铁力木苦素

随着重组DNA技术的迅猛发展，外源基因在不同宿主中的表达使得各种重组蛋白的工业生物生产成为可能。选择合适的宿主是生物工艺设计中的关键步骤之一，具体取决于：1.上游培养效率2.易于基因编辑和分子工具的可用性3.翻译后修饰的能力，如糖基化4.蛋白质（用于下游加工和作为生物制药成分等）的分泌能力目前，多种生物已被应用于重组蛋白的生产，尤其是大肠杆菌，易于基因改造，具有在酵母水解物等多种基质上快速生长并产生高蛋白滴度的优势。已成为迄今为止业界追捧的主力军。典型的生物工艺优化通常需要进行一些初步试验，以发现适用于宿主菌株并提高目的重组蛋白表达的培养基成分（特别是氮基营养素）。对于此类应用需求，能够提高实验效率和参数准确度的高通量筛选平台成为热门工具。贝克曼库尔特BioLector通过在线测量关键培养参数提供可放大的高通量分析。本案例为通过BioLector对多种酵母营养素就生物量生长和重组蛋白的形成进行评估和比较，筛选出了适合大肠杆菌重组蛋白生产和诱导时间的理想培养基。方法培养菌株：大肠杆菌BL21(DE3)pET-28a(+)EcFbFP。培养基：以标准TB培养基（Carl Roth）为参照物，对多个TB 样（Terrific 液）培养基进行比较。不同的TB 样培养基使用不同的酵母提取物。BioLector培养条件：在接种至微孔板之前，先在250 mL摇瓶中进行预培养， 37°C培养6小时。然后使用48孔梅花板（MTP-BOH2）在 BioLector中进行培养。温度 37°C ，振摇速度：1400 rpm。分别在每个培养孔中填充800μL培养液用于非诱导实验，填充790μL用于诱导实验。诱导实验中，在诱导时间点上添加 10μL 50μM 的 IPTG。环境氧气浓度保持在35%，避免培养物缺氧。BioLector在线测量：培养过程中对生物量、EcFbFP(黄素荧光蛋白)、pH以及 DO进行在线测量。结果不同TB样培养基的生物量生长情况：培养实验中，不同酵母营养素的培养基中生物量的生长情况如上图所示：培养基不同，最终的光密度和生长速率也会不同。ProCel 6 中的大肠杆菌OD最高，培养基 ProCel 3 中的大肠杆菌的OD低。ProCel 6为本特定工艺的最高生长速率。上图为培养过程的DO值。培养基 ProCel 3 和 ProCel 4 中的培养物未达到0%的氧饱和度，这表明由于耗氧量有限，该培养基中的菌株代谢活性较低。相反，其他培养物包括TB标准培养基，均在短时间内达到0%的氧饱和度，表明菌株代谢活性高。不同酵母营养素TB样培养基的产物生成：通过将IPTG 添加到培养物中来诱导 T7 聚合酶的表达促进黄素荧光蛋白的生成。BioLector使用梅花板为48个培养物提供了独立的培养空间，因此可测试不同的诱导时间点。使用自动化工作站整合BioLector后的 RoboLector 系统还可以自动进行培养诱导。首先选择一个固定的诱导时间点。分别为培养启动后的3小时、3.75小时和4.5小时。下图所示为每种TB样培养基在诱导时间下所测荧光的平均值。荧光动力学清晰地表明不同培养基有不同的EcFbFP（黄素荧光蛋白）表达水平。表现出最强荧光信号的两个样本为：ProCel 2，诱导点为3.75小时；ProCel 5，诱导点为 3 小时。经过 7.7 小时的培养，ProCel 5 的荧光值达到102.94a.u.，而ProCel 2 的荧光值达到 101.82 a.u.。本方法的不足之处在于未比较不同样本的生物量对蛋白质产量的影响。经过3小时的培养，一些培养物的OD已达到6，而其他培养物仅达到3。当诱导具有不同光密度的培养物时，可能会对在每种酵母营养素上生长的实验大肠杆菌的蛋白质生产性能造成误解。鉴于此，我们采用了一种新方法，将诱导点与生物量信号耦合。使用BioLector的信号驱动RoboLector，依赖于特定生物量的诱导对于每个单独的孔都是可行的。