比克白芷素

糖尿病视网膜病变（diabetic retinopathy，DR）是糖尿病患者中最常见的眼部并发症，糖尿病相关眼病是导致全球中度至重度视力丧失和失明的第5大常见原因[1]。随着糖尿病发病率的增加，糖尿病视网膜病变发病率逐年升高[2]。目前，DR的防治方法主要有手术治疗如激光光凝术、药物治疗如抗血管内皮生长因子制剂等，但治疗成本高，疗效欠佳，并且存在一定的不良反应，尚缺乏有效的防治措施[3-4]。因此，积极寻找更安全有效的治疗药物尤为重要。 白芷为伞形科植物白芷Angelica dahurica (Fisch. ex Hoffm.) Benth. et Hook. f. 或杭白芷A. dahurica (Fisch. ex Hoffm) Benth. et Hook. f. var. formosana(Boiss.) Shan et Yuan的干燥根[5]。现代药理学研究表明，白芷主要含有香豆素类、挥发油类、生物碱类等多种化学成分，具有抗炎、抗氧化应激、抗肿瘤等作用[6-7]。糖尿病的各种慢性并发症以微血管病变为主，这种损害包括内皮细胞损伤、基底膜增厚、血管通透性增加等，影响了血管的正常结构和功能，炎症、氧化应激是其重要的发病机制[8-9]。本课题组前期研究发现，在糖尿病慢性溃疡中，白芷可以通过调节巨噬细胞极化，减少炎症从而促进伤口愈合，证明了白芷在糖尿病并发症中的抗炎作用[10]。白芷能够减轻糖尿病溃疡中微血管细胞的功能障碍，抑制细胞的凋亡及丢失，从而减轻血管的损伤[11]。此外，白芷中有效成分紫花前胡苷对蛋白激酶B（protein kinase B，Akt）的磷酸化作用非常明显[12]。DR作为另一严重的糖尿病微血管并发症，主要表现也是血管功能的异常，因此提出白芷是否能够在一定程度上保护视网膜细胞从而延缓DR的发生和发展。本研究构建了DR动物模型和高糖诱导的视网膜细胞损害模型，拟从体内和体外实验2方面探讨白芷颗粒在DR中的保护作用和机制，以期为DR的防治提供新思路。 1 材料 1.1 动物 48只SPF级雄性SD大鼠，8周龄，购自斯贝福（北京）生物技术有限公司，动物许可证号SYXK（津）2020-0001，动物质量合格证号110324221106017247。大鼠饲养于天津医科大学朱宪彝纪念医院SPF级实验动物中心，动物房内保持22～25 ℃环境温度，50%～60%相对湿度，12 h明暗交替。本实验及相关实验操作已获得天津医科大学朱宪彝纪念医院动物实验伦理委员会批准（批准号DXBYY-IACUC-2022071）。 1.2 细胞 人视网膜上皮细胞（adult retinal pigment epithelial cell line-19，ARPE-19）购自北京北纳生物科技有限公司。 1.3 药品与试剂 白芷颗粒（批号A2110071，其中欧前胡素质量分数为0.12%）购自广东一方制药有限公司；羟苯磺酸钙（国药准字号H20030088）购自上海朝晖药业有限公司；链脲佐菌素（streptozotocin，STZ，批号572201）购自美国Sigma公司；柠檬酸钠缓冲液（批号C1013）、RIPA组织/细胞裂解液（批号R0010）、苏木素染色液（批号G1121）、伊红染色液（批号G1121）、高碘酸-席夫（PAS）染色试剂盒（批号G1281）购自北京索莱宝科技有限公司；NC膜（批号HATF00010）购自美国Millipore公司；ECL化学发光试剂盒（批号34095）购自美国Invitrogen公司；TUNEL检测试剂盒（批号C1090）购自上海碧云天生物技术股份有限公司；三色预染蛋白Marker（批号WJ102）、PAGE凝胶快速制备试剂盒（批号PG213）购自上海雅酶生物科技有限公司；剪切型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（cleaved cystein-asparate protease-3，cleaved Caspase-3）兔多克隆抗体（批号9661S）、磷脂酰肌醇3-激酶（phosphatidylinositol 3-kinase，PI3K）兔多克隆抗体（批号4292S）、p-PI3K兔多克隆抗体（17366S）、Akt兔多克隆抗体（批号9272S）、p-Akt兔多克隆抗体（批号4060S）购自美国CST公司；B淋巴细胞瘤-2（B-cell lymphoma-2，Bcl-2）兔多克隆抗体（批号26593-1-AP）、咬合蛋白（Occludin）兔多克隆抗体（批号27260-1-AP）、闭锁小带蛋白1（Zonula occluden-1，ZO-1）兔多克隆抗体（批号21773-1-AP）购自武汉三鹰生物技术有限公司；Bcl-2相关X蛋白（Bcl-2 associated X protein，Bax）兔多克隆抗体（批号A0207）购自武汉爱博泰克生物科技有限公司；PI3K抑制剂LY294002（批号HY-10108）购自美国MCE公司。 1.4 仪器 Tissuelyser组织研磨机（上海净信实业发展有限公司）；5425R型台式离心机（德国Eppendorf公司）；3K30型低温离心机（德国Heraeus公司）；PowerPac通用电泳仪、Mini-PROTEAN Tetra电泳槽（美国Bio-Rad公司）；eBlot L1型转膜仪（南京金斯瑞生物科技股份有限公司）；G BOX型凝胶成像系统（英国SYNGENE公司）；BX53型光学倒置相差显微镜（日本Olympus公司）；DM2500型荧光显微镜（德国Leica公司）。 2 方法 2.1 体内实验 2.1.1 动物模型制备、分组及给药 48只SD大鼠适应性饲养1周后，称定体质量，随机取12只作为对照组，36只作为造模组。禁食12 h后以ip STZ溶液（60 mg/kg）构建糖尿病模型，注射STZ 72 h后随机测得3次血糖值≥16.7 mmol/L时认为造模成功[13]，成模率为86.1%。将造模成功的31只大鼠称定体质量后随机分为模型组（n＝11）、白芷组（n＝10）、羟苯磺酸钙组（n＝10）。白芷组给药剂量参考课题组前期研究结果[11]，以1.25 g/(kgd)剂量ig给药，羟苯磺酸钙以135 mg/(kgd)剂量ig给药，连续给药12周，药物使用羟甲基纤维素钠溶液溶解。 2.1.2 视网膜组织病理学观察 （1）苏木素-伊红（HE）染色：末次给药后处死大鼠，摘眼球置于4%多聚甲醛溶液固定，石蜡包埋后切片进行HE染色，在显微镜下观察其病理学变化。 （2）PAS染色：显微镜下剥离视网膜后PBS摇洗3次，加入3%胰蛋白酶溶液，置于37 ℃恒温箱中消化视网膜；用吸管将消化好的血管脉络转移到干净的载切片上并晾干至完全干燥；干燥后的切片在自来水中冲洗3 min，过碘酸溶液氧化5 min，ddH2O浸洗2次；Schiff Ragent溶液染色5 min；自来水浸洗10 min，然后用苏木素溶液染细胞核2 min，ddH2O浸洗使其返蓝；依次放入70%乙醇1 min、80%乙醇1 min、90%乙醇1 min、无水乙醇3 min后，中性树胶封片并拍照保存。 2.1.3 TUNEL染色检测视网膜细胞凋亡情况 切片脱蜡脱水后滴加蛋白酶K，37 ℃孵育20 min；PBS洗涤3次，每次10 min；滴加50 μL TUNEL检测液，37 ℃避光孵育60 min；PBS洗涤3次，每次10 min；使用含DAPI抗荧光淬灭封片液封片后，在显微镜下观察拍照。 2.1.4 Western blotting检测视网膜组织Bax、Bcl-2、cleaved Caspase-3、Occludin、ZO-1、p-PI3K、PI3K、p-Akt、Akt蛋白表达 取各组视网膜组织，加入裂解液提取蛋白，蛋白样品经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳，转至PVDF膜，于5%牛奶中封闭，室温摇床振荡1 h；TBST洗膜3次后加入一抗稀释液，4 ℃摇床孵育过夜；回收一抗，TBST清洗后加入二抗孵育1 h；弃二抗，TBST洗膜后使用ECL显影液曝光。 2.2 体外实验 2.2.1 细胞培养 ARPE-19细胞用含10%胎牛血清、100 μg/mL链霉素和100 μg/mL青霉素的DMEM/F12培养基，在37 ℃、5% CO2的培养箱中进行培养。 2.2.2 TUNEL染色检测ARPE-19细胞凋亡 取对数生长期的ARPE-19细胞，以1×105个/孔接种于24孔板中，培养24 h。设置对照组、高渗组、高糖组、白芷组和羟苯磺酸钙组。对照组在含5.5 mmol/L葡萄糖的培养基中培养；高渗组在含5.5 mmol/L葡萄糖和25 mmol/L甘露醇的培养基中培养；高糖组在含30 mmol/L葡萄糖的培养基中培养；白芷组在含30 mmol/L葡萄糖的培养基中加入白芷继续培养；羟苯磺酸钙组在含30 mmol/L葡萄糖的培养基中加入羟苯磺酸钙继续培养。通过CCK-8实验结果确定白芷给药浓度为150 μg/mL，羟苯磺酸钙给药浓度为20 μmol/L。各组细胞干预24 h后，PBS洗涤1次，加入4%多聚甲醛固定细胞30 min；用PBS洗涤后加入含0.3% Triton X-100的PBS，室温孵育5 min。滴加50 μL TUNEL检测液，37 ℃避光孵育60 min后PBS清洗3次；使用含DAPI的抗荧光淬灭剂封片，荧光显微镜下观察并拍照。 2.2.3 Western blotting检测ARPE-19细胞Bax、Bcl-2、cleaved Caspase-3、Occludin、ZO-1蛋白表达 按“2.2.2”项下方法处理细胞，收集细胞，提取蛋白，按“2.1.4”项下方法检测Bax、Bcl-2、cleaved Caspase-3蛋白表达。 2.2.4 免疫荧光检测ARPE-19细胞Occludin、ZO-1表达 按“2.2.2”项下方法处理细胞，PBS洗涤，每孔加入1 mL 4%组织细胞固定液，常温固定30 min。PBS洗涤后加入1%牛血清白蛋白封闭，于37 ℃恒温箱中孵育30 min；弃封闭液，PBS摇洗后每孔加入200 μL一抗（1∶500），4 ℃摇床孵育过夜。回收一抗，清洗细胞后每孔加入200 μL荧光二抗（1∶200），避光孵育1 h后弃二抗，每孔加入200 μL DAPI溶液避光染核15 min，显微镜下观察并拍照保存。 2.2.5 Western blotting检测PI3K抑制剂LY294002对Bax、Bcl-2、cleaved Caspase-3、PI3K/Akt通路蛋白表达的影响 设置对照组、高糖组、白芷（150 μg/mL）组和白芷（150 μg/mL）＋LY294002（10 μmol/L）组，给予药物干预24 h 后，收集细胞，提取蛋白，按“2.1.4”项下方法检测相关蛋白表达。 2.3 统计学分析 所有数据均采用Graphpad Prism 9.0软件进行统计学处理并作图，实验数据以表示。两组间的比较采用独立样本t检验，多组间的比较采用单因素方差分析。 3 结果 3.1 白芷颗粒对糖尿病大鼠视网膜病理学变化的影响 HE染色结果如图1所示，对照组大鼠视网膜组织结构清晰，神经节细胞排列紧密，内核层和外核层细胞结构完整、紧密；模型组大鼠视网膜组织毛细血管轻微扩张，内、外核层组织疏松、厚度变薄，细胞排列紊乱；与模型组比较，白芷组和羟苯磺酸钙组以上病理变化均有所缓解。 图片 PAS结果如图2所示，与对照组比较，模型组无功能毛细血管明显增加；与模型组比较，白芷组和羟苯磺酸钙组抑制了无功能毛细血管的形成。 图片 3.2 白芷颗粒对糖尿病大鼠视网膜细胞凋亡的影响 如图3所示，与对照组比较，模型组红色荧光明显增加，提示糖尿病大鼠视网膜细胞凋亡水平增加；与模型组比较，白芷组和羟苯磺酸钙组荧光强度明显减弱，提示药物治疗后可以减轻糖尿病大鼠视网膜细胞凋亡水平。 图片 3.3 白芷颗粒对糖尿病大鼠视网膜组织凋亡相关蛋白表达的影响 如图4所示，与对照组比较，模型组大鼠视网膜组织中Bax/Bcl-2、cleaved Caspase-3蛋白表达水平明显升高（P＜0.05）；与模型组比较，白芷组和羟苯磺酸钙组Bax/Bcl-2、cleaved Caspase-3蛋白表达水平明显降低（P＜0.05），提示白芷颗粒能够抑制糖尿病大鼠视网膜细胞的凋亡。 图片 3.4 白芷颗粒对糖尿病大鼠视网膜组织中Occludin、ZO-1蛋白表达的影响 如图5所示，与对照组比较，模型组大鼠视网膜组织中Occludin和ZO-1蛋白表达水平显著降低（P＜0.05）；与模型组比较，白芷组和羟苯磺酸钙组Occludin和ZO-1蛋白表达水平均显著升高（P＜0.05），提示白芷颗粒能够在一定程度上保护糖尿病大鼠视网膜屏障。 图片 3.5 白芷颗粒对糖尿病大鼠视网膜组织中PI3K/Akt通路相关蛋白表达的影响 如图6所示，与对照组比较，模型组大鼠视网膜组织中p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt显著降低（P＜0.05）；与模型组比较，白芷组和羟苯磺酸钙组鼠视网膜组织中p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt显著升高（P＜0.05），提示白芷颗粒可能通过调控PI3K/Akt信号通路减轻DR损伤。 图片 3.6 白芷颗粒对高糖诱导的ARPE-19细胞凋亡的影响 如图7所示，与对照组比较，高糖刺激显著增加了细胞凋亡（P＜0.05），红色荧光明显增多；与模型组比较，白芷组和羟苯磺酸钙组细胞凋亡率显著降低（P＜0.05），红色荧光明显减少。表明白芷颗粒可以抑制高糖环境下ARPE-19细胞的凋亡。 3.7 白芷颗粒对高糖诱导的ARPE-19细胞中凋亡相关蛋白表达的影响 如图8所示，与对照组比较，模型组细胞Bax/Bcl-2、cleaved Caspase-3蛋白表达水平明显升高（P＜0.05）；与模型组比较，白芷组和羟苯磺酸钙组Bax/Bcl-2、cleaved Caspase-3蛋白表达水平明显降低（P＜0.05），表明白芷颗粒能够在一定程度上抑制ARPE-19细胞凋亡从而减轻高糖环境下的视网膜损伤。 图片 3.8 白芷颗粒对高糖诱导的ARPE-19细胞中Occludin、ZO-1表达的影响 为了进一步验证白芷对视网膜屏障的保护作用，采用免疫荧光技术考察白芷对高糖诱导下ARPE-19细胞Occludin以及ZO-1表达的影响。如图9所示，与对照组比较，模型组细胞间连接被破坏，Occludin、ZO-1荧光强度明显降低（P＜0.05）；与模型组比较，白芷组和羟苯磺酸钙组细胞中紧密连接有所恢复，Occludin、ZO-1荧光强度显著增加（P＜0.05）。 图片 3.9 白芷颗粒对高糖诱导的ARPE-19细胞中紧密连接相关蛋白表达的影响 如图10所示，与对照组比较，模型组细胞Occludin、ZO-1蛋白表达水平明显降低（P＜0.05）；与模型组比较，白芷组和羟苯磺酸钙组Occludin、ZO-1蛋白表达水平明显升高（P＜0.05），与免疫荧光结果一致，说明白芷颗粒能够通过增强细胞间紧密连接从而保护高糖诱导的ARPE-19细胞损伤。 图片 3.10 白芷颗粒通过激活PI3K/Akt通路减轻细胞凋亡保护视网膜屏障损伤 如图11所示，与对照组比较，模型组p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt明显降低（P＜0.05），PI3K/Akt信号通路受到抑制；与模型组比较，白芷组p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt明显升高（P＜0.05）；给予PI3K抑制剂LY294002干预后，Akt磷酸化受到抑制（P＜0.05），Bax/Bcl-2、cleaved Caspase-3蛋白表达明显升高（P＜0.05），提示白芷颗粒可能通过PI3K/Akt通路抑制细胞凋亡从而减轻视网膜屏障损伤。 图片 4 讨论 DR是糖尿病患者中最常见的一种微血管并发症，其病理过程与血-视网膜屏障（blood retinal barrier，BRB）密切相关[14]。慢性高血糖会破坏视网膜屏障，引起毛细血管中周细胞的丢失以及基底膜增厚，从而使得视网膜中的血管通透性增加，最终导致BRB分解[15-16]。BRB主要包括内屏障和外屏障，其中外屏障主要由视网膜色素上皮（retina pigment epithelium，RPE）及其连接构成[17-18]。细胞间的连接是屏障功能正常发挥作用的基础，紧密连接主要由Occludin、ZO-1等组成[19]。在糖尿病患者中，Occludin与BRB损伤密切相关，高糖会使得Occludin表达选择性降低，BRB通透性增加。相关实验表明，STZ诱导的糖尿病大鼠模型在8周后采用伊文思蓝染色观察发现其渗漏量与对照组相比增加了10%，免疫荧光结果显示糖尿病大鼠中Occludin表达量明显降低[20]。ZO家族中，ZO-1位于上皮细胞和内皮细胞的封锁小带中[21]。在DR早期阶段，氧化应激及炎症等会诱导炎症因子和趋化因子上调，导致ZO-1表达降低，视网膜屏障被破坏，从而出现出血等症状[22]。本研究结果显示，与对照组比较，模型组大鼠Occludin、ZO-1表达明显降低，提示糖尿病大鼠视网膜组织中紧密连接被破坏，BRB受损；与模型组比较，白芷给药后Occludin、ZO-1表达量明显升高，表明白芷在一定程度上具有保护BRB功能的作用。在体外研究中，采用免疫荧光和Western blotting法观察ARPE-19细胞中紧密连接及其蛋白表达情况，结果发现白芷干预后可以增加细胞间Occludin、ZO-1表达，发挥保护ARPE-19细胞的作用。 高糖诱导的视网膜细胞凋亡是早期DR的重要发病机制之一[23-24]。线粒体中高血糖诱导的ROS积累可以使线粒体膜通透性增加，进而触发视网膜线粒体释放细胞色素C激活Caspase-9，然后通过一系列生物过程激活Caspase-3导致细胞凋亡[25]。PI3K/Akt信号通路在视网膜细胞凋亡过程中起着至关重要的作用[26]。活化的Akt会引起下游磷酸化级联反应，从而促进细胞存活[27]。在高糖环境下PI3K/Akt信号通路传导受阻，使促凋亡因子Bax表达上调，抗凋亡因子Bcl-2表达受到抑制，之后进一步激活Caspase3后导致细胞凋亡增加[28]。本研究发现，白芷颗粒可以降低糖尿病大鼠视网膜组织与ARPE-19细胞中Bax/Bcl-2、cleaved Caspase-3的蛋白表达，TUNEL染色也证实了这一表现。本研究进一步测定了ARPE-19细胞中PI3K/Akt信号通路及其下游凋亡相关蛋白表达情况，结果显示与高糖组比较，白芷干预后p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt蛋白表达水平明显增加。使用PI3K抑制剂LY294002后抑制了Akt的磷酸化过程，同时下游Bax/Bcl-2蛋白表达增加、cleaved Caspase-3蛋白表达升高，由此推测白芷颗粒可能通过PI3K/Akt通路抑制细胞凋亡。 综上，本研究发现白芷颗粒可能通过调控PI3K/Akt信号通路减轻视网膜细胞凋亡保护BRB损伤，从而延缓早期DR，为白芷治疗DR提供了潜在机制研究。

