补骨脂甲素

化妆品中补骨脂特征成分补骨脂素、异补骨脂素、新补骨脂异黄酮和补骨脂二氢黄酮的检测方法1 适用范围　　本方法规定了用高效液相色谱法定性检测化妆品中补骨脂特征成分补骨脂素、异补骨脂素、新补骨脂异黄酮和补骨脂二氢黄酮的方法。　　本方法适用于化妆品中补骨脂特征成分补骨脂素、异补骨脂素、新补骨脂异黄酮和补骨脂二氢黄酮的定性测定。2 方法提要　　样品在经过提取后，经高效液相色谱仪分离，二极管阵列检测器检测，经与平行操作的补骨脂素、异补骨脂素、新补骨脂异黄酮和补骨脂二氢黄酮对照品及补骨脂对照药材比较，以保留时间和紫外光谱图定性，鉴别补骨脂特征成分补骨脂素、异补骨脂素、新补骨脂异黄酮和补骨脂二氢黄酮的存在。本方法对补骨脂素、异补骨脂素、新补骨脂异黄酮和补骨脂二氢黄酮的检出限和取样品0.5 g时的检出浓度见表1。 表1 4种补骨脂特征成分的检出限和检出浓度化合物检出限（ng）检出浓度（μg/g）补骨脂素0.30.6异补骨脂素0.30.6新补骨脂异黄酮0.30.6补骨脂二氢黄酮0.30.63 试剂和材料　　除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为实验室用一级水。3.1 乙腈，色谱纯。3.2 补骨脂素，纯度≥99%。3.3 异补骨脂素，纯度≥99%。3.4 新补骨脂异黄酮，纯度≥98%。3.5 补骨脂二氢黄酮，纯度≥99%。3.6 补骨脂，中国食品药品检定研究院，供鉴别用。3.7 补骨脂特征性成分混合标准溶液（=0.1 μg/mL）：分别称取补骨脂素（3.2）、异补骨脂素（3.3）、新补骨脂异黄酮（3.4）、补骨脂二氢黄酮（3.5）对照品各5 mg（精确到0.1 mg），置500 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，配制成质量浓度各为10 μg/mL的标准溶液。精密量取各标准溶液0.1 mL置10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得0.1 μg/mL的混合标准溶液。3.8 补骨脂标准储备溶液：取补骨脂对照药材0.2 g，置50 mL三角瓶中，加30 mL 70%乙醇回流提取1h，滤过，滤液置100 mL量瓶中，加70%乙醇稀释至刻度，摇匀，即得。4 仪器4.1 高效液相色谱仪：具二极管阵列检测器。4.2 分析天平：感量为0.1 mg。4.3 移液器。4.4 涡旋振荡器。4.5 超声波清洗仪（功率不低于200W）。4.6 高速离心机：转速不小于10000 r/min。

化妆品中补骨脂特征成分补骨脂素、异补骨脂素、新补骨脂异黄酮和补骨脂二氢黄酮的检测方法

[size=5]超临界流体色谱法测定补骨脂中补骨脂素和异补骨脂素含量[/size] 来源: 作者:陆峰，刘荔荔，李玲，吴玉田摘要目的：建立超临界流体色谱法用于测定补骨脂中补骨脂素和异补骨脂素的含量，并研究其影响因素。方法：用改性的超临界C02萃取中药补骨脂，超临界流体色谱法测定其中的香豆素成分(补骨脂素和异补骨脂素)含量。色谱条件：15 cm×1mm×3μm氨基柱，流动相为含5％甲醇的CO2，柱温40℃，柱头压27．6MPa，UV 247 nm检测。结果：在选定固定相条件下．流动相对组分的洗脱和选择性影响最大，柱温、柱压次之。补骨脂素的回收率为96．9％(RSD=1．8％)，异补骨脂素的回收率为95．I％(RSD=I．6％)。培论：与超临界流体萃取法联用，本法可用于香豆素类化合物的分离分析。关键词 超临界流体色谱法；补骨脂素；异补骨脂素；超临界流体萃取法材料和方法 药品和试剂：补骨脂药材由上海长海医院提供，并由本院生药教研室李彬鉴定；补骨脂素(psoralen)、异补骨脂索(isopsoralen)对照品购自中国药品生物制品检定所；SFE和SFC所用CO2购自上海BOC气体公司；蒽(内标物)和氯仿为分析纯；甲醇为HPLC级。 仪器：SFX 2-10萃取器，model 100DX／DM 注射泵，泵控制器． MWD检测器(ISCO．USA)，eppendof CH．30色谱柱加热器。 SFE条件：萃取溶剂为CO2，加入氯仿0．06 ml作改性剂，压力为38．5 MPa，温度为70℃：，静态萃取1 min，动态萃取7ml，限流管温度80℃，甲醇作吸收溶剂。 SFC条件：用SpheriorbNH2 柱(150mm×lmm×3μm，A1ltech，USA)，流动相为含5％甲醇的CO2．柱头压27．6 MPa，柱温4O℃ ，进样量为0．5， 流速为0．10ml/min，采用50cm×15μm石英毛细管作限流管，检测器AUFS 0．05，247 nm检测。结果与讨论1 固定相／流动相对保留的影响 以超临界C02(含少量改性剂)为基本流动相的SFC是正相色谱，一些极性较弱的化合物在C18柱上几乎不保留 本实验中补骨脂素和异补骨脂素很快从Cl8柱上洗脱，几乎没有分离效果，所以未用C18柱而改用正相NH2柱。 改性剂浓度对组分的保留影响很大。在NH2柱上．用纯C02作流动相时，补骨脂素和异补骨脂素在60min内未洗脱；而在高浓度改性剂时，因两者结构较相似，几乎同时洗脱。本实验用5％ 甲醇时洗脱效果良好.2 温度、压力对SFC的影响 温度和压力对保留也有影响。本实验在20．7～ 34．5 MPa压力范围和3O～6O℃ 温度范围内考察了这两个因素的影响。保留时问随压力增大而缩短；随温度升高而延长.3 标准曲线 在上述最佳色谱条件下．补骨脂素、异补骨脂素、内标蒽保留时间分别为6．37，5．00和4．00 min。 用甲醇分别配制对照品溶液和内标溶液：补骨脂素0．423mg/ml，异补骨脂素0．17mg/ml，蒽1．343 mg/ml。分别精密吸取对照品溶液25，50．100．200，400和600μl于10m1量瓶中，加入内标溶液5Oμl，定容，进行SFC分析。以对照品峰与内标峰面积之比(Y)对各自浓度(x,μ/m1)回归．得回归方程。 补骨脂素：Y=23．49X+1．37×10-4，r =0．999； 异补骨脂素：Y：20．04X+0．016．r =0．999。4 方法回收率 精密量取补骨脂素、异补骨脂素溶液各150．250和350μl，加入酸洗硅藻土50mg，挥干溶剂．按SFE条件萃取；甲醇吸收液再加入内标溶液50μl，定容、稀释，各进祥3次，按SFC步骤渊定，计算上述3种浓度的回收率，补骨脂素的回收率为96．9％( r=9．RSD=1．8％)；异补骨脂素的回收率为95．1％ ( r=9，RSD：1．6％ )。5 样品测定 分别取3批干燥药材粉碎．过1OO目筛．精密称取粉末50mg按上述条件萃取；在甲醇吸收液中加入适量内标液，稀释后每份溶液进样3次．按上述色谱条件测定，代入标准曲线，得3批药材中的补骨脂素、异补骨脂索含量分别为0．77％．0．70％ ；0．86％ ．0．82％ ：0．65％ ，0．53％ 。 以上结果表明：流动相组成是影响分离的最重要因素，加入改性剂可大大改善中等极性化合物的洗脱分离。系统的温度和压力对分离也有影响。与SFE联用，SFC可以较方便地用于某些香豆素类化合物的分离分析。

[b][size=16px]药用补骨脂[/size][/b][size=16px][/size][b][size=16px]《药性论》：“主男子腰疼，膝冷囊湿，逐诸冷痹顽，止小便利，腹中冷。”《本草纲目》：“治肾泄，通命门，暖丹田，敛精神。”《本草求真》：“能敛神明，使心包之火与命门之火相通，因而元阳坚固，骨髓充实。”《本草经疏》：“能暖水脏，阴中生阳，壮火益土之要药也。”[/size][/b][size=16px][/size][size=16px]补骨脂单用有效，也常与杜仲、核桃仁、熟地黄、五味子、菟丝子等药材同用，以增强补肾壮阳、固精缩尿的效果。[/size][size=16px][/size][size=16px]如用于治疗由肾阳不足引起的阳痿遗泄、尿频、遗尿等症，常配伍仙灵脾、菟丝子等同用。治虚冷泄泻，常与肉豆蔻等同用。肾气不足，摄纳无权，引起喘促，补骨脂温肾而纳气平喘，常与胡桃肉配伍以治虚寒气喘。[/size]

