磷酸二酯酶

导语在实验过程中，最心累的莫过于好不容易提取的核酸却降解了。那么核酸为什么会发生降解呢，我们又该如何预防呢？关于核酸降解，你了解多少呢？让我们一起对核酸降解一探究竟吧。 什么是核酸 核酸是一种高分子化合物，核苷酸是构成核酸的基本单位。核酸水解后得到许多核苷酸，核苷酸是组成核酸的基本单位，即组成核酸分子的单体。一个核苷酸分子是由一分子含氮的碱基、一分子五碳糖和一分子磷酸组成的。根据五碳糖的不同可以将核苷酸分为脱氧核糖核苷酸和核糖核苷酸。如果5-碳糖是核糖，则形成的聚合物是RNA；如果5-碳糖是脱氧核糖，则形成的聚合物是DNA。 核酸降解本质 核酸降解是DNA/RNA分子中的碱基和戊糖间的氮糖苷键，或磷酸二酯键在物理因素、化学因素和生物因素等作用下发生水解，使DNA/RNA链发生断裂。核苷磷酸化酶：能分解核苷生成含氨碱基和戊糖的磷酸酯酶。广泛存在于生物体内,催化的反应可逆。可在核苷水解酶作用下继续分解核苷成嘌呤碱、嘧啶碱和戊糖。核苷水解酶：主要存在于植物和微生物体内，只水解核糖核苷。 核酸降解原因 DNA降解的因素很多，主要分为物理因素，化学因素和生物因素。一、物理因素：温度，机械剪切力、核酸的反复冻融、高温煮沸及辐射等。二、化学因素：PH值，水解反应，氧化反应等。三、生物因素：酶解及微生物侵染等作用。一、物理因素的影响★ 温度：高温条件下，RNA不稳定，易加速磷酸二酯键的水解，使核酸降解；★ 机械剪切力：包括剧烈震荡、搅拌、细胞突然至于低渗溶液中，以及让溶液快速通过狭长的孔道；★ 核酸的反复冻融、高温煮沸及辐射等，均会导致核酸的降解。二、化学因素影响水解★ PH值：氢离子参与催化磷酸二酯键、糖苷键的水解，但糖苷键比磷酸二酯键更易被酸水解。过高或过低的PH值都易破坏复键。核酸(特别是RNA)在碱性溶液中十分容易降解；★ 氧化反应：会氧化碱基中的含氨杂环，使其变性，从而改变一级与二级的核酸构象；★ 苯酚在空气中被氧化生成醌，它能够产生自由基，直接用于DNA的分离，会使磷酸酯键断裂，造成DNA的降解。三、生物因素影响★ 酶解：核酸酶可以催化水解多聚核苷酸链中的磷酸二酯键，直接破坏核酸的一级结构，使其降解。1.核酸酶(磷酸二酯酶)核酸内切酶：在环境或生物体内具有识别双链DNA分子中特定核苷酸序列，并由此切割DNA双链的核酸内切酶统称为限制性核酸内切酶。作用方式从多聚核苷酸链中间开始，在某一个位点切断磷酸二酯键。如DNase，RNase等。核酸外切酶：核酸外切酶的作用方式是从多聚核苷酸链的一端(3' -端或5' -端)开始，逐个水解切除核苷酸。如蛇毒磷酸二酯酶，牛脾磷酸二酯酶等。2.核苷酸酶(磷酸单酯酶)专一性的磷酸单酯酶：3' -核苷酸酶，5' -核苷酸酶非专一性磷酸单酯酶。★ 微生物侵染：微生物会将DNA作为营养物质或是其分泌的化学物质含酶。 预防降解的方法 预防RNA降解的方法:★ 去除环境中RNase酶的污染或强有力地抑制其活性。★ 获取样品后最好立即提取RNA，若无条件立即实验，应于-80℃液氮中保存样品，提取时取出样品后立即在低温下研磨裂解细胞，以防RNA降解。★ 在总RNA提取分离的最初阶段，联合使用Rnase的特异抑制剂，尽可能的灭活胞内的Rnase的活性。★ 避免样品的反复冻融。★ 保证裂解液的质量，裂解液的用量不足，也会导致RNA降解。★ RNA提取后，放入-80℃保存，防止降解。预防DNA降解的方法:★ 简化操作步骤，缩短提取过程，以减少各种有害因素对核酸的破坏；★ 减少化学物质对DNA的降解，为避免过酸、过碱对DNA双链中磷酸二酯键的破坏；★ 防止基因组DNA的生物降解，主要是DNase降解基因组DNA，Dnase需要二价金属阳离子Mg2+等的激活，可用EDTA等金属离子整合剂整合Mg2+以抑制Dnase的活性；★ 减少物理因素对DNA的降解，物理降解因素主要包括机械剪切力(如剧烈震荡、搅拌等)；★ 避免样品的反复冻融，可将DNA分装保存于缓存液中；★ 所有试剂应用无菌水配制，耗材经高温灭菌；★ 避免DNA的过高温处理等。

即日起至2014年10月28日，凡一次或与他人组合订购5个或5个以上96 tests的Cyclic AMP Select EIA Kit (501040)的客户，可享受46折超低折扣！环磷酸腺苷(cAMP)是在细胞中广泛存在的第二信使，是信号传导途径中的关键组分，其连接膜受体及其配体，激活细胞酶活和基因表达。cAMP由膜结合的腺苷酸环化酶催化ATP形成的。某些配体或激素与其特异性的G蛋白偶联受体结合可活化GTP结合蛋白(Gs或Gi)，从而刺激或抑制腺苷酸环化酶。cAMP可通过磷酸化或去磷酸化来活化或抑制各种酶或级联的酶。磷酸二酯酶将cAMP水解为AMP可终止cAMP信号。因此细胞中的cAMP浓度指示了腺苷酸环化酶催化ATP形成cAMP的速率与特异性磷酸二酯酶将cAMP水解为AMP的速率之间的关系。Cayman新推出的Cyclic AMP Select EIA Kit (501040)，具有如下特性： ○ 灵敏度可达0.3pmol/ml (无需乙酰化) ○ 价格低 ○ 操作简单 ○ 可定量检测血清、血浆、尿液、细胞培养物或组织样本中的cAMP ○ 标曲范围为0.09 – 200 pmol/ml 阅读原文：http://www.liankebio.com/ProductCenterShow/articleID/2014080016.html

2012年3月16日，国家食品药品监督管理局发布第一批保健食品中可能非法添加的物质名单通知，通知如下： 　　关于发布保健食品中可能非法添加的物质名单(第一批)的通知 　　食药监办保化[2012]33号 　　各省、自治区、直辖市食品药品监督管理局(药品监督管理局)： 　　为贯彻落实国务院食品安全委员会办公室《关于进一步加强保健食品质量安全监管工作的通知》(食安办〔2011〕37号)要求，严厉打击保健食品生产中非法添加物质的违法违规行为，保障消费者健康，国家局组织制定了《保健食品中可能非法添加的物质名单(第一批)》，现予以印发。 　　该名单未涵盖行业内存在的所有非法添加物质，各级食品药品监督管理部门在监督检查中要注意收集名单之外的非法添加物质情况，汇总后报送国家局。 　　附件：保健食品中可能非法添加的物质名单(第一批) 　　国家食品药品监督管理局办公室 　　二○一二年三月十六日 附件： 保健食品中可能非法添加的物质名单(第一批) 序号 保健功能 可能非法添加物质名称 检测依据 1 声称减肥功能产品 西布曲明、麻黄碱、芬氟拉明 国家食品药品监督管理局药品检验补充检验方法和检验项目批准件2006004 2 声称辅助降血糖（调节血糖）功能产品 甲苯磺丁脲、格列苯脲、格列齐特、格列吡嗪、格列喹酮、格列美脲、马来酸罗格列酮、瑞格列奈、盐酸吡格列酮、盐酸二甲双胍、盐酸苯乙双胍 国家食品药品监督管理局药品检验补充检验方法和检验项目批准件2009029 3 声称缓解体力疲劳（抗疲劳）功能产品 那红地那非、红地那非、伐地那非、羟基豪莫西地那非、西地那非、豪莫西地那非、氨基他打拉非、他达拉非、硫代艾地那非、伪伐地那非和那莫西地那非等PDE5型（磷酸二酯酶5型）抑制剂 国家食品药品监督管理局药品检验补充检验方法和检验项目批准件2008016，2009030 4 声称增强免疫力（调节免疫）功能产品 那红地那非、红地那非、伐地那非、羟基豪莫西地那非、西地那非、豪莫西地那非、氨基他打拉非、他达拉非、硫代艾地那非、伪伐地那非和那莫西地那非等PDE5型（磷酸二酯酶5型）抑制剂 国家食品药品监督管理局药品检验补充检验方法和检验项目批准件2008016，2009030 5 声称改善睡眠功能产品 地西泮、硝西泮、氯硝西泮、氯氮卓、奥沙西泮、马来酸咪哒唑仑、劳拉西泮、艾司唑仑、阿普唑仑、三唑仑、巴比妥、苯巴比妥、异戊巴比妥、司可巴比妥、氯美扎酮 国家食品药品监督管理局药品检验补充检验方法和检验项目批准件2009024 6 声称辅助降血压（调节血脂）功能产品 阿替洛尔、盐酸可乐定、氢氯噻嗪、卡托普利、哌唑嗪、利血平、硝苯地平 国家食品药品监督管理局药品检验补充检验方法和检验项目批准件2009032

基于珀金埃尔默独具优势的原子光谱、分子光谱、色谱与质谱、热分析等技术，以及强大的数据完整性及合规性信息处理服务系统，珀金埃尔默最新推出《珀金埃尔默药品质量控制应用文集》，精选出十余篇覆盖从工艺研发到生产质控各个环节，涉及杂质分析、原料药及辅料鉴别、溶剂残留、化合物定性定量及稳定性研究、药物包装材料等各个领域的文献，助力您在制药领域大展宏图！ 内容丰富，小编带你先睹为快！第 1 篇《LAMBDA 365 紫外-可见分光光度计测定药物含量和多组分分析》常用镇痛药的活性成分通常为扑热息痛和阿司匹林，其作用方式相似，通过抑制引起疼痛、炎症和发热的前列腺素环氧化酶的产生而起到镇痛作用。紫外-可见分光光度法是药品质控实验室中常用的快速分析方法。本文描述了在遵守CFR 21 Part 11规定的同时，如何按照USP方法有效利用珀金埃尔默LAMBDA 365紫外-可见分光光度计测定止痛药剂中活性成分的含量。第 2 篇《傅里叶变换红外成像技术在传统制药和生物制药领域杂质特征研究中的应用》基于傅立叶变换红外(FT-IR)光谱仪的中红外显微成像技术可以弥补传统光学显微镜技术的不足，使用光学显微镜定位目标区域，然后通过红外辐射进行非侵入性、非破坏性采样，对样品内指定微观区域进行化学鉴定。这项技术既可用于材料研究、癌细胞和疾病诊断成像，又可用于聚合物和药物质量控制。傅里叶变换红外成像系统能够对在一些药品中观察到的固体材料(杂质)进行成像研究，并对所述杂质溯源。第 3 篇《使用NexION ICP-MS按照ICH Q3D和 USP /的规定检测和验证药用抗酸剂中的1级和2A级元素杂质》抗酸剂类由于具有极高的钙含量，给测定其所含元素杂质的分析造成了极大挑战。本文描述了利用珀金埃尔默公司NexION ICP-MS和Titan MPS微波样品制备系统，按照USP 规定，对抗酸剂中1级和2A级元素杂质进行测定和数据验证。第 4 篇《近红外光谱法鉴别假冒他汀类药物》他汀类药物是一种通过抑制HMG-CoA还原酶来降低患者胆固醇的药物。自1996年以立普妥为商品名通过上市审批以来，阿托伐他汀成为了最畅销的处方药。由于辉瑞公司拥有阿托伐他汀的专利权在2011年到期，仿制药开始不断涌现。本文对来自不同地域的他汀类药物进行研究鉴别，利用配备带Verify命令的Spectrum 10和AssureID软件包的珀金埃尔默Spectrum Two N傅里叶变换近红外光谱仪，快速、无损地鉴别来自各地的阿托伐他汀片剂。另外，为了提高简易性、形成工作流，Verify还可以并入Spectrum Touch中，从而实现假药的快速、简单筛查。第 5 篇《使用近红外光谱学和化学计量学鉴别真伪磷酸二酯酶抑制剂》本文针对最经常被仿冒的含有用于治疗勃起功能障碍、列腺增生和肺动脉高压的5-型磷酸二酯酶(PDE5)抑制剂的西地那非、他达拉非和伐地那非片剂，使用珀金埃尔默配备AssureID和Spectrum 10软件的Spectrum Two N傅里叶变换近红外光谱仪进行快速分析、鉴定。所述方法样本制备过程简单，AssureID和带Verify命令的Spectrum 10软件能够简单、准确地对仿冒药品进行表征。另外，为了提高简易性、形成工作流，Verify还可以并入Spectrum Touch中，从而实现假药的快速、简单筛查。第 6 篇《药物分析和工业分析中的荧光分光光度计的性能验证》与其它产生较准确和稳定的绝对光谱参数的技术如吸收光谱相比，受到更多因素影响的荧光分析仪器性能的验证更具有挑战性。尤其对于分析实验室来说，为了获得诸多权威机构如英国皇家认证委员会UKAS、国际标准ISO等的资格认证，需要证明使用的仪器完全满足分析实验的要求。然而，荧光分析仪器验证所采用的材料、方法等存在较多局限。例如，用于验证调查的样品必须能够自主发出荧光，或与其它物质反应生成/衍生出荧光物(例如，非荧光组胺与邻苯二甲醛反应产生能发出高度荧光的化合物)；其次，还需要考虑吸光性化合物对荧光造成掩盖和猝灭。USP第40版第853章提供荧光分光光度计性能验证指导。珀金埃尔默FL6500和FL8500荧光分光光度计配备符合USP要求的Spectrum FL软件验证模块，能够用于验证荧光分光光度计的各主要指标参数。第 7 篇《使用功率补偿型差式扫描量热仪对药物多晶型进行高分辨表征》珀金埃尔默功率补偿型DSC既可以提供药物多晶型测试所需要的极高灵敏度，又可以提供卓越的分辩率。这对于药物研发和生产行业来说是非常重要的，因为多晶型现象对于有效成分进入血液循环的速率有很大的影响，也会影响到药物的储存期。功率补偿型DSC的小炉体设计可以提供很快的响应时间，从而确保对热转变过程进行很好地检測和分辨；功率补偿型DSC可以掲示特定药物的多晶型性质，而热流型DSC则无法检测到该样品的多晶型现象（结晶过程）。第 8 篇《符合USP 671 药品容器光谱透光率检测规定的紫外可见分光光度法》药品包装质量对药品性能具有重大影响，所有药品都需要使用符合标准的容器进行保护与包装。USP 671“容器性能测试”中规定固体和液体口服剂型药品和膳食补充剂所用包装系统的功能性质标准。本文据此详述了几种能够确定塑料容器的水汽透过率和光谱透射率的试验方法，展示了使用珀金埃尔默LAMBDA™ 紫外/可见测定塑料药品容器光谱透射率的过程。第 9 篇《傅里叶变换近红外光谱在原料药检测中的应用》 本文主要介绍使用珀金埃尔默Spectrum TWO N傅里叶变换近红外光谱仪和Enhanced Security™ (ES)软件，辅以符合21 CFR Part 11规定、适合监管的工作流，通过比对待测样品与标准参比光谱数据库进行样品分析。可以根据不同测试需求选择不同的算法，不仅能识别化学性质不同的材料，还能区分化学性质极其相似的材料样品，以及确认未知材料样品可能成分，从而克服原料药识别过程中的多重挑战。近红外光谱法测试快速、简单，可以在数秒内完成样品测试。无需样品制备或稀释，直接使用 Spectrum TWO N上的近红外反射模块组件，测量放置于玻璃瓶或者培养皿中的样品。第 10 篇《利用傅里叶变换近红外光谱光纤探头对制药原料进行分析》分析所有进厂制药原料是遵守CFR 21第211.84节的规定。采用珀金埃尔默Spectrum Two N的远程采样模块(光纤探头)和Spectrum Touch软件，可以透过不同厚度和类型的包装分析原料，分析和鉴定各种制药原料，快速无损。分析可随地进行，包括装卸区和仓库，不用担心潜在的污染。此外，结合Spectrum Touch软件的使用，基于工作流的方法可以让无专业背景的用户轻松操作。第 11 篇《药品中残留溶剂的评估》珀金埃尔默Clarus系列气相色谱仪符合USP 467法规要求，它通过压力平衡顶空进样器和气相色谱-火焰离子化检测器对USP规定的所有三类残留溶剂进行分析。第 12 篇《Syngistix ES符合21CFR Part 11 法规要求Product Note》 制药公司和供应商将产品销往美国，必须符合21 CFR Part 11法规要求。该条款设定了有关电子记录、电子签名、 审计追踪方面的标准，确保分析测试过程中数据的完整性和可靠性。Syngistix™ Enhanced Security™ 专为珀金埃尔默原子吸收光谱仪(AAS)、电感耦合等离子体光谱仪(ICP-OES)和电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)等仪器设计，其功能完全满足21 CFR第11部分规定的技术要求。资料下载扫描下方二维码把珀金埃尔默药品质量控制应用文集收入囊中吧！关于珀金埃尔默：珀金埃尔默致力于为创建更健康的世界而持续创新。我们为诊断、生命科学、食品及应用市场推出独特的解决方案，助力科学家、研究人员和临床医生解决最棘手的科学和医疗难题。凭借深厚的市场了解和技术专长，我们助力客户更早地获得更准确的洞见。在全球，我们拥有12500名专业技术人员，服务于150多个国家，时刻专注于帮助客户打造更健康的家庭，改善人类生活质量。2018年，珀金埃尔默年营收达到约28亿美元，为标准普尔500指数中的一员，纽交所上市代号1-877-PKI-NYSE。了解更多有关珀金埃尔默的信息，请访问www.perkinelmer.com.cn

原辅料种类多？仪器操作繁琐？数据解析复杂？无法满足数据一致性要求？需要在生产现场检测？解决这些难题，一台Spectrum Two NTM帮你搞定！与其他分析方法相比，近红外测试更快速、更简单，样品无需前处理，直接通过玻璃瓶或者培养皿作为反射采样附件，对样品无破坏。原材料样品可能为多种物理形态，如液体、凝胶和固体等多种形态，这些在近红外光谱仪上都可以轻松完成测试。?样品近红外光谱：从上至下依次是：Avicel® 、聚维酮、抗坏血酸钙、羟丙基甲基纤维、硬脂酸镁Spectrum Two N系统结构紧凑，灵敏度高，可以容纳各种各样的采样附件。包括即插即用的近红外反射附件、可加热液体采样附件和远程直接采样附件，实现透过包装直接分析。强大且直观的Spectrum 10™ 软件结合了高效操作和多种傅里叶变换近红外的功能。帮助具有不同经验水平的分析人员获得样品的近红外光谱，只需片刻时间即可与参照光谱进行对比验证。原材料测试标准操作流程界面?软件同时可以提供审查跟踪、电子签名和权限控制，协助您遵循21 CFR Part 11的严格要求。体积小巧，便携式设计，可以使用Wi-Fi激活，可通过汽车电源供电，也可以用电池供电，方便您携带至不同地方使用。相关应用文章下载：《使用近红外光谱学和化学计量学鉴别真伪磷酸二酯酶抑制剂》《Spectrum Two N FT-NIR近红外光谱仪用于药品原料检测》

为深入学习贯彻党的十九届六中全会精神和中央人才工作会议精神，把党中央关于新时代人才工作的决策部署落到实处，大力弘扬科学家精神，中国细胞生物学学会将通过展示学会党员先锋模范，提倡广大人才积极发扬科学家胸怀祖国、服务人民的优秀品质。蒋争凡 教授学会任职： 党委副书记/理事研究方向：感染-免疫-肿瘤工作单位：北京大学入党时间：2012年12月蒋争凡，教授。天然免疫是机体抵抗感染与肿瘤的第一道防线。其中，识别细胞内DNA的cGAS-STING通路对肿瘤的免疫监视及治疗都至关重要。蒋争凡实验室是世界上发现STING蛋白的三个实验室之一，对其生理学功能进行了深入的研究。发现STING二聚体化对其激活天然免疫反应重要；细胞通过STING-TBK1活化STAT6及NF-kB在cGAS-STING通路中的重要作用；发现特异性降解3' 3' -cGAMP的磷酸二酯酶；发现多种Caspase负调控天然免疫反应，避免过度的免疫反应及凋亡细胞保持“免疫沉默”的机制；发现锰离子在cGAS-STING通路介导的抗感染、抗肿瘤中发挥重要作用，拓展了我们对锰离子的生理学功能研究，并为锰离子及锰佐剂在抗感染、抗肿瘤及疫苗研制等方面显示出广阔的应用前景。

