羧基荧光素

有机合成中羧基保护方法简介保护羧基的方法主要是酯化法,但在某些情况下,也可以用形成酰胺或酰肼等方法来进行保护.1.酯化法保护羧基:甲酯和乙酯 甲酯和乙酯作为羧酸的保护基对一系列合成操作十分适用。例如,以酯的形式进行的烷基化反应和各种缩合反应,随后酯基在酸或碱的催化下水解除去,偶尔酯基也可用热解反应消去。但简单的烷基酯作为羧酸的保护基在有些情况下并不适用,其原因往往是由于最后需用皂化反应来除去酯基。因此,实际上在合成中常甲基和乙基的衍生物取而代之。甲基的衍生物主要是苄基类型,可用温和条件下的酸处理或氢解脱除。乙基衍生物主要是β,β,β2三氯乙基等2.酯化法保护羧基:叔丁酯 叔丁酯不能氢解,在常规条件下也不被氨解及碱催化水解,但叔丁基在温和的酸性条件下可以异丁烯的形式裂去。此性质使叔丁基在那些不能进行碱皂化的情况下特别吸引人,例如:用于酮、β2酮酯、α,β不饱和酮和对碱敏感的α2酮醇以及肽的合成。在青霉素的合成中,可选择性地裂开叔丁酯以便形成β2内酰胺 在菌霉素的合成中和在容易还原的酮的制备中,都可用叔丁基来保护羧基。四氢吡喃酸具有和叔丁酯相似的对酸的不稳定性,这一保护基也类似地用于丙二酸酯类型的酮和酮酯的合成中。3.　酯化法保护羧基:苄基、取代苄基及二苯甲基酯类 这类酯保护基的特点在于它们能很快地被氢解除去。在青霉素合成中,苄酯不被温和的酯水解条件破坏,最后需由氢解除去苄酯 在谷酰胺和天门冬酰胺的合成中,以及在L2谷氨酸和L2天门冬氨酸酯的制备中,苄酯的性质都能典型地显示出来。Bowman 和Ames 将苄基酯用在活性酯(有α2活泼氢) 的烷基化或酰基化中,此法曾出色地完成脂肪酸、酮、二酮和α2醇酮的合成。芳环上或次甲基上有取代基的苄基在用酸性试剂脱去时,其敏感性可有大幅度的改变。Stewevr 在酯肽类合成中利用了亚甲苄酯易于催化脱去的优点,用其代替叔丁酯。苄酯和对硝基苄酯也可作为羧基的保护基,一个典型的例子就是其在氨基的酰化衍生物合成中的应用。在苯酯和缩酚酸的合成中,二苯甲酯具有相似的作用,但二苯甲酯在酸存在条件下的溶剂化分解太快,因此在酸性条件下不易作羧基保护基。总之,这类酯是一种有价值的保护基,其制备可用经典的方法及前述的反应制备。4.用酰胺和酰肼来保护羧基 在有限的范围内人们采用酰胺和酰肼的形式保护羧基,从其解脱方式的角度补充了酯类保护作用的不足。酰胺和酰肼对解脱酯类的温和碱性水解条件稳定,但酯类对能有效脱解酰胺的亚硝酯和用于裂解酰肼的氧化剂又均稳定,二者可以互补。制备酰胺和酰肼的经典方法是以酯或酰氯分别与胺或肼作用制备,也可直接从酸制得。酰肼已被用于抗菌素和肽的合成,在肽的合成中它们可被亚硝酸转化为叠氮化物,使得缩合反应容易发生。5.　酯的保护 酯和内酯的保护可视为羧基的间接保护,而且酯须有α2活泼氢,否则反应很复杂。酯在引进保护基后,可在很多条件下保持稳定,如HOAc/ H2O/ THF(25 ℃,1 h) ,KOH/MeOH(25 ℃,12 h) ,LiAlH4/ Et2O(25 ℃,3 h) ,CH3Li/Et2O(25 ℃,2 h) 等。可用汞盐或三氟化硼脱去脂保护基 综上所述,保护羧基的方法虽然不多,但作为保护基的酯的种类却不少,且各有特色。近年来有关羧基保护的研究主要在肽、氨基酸、抗菌素等的合成方面,且应用日见广泛。