化妆品中呋喃香豆素类（三甲沙林、8-甲氧基补骨脂素、5-甲氧基补骨脂素）和欧前胡内酯的检测方法

[em06] 如题菲罗门柱250*4.6，1.0ml/min，246nm 其中对照品浓度为：补14.32ug/ml，异补10.064ug/mlyy000021 对照品 柱温35度 进样20ul 两峰分离度 2.41 补塔板数4023 甲醇:水(43:57)yy000022 对照品 35度 进样20ul 两峰分离度 2.37 补塔板数4015 甲醇:1%醋酸(43:57)yy000024 对照品 40度 进样5ul 两峰分离度 3.19 补塔板数8117 甲醇:1%醋酸(43:57)yy000025 中药复方制剂的醇提液 35度 进样10ul 两峰分离度 3.13 补塔板数7415 甲醇:1%醋酸(43:57)

对照品溶液的制备 取补骨脂素对照品和异补骨脂素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml各含2ug的溶液，即得。供试品溶液的制备 取本品水蜜丸，研细，取0.5g，精密称定，置研钵中，加硅藻土2g，研匀，转移至具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml,密塞，称定重量，超声处理（功率250W，频率50kHz）30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。问题1、对照品溶液制备的过程中，补骨脂素对照品和异补骨脂素对照品是称好放同一量瓶中溶解稀释更好，还是分别配好呢？2、这个供试品的制备中，精密称定后，“置研钵中，加硅藻土2g，研匀，转移至具塞锥形瓶中”，我觉得这个精密称定后，加硅藻土置研钵中研匀会造成样品的损失吧，你再怎么倒也倒不干净吧。。。。我是直接称好放入锥形瓶中，再加2g硅藻土进去，拿个玻璃棒搅一下，不知道这样可不可以？？？

关于印发化妆品中氢化可的松等禁用物质或限用物质检测方法的通知 国食药监保化13号 2012年01月18日 发布 各省、自治区、直辖市食品药品监督管理局（药品监督管理局）：　　为规范化妆品中禁用物质和限用物质检测技术要求，提高化妆品质量安全，化妆品中氢化可的松等禁用物质或限用物质的检测方法已经国家食品药品监督管理局化妆品标准专家委员会审议通过，现予印发。　　附件：1．化妆品中氢化可的松等7种禁限用物质的检测方法　　　　　2．化妆品中水杨酸的检测方法　　　　　3．化妆品中酮麝香的检测方法　　　　　4．化妆品中巯基乙酸的检测方法　　　　　5．化妆品中8种邻苯二甲酸酯的检测方法　　　　　6．化妆品中4-氨基偶氮苯和联苯胺的检测方法　　　　　7．化妆品中苯并芘的检测方法　　　　　8．化妆品中4-氨基联苯及其盐的检测方法　　　　　9．化妆品中间苯二酚的检测方法　　　　　10．化妆品中32种禁限用染料成分的检测方法　　　　　11．化妆品中苯扎氯铵的检测方法　　　　　12．化妆品中羟基喹啉的检测方法　　　　　13．化妆品中过氧化氢的检测方法　　　　　14．化妆品中苄索氯铵、劳拉氯铵和西他氯铵的检测方法　　　　　15．化妆品中颜料橙5等5种禁用着色剂检测方法　　　　　16．化妆品中呋喃香豆素类（三甲沙林、8-甲氧基补骨脂素、5-甲氧基补骨脂素）和欧前胡内酯的检测方法　　　　　17．化妆品中补骨脂特征成分补骨脂素、异补骨脂素、新补骨脂异黄酮和补骨脂二氢黄酮的检测方法　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　国家食品药品监督管理局　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　二○一二年一月十六日

[color=#444444]请教一个问题，我做的是补骨脂素的肝微粒体孵育实验。质谱进样后找不到补骨脂素的峰，但是进了液相就能看出来有补骨脂素的峰。请问这是什么原因呢？？实验里面的试剂有：磷酸盐缓冲液、MgCl2、四钠盐、甲醇。[/color]

[color=#444444]各位大神好，请教一个问题，我做的是补骨脂素的肝微粒体孵育实验。质谱进样后找不到补骨脂素的峰，但是进了液相就能看出来有补骨脂素的峰。请问这是什么原因呢？？实验里面的试剂有：磷酸盐缓冲液、MgCl2、四钠盐、甲醇。[/color]

任务编号文献名称发布日期任务领取人完成情况任务一四一141.1 高效液相色谱法测定氢化可的松注射液的含量 10.29 dahua1981　已完成 迪马奖励积分20分141.2 高效液相色谱法测定抗金葡颗粒中黄芩苷的含量141.3 高效液相色谱法测定核黄素磷酸钠的有关物质 141.4 HPLC法测定健肝降脂丸中柚皮苷的含量 141.5 高效液相色谱法测定清肺抑火片中三组分的含量141.6 HPLC测定补骨脂酊中补骨脂素和异补骨脂素的含量141.7 HPLC法测定精制银翘解毒片中绿原酸的含量 141.8 HPLC法测定格列齐特片的含量 141.9 高效液相色谱法测定清肺抑火片中栀子苷的含量141.10 毕克草Ⅱ在油菜中的残留动态及其光降解的研究 　任务一四二142.1 HPLC法测定门冬氨酸洛美沙星注射液的含量和有关物质方法研究 10.29 dahua1981　已完成 迪马奖励积分20分142.2 多波长高效液相色谱法测定四季三黄胶囊中4种主药成分含量 142.3 五味子软胶囊中防腐剂对羟基苯甲酸乙酯的测定 142.4 HPLC-ELSD法测定肾衰康口服液中黄芪甲苷的含量 142.5 HPLC法测定阿托伐他汀钙的血药浓度 142.6 高效液相色谱法测定饲料中的苯并(a)芘 142.7 反相高效液相法测定克霉唑栓有关物质142.8 高效液相色谱法测定芦荟排毒胶囊中芦荟大黄素的含量142.9 HPLC法测定万寿菊茎中叶黄素的含量142.10 毛细管气相色谱法测定食品中甜蜜素 　任务一四三143.1 HPLC法测定麻黄中盐酸麻黄碱及盐酸伪麻黄碱的含量 10.29 dahua1981　已完成 迪马奖励积分20分143.2 高效液相色谱法测定小儿氨酚黄那敏颗粒中对乙酰氨基酚的含量 143.3 高效液相色谱法测定哮喘胶囊中盐酸庥黄碱含量 143.4 理中丸(浓缩丸)中甘草酸的含量测定 143.5 HPLC测定氨咖黄敏胶囊中对乙酰氨基酚和咖啡因的含量 143.6 HPLC法测定止咳橘红口服液中柚皮苷的含量143.7 HPLC法测定白芍和赤芍中1,2,3,4,6-五-O-倍酰-D-葡萄糖含量 143.8 HPLC法测定银杏叶提取物中总黄酮醇苷的含量 143.9 逍遥蒌贝胶囊的质量标准研究 143.10 血竭血清指纹图谱的研究 　任务一四四144.1 高效液相色谱法测定安肺胶囊中黄芩苷的含量10.