肺动脉高压（Pulmonary ArterialHypertension，以下简称PAH）是指因由心脏输送到肺部的肺动脉末梢小动脉的内腔变窄，导致血液流动不通畅，使肺动脉压力升高，而心脏的右心房难以承受该高压的病理状态。如果患上PAH这种严重疾病，右心房将长期处于高压，导致其功能下降，造成右心功能不全。最近，新开发出一种扩张血管的药物，并且有明显的治疗效果。为了对同时服用该药物和其他药物在体内的药物代谢动力学进行研究，要求采用一种对血浆中的药物成分进行快速微量分析的方法。 本文向您介绍使用LC/MS/MS ESI-正离子模式，可有效治疗PAH的内皮素受体拮抗剂（ERA）波生坦（Bosentan）、安贝生坦（Ambrisentan）、磷酸二酯酶-5（PDE-5）抑制剂西地那非（Sildenafil）、他达那非（Tadalafil）等4种成分进行快速高灵敏度分析的示例。使用高灵敏度LC/MS/MS 法，可控制样品即血浆的量，从而快速简单地进行预处理，以提高分析作业的效率。本法分析了50μL血浆中提取的药物成分，分析时间仅用了5min。该法分析速度快、灵敏度高，适合于血浆药物的药代动力学研究。 岛津三重四极杆LC/MS/MS 了解详情，敬请点击《使用三重四极杆LC/MS/MS 快速高灵敏度测定血浆中的药物成分》 关于岛津 岛津企业管理（中国）有限公司是（株）岛津制作所于1999年100%出资，在中国设立的现地法人公司，在中国全境拥有13个分公司，事业规模不断扩大。其下设有北京、上海、广州、沈阳、成都分析中心，并拥有覆盖全国30个省的销售代理商网络以及60多个技术服务站，已构筑起为广大用户提供良好服务的完整体系。本公司以“为了人类和地球的健康”为经营理念，始终致力于为用户提供更加先进的产品和更加满意的服务，为中国社会的进步贡献力量。 更多信息请关注岛津公司网站www.shimadzu.com.cn/an/ 。 岛津官方微博地址http://weibo.com/chinashimadzu。岛津微信平台

这种方法可以检测和定量合成类mRNA中大多数修饰的核苷。这不仅包括在体外转录过程中有意通过三磷酸盐引入的修饰，还包括商业化NTP原料变化引入的杂质，核苷被氧化产生的杂质等。该方法还能检测从帽结构释放的m7G或核糖甲基化修饰。使用LC-MS/MS，可以在核苷水平上分析mRNA，从而在单次运行中检测和量化数十种不同的修饰核苷。该方法可以很容易地对体外转录的NTP进行质量控制。溶液A：5mM醋酸铵缓冲液。乙酸调pH到5.3溶液B：乙腈。必须使用LC-MS级梯度条件：见下表样品制备用0.6U的核酸酶P1、0.2U的蛇毒磷酸二酯酶、0.2U的牛肠磷酸酶和10U的Benzonase核酸酶，在5mM Tris （pH8）和1mM氯化镁溶液中，37℃酶解2小时，将10μg的RNA酶切至核苷水平。另外，可以选择性地添加脱氨酶抑制剂，如喷司他汀（腺苷脱氨酶抑制剂，200ng）和四氢尿苷（胞苷脱氨酶抑制剂，500ng），以避免核苷降解。标样：腺苷或另一种主要核苷（C, U或G）色谱系统色谱柱：Synergi Fusion, 4μm, 80&angst 孔径, 250×2.0mm Phenomenex柱温：35℃流速：0.35mL/min检测器：UV 254nm仪器参数质谱仪：配备电喷雾离子源（ESI）的三重四极杆（QQQ）模式：正离子模式，dMRM（动态多反应监测）ESI参数：气体温度300℃，气体流量7L/min，雾化器压力60psi，鞘气温度400°C，鞘气流量12L/min，毛细管电压3000v，喷嘴电压0vQQQ参数：取决于必须检测的修饰核苷。建议对每台质谱仪的仪器参数（破碎器、碰撞能量、加速器电压）进行优化，以达到最佳灵敏度分析——相对定量用MS/MS法测定各修饰核苷的峰面积。修饰核苷的量用腺苷校正，以消除进样量不同带来的差异。为此，从254nm处记录的紫外色谱中获取腺苷的峰面积。通过在每个样品中加入同位素标记的标准物进行定量。A(MS mod)=修饰核苷酸的MS峰面积n(ISTD)=每个样品的内标量A(MS ISTD)=内标质谱峰的面积A(UV腺苷)=腺苷的峰面积或者，可以选择另一种主核苷（C、U或G）进行校正。例如，在酶促多聚腺苷酸化的情况下，它会导致未知或不同数量的腺苷。分析——绝对定量用MS/MS法测定各修饰核苷的峰面积。修饰核苷的量用腺苷校正，以消除进样量不同带来的差异。为此，从254nm处记录的紫外色谱中提取腺苷的峰面积。使用外部校准溶液进行绝对定量。准备浓度为0.1、0.5、1、5、10、50、100和500nM的校准溶液，用于MS/MS检测修正，每个修饰含有等量的内标。每种稀释液注入10μL，在1-5000fmol范围内进行校准。对于腺苷，准备浓度为0.1、1、10和100fmol的校准溶液。每种稀释液注入5μL，在0.5-500pmol范围内进行校准。响应因子对应于校准曲线线性拟合的斜率（峰面积对应于各自的量）。X(每个修主核苷的修饰量)=绝对定量，每个主核苷修饰量A(MS mod)=各自修饰的MS峰面积A(MS ISTD)=内标质谱峰的面积n(ISTD)=每个样品的内标量rf(MS mod/MS ISTD)=各自修饰物与内标物之比的响应因子A(UV腺苷)=腺苷的紫外峰面积RF(UV腺苷)=相应修饰的响应因子对于已定义的已知序列的mRNA：修饰核苷的数量可以归一化为RNA分子的数量。X(mod/RNA)=绝对定量，每个RNA分子的修饰量N(腺苷)=RNA序列中各自修饰的数目或者，可以选择另一种主核苷（C、U或G）进行归一化。防止在酶促聚腺苷酸化的情况下，导致未知数量的腺苷。参考文献：USP：Analytical Procedures for mRNA Vaccine Quality （Draft guidelines: 2nd Edition）

药物杂质研究贯穿于整个药物质量研究过程，并且对于一些可能具有特殊的生理活性或毒性的杂质，更需要进行结构确证和安全性验证。在此背景下，仪器信息网于2024年7月30日成功举办了“第八届化学药物杂质研究及质控技术”主题网络研讨会，本次会议汇聚了来自各药物研究院所、高校和仪器厂商的专家学者，共同探讨了化学药物杂质研究的最新进展和技术应用。会议内容涵盖了药物杂质研究的新思路、新技术，以及针对基因毒性杂质、元素杂质等特定杂质的分析方法。与会专家分享了他们在药物杂质研究领域的丰富经验和研究成果，并通过实际案例分析展示了新技术和新方法在药物杂质检测中的应用价值。点击看精彩报告回放》》中国医学科学院医药生物技术研究所副研究员山广志针对化学药物杂质研究新思路和新技术，指出对于药物中的杂质研究包括对已知杂质、特定杂质、潜在杂质和毒性杂质研究四种类型。从化学药物杂质研究方法趋势上，需要更全更快的技术对化药杂质进行检测。报告中也有对水苏糖有关物质HPLC-CAD测定、UHPLC-紫杉醇有关物质检测的实例介绍，还有对二维色谱定量基因毒杂质和超临界色谱分析手性异构体实际应用案例的方法开发和优化，展现了新技术新方法助力精准化学药物杂质检测的思路。岛津企业管理（中国）有限公司高级应用工程师孟海涛从液质联用技术在药物杂质分析中应用进行了报告，包括普通杂质定性分析的方法及案例、基因毒性杂质测定的相关方案两个方面。在报告中，展示了Trap-free 2D-LC/MS杂质分析系统、多/单中心捕集环二维杂质鉴定系统和二维捕集柱杂质鉴定系统等的适用范围以及应用案例。对基因遗传毒性杂质中磺酸酯类、亚硝胺类等常见种类检测进行了介绍，并对雷尼替丁、二甲双胍中NDMA的检测进行了实际案例的介绍。最终展示了岛津在药物杂质分析上有着丰富的应用方案以及仪器技术支持。中山大学药学院副教授徐新军依据其团队对罗达那非原料药的研究进行了报告，报告介绍了其团队研究发现罗达那非是一种PDE5抑制剂，可选择性的抑制PDE5，而对其他的亚型磷酸二酯酶没有或具有微弱的抑制作用，主要用于治疗男性勃起功能障碍。同时对罗达那非原料药进行了残留溶剂分析、有关物质分析、杂质谱分析、杂质结构鉴定、含量分析等。最终依据研究结果，制定了罗达那非原料药质量标准草案，建立和验证了罗达那非原料药含量测定和有关物质检查HPLC方法，以及残留溶剂GC检查方法，还初步建立了罗达那非原料药的杂质谱。在研究过程中所展现出的晶型差异、校正因子测定和杂质谱等方面的不足是后续指导该研究推进的方向。安捷伦科技（中国）有限公司原子光谱应用工程师曾梦根据多年原子光谱检测仪器的经验，对ICP-OES/ICP-MS 在化学药物元素杂质分析中的应用研究进行了报告。曾老师提出在制药行业分析杂质元素时面临的挑战包括有如何快速建立仪器分析方法？高盐样品如何兼顾检出限和稳定性？有机溶剂直接进样？前处理过程如何保证元素的稳定性？元素质谱干扰如何消除/数据准确性如何保证？针对以上无机元素在分析中面临的挑战，展现出ICP-MS在制药行业分析无机元素时所具有的解决方案优势。另外还介绍了ICP-OES在制药行业中针对检测难点，该技术具有其Intelli Quant半定量技术、全谱直读且分析时间最优化、软件的全流程实时监测等优势，能更好的应用于药物杂质元素的检测中。广东省科学院测试分析研究所（中国广州分析测试中心）博士周熙通过高分辨技术、药物杂质、有关物质定性分析和基因毒性杂质定量分析四个部分对高分辨质谱技术在药物杂质分析中的应用进行了报告。报告中详细介绍了杂质研究的重要意义、化学结构鉴定难点，并通过实际案例进行了辅证，最终表明利用高分辨质谱技术是可以实现有关物质的快速定性。同时结合制备液相分离，可以解决液相与质谱流动相不兼容的问题。报告中也体现出高分辨质谱已经越来越广泛的应用于基因毒性杂质的定量分析。本次会议为广大药学工作者和检测人员提提供了药物杂质研究的最新进展和技术应用，有助于推动化学药物安全和质量控制水平的研究进程。会议内容丰富，案例靠实，是一次宝贵的学习和交流机会。相信在新技术和新方法的推动下，化学药物杂质研究能够朝着更全更快的检测趋势发展，为保障公众用药安全做出更大的贡献。

来自中国科学院生物物理研究所、牛津大学等单位的科学研究人员经过多年紧密合作于2014年10月19日在Nature杂志上在线发表题为Hepatitis A virus and the origins of picornaviruses的论文，详细阐述了甲型肝炎病毒的独有的结构特性、极强的稳定性、特殊的脱衣壳机制和进化关系。。HAV病毒属于小RNA病毒科肝炎病毒属，科学家对这一病毒的研究也已经持续了很长时间。此次，中国科学院生物物理研究所饶子和院士研究组与牛津大学 David Stuart 教授研究组、中国食品药品检定研究院王军志教授和胡忠玉教授以及北京科兴控股生物有限公司尹卫东和高强等专家共同合作，解析了HAV成熟病毒和空心病毒两种状态的全颗粒高分辨率的晶体结构，结果显示这两种病毒颗粒的结构具有很大的不同。在这一论文中，科学家第一次证明HAV成熟病毒具有衣壳蛋白vp4，而空心病毒颗粒含有的是未被剪切的衣壳蛋白vp0前体。与目前已经解析的小RNA病毒科成员三维结构比较，HAV病毒结构最大的不同在于其衣壳蛋白vp2的N端进行了180度偏移，转向了病毒二次轴处，增强了病毒五聚体与五聚体之间的相互作用力，部分解释HAV病毒具有的极强稳定性。HAV病毒这一独特的构象是在小RNA病毒科中第一次被发现，然而这一构象在昆虫病毒成员中却普遍存在。与昆虫病毒类似，HAV病毒也能够进行细胞之间的传递。这一系列相似的特性，不难想到HAV病毒与昆虫病毒之间的关系。基于全病毒衣壳蛋白三维结构开展的进化关系分析表明，HAV病毒不断进化时，逐渐脱离昆虫病毒方向，衍生出小RNA病毒的结构特征，在HAV病毒的基础上又逐渐进化出更多更高级的小RNA病毒成员。病毒入侵宿主细胞的第一步是与其功能性受体结合，而甲型肝炎病毒与其功能性受体TIM1的结合模式和脱衣壳机制与其它小RNA病毒成员不同。结构分析表明HAV病毒颗粒因较短的vp1 BC loop和vp2 EF loop，使其不具备肠道病毒典型的“峡谷”结构特征，也意味着HAV病毒的受体结合方式与之不同。同时，HAV病毒衣壳蛋白也没有典型的疏水口袋，自然也不含有口袋因子，这暗示着HAV病毒采用不同的脱衣壳机制。HAV病毒具有极强的稳定性，耐酸耐碱耐高温，能在绝大多数有机溶液中存活，在自然环境中可存活几个月之久。热稳定性实验结果表明HAV病毒能够在pH 1-10保持着极好的稳定性，在弱酸环境下，HAV病毒能够忍受的裂解温度可高达81摄氏度。该研究对于进一步解析HAV灭活病毒疫苗的免疫原性和保护机理具有重要意义，对于抗肝炎病毒药物的研发提供理论指导和新方向中文名称：人外核苷酸焦磷酸酶/磷酸二酯酶2(ENPP2)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：ELISA Kit for Ectonucleotide 中文名称：人卵磷脂胆固醇脂酰转移酶(LCAT)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：ELISA Kit for Lecithin Cholesterol Acyltransferase (LCAT) 中文名称：人白介素19(IL19)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：ELISA Kit for Interleukin 19 (IL19) 中文名称：人C-型凝集素域家族3成员B(CLEC3B)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：ELISA Kit for C-Type Lectin Domain Family 3, Member B 中文名称：人神经元正五聚蛋白Ⅱ(NPTX2)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：ELISA Kit for Neuronal Pentraxin II (NPTX2) 中文名称：人骨成型蛋白10(BMP10)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：ELISA Kit for Bone Morphogenetic Protein 10 (BMP10) 中文名称：人自身免疫调节因子(AIRE)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：ELISA Kit for Autoimmune Regulator (AIRE) 中文名称：人5羟色胺转运蛋白(SERT)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：ELISA Kit for Serotonin Transporter (SERT) 中文名称：人补体成分9(C9)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：ELISA Kit for Complement Component 9 (C9) 中文名称：人肾连蛋白(NPNT)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：ELISA Kit for Nephronectin (NPNT) 中文名称：人白介素1受体辅助蛋白(IL1RAP)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：ELISA Kit for Interleukin 1 Receptor Accessory Protein 中文名称：人髓细胞触发受体2(TREM2)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：ELISA Kit for Triggering Receptor Expressed On Myeloid Cells 2 中文名称：人泛素羧基端酯酶L1(UCHL1)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：ELISA Kit for Ubiquitin Carboxyl Terminal Hydrolase L1 (UCHL1) 中文名称：人HtrA丝氨酸肽酶1(HTRA1)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：ELISA Kit for HtrA Serine Peptidase 1 (HTRA1) 中文名称：人丝氨酸肽酶抑制因子Kazal型1(SPINK1)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：ELISA Kit for Serine Peptidase Inhibitor Kazal Type 1 中文名称：人脯氨酰4-羟化酶α多肽Ⅲ(P4Hα3)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：ELISA Kit for Prolyl-4-Hydroxylase Alpha Polypeptide III 中文名称：人干扰素γ诱导蛋白30(IFI30)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：ELISA Kit for Interferon Gamma Inducible Protein 30 (IFI30) 中文名称：人轻肽神经丝蛋白(NEFL)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：ELISA Kit for Neurofilament, Light Polypeptide (NEFL) 中文名称：人视黄醇结合蛋白1(RBP1)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：ELISA Kit for Retinol Binding Protein 1, Cellular (RBP1) 中文名称：人转化生长因子β受体Ⅱ(TGFβR2)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：ELISA Kit for Transforming Growth Factor Beta Receptor II 中文名称：人死骨片1(SQSTM1)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：ELISA Kit for Sequestosome 1 (SQSTM1) 中文名称：人胃内因子(GIF)ELISA试剂盒价格96t/48t 英文名称：ELISA Kit for Gastric Intrinsic Factor (GIF)

仪器信息网讯 2010年8月22日上午11点30分，第三届全国生命分析化学学术报告与研讨会闭幕式在北京大学第二教学楼105教室举行。闭幕式由北京大学刘虎威教授主持，吸引了400余名业内人参加，中国科学院陈洪渊院士、第三世界科学院董绍俊院士、中国科学院汪尔康院士、中国科学院姚守拙院士等业内专家出席了本次闭幕式。 　　闭幕式现场 　　北京大学刘虎威教授主持闭幕式 　　闭幕式由“论文颁奖、金牌赞助厂商代表发言、主办方致谢”三个环节组成。首先进行的是本次学术报告与研讨会的颁奖环节。大会主办方特设“安捷伦杯”优秀墙报奖，共展示科研报告700余篇，经过专家组评审后，评出了优秀报告共41篇。董绍俊院士、汪尔康院士、姚守拙院士、陈洪渊院士以及赞助商代表分别为获奖者颁奖。 　　部分“安捷伦杯”优秀墙报奖获奖人员合影 获奖者 单位 题目 崔毅然 北京大学 核壳型磁性纳米材料的合成及其细胞磁性分选中的应用 李元娜 湖南大学 三维荧光光谱法结合二阶校正方法快速测定环境中除草剂敌草胺的含量 何子剑 北京理工大学 多光谱成像技术在肿瘤标志物检测中的应用 刘萍萍 北京师范大学 基于量子点标记的铁蛋白免疫检测新方法 陈永刚 大连理工大学 一种NO测定用新型铕配合物荧光探针的设计、合成与应用 马会娟 东北大学 半胱氨酸功能化纤维分离富集－原子荧光法测定汞的形态 吴亚锋 东南大学 基于高分子聚合反应的电化学发光免疫传感器 郑珍珠 福州大学 新型核酸探针在转基因食品检测中的应用研究 朱杰 复旦大学 二氧化硅纳米载体对光动力学药物抗癌毒性的研究 李银辉 湖南大学 设计和合成双功能探针检测葡萄糖苷酶和磷酸二酯酶的活性 苏招红 湖南师范大学 高频石英晶体阻抗技术研究血管紧张素转换酶与赖诺普利的相互作用 杨丽珠 华东师范大学 β-环糊精衍生物重氮化修饰直立碳纳米管及其通过主客体识别在均相溶液的DNA杂交检测重的应用 胡亮 华中科技大学 基于微流控芯片的线虫刺激成像的研究 蔡秋莲 兰州大学 环烯烃共聚物芯片微通道固定化蛋白酶的应用 赵倩 聊城大学 血红蛋白在Nafion/Fe3O4杂化膜修饰电极上的直接电化学及其过氧化氢的生物传感 张秋兰 南昌大学 电化学和光谱法结合MCR-ALS研究左旋多巴与牛血清白蛋白的相互作用 刘震 南京大学 新颖硼亲和方法及其在组学分析中的应用 邹文生 南京大学 基于Mn掺杂ZnS量子点基础上的TNT荧光化学传感器与化学剂量测定器 古志远 南开大学 基于金属有机骨架材料的分离分析新方法 杜甫佑 北京大学 免疫亲和色谱LC-QTOF MS联用分离分析植物多肽系统素的研究 张立兵 中科院长春应用化学所 利用DNA保护的银簇和核酸酶荧光检测铅离子 张晶 中科院长春应用化学所 活细胞膜上分子相互作用与成像分析研究 张轶鸣 中科院化学所 高通量表面等离子共振成像仪研制 江迎 中科院化学所 可视化分析新方法及其在脑化学研究中的应用 熊彩侨 中科院化学所 共振抛出－离子阱颗粒质谱赵超 中科院生态环境中心 丙烯醛－DNA加合物损伤位点检测的研究 蒋先旺 中科院武汉物数所 蛋白质芳香基团的1H-13C HSQC信号增强研究 张忠平 中科院合肥智能机械所 分子印记复合纳米结构的化学传感器 陈瀑 武汉大学 新型β－胡萝卜素镶嵌的纳米硅共振拉曼探针在细胞成像中的应用 张立春 四川大学 基于Y2O3微纳米材料的催化发光气相色谱检测器 韩国军 清华大学 基于ICP-MS的单细胞金属组学新方法研究 祁媛媛 清华大学 一种新的化学发光免疫分析反应模式测雌二醇的含量 陈晓彤 清华大学 对PH和铜离子具有双功能响应的席夫碱介孔硅材料 丁黎娟 山东师范大学 核酸酶双纳米金分子信标用于细胞内成像 邹蕊 陕西师范大学 多负载电化学阻抗ConA传感器的研究 王金和 厦门大学 光谱化学传感中的信号放大：仿生变构作用 兰韬 上海交通大学 基于共振散射光相关光谱的均相免疫分析 韩彬 中科院大连化物所 基于固载PH梯度整体材料的芯片自由流等电聚焦技术 刘跃 西南大学 单粒子光散射分析 黄健祥 中山大学 2,2－联吡啶铜配位印迹－固相微萃取纤维的制备及其在水相中的识别性能研究 林玲 北京化工大学 化学还原法制备Au/CNT复合催化剂及其在气体传感器上的应用 “安捷伦杯”优秀墙报奖获奖名单 　　颁奖仪式结束后，本次学术报告与研讨会的金牌赞助厂商沃特世、江苏江分、安捷伦科技、岛津、赛默飞世尔科技、日立等公司代表分别发言。他们感谢长期以来广大用户的支持，预祝本次研讨会圆满成功，并均表示将以优秀的技术与产品为中国的科研事业尽绵薄之力。 　　沃特世科技(上海)有限公司北方区经理薄美萍女士 　　江苏江分电分析仪器有限公司总经理吴荣坤先生 　　安捷伦科技(中国)有限公司生命科学部市场部经理庄晨杰先生 　　岛津国际贸易(上海)有限公司分析仪器事业部副事业部长曹磊博士 　　日立高新技术公司北京分公司经理高桥秀明先生 　　最后，会议主办方代表上台致谢，感谢志愿者、参会人员在会议期间的支持与帮助。国家自然基金国家自然科学基金委分析化学部庄乾坤教授在发言中说到，“本次大会聚集了国内外生物分析化学界的专业人士，大家共同探讨、相互促进，既促进了中国生命分析化学学术科研的交流，也锻炼了中国分析化学界主办学术交流会的能力。大会已成功举办了三届，参会人数越来越多，也取得了很多成果，这证明这个会议是有价值的、有前途的，但后期主办方需要做好相关事宜的总结工作。” 　　国家自然科学基金委分析化学部庄乾坤教授 　　会议主办方代表致谢 　　志愿者合影