【序号】：1【作者】：刘梦珍1陈杰烽2邓燧煵【题名】：同时测定羧甲基甲壳素的羧基取代度和脱乙酰度的方法【期刊】：造纸科学与技术 . 【年、卷、期、起止页码】：2019 ,38 (02)【全文链接】：https://kns.cnki.net/kcms2/article/abstract?v=hyVvMdIOuYCFe8L4Dgbxk8fUuwT_l0OtQ6U_0KMdPmE6rT-BSIcYRyc_5vOCID3lPuHacnfKnD3Q6xBtnskhO9PjXhWPkcmb95mMcfvdX7fwFjeKPoGsO6U6-INmaHqUOsVhpl25nzdsUwMqXPJ7mrABDjv9x5-KIsAJAk8l0fPHQVcObbqQvzo0w8Dt9dA2Va_DLRL89Ok=&uniplatform=NZKPT&language=CHS

现在在纳米金上修饰了一个羧基，要活化这个羧基，怎样活化？请求高手或大侠能指点一下，小弟感激不尽！

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有人问到 NHS化的染料蛋白标记我有跟帖简单回答 为了更清楚说明 并让更多人了解 NHS活化的荧光探针标记反应鉴于 荧光分析于毛细管电泳联用的广阔 前景单独发个主题帖 这大都是我的经验和理解 本人不是有机专业 有关合成方面 说错的地方还请拍砖 NHS化的荧光染料 是指 N-羟基琥珀酰亚胺 酯化的荧光染料标记 即N上的羟基与荧光探针上的羧基酯化反应[IMG]http://www.sigmaaldrich.com/structureimages/16/mfcd00005516.gif[/IMG]这些荧光探针与蛋白或者小分子胺偶联的原理很简单 都是 羧基与胺基反应生成酰胺键但是 一般的羧酸更倾向于 与胺基形成 铵盐因此引入个较好的离去基团就可以使羧基活化 促进羧基与胺基的共价键形成那么琥珀酰就是个很好的离去基团将荧光探针 用NHS进行酯化后 既可以相对稳定的保存，也可以直接用于与胺基分子的偶联，降低反应动力学壁垒与蛋白分子 或是 小分子胺 的偶联，原理相同 都是最终NHS基团离去，剩下的活化羧基与蛋白的胺基反应。在了解了原理的基础上，在进行NHS酯化的荧光探针标记策略上，应当着重注意以下几点：不用过多考虑蛋白的等电点，但需记住 胺基作为亲核基团的这个反应一般在 弱碱条件（pH=8~9）下进行 [B]！[/B]考虑到蛋白的特殊性 配制缓冲液注意需要避免 1）极端pH （2）重金属污染 和（3）过大的离子强度 导致的蛋白变性 [B] ！[/B]考虑到NHS酯化物的活泼程度，NHS化的荧光染料需要现配现加，不宜配制后静置过久。 [B] ！[/B]考虑到 反应原理 ，选择缓冲液和反应容器 需要严格避免胺基或者氨基污染，避免与蛋白分子竞争反应掉荧光染料。 e.g. 常用缓冲液 有 borate buffer，NaHCO3，磷酸盐等等此外，还需注意： A.一般 的protocol都是针对 抗体的，抗体是比较 坚强的蛋白 B.虽说暴露在蛋白表面所有的侧链胺基都有可能跟羧基反应 但是 反应动力学最大的还是 Lys的那个长侧链上的e-伯胺基，因此富含lys的蛋白偶联有福啦。 C.一般来说，反应活性 伯胺＞仲胺 D.别忘了 缓冲液选择也要考虑荧光探针自身特性，如果荧光探针自己带一个 很兴奋的胺基，那么由于自体的二聚反应，这个探针用于标记可能会效率很低当然NHS酯化的商品荧光探针有限，也可以用直接用 带油羧基的荧光探针偶联 蛋白，这时一般考虑使用 NHS EDC活化体系其原理就是 EDC先与 羧基形成个 不稳定的活化中间体然后 NHS接力 替代EDC形成 较稳定的 羧基活化体接下来的 就和上述原理一样了至于 标记上的蛋白 和未标记探针的蛋白 相互分离 每家公司各有法宝 我用过 BD公司的葡聚糖柱洗脱回收 也用CZE分离过小分子胺的标记产物其他更先进的方法就要看 论坛各位大神们的功夫啦附件上传的是 Pierce的NHS化荧光素的protocol 以及 Dynal beads羧基化表面偶联抗体的protocol 本文的 参考资料 有：http://en.wikipedia.org/wiki/N-hydroxysuccinimide[~185396~][~185397~]