[b][font=宋体]【含量测定】[/font][/b][font=宋体]照高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]法（通则0512）测定。[/font] [font=宋体]色谱条件与系统适用性实验：以苯基键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，0.5%三氟乙酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为280nm，流速为1.0ml/min。理论板数按地骨皮乙素峰计算应不低于5000。[/font] [table][tr][td=1,1,187] [font=宋体]时间（分钟）[/font][/td][td=1,1,180] [font=宋体]流动相A(%)[/font][/td][td=1,1,162] [font=宋体]流动相B(%)[/font][/td][/tr][tr][td=1,1,187] [font=宋体]0→3[/font][/td][td=1,1,180] [font=宋体]10[/font][/td][td=1,1,162] [font=宋体]90[/font][/td][/tr][tr][td=1,1,187] [font=宋体]3→10[/font][/td][td=1,1,180] [font=宋体]10→12[/font][/td][td=1,1,162] [font=宋体]90→88[/font][/td][/tr][tr][td=1,1,187] [font=宋体]10→20[/font][/td][td=1,1,180] [font=宋体]12→14[/font][/td][td=1,1,162] [font=宋体]88→86[/font][/td][/tr][tr][td=1,1,187] [font=宋体]20→35[/font][/td][td=1,1,180] [font=宋体]14→15[/font][/td][td=1,1,162] [font=宋体]86→85[/font][/td][/tr][/table] [font=宋体]对照品溶液的制备：取地骨皮甲素、地骨皮乙素对照品适量，精密称定，加甲醇-0.5%乙酸溶液（1：1）溶液分别制成每1ml含地骨皮甲素0.1mg、地骨皮乙素0.5mg的溶液，作为对照品溶液。[/font] [font=宋体]供试品溶液的制备：取本品1.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇-0.5%乙酸溶液（1：1）溶液50ml，密塞，称定重量，超声提取30分钟，放冷，用甲醇-0.5%乙酸溶液（1：1）溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。[/font] [font=宋体]测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱仪[/color][/url]，测定，即得。[/font] [font=宋体]本品按干燥品计算，含地骨皮甲素（C[sub]28[/sub]H[sub]42[/sub]N[sub]4[/sub]O[sub]6[/sub]）不得少于0.20%，地骨皮乙素（C[sub]28[/sub]H[sub]42[/sub]N[sub]4[/sub]O[sub]6[/sub]）不得少于1.00%。[/font] [b][size=16px][b][color=#ff0000]地骨皮中浸出物测定方法[/color][/b][/size] [font=宋体]【浸出物】[/font][/b][font=宋体][size=16px][color=#000000]照醇溶性浸出物测定法（通则2201）项下的热浸法测定，用稀乙醇作溶剂，不得少于6.0%。[/color][/size][/font]

国内最大最专业的国家标准物质服务平台坛墨质检-国家标准物质中心（北京坛墨质检科技有限公司），是国家质检总局指定的国家标准物质研制单位，是国内最大最专业的食品、环境、职业卫生标准物质生产商和服务商。 产品编号 产品名称 标准值 BW5193双去氧基姜黄素对照品，有报告HPLC≥98%BW5648白杨素对照品，有报告HPLC≥98%BW5277五味子酯乙对照品，有报告HPLC≥98%BW5278五味子酯甲对照品，有报告HPLC≥98%BW5347喜树碱对照品，有报告HPLC≥98%BW5348续随二萜醇对照品，有报告HPLC≥98%BW5349千金子二萜醇对照品，有报告HPLC≥98%BW5350龙脑（天然龙脑）对照品，有报告HPLC≥98%BW53515-羟甲基糠醛对照品，有报告HPLC≥98%BW5353百秋李醇对照品，有报告HPLC≥98%BW5354去氢木香内酯对照品，有报告HPLC≥98%BW5069木香烃内酯对照品，有报告HPLC≥98%BW5356异补骨脂素对照品，有报告HPLC≥98%BW5355补骨脂素; 制斑素对照品，有报告HPLC≥98%BW5357肉桂酸对照品，有报告HPLC≥98%BW5359肉桂醛对照品，有报告HPLC≥98%BW5032(+)-儿茶素对照品，有报告HPLC≥98%BW5251胆酸对照品，有报告HPLC≥98%BW5362DL-薄荷醇对照品，有报告HPLC≥98%BW5360果糖对照品，有报告HPLC≥98%BW5058芒果苷对照品，有报告HPLC≥98%BW5645去氧胆酸对照品，有报告HPLC≥98%BW5170丹酚酸A对照品，有报告HPLC≥98%BW5136野黄芩苷对照品，有报告HPLC≥98%BW5363酪醇对照品，有报告HPLC≥98%BW5365滨蒿內酯对照品，有报告HPLC≥98% 坛墨质检现有员工79人，办公室面积450平米，实验室1650平米；销售、客服、财务及行政人员35人，实验室工作人员21人，库房14人，市场部8人。实验仪器设备：气相色谱、液相色谱、气质联用、液质联用、离子色谱、紫外分光光度计，原子吸收、ICP-OES和ICP-MS；库房面积450平米，库房工作人员12人，现货产品5万个，坛墨质检自主研发的产品近3000个，已申报国标345项，填补国内空白的产品达到65项。坛墨质检是国内唯一提供标准溶液定制服务的标准物质研制单位，定制范围：特殊浓度定制、特殊溶剂定制、混标定制。

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任务号文献名称发布时间任务领取人完成情况任务二二一HPLC测定亚硫酸氢钠穿心莲内酯　dahua1981　　HPLC测定野菊花中两种黄酮类药效组分的含量HPLC测定野老鹳草中没食子酸和鞣花酸的总量HPLC测定薏苡中薏苡素的含量HPLC测定茵栀黄注射液中栀子苷的含量HPLC测定元宝枫中游离和水解没食子酸的含量HPLC测定元胡药材中脱氢延胡索碱的含量HPLC测定脂清颗粒中2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量HPLC测定止痛透骨膏中欧前胡素的含量 HPLC测定注射用13种维生素中维生素B_6、烟酰胺、D-泛醇的含量任务二二二HPLC测定注射用尼莫地平的含量及有关物质　dahua1981　　HPLC测定注射用氢溴酸高乌甲素含量HPLC对广西不同时期喜树果中喜树碱动态积累的研究HPLC法测定“网脱Ⅰ号”口服液中阿魏酸的含量HPLC法测定14个地区山楂中羽扇豆醇的含量HPLC法测定2,3-二氢苯并呋喃-5-甲醛的含量及其有关物质HPLC法测定5-氟尿嘧啶磁性碳微球的药物含量及包封率HPLC法测定β-榄香烯亚微乳注射液的含量及包封率HPLC法测定β-榄香烯脂质体药物含量及包封率HPLC法测定阿尼西坦分散片的含量任务二二三HPLC法测定阿托伐他汀钙片的含量　dahua1981　　HPLC法测定奥扎格雷钠注射液的含量HPLC法测定白癜风片中补骨脂素和异补骨脂素含量HPLC法测定白花蛇舌草中反式6-O-对香豆酰鸡屎藤苷甲酯的含量HPLC法测定板蓝根药材中靛蓝和靛玉红的含量HPLC法测定板栗种仁中原儿茶酸的含量HPLC法测定蒡芩慢咽滴丸中酯蟾毒配基及华蟾酥毒基的含量HPLC法测定比力洼-3中盐酸麻黄碱的含量HPLC法测定博落回药材不同器官白屈菜红碱含量HPLC法测定补肾斑龙片中松果菊苷的含量任务二二四HPLC法测定不同产地白花蛇舌草中2种蒽醌化合物的含量　dyn1985　　HPLC法测定不同产地川芎中阿魏酸的含量HPLC法测定不同产地蜂胶中白杨素的含量HPLC法测定不同产地鬼臼类药材中鬼臼毒素的含量HPLC法测定不同产地及品种木豆叶中牡荆苷的含量HPLC法测定不同产地降香中橙花叔醇的含量HPLC法测定不同产地天麻中天麻素的含量HPLC法测定不同来源红花中对香豆酸的含量HPLC法测定不同来源款冬