在杀死癌细胞的同时，也杀死了正常细胞。”这个困惑着全世界医生和癌症病人的难题，终于可望破解。笔者13日从中山大学获悉，中山大学中山医学院教授颜光美课题组于7日在国际期刊《美国科学院院报》发表了天然甲病毒M1具有选择性抗肿瘤作用的最新研究，该研究表明，一种叫做M1的天然病毒能特异性杀死癌细胞而不伤害正常细胞，这种新型溶瘤病毒有望成为新一代抗癌利器全球癌症发病率呈现快速增长态势，现有的治疗手段远远未能满足临床需求。颜光美课题组历经多年研究，从海南岛分离得到一种M1的天然病毒。颜光美团队使用细胞培养方法发现，M1病毒能选择性地感染并杀死包括肝癌、结直肠癌、膀胱癌、黑色素瘤在内的多种癌细胞，而对正常细胞无毒副作用。整体动物模型证明，M1病毒“像长了眼睛一样准确找到肿瘤组织并将其杀灭”，正常细胞则不受影响。XY-EL-Ch1509c 鸡间隙连接蛋白26(CX26)ELISA试剂盒 Chicken CX26 (Connexin 26) ELISA Kit XY-EL-Ch1510c 鸡金属硫蛋白2 (MT2)ELISA试剂盒 Chicken MT2 (Metallothionein 2) ELISA Kit XY-EL-Ch1511c 鸡神经激肽A(NKA)ELISA试剂盒 Chicken NKA (Neurokinin A) ELISA KitXY-EL-Ch1512c 鸡细胞粘附蛋白相互作用蛋白(CYTIP)ELISA试剂盒 Chicken CYTIP (Cytohesin Interacting Protein) ELISA KitXY-EL-Ch1513c 鸡磷酸二酯酶4D(PDE4D)ELISA试剂盒 Chicken PDE4D (Phosphodiesterase 4D, cAMP Specific) ELISA KitXY-EL-Ch1514c 鸡5核苷酸酶(5-NT)ELISA试剂盒 Chicken 5-NT (5-Nucleotidase) ELISA KitXY-EL-Ch1515c 鸡γ1肌动蛋白(ACTG1)ELISA试剂盒 Chicken ACTg1 (Actin Gamma 1) ELISA KitXY-EL-Ch1516c 鸡细胞分裂周期蛋白23(CDC23)ELISA试剂盒 Chicken CDC23 (Cell Division Cycle Protein 23) ELISA KitXY-EL-Ch1517c 鸡谷胱甘肽S转移酶κ1(GSTκ1)ELISA试剂盒 Chicken GSTκ1 (Glutathione S Transferase Kappa 1) ELISA Kit XY-EL-Ch1518c 鸡血管紧张素II受体1(ANG II R1)ELISA试剂盒 Chicken ANG II R1/AGTR1 (Angiotensin II Receptor 1) ELISA Kit XY-EL-Ch1520c 鸡染色质区解旋酶DNA结合蛋白3(CHD3)ELISA试剂盒 Chicken CHD3 (Chromodomain Helicase DNA Binding Protein 3) ELISA Kit XY-EL-Ch1521c 鸡脂多糖结合蛋白(LBP)ELISA试剂盒 Chicken LBP (Lipopolysaccharide Binding Protein) ELISA KitXY-EL-Ch1523c 鸡唾液酸结合免疫球蛋白样凝集素8(SIGLEC8)ELISA试剂盒 Chicken SIGLEC8 (Sialic Acid Binding Ig Like Lectin 8) ELISA KitXY-EL-Ch1524c 鸡肝细胞生长因子(HGF)ELISA试剂盒 Chicken HGF (Hepatocyte Growth Factor) ELISA Kit XY-EL-Ch1525c 鸡脂蛋白脂酶(LPL)ELISA试剂盒 Chicken LPL (Lipoprotein Lipase) ELISA KitXY-EL-Ch1526c 鸡胸腺五肽(TP5)ELISA试剂盒 Chicken TP5 (Thymopentin) ELISA KitXY-EL-Ch1527c 鸡可溶性CD14分子(sCD14)ELISA试剂盒Chicken sCD14 (Soluble Cluster of Differentiation14) ELISA KitXY-EL-Ch1528c 鸡胰岛素(INS)ELISA试剂盒 Chicken INS (Insulin) ELISA KitXY-EL-Ch1530c 鸡甲状腺素(T4)ELISA试剂盒 Chicken T4 (Thyroxine) ELISA KitXY-EL-Ch1532c 鸡促红细胞生成素(EPO)ELISA试剂盒 Chicken EPO (Erythropoietin) ELISA Kit XY-EL-Ch1533c 鸡甘露糖受体C1(MRC1)ELISA试剂盒 Chicken MRC1 (Mannose Receptor C Type 1 ) ELISA KitXY-EL-Ch1535c 鸡胰岛素样生长因子2-mRNA结合蛋白3(IGF2BP3)ELISA试剂盒 Chicken IGF2BP3 (Insulin Like Growth Factor 2 mRNA Binding Protein 3) ELISA Kit XY-EL-Ch1536c 鸡T细胞活化连接蛋白(LAT)ELISA试剂盒 Chicken LAT (Linker For Activation of T-cell) ELISA KitXY-EL-Ch1538c 鸡激酶锚定蛋白1(AKAP1)ELISA试剂盒 Chicken AKAP1 (A Kinase Anchor Protein 1) ELISA Kit XY-EL-Ch1539c 鸡肿瘤特异生长因子/肿瘤相关因子(TSGF)ELISA试剂盒 Chicken TSGF (Tumor Specific Growth Facter/Tumor Supplied Group of Factor) ELISA KitXY-EL-Ch1540c 鸡胃动蛋白2(GKN2)ELISA试剂盒 Chicken GKN2 (Gastrokine 2) ELISA Kit XY-EL-Ch1542c 鸡丙酮酸脱氢酶E1(PDH E1)ELISA试剂盒 Chicken PDH E1 (Pyruvate Dehydrogenase E1) ELISA KitXY-EL-Ch1543c 鸡抗丙氨酰tRNA合成酶抗体(Anti-AlaRS/Anti-PL12)ELISA试剂盒 Chicken Anti-AlaRS (Anti-Alanyl-tRNA Synthetase/Anti-PL12-Antibody) ELISA KitXY-EL-Ch1544c 鸡脱氢表雄酮硫酸酯(DHEA-S)ELISA试剂盒 Chicken DHEA-S (Dehydroepiandrosterone Sulfate) ELISA Kit XY-EL-Ch1545c 鸡胚胎性硫糖蛋白抗原(FSA)ELISA试剂盒 Chicken FSA (Fetal Sulfoslycoprotein Antigen) ELISA KitXY-EL-Ch1546c 鸡酪氨酸羟化酶(TH)ELISA试剂盒 Chicken TH (Tyrosine Hydroxylase) ELISA KitXY-EL-Ch1547c 鸡α-胞衬蛋白(SPTAN1)ELISA试剂盒 Chicken SPTAN1 (Alpha-Fodrin) ELISA Kit 除细胞水平及动物实验之外，课题组还使用临床标本离体活组织培养模型进一步证实了上述新型溶瘤病毒的有效性和特异性。据介绍，更为重要的是，研究工作还证明了M1病毒作用的分子遗传学机制，这个发现为精准的临床用药和实施个体化疗法提供了可靠的科学依据，也极大地增加未来临床试验取得成功的机会。据专家介绍，新型天然溶瘤病毒M1将会安全而有效地治疗癌症，有望成为攻克人类癌症的新一代利器

近日，在北京召开的第七届中国电动汽车百人会论坛（2021）上，比亚迪股份有限公司董事长王传福表示，“按照规划，到2025年，我国新能源汽车新车销售量将达到汽车新车销售总量的20％左右。”这意味着接下来5年，新能源汽车行业年复合增长率将达37%以上。结合前期“特斯拉Model Y低价发售”、“宁德时代逼近万亿股价”、“蔚来包下宁德时代磷酸铁锂电池生产线！”等新闻发酵，不难发现随着磷酸铁锂电池以其低成本高安全性的优势在中低端市场不断渗透，特别是相关技术的进步也助推磷酸铁锂电池自2020年起重新扩展市场空间，其需求快速反转向上。中国汽车动力电池产业创新联盟日前发布的数据显示，2020年我国动力电池累计销量达65.9GWh，同比累计下降12.9%。其中，三元锂电池累计销售34.8GWh，同比累计下降34.4%；磷酸铁锂电池累计销售30.8GWh，同比累计增长49.2%，是唯一实现同比正增长产品。中信证券指出，目前，特斯拉、戴姆勒等海外新能源汽车主流企业均明确了磷酸铁锂电池技术路线，预计宝马、大众等其他海外车企也将在其动力电池技术路线中选择磷酸铁锂方案。而国内无论是宁德时代的CTP电池管理控制技术还是比亚迪的“刀片电池”，磷酸铁锂的高安全性助力了其在乘用车领域的回暖，都让磷酸铁锂电池开始经历第二春！伴随着宁德时代年产8万吨磷酸铁锂投资项目签署，磷酸铁锂第二春的帷幕已然拉开，大规模的量产也必将刺激高性能激光粒度仪的市场需求。众所周知，激光粒度分析仪在锂离子电池行业有着广泛的应用需求，主要应用于正极材料、三元前驱体材料、负极材料、导电剂、隔膜涂覆用氧化铝等材料的粒度测试。从大量的制浆经验以及行业交流反馈来看，诸如钴酸锂(LiCoO2)、锰酸锂(LiMn2O4)、镍酸锂(LiNiO2)、镍钴锰酸锂(LiNiCoMnO2)和磷酸铁锂(LiFePO4)等多种不同的正极材料，通常采用中值粒径D50、代表大颗粒的D90作为关键质控指标。不同材料不同工艺的产品对原材料的粒径要求也不尽相同，以分布在1-20μm范围内居多。负极材料以石墨为例，当其平均粒径为16-18μm，且粒度分布较为集中时，电池有较好的初放容量及首次效率。此外，随着电池隔膜的厚度要求不断提高，对其中添加阻燃材料的粒径要求也随之不断提高，常使用的隔膜氧化铝粒径从微米级逐渐发展到亚微米甚至是纳米级。随着电池性能提高对原材料的粒度要求不断提高，激光粒度仪发挥着不可替代的作用，同时对粒度测量仪器的重复性、重现性、分辨能力提出了更高的要求。锂离子电池正、负极材料标准中的粒度分布要求激光粒度仪的高分辨能力在电池材料的检验中，对测试样本中少量的大颗粒或小颗粒的准确识别有着重要的意义。比如说在电池材料活性物质中如果存在少量的大颗粒，可能会对涂布、滚压造成负面影响。如果在原材料检测时就发现，则可以避免后续不良品的产生。另一个典型的例子是粒径过小的石墨粉在粉碎过程中更易于使其晶型结构发生改变，小颗粒石墨粉中菱形晶数量相对较多，而菱方结构的石墨具有较小的储锂容量，使电池的充放电容量有所降低。另外颗粒直径太小，单位重量总表面积就会很大，需要的包覆材料越多，导致电极材料的堆积密度减小而体积能量密度下降。如果能准确的对各种原材料进行粒度测试，在一定程度上有助于预判后续产品性能、防范风险… … 可见，电池性能的诸多方面都与正负极材料和隔膜材料等的粒径息息相关。欧美克Topsizer激光粒度分析仪对少量的大/小颗粒及样品各个粒径组分的准确识别，需要仪器制造商在无盲区光学设计、高品质高精度元器件、装配工艺、算法及软件智能控制上不断优化，提高产品分辨能力。例如早先的激光粒度仪将多个光电转换元件探测通道放置在一块或两块平面上，然而傅立叶透镜的聚焦面通常呈弧形分布，平面布置的探测器很难将所有角度的散射光信号都精确地聚焦获取，通过精准的独立探测器焦点曲面排布设计和一致性定位工装提高粒度仪分辨能力和仪器之间的重现性。欧美克Topsizer激光粒度分析仪和Topsizer Plus激光粒分析仪是在锂离子电池行业被广泛应用的高性能激光粒度分析仪。量程宽、重现性好、分辨能力强、自动化程度高、故障率低等优异性能保证了测试结果和分析能力，而且与国内外、行业上下游黄金标准保持一致，不仅为用户节省了方法开发和方法转移上的时间和成本，更重要的是可以避免粒径检测不准带来的经济损失和风险，无论在产品研发、过程控制还是质量控制上，都能够为用户带来真正的价值。欧美克LS-609激光粒度分析仪而欧美克LS-609激光粒度分析仪就采用了先进的激光粒度仪散射光能探测的设计，将常见的失焦影响较大的多个大角探测器通道以分个独立的方式精确放置于与其散射角相对应的傅立叶透镜焦点位置，以保证所有散射光角度的信号都是无混杂的，提高了散射光分布角度分辨能力。与此同时，各个独立的探测器有利于在探测器上布置杂散光屏蔽装置，同时也防止了散射光在不同探测器上的相互干扰，进一步降低系统的噪声，提高细微差异的分辨能力。我们以具体的电池材料样品来看欧美克激光粒度分析仪的测试性能对材料准确表征的案例。1. 欧美克Topsizer激光粒度仪测试含有少量大颗粒的石墨原材料的粒度分布图和粒度分布表如下图所示，可以看到对于体积含量在0.5%以下的极少量60-100μm的颗粒，以及体积含量在1%左右的2μm以下颗粒，均能够灵敏的检测出来其详尽的粒度分布。显示了Topsizer对粉体材料的大、小颗粒具有高超的分辨能力，对于最终下游应用中电池产品的安全性能和容量性能有更准确的指导意义。如果对于对少量小颗粒特别关注，在软件上，甚至可以采用数量分布替代体积分布的计算方法，进一步放大小颗粒的权重，对小颗粒数量上的变化进行更易识别的测试和生产质控。但需要注意的是，对于分布较宽的样品，由于大小颗粒在尺寸上差异本身就很大，同样体积的大小颗粒的数量相差将会异常巨大，取样和分散测量上的少许波动会导致测试结果数量分布上较大的偏差。2. 下图是欧美克LS-609激光粒度仪对磷酸亚铁锂3次取样分散测试粒度分布的叠加图，及特征粒径的统计结果，显示该仪器对磷酸亚铁锂的测试拥有优良的重现性。由此可见高分辨能力和重现性的激光粒度分析仪在电池原材料粒度检测领域能带来更好的质控效益。正如中国科学院院士、中国电动汽车百人会副理事长欧阳明高所说，中国动力电池技术创新模式已经从政府主导向市场驱动转型，目前中国电池材料研究处于国际先进行列。而在中国动力电池的快速创新发展必然也离不开高分辨能力和重现性的激光粒度分析仪作为质控的好帮手。通过给动力电池行业提供更专业优化的粒度检测方案，欧美克激光粒度仪的行业销售也在持续高速增长。欧美克必将一如既往不断探索，与中国动力电池行业并行快速发展，携手创造中国奇迹，助力新能源引领世界美好未来！参考资料：1. 沈兴志，珠海欧美克仪器有限公司，《高性能激光粒度分析仪在电池材料测试中的应用》2. 经济日报，《第七届中国电动汽车百人会论坛举办》3. 腾讯网，《磷酸铁锂厂家齐涨价，2021年将回潮迎来“第二春”？》4. 中国证券报，《磷酸铁锂电池迎来发展“第二春” 2020年累计销售同比增长近

杂质的研究是药品研究的重要方面，它贯穿于整个药品研究的始终。药品中的杂质是否能得到合理、有效的控制，直接关系到药品的质量可控性与安全性。仪器信息网将于2024年7月30日举办第八届“化学药物杂质研究及质控技术”网络会议。特邀专家学者共同剖析有机杂质、无机杂质及残留溶剂的来龙去脉，深入探索杂质控制策略。从源头到成品，从理论研讨到实践技术，交流讨论药物质控的每一个环节。欢迎大家踊跃报名！报名链接：https://www.instrument.com.cn/webinar/meetings/impurity240730/会议亮点1. 多技术：高分辨质谱技术、液质联用技术、ICP-OES/ICP-MS技术2. 多内容：聚焦药物质量研究解析、药物杂质分析技术突破、新技术新方法的开发、先进仪器在药物杂质分析领域的应用潜力。3. 多角度：包括对有机杂质、无机杂质及残留溶剂等药物杂质。(点击图片，快捷报名)会议日程07月30日 第八届化学药物杂质研究及质控技术网络研讨会14：00-14：30山广志中国医学科学院医药生物技术研究所 副主任药物质量研究新技术与新思路14：30-15：00孟海涛岛津企业管理（中国）有限公司 高级应用工程师液质联用技术在药物杂质分析中的应用15：00-15：30徐新军中山大学药学院 副教授罗达那非原料药质量标准研究15：30-16：00曾 梦安捷伦科技（中国）有限公司 应用工程师ICP-OES/ICP-MS 在化学药物元素杂质分析中的应用研究16：00-16：30周熙广东省科学院测试分析研究所（中国广州分析测试中心） 博士高分辨质谱技术在药物杂质分析中的应用会议嘉宾中国医学科学院医药生物技术研究所 山广志 副主任《药物质量研究新技术与新思路》山广志，博士，副研究员，中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所分析测试中心副主任，北京协和医学院硕士生导师。主要从事药物开发、药物分析、药品质量以及检测技术研究工作。将NMR、LC-HRMS、GC-MS、ICP-MS、2D-HPLC、HPLC、GC、SFC、Biacore、iTC、μDSC等新技术和新方法综合应用于药物发现、开发和质量表征工作，具体研究领域涉及基于靶点的新药筛选、结构确证、杂质谱研究、蛋白相互作用研究等。完成企业科研合作50余项，协助多个品种完成质量研究获批上市。在国内外学术期刊发表研究论文60余篇。【摘要】报告详细介绍了药物质量研究的过程、药品质量控制理念的变迁及团队在药物质量研究方面开发的新技术，围绕基于靶点的药物发现和基于片段的药物设计等两个方面阐释了新技术新方法助力精准药物发现的案例。点击报名》》岛津企业管理（中国）有限公司 孟海涛，高级应用工程师《液质联用技术在药物杂质分析中的应用》孟海涛，高级应用工程师，具有十多年色质谱应用支持经验，长期负责医药行业相关仪器使用培训、应用方法开发、客户合作项目支持，在药物杂质谱分析、基因毒性杂质方法开发、新型热点事件跟进及方案应对等相关领域积累了丰富的应用经验。【摘要】药物杂质的种类及涉及的分析技术，常规杂质定性分析中的痛点及二维液相在杂质鉴定中的应用案例，基因毒性杂质的分析思路及案例分享。点击报名》》中山大学药学院 徐新军 副教授《罗达那非原料药质量标准研究》徐新军，药物分析学博士，中山大学药学院副教授，广东省现代中药工程技术研究开发中心副主任，中国合格评定国家认可委员会(CNAS)实验室认可评审员，广东省科技厅、广州市科信局、广州市生产力促进中心专家库专家，广东省食品药品监督管理局药品、保健食品审评专家。主要从事中药、化学药质量标准研究及中药健康产品开发方面科研工作，在药品检验、药品质量标准制订及体内药物分析方法建立方面具有多年工作经验，已与企业合作完成多项药品质量标准及药物生物等效性研究并通过国家药审中心审核，已建成药品质量评价技术平台及中药化学对照品制备平台并对外提供技术服务。已发表论文144篇，其中SCI论文81篇，获授权发明专利6项。【摘要】罗达那非是中山大学药学院团队研究发现的一种PDE5抑制剂，其可选择性的抑制PDE5，而对其他的亚型磷酸二酯酶没有或具有微弱的抑制作用，主要用于治疗男性勃起功能障碍。按照国家药监局新药申报的相关要求及指导原则，对其质量标准进行了全面研究，主要有残留溶剂分析、有关物质分析、杂质谱分析、杂质结构鉴定、含量分析等。点击报名》》安捷伦科技（中国）有限公司 曾 梦 应用工程师《ICP-OES/ICP-MS 在化学药物元素杂质分析中的应用研究》曾梦，原子光谱应用工程师，有多年原子光谱分析仪器使用经验，主要负责ICP-MS、ICP-OES在各行业的应用与方法开发，专注于制药、环境、半导体等领域的分析应用。【摘要】药品中的元素杂质不能给患者提供任何治疗益处，超规定限度的杂质水平甚至会引发一些不良反应，给患者带来危害。同时，元素杂质的存在会影响药物的稳定性，缩短药物有效期。因此，对药中的元素杂质水平和种类进行检测，并将其控制在限度范围内是至关重要的。本报告介绍了药物中杂质元素分析的特点/难点，以及安捷伦分析仪器ICP-OES/ICP-MS在化学药元素分析中的应用及优势。点击报名》》广东省科学院测试分析研究所（中国广州分析测试中心） 周熙 博士《高分辨质谱技术在药物杂质分析中的应用》周熙，博士研究生，从事中药物质基础及中药质量标准等方面的研究，在Food chemistry、 Journal of Chromatography B、Analytical Biochemistry、分析化学、分析测试学报等期刊发表论文10余篇。【摘要】高分辨质谱技术在药物杂质分析领域扮演着越来越重要的角色。因其在高分辨率、高质量精度和宽动态范围等优势，在药物杂质分析中显示出了巨大的应用潜力。点击报名》》第八届化学药物杂质研究及质控技术网络研讨会，更多精彩内容，我们直播当日见！点击链接，抢占席位！报名链接：https://www.instrument.com.cn/webinar/meetings/impurity240730/

