltimate XB-C18柱分析结果如图所示：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/06/201106161331_300127_1745326_3.jpg6. 小结与讨论（下面将结合我对柱子的实际需求，对色谱柱的柱压、保留时间、柱效进行比较）6.1 柱压比较 国产品牌1和国产品牌2压力较低，双泵泵压均为16MPa左右，单从压力的角度来说，这是一个不错的结果。与之相对的是，某国外品牌色谱柱的柱压，双泵压力均高达26MPa左右，这是让人不太满意的结果。耐人寻味的是，Ultimate XB-C18柱的压力为20MPa，大小左右介于二者之间，且更偏向于前者，这个结果，是完全可以接受的。6.2 保留时间比较 对我而言，分析液相的结果将用于指导制备液相条件的确定。保留时间太短，在降低甲醇比例分离多组分的样品时，此类色谱柱将不具备优势，比如，用10%甲醇水时样品在10min内就出峰，将来要“往后拖”的时候，就只有5%甲醇水等选择了（换柱子不太可能）；相反，如果保留时间太长，“往后拖”分离多组分样品时，制备液相的出峰时间将变得极其漫长，这是不可接受的。从分析结果来看，如果要购买制备色谱柱，本人将不考虑国产品牌2（这段估计看着很费劲吧，汗）。6.3 柱效比较 本人极其厌烦理论塔板数一类的东西，简单明了干净利落是我追求的风格。关于柱效，最简单的说法就是，峰宽越窄峰高越高柱效越好。从图中可以看出，国产品牌1柱效过低，明显不适合用于分离此类化合物（国产品牌2色谱柱有点旧，此处不参与比较）；Ultimate XB-C18柱的柱效跟某知名国外品牌基本相当，或者说，略好。7. 结论 通过以上比较得出结论，以后在选择制备型液相色谱柱（限文中提到的4种品牌）的时候，某国产色谱柱保留时间太短，将不予考虑；另一国产色谱柱由于对此类样品的分离柱效太低，将不予考虑；在对柱压没有太大要求的情况下，Ultimate XB-C18和某国外品牌将成为考虑的对象。如果是对柱压有要求（嫌高），那么Ultimate XB-C18将会成为唯一的选择。

HPLC法测定当归四逆汤合煎液与单煎合并液中阿魏酸和芍药苷的含量目的：建立测定中药复方当归四逆汤主要成分含量的方法，比较当归四逆汤合煎液与单煎合并液中阿魏酸和芍药苷的含量差异。方法：采用HPLC分析，色谱柱为YWG—C18色谱柱（4.6mm×250mm，5μm）。分析阿魏酸含量：流动相为水: 乙腈=83：17，流速为1.0mL/min，柱温为30℃，检测波长230nm，进样量为20μl。分析芍药苷：流动相为0.01%(v/v)磷酸水溶液:乙腈=95:5，流速为1.0mL/min，柱温为30℃，检测波长230nm，进样量20μl。结果:阿魏酸和芍药苷分别在3.375μg·mL-1～67.5μg·mL-1，0.8065μg·mL-1～25.8000μg·mL-1范围内峰面积与浓度呈良好的线性关系,相关系数（r）分别为0.9996和0.9995；HPLC测定当归四逆汤中阿魏酸和芍药苷的含量稳定可行，简便，可作为当归四逆汤的质量控制标准。当归四逆汤合煎可提高有效成分的溶出。当归四逆汤来源《伤寒论》，由当归、桂枝、芍药、细辛、通草、大枣、炙甘草组成。主治血虚寒厥证，手足厥寒，或腰、股、腿、足、肩臂疼痛，口不渴，舌淡苔白，脉沉细或细而欲绝。阿魏酸为该方当归的有效成分，也是当归四逆汤的重要成分之一，具有明显扩张冠状动脉血管、增加冠脉流量、抑制ADP诱导的血小板凝聚，增强细胞吞噬功能的作用。芍药苷具有显著的镇痛、镇静、抗惊厥作用、扩张血管作用、保护脑缺血的作用解痉解热作用等也具抗菌、抗病毒和抗真菌作用。本文利用HPLC法，对当归四逆汤合煎液与单煎合并液中阿魏酸和芍药苷含量进行比较，从而从一个侧面探讨当归四逆汤配伍的科学性。

【作者】 魏智勇； 王俊华； 边景； 毕丽萍； 刘芳； 周晶； 张庆伟；【机构】 天津传染病医院天津市肝病研究所； 天津医科大学；【摘要】 目的:建立同时测定抗纤丸中芍药苷、阿魏酸、黄芩苷3种有效成分的含量方法。方法:Diamonsil C18色谱柱,流动相甲醇-1%磷酸,梯度洗脱;二极管阵列检测器(DAD);检测波长分别为芍药苷230nm,阿魏酸316nm,黄芩苷280nm,柱温35℃。结果:在3个波长下同时测定3种化合物的含量:芍药苷、阿魏酸、黄芩苷的线性范围分别为0.20~0.60μg,0.025~0.075μg,1.25~3.75μg;平均加样回收率分别为100.87%,100.31%,101.05%;RSD分别为1.03%,0.71%,1.88%。结论:该方法灵敏准确、重复性好,可用于本制剂的质量控制。 【谱图】 http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/08/201208142023_383857_1609970_3.jpg