磷酸二酯酶

【序号】：1 【作者】：姜忠义陈洪钫【题名】：酶膜反应－萃取耦合过程传质特性的研究【期刊】：第六届全国生物化工学术会议论文集 【年、卷、期、起止页码】：1995年05月29日 【全文链接】： 【序号】： 2【作者】：姜忠义 【题名】：酶膜反应-萃取器的研究 【期刊】： 【年、卷、期、起止页码】： 1994【全文链接】： 【序号】： 3【作者】：陈洁 【题名】：麦芽根中核酸酶的性质研究及其在酵母抽提物中的应用【期刊】： 【年、卷、期、起止页码】：2000 【全文链接】： 【序号】：4 【作者】：张群【题名】：麦芽根中5'-磷酸二酯酶提取和纯化 【期刊】： 【年、卷、期、起止页码】： 2008【全文链接】： 【序号】： 5【作者】：李德莹【题名】：应用5′-磷酸二酯酶酶法生产5′-[color=bla

新华社东京1月26日电 日本研究人员在动物实验中确认，绿茶的一种成分与治疗男性勃起功能障碍药物万艾可如果联合使用，能有效抑制癌细胞增殖。 日本九州大学研究生院教授立花宏文及其研究小组在25日的美国《临床检查杂志》网络版上报告说，这项研究涉及的绿茶成分名叫“表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）”，它是从茶叶中分离得到的儿茶素类单体，是茶多酚中主要的生物活性成分。 立花宏文此前曾发现，EGCG能抑制癌细胞增殖，但生物体内的磷酸二酯酶5（PDE5）会妨碍其抗癌效果。 万艾可能阻止磷酸二酯酶5发挥作用，研究人员将万艾可与EGCG同时注射到患有血癌的实验鼠体内，发现癌细胞不再增加。对于移植了人类乳腺癌细胞的实验鼠，这两种物质联用能使癌细胞消失。 在试管中利用胰腺癌组织进行的实验显示，比起现有的抗癌药物，这两种物质并用的治疗效果更好。实验还表明，该方法对胃癌和前列腺癌也有效。 立花宏文透露，美国的研究所准备年内针对上述疗法展开临床试验。不过，普通绿茶中EGCG含量很低，要大量饮用才可能收到抗癌效果，但这样有可能产生副作用，研究人员告诫民众不要在家中自行尝试。（记者 蓝建中）

（1）限制性核酸内切酶 一种内切酶只能识别一种特定的核苷酸序列，并且能在特定的切点上切割DNA，俗称“分子手术刀”。内切酶是重组DNA技术和基因诊断中重要的一类工具酶。 （2）DNA连接酶 DNA酶能利用ATP或NAD+水解提供的能量催化DNA链的5'-磷酸末端与另一DNA链的3'-OH生成3',5'-磷酸二酯键，从而把两个DNA链连接起来。常见实验室常用的DNA连接酶，包括T4 DNA连接酶和Taq DNA连接酶等。 （3）DNA聚合酶 DNA聚合酶主要是催化脱氧核苷酸之间的聚合反应，连接DNA片段与单个脱氧核苷酸之间的磷酸二酯键，在DNA复制中起到关键作用。 DNA聚合酶与DNA连接酶的区别：DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核酸片段的3'末端的羟基上，形成磷酸二酯键；而DNA连接酶是在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键，不是在单个核苷酸与DNA片段之间形成磷酸二酯键。 此外，DNA聚合酶是以一条DNA链为模板，将单个核苷酸通过磷酸二酯键形成一条与模板链互补的DNA链；而DNA连接酶是将DNA双链上的两个缺口同时连接起来，因此，DNA连接酶不需要模板。 （4）RNA聚合酶 RNA聚合酶以完整的双链DNA为模板，转录时DNA的双链结构部分解开，转录后DNA仍然保持双链的结构。常见RNA聚合酶：rRNA、mRNA、tRNA和其它小分子RNA，在RNA复制和转录中起作用。 （5）逆转录酶 逆转录酶具有三种酶活性，即RNA指导的DNA聚合酶、RNA酶、DNA指导的DNA聚合酶。在分子生物学实验中，广泛用于建立基因文库、获得目的基因等工作。 （6）解旋酶 解旋酶是一类解开氢键的酶，通过水解ATP供能，并识别复制叉的单链结构，因此，大部分解旋酶都具有ATP酶的活性。解旋酶大部分移动方向是5'→3'。 （7）核酸酶 核酸酶是指能降解核酸的酶，与聚合酶的功能相反，通过水解或打开在多核苷酸链中的相邻核苷酸的磷酸二酯键内的酯键发挥作用。核酸酶分为内切核酸酶和外切核酸酶，内切核酸酶能水解多核苷酸链中的内部键，而外切核酸酶则必须从末端开始水解反应。 （8）蛋白酶K 蛋白酶K是一种从白色念珠菌分离出来的蛋白溶解酶，具有很高活性，用于质粒或基因组DNA、RNA的分离和抽提。 （9）UNG酶 UNG酶可以选择性水解断裂含有dUTP的双链或单链DNA中的尿嘧啶糖苷键，破坏形成的有缺失碱基的DNA链，从而降低非特异性扩增。