大家好，本周为大家介绍一篇本课题组发表在ACS Chem. Biol.上的文章，Insights into Phosphorylation-Induced Protein Allostery and Conformational Dynamics of Glycogen Phosphorylase via Integrative Structural Mass Spectrometry and In Silico Modeling1。变构调节在自然界中广泛存在，可以用于调控细胞过程。糖原磷酸化酶（GP）是第一个被鉴定出的与变构调节相关的磷酸化蛋白。GP是一个分子量约196kD的同源二聚体蛋白，是糖代谢中重要的组分，也是2型糖尿病及癌症的靶点。AMP结合以及Ser14的磷酸化介导了GP的变构调节，使其构象从非活化的T-state GPb（未磷酸化状态）转变为活化的R-state GPa（磷酸化状态）。即使目前X-射线晶体学法解析出了GP的原子级蛋白结构，但受限于较大分子量，其结构动态性的检测较为困难，因此与GP变构调节相关的结构动态变化过程仍较为模糊。核磁共振（NMR）谱及分子动力学（MD）模拟等是探究蛋白质结构动态性的常用方法，但NMR分析存在分子量上限，且样品消耗量大，MD模拟的时间尺度和力场准确度有限。质谱（MS）法具有快速、灵敏的特点，是蛋白质结构、动态性以及构象变化分析中强有力的一款技术。氢氘交换质谱（HDX-MS）通过监测蛋白骨架酰胺氢原子与溶液中氘的交换来反映蛋白质构象动态性，因此适用于探究由配体、蛋白结合或共价修饰引起的蛋白质构象变化。同时，多个软件实现了由HDX-MS数据计算保护因子（PFs）和吉布斯自由能，从而提取残基水平的蛋白动态性信息。此外，在先前的工作中2, 3，我们整合了native MS和top-down方法（native top-down，nTD-MS技术），成功实现了多个蛋白复合物的一级序列到高阶结构等多方面信息的检测（包括测序、翻译后修饰、配体结合、结构稳定性、朝向等）。整合多种结构质谱法（整合结构质谱法）可以有效填补传统生物物理法中结构到动态性联系中的空缺，更好地表征变构调控现象。本文整合了HDX-MS、nTD-MS、PF分析、MD模拟以及变构信号分析检测了磷酸化介导的GP变构调控的结构和动态性基础，为GP的变构调控过程提供了见解。根据X-射线晶体学结构报道（图1a），T-state GPb转变为R-state GPa时，二聚体界面中N-末端尾部、α2、cap’（图1b）以及tower-tower helices区（图1c）发生了明显的结构重排，导致催化位点开放，从而底物磷酸吡哆醛（PLP）可以结合。尽管有晶体学报道，但与变构调控关联的构象动态性仍有待探寻。图1.（a）磷酸化介导T-state GPb（PDB：8GPB）向R-state GPa（PDB：1GPA）的构象转变；亚基相互作用界面：（b）C端区域和（c）tower-tower helices，GPb为蓝色，GPa为绿色。首先我们通过nTD-MS进行了检测。如图2a、b，谱图中观察到了GPb的单体和二聚体信号，其中二聚体为主要形式；GPa除了单体和二聚体外，谱图中还存在少量四聚体，但仍以二聚体为主要形式。当增加sampling cone（SC）电压时，GPb、GPa保留了其二聚体形式（图2c、d）。随后我们选择离子（29+）并在trap池中进行了碎裂（图2e、f、g、h），谱图低质荷比区GPa的碎片相对峰强度较GPb高，说明GP的二聚体互作界面较为稳定，且GPb亚基结构较GPa稳定。nTD-MS不仅能够探究GPb、GPa的结构差异，也能够为接下来的HDX-MS实验做好前期样品质量检查工作。图2.不同活化条件下GPb、GPa的nTD-MS谱图。（a、b）SC=40V；（c、d）SC=150V；（e、f）SC=150V、trap=100eV；（g，h）SC=150V、trap=200eV。左侧为GPb，右侧为GPa。随后我们进行了HDX-MS实验。图3a中展示了五个时间点的HDX heat map。图3b为通过PyHDX软件计算产生的PF值。其中N-端（1-22）以及tower helix前的loop区域（256-261）的氘代值较高、PF值较低，说明这些区域较为柔性或是结构较为无序。此外我们发现，tower-tower helices（262-276）区域的氘代值较低、PF值较高，表明helices的旋转可能是由前端可塑性铰链区触发的，而非helices本身的变形和重塑引起的，这些发现在晶体结构数据中均有吻合之处。除这两个区域外，GPa和GPb基本保持了稳定的整体结构。而从1μs原子级MD模拟计算得到的均方根波动（RMSF）和溶剂可及表面（SASA）中我们也发现（图3c），这两个区域数据与HDX-MS信息有所吻合，但MD模拟中部分区域未和HDX-MS相吻合的区域可能跟序列覆盖不足相关。图3. （a、d）GPb和GPa在不同标记时间下的氘代热图并映射到结构中（PDB: 1GPA）。（b、e）基于HDX-MS数据计算得到的PF值并映射到晶体结构中。（c、f）MD模拟中RMSF和SASA值并映射到结构中。从氘代差异图（图4a）中可以看出，4个区域呈氘代降低趋势（红色方框），多个区域呈氘代上升趋势（蓝色方框）（GPa-GPb）。而PF差的变化趋势与氘代变化趋势基本一致（图4b）。由数据可知，N-端和tower-tower helices的变化说明磷酸化介导的变构稳定了这两个区域，α1-cap-α2区域的动态性轻微下降。除此之外多个区域（尤其是tower-tower helices序列后的区域）均表现为PF值下降，说明相比于GPb，GPa催化位点附近的区域动态性增强了。接下来我们根据HDX kinetic plot特征将其进行了分类，并详细讨论了所属区域的变化。图4.（a）GPa-GPb HDX-MS的氘代差异图。（b）GPb到GPa PF的变化。 首先是N-端和C-端的变化（图5）。N-端残基1-22表现氘代下降，这说明N-端具有一定可塑性。受N-端区域磷酸化和结构变化影响，C-端区域也产生了一定的变化。此外，残基30-50（cap区）和残基111-117（α4back-loop）区表现氘代下降，而103-109（α4front）表现氘代上升。根据晶体结构推测，cap区和α4back-loop的氘代变化受N-末端变化影响，原有的残基相互作用被打破，形成新的残基间相互作用，同时这两个区域也经历了结构重排，因此表现出较明显的氘代变化。残基88-99（β2-α3）和残基125-141（β3-L-α6）氘代上升。总的来说，磷酸化使得cap′/α2界面互作增强了，同时磷酸化基团和精氨酸残基的静电相互作用是cap区产生变化的主要原因，而α1和α2起到锚定作用，其相对位置基本保持不变。图5.GPb（a）和GPa（b）的N-端和C-端区域的局部结构和HDX动力学曲线（c）。 此外，tower-tower helices（α7，残基262-278）区的变化同样值得关注（图6）。250s loop是表面暴露区域，未与其他区域发生接触，其氘代下降可能是因为自身结构的收缩。而肽段262-267和268-274氘代下降提示该区域可能发生了低周转率或强互作的结合反应。280s loop区氘代值上升。这些变化均说明，tower-tower helix的角度的改变不仅影响了二聚体界面结构，而且还影响了其靠近催化位点的周围区域。因此我们结合晶体结构推测，磷酸化和N-端相对位置的改变，使250s loop自身结构收缩，从而打破了Tyr262' -Pro281和Tyr262-Tyr280′之间的相互作用，导致两个亚基的tower helices发生相对滑动，倾斜角度增加。图6.GPb（a）和GPa（b）tower helix区域的局部结构和HDX动力学曲线（c）。 最后是催化位点、PLP结合位点和糖原存储位点的变化情况（图7）。催化位点周围多数区域均表现氘代上升趋势。我们推测，随着Pro281、Ile165和Asn133间的相互作用被打破，Arg569与Ile165、Pro281、Asn133间的互作也随之打破，因此催化位点和PLP结合位点周围的残基溶剂可及性上升，局部区域结构变得更为灵活，催化位点开放并转变为活化构象。糖原储存位点位于GP表面，距离催化位点30Å，除了α23（残基699−708）外，HDX-MS在糖原存储区没有观察到明显的变化。图7.GPb（a）和GPa（b）的催化位点和PLP（橙色）结合位点的局部结构和HDX动力学曲线（c）。结合以上所有数据，我们对磷酸化调节的动态机制进行了推测（流程图1）。磷酸化后，N-端尾部残基与acidic patch的互作被打破，也导致N-端尾部的有序化以及C-端尾部的无序化以及伴随的其他结构变化。通过在pSer14和Arg69和Arg43′之间形成新的盐桥，N-端残基被重定位，随之带来的是Asp838和His36′间的盐桥断裂。随着三级和四级结构的转变，250s loop收缩并发挥类似“门环”的作用，当其收缩时，Tyr262′-Pro281与Tyr262-Tyr280′之间的相互作用、276-279区与162-164区之间的氢键也被打破，导致tower helix发生相对滑动，tower-tower helices之间的作用被打破，同时将结构变化传递到催化位点。最后，280s loop和催化位点以及PLP结合位点附近的残基松动，通往催化位点和底物磷酸盐识别位点的通道打开，酶得以活化。流程图1.GP变构调节过程中，被打破（蓝色）或新形成的（红色）关键残基相互作用。 本文整合nTD-MS、HDX-MS、PF分析和MD模拟检测了GP磷酸化变构调节过程的结构和动态基础，通过该整合结构手段揭示了GP构象柔性、局部动态性以及长程变构调控构象变化中值得关注的信息。各个方法具有各自的优势，但也在一定层面存在局限，我们期待将HDX-MS信息与计算模拟信息进行更深度的整合以实现二者对蛋白质结构更精确的分析。撰稿：罗宇翔编辑：李惠琳原文：Insights into Phosphorylation-Induced Protein Allostery and Conformational Dynamics of Glycogen Phosphorylase via Integrative Structural Mass Spectrometry and In Silico Modeling李惠琳课题组网址：https://www.x-mol.com/groups/li_huilin参考文献1. Huang, J. Chu, X. Luo, Y. Wang, Y. Zhang, Y. Zhang, Y. Li, H., Insights into Phosphorylation-Induced Protein Allostery and Conformational Dynamics ofGlycogen Phosphorylase via Integrative Structural Mass Spectrometry and In Silico Modeling. ACS Chem. Biol. 2022.2. Li, H. Nguyen, H. H. Ogorzalek Loo, R. R. Campuzano, I. D. G. Loo, J. A., An integrated native mass spectrometry and top-down proteomics method that connects sequence to structure and function of macromolecular complexes. Nat. Chem. 2018, 10 (2), 139-148.3. Li, H. Wongkongkathep, P. Van Orden, S. L. Ogorzalek Loo, R. R. Loo, J. A., Revealing ligand binding sites and quantifying subunit variants of noncovalent protein complexes in a single native top-down FTICR MS experiment. J. Am. Soc. Mass Spectrom. 2014, 25 (12), 2060-8.

大家好，本周为大家介绍一篇发表在J. Am. Chem. Soc.上的文章，Transient Structural Dynamics of Glycogen Phosphorylase from Nonequilibrium Hydrogen/Deuterium-Exchange Mass Spectrometry，文章作者是英国埃克塞特大学的Jonathan J. Phillips。　　变构调节指在蛋白质的正构位点上的变化通过蛋白质内部传递，最终影响到变构位点的结构，从而调整白质功能。理解蛋白质功能转换背后的特定结构动态变化对于分子生物学和药物发现领域至关重要。尽管变构现象自从提出以来已有广泛的研究，但是关于信号如何在蛋白质内部长距离传递的具体机制仍然不甚清楚。很大程度上是由于缺乏能够在时间和空间上高分辨率测量这些信号的生物物理方法。糖原磷酸化酶(glycogen phosphorylase，GlyP)是研究变构调节常用的标准蛋白，GlyP与II型糖尿病和转移性癌症的治疗密切相关。GlyP作为一种典型的变构酶，其活性受磷酸化修饰、多种天然配体和药物的调控。本文旨在通过开发和应用非平衡毫秒级氢/氘交换质谱(neHDX-MS)技术，来精确定位GlyP在变构激活和抑制期间的动态结构变化。这项技术能够提供蛋白质在毫秒时间尺度上的局部结构动态信息，有助于揭示变构调节过程中的瞬态结构特征，从而为理解蛋白质的动态行为和设计变构调节剂提供重要的结构信息。　　作者首先确定了能够完全激活或抑制GlyP的条件。25 mM 的AMP能实现GlyPb的最大激活(图1A)。32 mM咖啡因足以完全抑制GlyPa(图1B)。并且观察到50ms内AMP和咖啡因能够达到最佳激活/抑制状态(图1C和1D)。　　图1.糖原磷酸化酶b的变构激活和糖原磷酸化酶a的抑制。　　随后作者通过neHDX-MS捕捉由AMP引起的GlyPb变构激活过程中的局部结构扰动。通过激活过渡态与未激活和激活状态之间的HDX差异，作者将这些肽段分成了七个类群。其中重点值得关注的类群是c、d(其他类群对应区域及趋势不在此详细介绍)，因为他们的HDX行为与未激活和激活时的稳定态都有明显差异，这些局部区域的结构变化是过渡态的独特体现(图2A)。其中，c类群主要涵盖了tower helix区(图2B)，说明该区域在从未激活到激活状态的过渡态中，表现出相较于前后二者皆较高的动态性。d类群涵盖活性位点，说明活性稳点结构在因结合发生了结构稳定化现象。为了从原子水平理解这些瞬态结构变化，研究人员使用了一种基于Energy Calculation and Dynamics(ENCAD)的方法，Climber，来模拟从非活性状态到活性状态转变过程中的过渡态内部作用变化。结果显示，tower helix在激活过程中经历了氢键先断裂后形成的变化，这与观察到的HDX增加相一致(图4A)。　　图2.GlyPB中表现不同结构动力学行为的类群。　　图3.局部区域HDX动力学。　　图4.GlyP在活性和非活性状态之间的结构插值。　　随后作者探讨了咖啡因如何通过变构抑制影响GlyPa的结构动态。同样作者也比较了抑制过渡态与未抑制和抑制状态之间的HDX差异，分成了七个类群。在这几组类群中，仅有m表现出较未抑制和抑制状态都较明显的氘代上升趋势(图2C、图3C&D)。m区域涵盖了tower helix区(图2D)，说明该区域在未抑制状态到完全抑制状态的过渡阶段内，发生了局部去结构化现象。此外，在280s loop和250′ loop区域也表现出类似的瞬时去稳定化现象。结合AMP激活实验中的现象表明，尽管咖啡因和AMP作用于GlyP的不同位点，但它们都可能通过类似的变构路径(即tower helix的去稳定化)来引起GlyP的变构调节，从而实现对该蛋白功能的调控。同样在Climber分析中，可以观察到对应区域发生了氢键重排，与neHDX-MS结果呼应(图4B)。　　本文讨论了GlyP的变构调节中间态涉及的局部结构动态变化，并通过毫秒级neHDX-MS揭示了这些变化。结果表明激活和抑制过渡态都涉及到tower helix的氢键断裂和局部结构重排，这是两个途径的共同特点。本研究的亮点在于开发了一种新的neHDX-MS方法，能够在毫秒时间尺度上观察蛋白质的变构结构动态。这种方法不仅对理解GlyP的变构机制具有重要意义，而且可以广泛应用于不同蛋白质的变构研究，为理解蛋白质的变构调节提供了新的视角和工具。　　撰稿：罗宇翔　　编辑：李惠琳　　文章引用：Transient Structural Dynamics of Glycogen Phosphorylase from Nonequilibrium Hydrogen/Deuterium-Exchange Mass Spectrometry　　参考文献　　Kish, M. Ivory, D. P. Phillips, J. J., Transient Structural Dynamics of Glycogen Phosphorylase from Nonequilibrium Hydrogen/Deuterium-Exchange Mass Spectrometry. J. Am. Chem. Soc. 2023, 146 (1), 298-307.

p 　　11月14至17日，中国化学会第十五届全国计算(机)化学学术会议在复旦大学举行。此次会议由中国化学会主办，中国化学会计算机化学专业委员会、复旦大学、复旦大学附属肿瘤医院承办 复旦大学遗传工程国家重点实验室、复旦大学人类表型组研究院协办。 /p p 　　会议以“计算化学与精准药物设计”为主题，分化学计量学与生物信息学、化学信息学与分子设计、化学理论计算与过程模拟和精准药物设计与精准医学四个分会场，全面展示近年来我国在计算(机)化学领域取得的最新进展及成果，深入探讨所面临的机遇、挑战及未来发展方向，致力于促进学术界与产业界的沟通联系，推进我国计算机化学的健康发展。 /p p style=" text-align: center" img style=" max-width:100% max-height:100% " src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201911/uepic/e836652a-0707-4e2c-8eb4-3cad83766147.jpg" title=" 1_副本.png" alt=" 1_副本.png" / /p p style=" text-align: center " span style=" font-family: 楷体, 楷体_GB2312, SimKai " 图：中国化学会计算(机)化学专业委员会主任委员、中国科学院院士、中科院上海药物所教授蒋华良 /span /p p span style=" font-family: 楷体, 楷体_GB2312, SimKai " /span /p p style=" text-align: center" img style=" max-width:100% max-height:100% " src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201911/uepic/9e016cab-5558-44f1-bd76-f42ba83009a6.jpg" title=" 2_副本.png" alt=" 2_副本.png" / /p p style=" text-align: center " span style=" font-family: 楷体, 楷体_GB2312, SimKai " 图：本次大会组织委员会副主任、复旦大学生命科学学院教授石乐明博士 /span /p p 　　大会报告精彩纷呈，开幕式由复旦大学石乐明教授主持，中国化学会计算(机)化学专业委员会主任委员、中国科学院院士、中科院上海药物所蒋华良教授做了题为“大数据和人工智能助推药物设计”的报告，深圳微芯生物科技股份有限公司鲁先平博士做了题为“结合计算机辅助药物设计与化学基因组学的新药研发”的报告。 /p p 　　据了解本次大会参会代表600多名，8个大会报告，4个分会场，137个口头报告，逾150篇墙报。大会期间，颁发了2019年度(第二届)中国化学会计算机化学专业委员会“计算机化学奖”，该奖设立三类子奖：“终身成就奖”、“杰出贡献奖”和“青年计算化学家奖”。本届终身成就奖空缺。获得本届“杰出贡献奖”的是湖南大学吴海龙教授。 /p p style=" text-align: center" img style=" max-width:100% max-height:100% " src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201911/uepic/c8c057af-72db-401a-bac7-5ec8c2f95bd9.jpg" title=" 3_副本.png" alt=" 3_副本.png" / /p p style=" text-align: center " span style=" font-family: 楷体, 楷体_GB2312, SimKai " 图：国际著名药物化学家、美国密歇根大学终身教授王少萌为湖南大学吴海龙教授颁发杰出贡献奖证书 /span /p p 　 strong 　杰出贡献奖获奖人员介绍： /strong /p p 　　吴海龙，湖南大学化学生物传感与计量学国家重点实验室教授，博士生导师。长期从事化学计量学方法和应用研究，发表研究论文逾300篇。荣获2002年湖南省科技进步奖一等奖、2003年国家自然科学奖二等奖，中国化学会分析化学基础研究“梁树权”奖等学术奖项。培养毕业博士生28名、毕业硕士生70多名。 /p p 　　获得本届青年计算化学家奖的分别是中山大学罗海彬教授和北京大学裴剑锋教授。 /p p style=" text-align: center" img style=" max-width:100% max-height:100% " src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201911/uepic/c54f9c08-deb6-4d01-9454-7acdbb746274.jpg" title=" 4_副本.png" alt=" 4_副本.png" / /p p style=" text-align: center " span style=" font-family: 楷体, 楷体_GB2312, SimKai " 图:从左到右依次是中山大学罗海彬教授、南开大学邵学广教授和北京大学裴剑锋教授 /span /p p 　 strong 　青年计算化学家奖获奖人员介绍： /strong /p p 　　裴剑锋，北京大学前沿交叉学科研究院研究员，博士生导师，长期从事化学信息学、生物信息学和药物设计研究，在 JACS、PNAS、NAR、Nature 等国际重要学术刊物上发表论文 60 多篇, 申请获得专利 6 项，软件著作权 8 项。主持新药创制国家科技重大专项等多个国家项目。获得过中国药学会施维雅青年药物化学奖、药明康德生命化学研究奖等奖项。 /p p 　　罗海彬，中山大学药学院副院长，教授、博士生导师，国家重点研发计划首席科学家，广东省“珠江学者”特聘教授，国家自然科学基金优秀青年基金获得者，中国药学会-施维雅青年药物化学奖获得者，SCI期刊Chem Biol Drug Des、药学学报(英文版)、药学研究编委。主要从事药物化学和结构生物学等方面的研究。多年来从事抗老年性痴呆、肺动脉高压、糖尿病、哮喘等药物靶标结构生物学和发现研究，重点构建基于靶标磷酸二酯酶(PDE)的药物筛选体系，并进行相关的药物分子设计、有机合成和作用机制研究。 /p p 　　据悉，中国化学会计算机化学“终身成就奖”奖励多年为计算机化学的发展做出重要贡献的科学家，为本领域的最高荣誉 奖励名额根据提名情况设定。 “杰出贡献奖”奖励为计算机化学发展做出杰出贡献，在某一领域中做出了完整、系统、具有创新性研究成果的科技人员 每届奖励1名。 “青年计算化学家奖”奖励在计算机化学研究领域中取得突出成绩，有创新性研究成果的青年科技工作者(45周岁以下)，每届奖励2名。 /p p style=" text-align: center" img style=" max-width:100% max-height:100% " src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201911/uepic/51a2959b-9554-43cd-89a8-efcdce7bfe4f.jpg" title=" 5_副本.jpg" alt=" 5_副本.jpg" / /p p style=" text-align: center " span style=" font-family: 楷体, 楷体_GB2312, SimKai " 图：2019中国化学会第十五届全国计算(机)化学学术会议参会代表合影 /span /p