[size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px]连翘（F. suspensa）是中医临床常用的传统中药，因其解热和抗炎作用而在中医中用于治疗传染病，有清热、解毒、排脓、散肿等功效。最近的研究表明，F. suspensa水提取物（WFS）对抗破骨细胞异常分化和雌激素缺乏引起的骨质流失有益，且WFS的植物化学特征表明丰富的生物碱、木脂素、萜烯类、黄酮类和类固醇成分可能具有抗骨质疏松活性。在这些成分中，连翘脂素（Phi）是尚未在骨代谢中报道的成分之一。2024年2月15日，上海交通大学医学院附属瑞金医院/上海市创伤骨科研究所江敏、徐醒、奚小冰团队在Phytother Res（IF=7.2）上发表题为“Phillygenin prevents osteoclast differentiation and bone loss by targeting RhoA”的文章，发现连翘叶中富含的一种化合物连翘脂素（Phi）在体内外具有抗破骨细胞生成特性。机制上，Phi与RhoA结合可通过NF-κB/NFATc1/c-fos通路和RhoA/ROCK1/Cofilin通路在体外抑制RANKL诱导的破骨细胞生成和骨吸收，研究可能为Phi和F. suspensa在功能性食品中开辟新的应用领域。[/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px]1、连翘脂素减轻体内LPS诱导的小鼠颅骨骨溶解作者通过脂多糖（LPS）诱导的小鼠颅骨骨溶解模型来说明Phi在体内的保护作用，发现Phi显著逆转LPS诱导的骨质破坏。此外，组织切片TRAP染色显示LPS显著增加破骨细胞（OC），而Phi则减少OC的形成，表明Phi抑制OC的形成，从而抑制体内骨质破坏。[/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px]2、Phi 可预防卵巢切除术（OVX）引起的体内骨质流失作者接着评估了Phi在OVX诱导的骨质疏松症小鼠模型中的作用，发现OVX小鼠表现出广泛的骨质疏松，而Phi使其得到改善。此外，对股骨切片也进行了TRAP和HE染色，结果显示OVX组的OCs数量增加，而Phi组的OCs数量减少。[/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px]3、Phi 抑制小鼠BMMs破骨细胞生成作者接着体外评估了Phi的作用，细胞增殖和细胞毒性实验显示Phi不干扰BMMs的增殖，且无细胞毒性，TRAP染色结果表明Phi以剂量依赖性方式抑制成熟OC的形成。随后以Phi干预OCs分化，发现Phi在早期、中期、晚期均不同程度抑制破骨细胞形成。[/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px]4、Phi通过OC分化和骨吸收相关基因表达损害骨吸收接下来，作者利用RNA-seq阐明 Phi 抑制OC分化的潜在分子机制，KEGG发现差异基因主要参与破骨细胞分化途径和肌动蛋白细胞骨架途径的调控等，GO显示骨吸收和骨重建的调控等骨重建过程，肌动蛋白细胞骨架组织过程显著富集。转录组结果和[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]验证均显示Phi处理后与破骨细胞分化相关的基因下调。[/size] [size=14px] [/size] [size=14px]5、Phi与RhoA结合并抑制RhoA激活剂诱导的RhoA活性接着作者采用了Pulldown+MS的方法识别Phi的直接靶点。首先合成生物素化的探针，发现生物素标签不会影响Phi的活性，进一步开展pulldown+MS鉴定到155种蛋白质，PPI显示与细胞骨架相关的簇及RhoA蛋白的存在。已有报道表明RhoA对破骨细胞的生长、运动和骨吸收至关重要。作者采用免疫沉淀法进一步证实了Phi与RhoA的结合，分子对接预测了结合位点，进一步酶活实验发现Phi能够以剂量依赖性的方式抑制RhoA活性。[/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px]6、Phi通过RhoA/ROCK1/NFATc1通路发挥抑制作用NFATc1/c-fos已被证实是破骨细胞生成中最重要的转录因子，作者发现Phi抑制 NFATc1/c-fos 的mRNA和蛋白表达。TRAP染色结果显示C3（RhoA抑制剂）减少OC的形成，降低NFATc1的mRNA表达和蛋白表达，在破骨细胞生成中发挥了与Phi类似的作用。此外，敲低RhoA导致成熟OC数量减少，NFATc1蛋白表达也受到抑制。RhoA通过磷酸化ROCK1下游底物激活ROCK1，从而发挥重塑细胞骨架等作用，作者发现Phi通过RhoA/ROCK1/NFATc1通路发挥其抗破骨细胞生成作用。[/size] [size=14px] [/size] [size=14px]7、Phi靶向RhoA/ROCK1减弱RANKL诱导的NF-κb磷酸化NF-κb信号通路是参与OC分化和吸收的关键信号通路，作者发现Phi显著抑制RANKL诱导的p65磷酸化和IκBα磷酸化。此外，C3（RhoA抑制）和Y-27632（ROCK1抑制剂）显著抑制NF-κB信号通路，与 Phi 的抑制作用一致。结果表明Phi显著抑制NF-κB信号通路，并且RhoA/ROCK1信号通路也可能参与其中。[/size] [size=14px] [/size] [size=14px]8、Phi通过RhoA/ROCK1信号通路抑制OCs F-actin的形成破骨细胞中的关键骨骼蛋白F-actin聚合后形成F-肌动蛋白环，这对破骨细胞介导的骨吸收至关重要。RNA-seq结果也显示Phi抑制了肌动蛋白形成过程。作者使用TRITC鬼笔环肽染色发现Phi、C3和Y27632抑制了F-肌动蛋白环的形成，表明Phi和RhoA/ROCK参与了F-肌动蛋白环的形成。之前有报道称RhoA是Rho家族中调节ROCK1/cofilin通路以实现肌动蛋白丝分布的关键成员，WB结果显示在用Phi、C3或Y-27632处理后，ROCK1和p-cofilin/cofilin表达也降低。[/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px]总结该研究发现Phi与RhoA结合可通过NF-κB/NFATc1/c-fos通路和RhoA/ROCK1/Cofilin通路在体外抑制RANKL诱导的破骨细胞生成和骨吸收。此外，Phi显著降低LPS诱导的颅骨骨吸收，预防和缓解OVX诱导的体内骨质疏松症。[/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size][size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size] [size=14px] [/size]