摘要：中药白芷具有广泛的药理作用，其主要有效成分香豆素类化合物的分离提取和结构鉴定已有了长足发展。现代色谱技术在中药白芷研究中的广泛运用，使白芷的定量分析方法体系、质量指标体系和提取工艺优化等研究有了新的进展，文章对近5年的有关文献作了综述。　　关键词：色谱法；白芷；化学成分；质量；鉴定　　Research Development of Angelica dahurica by Chromatography 　　MENG Lanzhen， NIE Hong， XU Zhenxia， XIONG Aihua， LIU Jianjun　　（1.Department of Pharmacology of Pharmacy, College of Jinan University，Guangzhou 510632，China； 2.The Test Technology Center of Pharmacy, College of Jinan University, Guangzhou 510632, China）　　Abstract:The Angelica dahurica has been claimed to be effective on many diseases，and also there are great development for the isolation and instrumental analyses of its main effective components. The application of chromatography technology greatly advanced and accelerated the research of Angelica dahurica.　　Key words:Chromatography；Angelica dahurica；Development research　　白芷为伞形科植物白芷Angelica dahurica（Fisch. ex Hoffm.）Benth. et Hook. f. 或杭白芷Angelica dahurica（Fisch. ex Hoffm.） Benth. et Hook. f. var. formosana （Boiss.） Shan et Yuan 的干燥根。性温，味辛。具有散风除湿、通窍止痛、消肿排脓的功效。可用于治疗感冒头痛、眉棱骨痛、烧伤等症。色谱法（chromatography）或称层析法，其原理是利用不同组分在两相中的吸附能力、分配系数、离子交换能力或分子大小等性质的微小差别，经过连续多次在两相间的质量交换，使不同的组分得到分离，是分离分析多组混合物的分析方法，在各个学科领域中的应用日益普遍［1］。从经典的平板色谱到柱色谱，[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]技术（GC）、高效液相色谱法（HPLC）、超临界流体色谱法（SFC）到毛细管电泳法（CE）、色谱-光谱连用等现代色谱技术已广泛运用于中药白芷的研究。[b]　　1 白芷中化学成分的提取分离[/b]　　1.1 化学成分的分离结合现代光谱技术，近年陆续从白芷中发现了新结构的香豆素类化合物，如从日本白芷中分离得到七种新的bifuranocoumarins［2］，从韩国白芷的茎部首次发现6［（1S），2（R）2，3二羟基1甲氧基3甲基丁酸］7甲氧基香豆素［3］，从根部得到两种新的呋喃香豆素化合物［4］。国内游小琳等［5］首次发现白芷水溶性成分中丁二酸，葡萄糖，蔗糖等6个化学成分。聂红等［6］运用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/bp][color=#3333ff]气质联用[/color][/url]（GCMS）技术发现白芷的水蒸气蒸馏所得的油状物的主要成分为甲基环癸烷（22.4%）、1十二烷醇（8.6％）等。　　1.2有效成分的提取刘文等［7］认为采用超临界流体CO2萃取白芷中欧前胡素速度快，HPLC法测定精度高。刘红梅等运用GCMS技术对白芷中香豆素类成分的最佳超临界流体CO2萃取工艺（萃取温度50℃，萃取压力21 MPa、萃取时间3.0 ｈ，分离压力6.5 MPa，粉碎度20目）的超临界样品进行了分析鉴定，主要成分氧化前胡素、欧前胡素、异欧前胡素的相对含量分别达到42.40％，22.14％和12.12％［ 8，9］。　　高速逆流色谱法［10］（HighSpeed CounterCurrent Chromatography）是一种可以在短时间内实现高效分离和分析的方法，具有无固体载体，可以避免分离样品与固体载体表面产生化学反应而变性和不可逆吸附等优点，已广泛应用于天然药物研究。Liu等［11］用该法成功分离测定了白芷中的欧前胡素、异欧前胡素和氧化前胡内酯，其上相固定相为正己烷甲醇水（5∶5∶5，V/V），下相流动相前150 min正己烷甲醇水（5∶5∶5，V/V），后150 min正己烷甲醇水（5∶7∶3，V/V）体积以线性递增，鉴定各峰分离物，纯度达到了98％以上。运用该技术还分离了丹参中的丹酚酸B［12］、川芎中的川芎嗪［13］，天麻中的天麻素［14］等多种化学成分。　　高效毛细管电泳法（High Performance Capillary Electrophoresis）为近年来发展最快的一种分离分析技术，具有分离效率高、分析速度快和样品用量少等特点。毛细管胶束电动色谱（Micellar Electrokinetic Capillary Chromatography）为它的一个重要分支，具有分离效果好，速度快，操作简单，费用低等优点，已迅速进入药物分析领域。其原理是向载体中加入表面活性剂，活性剂浓度大于临界值时，则在毛细管内形成胶束，被分析物受到电渗流和胶束相与水相之间分配的双重影响而实现分离。Wang［15］等成功的采用该法简单快速的从白芷中分离得到欧前胡素、异欧前胡素和东莨菪苷元（7羟6甲氧香豆素）。该技术还应用于测定西洋参中人参皂苷Rb1，Re的含量［16］，分离鉴定槐属植物苦豆子、苦参、山豆根中喹嗪烷类生物碱［17］，最近联用电化学检测器首次分离测定木犀科植物女贞叶和果实中的D甘露糖、蔗糖、葡萄糖和果糖［18］。[b]　　2 白芷的质量控制及鉴定[/b]　　HPLC被广泛应用于白芷的质量控制和鉴定：人工四倍体白芷主要有效成分欧前胡素的含量较原二倍体白芷成倍提高［19］；不同产地白芷中2种香豆素总量存在较大差异［20］；提取挥发油后欧前胡素损失较大［21］；建立了白芷药材质量的控制方法，其色谱条件：流动相甲醇水（70∶30），检测波长254 nm，欧前胡素在0.974～3.896 μg，异欧前胡素在0.360～2.640 μg范围内线性关系良好［22］。或同时检定出欧前胡素、异欧前胡素、比克白芷素及水化氧化前胡素，且其中的欧前胡素和异欧前胡素含量分别不得低于0.1%和0.04%［23］。王梦月等［24］证实白芷果实中总香豆素含量最高，茎中最低；以晒干法的含量最高。抽苔白芷中香豆素的含量不及白芷含量的50%，不能作白芷药用。[b]　　3 体内白芷有效成分的测定[/b]　　白芷的活性成分白当归素，是一种醛糖还原酶抑制剂，可用于治疗糖尿病性白内障。Kwon等［25］研究分析它的肾代谢产物。尿样经液液提取，GCMS、HPLCDAD以及H1核磁共振波谱等分析，发现两种主要代谢物分别是白当归素侧链经C脱甲基或O脱烷而产生，另一代谢物认为可能是由白当归素被羟基化而产生。　　Kazuhisa等［26］利用柱切换HPLC法快速检测大鼠血浆中的白当归素和水化氧化前胡素。血浆样品用过氯酸脱蛋白，离心后上清液制备成供试品。流动相为乙睛水（20∶80），流速1 ml/min，检测波长260 nm，柱温40℃。龚志南等［27,28］用HPLC测大鼠胃液、肠液、血液和脑组织中香豆素类化合物的含量，以考查其药动学参数，评价提取工艺指标和最佳剂型。[b]　　4 结语[/b]　　综上所述，现代色谱技术应用于白芷的研究，可以快速、高效地分离纯化有效成分［11，15］，优化提取工艺［7～9］，建立准确、重复性好的质量标准［19～24］等，但在指纹图谱方面的研究还未见报道。可见色谱技术以其分离效能高、分析速度快、定量结果准、易于自动化等优点，成为中药与天然药物有效成分的确定、鉴定等定性与定量工作以及分离纯化过程中最有效的方法。可以预见色谱技术必然会更广泛地应用于中药的制备和质量控制过程中，加速中药生产工艺的现代化进程。　　目前色谱技术应用于白芷等中药研究存在的问题有：一方面中药成分复杂、质量影响因素多，单用一种色谱技术研究中药捉襟见肘，如GC不适用于分析热不稳定性和不能气化的成分；HPLC则对强极性组分分离效果不好，色谱柱容易受污染，仪器运转费用高；新兴的高速逆流色谱法和高效毛细管电泳法，可以很好的为中药药效学评价及定性定量分析等提供技术支持，但在国内尚未普及和系统化。因此要求色谱技术在自身不断完善的基础上，结合其他学科的高新技术，推陈出新，以便更好地为我国中药现代化服务。另一方面该技术在中药活性成分筛选与作用机理研究方面期待突破性的进展。生物色谱法是生命科学和色谱分离技术结合形成的高新技术［29，30］，这种模型既具有很好的生物相关性又克服了成分分离与效应脱节的弊端，已成功应用于药物活性成分的筛选和作用机理的研究［31～32］，如果联用二极管列阵和高分辨率质谱等技术，将实现中药中微量活性成分的分离纯化和结构鉴定及活性测定的高度一体化。