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[b]NF V03-615*NF EN ISO 11214:1996改性淀粉.氧化淀粉羧基含量的测定[/b]

我的化合物含羧基，但是氢谱上9－13的地方并没有发现有峰，做质谱分子量又确实是我要的化合物，请问是什么原因，羧基有可能不出峰吗？

各位好心人士，请问有谁是做分子印记方面的吗？我现在做改性，模板分子式氯霉素，功能单体是甲基丙烯酸，交联剂是EDMA，请问用什么改性剂可以把微球表面的多余的羧基去掉，改性剂不能破坏其他的基团和氢键。万分感激。呵呵

[size=5]各位朋友们好，我急切求助，在下想知道含有羧基的可用叔胺标记的药物有哪些？请指点迷津，诚挚感谢！[/size]

[size=6]请问三溴羧基偶氮胂和二溴—氯偶氮膦（武汉大学出品）哪里有供应?本人急需求购，多谢！[/size]

做氢谱时羧基峰都能出来吗？我做氢谱时化学位移13以内无羧基峰，不知道什么原因

一化合物结构确定了，（样品量不是很大），但是羧基的碳却没有做出来 求助这种情况见得多么？有没有文献支持啊求解啊

酸化是好象过了，打出的谱图羧基氢的峰找不到，在化学位移12.2处出现一个小鼓包。溶剂是D6-DMSO，不知是否是氢交换的缘故，还是其他的原因？请问质子化的酸的羧基氢峰有什么特征？

大家好，有几个化合物分别带2个或4个羧基，想通过高效液相色谱C18柱分离，一般采用什么流动相？请有经验的版友多多指导。目前试了甲醇水效果不好。

我的产物是带羧基的，但是打完核磁在11左右根本没有信号。

我的一个头孢母核的中间体的1Hnmr图谱中没有发现羧基和氨基的质子峰，这是不是因为这两个基团的质子与溶剂氘代DMSO发生了质子交换的原因呢？（溶剂DMSO-d6,图谱显示明显的水峰。样品浓度比较稀，信号高度约为溶剂峰的1/3）而用此中间体合成的头孢药物则可识别出羧基和氨基峰，这又似乎没有与溶剂氘代DMSO发生交换，这该如何解释呢？

SH/T 1609-1995 羧基丁苯胶乳

甲醇与羧基苯磺酸钠反应的具体条件是什么？最后有相关文献

有朋友做过2-氨基-5-羧基吡啶的液相分析吗？流动相90%甲醇+10%水（0.1%磷酸）,峰形拖尾严重,请专家指点,谢谢!