韩国拟定食品添加剂标准规范修订案 来源: 厦门技术性贸易措施信息网 时间:2011-6-24 2011 年5 月17 日，韩国发布 G/SPS/N/KOR/388 号通报：食品添加剂标准规范修订案。修订内容包括“标准规范”及“器皿、容器和包装食品接触面消毒液”两项，主要内容涉及： （1）木聚糖酶（Xylanase） 、5’-脱氨酶（5’-deaminase） 、α-葡糖苷酶（α-glucosidase） 、磷酸二酯酶（phosphodiesterase） 、硒酸钠（sodium selenate）及钼酸钠（sodium molybdate）为新批准项目。 （2）修订以下 22种食品添加剂定义：合成香料物质、糖化酶、溶菌酶、万寿菊提取物、α淀粉酶、蛋白酶、焦糖色、天然香料物质、天门冬酰胺酶、高粱色、甜菜红、甘蓝红色素、栀子红色素、可可色素、红曲黄色素、红花黄素、芙蓉色素、非洲酪脂果色素、紫甘薯色素、紫山芋色素、葡萄汁色素及磷虾颜色。 （3）修改以下4 种食品添加剂的分规范：L-胱氨酸；L-谷氨酸；磷酸一铵；L-左旋及焦糖色。 （4）修改以下几种食品添加剂使用标准： 焦亚硫酸钠、钾焦亚硫酸钠、二氧化硫、亚硫酸氢钠、亚硫酸钠、次硫酸钠、山梨酸、山梨酸钾、山梨酸钙、聚乙烯吡咯烷酮、抗坏血酸棕榈酸酯，disodium 5’-cytidylate，disodium5’ -uridylate， 5’ -adenylic acid及5’ -cytidylic acid。（5）碘被批准作为一种器皿、容器和包装的食品接触面消毒液。 （6）修订以下 4 种器皿、容器和包装食品接触面消毒液的成分规范：二氯异氰尿酸钠，双氧水，过氧乙酸和柠檬酸。 拟批准和生效日期待定， 评议截止日期为 2011 年7 月10日。

最近一直在用石墨炉[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Wp][color=#3333ff]原子吸收[/color][/url]做Cd的实验，溶液一：0.2%的硝酸中加入0.3g/100ml的磷酸二氢铵；溶液二：0.2%的硝酸中加入0.06g/100ml的硝酸镁；溶液三：0.2%的硝酸中加入0.3g/100ml的磷酸二氢铵+0.06g/100ml的硝酸镁；刚开始把灰化阶段的温度设置为700；发现3种溶液都有一定值的吸光度；后把温度升到900，溶液一、二的吸光度基本可以忽略，但是溶液三的吸光度就比较大能达到0.07-0.09Abs。各位看到上面的现象能否请给出一些意见。