[font=宋体]白芷以根入药，夏、秋间叶黄时采挖，除去须根及泥沙，晒干或低温干燥，切片，生用。[/font][font=宋体]味辛，性温，归肺、胃、大肠经，有解表散寒，祛风止痛，宣通鼻窍，燥湿止带，消肿排脓的功效。[/font][b][font=宋体][color=#ffc000]解表散寒[/color][/font][/b][font=宋体]白芷辛散温通，祛风解表散寒之力较温和，而以止痛、通鼻窍见长，常与防风、羌活、川芎等祛风散寒止痛药同用，治疗外感风寒，头身疼痛，鼻塞流涕之症，如九味羌活汤（《此事难知》）。[/font][b][font=宋体][color=#ffc000]祛风止痛[/color][/font][/b][font=宋体][/font][font=宋体]白芷辛散温通，长于止痛，且善入足阳明胃经，常用于治疗阳明经头额痛以及牙龈肿痛。单用白芷可治疗外感风寒引起的阳明头痛，眉棱骨痛，头风痛等症，即都梁丸（《百一选方》）；或与防风、细辛、川芎等祛风止痛药同用，如川芎茶调散（《和剂局方》）；治疗外感风热者，可配伍薄荷、菊花、蔓荆子等药。治疗风冷牙痛，可与配伍细辛、全蝎、川芎等同用，如一捻金散（《御药院方》）；治疗风热牙痛，可配伍石膏、荆芥穗等药，如风热散（《仙拈集》）。若风寒湿痹，关节疼痛，屈伸不利者，可与苍术、草乌、川芎等药同用，如神仙飞步丹（《袖珍方》）。[/font][b][font=宋体][color=#ffc000]宣通鼻窍[/color][/font][/b][font=宋体][/font][font=宋体]白芷祛风、散寒、燥湿，可宣利肺气，升阳明清气，通鼻窍而止疼痛，常与苍耳子、辛夷等散风寒、通鼻窍药同用，治疗鼻鼽、鼻渊等鼻科疾病引起的鼻塞不通，流涕不止，前额疼痛，如苍耳子散（《济生方》）。[/font][b][font=宋体][color=#ffc000]燥湿止带[/color][/font][/b][font=宋体][/font][font=宋体]白芷辛温香燥，善除阳明经湿邪而燥湿止带。常与鹿角霜、白术、山药等温阳散寒、健脾除湿药同用治疗寒湿下注，白带过多者；常与车前子、黄柏等清热利湿、燥湿药同用治疗湿热下注，带下黄赤者。[/font][b][font=宋体][color=#ffc000]消肿排脓[/color][/font][/b][font=宋体][/font][font=宋体]白芷辛散温通，对于疮疡初起，红肿热痛者，有散结消肿止痛的功效，常与金银花、当归等药配伍，如仙方活命饮（《校注妇人良方》）；若脓成难溃者，常与益气补血药同用，共奏托毒排脓之功，如《外科正宗》托里消毒散、《医宗金鉴》托里透脓散，其均与人参、黄芪、当归等药同用。[/font][font=宋体]此外，本品祛风止痒，可用治皮肤风湿瘙痒。[/font][font=宋体]本品辛香温燥，阴虚血热者忌服。[/font]

[font=宋体][font=宋体]泛素化是一种细胞内的蛋白质标记系统，蛋白质泛素化是指将小的蛋白质泛素共价地连接到其他蛋白质分子上的过程。泛素（[/font][font=Calibri]ubiquitin[/font][font=宋体]）是一种高度保守的蛋白质，其结构由[/font][font=Calibri]76[/font][font=宋体]个氨基酸残基组成。泛素连接到目标蛋白质上的过程，经历了泛素激活、泛素转移和靶蛋白接受三个主要步骤。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]蛋白质泛素化具有多种特点，例如它是高度选择性的，不同蛋白质泛素化的位置和数量可以影响其功能；它是可逆的，通过去泛素化反应可以调控蛋白质的泛素化状态；它还是动态调控的，受到多种因素的调控，如细胞信号通路和环境刺激。[/font][b][font=宋体]泛素化蛋白大小：[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]蛋白泛素化是指将小蛋白颗粒泛素（[/font][font=Calibri]Ubiquitin[/font][font=宋体]）与其他蛋白质共价结合的修饰过程。 泛素化修饰通常会导致泛素共价连接在蛋白质的赖氨酸残基上形成多重泛素链。 这种蛋白质泛素化增加了蛋白质的分子量，因为每个泛素分子的质量大约为[/font][b][font=Calibri]8.5[/font][font=宋体]千达尔顿（[/font][font=Calibri]kDa[/font][/b][font=宋体][b]）[/b]。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]泛素化蛋白质组学在许多领域有重要的应用，主要包括：[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]①疾病机制研究：泛素化是一种广泛存在于细胞中的蛋白质修饰方式，参与了细胞的生长、分化、修复和调控等多个生命活动。泛素化蛋白质组学的研究可以帮助我们了解泛素化修饰的生物学功能和调控机制，为疾病发生机制和治疗策略的研究提供重要线索。例如，在癌症、代谢综合征、神经退行性疾病等疾病中，则会出现异常泛素化。[/font][font=宋体]②药物研发：通过分析药物对泛素化蛋白质的影响，可以评估药物的效力和选择性，为药物研发提供指导。[/font][font=宋体]③临床诊断：泛素化蛋白质组学鉴定与定量分析技术可以揭示细胞调控的机制，通过分析泛素化蛋白质的组学数据，可以确定泛素化修饰在细胞信号转导、蛋白质降解和细胞周期调控等过程中的重要作用。此外，通过比较病态和正常样品中泛素化蛋白质的差异，可以鉴定与疾病发生发展相关的泛素化修饰靶点，并进一步理解疾病的分子机制。因此，这些技术也可用于临床诊断。[/font][font=宋体]④蛋白质降解调控：在癌症、神经退行性疾病和免疫相关疾病等病症中，蛋白质降解调控出现异常。而泛素化蛋白组在调控蛋白质降解中发挥重要作用。通过与泛素连接，目标蛋白质被送入蛋白酶体或蛋白酶体样体中进行降解。这个过程是细胞清除异常、老化或受损蛋白质的重要途径。[/font][font=宋体]⑤高通量技术应用：高通量泛素化蛋白质组学鉴定与定量分析技术的发展包括质谱鉴定和抗体鉴定两种方法。质谱鉴定技术利用质谱仪的高灵敏度和分辨率，能够鉴定泛素化修饰的蛋白质及其泛素化位点。抗体鉴定技术则通过特异性抗体的使用，可以富集和鉴定泛素化修饰的蛋白质。这些技术为全面了解泛素化在细胞中的作用机制和调控网络提供了可能。[/font][font=宋体]总的来说，泛素化蛋白质组学在多个领域都有重要的应用价值，推动了我们对生命过程的深入理解以及疾病治疗的创新发展。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]更多详情关于[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review][b]蛋白资源[/b][/url]详情可以参看：[/font][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review][u][font=宋体][color=#0000ff][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review[/font][/color][/font][/u][/url][b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州：蛋白与抗体的专业引领者，欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b]

[font=黑体]不同种质白芷质量分析 [/font][font=宋体]本实验将各主产区的不同种质白芷引种遂宁白芷基地统一播种栽培，可以最大限度排除生长环境和栽培年限等因素的影响，差异的产生主要来源于种质的不同，即原种质遗传物质的差异。[/font]PCA[font=宋体]和[/font]HCA[font=宋体]结果显示，[/font]5[font=宋体]个种质白芷被分为了[/font]2[font=宋体]类，其中川白芷、南川白芷及亳白芷聚为一类，祁白芷、禹白芷聚为一类，推测原因，可能由于其基原和地环境有关。《中华本草》[/font][sup][32][/sup][font=宋体]载：[/font][font=宋体]“[/font][font=宋体]杭白芷：产浙江杭州、余姚、临海；四川遂宁、达县、内江和重庆市亦产。产于四川者又称川白芷。祁白芷：产河北安国，河南长葛、禹县。产河南者又称禹白芷。[/font][font=宋体]”[/font][font=宋体]根据《遂宁县志》记载，川白芷距今已有[/font]400[font=宋体]～[/font]600[font=宋体]年的栽培历史，相传为明朝时期从浙江带回种籽（杭白芷）于四川遂宁栽培[/font][sup][33][/sup][font=宋体]。由此可见，川白芷与南川白芷二者为同一基原，是《中国植物志》所载的杭白芷[/font][i]A. dahurica [/i]cv.‘[i]Hangbaizhi[/i]’[sup][34][/sup][font=宋体]。禹白芷相比于川白芷栽培历史较短，但也有[/font]200[font=宋体]余年，王梦月等[/font][sup][35][/sup][font=宋体]经本草考证认为，明中期河南禹州开始有栽培白芷，应是华北一带的野生白芷[/font][i]A. dahurica[/i][font=宋体]经过驯化后形成的栽培品，祁白芷的栽培历史不早于[/font]20[font=宋体]世纪[/font]30[font=宋体]年代，可能是从河南引种栽培而得，其与禹白芷为同一品种[/font][i]A. dahurica[/i] cv.‘[i]Qibaizhi[/i]’[sup][34][/sup][font=宋体]。而亳白芷栽培历史最短，大量栽培始于[/font]20[font=宋体]世纪[/font]70[font=宋体]年代末，由于安徽白芷产业的急速发展，各地引种导致其种质资源复杂，品质也参差不齐[/font][sup][36-37][/sup][font=宋体]。[/font][font=宋体]不同种质白芷[/font]8[font=宋体]种香豆素类成分含量测定结果表明，不同种质白芷成分存在较大差异，总香豆素含量显示：川白芷＞南川白芷＞亳白芷＞禹白芷＞祁白芷，说明川白芷在总香豆素类成分含量方面具有显著优势。不同种质白芷质量综合得分显示：川白芷[/font][i]F[/i][font=宋体]＞南川白芷[/font][i]F[/i][font=宋体]＞禹白芷[/font][i]F[/i][font=宋体]＞祁白芷[/font][i]F[/i][font=宋体]＞亳白芷[/font][i]F[/i][font=宋体]，结果表明川白芷质量最优，而亳白芷质量较差，可能是其基原混杂导致。传统认为，杭白芷、川白芷品质上乘，疗效更好。民国《药物出产辩》[/font][sup][38][/sup][font=宋体]载：[/font][font=宋体]“[/font][font=宋体]产四川为正[/font]……[font=宋体]有产浙江宁波杭州等，名杭芷，又名宁波芷[/font],[font=宋体]又名老头芷，味辛辣，不适用。有名会芷，产河南，如无川芷，则用会芷亦可。[/font][font=宋体]”[/font][font=宋体]因此，为了确保白芷药材质量，必须从源头把关，加强对白芷种质资源的管理，充分保障质量上乘的川（杭）白芷种质纯正。 [b][color=#ffffff]1 [font=黑体]材料[/font][/color][/b]1.1 [font=黑体]仪器[/font]Ulti Mate 3000[font=宋体]型高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱仪[/color][/url]，美国[/font]Thermo Fisher[font=宋体]公司；[/font]Agilent Zorbax Eclipse XDB-C[sub]18[/sub][font=宋体]（[/font]250 mm[font=宋体]×[/font]4.6 mm[font=宋体]，[/font]5 μm[font=宋体]）；[/font]KQ 500DE[font=宋体]型超声波清洗器，昆山超声仪器有限公司；[/font]TD6M[font=宋体]台式低速大容量离心机，常州金坛良友仪器有限公司；[/font]DHG-9245A[font=宋体]型电热恒温鼓风干燥箱，上海善志仪器设备有限公司；[/font]BP210S[font=宋体]型十万分之一电子天平、[/font]SQP[font=宋体]型万分之一电子天平，北京赛多利斯科学仪器有限公司；[/font]JSCQHW[font=宋体]型计重电子秤，昆山巨天仪器设备有限公司，[/font]YLS16A[font=宋体]（[/font]pro[font=宋体]）型烘干法水分测定仪，上海天美天平仪器有限公司；[/font]UPR-Ⅱ[font=宋体]型四川优普超纯水机，四川优普超纯科技有限公司。[/font]1.2 [font=黑体]药材与试剂[/font][font=宋体]将不同种质白芷的种子统一播种，在排除生长环境因素的影响的条件下评价其质量。所有白芷种子均引自河北安国、河南禹州、安徽亳州、四川遂宁、重庆南川等白芷道地产区及主产区，在四川省遂宁市川白芷科研示范基地进行统一播种管理，分别称为祁白芷（[/font]Q1[font=宋体]～[/font]Q7[font=宋体]）、[/font][font=宋体]禹白芷[/font][font=宋体]（[/font]Y1[font=宋体]～[/font]Y7[font=宋体]）[/font][font=宋体]、亳白芷（[/font]B1[font=宋体]～[/font]B7[font=宋体]）、川白芷（[/font]C1[font=宋体]～[/font]C7[font=宋体]）、南川白芷（[/font]N1[font=宋体]～[/font]N7[font=宋体]），于[/font]2021[font=宋体]年[/font]3[font=宋体]月[/font][font=宋体]～[/font]7[font=宋体]月（[/font]3[font=宋体]月[/font]28[font=宋体]日、[/font]4[font=宋体]月[/font]28[font=宋体]日、[/font]5[font=宋体]月[/font]30[font=宋体]日、[/font]6[font=宋体]月[/font]15[font=宋体]日、[/font]6[font=宋体]月[/font]30[font=宋体]日、[/font]7[font=宋体]月[/font]15[font=宋体]日、[/font]7[font=宋体]月[/font]30[font=宋体]日）根据白芷不同物候期采集。本实验所用白芷药材均经成都中医药大学药学院裴瑾教授鉴定为伞形科植物杭白芷[/font] [i]A. dahurica[/i] (Fisch. ex Hoffm.) Benth. etHook. f. var. [i]formosana[/i] (Boiss.) Shanet Yuan[font=宋体]的新鲜根。[/font][font=宋体]白当归素（批号[/font]CHB210104[font=宋体]）、佛手柑内酯（批号[/font]CHB201127[font=宋体]）、氧化前胡素（批号[/font]CHB210113[font=宋体]）、欧前胡素（批号[/font]CHB210108[font=宋体]）、珊瑚菜素（批号[/font]CHB210106[font=宋体]）、异欧前胡素（批号[/font]CHB210110[font=宋体]），对照品均购于成都克洛玛生物科技有限公司，质量分数均≥[/font]98%[font=宋体]。水为超纯水，甲醇、乙腈、甲酸均为色谱纯，美国[/font]Thermo Fisher[font=宋体]公司；提取样品所用无水乙醇及其他试剂为分析纯，成都市科隆化学品有限公司。[/font][color=#ffffff][b]2 [font=黑体]方法[/font][/b][/color]2.1 [font=黑体]溶液的制备[/font]2.1.1 [font=宋体]供试品溶液制备[/font] [font=宋体]精密称取本品粉末（过三号筛）[/font]0.5 g[font=宋体]，置[/font]50 mL[font=宋体]锥形瓶中，加入[/font]50%[font=宋体]乙醇溶液[/font]25 mL[font=宋体]，超声处理（功率[/font]500 W[font=宋体]、频率[/font]40 kHz[font=宋体]）[/font]1 h[font=宋体]，取出，放冷后加[/font]50%[font=宋体]乙醇溶液补足减失的质量，摇匀，经[/font]0.22 μm[font=宋体]微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。所有供试品溶液均在[/font]4 [font=宋体]℃条件下储藏。[/font]2.1.2 [font=宋体]混合对照品溶液制备[/font] [font=宋体]精密称取欧前胡素、异欧前胡素、珊瑚菜素、佛手柑内酯、氧化前胡素、白当归脑、白当归素、水合氧化前胡素对照品适量，加甲醇制成质量浓度分别为欧前胡素[/font]80 μg/mL[font=宋体]、异欧前胡素[/font]99 μg/mL[font=宋体]、珊瑚菜素[/font]70 μg/mL[font=宋体]、佛手柑内酯[/font]61 μg/mL[font=宋体]、氧化前胡素[/font]98 μg/mL[font=宋体]、白当归脑[/font]126 μg/mL[font=宋体]、白当归素[/font]75 μg/mL[font=宋体]、水和氧化前胡素[/font]45 μg/mL[font=宋体]的对照品溶液。混合对照品溶液在注入[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱仪[/color][/url]前经[/font]0.22 μm[font=宋体]微孔滤膜滤过。所有对照品溶液均在[/font]4 [font=宋体]℃条件下储藏。[/font]2.2 [font=黑体]色谱条件[/font][font=宋体]色谱柱为[/font]Agilent C[sub]18[/sub][font=宋体]柱（[/font]250 mm[font=宋体]×[/font]4.6 mm[font=宋体]，[/font]5 μm[font=宋体]，安捷伦科技中国有限公司）；检测波长为[/font]254 nm[font=宋体]；流动相为[/font]0.1%[font=宋体]甲酸水溶液[/font]-[font=宋体]乙腈，梯度洗脱：[/font]0[font=宋体]～[/font]10 min[font=宋体]，[/font]10%[font=宋体]～[/font]25%[font=宋体]乙腈；[/font]10[font=宋体]～[/font]30 min[font=宋体]，[/font]25%[font=宋体]～[/font]50%[font=宋体]乙腈；[/font]30[font=宋体]～[/font]50 min[font=宋体]，[/font]50%[font=宋体]～[/font]65%[font=宋体]乙腈；[/font]50[font=宋体]～[/font]55 min[font=宋体]，[/font]65%[font=宋体]～[/font]10%[font=宋体]乙腈；体积流量为[/font]1.0 mL/min[font=宋体]；进样量为[/font]10 μL[font=宋体]；柱温为[/font]30 [font=宋体]℃。[/font][/font]