荧光素是具有光致荧光特性的染料，荧光染料种类很多目前常用于标记抗体的荧光素有以下几种。 [size=4][b]1．异硫氰酸荧光素[/b][/size]　　(fluorescein isothiocyanate, FITC) FITC纯品为黄色或橙黄色结晶粉末，易溶于水和酒精溶剂。有两种异构体，其中异构体Ⅰ型在效率、稳定性与蛋白质结合力等方面都更优良。FITC分子量为389.4，最大吸收光波长为490～495nm，最大发射光波长为520～530nm，呈现明亮的黄绿色荧光。FITC在冷暗干燥处可保存多年，是目前应用最广泛的荧光素。其主要优点是人眼对黄绿色较为敏感，通常切片标本中的绿色荧光少于红色。 [size=4][b]2．四乙基罗丹明[/b][/size]　　(rhodamine, RB200) RB200为橘红色粉末，不溶于水，易溶于酒精和丙酮，性质稳定，可长期保存。最大吸收光波长为 570nm，最大发射光波长为595～600nm，呈现橘红色荧光。 [size=4][b]3．四甲基异硫氰酸罗丹明[/b][/size]　　(tetramethyl rhodamine isothiocynate, TRITC) TRITC为罗丹明的衍生物，呈紫红色粉末，较稳定。最大吸收光波长为 550nm，最大发射光波长为620nm，呈现橙红色荧光，与FITC的翠绿色荧光对比鲜明，可配合用于双重标记或对比染色。因其荧光淬灭慢，也可用于单独标记染色。 [size=4][b]4．酶作用后产生荧光的物质[/b][/size]　　某些化合物本身无荧光效应，一旦经酶作用便形成具有强荧光的物质。例如，4-甲基伞酮-β-D半乳糖苷受β-半乳糖苷酶的作用分解成4-甲基伞酮，后者可发出荧光，激发光波长为360nm，发射光波长为450nm。其他如碱性磷酸酶的底物4-甲基伞酮磷酸盐和辣根过氧化物酶的底物对羟基苯乙酸等。 5．镧系螯合物 某些3价稀土镧系元素如铕 (Eu3+)、铽 (Tb3+) 等的螯合物可发射特征性的荧光，而且激发光波长范围宽、发射光波长范围窄、荧光衰变时间长，最适合于时间分辨荧光免疫测定。