点评 | 朱锦芳（NIH）2022年5月23日，上海交通大学基础医学院生化与分子细胞生物学系童雪梅教授课题组及其合作团队，上海市免疫学研究所李斌研究员课题组和复旦大学附属华山医院/脑科学转化研究院杨辉研究员，在Nature Metabolism杂志在线发表题为 Non-oxidative pentose phosphate pathway controls regulatory T cell function by integrating metabolism and epigenetics 的研究论文，揭示非氧化磷酸戊糖途径（非氧化PPP）对调节性T（Treg）细胞代谢模式及细胞功能的调控机制。Nature Metabolism同期发表伦敦帝国理工学院Margarita Dominguez-Villar博士为该研究撰写的News & Views特评，认为该文章发现非氧化PPP在Treg细胞活化和功能调控中的中心地位（a central regulator）。表达特征转录因子Foxp3的Treg细胞是一类具有免疫抑制功能的CD4+ T细胞亚群，维持机体免疫系统稳态，防止免疫过激诱发自身免疫病。已知葡萄糖酵解、脂肪酸氧化和氨基酸分解代谢等都参与 Treg 细胞功能调控。PPP是一条不产生ATP的葡萄糖分解代谢途径，由生成NADPH的氧化PPP和产生5-磷酸核糖的非氧化PPP组成。非氧化PPP包括4个代谢酶催化的5步可逆反应，可以通过改变代谢物流向来满足细胞的功能需求。非氧化PPP是否参与免疫细胞如Treg细胞的代谢与功能调控尚不清楚。转酮醇酶TKT是非氧化PPP中催化两步可逆反应的代谢酶。童雪梅团队已发现TKT在肝脏、脂肪和肠道中调控糖脂代谢平衡的重要作用（Li M et al, Cancer Research, 2019 Tian N et al, Diabetes, 2020 Tian N et al, Cell Death & Disease, 2021）。在本研究中，研究人员通过构建Treg细胞特异性敲除TKT的小鼠模型，深入探究非氧化PPP是否和如何调控Treg细胞代谢及功能。他们研究发现，Treg细胞特异性敲除TKT的小鼠出生3周后发生严重自身免疫性疾病，并且在断奶之后相继死亡，其表型与缺失Foxp3基因的小鼠相似。进一步研究发现，敲除TKT在不影响Treg数目和转录因子Foxp3 水平的情况下，阻断Treg细胞的免疫抑制功能。为了排除炎症反应的影响，研究者根据Foxp3基因位于X染色体和雌鼠X染色体选择性失活的特点，构建了在同一只鼠中既有TKT缺失又有TKT正常表达的Treg细胞嵌合小鼠模型。该小鼠Treg细胞的转录组和表观遗传组分析表明，TKT缺失导致Treg细胞中87.9%的差异表达基因被下调，染色质可及性降低。这些被下调的基因几乎全部为效应性Treg特征性基因，表明非氧化PPP对调控Treg细胞免疫抑制功能是必需的。研究者进一步发现，TKT缺失导致Treg 细胞NADPH 减少和氧化应激增加，葡萄糖进入线粒体氧化减少，脂肪酸氧化增加，氨基酸分解代谢显著增强，分解代谢重构使线粒体功能受损。同时，被氧化应激和线粒体损伤诱发的还原性TCA循环使α-酮戊二酸/琥珀酸及α-酮戊二酸/富马酸比率降低，DNA甲基化增加，抑制Treg细胞特征性功能基因表达，导致其免疫抑制性功能丧失。文章也发现非氧化PPP中的另外一个代谢酶——转醛醇酶（TAL），对维持效应性Treg特征性功能基因表达也不可或缺。此外，在自身免疫性病人外周血 Treg细胞中，TKT水平显著降低。综上所述，此研究首次揭示非氧化PPP对于调控Treg细胞中糖、脂和蛋白质分解代谢稳态、维持代谢物依赖的表观遗传修饰和功能基因表达有关键作用，即非氧化PPP可以通过整合三大营养物质代谢和表观遗传修饰控制Treg细胞功能。这项研究将为通过调控Treg功能防治自身免疫性疾病和其它免疫相关疾病提供新策略新手段。非氧化 PPP 通过整合代谢组和表观遗传组调控Treg细胞功能上海交通大学医学院博士生刘琪、阿拉巴马大学伯明翰分校博士生朱方明和上海市免疫学研究所博士生刘鑫男是该研究论文的共同第一作者。此项研究得到复旦大学生物医学研究院叶丹研究员、海军军医大学附属长征医院风湿免疫科徐沪济主任、上海交通大学附属仁济医院沈南主任、上海交通大学基础医学院徐天乐教授、清华大学药学院胡泽平研究员、阿拉巴马大学伯明翰分校胡晖教授等合作实验室的大力协助。通讯作者为童雪梅教授、李斌研究员和杨辉研究员。专家点评朱锦芳Jeff Zhu (Chief, Molecular and Cellular Immunoregulation Section, NIH)调节性T细胞（Tregs）在维持免疫耐受和免疫稳态中发挥关键作用，并且参与调节感染和癌症中的各种免疫反应。一方面，Treg功能的丧失通常与自身免疫和过度炎症有关；另一方面，肿瘤微环境中激活的Treg往往会抑制肿瘤免疫。因此，了解Treg的产生、激活及其获得抑制性功能的机制不仅将拓展基础免疫学认知，而且将为各种免疫相关疾病提供新颖有效的临床疗法。不同的代谢途径在控制Treg和效应性辅助型CD4+ T（Th）细胞的发育和分化中作用不同。经典观点认为，Tregs更倾向于脂肪酸氧化，而效应Th细胞主要利用葡萄糖作为能量来源。在本项工作中，童雪梅团队及其合作实验室共同发现，非氧化磷酸戊糖途径（非氧化PPP）在控制Treg细胞激活和抑制功能中起着关键作用。非氧化PPP是葡萄糖分解代谢的一个分支，它在Treg和效应性Th细胞中的功能尚不清楚。令人惊奇的是，在Treg中敲除非氧化性PPP中的重要酶—转酮醇酶（TKT），小鼠会产生致死性自身免疫病。Treg细胞特异性 TKT 缺失导致其失去免疫抑制功能，却不影响其发育和Foxp3蛋白表达。机制上，童雪梅及其合作团队发现TKT缺失诱导线粒体氧化应激和还原性TCA循环，导致α-酮戊二酸（α-KG）水平降低。α-KG作为重要的表观遗传辅助因子，能调控组蛋白和DNA去甲基化酶的功能。TKT缺失时，Treg中众多基因的DNA甲基化增加，染色质可及性下降。并且，α-KG补充能够改善由Treg特异性TKT 缺失引起的自身免疫反应。此外，在临床自身免疫性疾病患者外周血Treg中，TKT水平被下调。Treg获得抑制功能需要被激活，TKT缺失诱发的自身免疫反应是由活化Treg特征性基因表达减少所导致的。由于Treg细胞群体的异质性，单细胞分析可以为TKT如何调节Treg激活和表观修饰提供一个更清晰的解释。然而，该研究发现在大约1000个激活态Treg特征基因中，只有124个受到TKT缺失的影响，却诱发了显著的小鼠自身免疫病表型，表明这个小的基因群体包含对Treg功能至关重要的效应分子，例如IL-10和TIGIT等。因此，本项研究发现令人印象非常深刻。本项工作不仅促进我们全面认识Treg细胞激活和功能的机理，而且在未来治疗人类疾病方面具有潜在重要转化价值。原文和特评链接：https://www.nature.com/articles/s42255-022-00575-z，https://www.nature.com/articles/s42255-022-00574-0

AIMS2015 Program Preview· Chengdu China 　　2015年第三届中国原位电离质谱会议 (成都)日程 日期 时间 主要内容 4月23日 09:30-22:00 Registration, Booth and Poster Setup Ø Shangri-La Hotel, 1F, Jin Guan (Junior Ballroom) 报到、注册、布展 Ø 会议厅: 香格里拉大酒店1F 锦官城 Section I：Advances in AIMS and Related Fields (1) Ø Shangri-La Hotel, 1F, Jin Guan (Junior Ballroom) 第一节：原位电离前沿基础（1）：进展与展望 Ø 会议厅: 香格里拉大酒店1F 锦官城 4月24日 8:30-12:15 主持人 Brian Musselman 谢建台 08:30-08:45 Opening Remarks: Prof. Jinying Li, President, Chinese Society of Mass Spectrometry 开幕式及嘉宾致辞 李金英 教授，中国质谱学会理事长 08:45-09:10 Analysis of Thermal Labile Compounds by DART MS - Mechanism and Application DART-MS 分析热不稳定化合物时产生的气相离子反应 - 机理和应用 刘淑莹 教授, 吉林省人参科学研究院，中科院长春应化所 09:10-09:35 State-of-the-art proteomics using capillary zone electrophoresis 艺术级的毛细管电泳蛋白质组学 Norman Dovichi 教授，University of Notre Dame 09:35-10:00 （题目待定） Jentaie Shiea 教授，台湾国立中山大学化学系 10:00-10:20 Tea Break, Poster Review 茶 歇、墙报观览 Section II：Advances in AIMS and Related Fields (2) Ø Shangri-La Hotel, 1F, Jin Guan (Junior Ballroom) 第二节：原位电离前沿基础（2）：新技术、新方法 Ø 会议厅: 香格里拉大酒店1F 锦官城 10:20-10:45 High resolution and accurate mass (HRAM) characterization of multiply charged proteins and peptides produced by novel ionization techniques on a MALDI-LTQ-Orbitrap platform 应用MALDI-LTQ-Orbitrap质谱平台对新型离子化技术产生的多价态蛋白质和多肽进行高分辨率和高精确质量表征 李灵军 教授，威斯康星大学药学院 10:45-11:10 Miniature Mass Spectrometry Systems with Ambient Ionization Capabilities 装载原位电离源的小型化质谱系统 Ouyang Zheng 教授，Purdue University Dept Biomedical Engineering 11:10-11:35 Method Development for Determination of Phosphodiesterase Inhibitors in Herbal Supplments byDART-HRMS and DART-MSMS: Addressing AOAC call for methods SMPR 草药补剂中磷酸二酯酶抑制剂的DART高分辨或串接质谱方法&ndash 响应AOAC呼吁的SMPR方法 Brian Musselman博士，IonSense公司 4月24日 主持人 Norman Dovichi 11:35-12:05 Penal Discussion &ndash Fundamental Speakers and Guests Ø Shangri-La Hotel, 1F, Jin Guan (Junior Ballroom) What are the most promising fields of applications of AIMS？有哪些应用领域是原位电离最能发挥其特点的/尚未开发，有待挖掘的领域？（如临床治疗药物监测、生物活体原位研究、疾病分子诊断） Any overthrow or reform opportunity that AIMS can bring into the current testing industry? 原位电离技术会给分析测试领域带来哪种程度的颠覆? How AIMS avoids matrix interferences? Can AIMS perform both Qual. & Quant. Analysis? 原位电离技术如何有效规避基质效应，实现快速定量分析？ Are the mechanisms of ESI and AIMS the same or different? How much differences? 原位电离技术和电喷雾技术原理的区别，业界是否对其机理有一个明晰的共识？ Will AIMS become another round of golden standard for industrial testing, just like LCMS? What will be the bottleneck in limiting its wide spreading usage, if any? 就目前的趋势来看，什么最有可能制约原位电离的发展？ Challenges for ambient ionization techniques？原位电离质谱技术的挑战？ 4月24日 12:05-13:30 Silver Sponsored Lunch (Shangri-La Hotel, 1F) 银牌赞助午宴（香格里拉大酒店1F） Section III：Novel Applications of AIMS (1) Ø Shangri-La Hotel, 1F, Jin Guan (Junior Ballroom) 第三节：原位电离新应用（1）：脂质组、单细胞、组织成像 Ø 会议厅: 香格里拉大酒店1F 锦官城 4月24日 14:00-17:50 主持人 李灵军 Xianlin Han 13:30-13:55 Shotgun Lipidomics and its Application in Neuroscience Research 鸟枪法脂质组学及其在神经科学研究中的应用 Xianlin Han 教授，伯纳姆医学研究所 13:55-14:20 Ambient Ionization Mass Spectrometry in Single Cell Analysis and Tissue Imaging 单细胞分析及组织成像的原位电离质谱技术 Akos Vertes 教授，George Washington University 14:20-14:45 Ambient lipid analysis from cells and animal tissues 细胞及活体组织的原位电离脂质分析 Yu Xia 教授，Purdue University 14:45-15:10 Profiling and Relative Quantitation of Phospholipid species by Chip-based nanoESI-MS workflows Based on Isotopic Labeling 基于芯片-纳升-电喷雾串联质谱技术和稳定同位素标记的磷脂定性和定量分析 杨福全 教授，中国科学院生物物理研究所 15:10-15:30 Tea Break, Poster Review 茶 歇、墙报观览 Section IV：Novel Applications of AIMS (2) Ø Shangri-La Hotel, 1F, Jin Guan (Junior Ballroom) 第四节：原位电离新应用（2）：小分子、能源、生物基质 Ø 会议厅: 香格里拉大酒店1F 锦官城 15:30-15:50 The Development and Application of Solvent-assisted Electrospray Ionization 溶剂辅助电喷雾离子化方法的开发及应用 郭寅龙 教授，中科院上海有机化学研究所 15:50-16:10 Improved methods for the analysis of biological substrates by LESA MS 改良的LESA液滴萃取表面分析质谱法用于研究生物培养液 Rian Griffiths 博士，University of Birmingham 16:10-16:30 （题目待定） 肖国平 副教授，中国原子能科学研究院 16:30-16:50 Ionization Behavior of Cyclic Polyhydroxy Compounds in Direct Analysis in Real Time Mass Spectrometry 环状聚羟基化合物的DART质谱离子化行为 武国华 教授, 江苏科技大学蚕业研究所 16:50-17:10 MALDI and DIP mass spectrometry new development and applications 布鲁克MALDI技术和直接进样探针（DIP）技术的最新进展和应用 潘晨松 博士 布鲁克质谱应用经理 17:10-17:30 Characterization of molecules in coals and coal derivatives 煤及煤衍生物的分子表征 樊星 副教授，中国矿业大学化工学院 4月24日 18:00-20:30 AIMS Sponsored Dinner and CSMS Awarding Night (TBA) 金牌赞助晚宴、质谱学会颁奖晚会（地点待定） Section V：Advances in AIMS and Related Fields (3) Ø Shangri-La Hotel, 1F, Jin Guan (Junior Ballroom) 第五节：原位电离前沿基础（3）：进展与展望（续） Ø 会议厅: 香格里拉大酒店1F 锦官城 4月25日上午 8:45-12:10 主持人 杨芃原 Akos Vertes 08:45-09:10 Study and Application of Atmosphere Pressure Chemical Ionization by Accurate Mass Mass Spectrometry 高质量精度大气压化学电离的机理研究和应用 杨芃原 教授，复旦大学生物医学院 09:10-09:35 Pushing the Limit of MS Sensitivity via Advanced Ion Source and Interface Technologies 采用先进的离子源及接口技术设计推高质谱灵敏度 Keqi Tang 博士，Pacific Northwest National Laboratory (PNNL) 09:35-10:00 Electrospray Ionization on Wooden Tips and Beyond 木签及别种材质的电喷雾离子化 姚钟平 教授，香港理工大学应用生物与化学科技系 10:00-10:20 Tea Break, Poster Review 茶 歇、墙报观览 Section VI：Advances in AIMS and Related Fields (4) Ø Shangri-La Hotel, 1F, Jin Guan (Junior Ballroom) 第六节：原位电离前沿基础（4）：新技术、新方法（续） Ø 会议厅: 香格里拉大酒店1F 锦官城 10:20-10:45 Open-air Ambient Ionization Mass Spectrometry and Its Applications 常压敞开式质谱新技术及其应用 白玉 教授, 北京大学化学系 10:45-11:10 Solid Surface Ambient Ionization Mass Spectrometry 固体表面原位分析的质谱方法 杭纬 教授，厦门大学 11:10-11:35 DESI and Beyond 解吸附电喷雾及衍生技术进展 Justin Wiseman 博士，Prosolia Inc. 4月25日 主持人 Ouyang Zheng 11:35-12:05 Penal Discussion &ndash Industrial Speakers and Guests Ø Shangri-La Hotel, 1F, Jin Guan (Junior Ballroom) Review and comment on the recent M&A events happened in the past dozens of months on AIMS related or MS in general? 请就最近仪器工业界发生的几起和原位电离质谱技术相关的并购事件，做一个回顾和评论 When the integrated Ambient Ionization Mass Spectrometer available on the markets? How is the market size of the AIMS? 专用原位电离质谱仪整机何时面世？市场是否有这样整机的需求？需求有多大？ Would Ambient Ionization technologies be state-of-the-art in qualitative and quantitative analysis and how? 原位电离技术是否能成为高水准的定量定性分析手段？如何成为？ How long to take for the AIMS technique becomes industrial standard acquired methods, and how? 原位电离技术何时及如何能够建立行业内标准方法？ 4月25日 12:10-13:30 Lunch Break ( Shangri-La Hotel, 1F) 午餐（香格里拉大酒店1F） Section VII：AIMS Customization for Industrial Applications (1) Ø Shangri-La Hotel, 1F, Jin Guan (Junior Ballroom) 第七节：原位电离应用与方法定制（1）：农业、能源、食品、药品 Ø 会议厅: 香格里拉大酒店1F 锦官城 4月25日13:30-17:50 主持人 杨松成 尹慧勇 14:00-14:25 Functional and quantitative phosphoproteomics in study of plant hormone signaling 通过功能与定量磷酸化蛋白质组学的方法研究植物荷尔蒙诱导的细胞信号转导 李凝 教授，香港科技大学 14:25-14:50 HRMS Characterization of Small Molecule Organic Complex 小分子复杂有机体系的高分辨质谱分析 史权 教授，中国石油大学 14:50-15:15 Food and drug testing by DART-MS DART在食品、药品检验中的应用 车宝泉 博士，北京市药品检验所 15:15-15:40 Screening of adulterants in health care products by DART-MS 保健品中非法添加物的快速筛查 杜刚 博士，四川药检所 15:40-16:00 Introduction of New MS Detector from Hitachi for HPLC Users &mdash Chromaster5610 MS Detector 日立为HPLC用户推出的新型质谱检测器 &mdash Chromaster5610 质谱检测器 日立高新 16:00-16:20 Tea Break, Poster Review 茶 歇、墙报观览 Section VIII：AIMS Customization for Industrial Applications (2) Ø Shangri-La Hotel, 1F, Jin Guan (Junior Ballroom) 第八节：原位电离应用与方法定制（2）：健康、物证、反应检测 Ø 会议厅: 香格里拉大酒店1F 锦官城 16:20-16:45 Omics Meet Systems Biology: Discovery of A Critical Transition Stage from Nonalcoholic Hepatosteatosis to Steatohepatitis by Lipidomics and Dynamical Network Biomarker 尹慧勇 博士，中科院上海生命科学院营养所 16:45-17:10 It´ s Alive &ndash The Need for Sample Preservation Standardization in Mass Spectrometry. 切后余生 - 生物及组织样品保存的标准化 Mats Boren 博士， Denator AB 17:10-17:35 DART-MS Monitoring of a Complicated Chemical Reaction DART-MS在卤键研究中的一个应用实例 练鸿振 教授，南京大学现代分析中心 4月25日 17:35- 19:00 Gold Sponsored Reception, Performance, Finale Ø Shangri-La Hotel, 1F,Musical Lounge 金牌赞助酒会、演出、闭幕式 Ø 会议厅: 香格里拉大酒店1F 音乐酒廊）