[size=16px][font=Arial, 'Microsoft Yahei'][color=#333333]目的[/color][/font][font=Arial, 'Microsoft Yahei'][color=#333333] 建立祁白芷超高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url](UPLC)指纹图谱,采用超高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]-四极杆-飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MS)对共有峰进行成分鉴定,测定各批次祁白芷抗氧化活性,并探讨祁白芷的化学成分与抗氧化活性的谱效关系。 [/color][/font][font=Arial, 'Microsoft Yahei'][color=#333333]方法[/color][/font][font=Arial, 'Microsoft Yahei'][color=#333333] 采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)》建立28批祁白芷的指纹图谱,确认共有峰并进行相似度评价,并对共有峰进行UPLC-Q-TOF-MS分析。以1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基清除率为抗氧化指标,测定其抗氧化活性。采用灰色关联度和偏最小二乘回归分析祁白芷共有峰与抗氧化活性的谱效关系。 [/color][/font][font=Arial, 'Microsoft Yahei'][color=#333333]结果[/color][/font][font=Arial, 'Microsoft Yahei'][color=#333333] 建立了28批祁白芷药材的指纹图谱,其相似度为0.910~0.997。聚类分析可将不同加工方式的祁白芷分为熏硫和无硫两大类,当平方欧氏距离为 10 时,可将无硫祁白芷进一步分为两类,与商品规格等级分类相符。其共标定13个共有峰,利用对照品对比和UPLC-Q-TOF-MS解析指认出共有峰分别为奎宁酸、二氢山芹醇、水合氧化前胡素、白当归素、花椒毒素、佛手柑内酯、异茴芹内酯、氧化前胡素、欧前胡素、珊瑚菜素、8-氧甲基异欧前胡内酯、异欧前胡素、镰叶芹酮。通过清除DPPH自由基实验发现,28批祁白芷均有抗氧化能力,谱效分析结果显示,奎宁酸、佛手柑内酯、氧化前胡素、珊瑚菜素、异欧前胡素、镰叶芹酮等与抗氧化能力呈正相关。 [/color][/font][font=Arial, 'Microsoft Yahei'][color=#333333]结论[/color][/font][font=Arial, 'Microsoft Yahei'][color=#333333] 本研究建立了基于化学成分和抗氧化活性的祁白芷质量评价模式,为阐明祁白芷药材中抗氧化活性成分及质量控制提供参考。[/color][/font][/size]

传说一、据说北宋初年，南方有一富商的女儿，每逢行经腹痛剧烈，致形体日衰。富商带她欲往京都寻求名医，到汴梁时女儿经期适至，腹痛难忍。正遇一采药老人，仔细询问病情后，老人从药篓中取出白芷一束相赠，嘱咐洗净水煎饮服。富商谢过，按法煎制，一煎服了痛缓，二煎服了痛止，再服几剂，来月行经安然无恙。从此，妇女行经不舒，煎服白芷，在民间广为使用。

蛋白质与多肽蛋白质粉 人类的营养物质有许多种类，最为重要的为蛋白质，碳水化合物和脂肪，其它则是微量营养物质，如维生素、电解质和微量元素等。虽然每一种营养物质对人体来说都是不可或缺的，但绝大多数的营养学家都会有充分的理由认为，真正最重要的营养物质是蛋白质。一、蛋白质是构成人体的基本物质。 蛋白质是由氨基酸通过肽链相连而构成的，它是人体包括骨骼、肌肉、皮肤和脑的重要物质基础，同时氨基酸也是生成核酸的基本物质。我们知道，核酸既形成遗传密码，也是体内储存能量的基本物质。因而从根本上说，人体是由蛋白质组成的。构成人体蛋白质的生理功能概括有如下三个方面：1）人体组织的主要构成成份：如肌肉、骨骼、血液、皮肤、神经、肝、心等等。2）具有特殊生理功能：可以这样说，人类的一切生理活动都与蛋白质有关。如酶蛋白能催化机体的一切化学反应，包括蛋白质、脂肪、碳水化合物的消化等；载脂蛋白运送脂肪；血红蛋白运送氧；激素蛋白调节代谢与生理活动包括情感；血浆白蛋白调节渗透压、运输金属离子、胆红素和抗生素等。3）供给机体能量：成年人每日约需要更新400g蛋白质，每克蛋白质彻底分解能释放出约4 Kcal的热量。4）为机体提供氮原料：人体内所必需的嘧啶、嘌呤、肌酸、胆碱、肾上腺素、肉碱、牛磺酸等，都是以多肽、氨基酸为原料的。表1. 世界粮食组织（FAD）和世界卫生组织（WHO）根据中国人的体质和膳食结构推荐的中国人蛋白质的摄入量（RNLs）。年 龄蛋白质RNL（g/d） 初生—6个月 1.5-3 1岁 35 3岁 45 5岁 55 7岁 60 9岁 65 10-16岁 75-85 成年女性 65 成年男性 75 妊娠 +15 乳母 +20 根据统计资料：由于贫困、工作紧张、精神压力、减肥节食、以及肠胃疾病、癌症、贫血、肾病、各种结核病、肝硬化、腹水、烧伤、失血等，以及老龄人均不同程度地存在着蛋白质的摄入不足。 上世纪80年代以来，我国营养学家对7个省18个贫困地区，1万名学龄前儿童进行了为期4年的连续调查，发现营养不良现象非常严重，其中蛋白质的摄入量不足WHO规定的60%。近年社会医学工作调查，在发达地区由于生活节奏加快，精神压力异常增加，以及办公室白领阶层的减肥节食，也导致蛋白质摄入不足，代谢异常的人群增加。二、蛋白质缺乏的体征和临床症状 单纯的蛋白质营养不良又叫加西长病，这或许是来源于非洲的单词，单纯的能量不足时叫消瘦；临床上通常把这两种现象叫单纯性蛋白质能量营养不良症或PEM。单纯的PEM症在临床上较少见到，但在慢性消耗性疾病患者中则常见，尤其是在癌症患者和艾滋病的患者中几乎占到90%以上。 现代都市和贫困地区存在着相当数量的蛋白质营养不良族群，他们的临床表现主要是能量损失或不足，如体力不支、睡眠不安、怕冷、怕热、性冷淡、无法进行正常的体力劳动和运动，其次为肌肉组织萎缩、皮肤松驰；腿部、脸部易水肿、脂肪肝、无名皮疹、伤口愈合不良、记忆力下降、视力减弱等。再者免疫力低下易感冒、感染。在做血检时通常会发现这些族群的血浆蛋白处于正常值的下限，其中白蛋白、转铁蛋白、甲状腺素结合前体蛋白和视轴蛋白（retinol-binding protein）均处于低水平时，患者易于感染各种疾病并且出现早衰症状，如果是儿童则感染后死亡率增加30%-40%，对于这类人群WHO的专家最好的建议就是迅速补充优质（或全价）的蛋白质。三、优质蛋白质和劣质蛋白质的区别。 要弄清楚何为优质蛋白质？何为劣质蛋白质？我们要引入什么是必需氨基酸的概念。营养生理学家、生化学家发现构成人体蛋白质的氨基酸共有21种，而这些氨基酸中其中有4种是可以由体内含碳和含氮底物自己合成的，被称为非必需氨基酸，还有10个必需的氨基酸，是人类机体无法制造需要从饮食中摄取的，另有7个是介于这两者之间的被称为条件必需氨基酸。表2. 必需、条件必需和非必需氨基酸 必需氨基酸条件必需氨基酸 非必需氨基酸 亮氨酸牛黄酸 丙氨酸 异亮氨酸酪氨酸 谷氨酸 缬氨酸甘氨酸 天冬氨酸 赖氨酸丝氨酸 天冬酰胺 苯丙氨酸（酪氨酸）脯氨酸 蛋氨酸（半胱氨酸）谷氨酰酸 苏氨酸 胱氨酸 色氨酸 组氨酸 精氨酸 虽然蛋白质广泛存在于许多动物性和植物性食物中，但是必需氨基酸的构成异差很大，WHO把“蛋白质其组成恰好符合人体需要”的蛋白质称为理想蛋白质，在自然界这种理想的蛋白质普遍认为是鸡蛋蛋白，因此就把鸡蛋蛋白作为衡量蛋白质优劣的参照蛋白，科学家把它作为一把尺子来衡量各种蛋白质，并制定出标准，以4种必需氨基酸为最低限来决定其优劣，即色氨酸、苏氨酸、赖氨酸或者蛋氨酸（半胱氨酸）。 通过比较科学发现，肉、鱼、蛋、牛奶、乳酪含有优质蛋白，大豆、花生、豌豆也含有较多的高质量蛋白。进一步研究发现它们都不够完美，因而要求大家对优质的动物性蛋白和植物性蛋白进行了科学搭配才是最完美的全价蛋白质（complete protein）。表3. 部分高质量蛋白