为自动化工作站设置3、6或8的OD目标值，以根据孔内培养物的生长动力学自动添加IPTG以诱导蛋白质生产。如下图所示，ProCel 2表现最佳，最终值为 146.23 a.u.，培养时间是 12.3 小时；ProCel 5表现次之，最终值为138.1 a.u.。与之前进行的一系列实验相比，本实验中的排名与在特定时间点进行诱导的实验不同。这一观察证明了最佳工艺条件的重要性，并使这些条件具有可比性。此处数据表明：与之前的实验相比，本实验中的荧光值更高。正如该领域诸多论文中所强调的那样，诱导时间确实是一个关键参数。同样，在优化大肠杆菌重组蛋白生产的过程中，也必须评估诱导剂的浓度。另外，与对照TB培养基相比，这里测试的一些酵母氮源产生了更高的重组蛋白产量。这些结果凸显了选择培养基成分的重要性，这些成分能够在特定的生物工艺中实现高而稳定的产量。结论通过BioLector系统，贝克曼库尔特可为用户提供适用于各种应用领域的高通量筛选平台。其独特的梅花形微孔板尤其适用于好氧培养，如同实验室生物反应器，BioLector系统通过非侵入式传感器使客户能够获取更多的在线测量参数。正如本应用，通过BioLector系统可轻松实现培养基的筛选，整合自动化工作站的RoboLector，还可实现更多功能。补料、pH调控以及文中所述的诱导功能，所有这些均可在小规模实验中实现，帮助客户同时兼顾成本和效率。RoboLector高通量自动化微型生物培养平台欲了解该应用详情，请扫描下方二维码下载应用指南《利用BioLector进行大肠杆菌重组蛋白生产用酵母营养素的筛选》

东方特钢-三思纵横联合试验室成立仪式暨钢铁力学检测研讨会成功举行 　　--------------------------------------------------------------------------------- 　　“东方特钢 三思纵横联合试验室成立仪式暨钢铁力学检测研讨会”在东方特钢股份有限公司科技楼会议室正式召开。此次会议的召开，标志着三思纵横和东方特钢实现了材料检测的战略性合作，以及三思纵横试验机在钢铁行业的实践检验。 　　---------------------------------------------------------------------------------　　 董事长黄志方与东方特钢副总经理李国彦为联合试验室揭牌　　 三思纵横董事长黄志方先生在会上演讲 三思纵横 东方特钢联合试验室成立仪式会议现场 　　10月30日，迎着祖国六十华诞的喜庆，“东方特钢 三思纵横联合试验室成立仪式暨钢铁力学检测研讨会”在东方特钢股份有限公司科技楼会议室正式召开。东方特钢副总经理李国彦先生、东方特钢技术中心主任申鹏先生、三思纵横集团董事长黄志方、三思纵横上海分公司董事长徐卫栋、上海公司总经理胡春、三思纵横营销副总经理李跃，以及来自安徽、陕西、上海、鄂尔多斯等地的五十几位新老用户朋友参加了此次会议。此次会议的召开，标志着三思纵横和东方特钢实现了材料检测的战略性合作，以及三思纵横试验机在钢铁行业的实践检验。 　　会上，东方特钢副总经理李国彦先生和技术中心主任申鹏先生分别代表东方特钢进行了发言，首先对东方特钢与三思纵横的此次合作进行了整体的背景介绍和项目总结，对三思纵横整体的技术和服务做了充分的肯定，并表示与三思纵横成立“联合试验室”将会大大提升东方特钢整体的产品质量，同时也更好的为各项材料进行严格的把关。 　　三思纵横董事长黄志方先生也在会上介绍了三思这一民族品牌一路走来的坎坎坷坷，以及他本人从成立三思到保护三思品牌的心路历程，并郑重的呼吁全场的朋友要维护民族品牌，让民族品牌走向世界，走向未来。 　　最后，三思纵横董事长黄志方先生和东方特钢副总经理李国彦先生为“三思纵横&东方特钢联合试验室”进行了揭牌仪式。仪式结束后，全体参会人员参观了“三思纵横东方特钢联合试验室”。