连接子 - 抗体与药物结合的关键因素抗体-药物偶联物（Antibody-drug conjugate, ADC）结合了抗体的高特异性和小分子药物的强细胞毒性。这种组合结合了抗体的独特和非常敏感的目标能力，可以区分健康组织和癌组织。它还具有细胞毒性药物的细胞杀伤能力，可能最大限度地减少剂量限制性毒性，同时最大限度地提高所需的治疗效果。ADC的主要优点是可以在体循环中作为药物使用，最终在靶肿瘤细胞中释放游离药物。在这一过程中，连接子在释放有效药物靶向肿瘤细胞，决定ADC的药代动力学特性、治疗指标和选择性，甚至整体成功方面发挥着关键作用。目前使用的连接子可分为可切割连接子和不可切割连接子两大类，它们之间的区别在于它们在细胞内是否会被降解。一、用于连接的可切割连接ADC连接子的主要类别是可切割连接子。可切割连接子被设计为对细胞外和细胞内环境差异（pH、氧化还原电位等）表现出化学不稳定性，或者可以被特定的溶酶体酶切割。在大多数情况下，这种连接子被设计成在键断裂后释放有效载荷分子。这种无迹可循的药物释放机制使研究人员能够根据已知的游离有效载荷的药理学参数估计共轭有效载荷的细胞毒性。2.1 可切割接头的类型可裂解接头腙是一种酸不稳定基团，当ADC被转运到核内体（pH 5.0-6.0）和溶酶体（pH约4.8）时，它被用作可切割的连接子，通过水解释放游离药物。组织蛋白酶B响应连接子组织蛋白酶B是一种溶酶体蛋白酶，在多种癌细胞中过表达，参与人类许多致癌过程。组织蛋白酶B的底物范围相对较广，但它优先识别某些序列，如苯丙氨酸-赖氨酸（Phe-Lys）和缬氨酸-瓜氨酸（Val-Cit）。这种序列的c端切割肽键。Val-Cit和Val-Ala连接物偶联p -氨基苄氧羰基（Val-Cit- pabc和Val-Ala- pabc）是adc最成功的可切割连接物。PABC片段使自由有效载荷分子以无迹方式释放。双硫键连接子谷胱甘肽敏感连接子是另一种常见的裂解连接子，其策略依赖于细胞质中较高浓度的还原分子（如谷胱甘肽）（1-10 mmol/L）。二硫键嵌入在连接子中，在循环中抵抗还原性裂解。然而，内化后，大量细胞内谷胱甘肽减少二硫键，释放自由有效载荷分子。为了进一步提高循环中的稳定性，通常在二硫键旁边安装一个甲基。焦磷酸二酯连接子该阴离子连接子具有比传统连接子更高的水溶性和优良的循环稳定性。此外，在内化后，焦磷酸二酯通过内核体-溶酶体途径快速裂解，释放未修饰的有效载荷分子。图1. 可切割连接子。（Kyoji Tsuchikama & Zhiqiang An. 2018）二、不可切割的连接子不可切割连接子由稳定的键组成，抵抗蛋白质水解降解，确保比可切割连接子更高的稳定性。不可切割连接子依赖于细胞质和溶酶体蛋白酶对ADC抗体成分的完全降解，并最终释放与降解抗体衍生的氨基酸残基连接的有效载荷分子。与可切割连接子相比，不可切割连接子的最大优点是其等离子体稳定性增强，与可切割连接子相比，这可能提供更大的治疗窗口。此外，与可切割的偶联物相比，它有望降低脱靶毒性，因为不可切割的adc可以提供更大的稳定性和耐受性。图2. 不可切割的连接子。不可切割连接的化学稳定性可以承受蛋白质水解降解。单抗的细胞质/溶酶体降解可以释放与降解的单抗衍生氨基酸残基相连的有效载荷分子。（Kyoji Tsuchikama & Zhiqiang An. 2018）三、总结结论保证游离药物在肿瘤细胞内的特异性释放是选择Linker的最终目的。该连接子对ADC的稳定性、毒性、PK特性和药效学等具有重要意义。每个环节都有其优点和缺点。在选择连接子时，必须考虑许多因素，包括单克隆抗体和细胞毒性药物中的现有基团、反应性基团和衍生功能基团。最后，需要通过个案分析确定如何优化选择合适的连接物、靶点和毒性分子，平衡ADC药物的有效性和毒性。表1. 连接子类型及优缺点比较参考文献1. Kyoji Tsuchikama & Zhiqiang An. Antibody-drug conjugates: recent advances in conjugation and linker chemistries. Protein & Cell. 2018 9:33-46.2. Jun Lu. Feng Jiang. Aiping Lu. and Ge Zhang. Linkers Having a Crucial Role in Antibody–Drug Conjugates. Int J Mol Sci. 2016 Apr 17（4）:561.3. Monteiro Ide P, Madureira P, de Vasconscelos A, Pozza DH, de Mello RA. Targeting HER family in HER2-positive metastatic breast cancer: potential biomarkers and novel targeted therapies. Pharmacogenomics. 2015 16（3）:257-71.阿拉丁提供相关产品，详情请见阿拉丁官网：Linkers - A Crucial Factor in Antibody–Drug Conjugates (aladdin-e.com)

近日，The Lancet Rheumatology发表一项研究预测到2050年全球骨关节炎的患病率情况，研究显示，截止到2020年，全球骨关节炎患者增加到5.95亿，约占全球人口的7.6%，增幅高达132%。由此可见，开发针对骨相关疾病的精准无创诊疗技术迫在眉睫，因为它不仅可以连续监测骨代谢、生长、转移、给药和指导手术，而且可以实现骨疾病的高效治疗。然而，设计精准无创的骨疾病诊疗探针是极具挑战的工作。应 用 报 道今年9月，青岛科技大学袁勋教授团队在《Aggregate WILEY》报道了一种新型的金团簇基骨靶向诊疗探针[1]，实现了高时空分辨的体内骨靶向近红外二区（NIR-II）荧光成像和增强的类风湿性关节炎治疗。图1. Au44MBA26-P团簇的体内特异性骨靶向和高分辨率成像该探针的设计关键在于将原子级精确的NIR-II发射Au44团簇的表面进行磷酸化。一方面，Au44团簇的表面磷酸化大大增强了探针的骨靶向能力，使骨主要成分羟基磷灰石对磷酸化前后的Au44团簇探针的理论max吸附量提高了1.36倍，使该团簇探针实现了高对比度和高分辨率的体内骨靶向NIR-II荧光成像（信噪比提升1.4倍，见图1）。图2. Au44MBA26-P团簇对胶原免疫诱导大鼠类风湿性关节炎(CIA)模型的治疗作用另一方面，该团簇探针作为一种新型纳米药物，具有直接的生物效应，可显著抑制脂多糖诱导的小鼠巨噬细胞促炎因子的产生。在II型胶原诱导的大鼠类风湿性关节炎治疗中，该团簇探针表现出优异的抗炎和免疫调节作用，可将破坏的软骨恢复到接近正常状态，比临床治疗药物甲氨蝶呤效果更为显著（图2），且具有良好的肾脏清除率和优良的生物相容性。本研究提出了一种金属纳米团簇基诊疗探针的设计范例，为高分辨率骨靶向荧光成像和类风湿性关节炎治疗提供了新思路。图3.睿光NirVivo-Pro 近红外二区小动物活体荧光成像系统助力科研研究[1]: Phosphorylation of NIR-II emitting Au nanoclusters for targeted bone imaging and improved rheumatoid arthritis therapyhttps://linkinghub.elsevier.com/retrieve/pii/S0142961223001382产 品 推 荐近红外二区小动物活体荧光成像系统NirVivo-Pro 活体荧光成像系统是北京睿光科技自主研发的一款专门用于近红外二区的光学成像系统。该系统可实现高质量荧光图像的采集及图像处理，实时地观察基因在活体动物体内的表达、肿瘤的发生、生长、转移及药物的治疗效果，对同一个动物进行时间、环境、发展和治疗影响跟踪，可用于生命科学、医学研究及药物开发等应用领域。产品特点

蛋白质磷酸化是在激酶催化下将磷酸基团转移到底物蛋白质上的可逆过程，是能够调控蛋白质结构与功能且参与细胞内信号转导的重要翻译后修饰，在植物的生长、发育、环境适应以及作物的产量和品质调控中发挥着重要作用。深度解析磷酸化蛋白质组，是探讨磷酸化如何参与这些生物学过程以及筛选与作物重要农艺性状相关的关键磷酸化靶点的有效手段。然而，与动物相比，植物磷酸化蛋白质组的深度解析在技术上更具挑战性。这是由于植物细胞具有致密的细胞壁和大量的色素以及其他次生代谢物。前者增加了蛋白质提取的难度，而后者干扰了磷酸肽富集的效率和特异性。 中国科学院遗传与发育生物学研究所汪迎春研究组通过探索一系列的实验条件，研发出高效的植物磷酸化蛋白质组学新技术。该技术的主要特点是利用脱氧胆酸钠高效抽提植物蛋白，同时消除常规方法中导致样品损失和灵敏度降低的两个步骤，即在蛋白酶消化前的样品净化和在磷酸肽富集前的脱盐处理，在色素与其他干扰分子共存的情况下进行高特异性、高灵敏度地磷酸肽富集。 科研人员应用这一方法，在拟南芥、水稻、番茄和衣藻等绿色生物的组织中高效纯化磷酸化蛋白质组（单针质谱可鉴定约11,000个磷酸位点）。由于该技术主要面向高等植物及其他绿色生物（如衣藻），且操作简便，降低了实验所需的人力和试剂费用，因此命名为GreenPhos。GreenPhos可定量分析不同植物的磷酸化蛋白组，分析深度深、定量重复性高，有望成为植物磷酸化蛋白组学的通用技术。研究人员应用该技术，深度解析了拟南芥响应不同时长盐胁迫的差异磷酸化蛋白质组，发现了包括剪接体蛋白和一些激酶响应盐胁迫的磷酸化事件。 11月27日，相关研究成果在线发表在《分子植物》（Molecular Plant，DOI：10.1016/j.molp.2023.11.010）上。研究工作得到国家重点研发计划与中国科学院战略性先导科技专项的支持。中国科学院植物研究所的科研人员参与研究。GreenPhos工作流程及多种绿色生物磷酸化蛋白质组鉴定结果

PCR实验时，我们有时候会遇到目的基因得率低，或者根本扩不出来的情况，不管是PCR的实验王zhe，还是初级实验小白，都需要逐个排查问题，那么我们需要考虑哪些因素呢？今天这一篇干货，帮您彻底解决问题。首先考虑的问题，是不是DNA模板的问题呢？ 如果模板质量太差？那么检查DNA模板的纯度和完整度，保证你的模板中不含有PCR抑制剂。在分离DNA时，尽量减少对DNA的切断或切刻。如有需要，可通过凝胶电泳检测模板DNA完整性。将DNA保存于分子级别的水或TE缓冲液 （pH 8.0）中，防止被核酸酶降解。 如果是模板浓度太低？建议使用DNA纯化试剂盒分离模板DNA时，应严格遵循试剂盒生产商的建议。查阅用户手册和疑难问题指南，改善较低的DNA质量。如果采用化学或酶促DNA纯化方案，应确保无PCR抑制剂残留，如苯酚、EDTA和蛋白酶K。使用70%乙醇再纯化或沉淀和洗涤DNA，去除可能会抑制DNA聚合酶的残留盐分或离子（如， K+, Na+等）。选择具有高合成能力的DNA聚合酶，这类聚合酶对土壤、血液和植物组织携带的常见PCR抑制剂具有较好的耐受性。 如果是DNA模板量不足？建议检查 DNA起始量 ，如有需要适当增加起始量。 选择具有高灵敏度 的DNA聚合酶用于扩增。适当增加PCR循环数。 如果需要扩增的目的片段比较复杂（如，高GC含量或含二级结构）？、建议选择具有相应的扩增试剂盒，比如适合高GC含量片段的PCR试剂盒。或者选择具有高合成能力的DNA聚合酶，这类酶对DNA模板的亲和力较高，geng适合扩增困难靶标。 使用 PCR添加剂或辅助溶剂 ，促进富含GC的DNA和具有二级结构的序列变性。增加 变性时间或温度 ，从而高效解离双链DNA模板。 如果目的片段太长？建议直接使用长片段设计的PCR试剂盒，或者确认所选DNA聚合酶的长片段扩增能力。使用专为 长片段PCR设计的DNA聚合酶。选择具有高合成能力的DNA聚合酶，这类酶能够在短时间内扩增长片段。降低退火和延伸温度，促进引物结合和提高酶热稳定性。根据扩增子长度，增加延伸时间。或者是引物的问题？ 考虑引物浓度是不是不是最you的？建议预实验优化引物浓度（范围通常为0.1–1 μM）。对于长片段PCR和使用简并引物的PCR，最小起始浓度为 0.5μM。 引物设计有问题？可以使用多种引物设计软件比如Primer Premier等，或者使用在线 引物设计工具 。确保引物针对目的片段具有特异性。 确认引物与正确的目标DNA链互补。也许是其他试剂的问题？ MgCl2 浓度太低？镁离子（Mg2+）作为DNA聚合酶活性的辅助因子，有助于聚合期间dNTP的结合。酶活性位点处的镁离子可催化引物的3′-OH与dNTP的磷酸基团间形成磷酸二酯键。此外， Mg2+ 能够稳定磷酸盐骨架上的负电荷，从而促进引物与DNA模板形成复合物。在PCR中，标准的 Mg2+ 终浓度范围为1–4 mM，建议优化滴定增量为0.5 mM。 Mg2+ 浓度过低会降低聚合酶活性，导致PCR产物较少或无PCR产物。另一方面， Mg2+ 浓度过高则会提高引物-模板复合物的稳定性，产生非特异性PCR产物，并增加由dNTP错误插入导致的复制错误。还有可能是PCR循环设置不理想呢？ 变性效果不理想？建议优化DN变性时间和温度。变性时间短、温度低可能无法获得良好的双链DNA模板解离效果。相反，变性时间长、温度高可能会降低酶活性。 退火效果不理想？尽量使用 梯度热循环仪 ，以1–2°C增量逐步优化退火温度。最jia退火温度通常比最低引物Tm低 3–5°C。当使用 PCR 添加剂或辅助溶剂 时，应调整退火温度。使用指定DNA聚合酶在其最jia缓冲液中的 推荐退火温度 。DNA聚合酶不同，则引物对的退火温度也不同。 延伸效果不理想？选择适合于扩增子长度的延伸时间。在扩增长片段（如，10 kb）时，降低延伸温度（如，降至68°C）可保持酶活性。使用具有 高合成能力 的DNA聚合酶，在较短的延伸时间内也能实现 稳定的扩增 。 PCR循环数不合适？调整循环数（通常为23-35个循环），以获得合适的PCR产物得率。如果DNA起始量低于10拷贝，则将循环数增加至40。

PCR简介聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR)是利用一段DNA为模板，在DNA聚合酶和核苷酸底物共同参与下，将该段DNA扩增至足够数量，以便进行结构和功能分析的一种反应。PCR扩增原理核酸降解是DNA/RNA分子中的碱基和戊糖间的氮糖苷键，或磷酸二酯键在物理因素、化学因素和生物因素等作用下发生水解，使DNA/RNA链发生断裂。▲ 图一：PCR原理反应示意图▲ 图二：PCR反应过程中温度变化图实时荧光定量PCR原理通过荧光染料或荧光标记的特异性探针，对PCR产物进行标记跟踪，实时监控反应过程，结合相应软件可以对结果进行分析，通过标准曲线对未知模板进行定量分析，计算待测样本的初始模板浓度。▶ 初始DNA浓度越高，荧光达到某一值（阈值）时所需要的循环数越少（Cq值）。▶ Log浓度与循环数成线性关系，根据样品扩增到阈值的循环数与已知起始拷贝数的标准品作出的标准曲线对比就可以计算出该样品的起始拷贝数。影响PCR扩增的因素▶ 模板间的交叉污染。▶ PCR试剂的污染。▶ PCR产物的污染。防止污染的预防操作❶ 永远要设置NTC（No Template Control）对照，一个不含有模板DNA但含有PCR体系中所有其他成分的对照。如果不能在污染的第一时间发现，会导致后续一系列的数据无法使用。❷ 准备PCR体系的移液器要专用，千万不能用吸取过PCR产物的移液器去准备PCR体系。❸ 打开离心管前先离心，开管动作要轻，以防管内液体溅出。❹ 最好在加完其他反应成分再加入模板。❺ 实验结束后及时清理台面。出现污染后的解决办法❶ 更换试剂：更换新的试剂和水，用确保无污染的移液器分装备用。❷ 清洁所有可能的污染源：实验台面，离心机，门把手等。❸ 实验过程更加小心，采用前面提到的各种防止污染的方法。CieloTM实时荧光定量PCR系统Harness of the power of qPCR☑ 数据可靠性：连续1000次实验后，结果高度一致。☑ 应用灵活性：提供多种qPCR应用分析。☑ 流程智能化：中英文用户界面，触控操作，可多机联用。☑ 在线便捷性：主机可独立运行qPCR程序，数据可USB、Wi-Fi等网络传输。

相信看过美剧《CSI》（犯罪现场调查）的朋友们一定对剧中诸如指纹数据库、从带血棉签中五分钟内验出DNA等等炫酷的证据检测桥段并不陌生，虽然是源于想象的虚构，但却自然而逼真。其实，纵观司法科学鉴定技术的发展长河，《CSI》里面的许多高科技手法在现实中已被广泛应用，特别是DNA技术的应用无疑是个历史性的突破。从犯罪现场到实验室的王牌证据长期以来，作为给犯罪嫌疑人定罪的“毋庸置疑的铁证”，DNA鉴定一直被认为是目前法庭科学领域中最有效的统一认定技术，虽然说对于少数特殊情况存在一定的例外和局限性，但总的来说，DNA证据仍是当今人类世界可靠性最高的证据。尤其是在血腥的犯罪现场留有血迹、精斑、毛发等人体生物检材的命案中，DNA证据一直是对付罪犯的利器，被社会各界寄予厚望。众所周知，得到足量且纯净的DNA样本是进行准确鉴定的前提，因此DNA提取纯化技术是法医DNA检验的第一个步骤，也是最关键的步骤。通常，从犯罪现场提取到的各种生物检材难免会腐败、变质和被污染，这就对DNA提取纯化技术有了更高的要求。目前在法医实验室中，常用的提取方法无外乎五种，即Chelex100法、有机法（苯酚-氯仿提取）、磁珠法、盐析法、碱性法（NaOH提取）。不管哪种方法，提取过程大体上分为材料准备、破碎细胞或包膜以释放内容物、核酸分离纯化、沉淀或吸附核酸并去除杂质、将核酸溶解在适量缓冲液或水中。而作为整个过程当中至关重要的环节，离心分离的好坏直接决定着实验的成败。不容忽视的离心内部环境——温度控制说到DNA提取等生物样品分离实验，除了在司法鉴定中扮演着举足轻重的角色以外，在基因工程和蛋白质工程等分子生物学领域也应用极广，而样品分离实验自然离不开离心机的性能技术指标与正确使用，比如转速设定、离心时间、摆放位置等，而其中最关键也是容易被忽视的一点就是样品的温度控制。下面我们拿DNA提取实验举例，采用传统且应用最广泛的有机法在不同温度条件下提取血液DNA。在细胞的细胞核中，DNA与蛋白质结合形成染色体，因此提取DNA时既要将蛋白质等物质除尽，又要尽可能保持DNA分子的完整性，即保持DNA带不发生断裂，无外源核酸污染。实验在4℃和常温条件下分别进行。4℃条件下采用高速冷冻离心机，而常温条件采用小型台式高速离心机，实验结果显示，4℃条件提取的DNA条带整齐无拖带，而常温提取的DNA有明显的拖带现象，表明前者的DNA片段完整无断裂，未被污染，且分子大小相同，而后者的DNA有部分已断裂。在本实验采用的有机法中，由于酚类容易被氧化，产生醌、二羧酸等氧化物，可破坏核酸中的磷酸二酯键，并引起DNA链的交联，常温条件下由于离心机转子高速旋转产生大量热，加速了酚的氧化，并增加了血液中细胞释放的内源核酸酶的活性，导致部分基因组DNA降解。而在4℃条件下提取的DNA由于温度低，酚不易被氧化，内源核酸酶活性较低，因此能够保证DNA的完整性。【1】看过了上面的实验，您是不是对温度控制的重要性有了直观的认识呢？其实，对于诸如生物制药或营养物质萃取等对生物活性保留要求很苛刻的技术项目，离心萃取的温度都需要严格符合要求，与标准相差几摄氏度可能就会严重影响品质，常见的情况就是超过温度区间范围会对活性酶的指标有影响或者温度过低导致凝结，因此选用带精确温控的离心机则是重中之重。需要严格温控的实验基本上都要求样品保持在较低的温度，因此在使用带冷冻功能的离心机之前需要进行预冷，并进行温度校准和监测温度波动。现在问题来了，市面上离心机的温度传感器通常都在机腔内，而中间会隔着不同大小规格的离心管，不同型号的转子以及腔内空气等介质，所以即使准备工作做得很周全，在离心机高速运转的时候，传感器所探测到的腔体温度与样品的实际温度难免会有差值，这个差值又因为转子选择，温度、转速设置的不同而发生进一步的变化。如前所述，这个差值在那些要求极为苛刻的实验项目中是绝不允许的。奥豪斯离心机陪你玩转温度控制看了这么多，有人一定要问，有没有什么好的办法能自动解决这个温度差值呢？重点马上登场。配有强劲的冷冻系统和样品温度补偿功能的奥豪斯FC5515R高速冷冻离心机应运而生，全面瓦解让您头疼的温度控制难题！早在产品研发阶段，奥豪斯就对在不同条件下腔体温度与样品实际温度间的温差数据进行了完善的测定，建立了补偿模型，并将这个补偿模型内置在离心机的控制软件系统，传感器测得的腔体温度经过补偿，出现在显示屏上的温度数值即为离心样品的实际温度，保证离心过程在设定的样品温度进行。这样一来，通过系统内设的样品温度补偿，完美地解决了离心机设置显示的温度与离心过程中样品的实际温度不一致的问题。此外，FC5515R强劲的冷冻系统保证了即便在全速运转的情况下，也能将温度保持在所需温度。怎么样，看完了上面的精彩片段您还会为离心过程中的温度控制难题发愁吗？事实上，奥豪斯所有带冷冻功能的离心机型号都具有以上所述的特点。如果您想了解更多相关案例以及奥豪斯离心机家族的产品信息，或正在寻求更专业细致的选型指导，请及时联系我们，我们的工程师们将会在第一时间为您提供专业的解答和建议！【1】参考文献：李强子，张丽. 温度对提取DNA质量的影响[J]. 中国生物制品学杂志，2016年4月，29(4)