蛋白质的英文名词来源于希腊文，其含义是“第一”和“基本的”。反映了蛋白质是生命活动中最基本的和最重要的物质。蛋白质由碳、氢、氧、氮4种主要元素组成，有的蛋白质还含有硫、磷等其他元素。如血红蛋白含有铁、甲状腺球蛋白含有碘等。蛋白质的基本结构单位是氨基酸。氨基酸的特点是在分子一端含有氮和氢元素组成的化学基团——氨基。动物不能合成氨基，只有植物有利用硝酸盐合成氨基的能力。所以在动物饲养中，要依靠含有氨基酸、蛋白质的饲料，使家畜、家畜等生产蛋白质（净肉）。 蛋白质由一长串氨基酸链组成。一般都很长，如血红蛋白是由580个氨基酸组成。但氨基酸种类只有20种，在蛋白质中按严格的顺序排列，构成多种多样的生物专一性的蛋白质。由于人体不能合成氨基酸，只能从食物中获得蛋白质，并在肠内将蛋白质分解成各种氨基酸，这些氨基酸被吸收后，重新合成人体的特殊蛋白质。合成蛋白质的主要器官是肝脏。 从蛋白质这个名字看，好像蛋白质来源离不开蛋。其实动物、植物以及其他生物体都含有蛋白质。虽然最常党见的蛋白质——蛋清是白色的。但并非所有蛋白质都是白色的。血液上的血红蛋白是红色的，绿色植物的叶绿蛋白是绿色的。 同碳水化物和脂肪相比，蛋白质的两个代谢特点，一是它主要在代谢中发挥作用，而不是分解后为人体提供能量；二是蛋白质代谢的起点和终点都是蛋白质，即起点是人体的异蛋白质（如鱼的蛋白质，鸡肉蛋白质等），而终点则成了人体特有的蛋白质。蛋白质由氨基酸组成，是另一种重要的供能物质，每克蛋白质提供4卡路里的热量。但蛋白质的更主要的作用是生长发育和新陈代谢。过量的摄入蛋白质会增加肾脏的负担。因此蛋白的摄入要根据营养状况、生长发育要求达到供求平衡。通常蛋白摄入所产生的热量约占总热量的20%左右为宜。

[align=center][size=20px]食品添加剂 甲壳素[/size][/align][align=center]林夷畅[/align]1 概述甲壳素又称几丁质、甲壳质或壳多糖，英文名是chitin。甲壳素在1811年被Braconnot首次从蘑菇中分离出来。1.%2 结构甲壳素是以(β1→4)糖苷键连接的由N-乙酰-D-葡萄糖胺残基组成的匀质多糖，是一种天然生物高分子。分子式为(C[font='等线'][size=13px]8[/size][/font]H[font='等线'][size=13px]13[/size][/font]NO[font='等线'][size=13px]5[/size][/font])[font='等线'][size=13px]n[/size][/font]，其中n是聚合度，范围是1000~3000。2.%2 相关化合物甲壳素的结构与纤维素非常相似，它们仅有的差异是在C-2位用乙酰氨基替换羟基。几丁质形成类似于纤维素的长纤维。纤维素和甲壳素的功能也非常相似，在生物体中都是主要起结构支持作用，但纤维素存在于植物中，甲壳素主要存在于节肢动物和菌类中。甲壳素和纤维素一样不能被脊椎动物所降解。纤维素是自然界中最丰富的糖类，甲壳素是仅次于纤维素的第二丰富的多糖类。壳聚糖（chitosan），又称脱乙酰甲壳素、可溶性甲壳素，是甲壳素的脱乙酰化产物。由于现存的技术尚不能将甲壳素完全脱去乙酰基变成100%的壳聚糖，也很难将两者完全分离开，故现有壳聚糖商品通常是甲壳素与壳聚糖的混合物，但要求壳聚糖含量在60%以上，作为功能性食品基料的壳聚糖要求壳聚糖含量在85%以上。甲壳素衍生物是甲壳素或壳聚糖经化学修饰而获得的产品。甲壳素和壳聚糖含有羟基和氨基，因此，通过多种化学反应可以实现其结构的化学修饰。壳聚糖衍生物克服了壳聚糖仅溶于酸，易降解，在有机溶剂中易沉淀，物理与化学稳定性差的弱点，从而大大拓展了甲壳素的应用领域。化学改性的方法[1]包括主链水解、酰化反应、烷基化反应、羧基化反应、硅烷化反应、接枝共聚反应、酯化反应、壳聚糖季铵盐反应、与金属形成壳聚糖金属配合物等。1.3 理化性质甲壳素是白色或微黄色无定形半透明固体，无臭、无味，化学性质稳定，不溶于水、乙醇、乙醚、盐类和稀酸、稀碱，能溶于醋酸、乳酸、柠檬酸、麸酸、无水甲酸和浓无机酸，与浓烧碱溶液作用，形成玻璃状胶体的壳聚糖。在浓酸或浓碱中发生水解而成α-氨基葡萄糖。经脱乙酰基后形成的壳聚糖，虽然也不溶于水、碱溶液和有机溶剂中，但可溶于稀酸溶液中，包括无机稀酸（盐酸、硝酸等）和有机稀酸（醋酸、乳酸、甲酸、抗坏血酸、苹果酸等）中，这就是壳聚糖被称为可溶性甲壳素的原因。1.4 在自然界的分布甲壳素是自然界仅次于纤维素的第二丰富的多糖，是将近一百万种节肢动物，如昆虫、虾类、螃蟹外壳的主要成分，虾壳约含15%~30%，蟹壳约含15%~20%。甲壳动物的外壳，如虾壳、蟹壳都由两部分组成，其表面是薄而透明的角质层，主要成份是钙，内部则是较厚的甲壳素层。甲壳素也是菌类，如蘑菇、灵芝、酵母、地衣等的细胞壁的组成部分。鱿鱼、乌鱼的骨骼都含有甲壳素。绿藻、水母及乌贼体内也含有。据估计，生物圈中始终存在着至少100亿吨的甲壳素，每年的生物合成量超过10亿吨，是一种巨大的可再生资源。3 甲壳素的生产甲壳素是从各种动物或菌类的废弃物，主要是甲壳动物的外壳（虾壳、蟹壳等）中提取制得，促进了对资源的综合利用。甲壳素的制备方法主要有酸碱法、酶解法、发酵法等。3.1 酸碱法酸碱法也称为化学法，主要步骤是：先用酸除去甲壳中的钙以及其他无机盐，再用碱除去蛋白质。所用的酸主要包括HCl、HNO[font='等线'][size=13px]3[/size][/font]、H[font='等线'][size=13px]2[/size][/font]SO[font='等线'][size=13px]3[/size][/font]、CH[font='等线'][size=13px]3[/size][/font]COOH、HCOOH和柠檬酸等, 其HCl的使用最为普遍 所用的碱主要为NaOH等。酸碱法所用的原料包括虾壳、蟹壳、南极磷虾虾壳[2]、小龙虾（克氏原螯虾）[3]壳、白星花金龟[4]、鲤鱼鱼鳞[5]、蝉蜕[6]、尖尾东鳖甲[7]、黄粉虫虫粕[8]等。酸碱法的缺点是需要强酸和强碱。下面详细描述一种典型的工艺：首先，将虾、蟹壳中的肉质剔去，洗净，烘干，粉碎。然后将其浸泡在盐酸中，一般要几天，直至不冒气泡为止，过滤，水洗至中性，此时甲壳中的钙等无机盐被除去，而呈柔软状。再用氢氧化钠溶液浸泡数小时，水洗，以除去蛋白质。酸、碱处理可重复1~2次，彻底除去碳酸钙、磷酸盐等无机盐、蛋白质、色素、角质层和脂肪等杂质。然后用1%的KMnO[font='等线'][size=13px]4[/size][/font]溶液浸泡经碱煮后的软甲壳，通过氧化作用除去甲壳上的有机色素。水洗后，再浸入1%的亚硫酸氢钠溶液10分钟，除去残留的高锰酸钾，然后加入少量盐酸，使溶液呈酸性，继续浸泡20分钟，以除去附在甲壳上的二氧化锰，此时甲壳应呈白色，即得不溶性甲壳素，充分水洗，干燥，即得纯净的甲壳质。也可将甲壳粉碎后先用2%稀碱液煮解蛋白质约1.5小时并过滤，再在不溶物中加5%~10%盐酸使碳酸钙变成氯化钙而溶解除去，再离心分离、水洗、干燥而成。已有报道用此法从蚕蛹[9]和黑皱鳃金龟[10]中提取甲壳素。3.2 酶解法酶解法采用生物酶对原料进行处理。所用的酶包括碱性蛋白酶、胰蛋白酶、水解酶、脂肪酶、酯酶等。3.3 发酵法发酵法是利用一些细菌和真菌发酵体产生的有机酸或蛋白酶来去除蛋白质和钙盐，从而制取甲壳素。所用的微生物包括乳酸菌、芽孢杆菌以及其他菌类，也可以使用混合菌。2.4 其他生产方法生产甲壳素的其他方法有EDTA法，离子液体提取法，热甘油预处理法等。也可以联合使用两种生产方法。此外，有些酿造工业的副产物也是甲壳素的原料。例如使用黑曲霉发酵生产柠檬酸的残液，以及使用鲁毛霉、布拉克须霉和卵孢接霉发酵的发酵液中都能提供一定量的脱乙酰甲壳质。2.5 甲壳素转化为壳聚糖产生的甲壳素可进一步用于制取壳聚糖。在很多工艺流程中，甲壳素就地转化为壳聚糖。将甲壳素置于高压皂化锅内，加入40%~60%氢氧化钠溶液进行蒸煮，温度为100~180℃，压力0.5~1 MPa，时间8~12 h，脱乙酰度可达70%～90%。皂化反应完成后，沥干碱液，水洗至中性，烘干，即可得壳聚糖。通过超声协同甲壳素脱乙酰基酶脱去乙酰基，再过滤、水洗、烘干得到壳聚糖，壳聚糖脱乙酰度高达91.09%，相对得率81.87%[11]。3 甲壳素的应用甲壳素以及甲壳素制造的产品，因其独特的物理、化学性质，具有防潮、耐晒、防霉、耐腐蚀等优良特性，用途十分广泛。3.1 防腐作用甲壳素作为食品添加剂，具有防腐作用。醋酸、乳酸、柠檬酸、麸酸等常在工业制程中用以溶解甲壳素，其溶解度与酸浓度呈正比。以醋酸为例，10 g/L甲壳素需溶于1%醋酸中。一旦溶解，即可以进一步以水稀释。甲壳素的脱乙酰度影响其成膜的能力。较高脱乙酰度者，水溶液干燥后较易形成膜。用于肉或肉制品表面成膜，即有防腐作用。也可用甲壳素溶液浸泡食品，可降低生菌数，并增加商品寿命，达到防腐的效果。其制作过程需使用黏度低、脱乙酰度高的甲壳素。但亦有工艺说明，如以浸泡方式操作，其甲壳素的浓度应尽量提高，以便于浸泡后的剂量能有足够的防菌及保湿能力。但因浓度过高时黏度亦提高，故必须以特殊方式降低黏度，不使其凝聚成膜。日本丸大火腿是用甲壳素防腐的一个实例，其制作过程中添加甲壳素约200 mg/kg，可抑制不良霉菌的滋长。日本朝日化学、Asama Chemical以及其下游厂商，均以甲壳素为保鲜剂提供酱菜，以利降低盐分的使用。3.2 食品添加剂甲壳素作为食品添加剂，除了防腐作用，也可作为增稠剂、稳定剂，具有防变色和除涩的功能。用于果汁、果酒、果酱、乳酸菌饮料、氢化植物油、其他油脂或油脂制品、冷冻饮品、花生酱、蛋黄酱、沙拉酱、冰淇淋、植脂性粉末、食醋、啤酒和麦芽饮料等。甲壳素和脱乙酰甲壳素可以作为果汁澄清剂。由于果汁溶液多半呈弱酸性，壳聚糖分子上存在游离的氨基带正电，能够和酸、多酚类的物质进行反应，进而对胶态颗粒絮凝沉淀，达到澄清果汁的效果，并且不会影响营养成分和风味。目前大多用酶法或过滤法来澄清果汁，成本高且周期长，使用甲壳素和壳聚糖具有操作方便、成本低的优点。3.3 在医疗方面的应用甲壳素无毒，并具有生物相容性，在医疗方面有广泛的应用。甲壳素有一定协助溶菌作用，还能作为血液抗凝剂，创伤愈合剂等。脱乙酰甲壳素可调节机体免疫功能、抑制胃溃疡，还通过阻断膳食脂肪和胆固醇的吸收而降低胆固醇，降低血脂、血糖、血压。甲壳质的水解产物氨基葡萄糖盐用于治疗肠炎、结肠溃疡和肺炎。应用甲壳素或氨基葡萄糖作为某些肿瘤的化疗剂，效果很好。硫酸葡萄糖胺，是一种能缓解关节疼痛、支持关节运动、起到润滑作用的药物。甲壳素可作为药剂辅料、医用缝合线等。其中作为辅料可用作缓释剂、润滑剂、包衣剂。通过直接压片、湿法制粒或包衣可制备相应药物的微粒剂、片剂、胶囊剂、微膜剂等。也可用于制作药物载体。可制成透析膜、超滤膜和反渗透膜；与纤维等交链复合体可作成分子筛。与戊二醛等作交联剂，可与许多酶或微生物细胞固定化，如固定化天冬酰胺酶。甲壳素可用于制作手术缝合线、人造皮肤、人造血管、人工肾、伤口敷料、止血海绵、接触眼镜等，使用效果良好。3.4 重要的化工原料甲壳素是制取壳聚糖、氨基葡萄糖系列产品的重要原料。这一系列产品在医药、化工、保健食品等方面具有十分广泛的用途。甲壳素可用作制人造纤维和塑料等的原料。3.5 环境保护甲壳素与其衍生物对多种金属，特别是一些会造成严重环境污染的有害金属，如汞、镉、铜、镍、铬等都有很好的螯合能力，所以在净水、污水处理等方面很有前途。可作为絮凝剂，用于废水处理。也可以用来净化放射性污染，因为许多放射性污染的造成系属于放射性的过渡族元素的衍生物，可以使用甲壳素移除。3.6 纺织业可用于纺织品的防皱和防缩处理；直接染料或硫化染料的固色；其他织物的整理剂。甲壳素可以制成高聚物型的染料。3.7 化妆品工业甲壳素可作为阳离子增稠剂，其溶液呈无色半透明黏稠液，失水后能形成薄膜，用于皮肤、头发，均可形成薄膜，具有护肤、护发、定型的功能，因此可以配制膏霜、面膜、摩丝、发胶等产品。甲壳素和抗氧化成分的结合具有清除自由基的作用，可用于防止太阳辐射对光老化和皱纹的有害影响。壳聚糖是亲水胶体，可以与蛋白质等相互作用形成保护膜，从而起到保湿的作用。能够在头发表面形成一层覆盖膜，不易沾染灰尘，是一种理想的固发原料。8.%2 农业甲壳素及壳聚糖通过提高植物根、茎、叶的生长速率，从而使得农作物的产量和品质得到很好的改善。壳聚糖针对植物的氮代谢具有独特的调节功能这一特性，从而增加了低含量的蛋白作物提高储存蛋白含量的作用。甲壳素及壳聚糖中丰富的C和N元素，使得当其被微生物分解利用后可以用它来作为植物生长的养分，这不仅使得土壤中的微生物体系得到了改善，还可以抑制放线菌等病原菌的生长，也可以加快有益微生物的生长。3.9 其他方面的应用甲壳素还有许多其他方面的应用。例如，几丁质可用于几丁质酶的分析，要求纯化后才能使用作为几丁质酶的底物。可用作色谱载体。甲壳素对锆、铌、铷等都是有效的收集剂，可增大矿石的利用程度。在造纸工业中，甲壳素可用作施胶剂、助留剂和增强剂。甲壳素在照相技术中也有应用，可制备照相感光乳剂，一种无液定影与显影的照相法即是采用耐磨且具有感光能力的甲壳素。甲壳素还可用于涂料印花的固着，木材的胶合以及防雨篷布的上浆等。4 甲壳素的限量目前，规定甲壳素作为食品添加剂的限量标准的现行国标是GB 2760—2014。其CNS号为20.018。这个国家标准规定了9类食品中甲壳素作为食品添加剂的最大使用量，如下表所示。[table][tr][td]食品分类号[/td][td]食品名称[/td][td]最大使用量/(g/kg)[/td][td]备注[/td][/tr][tr][td]02.01.01.02[/td][td]氢化植物油[/td][td]2.0[/td][td][/td][/tr][tr][td]02.05[/td][td]其他油脂或油脂制品(仅限植脂末)[/td][td]2.0[/td][td][/td][/tr][tr][td]03.0[/td][td]冷冻饮品(03.04食用冰除外)[/td][td]2.0[/td][td][/td][/tr][tr][td]04.01.02.05[/td][td]果酱[/td][td]5.0[/td][td][/td][/tr][tr][td]04.05.02.04[/td][td]坚果与籽类的泥(酱),包括花生酱等[/td][td]2.0[/td][td][/td][/tr][tr][td]12.03[/td][td]醋[/td][td]1.0[/td][td][/td][/tr][tr][td]12.10.02.01[/td][td]蛋黄酱、沙拉酱[/td][td]2.0[/td][td][/td][/tr][tr][td]14.03.01.03[/td][td]乳酸菌饮料[/td][td]2.5[/td][td]固体饮料按稀释倍 数增加使用量[/td][/tr][tr][td]15.03.05[/td][td]啤酒和麦芽饮料[/td][td]0.4[/td][td][/td][/tr][/table]虽然国家标准已经规定了几种食品中甲壳素的限量，但是，目前，国标（GB 5009系列）尚未规定食品中甲壳素的测定方法。5 对食品添加剂甲壳素的要求现行国标GB 1886.312-2020对作为食品添加剂的甲壳素提出了若干要求。该标准适用于以虾壳、蟹壳、鲎壳、鱿鱼骨、乌鱼骨等为主要原料，经脱钙、脱蛋白等工艺加工制得的食品添加剂甲壳素。5.1 感官要求感官要求应符合下表的规定。[table][tr][td]项目[/td][td]要求[/td][td]检验方法[/td][/tr][tr][td]色泽[/td][td]白色至浅黄色或浅红色[/td][td=1,4]取适量试样置于清洁、干燥的白瓷盘内，在自然光线下观察其色泽和组织状态，嗅其气味[/td][/tr][tr][td]状态[/td][td]片状或粉末状[/td][/tr][tr][td]气味[/td][td]具有本身固有特征气味、无异味[/td][/tr][tr][td]杂质[/td][td]无正常视力可见的外来杂质[/td][/tr][/table]5.2 理化指标理化指标应符合下表的规定。[table][tr][td]项目[/td][td]指标[/td][td]检验方法[/td][/tr][tr][td]水分，w[font='等线']/[/font][font='等线']% [/font][font='等线']≤[/font][/td][td]10.0[/td][td]GB 5009.3第一法 直接干燥法[/td][/tr][tr][td]pH(10 g/L水溶液)[/td][td]6.5~8.5[/td][td]GB/T 9724[font='等线'][size=13px]a[/size][/font][/td][/tr][tr][td]总灰分，w[font='等线']/[/font][font='等线']% [/font][font='等线']≤[/font][/td][td]1.0[/td][td]GB 5009.4[/td][/tr][tr][td]铅(Pb)/(mg/kg)[font='等线'] [/font][font='等线'] [/font][font='等线']≤[/font][/td][td]2.0[/td][td]GB 5009.12或GB 5009.75[/td][/tr][tr][td]总砷(以As计)/(mg/kg)[font='等线'] [/font][font='等线'] [/font][font='等线']≤[/font][/td][td]1.0[/td][td]GB 5009.11或GB 5009.76[/td][/tr][tr][td]镉(Cd)/(mg/kg)[font='等线'] [/font][font='等线'] [/font][font='等线']≤[/font][/td][td]1.0[/td][td]GB 5009.15[/td][/tr][tr][td]重金属(以Pb计)/(mg/kg)[font='等线'] [/font][font='等线'] [/font][font='等线']≤[/font][/td][td]10[/td][td]GB 5009.74[/td][/tr][tr][td=3,1][font='等线'][size=13px]a[/size][/font]磁力搅拌１h。[/td][/tr][/table]5.3 鉴别试验试验所用到的试剂和材料需按照该标准进行配制。称取1.0 g试样，精确至0.01 g，加入200 mL水，混合，试样应不溶解。称取1.0 g试样，精确至0.01 g，加入200 mL 1%乙酸溶液，混合，试样应不溶解。称取0.2 g试样，精确至0.01 g，加入5 mL 0.2%蒽酮硫酸溶液和1 mL水，水浴加热，试样溶液应呈蓝色至绿色。称取1.0 g试样，精确至0.01 g，加入10 mL盐酸，置于90 ℃~100 ℃水浴中放置4 h，过滤，滤液用氢氧化钠溶液中和，作为试样溶液。吸取1 mL试样溶液，加入1 mL茚三酮溶液，加热，溶液应呈紫红色。参考文献[font='等线'][size=13px]1. 戴鹏, 郑金路, 刘炳荣, 王甘英, 刘峰. 甲壳素与壳聚糖的化学改性及应用. 高分子通报, 2020, (07), 1-17.[/size][/font][font='等线'][size=13px]2. 韩银双, 张忭忭, 刘志东, 刘宝林, 林娜. 南极磷虾甲壳素研究进展. 食品安全质量检测学报, 2021, 12(03), 866-872.[/size][/font][font='等线'][size=13px]3. 徐文思, 李柏花, 张梦媛, 杨祺福, 杨品红, 周顺祥. 小龙虾及其副产物加工利用研究进展. 农产品加工, 2021, (01), 60-63+68.[/size][/font][font='等线'][size=13px]4. 李小万, 王萍莉. 从白星花金龟中提取甲壳素的工艺研究. [/size][/font][font='等线'][size=13px]世界中医药[/size][/font][font='等线'][size=13px], 2018, 13(08), 2027-2031.[/size][/font][font='等线'][size=13px]5. 高倩倩. 鲤鱼鱼鳞中甲壳素的提取. 食品研究与开发, 2018, 39(04), 84-90.[/size][/font][font='等线'][size=13px]6. 杨佳红, 靳玲侠, 张继林, 李琛. 利用蝉蜕提取甲壳素的工艺研究. 化工设计通讯, 2016, 42(06), 80-81.[/size][/font][font='等线'][size=13px]7. 张建英, 贾龙, 张大治, 喜巧红. 从尖尾东鳖甲中提取甲壳素的研究. 食品研究与开发, 2016, 37(09), 66-71.[/size][/font][font='等线'][size=13px]8. 高素红, 吉志新, 宋士涛, 温晓蕾, 暴瑞欣, 王熙. 黄粉虫虫[/size][/font][font='等线'][size=13px]粕中甲壳素的提取工艺[/size][/font][font='等线'][size=13px]. 河北科技师范学院学报, 2016, 30(02), 48-54.[/size][/font][font='等线'][size=13px]9. 蒋艳忠, 蒋琳. 蚕蛹甲壳素的提取工艺研究. 中国食品添加剂, 2015, (03), 88-91.[/size][/font][font='等线'][size=13px]10. 张建英, 贾龙, 杨贵军, 石晓莉. 黑皱鳃金龟甲壳素提取工艺研究. 环境昆虫学报, 2015, 37(04), 818-826.[/size][/font][font='等线'][size=13px]11. 窦勇, 胡佩红. 超声协同CDA酶法制备龙虾壳聚糖. 食品与发酵工业, 2014, 40(11), 127-131.[/size][/font]