1、标准品　　标准品是放射免疫分析法定量的依据，由于以标准品的量用来表示被涮物质的量，故标准品与被测物质应当化学结构一致并具有相同免疫活性。标准品作为定量的基准。应要求高度纯化。标准品除含量应具有准确性外，还应具备稳定性，即在合理的贮存条件下保持原来的特性。　　按实验要求，将标准品用缓冲液配成含不同剂量的标准溶液，用于制作标准曲线。2、标记物　　标记抗原应具备：①比放射性高，以保证方法的灵敏度；②免疫活性好；③所用的核素的半衰期尽可能长，标记一次可较长时间使用，这对来之不易的抗原尤其重要；④标记简便、易防护。　　要准确测量B与F的放射性，必须有足够的放射性强度。所选用的标记抗原的量，在使用125I时达5000～15000cpm。3、抗体　　应选择特异性高、亲和力强及滴度好的抗体，用于放射免疫测定。　　根据稀释曲线，选择适当的稀释度，一般以结合率为50%作为抗血清的稀释度。4、B与F分离剂　　以2%加膜活性炭溶液为例，2%加膜活性炭溶液的配制：　　活性炭2g（杭州木材厂生产，森工牌732型）　　右旋糖酐T200.2g　　加0.1mol/L PB 至100ml　　电磁搅拌1h，然后置于变通冰箱冰箱待用。5、缓冲液　　放射免疫分析技术所用的缓冲液有多种，要通过实验选用抗体和抗原结合最高的缓冲液。　　目前最常用的缓冲液有下列几种：①磷酸盐缓冲液；②醋酸盐缓冲液；③巴比妥缓冲液；④Tris –HCl缓冲液；⑤硼酸缓冲淮。其中以磷酸盐缓冲液应用最多。　　在缓冲液中，除必须有弱酸及弱酸的盐成分外，还应根据不同检测项目加入下列物质：①保护蛋白：常用的有牛血清白蛋白或白明胶，浓度为0.1%～0.2%，用以降低试管对抗原的非特异性吸附。②防腐剂：多采用0.1%叠氮钠、0.01%柳硫汞、溶菌酶或抗菌素。③酶抑制剂：如测定心钠素等肽类激素时，要加入适量的抑肽酶，用以抑制血浆内源性水解酶对待测物的降解；又如测定cAMP、cGMP时，需加入EDTA2Na，抑制磷酸二酯酶的活性。④阻断剂：在测定甲状腺激素或测定某些甾体激素时，必须加阻断剂，使和蛋白质相结合的激素，变为游离型。常用的阻断剂有8—苯胺—1—萘磺酸、柳硫汞、水杨酸钠、三氯醋酸钠等。⑤载体蛋白：采用二抗作B与F分离剂时，要向反应液中加入适量与第一抗体同种动物的正常血清。在测定不含有血浆蛋白的样品时，用PEG沉淀剂分离B、F，必须加适量γ球蛋白或正常人混合血清。　　在神经肽的RIA时，常用PELH缓冲液，（按1000ml,pH7.6）：　　0．1mol/l PB　　　　　　　　980.0ml　　0.3mol/L EDTA2Na　　　　　10.0ml　　0.2%洗必泰溶液　　　　　　　10.0ml　　溶菌酶　　　　　　　　　　　1.0g

配制的磷酸二氢铵的浓度1%，硝酸镁浓度是0.06%，线性不好，请大家帮忙

[b][font='微软雅黑','sans-serif'][color=#FF6600]实验原理[/color][/font][/b][font='微软雅黑','sans-serif']碱性磷酸酶（alkaline phosphatase EC 3.1.3.1简称为ALPase）广泛存于微生物界和动物界。ALPase能催化几乎所有的磷酸单酯的水解反应，产生无机磷酸和相应的醇、酚或糖。它也可以催化磷酸基团的转移反应，磷酸基团从磷酸酯转移到醇、酚或糖等磷酸受体上。在磷的生物和化学循环过程中，ALPase起了及其重要的作用。在生物体内ALPase与磷的代谢直接相关，参与磷与钙物质的消化、吸收、分泌以及骨骼的形成等生理生化过程。ALPase的作用最适PH在碱性区域，一般在PH9.0~10.5范围内。Mg[sup]2+[/sup]对该酶的活力有显著的激活使用。[/font][font='微软雅黑','sans-serif']为了获得好的提取效果，在酶的制备过程，特别应注意以下几点：[/font][font='微软雅黑','sans-serif']（1）[/font][font='微软雅黑','sans-serif']选取来源丰富、酶含量高的新鲜材料。提取工作应在获得材料后立刻开始，否则应在低温下保存。[/font][font='微软雅黑','sans-serif']（2）[/font][font='微软雅黑','sans-serif']用盐分级沉淀是一种应用非常广泛的方法。碳酸铵是最常用的盐。操作时，要注意保持缓冲液的合适PH值和温度。在加碳酸铵时需事先将其研细，需缓慢加入并及时搅拌溶解，尽量防止泡沫形成，以免酶蛋白在溶液中表面变性。盐析生成的沉淀，要静置20min以上，以使沉淀完全，然后方可时行离心分离。[/font][font='微软雅黑','sans-serif']（3）[/font][font='微软雅黑','sans-serif']有机溶剂沉淀法也常用于蛋白质的分离提纯。丙酮和乙醇是使用最为广泛的两种有机溶剂。应注意在低温下操作，缓慢加入，充分搅拌，避免局部浓度过高放出大量热量而使酶蛋白变性。离心收集沉淀后，最好立即将其溶于适量缓冲液中，以避免酶活力的丧失。[/font][font='微软雅黑','sans-serif']（4）[/font][font='微软雅黑','sans-serif']在酶的制备过程中，每经一步处理，都需测定酶的活力和比活力。唯有比活力提高较大，提纯步聚才有效。[/font][align=left][font='微软雅黑','sans-serif'] [/font][font='微软雅黑','sans-serif']酶活力的分析：通常是以对—硝基苯磷酸二纳（pNPP)为底物，在PH10.1的碳酸盐缓冲液（含2mmol/L Mg[sup]2+[/sup]）的测活体系中检测酶催化pNPP水解产生黄色的对硝基苯（ pNP）在405 nm处有最大的吸收峰，可以根据OD[sub]4[/sub][sub]〇5[/sub]值的增加计算酶活力的大小。酶活力定义为在37℃下，以5mmol/L pNPP为底物，在pH 10.1的碳酸盐缓冲液含2 mmol/L Mg[sup]2+[/sup]的测活体系中每分钟催化产生1 mol/L pNP的酶量定为1个酶活力单位。酶的比活力定义为每mg蛋白所具有的酶活力单位数。 [/font][/align]