膝骨性关节炎（knee osteoarthritis，KOA）主要表现为膝关节疼痛伴随活动受限、关节畸形，严重影响患者的生活质量。骨质疏松症（osteoporosis，OP）是以骨密度和骨质量下降，骨微结构破坏，造成骨脆性增加，从而容易发生骨折的全身性骨病，本质上是骨形成与吸收之间的平衡破坏。KOA的发病率随年龄增长呈现上升趋势。据相关研究统计，我国KOA发病率为11.1%～21.9%[1-2]。我国65岁及以上人口OP患病率为32%，并且持续走高，预计2035—2050年，我国居民骨质疏松性骨折发生例次将上升至599万例左右[3]。KOA与OP是临床上2种老年人常见的退行性疾病，且临床上发现很大一部分患者同时出现2种疾病，尤其是绝经妇女，2种疾病总和甚至超过老年高血压发病率。因此2病在病机特点上同属于“本虚标实”，即以肾虚为本、以血瘀为标。肾虚血瘀可从多方面影响KOA及OP的发病，以此病机为基础施以补肾活血法对证治疗已被证实能够取得很好疗效[4]。 中药在治疗KOA与OP“共病”中优势显著，有研究表明，中药在治疗KOA方面疗效优于安慰剂和化学药，中西药联用治疗疗效优于单独使用化学药[5]。中药对OP也同样有着明确治疗作用，中药中的活性成分在发现新型抗OP药物方面存在潜力。中药复方中的活性成分可以结合使用，与单个化合物相比，这些药物可能表现出更好抗骨质疏松作用[6]。补肾活血中药以补肾治肾虚，以活血行血瘀，且具有多途径、多靶点、多信号通路的特点，在KOA与OP“共病”治疗中疗效显著，并取得较好的进展。KOA与OP虽为2种疾病，但在中医理论、分子机制及临床证象等方面存在相关性。本文针对KOA与OP“共病”发病机制，对补肾活血中药治疗KOA与OP“共病”作用机制进行综述，为深入开展中医药治疗KOA与OP“共病”基础研究提供依据。 1 KOA与OP在中医理论层面的相关性 KOA在中医属“痹证”，OP多属“痿证”，肾虚为本，是痹证发生的病机基础，亦是痿证发病的基本条件；血瘀为标，是痹痿重要病机，且肢体之痹痿，内联脏腑。补肾活血中药在治疗KOA与OP方面多表现为痹痿同治。其病因病机大致有以下几类。 1.1 外邪致病 “痹”“痿”最早见于《黄帝内经》。《素问 痹论篇》对痹证成因记载道：“风、寒、湿三气杂至，合而为痹也。”因此，痹证由风、寒、湿、热等外邪侵袭人体，痹阻经络，气血运行不畅所致。另外，《素问》中亦阐述外邪侵袭可致痿，如《素问痿论篇》阐述：“有渐于湿，以水为事，若有所留，居处相湿，肌肉濡渍，痹而不仁，发为肉痿。”说明湿困肌肉，肢体麻痹不仁，形成肉痿。《素问六元正纪大论篇》中指出：“民病寒湿，发肌肉萎，足痿不收。”进一步提出寒湿之邪可相兼致痿。张锡纯在继承《黄帝内经》痿证成因理论基础上，指出：“证之大旨，当为三端，其人或风寒袭入经络；或痰涎郁塞经络；或风寒痰涎，互相凝结经络之间，以致血脉闭塞。”痿证病因可归纳为风、寒、痰涎3个方面，且这些邪气往往相兼致痿，并言：“痹之甚者即令人全体痿废。”因此KOA可逐渐发展成为OP，进一步证明KOA与OP在理论依据上的相关性。 1.2 气虚致病 张锡纯强调元气亏虚在痹痿发病中具有根本性作用，并提出痹痛发生的先决条件是元气壮旺与否，“从来治腿疼、臂疼者，多责之，或血瘀、气滞、痰涎凝滞，不知人身之气化壮旺流行，而周身痹者、瘀者、滞者，不治自愈，知元气素盛之人，得此病者极少”，在治疗气虚痹痛的健运汤方中，黄芪与党参并用，共补大气、元气。张锡纯认为大气虚损在痿证发病中同样具有决定性作用。如振颓汤方中所述：“大气虚，则腠理不固，而风寒易受，脉管湮瘀，而痰涎易郁矣。”胸中大气已虚，风、寒、痰涎方有致痿可能，若大气旺，外邪即难内侵为病。综上，气虚不仅是痹证的病机基础，亦是痿证发病的基本条件。这也从侧面证明分别对应痹证和痿证的KOA与OP在中医学角度具有极强的相关性。 1.3 气血凝滞 气血凝滞是痹证、痿证发生发展的重要病机。闭必得通，通则气血运行正常，肢体得以濡养而活动如常。外邪及气虚皆有可能凝滞气血，血行不畅，不通诱发痹证，不荣诱发痿证。气血凝滞对痹痿发生发展的直接影响，闭必得通，通则气血运行正常，肢体得以濡养而活动如常，因此，治疗痹证与痿证的各方中多配伍通气活血之品。 2 KOA与OP在遗传机制方面的相关性 遗传机制为生物体生命过程提供了表观遗传学修饰等在内的各种蓝图。表观遗传机制参与机体对环境的适应和应对复杂疾病发病的调控[7]。Jeffries等[8]应用DNA甲基化分析了KOA患者的关节软骨和软骨下骨，发现有大量基因在关节软骨及软骨下骨的相同区域共表达。其中G蛋白偶联受体参与骨与软骨发育、炎症和免疫反应等多种生物学过程，是调节骨关节发育和重建的必要物质，其破坏或突变可能导致临床上出现非对称性关节间隙变窄、软骨下骨硬化或囊性病变、关节边缘骨赘形成等证象。陈桐莹等[9]利用生物信息学方法分析了KOA与OP的关系，发现4个微小核糖核酸（microRNA，miRNA）在KOA与OP中有交集，其表观遗传机制在KOA与OP“共病”的发病、病理过程中具有重要的调节作用。综上，KOA与OP在分子层面同样存在关联。 3 补肾活血中药对KOA与OP“共病”的作用机制 3.1 补肾活血中药可促进骨与软骨修复 3.1.1 调节信号通路 补肾活血中药可通过调控转化生长因子-β（transforming growth factor-β，TGF-β）/骨形态发生蛋白（bone morphogenetic protein，BMPs）信号通路、Wnt/β-连环蛋白（β-catenin）、Hippo信号通路等，促进骨与软骨修复。 （1）TGF-β/BMPs信号通路：有研究表明，TGF-β/BMPs通路在维持KOA患者关节内环境稳态及关节软骨修复方面具有重要作用，证明TGF-β等一系列促软骨生长因子能够诱导软骨、骨及结缔组织生长[10]。补肾活血中药在基础及临床研究中已被证实能够有效调节TGF-β/BMPs通路。杨帆等[11]通过探讨补肾活血汤对兔KOA模型TGF-β及BMPs的影响，发现骨碎补、桑寄生、川牛膝等补肾活血中药能够调节TGF-β及BMP4、BMP7分泌，促进骨、软骨及相关结缔组织形成。其中BMP7可有效增强碱性磷酸酶活性进而促进骨形成，BMP4在体内、外皆具有促进成骨细胞增值分化的能力，TGF-β除可减轻滑膜炎症外，主要促进软骨细胞及基质的合成并诱导干细胞分化为软骨，在形成和维护骨架中发挥重要作用。王宁宁等[12]通过对KOA患者实施补肾活血汤联合针灸治疗发现补肾活血方中怀牛膝、骨碎补、淫羊藿等补肾活血中药可促进TGF-β及BMPs合成，促进软骨修复从而缓解KOA患者症状。另外也有研究指出OP状态下患者骨组织内BMPs含量降低，使骨生成量减少[13]。因此，补肾活血中药可以通过调节TGF-β/BMPs细胞通路，直接作用于成骨细胞，增强成骨细胞活性，同时改善KOA与OP症状。 （2）Wnt/β-catenin信号通路：Wnt/β-catenin信号通路在调控细胞增殖和分化方面扮演着至关重要的角色，是一类高度保守的基因序列，Wnt信号通路处于过度激活状态时，软骨及软骨下骨的细胞表型和分子功能失衡，同时也会影响细胞外基质的合成，这在KOA的发病过程中具有重要意义[14]。汤鹏[15]通过研究补肾活血中药治疗KOA与Wnt/β-catenin信号通路的作用关系，发现Wnt蛋白在活化状态下能够抑制胞内β-catenin的磷酸化及降解，导致β-catenin持续增多并最终转移进胞核，通过结合淋巴增强因子和T细胞因子（T cell factor，TCF）促进下游靶基因的表达。而补肾活血类中药能够通过抑制Wnt/β-catenin通路，抑制Wnt信号通路活性并恢复软骨细胞增值能力，促进骨与软骨的修复。另外，β-catenin能够直接影响低密度脂蛋白受体相关蛋白5（low density lipoprotein receptor-related protein 5，LRP5），LRP5是低密度脂蛋白受体超家族成员，能够直接影响骨量和骨密度，对成骨细胞的分化有促进作用，其功能的缺失突变直接表现为骨质疏松。许应星等[16]通过研究补肾活血颗粒含药血清影响成骨细胞分化及Wnt/β-catenin信号通路，探究其治疗OP的作用机制。发现含药血清能提高碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）活性，矿化结节形成，并上调β-catenin、LRP5及TCF表达。表明补肾活血颗粒可增加成骨细胞的成骨活性及矿化，促进骨及软骨的修复，从而发挥治疗OP的作用，其机制可能与影响Wnt/β-catenin信号通路有关。综上，Wnt/β-catenin通路可通过促进骨修复起到治疗KOA与OP“共病”的作用。 （3）Hippo信号通路：Hippo信号通路是近年来发现的在骨生长发育中发挥重要调节功能的生长控制信号通路，可以参与细胞膜向细胞核的传递，如细胞生长、细胞增殖等[17]。张晨等[18]研究发现Hippo不仅可以直接参与KOA与OP“共病”的发病过程，还可以作为许多骨性关节相关通路的上游信号，参与骨与软骨的修复。首先，Hippo信号通路可刺激环氧合酶-2（cyclooxygenase-2，COX-2）加速软骨细胞修复。其次，Hippo信号通路可促进上述2种信号通路，Hippo信号通路可抑制Wnt-β-catenin通路，进一步诱导基质金属蛋白酶9（matrix metalloproteinase 9，MMP9）和MMP13降低，加速软骨的修复。Hippo信号传导途径可以与TGF-β效应蛋白结合进入细胞核[19]。导致细胞核内积累增加，进而抑制细胞生长并影响各种转录过程，包括修复受损的软骨细胞和维持成骨细胞与破骨细胞间的平衡，影响骨的自我更新过程。补肾活血中药中牛膝总苷、藏红花素等活性成分均可通过增强Hippo信号通路，抑制血清中的白细胞介素-1β（interleukin-1β，IL-1β）、MMP13炎性介质，下调半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3与促进B细胞淋巴瘤-2相关X蛋白合成，以增强软骨修复并抑制炎症反应[20]。 3.1.2 调节胰岛素样生长因子-1（insulin-like growth factor-1，IGF-1）水平 IGF-1与TGF-β同为促软骨生长因子。KOA是骨刺、骨赘形成的常见病因，OP本质特征是骨量丢失，而IGF-1恰好与骨赘形成及OP时骨量丢失有密切关系[21]。因此，调节IGF-1水平同样能够缓解KOA与OP“共病”症状。马文娟[22]通过测定兔软骨细胞内对应促软骨细胞因子mRNA表达，发现高剂量的补肾活血汤中丹参有效成分等能够显著提高软骨细胞内IGF-1 mRNA表达，抑制关节软骨IL-1β表达强度，保护关节软骨并促进修复因此补肾活血中药能够通过调节TGF-β、BMPs及IGF水平，促进骨及软骨修复。 3.1.3 调节激素水平 软骨细胞、滑膜细胞及软骨下成骨细胞中存在雌激素受体。梁其隆等[23]认为调节雌激素水平的下丘脑-垂体轴近似于中医“天癸”功能，下丘脑-垂体轴功能异常会导致雌激素水平发生变化，进而影响骨代谢。“天癸”最早见于《黄帝内经》中《素问上古天真论》，“天癸”源于先天之精，靠后天之精滋养，是促进与维持男女性机能的物质，这与现代医学中雌激素功能有相似之处。“天癸”藏于肾，并随肾气生理消长而变化。肾气初盛，天癸亦微；肾气既盛，“天癸”蓄极而泌；肾气渐衰，“天癸”乃竭。肾主生殖功能是通过“天癸”体现，同时肾主骨，“天癸”功能一定程度上可以反应骨代谢功能。雌激素水平下降，关节软骨中成骨细胞与破骨细胞功能协调稳定将被打破，造成骨量丢失，这是雌激素失调导致OP形成的主要原因。王岩岩等[24]研究表明补肾活血方可通过降低卵巢异常免疫应答而增加雌激素水平，达到治疗绝经后OP。补肾活血中药中补骨脂有效成分具有雌激素样作用，菟丝子有效成分含黄酮类成分，可促进内源性雌激素产生，促进成骨细胞增殖。淫羊藿主要成分是黄酮类化合物，属于植物激素，其能与骨组织中雌激素β受体结合，抑制破骨细胞活性，使成骨细胞与破骨细胞保持动态平衡，并有效防治OP。蛇床子能够间接性抑制IL-1与IL-6分泌；同时促进降钙素合成。骨碎补主要成分是骨碎补总黄酮可直接作用于下丘脑-垂体-性腺轴功能，并有效改善激素紊乱，调节骨代谢同时起到抗炎作用。鹿茸具有抗骨质疏松作用，其主要成分雌酚酮、雌二醇等具有性激素样治疗作用。杜仲叶醇提取物被证明具有雌激素样作用，增强成骨细胞活性以增加骨量。黄芪主要成分黄芪总黄酮，其雌激素样作用可以抑制破骨细胞活性。葛根有效成分为葛根素、大豆苷具有弱雌激素样作用，促进骨骼形成、增加骨密度[25]。杜仲可以通过促进成骨细胞分泌ALP和骨保护素（osteoclastogenesis inhibitory factor，OPG），并上调OPG/核因子-κB受体激活因子配体（receptor activator for nuclear factor-κB ligand，RANKL）的值，促进成骨细胞的功能恢复。 3.2 补肾活血中药能够抑制骨与软骨的破坏 3.2.1 调节信号通路 （1）丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinases，MAPK）信号通路：MAPK磷酸酶是MAPK信号传导的负调节因子。在KOA病程中，MKP-1主要发挥抑制关节炎症的作用，其在软骨中的表达能够降低p38磷酸化水平，进而抑制p38的磷酸化过程。这种抑制作用有助于减少COX-2、MMP3、IL-6及软骨下骨前列腺素E2（prostaglandin E2，PGE2）[26]，在KOA的治疗中能够协同非甾体抗炎药（NSAIDs）、类固醇药物、透明质酸类药物，抑制关节炎症、软骨退变等病理过程[27]。而在OP相关病程中，MKP-1可诱导破骨细胞分化促进骨吸收[28]。Griffin等[29]发现MKP-1基因敲除后小鼠成骨细胞分化和矿化功能被抑制，导致小鼠骨量减少。杨小四等[30]发现丹皮酚可抑制KOA大鼠p38 MAPK蛋白表达，减轻KOA大鼠继发性关节炎症，改善KOA疼痛的症状。紫云英苷能够下调KOA大鼠软骨组织中c-Jun氨基末端激酶（c-Jun N-terminal kinase，JNK）、p38 MAPK磷酸化蛋白表达，抑制JNK、p38 MAPK信号通路激活。罗汉果苷IV可通过抑制p38 MAPK信号通路表达，抑制软骨炎症反应和细胞凋亡，减轻OP症状。 （2）RANK/RANKL信号通路：KOA的发生发展同样与RANK/RANKL表达水平有关，林燕云等[31]通过实验证明降低RANK/RANKL表达可抑制OC的分化与成熟，从而有效缓解KOA症状。RANK在OA患者晚期阶段软骨细胞中呈高度表达状态，且RANK多态性与KOA患者个体易感性遗传相关联，RANK基因可能是OA的潜在危险因素，而KOA患者中RANKL在表达水平也会增加，RANKL的过表达可能从软骨细胞扩散到软骨下骨，促进OC的增殖与分化，使得骨破坏进一步加重[32]。此外，RANK/RANKL信号通路也是女性绝经后OP发生、发展的重要路径之一，RANK是诱导破骨细胞成熟的关键细胞因子，其主要功能在破骨细胞及其前体细胞表面与RANKL结合，促进破骨细胞的成熟、分化，且减慢破骨细胞凋亡。肖亚平等[33]通过对淫羊藿、补骨脂、蛇床子、杜仲、续断等补肾中药在RANK/RANKL信号通路的调节作用发现此类中药可通过作用破骨细胞抑制骨吸收。淫羊藿苷及蛇床子素可作用于破骨细胞，显著减少骨吸收陷窝的数目和面积，下调RANK信号通路表达。骨碎补总黄酮作用于去睾丸OP大鼠，可显著提高股骨的骨密度及骨小梁数目，显著上调去势骨质疏松大鼠破骨细胞中OPG/RANKL的值，下调RANK、RANKL的基因表达，达到改善骨质疏松的目的。杜仲中的木脂素、紫云英苷等均可通过OPG/ RANKL/RANK信号通路作用于破骨细胞抑制骨吸收。此外，续断有效成分可显著降低模型组大鼠中Ca、ALP、RANKL的含量，提高OPG和RANK的表达，提高软骨增殖速度，改善OP状。 3.2.2 调控细胞自噬 KOA主要病理学特点为软骨基质持续降解及软骨细胞总量不断降低，而OP主要病理学特点为骨量丢失与骨组织微细结构破坏，2病共同特点均为代谢平衡破坏导致骨细胞减少。自噬是细胞经溶酶体吞噬再循环的一种代谢平衡过程，López等[34]研究发现自噬水平降低会导致软骨细胞损伤。因此，提高自噬水平成为延缓KOA与OP“共病”病情进程手段之一。黄鑫等[35]研究发现补肾活血汤中熟地、独活、秦艽、赤芍、当归、川芎、杜仲等能够增强软骨细胞自噬，使软骨细胞能够祛除多余氧化自由基和功能障碍的细胞结构，改善软骨细胞应对机械压力等各类外界环境变化的适应力，调控膝关节部位的新陈代谢稳态来防治KOA与OP“共病”。miR-140-5p可促进骨关节炎软骨细胞细胞自噬和增殖，减轻细胞损伤，而红花黄色素可促进体外骨关节炎软骨细胞中miR-140-5p表达，并且下调miR-140-5p还可逆转红花黄色素的这种作用，提示红花黄色素可通过上调miR-140-5p的表达促进骨关节炎软骨细胞自噬，减少凋亡，并抑制炎症因子分泌，改善骨关节炎及OP症状[36]。 3.2.3 抑制氧自由基对软骨破坏 氧自由基是一种游离基，指氧分子中2个氧原子间的共价键被光热电离或其他化学反应所断裂，形成2个带有未成对电子的氧离子基团。在KOA及OP病程中，氧自由基可能会引起骨细胞膜破坏、引发骨及软骨细胞DNA突变、损伤及加速老化。Hosseinzadeh等[37]认为氧自由基导致氧化损伤是KOA及OP病程中重要因素。李朝军等[38]研究发现补肾活血中药可通过降低超氧化物歧化酶、一氧化氮、丙二醛表达以抑制氧自由基产生。可见补肾活血中药可通过抑制氧自由基以减少软骨细胞破坏，从而缓解KOA与OP“共病”症状。 3.2.4 抑制MMPs对软骨破坏 骨代谢关键因素之一是软骨细胞合成的蛋白酶，可以促进软骨修复，延缓软骨破坏，改善KOA及OP症状。MMPs增高会激活蛋白酶裂解，加快软骨细胞损伤，KOA患者关节软骨基质中MMP3和金属蛋白酶组织抑制因子（tissue inhibitor of matrix metalloproteinase，TIMP）水平均和病变严重程度相关，用于评价KOA病程和进展的有效指标。软骨细胞可分泌MMP3，促使破骨细胞加速破坏软骨质导致病情继续发展。而软骨细胞又能分泌TIMP，通过抑制成骨细胞分化及破骨细胞凋亡来控制骨代谢[39]。此外，MMP9可促进细胞间质成分降解，加快钙盐代谢，致使钙磷代谢紊乱，从而导致骨质代谢异常加重OP病情[40]，使OP患者MMP9高表达，且与患者骨密度有着直接关系[41]。罗静等[42]研究发现补骨脂有效成分可通过NF-κB通路影响MMPs对关节软骨的破坏。当归有效成分当归多糖可以通过调节骨组织中MMP3表达，抑制关节软骨退变[43]。骨碎补可通过抑制MMP3抑制软骨细胞凋亡作用[44]。杜仲可调控MMP13表达从而引起膝关节血清及滑膜组织中IL-1β、TNF-α及MMP13含量降低，延缓软骨破坏同时具有消炎的作用[45]。因此调控MMPs水平能够有效延缓KOA与OP“共病”病程。 3.2.5 抑制炎性反应 KOA与炎性因子之间存在明确的直接联系。卜寒梅等[46]提出KOA患者的膝关节中存在炎性因子的过度表达现象。此外，炎性因子与OP之间也存在密切的关联，OP在绝经后妇女中的发病率相对较高，雌激素水平降低会加快T细胞增值分化，介导炎性因子IL及肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）。炎性因子诱导破骨细胞加速增殖并抑制成骨细胞分化，骨吸收强于骨形成，加重OP症状[47]。在KOA合并OP病程中，IL-1是导致骨质疏松和膝关节软骨损伤重要的细胞因子之一，IL-1β则刺激软骨细胞产生MMPs，导致滑膜炎及骨吸收产生。另外，TNF-α能够刺激软骨细胞分泌蛋白水解酶，抑制胶原合成。因此，降低IL-1表达有望成为预防和治疗KOA合并OP的有效方法之一。另外，TNF主要包含TNF-α、TNF-β、TNF-γ 3种，其中TNF-α与OP关系密切，可促使破骨细胞数量增多、活性增强，使成骨细胞数量减少，继而导致骨吸收增加、骨形成降低，另外，TNF也可诱导IL-1、IL-6产生以加速对软骨细胞破坏。KOA患者血清和关节液中IL-1和TNF-α均显著升高，损伤膝关节软骨细胞。因此，降低患者血清中IL-1与TNF-α含量，能够有效改善膝关节功能，从而起到治疗KOA与OP“共病”的作用。补肾活血药物中，红花有效成分红花黄色素能够降低关节液中IL-8水平以抑制退行性改变并抑制炎症。杜仲提取物能够降低血清及关节液TNF-α及IL-1β等关键炎性因子水平[48]。熟地黄有效成分熟地黄多糖可以通过调控miR-140水平抑制炎性因子释放[49]。没药可以通过活化蛋白激酶信号作用于骨代谢系统从而抑制IL-6分泌[50]。肉苁蓉主要成分肉苁蓉多糖能够减少IL-6分泌[51]。牛膝有效成分牛膝总皂苷能够降低关节滑膜液中IL-3以缓解炎症。骨碎补有效成分也能够协同上述各药抑制IL-6、TNF-α水平[52]。炎性因子在KOA及OP发病过程中关键因素，能够以各种方式影响NF-κB信号通路或酶蛋白因子等直接或间接干预成骨与破骨功能平衡及骨组织稳态平衡。补肾活血中药在抑制炎性因子方面效果好、不良反应低，能够同时干预并缓解KOA及OP症状。 此外，除调节成骨细胞与破骨细胞活性外，雌激素也能够抑制炎性因子表达，有效改善KOA与OP“共病”患者症状。雌激素可以抑制炎性因子表达。陈彦飞等[53]认为“天癸竭”近似等同于雌激素水平下降，导致抗炎作用减弱，因此治疗KOA及OP时应考虑雌激素带来影响。蔡心银等[54]研究发现补肾活血中药诸如补骨脂、牛膝、当归、白芍等均含有不同种类植物雌激素成分，可以炎症反应所导致红、肿、热、痛等症状。有效改善KOA与OP“共病”症状。 图片 4 结语与展望 KOA并非单纯软骨退变，还包括软骨下骨改变、骨赘形成、滑膜炎症及韧带和肌肉改变，而引起关节僵硬、疼痛及功能障碍；OP以骨吸收异常活跃，骨代谢平衡失调，致骨微结构改变，骨脆性增加，骨折危险性增加为特点，其可能是KOA早期病理特点，即在KOA早期，软骨下骨吸收增强、软骨下骨骨髓改变、骨强度减弱，而引起或加重软骨退变。中药有效成分防治KOA的研究已显示出巨大潜力。补肾活血中药治疗无论是通过扶正补益效果增强自身免疫，防止外邪侵入，还是通过针对KOA与OP“共病”炎症反应、软骨破坏、细胞凋亡、骨修复抑制等方面都表现出较满意的治疗效果。 尽管补肾活血中药在治疗KOA与OP“共病”研究中不断深入，且与临床疗效相符合，但仍有不足：（1）目前已有研究对炎性因子及雌激素等发病因素研究较为深入，但对于信号通路、促生长因子及其他激素（瘦素、降钙素等）的研究仍停留于基础研究，缺乏临床研究。（2）KOA与OP在病机特点上同属“肾虚血瘀”，符合中医基础理论治法中“同病异治”概念，但现有研究仅罗列了作用机制，未能与中医理论融会贯通，未能体现祖国医学优势。 值得注意的是，补肾活血中药越来越多作用机制被不断发掘，如瘦素、降钙素、IGF、TGF等，这更加证明KOA与OP存在紧密关联，且KOA与OP“共病”治疗路径将更加多样化，同时也证明了中医药科学性。结合补肾活血中药丰富种类以及配伍方法与现代药理学微观层面的研究技术，更多治疗KOA与OP“共病”的补肾活血中药有效成分被发掘也将成为可能，为进一步研究补肾活血中药治疗KOA与OP“共病”提供理论依据。