人类的营养物质有许多种类，最为重要的为蛋白质，碳水化合物和脂肪，其它则是微量营养物质，如维生素、电解质和微量元素等。虽然每一种营养物质对人体来说都是不可或缺的，但绝大多数的营养学家都会有充分的理由认为，真正最重要的营养物质是蛋白质。一、蛋白质是构成人体的基本物质。蛋白质是由氨基酸通过肽链相连而构成的，它是人体包括骨骼、肌肉、皮肤和脑的重要物质基础，同时氨基酸也是生成核酸的基本物质。我们知道，核酸既形成遗传密码，也是体内储存能量的基本物质。因而从根本上说，人体是由蛋白质组成的。构成人体蛋白质的生理功能概括有如下三个方面：1）人体组织的主要构成成份：如肌肉、骨骼、血液、皮肤、神经、肝、心等等。2）具有特殊生理功能：可以这样说，人类的一切生理活动都与蛋白质有关。如酶蛋白能催化机体的一切化学反应，包括蛋白质、脂肪、碳水化合物的消化等；载脂蛋白运送脂肪；血红蛋白运送氧；激素蛋白调节代谢与生理活动包括情感；血浆白蛋白调节渗透压、运输金属离子、胆红素和抗生素等。3）供给机体能量：成年人每日约需要更新400g蛋白质，每克蛋白质彻底分解能释放出约4 Kcal的热量。4）为机体提供氮原料：人体内所必需的嘧啶、嘌呤、肌酸、胆碱、肾上腺素、肉碱、牛磺酸等，都是以多肽、氨基酸为原料的。表1. 世界粮食组织（FAD）和世界卫生组织（WHO）根据中国人的体质和膳食结构推荐的中国人蛋白质的摄入量（RNLs）。年 龄 蛋白质RNL（g/d）初生—6个月 1.5-31岁 353岁 455岁 557岁 609岁 6510-16岁 75-85成年女性 65成年男性 75妊娠 +15乳母 +20根据统计资料：由于贫困、工作紧张、精神压力、减肥节食、以及肠胃疾病、癌症、贫血、肾病、各种结核病、肝硬化、腹水、烧伤、失血等，以及老龄人均不同程度地存在着蛋白质的摄入不足。上世纪80年代以来，我国营养学家对7个省18个贫困地区，1万名学龄前儿童进行了为期4年的连续调查，发现营养不良现象非常严重，其中蛋白质的摄入量不足WHO规定的60%。近年社会医学工作调查，在发达地区由于生活节奏加快，精神压力异常增加，以及办公室白领阶层的减肥节食，也导致蛋白质摄入不足，代谢异常的人群增加。二、蛋白质缺乏的体征和临床症状单纯的蛋白质营养不良又叫加西长病，这或许是来源于非洲的单词，单纯的能量不足时叫消瘦；临床上通常把这两种现象叫单纯性蛋白质能量营养不良症或PEM。单纯的PEM症在临床上较少见到，但在慢性消耗性疾病患者中则常见，尤其是在癌症患者和艾滋病的患者中几乎占到90%以上。现代都市和贫困地区存在着相当数量的蛋白质营养不良族群，他们的临床表现主要是能量损失或不足，如体力不支、睡眠不安、怕冷、怕热、性冷淡、无法进行正常的体力劳动和运动，其次为肌肉组织萎缩、皮肤松驰；腿部、脸部易水肿、脂肪肝、无名皮疹、伤口愈合不良、记忆力下降、视力减弱等。再者免疫力低下易感冒、感染。在做血检时通常会发现这些族群的血浆蛋白处于正常值的下限，其中白蛋白、转铁蛋白、甲状腺素结合前体蛋白和视轴蛋白（retinol-binding protein）均处于低水平时，患者易于感染各种疾病并且出现早衰症状，如果是儿童则感染后死亡率增加30%-40%，对于这类人群WHO的专家最好的建议就是迅速补充优质（或全价）的蛋白质。