1、标准品　　标准品是放射免疫分析法定量的依据，由于以标准品的量用来表示被涮物质的量，故标准品与被测物质应当化学结构一致并具有相同免疫活性。标准品作为定量的基准。应要求高度纯化。标准品除含量应具有准确性外，还应具备稳定性，即在合理的贮存条件下保持原来的特性。　　按实验要求，将标准品用缓冲液配成含不同剂量的标准溶液，用于制作标准曲线。2、标记物　　标记抗原应具备：①比放射性高，以保证方法的灵敏度；②免疫活性好；③所用的核素的半衰期尽可能长，标记一次可较长时间使用，这对来之不易的抗原尤其重要；④标记简便、易防护。　　要准确测量B与F的放射性，必须有足够的放射性强度。所选用的标记抗原的量，在使用125I时达5000～15000cpm。3、抗体　　应选择特异性高、亲和力强及滴度好的抗体，用于放射免疫测定。　　根据稀释曲线，选择适当的稀释度，一般以结合率为50%作为抗血清的稀释度。4、B与F分离剂　　以2%加膜活性炭溶液为例，2%加膜活性炭溶液的配制：　　活性炭2g（杭州木材厂生产，森工牌732型）　　右旋糖酐T200.2g　　加0.1mol/L PB 至100ml　　电磁搅拌1h，然后置于变通冰箱冰箱待用。5、缓冲液　　放射免疫分析技术所用的缓冲液有多种，要通过实验选用抗体和抗原结合最高的缓冲液。　　目前最常用的缓冲液有下列几种：①磷酸盐缓冲液；②醋酸盐缓冲液；③巴比妥缓冲液；④Tris –HCl缓冲液；⑤硼酸缓冲淮。其中以磷酸盐缓冲液应用最多。　　在缓冲液中，除必须有弱酸及弱酸的盐成分外，还应根据不同检测项目加入下列物质：①保护蛋白：常用的有牛血清白蛋白或白明胶，浓度为0.1%～0.2%，用以降低试管对抗原的非特异性吸附。②防腐剂：多采用0.1%叠氮钠、0.01%柳硫汞、溶菌酶或抗菌素。③酶抑制剂：如测定心钠素等肽类激素时，要加入适量的抑肽酶，用以抑制血浆内源性水解酶对待测物的降解；又如测定cAMP、cGMP时，需加入EDTA• 2Na，抑制磷酸二酯酶的活性。④阻断剂：在测定甲状腺激素或测定某些甾体激素时，必须加阻断剂，使和蛋白质相结合的激素，变为游离型。常用的阻断剂有8—苯胺—1—萘磺酸、柳硫汞、水杨酸钠、三氯醋酸钠等。⑤载体蛋白：采用二抗作B与F分离剂时，要向反应液中加入适量与第一抗体同种动物的正常血清。在测定不含有血浆蛋白的样品时，用PEG沉淀剂分离B、F，必须加适量γ球蛋白或正常人混合血清。　　在神经肽的RIA时，常用PELH缓冲液，（按1000ml,pH7.6）：　　0．1mol/l PB　　　　　　　　980.0ml　　0.3mol/L EDTA• 2Na　　　　　10.0ml　　0.2%洗必泰溶液　　　　　　　10.0ml　　溶菌酶　　　　　　　　　　　1.0g

我在用磷酸苯二钠测定土壤碱性磷酸酶时，配制的磷酸苯二钠（用硼酸缓冲液配制）溶液，在暗处放置了将近五天后出现了一些絮状物，请问下，磷酸苯二钠是不是现配现用啊？万分感谢！

公司作克林酶素磷酸酯,分析过程依据药典,使用ZOBARX C8分析,可分离效果很不理想.不知大家有没有做相同产品的,使用的什么柱子,最好有谱图,谢谢了.