任务号文献名称发布时间任务领取人完成情况任务二六一RP-HPLC法测定盐酸阿扑吗啡舌下片含量及其有关物质　　dahua1981　RP-HPLC法测定盐酸川丁特罗片的有关物质RPHPLC法测定盐酸曲美他嗪片的含量和有关物质RP-HPLC法测定盐酸异丙嗪注射液中主药和有关物质的含量RP-HPLC法测定氧氟沙星中二氟吡啶羧酸的含量RP-HPLC法测定依普利酮片的含量及有关物质RP-HPLC法测定余甘子中诃黎勒酸、没食子酸、粘酸-2-O-没食子酸酯的含量RP-HPLC法测定照山白中金丝桃苷的含量RP-HPLC法测定脂质体中重酒石酸长春瑞滨的含量RP-HPLC法测定枳壳中5个脂溶性成分的含量任务二六二RP-HPLC法测定注射用兰索拉唑含量　　dahua1981　RP-HPLC法测定注射用乙酰谷酰胺中的有关物质RP-HPLC法测定自乳化释药系统中金雀异黄素的含量RP-HPLC法测定自乳化释药系统中伊曲康唑的含量RP-HPLC法对元宝枫果翅中3种黄酮苷元的研究RP-HPLC法考察中性胰岛素的稳定性RP-HPLC法体外筛选5α-还原酶抑制剂模型的建立RP—HPLC法同时测定白屈菜药材中血根碱、小檗碱和白屈菜红碱的含量RP-HPLC法同时测定不同产地及不同部位防风中4种有效成分的含量RP-HPLC法同时测定参芪肝康胶囊中阿魏酸与6,7-二甲氧基香豆素的含量任务二六三RP-HPLC法同时测定大鼠血浆中的紫杉醇与汉防己甲素　　dahua1981　RP-HPLC法同时测定当归龙荟片中黄芩苷、盐酸巴马汀和盐酸小檗碱的含量RP-HPLC法同时测定多种维生素注射液(13)中3种脂溶性维生素的含量RP-HPLC法同时测定复方丹栀颗粒中原儿茶醛与栀子苷的含量RP-HPLC法同时测定黄芪药材中6个黄酮类成分的含量RP-HPLC法同时测定家兔体内氨苯砜、咖啡因和美托洛尔的含量RP-HPLC法同时测定利胆排石片中5种有效成分的含量RP-HPLC法同时测定人参提取物转化产物中20(S)、20(R)-人参皂苷Rg2和20(S)、20(R)-人参皂苷Rh1的含量RP-HPLC法同时测定人血浆中氯氮平、喹硫平浓度RP-HPLC法同时测定山葛降脂分散片中葛根素和牡荆素鼠李糖苷的含量任务二六四RP-HPLC法同时测定升阳散火汤浸膏粉中葛根素、阿魏酸、异阿魏酸、蛇床子素和异欧前胡素的含量　　fengmo4668　RP-HPLC法同时测定十味活血丸中阿魏酸、橙皮苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷的含量RP-HPLC法同时测定四神丸中补骨脂素、异补骨脂素、五味子醇甲和吴茱萸碱的含量RP-HPLC法同时测定天麻头风灵胶囊中梓醇和天麻素的含量RP-HPLC法同时测定维血宁颗粒中芍药苷、虎杖苷、麦角甾苷和白藜芦醇的含量[/