5-羧基-2-吡咯烷酮怎么用HPLC测EE值，用什么样的流动相，用什么样的手性柱，求助分析方法，向大家请教了，谢谢

荧光定量PCR（也称TaqMan PCR,以下简称FQ-PCR）是美国PE（Perkin Elmer）公司1995年研制出来的一种新的核酸定量技术，该技术是在常规PCR基础上加入荧光标记探针来实现其定量功能的，与变通PCR相比，FQ-PCR具有许多优点。本文拟就该技术的特点、原理和方法以及应用作一简要叙述。一、特点FQ-PCR不仅具有普通PCR的高灵敏性，而且由于荧光探针的应用，可以通过光电传导系统直接探测PCR扩增过程中荧光信号的变化以获得定量结果，所以还具有DNA杂交的高特异性和光谱技术的高精确性，克服了常规PCR的许多缺点。如一般PCR产物都需通过琼脂糖凝胶电泳和溴化乙锭染色紫外光观察结果或通过聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染检测，不仅需要多种仪器，而且费时费力，所使用的染色剂溴化乙锭对人体又有害，这些繁杂的实验过程又给污染和假阳性提供了机会。而FQ-PCR只须在加样时打开一次盖子，其后的过程完全是闭管操作，不需要PCR后处理，避免了常规PCR操作中的诸多弊端。实验一般使用PE公司研制的ABI7100型PCR扩增仪。该仪器具有以下特点：①应用广泛：可用于DNA和RNA的PCR产物定量、基因表达研究、病原体检测及PCR条件的优化等。②独特的定量原理：采用荧光标记探针，经激光激发后荧光量随PCR循环而累积，从而达到定量目的。③工作效率高：内置9600型PCR扩增仪，电脑控制1～2小时全自动同步完成96个样品的扩增及定量。④无须凝胶电泳：无须对样品进行稀释和电泳，只须通过特殊探头在反应管内直接检测。⑤无管道内污染：采用独特全封闭反应管及光电传导系统，无须顾及污染。⑥结果重现性好：定量动态范围高达五个数量级。所以自从此项技术研制成功以来，受到许多科研工作者的重视并在多个领域得到应用。二、原理和方法FQ-PCR的工作原理是利用Taq酶的5’→3’外切酶活性，在PCR反应系统中加入一个荧光标记探针。该探针可与引物包含序列内的DNA模板发生特异性杂交，探针的5’端标以荧光发射基因FAM（6-羧基荧光素，荧光发射峰值在518nm处），靠近3’端标以荧光淬灭基团TAMRA（6-羧基四甲基若丹明，荧光发射峰值在582nm处），探针的3’开端被磷酸化以防止探针在PCR扩增过程中被延伸。当探针保持完整时，淬灭基团抑制发射基团的荧光发射。发射基团一旦与淬灭基团发生分离，抑制作用被解除，518nm处的光密度增加而被荧光探测系统检测到。复性期探针与模板DNA发生杂交，延伸期Taq酶随引物延伸沿DNA模板移动，当移动到探针切断，淬灭作用被解除，荧光信号释放出来（见图）。模板每复制一次，就有一个探针被切断，伴随一个荧光信号的释放。由于被释放的荧光基团数目和PCR产物数量是一对一的关系，因此用该技术可对模板进行准确定量。实验仪器一般使用PE公司研制的ABI7100型 PCR扩增仪，也可用其它PCR仪。如果用ABI7700型反应型反应系统进行实验，反应结束后，通过电脑分析，可直接给出定量结果。如果用其他PCR仪，则需要同时使用荧光探测仪测量反应管中的荧光信号，计算出RQ+、RQ-、△RQ。RQ+代表样品管荧光发射基团发光强度与淬灭基团发光强度的比率，RQ-代表空白管中二者的比率，△RQ（△RQ=RQ+-RQ-）代表PCR过程中荧光信号变化量，经过数据处理，即可得出定量结果。由于荧光探针的引入，显著提高了实验的特异性。探针设计一般应符合以下条件：①探针长度应在20～40个碱基左右，以保证结合的特异性。②GC碱基含量在40%～60%，避免单核苷酸序列的重复。③避免与引物发生杂交或重叠。④探针与模板结合的稳定程度要大于引物与模板结合的稳定程度，因此探针的Tm值要比引物的Tm值至少高出5℃。另外，探针的浓度、探针与模板序列的同源性，探针与引物的距离都对实验结果有影响。 http://www.biomart.cn/upload/asset/2008/07/21/1216476450.gif图.TaqMan PCR反应模式 （A）聚合反应；（B）链置换；（C）裂解； （D）聚合完成（R：FAM；Q：TAMRA，FP：上游引物；RP：下游引物）

我现在的样品中含有羧基并且极性很大，我用甲醇水和醋酸铵都不能把那两个峰分开，请高手在百忙之中能帮我解答一下，谢谢你们了

[color=#013add][size=4]请问谁有一些有关用高效液相色谱分析精对苯二甲酸中的苯甲酸、对羧基苯甲醛的分析方法。我非常需要，先谢谢能够提供的人[/size]。[/color]

在GB1266-1986 化学试剂 氯化钠 中关于氯化钠主含量的测试有以下几个问题：1 加10ml淀粉溶液的作用是什么？2 荧光素指示剂是用荧光黄还是荧光红配制的？http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/05/201105101458_293457_1631142_3.gif

分享FZ/T 50012—2006《聚酯中端羧基含量的测定 滴定分析法》[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=181224]FZT 50012－2006聚酯中端羧基含量的测定 滴定分析法.pdf[/url]

用硅胶G版分离甾醇及脂类物质文献中规定的显色剂是2，7二氯荧光素可以用4.5二氯荧光素代替吗