FJA-2型微机控制自动滴定系统测定食品添加剂磷酸氢二钠 方建安 张振兴 （南京传滴仪器设备有限公司、徐州天嘉食用化工有限公司） 徐州天嘉食用化工有限公司携带样品与有关分析试剂前来我公司，利用FJA-2 型微机控制自动滴定系统对磷酸氢二钠含量的测定，对多个样品的测试结果表明，电位滴定法测定磷酸氢二钠含量，具有较高的灵敏度与好的测定精度，滴定图谱清晰。现将测试结果报告如下，供能考。 （一）磷酸氢二钠测定方法与结果 用天平称取样品溶液零点几克，精确到0.001g（视样品含量不同而不同）于100ml烧杯中，加c1mol/L盐酸10ml，加50 ml蒸馏水，待样品溶解后，以PH复合电极为指示电极，用NaOH［C(NaOH)＝0.9795mol/L］为滴定剂，在FJA-2微机控制自动滴定系统上进行自动滴定，叁个样品测量结果如下表。滴定曲线如图所示。 测量次数 样品号 样重（克） 滴定剂体积 终点1 (ml) 滴定剂体积 终点2(ml) 磷酸氢二钠含量 （%） NaN2 0.516 6.265 9.894 97.82 NaN2 0.526 6.047 9.750 97.92 NaN2 0.652 5.405 9.987 97.75 计算 磷酸氢二钠%=[C (V2-V1) 0.1420 100]/m 式中： C&mdash &mdash NaOH滴定剂的摩尔浓度； V&mdash &mdash 滴定剂NaOH的耗用量（ml）； m&mdash &mdash 试样重量； 0.1420&mdash &mdash 为磷酸氢二钠的毫摩尔质量。 （二）讨论 1、上述是连续3次测定结果，可以看出，几次测定结果的最大值减最小值的绝对差值都在于0.2% 以内。最后一个图谱为体积对pH滴定曲线。 2、为了保证测定的精度要注意下面几个重要环节： （1）、正确配置NaOH溶液也是控制滴定的精度的一个重要因素。要点是要用饱和NaOH溶液来配制滴定剂，不要固体称重来配制；要用新的去离子水（电导值小于5µ S）来配制滴定剂；滴定剂瓶上要装吸收二氧化碳的过滤器等。 （2）、pH复合电极要靠滴定池边，磁力搅拌要平稳，不要太剧烈，以防样液的损失。 参考文献 【1】 斯维拉。G著，高立译。自动电位滴定。北京。原子能出版社。1985 【2】 方建安，夏 权编著。电化学分析仪器。南京，东南大学出版社，1992 【3】 方建安，影响电位滴定精度的几个问题，分析仪器，（4），1993 【4】 方建安，方 晖等，一种微机控制的自动光度滴定系统，分析化学，（10）24，1233，1996

2023年3月2日，广东省科学技术厅公示了283个省级科技计划项目终止名单，其中处理意见包括78个项目终止；65个项目终止，追缴部分财政资金；53个项目终止，追缴财政资金；63个项目终止，追缴财政资金，对项目承担单位、项目负责人记录严重科研失信等。各有关单位：根据项目管理相关规定并经专家评估等程序，我厅拟对“基于动态流量辨识的管网结构分析与应用项目”等项目予以终止，现进行公示，具体项目情况见附件，公示时间为2023 年3月2日～2023年3月10日。任何单位或个人如对拟终止项目有异议，可于公示期或公示结束之日起5个工作日内向我厅提出书面复核申请，复核申请应明确复核的内容及理由。属单位提出申请复核的，应加盖单位公章，注明联系人和联系方式；属个人提出申请复核的，应签署真实姓名，注明联系方式。凡未按上述要求提出申请的，将不予受理。联系人：季大琴电 话：020-83163926地 址：广州市越秀区连新路171号科技信息大楼邮 编：510033附 件：拟终止项目信息表省科技厅2023年3月1日拟终止项目信息表序号项目名称承担单位项目负责人处理意见1面向临床和筛查的智能胶囊胃镜影像辅助诊断系统开发和应用广东安翰科技有限公司吉朋松终止2函数空间理论合作研究汕头大学娄增建终止3家族企业二代涉入与跨代创业研究汕头大学宋丽红终止4土壤-生物炭-水-植物-大气相互作用的机理研究汕头大学AnkitGarg终止5智能材料与结构健康监测汕头大学姜涛终止6城市黑臭水体水质净化与生态修复关键技术研究及示范深圳市尚善循环治污有限公司成家杨终止7广东省科技服务业研究院资源集聚能力与服务竞争优势建设广东省科技服务业研究院邱心贤终止8TRPM7 通道调控内皮间充质转化对糖尿病心肌病微血管病变和心肌间质纤维化的作用研究广州医科大学陈文亮终止9治疗慢阻肺中药新药活肺通片III 期临床研究河源市金源绿色生命有限公司陈楚镇终止10中药 5 类新药艾心酮片的临床研究深圳市海王生物工程股份有限公司谭道鹏终止11miR-338-3p：寻常型天疱疮的生物诊断标记和潜在基因治疗靶点的探索性研究南方医科大学南方医院曾抗终止12廉江市长山镇茶叶专业镇产业转型升级示范建设廉江市长山镇人民政府黄喜终止13首个降尿酸中药新药的Ⅱ期临床研究中山市恒生药业有限公司成金乐终止14全自动高速 RFID 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类（原二类）新药“糖视明滴丸”的临床试验及产业化研究中山大学朱邦豪终止62城市路桥收费综合信息平台的构建及应用研究广州市市政设施收费处戴慧群终止63锂电池负极材料用纳米二氧化钛/石墨烯复合材料东莞市翔丰华电池材料有限公司戴涛终止64韶关知识产权服务能力建设韶关市科学技术开发中心何朝驹终止65基于车联网应用的手机互联智能系统佛山市北斗智兴科技有限公司李劲终止66全自动杯装食品生产线东莞市渝科机电设备制造有限公司张得洪终止67一体式人体红外感应调光太阳能路灯江门市新会区光敏太阳能科技有限公司林敏伟终止68灯灯网电子商务服务平台广东灯灯网科技有限公司缪键终止69高精度高寿命厚板冲压模具珠海格莱利模具有限公司刘金亮终止70遥控玩具射频芯片产业化研发揭阳电商港科技有限公司陈桂旋终止71无位置传感器控制永磁同步电机的研发与应用佛山市顺德区苇源电机有限公司何良远终止72一体化多功能车载影音导航系统中山精程电子科技有限公司欧阳军和终止73低成本高输出率太阳能电池组件河源市中晶太阳能技术有限公司蔡越峰终止74果业精准种植与营销管理平行系统研发广东省佛山市南海千里山水果经营部刘德力终止75热风循环催化漆包机节能控制关键技术与换代设备的研制佛山市大长金电工设备有限公司林兆欣终止76食品工业含糖废水转化为生物油脂的资源化关键技术研究佛山市威力清环保科技有限公司冯国球终止77中山高平工业区电镀、印染废水集中治理示范工程中山市三角镇环保科技创新中心谭元茂终止7812K 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芯片和全裸晶封装光电一体组件研发及产业化中山昂欣科技有限责任公司桑钧晟终止，追缴部分财政资金113电信大数据分析及应用示范中国电信集团有限公司广东分公司向勇终止，追缴部分财政资金114柔性显示用聚酰亚胺共聚物的合成与制膜银禧工程塑料（东莞）有限公司傅轶终止，追缴部分财政资金115食品专业镇创新能力培育与创新环境建设吴川市海滨街道办事处彭维明终止，追缴部分财政资金116莞韶对口合作振兴发展机械装备专业镇项目东莞(韶关)产业转移工业园武江片区管理委员会曹吾林终止，追缴部分财政资金117潮州三饶镇与中山东凤镇对接帮扶建设饶平县胜佳陶瓷工艺厂陈炳良终止，追缴部分财政资金118始兴县科学技术局自身能力建设项目始兴县科学技术局冯明聪终止，追缴部分财政资金119圭岗柑橘专业镇产业升级示范建设阳春市沣民农业发展有限公司陈海终止，追缴部分财政资金120梅州客家旅游专业镇升级示范公共服务平台建设五华县转水镇人民政府严季岳终止，追缴部分财政资金121经食管超声心动图代替肺动脉导管监测 CABG 术中整体心室功能在南疆地区的应用研究广东省心血管病研究所张建军终止，追缴部分财政资金122喀什地区维吾尔族群众脑血管病防治知识、危险因素及健康教育干预的研究广州市第十二人民医院戴建武终止，追缴部分财政资金123电子束近距离放疗系统研发与产业化深圳铭杰医疗科技有限公司WeiGai终止，追缴部分财政资金124近海底精细光学探测深海自主水下机器人研制及应用示范南方海洋科学与工程广东省实验室（湛江）严俊、胡庆玉终止，追缴部分财政资金125冠心病治疗药物反应性个体差异的跨组学研究及潜在靶标功能与干预研究广东省人民医院钟诗龙终止，追缴部分财政资金126基于高通量测序技术的巴戟天基因资源库的建立及新型质量检测产品的研发深圳市第二人民医院王西亮终止，追缴部分财政资金127异长春花碱对朗格汉斯组织细胞增生症的抑瘤研究中山大学孙逸仙纪念医院郭海霞终止，追缴部分财政资金128白藜芦醇抗高尿酸血症肾损伤的作用及其机制广东省人民医院王端终止，追缴部分财政资金129便携式多功能针刀镜的研发及产业化研究广州军区广州总医院韦嵩终止，追缴部分财政资金130兼具认知能力损伤和抑郁症治疗作用的 1.1 类化学新药磷酸二酯酶 4 亚型抑制剂氯比普兰的临床前研究南方医科大学徐江平终止，追缴部分财政资金131基于引射和多效加湿除湿新方法的太阳能海水淡化装置研究广东海洋大学候少波终止，追缴部分财政资金132两种新型颈椎前路内植物系统的研制及生物力学研究深圳市第二人民医院顾洪生终止，追缴部分财政资金133甘氨酸受体调控改善颅脑照射后认知障碍的实验研究中山大学孙逸仙纪念医院邱幸生终止，追缴部分财政资金134儿科学教学网站的建设南方医科大学第三附属医院张振洪终止，追缴部分财政资金135惠州仲恺高新区创新型电子产业集群建设惠州仲恺高新技术产业开发区管理委员会扈伟终止，追缴部分财政资金136儿童健康管理手机应用平台的开发南方医科大学第三附属医院张振洪终止，追缴部分财政资金137高效稳定的钙钛矿核壳结构量子点发光二极管的材料与器件研究深圳第三代半导体研究院唐孝生终止，追缴部分财政资金138抗病毒多肽的表面化以及生物医学应用开发中新国际联合研究院贾永光终止，追缴部分财政资金139中国铁路桥梁智能检查、监测和维养系统广州瀚阳工程咨询有限公司孙峻岭终止，追缴部分财政资金140特种油料植物印加果的良种选育和高效栽培技术研究与示范国家林业和草原局桉树研究开发中心陈鸿鹏终止，追缴部分财政资金141Fidgetin-like 2 siRNA 纳米颗粒促进视神经挤压伤后视网膜神经节细胞轴突再生及存活中山大学中山眼科中心周世有终止，追缴部分财政资金142基于9G 膜技术平台的HPV 检测试剂盒及配套仪器广州鸿琪光学仪器科技有限公司王朝阳终止，追缴部分财政资金143智慧大数据处理与应用粤港联合科技创新平台中山大学张军终止，追缴部分财政资金144制造业自主品牌升级过程中的供应链冲突及政策协调中山大学牛保庄终止，追缴财政资金145介入导丝产业化关键技术研究广东爱迪医疗科技有限公司许燕婷终止，追缴财政资金146肾脏移植中 HLA 氨基酸错配对DSA 产生的影响南方医科大学于立新终止，追缴财政资金147白云区特色农产品电子商务交易平台建设及应用广州市白云区供销合作联社郭义端终止，追缴财政资金148塑料激光焊接装备开发及其产业化东莞市创普光电技术有限公司梁昆终止，追缴财政资金149强迫症注意转换功能的脑机制研究广州市惠爱医院阳琼终止，追缴财政资金150用友全程移动电子商务服务平台广东用友软件有限公司蔡伟终止，追缴财政资金151基于物联网技术的制造企业全数字化物流管控协同平台深圳市一信通软件有限公司马杰终止，追缴财政资金152佛山高新区“新三板”试点园区建设佛山高新技术产业开发区管理委员会徐平终止，追缴财政资金153密集型超高频 RFID 读写器和硬件中间件控制平台及相关软件的研发深圳市一信通软件有限公司孙铭终止，追缴财政资金154宽幅高磁感取向硅钢关键技术研发及产业化广东盈泉高新材料有限公司彭志