20世纪基因组学研究取得的巨大成就为蛋白质组学的发展奠定了基础。蛋白质组学是从整体水平上分析生命体、组织或细胞的蛋白质组成及其活动规律的科学，以基因表达产物为研究对象，延伸了基因组学研究深度，更深层次地揭示了生命活动规律。蛋白质组学的研究内容主要包括蛋白质表达存在方式(修饰形式)的鉴定、结构与功能分析、蛋白质定位、蛋白质差异表达以及蛋白质间相互作用分析等[1]。目前蛋白质组学研究技术主要包括：二维电泳技术、蛋白质芯片技术、质谱技术等[2]。其中，二维电泳技术是早期蛋白质组学的重要技术之一，但是由于实验步骤多，耗时长，重复性差等特点，已经逐步被新型技术所取代。蛋白质芯片技术是将多种蛋白质纯品点于芯片表面，形成蛋白质矩阵进行免疫等标记反应，主要受限于很多蛋白质无法获得纯品而不能用于芯片制备。质谱技术由于灵敏度高、特异性强、分析范围宽等优点逐渐成为蛋白质组学的主要研究手段，可以对特定生命过程中的功能性蛋白质分子进行定性和定量检测，因此在基础科研和临床研究中得到了广泛的应用[3,4]。一、基于质谱的蛋白质组学技术1．基于质谱的蛋白质组学定性技术：蛋白质定性鉴定的基本原理在于：蛋白质组的基本序列已经通过基因组学信息获得，可以用来鉴定多肽的氨基酸序列，并且获得多肽与蛋白质的对应关系[1]，即质谱提供的多肽碎片数据可以与蛋白质数据库自动匹配来确定多肽序列与蛋白质归属。基本技术策略分为：(1)自上而下(Top–down)策略[5]，即完整蛋白质在质谱中进行分析，可以提供完整蛋白质的质量数，但是由于质谱仪受到质量分析范围的限制，此方法在常规实验室不易实现。(2)自下而上(Bottom–up)策略[6]，即蛋白质被蛋白酶水解成多肽，然后对多肽进行质谱分析和碎裂。基于这条策略的大致步骤为：蛋白质样品首先经过酶解降解为多肽，然后对多肽进行色谱–质谱分离与鉴定，最后通过搜索引擎(MASCOT：http：//www.matrixscience.com/server.html, SEQUEST：http：//fields.scripps.edu/sequest等)在公共蛋白质组学数据库(SWISS–PORT: http：//web.expasy.org/groups/swissprot, NCBI：http：//www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed等)中自动完成质谱数据的解析，确定多肽序列与蛋白质种类。该技术灵敏度高，特异性好，仪器自动化程度高，可以鉴定出生物样品中成千上万种蛋白质，被认为是大规模、高通量蛋白质定性检测的首选方法。2．基于质谱的蛋白质组学相对定量技术：对于大多数生命科学和医学研究来说，仅完成样品中蛋白质组的定性研究是远远不够的，还需要对蛋白质组进行定量分析。由于组学的研究对象是多个蛋白质，单次检测很难实现所有蛋白质的绝对定量，因此蛋白质组学定量多为相对定量检测。蛋白质组学定量的质谱技术包括谱图计数、质谱峰强度定量、同位素定量技术等。其中使用同位素作为内标定量的方法是目前质谱定量的最佳手段，即对整体蛋白质组进行同位素标记，并使用每一种天然蛋白质与同位素蛋白质的比值进行相对定量分析。主要分为细胞层面标记和蛋白质层面标记两种技术路线：(1)细胞层面标记的细胞培养氨基酸稳定同位素标记(stable isotope labeling with amino acids in cell culture，SILAC)方法[7]：即在两种细胞样品中分别加入轻重同位素标记的培养基，经过传代培养后，两种细胞样品中的全部蛋白质中分别嵌合了轻重同位素，可以在质谱上根据同位素的不同质荷比直接判断样品来源并进行定量比对。(2)蛋白质层面标记：使用含有同位素的小分子与样品全部蛋白质直接标记，如同位素标记相对和绝对定量技术(isobaric tags for relative and absolute quantification，iTRAQ)[8]、同位素编码亲和标记(isotope–coded affinity tag，iCAT) [9]、18O标记[10]等方法，此类方法使用带有稳定同位素的小分子与特定氨基酸侧链反应，使得多个样品可以分别连接含有不同同位素个数(多至8个)的小分子，从而产生一级数据相同但是二级数据不同的质谱谱图，通过二级谱图强度比对进行多个样品的定量分析。3．基于质谱的目标蛋白质绝对定量技术：质谱技术对目标蛋白质的绝对定量检测主要通过质谱多反应监控技术与同位素多肽内标技术联用来实现[11]。该方法首先选定目标蛋白质的一个或多个多肽，合成序列相同但含有稳定同位素的多肽作为内标，定量加入样品中，通过监测特定多肽及其同位素多肽的质谱峰强度进行比对和计算获得目标蛋白质的定量值。质谱多反应监控技术通过进行母离子筛选与子离子筛选等二次选择过程，筛选出目标蛋白质，而非目标蛋白质由于无法通过筛选达到检测器，极大降低了噪音干扰。因此，此方法针对性强，本底噪音低，是目前质谱技术中定量能力最好的一种，可以控制变异系数小于15%，检测限低至纳克每毫升，适合血液、组织等临床样品的定量检测[11]。二、质谱技术发现肿瘤蛋白质标志物质谱技术作为一项强有力的研究工具在科学研究中发挥着巨大的作用，特别在肿瘤相关研究中，目前已经获得美国食品药品监督管理局(Food and Drug Administration，FDA)批准的肿瘤标志物包括多种蛋白质前列腺特异性抗原(prostate–specific antigen, PSA), 癌胚抗原(carcinoembryonic antigen CEA), 人类表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2，Her–2), 人绒毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotropin, HCG), 糖类抗原CA125等，均揭示了蛋白质与肿瘤发生发展密切相关。这些已有成果极大促进了质谱技术在肿瘤蛋白质标志物研究中的应用，并取得了标志性进展。例如：美国约翰霍普金斯大学的Chan课题组发现了新型卵巢癌蛋白质标志物，他们使用表面增强激光解析电离质谱技术(surface enhanced laser desorption and ionization time–of–flight mass spectrometry, SELDI–TOF MS)技术对503个妇女的血清进行了蛋白质组学的分析[12]，在随后的大量临床验证中最终确定CA125、β2微球蛋白，转铁蛋白，甲状腺运载蛋白和载脂蛋白A1的联合检测可以作为卵巢癌的新型临床诊断指标。2009年9月该试剂盒OVA1(商品名称：http：//ova–1.com)获得了美国FDA的认证，进入临床使用，被认为是国际肿瘤蛋白质标志物研究的重要标志性成果。同时，肿瘤仍然是国际上致死率最高的疾病之一，缺乏早期检测技术和有效治疗方案，临床中还存在着大量问题需要解决，新型标志物的研发迫在眉睫。由于肿瘤蛋白质标志物研究的难度大，风险高，因此近十年来仅有几例试剂盒获得了美国FDA批准，进入临床使用。大量标志物研究还停留在论文研究水平，其中临床问题、研究思路和技术方案的选择直接关系到研究的成功与否。1．临床问题选择：在肿瘤蛋白质标志物研究中，临床问题的选择是研究核心。在肿瘤研究中，需要解决的临床问题往往包括肿瘤早期检测、肿瘤分期检测、治疗方案与药物选择、疗效评估等多个方面。研究者需要根据不同肿瘤的临床情况，具体分析并凝练不同肿瘤的主要临床问题。例如，对于病程发展快、五年存活率低、没有有效手术或化疗手段的肿瘤，早期诊断是研究重点，如胰腺癌、卵巢癌、肺癌等；对于病程发展慢、手术效果明显的肿瘤，肿瘤的愈后与复发是需要关注的问题，如前列腺癌、肠癌等；还有一些肿瘤有特殊的检测需求，如乳腺癌虽然有临床有效的雌激素受体(estrogen receptor，ER)，孕激素受体(progesterone receptor，PR)，HER2等基因标志物，可以进行药物靶点治疗，但是三阴性乳腺癌的检测还缺乏有效的标志物与治疗方案。因此，在肿瘤蛋白质标志物研究实验开展之前，明确临床问题，并以此确定临床样品入组标准，是研究成功的核心基础。2．研究思路设计：不同于基础科学实验，临床实验需要在大量样本中进行实验结果的验证，因此肿瘤蛋白质标志物研究往往包括新型标志物发现和验证两部分。标志物发现实验是在疾病组和对照组之间进行蛋白质组学分析，鉴定样本中的未知蛋白质组并进行相对定量比较，分析数据选择出在两组样本中差异最大的一个或几个蛋白质作为新型标志物的候选物。随后，标志物验证实验在大量未知样本中进行蛋白质候选物的定量检测，使用发现实验中建立的区分标准进行判读，计算检测灵敏性(sensitivity)和特异性(specificity)。有效的蛋白质标志物研究往往需要发现与验证的两步设计思路来相互保证。3．技术方案选择：根据蛋白质标志物研究的两步设计思路，发现实验中使用基于质谱的蛋白质组学定性技术与相对定量技术对样本中的大量未知蛋白质进行分析，获得标志物候选物名单。验证实验中根据已有名单，进行目标蛋白质(非蛋白质组学)的精确定量检测。这几种质谱技术的配合使用，可以满足不同实验情况和目的，最终实现新型蛋白质标志物的成功研发。三、展望质谱技术是现阶段蛋白质组学研究的核心技术，具有灵敏度高、特异性强、分析通量大等优势，特别是其与同位素内标的联合使用，大大提高了质谱定量能力，因此在多种肿瘤标志物研究中取得了突破性进展并被广泛应用。目前，大量肿瘤蛋白质标志物候选物已经通过使用质谱技术被从血液、组织、体液中筛选出来，预计在完成大规模临床验证后可以作为新型标志物在临床使用，促进肿瘤检测水平的发展。同时值得注意的是，质谱技术还不具备进行蛋白质组的绝对定量能力。相对于免疫等传统蛋白质检测技术，仪器昂贵，操作复杂，自动化程度低，这些因素决定了质谱目前适用于蛋白质的临床研究，但不适用于蛋白质的临床检验，这是质谱技术面临的重要挑战之一。参考文献[1]何华勤. 简明蛋白质组学[M]. 北京:中国林业出版社, 2011:1,76,85-95,119,125-138.[2]RuediA, MatthiasM. Mass spectrometry-based proteomics[J]. Nature, 2003, 422(13):198-207.[3]甄艳, 施季森. 质谱技术在蛋白质组学研究中的应用[J]. 南京林业大学学报:自然科学版, 2011, 35(1):103-108.[4]孙瑞祥, 付岩, 李德泉,等. 基于质谱技术的计算蛋白质组学研究[J]. 中国科学E辑信息科学, 2006, 36(2):222-234.[5]WhiteleggeJ,HalgandF,SoudaP, et al. Top-down mass spectrometry of integral membrane proteins [J]. Expert Review Proteomics, 2006, 3(6):585-596.[6]ChaitBT. Mass spectrometry:bottom-up or top-down? [J]. Science, 2006, 314(5796):65-66.[7]TranDT, AdhikariJ, FitzgeraldMC. StableIsotope Labeling with Amino Acids in Cell Culture (SILAC)-based strategy for proteome-wide thermodynamic analysis of protein-ligand binding interactions [J]. Mol Cell Proteomics, 2014,13(7):1800-1813.[8]DytfeldD, KandarpaM, StrahlerJR, et al. Proteomic Profiling of Multiple Myeloma (MM) Cells Using iTRAQ and Label-Free Quantitative Proteomics for the Prediction of Complete or near Complete Response (CR/nCR) In Frontline Treatment with Lenalidomide, Bortezomib, and Dexamethasone [J]. Blood, 2010, 116(21):271-272.[9]García-SantamarinaS, BoronatS, DomènechA, et al. Monitoring in vivo reversible cysteine oxidation in proteins using ICAT and mass spectrometry [J]. Nat Protoc,2014,9(5):1131-1145.[10]MirzaSP, GreeneAS, OlivierM. 18O labeling over a coffee break:a rapid strategy for quantitative proteomics [J]. J Proteome Res, 2008,7(7):3042-3048.[11]曹冬, 张养军, 钱小红. 基于生物质谱的蛋白质组学绝对定量方法研究进展[J]. 质谱学报, 2008, 29(3):185-190.[12]ZhangZ, BastRC, YuY,et al. Three biomarkers identified from serum proteomic analysis for the detection of early stage ovarian cancer[J]. Cancer Res,2004,64(16), 5882-5890.

可促进深度睡眠的蛋白质6月22日,日本研究人员宣布，他们发现了一种可促进深度睡眠的新型蛋白质。这一研究成果已经刊登在美国《睡眠》杂志网络版上。日本自然科学研究机构生理学研究所科研人员22日发表公告说，他们发现的这种新型蛋白质名为“神经肽B”。迄今为止，安眠药都是通过抑制整个脑神经的活动来促进睡眠，而“神经肽B”只对能促进睡眠的神经发挥作用，因此有望用其开发出只需少量服用就能提高睡眠质量的安眠药。公告说，研究人员2002年就发现人脑存在“神经肽B”，但是一直没有弄清其具体功能。今年，研究人员在一次实验中向老鼠头部注射“神经肽B”，发现夜行性的老鼠在进入深夜后依然保持睡眠状态。而且，他们利用仪器观察睡眠中老鼠的脑电波和肌肉状态时发现，老鼠的大脑和身体都处于休息状态，属于深度睡眠。他们因此认定“神经肽B”具有促进深度睡眠的作用。

蛋白质，是身体构建和修复的基石！但你知道哪些食物富含蛋白质吗？别急，我来告诉你！肉类：牛肉、猪肉、鸡肉，都是优质蛋白的来源，每天来点，肌肉更结实！鱼类：三文鱼、金枪鱼，不仅蛋白质丰富，还有Omega-3，对心脏好哦！[b]豆类：黄豆、黑豆、绿豆，植[/b]物蛋白的代表，素食者的好选择！奶制品：牛奶、酸奶、奶酪，钙质和蛋白质双丰收，每天一杯，骨骼更强壮！蛋白质摄入要适量，过多或过少都不利于健康。每天建议摄入量，成年男性约56克，女性约46克。均衡饮食，合理搭配，让蛋白质成为你健康生活的好伙伴！

我想将杂色曲霉素偶联到蛋白质分子上（可用基团-NH2,-COOH,NH4...等蛋白质上拥有的基团），共价连接。。。以备后期检测用，，希望大家能够有好一点的建议。。[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2007/11/200711190837_70334_1613111_3.gif[/img]

公司作克林酶素磷酸酯,分析过程依据药典,使用ZOBARX C8分析,可分离效果很不理想.不知大家有没有做相同产品的,使用的什么柱子,最好有谱图,谢谢了.