任务号文献名称发布时间任务领取人完成情况任务二四一HPLC法测定雪山金罗汉止痛涂膜剂中西红花苷-Ⅰ和龙胆苦苷　　dahua1981　HPLC法测定血浆中盐酸曲马朵药物浓度HPLC法测定烟酸占替诺氯化钠注射液中主药的含量HPLC法测定盐酸度洛西汀的含量及有关物质HPLC法测定盐酸二氢埃托啡注射液的含量及有关物质HPLC法测定盐酸林可霉素滴眼液的含量HPLC法测定盐酸米诺环素缓释微丸胶囊中的米诺环素和有关物质HPLC法测定盐酸西替利嗪分散片的含量HPLC法测定盐酸异丙嗪注射液的含量和有关物质HPLC法测定眼保Ⅰ号胶囊中葛根素和芍药苷的含量任务二四二HPLC法测定养血当归胶囊中阿魏酸　　dahua1981　HPLC法测定养阴补血合剂中阿魏酸的含量HPLC法测定氧化石墨纳米粒中10-羟基喜树碱的含量HPLC法测定依达拉奉中苯肼的残留量HPLC法测定异株荨麻茎叶中绿原酸和黄酮类化合物HPLC法测定益精灵口服液中二苯乙烯苷的含量HPLC法测定茵陈蒿汤中绿原酸和栀子苷的含量HPLC法测定银翘伤风胶囊中牛蒡苷的含量HPLC法测定婴幼儿配方食品中的糠氨酸HPLC法测定孕康口服液中补骨脂素和异补骨脂素的含量任务二四三HPLC法测定榛子雄花中槲皮素和山萘素的含量　　dahua1981　HPLC法测定知母药材及其相关制剂中芒果苷和新芒果苷的含量HPLC法测定栀子柏皮颗粒中栀子苷的含量HPLC法测定栀子柏皮软胶囊中栀子苷和小檗碱的含量HPLC法测定中药复方香砂胃苓丸中橙皮苷的含量HPLC法测定种子经处理后种植的辽细辛中马兜铃酸A的含量HPLC法测定注射用门冬氨酸阿奇霉素的含量和有关物质HPLC法测定注射用乳糖酸阿奇霉素的含量HPLC法测定钻山风糖浆中芒柄花素的含量HPLC法测银拗合剂中苦杏仁苷的含量任务二四四HPLC法和电位滴定法测定创新药物CD-01盐酸盐的含量　　dyn1985　HPLC法和紫外双波长法测定维C银翘片中对乙酰氨基酚含量的结果比较HPLC法检测降糖中成药添加磺酰脲类药物HPLC法检测金银花和蒲公英总提取物中绿原酸含量HPLC法检测人体夫西地酸的浓度及药代动力学研究HPLC法检查小剂量阿司匹林肠溶片中的游离水杨酸HPLC法鉴别测定苦参药材中多种生物碱成分HPLC法同时测定Beagle犬血浆中茴三硫及其代谢物浓度的方法学研究[font