联合试验室整齐排列着三思纵横的五台设备， 引起与会宾客的强烈兴趣，大家纷纷询问和了解设备特性，现场的技术工程师为大家一一详细解答，并现场进行了试验演示。与会宾客对三思纵横的设备表示了充分的肯定，部分客户甚至现场表达了采购的意向。 　　下午，所有与会宾客朋友前往上海，参加“钢铁力学检测研讨会”。大家首先参观了上海三思纵横公司的生产线及办公大楼，上海生产基地不仅规划好，而且规模大，管理规范，赢得了大家的一致好评。对上海公司的参观，使大家对三思纵横的生产、技术能力有了全面的了解，增进了彼此的合作信心。部分宾客表示，三思纵横上海生产基地能在如此短期内迅速发展，是一个奇迹，说明三思一流的组织运作能力，不愧为中国试验机行业的第一品牌 。 　　接下来，在上海旗山大酒店举行了“钢铁力学检测研讨会”，徐卫栋先生就钢铁行业中的试验解决方案和试验机选型做了演讲，三思纵横的技术管理层与新老朋友进行一对一的交流、探讨， 解答了大家的疑问，宾客发言踊跃，掀起一阵又一阵高潮。 　　一天的会议安排很紧凑，但是三思纵横与所有宾客的心更近了，活动在夕阳的余晖中圆满落幕。 　　相关连接： 　　------------------------------------------------------------------------------- 　　三思，国内试验机行业第一品牌，由“中国试验机行业第一人”、原新三思公司董事长黄志方创建，重组后的企业全名为“深圳三思纵横科技股份有限公司”，公司成员来自于原新三思技术和管理团队，公司已经迅速发展为中国试验机行业新的领军者。公司专业提供材料检测、结构试验和成品试验的一流试验仪器和全面解决方案。 　　东方特钢是国内新型的不锈钢制造企业之一，位于长江三角洲杭嘉湖平原腹心地带的嘉兴市特钢产业基地，是国内钢铁行业的后起之秀。东方特钢此前对试验机设备进行招标，招标机型代表了国内钢铁行业的试验机要求的最高水平。三思纵横设备中标，顺利完成交货验收，双方并一举签订了联合试验室合作方案，建立起更加紧密的合作关系。 　　------------------------------------------------------------------------------- 　　 与会宾客参观上海三思纵横公司生产车间 客户代表在研讨会上提问 上海公司董事长徐卫栋正在为客户解答难题

11月12日，在北京人民大会堂举行的第九届中国食品安全年会开幕式上，全国人大常委会副委员长司马义铁力瓦尔地、全国政协副主席阿不来提阿不都热西提、十届全国人大常委会副委员长顾秀莲等领导共同启动了“中国食品安全万里行”活动，拉开了“宣传我国食品安全进程、普及全民食品安全知识、宣传贯彻落实《食品安全法》、提高全民食品安全素质”的序幕。 　　顾秀莲在讲话时指出，今年是“十二五”启动之年，也是做好食品安全工作的关键之年。要认真贯彻落实党中央、国务院的决策部署，全面宣传、普及、贯彻落实《食品安全法》，继续全力彻查，严处重大食品安全事故，大力提高全民食品安全意识，全面提升我国食品安全整体水平，努力确保百姓一日三餐安全、营养和健康。 　　顾秀莲强调，宣传、普及《食品安全法》，重在活动，贵在坚持，重在普及，贵在落实。当前要城乡联动普新法，上下合力筑安营，把食品安全“进社区”、“进农村”、“进校园”、“进企业”的每一项活动开展得井井有条、有声有色，真正实现提高全民食品安全综合素质，真正营造出“人人关心食品安全，人人关注食品安全”的良好社会氛围。 　　来自全国的食品企业代表在开幕式上庄严宣誓：始终坚持科学发展，忠诚履行社会责任 坚决遵守政策法规，严格执行行业标准 积极配合政府执法，主动接受社会监督 建立健全诚信体系，执着追求高端品质 模范践行职业道德，自觉固守行业自律 矢志确保食品安全，努力构建和谐社会。 　　此间还举办了第九届中国食品安全年会论坛，来自全国食品安全领域的各界代表600多人欢聚一堂，共议保障和改善民生之大计，同商推进和提升安全之良策。