我在用磷酸苯二钠测定土壤碱性磷酸酶时，配制的磷酸苯二钠（用硼酸缓冲液配制）溶液，在暗处放置了将近五天后出现了一些絮状物，请问下，磷酸苯二钠是不是现配现用啊？万分感谢！

大家有开展有机磷酸酯类阻燃剂测试没？比如说磷酸三(2,3-二氯丙基)酯（TDCPP）等。

如题我是新人算的和同事算的不一样呢？如：0.05mg磷酸二氢铵 + 0.003mg硝酸镁 磷酸二氢铵 ：含量99.5% 硝酸镁 英文显示：element：Mg ； 浓度：10000mg/L（20℃） ；matix：Mg(NO3)2如果我每个样基改进5ul，那么浓度就是0.01mg/ul磷酸二氢铵 + 0.0006mg/ul硝酸镁=0.01g/ml磷酸二氢铵 + 0.0006g/ml硝酸镁我配100ml基改就需要 ：1g磷酸二氢铵+0.06g硝酸镁硝酸镁浓度为10000mg/L=10mg/ml，需要0.06g硝酸镁=6ml——请问对吗？铬的基改是0.015mg 硝酸镁那岂不是要30ml？

前天测的石墨炉镉加了硝酸镁跟磷酸二氢铵做曲线浓度感觉空白高并且灵敏度低，测标样还测不准，今天做了一个不加任何试剂的镉感觉还可以并且盲样也准了，求大神指导一下能用不，曲线r=0.9976。并且求解一下为什么加了之后的空白高，吸光度低

向大家求助，基体改进剂磷酸二氢铵、硝酸镁的化学反应方程式

[color=#333333]磷酸酶对乳制品的质量有何影响[/color]

谁能提供下磷酸二异辛酯（P204)的国家标准或化工标准？

十二水合磷酸氢二钠pH值为9.1-9.4（50g/L），但是60g/L时为何pH无明显变化？磷酸氢二钠溶液可能pH达到10.5么?若可能，是否风化、潮解、分解？ 因目前发现磷酸氢二钠pH=10.5，暂未找到原因。

请教使用什么设备可以检测氯磷酸二苯酯的含量和纯度，我是生产企业，需要设备检测原料和成品中的氯磷酸二苯酯的含量和纯度，这此物质沸点315℃，蒸汽有强腐蚀性，吸湿性，采用什么设备能够胜任检测，感谢老师们的指教，万分感谢

急需用磷酸氢二钾与磷酸二氢钾配制磷酸盐缓冲液(pH7.8)， 取磷酸氢二钾5.59g与磷酸二氢钾0.41g，加水使溶解成1000ml，即得。这种方法配出来的是多少mol/L的缓冲液？pH是7.8吗，有没有别的方法？详细点的。另外，用下面方法磷酸盐缓冲液(pH7.8) 甲液：取磷酸氢二钠35.9g，加水溶解，并稀释至500ml。乙液：取磷酸二氢钠2.76g，加水溶解，并稀释至100ml。取上述甲液91.5ml与乙液8.5ml混合，摇匀，即得。钠盐和钾盐有什么区别呢，用来做土壤样品提取液进[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质[/color][/url]？

各位好，今天做了土壤酸性和碱性磷酸酶的标准曲线，采用的苯磷酸二钠的方法。结果反应液的颜色没什么变化，而且吸光度值没有趋势。请问这是什么情况。请大家帮助分析一下！救命的啊

1.请问优级纯的磷酸氢二钾含量应该是多少？我们实验室买了一瓶进口的，含量是99.0%，怀疑是AR级的。2.现在要配制1000mg/L的磷酸根标液1000mL,应该称多少g磷酸氢二钾？

亚磷酸二甲酯有化学分析方法，有无其它的分析方法？

购买了一些磷酸二苯酯，想知道具体的纯度，用液相色谱什么条件比较好啊，酸度系数是1.12左右

[font=宋体][size=3]我用磷酸苯二钠比色法想测土壤磷酸酶的活性，具体应该怎么做，我查了些文章，都没有很具体的操作。我是刚刚接触酶活性这一块，感觉一头雾水。非常感谢[/size][/font]

各位前辈,我想配制pH为7.0的0.05M/L的磷酸氢二纳--磷酸二氢钠缓冲液,只查到0.1M/L的方法,请各位多指教!!谢了!