任务号文献名称发布时间任务领取人完成情况任务四十一41.1 当归养血丸中阿魏酸的HPLC测定 8.13dahua1981已完成 迪马奖励积分20分41.2 枳术丸中辛弗林的HPLC测定41.3 高效液相色谱法测定二妙丸中盐酸小檗碱的含量 41.4 高效液相色谱法测定虫草安肺片中盐酸麻黄碱含量41.5 安乳颗粒质量标准研究 41.6 感特灵胶囊中黄芩苷的HPLC测定41.7 双黄连颗粒中绿原酸含量的HPLC测定41.8 高效液相色谱法测定穿龙骨刺片中淫羊藿苷的含量41.9 高效液相色谱法测定健脾养胃胶囊中黄芩苷的含量41.10高效液相色谱法测定茴桂妇炎胶囊中芍药苷的含量 任务四十二42.1 高效液相色谱法测定大风丸中蛇床子素的含量8.13dahua1981已完成 迪马奖励积分20分42.2 不同季节虎杖根茎与茎叶中大黄素含量变化研究42.3 止咳平喘糖浆中盐酸麻黄碱的HPLC测定 42.4 黄菊解毒片中盐酸小檗碱含量测定 42.5 HPLC法测定盐酸青藤外敷散中盐酸青藤碱含量42.6 HPLC法测定犀羚解毒丸中甘草酸的含量 42.7 HPLC法测定四季感冒片中连翘苷的含量 42.8 HPLC法测定复方五指柑胶囊中盐酸小檗碱的含量42.9 HPLC法测定补肾健脑软胶囊中补骨脂素和异补骨脂素的含量42.10 不同采收期及贮存时间广陈皮药材主要成分含量的动态变化研究 任务四十三43.1 RP-HPLC法同时测定舒肝祛脂胶囊中4种大黄蒽醌的含量 8.13dahua1981已完成 迪马奖励积分20分43.2 高效液相色谱法测定链麻喷雾剂中麻黄碱的含量 43.3 RP-HPLC法测定复方产舒颗粒中人参皂苷Rb1的含量 43.4 高效液相色谱法测定新雪颗粒中栀子苷的含量 43.5 HPLC法测定银黄制剂中绿原酸的含量 43.6 HPLC法测定消渴灵片中五味子醇甲的含量 43.7 HPLC测定养血当归片中芍药苷的含量 43.8 某药酒中非法添加PDE5抑制剂的HPLC检测43.9 高效液相色谱法测定宫炎片中丹参素钠的含量43.10 蔬菜和水果中三氯杀螨醇和拟除虫菊酯类农药的气相色谱测定法任务四十四44.1 高效液相色谱法测定黄芪总皂苷氯化钠注射液中黄芪甲苷的含量 8.13yu3226033已完成 迪马奖励积分20分44.2 五子衍宗片质量控制方法的研究 44.3 HPLC法测定天麻头风灵颗粒中阿魏酸的含量 44.4 82 HPLC-ELSD同时测定白英中延龄草苷和去半乳糖替告皂苷的含量 44.5 《中国中药杂志》现状简介正交试验优选佛波醇酯的水解工艺 44.6 RP-HPLC同时测定温胆汤中甘草苷、柚皮苷、橙皮苷和甘草酸 44.7 血竭中5-羟基-7-甲氧基黄烷的含量测定 44.8 RP-HPLC法测定八角莲属植物中槲皮素及山柰酚的含量44.9 HPLC测定癃闭舒片中补骨脂素的含量44.10 紫杉醇PLGA口服纳米粒的制备及生物利用度的研究任务四十五45.1 HPLC法测定不同产地和品种石韦中绿原酸和芒果苷的含量 8.13yu3226033已完成 迪马奖励积分20分45.2 HPLC测定穿心莲内酯原料药的含量 45.3 HPLC法测定复方神安颗粒中苦参碱含量45.4 HPLC测定覆盆子中椴树苷的含量 45.5 HPLC测定参仙片中淫羊藿苷的含量45.6 44种中药中1,2,3,4,6-五-O-倍酰-D-葡萄糖含量的测定 45.7 伪人参皂苷GQ的排泄试验研究 45.8 HPLC测定决明子中红镰霉素龙胆二糖苷的含量 45.9 HPLC测定番泻叶中5种主要化学成分的含量 45.10 顶空毛细管GC法测定硫酸头孢匹罗中有机溶剂残留量 任务四十六46.1 刺五加抗疲劳活性部位中刺五加苷B的含量测定8.13yu3226033已完成 迪马奖励积分20分46.2 红花药

高良姜，盒果藤，补骨脂，芦荟，司卡摩尼亚脂，驱虫斑鸠菊有何不良反应？有无相关文献报道？请专家给个链接或者解释！

各位大佬，请问一下谁家有supelco的固相萃取装置？或者了解哪家公司购买好点？

维生素C能增加“好”胆固醇的水平，促进胆固醇代谢，并可抑制胆固醇合成酶的活性，降低胆固醇合成速率，从而达到控制血脂的目的。新鲜果蔬富含维生素C，比如猕猴桃、鲜枣、青椒、绿叶菜等。