一些蛋白质的分子量与Stokes半径：蛋白质 分子量（kD）Stokes半径（nm）乳清蛋白 12.4 2.01核糖核酸酶 13.7 1.92肌红蛋白 17.0 2.00大豆胰蛋白酶抑制剂 21.5 2.26碳酸酐酶 31.0 2.35辣根过氧化物歧化酶 40 3.00卵清蛋白 45 2.80血红蛋白（人）64.5 3.08牛血清白蛋白 70 3.65酵母醇脱氢酶 150 4.55血浆铜蓝蛋白 151 4.73谷氨酸脱氢酶 258 6.00甲状腺球蛋白 670 8.25芜菁花叶病毒 3500 ~12.0

请问老师有做过胰岛素高分子蛋白质检测的，

豆油皮，素肉，腐竹这三个做蛋白质，蛋白换算系数一样吗？

peanut fibre又称花生蛋白质纤维。以花生蛋白质为原料而制得。蜜黄色。密度1.30-1.31。强度0.08牛/特（0.8克力/旦）。一般性能和染色性能与羊毛相同。用作混纺的原料。国内这种纤维大家见过实物吗？用作那些产品上面？

求助6-氨基青霉素烷酸中蛋白质检测 ，也就是6-APA中蛋白质含量检测，有做过的给说下吧，谢谢

市售的白芷调味品是属于哪种？谢谢！

大家有点相关常识就知道凯氏氮的缺点，不法商人也就凭这个缺点钻了空子，以至于到今天这个地步。以前是往牛奶里面加尿，发觉味道不行了又想出这个三聚氰胺。其实其他蛋白质检测方法准确灵敏简单快捷的非常多，我就想不通为什么过时的东西还在用。N年前我做毕业论文的时候也牵涉到蛋白质检测，那时用的是考马斯亮蓝G-250（Coomassie brilliant blue G-250）法。很简单很迅速啊。资料：考马斯亮蓝G-250测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。考马斯亮蓝G-250在游离状态下呈红色，最大光吸收在488nm；当它与蛋白质结合后变为青色，蛋白质-色素结合物在595nm波长下有最大光吸收。其光吸收值与蛋白质含量成正比，因此可用于蛋白质的定量测定。蛋白质与考马斯亮蓝G-250结合在2min左右的时间内达到平衡，完成反应十分迅速；其结合物在室温下1h内保持稳定。该法是1976年Bradford建立，试剂配制简单，操作简便快捷，反应非常灵敏，灵敏度比Lowry法还高4倍，可测定微克级蛋白质含量，测定蛋白质浓度范围为0～1 000μg／mL，是一种常用的微量蛋白质快速测定方法。

关于国家十一五计划的 乳制品质量安全控制技术研究与产业化示范中青霉素降解产物－蛋白质复合物方面哪位大侠能介绍一下吗？介绍几篇文献也行不胜感激 因为我查了很多文献都没有这方面的知识 都没找到不清楚到底是与哪种蛋白形成了什么复合物

中国药典2020版《9302 中药有害残留物限量制定指导原则》规定了中药重金属及有害元素主要有铅（Pb）、汞（Hg）、镉（Cd）、铜（Cu）、砷（As）等；《2321 铅、镉、砷、汞、铜测定法》则指出主要检测方法为原子吸收分光光度法和ICP-MS法。世界各国对于毒性元素的价态，特别是无机砷、甲基汞、六价铬的价态均有明确的限量规定，2015版《中国药典》首次制定了通则《2322元素形态及其价态测定法》，2020版药典对通则2322进行了修订和完善，进一步规范了矿物药及其制剂和动、植物类中药（除甲类、毛发类）的前处理方法，检测方法为LC-ICP-MS法。ICP-MS 测定金银花和白芷中的重金属含量依据中国药典《2321 铅、镉、砷、汞、铜测定法》中收载的ICP-MS法测定金银花和白芷中砷、镉、汞、铅、铜等5种重金属元素；采用硝酸+双氧水微波消解，结合动能歧视模式，消除多原子离子的干扰；以内标法，消除物理干扰和基体效应的影响，实现高精密度、高准确度测定。检出限在0.016~0.069μg/L，连续测定11次精密度均在小于5%，样品中各元素加标回收率均在80%~120%之间。

蛋白质纯化及复性 重组蛋白在大肠杆菌（E. coli）高效表达时，往往以不溶的、无活性的蛋白聚集体，即包涵体(inclusion body)的形式存在于细胞内。必须从细胞内分离出包涵体，采用高浓度变性剂（如7.0mol/L盐酸胍、8.0mol/L脲）溶解包涵体，然后除去变性剂或降低变性剂的浓度，使包涵体蛋白得以复性，最后再用色谱法使目标蛋白质得到纯化。其中包涵体蛋白的复性和纯化是整个过程中的核心。 目前重组蛋白生产中普遍存在的问题是：（1）复性效率低。传统的复性方法稀释法和透析法。稀释复性法对样品几十倍，甚至上百倍的稀释会使样品的体积急剧增大，给后续的分离纯化带来很大的困难，而且复性过程中需要较大的复性容器。透析法耗时较长，而且要多次更换透析溶液。这两种方法的共同缺点是蛋白质在复性过程中会发生聚集而产生大量沉淀，复性效率低，通常蛋白质的活性回收率只有5~20%，而且复性后的蛋白质溶液中含有大量的杂蛋白，需要进行进一步的分离纯化。（2）工艺路线烦琐，生产周期长。在传统的重组蛋白质分离纯化工艺中，大多采用经典的软凝胶分离介质，由于这种介质的颗粒较大，分离效率较差，因此常常需要采用多种不同模式的色谱操作联用对目标蛋白质进行纯化，才能得到纯度符合一定标准的目标蛋白质。另外，这种色谱介质的耐压性很差，只能在流速较低的情况下进行操作，分离纯化时间较长。分离纯化步骤多和分离时间长使得蛋白质的质量回收率和活性回收率很低。而且在传统的重组蛋白质生产工艺中，蛋白质的复性和纯化是生产过程中两个独立的单元操作，也在很大程度上制约着生产效率。（3）生产成本高，设备投资大。由于复性和分离纯化分别单独进行，而且分离纯化步骤多，每一步都需要有与之配套的设备，致使设备投资大，生产成本高。随着生产规模的增加，这种弊端会愈来愈严重。 1991年耿信笃教授首先将高效疏水相互作用色谱(HPHIC)用于变性蛋白的复性，很好的解决了上述问题，现已成功用于重组人干扰素-g(rhIFN-g)、重组人干扰素-a(rhIFN-a)、人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)、重组人胰岛素原(proinsulin)、重组牛朊病毒(prion)等重组蛋白以及溶菌酶和核搪核酸酶等标准模型蛋白的复性与同时纯化中。目前，排阻色谱法、离子交换色谱法和亲合色谱法也已用于蛋白质的复性和同时纯化中。与传统的稀释法及透析法比较，用色谱法进行蛋白复性的优点是：①在进样后可很快除去变性剂；②由于色谱固定相对变性蛋白质的吸附，可明显地减少、甚至完全消除复性过程中蛋白质聚集体和沉淀的产生，从而提高蛋白质复性的质量和活性回收率；③在蛋白质复性的同时可使目标蛋白质与杂蛋白分离以达到纯化的目的，使复性和纯化同时进行；④便于回收变性剂，以降低废水处理成本。简言之，色谱法复性可以提高蛋白质的活性和质量回收率，将蛋白复性和纯化集成在一步操作完成，缩短了操作步骤和生产时间，减少了设备投资，使生产成本大大降低，已经引起了全世界范围内许多生化研究者和重组蛋白药物生产厂家的关注。由于高效液相色谱（HPLC）分离效率高，往往在一步操作中便可得到纯度符合要求的蛋白质，而且分离速度快，在应用方面具有更大的优势。

鱼富含优质蛋白质，其含量要比鸡蛋、猪肉中的高很多，因此生理价值较高，鱼类的蛋白质含量约15～24%，所以鱼肉是很好的蛋白质来源，而且这些蛋白质吸收率很高，约有87～98%都会被人体吸收。此外鱼肉的肌纤维比较纤细，组织蛋白质的结构松软，水分含量较多，肉质细嫩，很容易被人体消化。　　此外，鱼油还含有丰富的维生素A及D，特别是鱼的肝脏含量最多。鱼类也含有水溶性的维生素B6、B12、烟碱酸及生物素。鱼类还含有矿物质，最值得一提的是丁香鱼或沙丁鱼等，若带骨一起吃，是很好的钙质来源;海水鱼则含有丰富的碘;其它如磷、铜、镁、钾、铁等，也都可以在吃鱼时摄取到。不同的鱼有不同的食疗作用。豆制品加盟nd.spzs.com　　鲢鱼：有温中益气、暖胃、润肌肤等功能，是温中补气养生食品。 青鱼：有补气养胃、化湿利水、祛风除烦等功能。其所含锌硒等微量元素有助于抗癌。　　黑鱼：有补脾利水、去瘀生新、清热祛风、补肝肾等功能。黑鱼与生姜红枣煮食对治疗肺结核有辅助作用。黑鱼与红糖炖服可治肾炎。产妇食清蒸黑鱼可催乳补血。有滋肝肾、补气血、清胃去热等功能。是妇女的保健食品，有养血、明目、通经、安胎、利产、止血、催乳等功能。　　草鱼：有暖胃和中平肝祛风等功能，是温中补虚养生食品。 带鱼：有暖胃、补虚、泽肤、祛风、杀虫、补五脏等功能，可用作迁延性肝炎、慢性肝炎的辅助治疗。肝炎患者用鲜带鱼蒸熟后取上层油食之，久服可改善症状。 鳗鱼：有益气养血、柔筋利骨等功能。　　鲫鱼：有益气健脾、利水消肿、清热解毒、通络下乳等功能。腹水患者用鲜鲫鱼与赤小豆共煮汤服食有疗效。用鲜活鲫鱼与猪蹄同煨，连汤食用，可治产妇少乳。鲫鱼油有利于心血管功能，还可降低血液粘度，促进血液循环。 鲢鱼，有温中益气、暖胃、润肌肤等功能，是温中补气养生食品。　　青鱼，有补气养胃、化湿利水、祛风除烦等功能。其所含锌硒等微量元素有助于抗癌。 黑鱼，有补脾利水，去瘀生新、清热祛风、补肝肾等功能。黑鱼与生姜红枣煮食对治疗肺结核有辅助作用。黑鱼与红糖炖服可治肾炎。产妇食清蒸黑鱼可催乳补血。　　墨鱼，有滋肝肾、补气血、清胃去热等功能。是妇女的保健食品，有养血、明目、通经、安胎、利产、止血、催乳等功能。　　草鱼，有暖胃和中平肝祛风等功能，是温中补虚养生食品。 带鱼，有暖胃、补虚、泽肤、祛风、杀虫、补五脏等功能，可用作迁延性肝炎、慢性肝炎的辅助治疗。肝炎患者用鲜带鱼蒸熟后取上层油食之，久服可改善症状。 鳗鱼，有益气养血、柔筋利骨等功能。　　黄鳝，入肝脾肾三经，有补虚损、祛风湿、强筋骨等功能，对血糖也有一定的调节作用。气血两虚者可用黄鳝肉丝、黄芪(纱布包)加水煮熟调味服食。小儿疳积、形瘦食少者可用黄鳝一条，切段加鸡内金少许煮熟食用。内痔出血、子宫脱垂可将黄鳝煮食，久服有效。　　泥鳅，有补中益气、祛除湿邪、解渴醒酒、祛毒除痔、消肿护肝之功能。泥鳅与大蒜猛火煮熟可治营养不良之水肿。泥鳅用油煎至焦黄加水煮汤可治小儿盗汗。泥鳅炖豆腐可治湿热黄疸。泥鳅与虾黄同煮服，可治阳痿不举。

【会议讲座】Bruker新一代小分子晶体学和蛋白质晶体学解决方案：PHOTON II CPAD探测器和IμS 3.0光源【会议时间】2016年03月16日 14:00:00【主讲老师】张振义博士，Bruker AXS SCD单晶应用科学家，负责中国区的小分子晶体学和蛋白质晶体学的技术支持工作。在晶体学领域具有10年的研究经历，涵盖蛋白质晶体学，蛋白质和药物小分子复合物以及小分子晶体结构的研究。【会议简介】本次讲座将为您带来最新单晶衍射技术的精彩介绍，让您的工作变得更加得心应手，效率更高。布鲁克公司一直致力于在光源和探测技术上革命性的创新，在材料研究、晶体结构研究等领域给用户提供了一系列解决方案，引领者单晶衍射仪的潮流。最新推出新一代PHOTON II探测器，自动化程度更高，易学易用，在提升用户工作效率方面有着惊人的进步。该探测器使用了最前沿的用于四代同步辐射光源的CPAD（电荷积分像素阵列）技术，将实验室探测器的技术提升到了一个新的高度：最大的单片有效区域，最高的动态范围，单光子的检测效率。同时布鲁克公司推出新一代，光强度媲美转靶的微焦斑光源：IμS 3.0。这些新技术的应用将为您的晶体学的实验带来质的飞跃。【会议报名】http://www.instrument.com.cn/webinar/meeting/meetingInsidePage/1798-------------------------------------------------------------------------------1、报名条件：只要您是仪器网注册用户均可报名，通过审核后即可参会。2、报名截止时间：2016年03月15日 13:303、报名及参会咨询：QQ群—171692483