据教育部科技发展中心消息，2012年度高等学校博士学科点专项科研基金课题评审工作结束，获批项目于12月18日公布，其中博导类项目有1497个，新教师类项目有1773个，优先发展领域项目有196个。批准项目公布如下： 　　附件： 　　2012年博士点基金资助课题名单-博导类 　　2012年博士点基金资助课题名单-新教师类 　　2012年博士点基金资助课题名单-优先发展领域 2012年度高等学校博士学科点专项科研基金资助课题名单（优先发展领域） 序号 课题编号 课题名称 申请学校 申请人 所属领域 课题类型 资助额度（万元） 1 20120032130004 小型化GDI汽油机的预燃现象生成机理研究 天津大学 舒歌群 节能环保 优先发展领域 40 2 20120091130005 基于球形纳米复合材料的生化尾水深度除磷新技术及原理研究 南京大学 潘丙才 节能环保 优先发展领域 40 3 20120094130003 水能高效开发利用的重大水工程服役健康的关键技术 河海大学 顾冲时 节能环保 优先发展领域 40 4 20120095130001 低品质煤振动流态化干法分选的基础理论研究 中国矿业大学 赵跃民 节能环保 优先发展领域 40 5 20120097130003 秸秆热裂解生物质炭资源和能源利用的技术途径及潜力分析评价 南京农业大学 潘根兴 节能环保 优先发展领域 40 6 20120101130001 共溶剂存在下离子液体-分子溶剂液液两相体系的界面结构与性质 浙江大学 任其龙 节能环保 优先发展领域 40 7 20120143130002 基于通航环境动态响应的船舶动力系统能效提升方法研究 武汉理工大学 严新平 节能环保 优先发展领域 40 8 20120201130007 制冷剂在水平管束外降膜传热的研究 西安交通大学 陶文铨 节能环保 优先发展领域 40 9 20122102130001 一种基于纳米两相材料磁状态可控的新型电力变压器 沈阳工业大学 白保东 节能环保 优先发展领域 40 10 20123218130002 基于脉振高频电流注入的永磁同步电机低速无位置传感器技术 南京航空航天大学 周波 节能环保 优先发展领域 40 11 20123219130003 基于石墨烯的多功能异质结 南京理工大学 汪信 节能环保 优先发展领域 40 12 20124116130001 煤矿回风流低浓度瓦斯多级提纯基础研究 河南理工大学 李化敏 节能环保 优先发展领域 40 13 20126118130002 非均匀入流条件下离心泵内部流动机理及压力脉动特性研究 西安理工大学 罗兴锜 节能环保 优先发展领域 40 14 20126125130001 基于聚集态结构的纤维素定向酸水解机理及技术研究 陕西科技大学 张美云 节能环保 优先发展领域 40 15 20120002130003 面向QoE的计算通信理论基础 清华大学 陆建华 新一代信息技术 优先发展领域 40 16 20120002130007 面向智能交通的元胞自动机交通流模型及其复杂动态行为的研究 清华大学 覃征 新一代信息技术 优先发展领域 40 17 20120005130001 基于网络编码的光组播路由机制与数据高效传送方法 北京邮电大学 纪越峰 新一代信息技术 优先发展领域 40 18 20120005130002 物联网环境中视频动态传输与海量数据处理方法 北京邮电大学 马华东 新一代信息技术 优先发展领域 40 19 20120009130002 高速铁路环境下新一代移动通信系统架构和关键技术研究 北京交通大学 谈振辉 新一代信息技术 优先发展领域 40 20 20120032130010 基于全网波长同步的新型大容量接入网关键技术研究 天津大学 于晋龙 新一代信息技术 优先发展领域 40 21 20120042130003 基于信任推荐和招标模型的社交云资源管理机制研究及原型实现 东北大学 王兴伟 新一代信息技术 优先发展领域 40 22 20120061130008 聚合物超宽波段电光路由/开关阵列及可扩拓扑机制研究 吉林大学 王一丁 新一代信息技术 优先发展领域 40 23 20120073130003 基片集成波导高速电互连技术 上海交通大学 毛军发 新一代信息技术 优先发展领域 40 24 20120076130003 可信信息物理融合系统的基础理论研究 华东师范大学 何积丰 新一代信息技术 优先发展领域 40 25 20120093130001 纤维集束体的可重构检测模型及实时响应研究 江南大学 高卫东 新一代信息技术 优先发展领域 4026 20120101130006 基于表面波远场宽场超分辨光学显微方法的研究 浙江大学 刘旭 新一代信息技术 优先发展领域 40 27 20120142130004 基于受激布里渊散射的微波信号全光处理技术研究 华中科技大学 孙军强 新一代信息技术 优先发展领域 40 28 20120142130008 基于分子计算的非传统信息处理技术 华中科技大学 潘林强 新一代信息技术 优先发展领域 40 29 20120162130008 基于协同的机会网络传输技术研究 中南大学 陈志刚 新一代信息技术 优先发展领域 40 30 20120181130007 交互式人体肝脏数字虚拟模型研究 四川大学 章毅 新一代信息技术 优先发展领域 40 31 20120184130002 序列奇周期相关特性与非周期相关特性及其应用研究 西南交通大学 唐小虎 新一代信息技术 优先发展领域 40 32 20120185130001 基于时间反演电磁学的超分辨率目标成像研究 电子科技大学 王秉中 新一代信息技术 优先发展领域 40 33 20121101130001 复杂电磁环境下多域自适应抗干扰通信技术 北京理工大学 陶然 新一代信息技术 优先发展领域 40 34 20121102130001 基于面部信息分离的表情分析与理解研究 北京航空航天大学 毛峡 新一代信息技术 优先发展领域 40 35 20121102130004 共享虚拟环境中的三维变形表示与传输 北京航空航天大学 吴威 新一代信息技术 优先发展领域 40 36 20122304130002 面向未来网络的自律网络模型及适变机理研究 哈尔滨工程大学 王慧强 新一代信息技术 优先发展领域 40 37 20123120130001 高分辨率光场成像理论及其在3-D信息获取与显示中的应用研究 上海理工大学 庄松林 新一代信息技术 优先发展领域 40 38 20124307130004 面向大规模异构可重构系统的对等操作系统关键技术研究 国防科学技术大学 张春元 新一代信息技术 优先发展领域 40 39 20124420130001 面向强随机业务流的家庭物联网服务质量控制机理研究 广东工业大学 章云 新一代信息技术 优先发展领域 40 40 20120002130004 翻译后修饰蛋白的化学合成新方法 清华大学 刘磊 生物 优先发展领域 40 41 20120002130005 植物Rubisco小亚基在植物病毒侵染中的作用 清华大学 刘玉乐 生物 优先发展领域 40 42 20120003130003 入侵植物刺耳龙葵种群扩散规律的研究 北京师范大学 娄安如 生物 优先发展领域 40 43 20120008130006 植物源农药辣根素防治棉花黄萎病研究 中国农业大学 李健强 生物优先发展领域 40 44 20120043130001 人参果胶调节免疫活性的构效关系及其机制研究 东北师范大学 周义发 生物 优先发展领域 40 45 20120043130002 果蝠对热带亚热带经济作物的生态作用及种群生态学研究 东北师范大学 冯江 生物 优先发展领域 40 46 20120061130001 羊传染性脓疱病毒感染宿主细胞的差异表达基因鉴定与功能分析 吉林大学 高丰 生物 优先发展领域 40 47 20120073130011 OsMADS34在控制水稻花序发育中作用机制研究 上海交通大学 张大兵 生物 优先发展领域 40 48 20120093130002 脂肪氧合酶高效生产菌种构建和发酵优化 江南大学 堵国成 生物 优先发展领域 40 49 20120096130002 山楝属植物新颖结构变形三萜的发现和抗肿瘤活性研究 中国药科大学 孔令义 生物 优先发展领域 40 50 20120097130002 高产甘油酿酒酵母工程菌构建及其防控奶牛能量代谢病机制 南京农业大学 黄克和 生物 优先发展领域 40 51 20120097130004 重金属胁迫下植物过氧化氢积累与金属结合蛋白表达间的关系 南京农业大学 沈振国 生物 优先发展领域 40 52 20120097130006 水稻水通道蛋白PIP1与水稻黄单胞菌Hpa1蛋白互作及信号转导机制 南京农业大学 董汉松 生物 优先发展领域40 53 20120101130004 蝶蛹金小蜂毒液源寄主免疫抑制因子的筛选及其利用 浙江大学 叶恭银 生物 优先发展领域 40 54 20120101130009 基于适配体的转基因蛋白检测用微流控阻抗生物传感方法研究 浙江大学 应义斌 生物 优先发展领域 40 55 20120101130011 基于DNA杂交编码技术构建嗅觉受体和细胞阵列的仿生嗅觉传感机理研究 浙江大学 王平 生物 优先发展领域 40 56 20120101130014 携带流行毒株E2基因重组猪瘟病毒标记弱毒疫苗构建及其免疫原性研究 浙江大学 方维焕 生物 优先发展领域 40 57 20120121130001 一株新分离的特殊、高效溶藻微生物的作用机理与生态过程研究 厦门大学 郑天凌 生物 优先发展领域 40 58 20120131130008 结构脑网络组的生前发育 山东大学 刘树伟 生物 优先发展领域 40 59 20120131130010 骨髓间充质干细胞在新型工程支架材料上血管化的分子机制研究 山东大学 苗俊英 生物 优先发展领域 40 60 20120132130001 海州湾及邻近海域小黄鱼早期补充机制的研究 中国海洋大学 万荣 生物 优先发展领域 40 61 20120132130002 栉孔扇贝生长抗逆性状的精细遗传解析 中国海洋大学 包振民 生物 优先发展领域 4062 20120141130008 基于冠状病毒复制酶功能的药物靶标鉴定与抑制剂筛选 武汉大学 郭德银 生物 优先发展领域 40 63 20120142130009 紫杉醇母核有效羟化途径的合成生物学研究 华中科技大学 余龙江 生物 优先发展领域 40 64 20120146130003 GnIH基因疫苗构建及其与INH基因疫苗联合应用的效果与作用机制研究 华中农业大学 杨利国 生物 优先发展领域 40 65 20120146130004 柑橘体细胞杂种的基因组倍性效应及果实品质特征 华中农业大学 郭文武 生物 优先发展领域 40 66 20120171130003 miR397在水稻谷粒大小决定中的作用及调控机制 中山大学 陈月琴 生物 优先发展领域 40 67 20120181130006 纳米金负载多胺或大环多胺基因转染载体的研究 四川大学 余孝其 生物 优先发展领域 40 68 20120181130008 细胞自噬在植物衰老以及天然免疫反应中的作用研究 四川大学 林宏辉 生物 优先发展领域 40 69 20120201130011 与Sertoli细胞共培养的血管化胰岛种植于小肠粘膜下层构建人工胰岛 西安交通大学 薛武军 生物 优先发展领域 40 70 20121108130001 水稻渗透刺激快速应答分子（OsEROS1）的筛选、特性和调控机理研究 首都师范大学 李乐攻 生物 优先发展领域 40 71 20121208130001 大肠杆菌中蒜氨酸生物合成途径的构建及其代谢流研究 天津科技大学 路福平 生物 优先发展领域 40 72 20121420130001 牛羊群布鲁氏菌病的数学建模与研究 中北大学 靳祯 生物 优先发展领域 40 73 20121515130001 德氏乳杆菌保加利亚亚种后酸化功能基因及其调控机制的研究 内蒙古农业大学 张和平 生物 优先发展领域 40 74 20122307130001 TRX与PEDF在砷致肝脏和中枢神经系统损伤过程中的作用研究 哈尔滨医科大学 孙殿军 生物 优先发展领域 40 75 20122307130003 亚砷酸治疗APL时砷代谢产物浓度与疗效、副作用关系研究 哈尔滨医科大学 周晋 生物 优先发展领域 40 76 20123221130001 基于高效催化红景天苷合成的糖苷酶解析及其底物识别机制研究 南京工业大学 何冰芳 生物 优先发展领域 40 77 20123402130004 非整倍体细胞命运决定的分子基础及机制 中国科学技术大学 史庆华 生物 优先发展领域 40 78 20123402130006 p53家族蛋白及其相关microRNA调控细胞代谢的机制研究 中国科学技术大学 吴缅 生物 优先发展领域 40 79 20123603130001 不同繁殖力猪种的基因组重测序分析与产仔数基因的鉴别 江西农业大学 黄路生 生物 优先发展领域 40 80 20123702130001 抗凋亡基因对平邑甜茶根系死亡与分化的调控 山东农业大学 杨洪强 生物 优先发展领域 40 81 20123704130001 耐盐甜高粱种质筛选及拒Na+机理研究 山东师范大学 王宝山 生物 优先发展领域 40 82 20124404130001 脂肪代谢关键酶SCD1和DGAT2对猪肌肉脂肪酸组成的调控作用 华南农业大学 江青艳 生物 优先发展领域 40 83 20120001130008 利用小鼠模型及人卵母细胞体外成熟体系评价磷酸二酯酶（PDE）3抑制剂作为潜在避孕药物的可行性与安全性 北京大学 乔杰 医学 优先发展领域 40 84 20120001130013 多靶点药物递送与多靶点抗肿瘤研究 北京大学 张强 医学 优先发展领域 40 85 20120013130002 中药菊苣颗粒治疗高尿酸血症作用特点与机制的实验研究 北京中医药大学 张冰 医学 优先发展领域 40 86 20120061130010 EphrinB2/EphB4双向信号介导的促红细胞生成素对骨重塑的作用及机理研究 吉林大学 孙宏晨 医学 优先发展领域 40 87 20120071130011 瑞香狼毒及其近缘植物的抗艾滋病毒活性二萜药物资源 复旦大学 陈道峰 医学 优先发展领域 40 88 20120096130001 维卡格雷的分子机制及新药研究 中国药科大学 孙宏斌 医学 优先发展领域 40 89 20120121130003 新型超快速高分辨磁共振定域谱方法及其在生物医学中的应用 厦门大学 陈忠 医学 优先发展领域 40 90 20120141130009 程序缓释定向纤维支架和静态微应力在种植体类牙周膜形成中的作用 武汉大学 王贻宁 医学 优先发展领域 40 91 20120141130010 POT1/TPP1复合体介导的端粒稳态维持机制在放射性DNA损伤形成及转归中的作用 武汉大学 周云峰 医学 优先发展领域 40 92 20120142130002 阻断NKG2D/Ligand减轻心脏移植物血管病变的作用及机制 华中科技大学 夏家红 医学 优先发展领域 40 93 20120162130001 新一代抗肾纤维化新药ZHC116抗炎机制研究 中南大学 陶立坚 医学 优先发展领域 40 94 20120162130003 DNA羟甲基化调控CD4+T细胞活化与分化及其在系统性红斑狼疮发病中的作用 中南大学 陆前进 医学 优先发展领域 40 95 20120171130013 吡非尼酮防治常见眼科术后增殖性病变的研究及眼用缓释系统研制 中山大学 余敏斌 医学 优先发展领域 40 96 20120181130002 透明质酸对软骨细胞骨架的影响及其对关节软骨保护的分子机制研究 四川大学 裴福兴 医学 优先发展领域 40 97 20120181130004 法医学三等位基因SNPs遗传标记的探索研究 四川大学 侯一平 医学 优先发展领域 40 98 20120181130015 TCF7L2促少突胶质细胞髓鞘形成及损伤修复的分子遗传学机制 四川大学 毛萌 医学 优先发展领域 40 99 20120201130009 人工寰齿关节的研制与应用基础研究 西安交通大学 贺西京 医学 优先发展领域 40 100 20121106130001 以α-突触核蛋白为靶点的抗帕金森病创新药物的基础研究 北京协和医学院 陈乃宏 医学 优先发展领域 40 101 20121106130002 应用活体动物光学成像及超声微血管显像动态监测HIF-1α对乳腺癌新生血管的调控 北京协和医学院 姜玉新 医学 优先发展领域 40 102 20121106130005 骨髓增生异常综合征剪切体复合物蛋白编码基因突变的研究 北京协和医学院 肖志坚 医学 优先发展领域 40 103 20122134130001 氨基糖苷类抗生素结构中各种氨基葡萄糖生成机制及相关组合生物合成的研究 沈阳药科大学 夏焕章 医学 优先发展领域 40 104 20123107130002 黄芪甲苷在自身免疫神经退行性疾病中的神经保护作用研究 上海中医药大学 王峥涛 医学 优先发展领域 40 105 20124323130001 冠心病血瘀证心肌细胞能量代谢网络模型的研究 湖南中医药大学 袁肇凯 医学 优先发展领域 40 106 20120032130002 基于光频梳的大长度精密测量技术研究 天津大学 曲兴华 高端装备制造 优先发展领域 40 107 20120073130010 微通道管材分流挤压成形机理与界面焊合模型 上海交通大学 彭颖红 高端装备制造 优先发展领域 40 108 20120101130003 复杂薄壁曲面件复合型精密旋压关键技术研究 浙江大学 陆国栋 高端装备制造 优先发展领域 40 109 20120131130009 高速GMAW焊接熔池后向液体流的动量调控机制研究 山东大学 武传松 高端装备制造 优先发展领域 40 110 20120142130011 模板式有机气相喷印沉积成膜机理与装备研究 华中科技大学 张鸿海 高端装备制造 优先发展领域 40 111 20120161130001 基于超级计算平台的大型航天装备整机结构优化设计关键技术研究 湖南大学 文桂林 高端装备制造, 优先发展领域 40 112 20120181130012 高可靠精密滤波传动与智能装备集成系统关键技术研究 四川大学 王家序 高端装备制造 优先发展领域 40 113 20120185130002 无缝采集与数据处理方法研究 电子科技大学 王厚军 高端装备制造 优先发展领域 40 114 20122216130001 不规则复杂曲面、型孔磨粒流研抛智能高端数控精密装备及其工艺技术研究 长春理工大学 刘薇娜 高端装备制造 优先发展领域 40 115 20123227130002 基于挠曲电效应的航空结构早期损伤监测应变梯度传感器 江苏大学 骆英 高端装备制造 优先发展领域 40 116 20123318130001折叠翼展开机构工作可靠性建模与仿真评价方法研究 浙江理工大学 陈文华 高端装备制造 优先发展领域 40 117 20126102130003 飞行器薄壁曲面开孔结构的先进优化设计方法研究 西北工业大学 张卫红 高端装备制造 优先发展领域 40 118 20126102130004 基于非线性映射和证据理论的飞行器结构损伤位置振动检测方法研究 西北工业大学 闫云聚 高端装备制造 优先发展领域 40 119 20120014130001 非粮生物质燃料乙醇原料资源高效培育技术研究 北京林业大学 马履一 新能源 优先发展领域 40 120 20120032130008 具有大规模分布式可再生能源接纳能力的智能配电系统规划及分析 天津大学 王成山 新能源 优先发展领域 40 121 20120036130001 永磁电机式机械弹性储能机组若干基础问题研究 华北电力大学 米增强 新能源 优先发展领域 40 122 20120073130006 分布式光伏系统发电/储能协同控制与能量优化 上海交通大学 李少远 新能源 优先发展领域 40 123 20120073130009 大体积非均匀放射性废物三维活度探测技术研究 上海交通大学 王德忠 新能源 优先发展领域 40 124 20120092130008 新型双定子无刷双馈风力发电机及控制系统研究 东南大学 程明 新能源 优先发展领域 40 125 20120101130010 燃料电池应急电源系统电力电子功率变换构架及控制 浙江大学 徐德鸿 新能源 优先发展领域 40 126 20120101130016 核电站反应堆一回路冷却剂泄漏故障的监测、诊断、预警关键技术研究 浙江大学 梁军 新能源 优先发展领域 40 127 20120131130003 离子液体参与构筑的新型燃料电池质子交换膜的研究 山东大学 郑利强 新能源 优先发展领域 40 128 20120161130002 基于生物表面活性剂的柴油逆胶束体系的构建及其对生物质衍生生物油的乳化方法与机理 湖南大学 袁兴中 新能源 优先发展领域 40 129 20120181130014 由若干生物质基原料制备高附加值化学品研究 四川大学 胡常伟 新能源 优先发展领域 40 130 20120191130003 微型风振压电能量转换装置中流致振动机理及能量转换关键影响因素研究 重庆大学 张力 新能源 优先发展领域 40 131 20120201130004 高效可调控纳米异质结构阵列基纳米复合材料太阳能电池的基础研究 西安交通大学 阙文修 新能源 优先发展领域 40 132 20120201130006 太阳能吸热器的高效光捕获机制与光热转换机理及优化设计的基础研究 西安交通大学 何雅玲 新能源 优先发展领域 40 133 20123402130008 生物质基液体含氧燃料的基础研究 中国科学技术大学 郭庆祥 新能源 优先发展领域 40 134 20126501130001 独立变桨技术对兆瓦级风力发电机组电能质量影响的研究 新疆大学 王维庆 新能源 优先发展领域 40 135 20120031130002 锂离子动力电池用高容量正极材料 南开大学 高学平 新能源汽车 优先发展领域 40 136 20120032130009 醇-烃二元燃料燃烧反应动力学及其在柴油机缸内燃烧中的应用 天津大学 姚春德 新能源汽车 优先发展领域 40 137 20120131130007 车电互联模式下插电式混合动力汽车动力系统关键控制问题研究 山东大学 张承慧 新能源汽车 优先发展领域 40 138 20120211130005 高功率密度锂离子电池负极硅基材料研究 兰州大学 贺德衍 新能源汽车 优先发展领域

近日，上海交通大学王鹏飞教授和团队，设计一种无需预扩增的新型 DNAzyme 传感器，并将其并命名为 SPOT。图 | 王鹏飞（来源：王鹏飞）对于以 miRNA 和病毒 RNA 为代表的多种临床意义核酸标记物，本次传感器均具备检测能力，并能实现快速、便捷的临床分子诊断应用。通过针对血清 miRNA 进行敏感和特异的检测，进而可以用于乳腺癌、胃癌和前列腺癌等多种癌症的分子诊断。此外，SPOT 能从临床拭子中灵敏准确地检测 SARS-CoV-2 RNA。同时，SPOT 可以与侧流层析技术联合，实现对于核酸靶标的即时（POCT，point-of-care testing）检测。（来源：Angewandte Chemie International Edition）鉴于 SPOT 完全由合成 DNA 分子构建，避免了对于昂贵蛋白质酶的需求，具备较好的成本优势。实验显示，一次 SPOT 测定的材料成本，大约低至 0.02 美元，明显低于已有的检测体系。与现有基于 DNA 酶、或基于 CRISPR 的核酸靶标测定相比，这种灵敏且特异的分析性能、一步法的操作方案、低成本的优势、以及和 POCT 能力的结合，让 SPOT 能够成为一种更好的测定方法。未来在检验医学领域，该团队希望利用 SPOT 体系针对循环体内核酸进行检测，实现多类型疾病的灵敏特异分子诊断，从而为疾病的早期诊断和精准治疗提供新的可能。进一步地，他们也希望基于核酸适体的结合，能够进行小分子与蛋白的检测，扩展 SPOT 系统在多方面的临床诊断应用。此前，在体内递送治疗方面，传统的 DNAzyme 不具备可编程的靶向性。而该团队设计的新型 DNAzyme 体系可以快速设计和实现可编程的靶向目标链，并通过切割来达到治疗目标。总的来说，这一创新有望为疾病治疗提供更精准、更有效的手段，为基因治疗和精准医学的发展带来重要推动。（来源：Angewandte Chemie International Edition）那么，本次成果的研发必要性是什么？它弥补了已有测量工具的哪些不足？据介绍，生物体液（血液、尿液、汗液等）中存在的核酸分子，是对包括癌症和病毒感染等重大疾病进行分子诊断的一类关键生物标志物。然而，核酸标志物存在低丰度、高度动态、高异质性、背景干扰大等特点，其临床检测面临着测不出、测不准、测不全、测不了、测不起等挑战。因此，迫切需要开发超灵敏、高特异、通量高、便捷经济的核酸生物标志物检测分析方法。DNAzymes 是一类体外筛选的合成 DNA 分子，具有类似酶的催化活性，例如裂解核酸磷酸二酯键。典型的裂解核酸 DNAzyme，由具有催化能力的催化核心、以及用于通过序列互补性识别底物的两条臂组成。因此，当前许多 DNAzyme 已经广泛用于体外和体内的金属离子检测，因为它们的催化活性高度依赖于金属离子。然而，具有小分子、蛋白质或核酸检测能力的 DNAzyme 鲜有报道，导致这些目标很难被检测到。受自然酶和核酸酶的启发，通过实施异构模块（如 aptamer、toehold）来设计异构的 DNAzyme 生物传感器，可以通过小分子、蛋白质、核酸或细菌等，调节因子介导其催化活性。传统的异构 DNAzyme 生物传感器通常被设计成多组分分子复合体，通过具有 toehold 的抑制链，来抑制并释放 DNAzyme。以及通过在靶结合后分裂并恢复催化核心，或通过靶诱导的 DNAzyme-底物-靶标复合物的稳定，来实现对于核酸靶的直接检测。然而，这些生物传感系统对于定向核酸的直接检测，通常表现出皮摩尔至纳摩尔的敏感性，因此无法探测临床样本中的 miRNA 或病毒 RNA 标志物。而许多 miRNA 被视为是多种癌症的潜在生物标志物，然而由于缺乏癌症诊断的敏感性和特异性，很少有 miRNA 被证明在临床上有用。王鹏飞认为，这种多组分设计可能会对其检测能力产生负面影响。由于一些原因比如化学计量的不完善、动力学分子陷阱、催化活性受损、以及信号泄漏的风险增加，会导致低丰度目标更加难以被测量。而该课题组的主要研究兴趣是：开发简单、快捷、灵敏的新型疾病分子诊断方法。通过调研，该团队发现体液中的循环核酸已经成为多种疾病的重要液体活检生物标志物。由于这些核酸生物标志物在生物标本中的高度动态、异质性和低丰度，导致其临床检测面临着巨大挑战。传统的聚合酶链式反应（PCR，Polymerase Chain Reaction）技术需要严格的样品处理、昂贵仪器和专业操作。而新型等温扩增方法，比如重组酶聚合酶扩增（RPA，Recombinase Polymerase Amplification）、环介导等温扩增（LAMP，Loop-mediated isothermal amplification）等则能简化操作过程。而尽管 CRISPR结合等温扩增技术，能够显示出较高的灵敏度和便捷性，但是存在非特异性扩增、连续操作步骤和对昂贵易损酶的需求等缺陷，限制了临床上的应用。通过对以上这些因素的思考、并结合课题组自身优势，他们定下了本次课题。（来源：Angewandte Chemie International Edition）通过理论模拟与设计，他们设计出了这种新型 DNAzyme 传感器 SPOT。为了明确 SPOT 的机制并优化实验参数，课题组研究了具体的激活方式、以及可应用的核酸靶标长度。由于 DNAzyme 传感器的自身特性，最初他们设计的 DNAzyme 传感器信号泄漏非常严重，无论如何优化实验条件，都无法达到稳定、高灵敏的检测目的。通过大量的文献调研，以及学习和理解此前 DNAzyme 传感器的设计原理，再结合组内讨论他们认为：自封锁核酸链的设计，或许可以解决信号泄漏的问题。后来，通过一系列的实验，信号泄漏问题已经被解决。但是，DNA 酶传感器却无法被激活。于是，他们进一步优化参数，通过缩短结合臂的长度，最后成功构建了 DNAzyme 传感器。通过此，他们构造了一个单链、自锁定的单分子系统，并将这种传感系统命名为 SPOT（用于核酸检测的灵敏的环启动 DNAzyme 生物传感器）。同时，他们进一步将 SPOT 与试纸条结合，为 SPOT 实现 POCT 检测奠定了基础。经过全面优化和 SPOT 检测，在单管、一步、无预扩增和等温检测的前提下，实现了对 miR-21 的 15fM、对病毒 RNA 的 1.9aM 的强大检测灵敏度，以及对于核酸靶标的检测特异性（区分变异体）。最终，相关论文以《一种用于核酸敏感检测的可编程 DNAzyme》（A Programmable DNAzyme for the Sensitive Detection of Nucleic Acids）为题发在 Angewandte Chemie International Edition[1]。史辰致是第一作者，王鹏飞担任通讯作者。图 | 相关论文（来源：Angewandte Chemie International Edition）不过，目前只有少量临床样本在 SPOT 上进行测试。未来，课题组将对更多患者进行临床研究，以便全面评估 SPOT 测定的可靠性。同时，由于本次研究采用了无前置放大器的方案，因此 SPOT 还不够灵敏，无法在肉眼可见的测试条上，产生明显可区分的读数。因此，该团队打算进一步提高 SPOT 的灵敏度，或与基于等离子体/荧光的便携式可视化设备结合，以便让 SPOT 的 POCT 能力能被用于实际应用。未来，在临床应用层面，他们希望能够建立多中心、大规模临床队列，对 SPOT 体系的疾病诊断效能进行更大范围的论证。在技术改进层面，该团队计划拓展 SPOT 的应用范围。除了核酸检测外，他们也希望通过引入核酸适体，来实现对于小分子和蛋白标志物的检测。

p 　　 span style=" font-family: 楷体,楷体_GB2312, SimKai " 回顾2017年，基于质谱的临床研究有一项突破性发现。普渡大学陶纬国教授团队在2017年3月20日的《美国国家科学院院刊》(PNAS)杂志上发表文章称，他们从人体血液中发现2400多种磷酸化蛋白。该发现首次证明了磷酸化蛋白可以作为基于液体活检的疾病标志物，能用于对癌症等重大疾病更早、更精准的非侵入性诊断，为 “液体活检”提供了全新的检测维度。近日，仪器信息网专访了陶纬国。 /span /p p style=" text-align: center " img title=" 1.jpg" src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201801/insimg/a21a903c-0479-4776-9e2a-5b5c719f76fc.jpg" / /p p style=" text-align: center " strong 普渡大学 陶纬国教授 /strong /p p 　　 span style=" color: rgb(255, 0, 0) " strong 磷酸化蛋白突破性发现 /strong /span /p p 　　通过液体活检来诊断肿瘤和癌症等疾病一直是临床科学家关注的焦点，研究对象多集中在循环肿瘤细胞(CTC)和循环肿瘤DNA(ctDNA)，但是二者都有局限性：由于CTC在血清中的浓度非常低，取少量血液对其检测难度很大 癌症有很多基因突变，而这些突变不一定会显现出来，因此基于ctDNA进行的液体活检的诊断结果只能预测患病的概率，并不能确诊。 /p p 　　蛋白质磷酸化是调节和控制蛋白质活力和功能的最基本，最普遍，也是最重要的机制，同时，与许多疾病的发生密切相关。在众多肿瘤致病机理中，当前学术界对蛋白质磷酸化机理的研究最为清楚，80%-90%的癌症都跟蛋白质磷酸化有关。因此，许多抗肿瘤药物的研制都着眼于磷酸化蛋白。理论上，磷酸化蛋白作为相关基因突变的表达，在临床上能够帮助医生做出更明确的诊断。但是，有关基于液体活检的磷酸化蛋白研究还很少。此前，有个别报道在血液中发现几十种磷酸化蛋白，均是高丰度蛋白，生物学意义不大。“原因就是磷酸化蛋白一旦从细胞进入血液中就被肝脏分泌的磷酸酶水解了。”陶纬国解释说，“所以虽然磷酸化蛋白跟癌症关系非常密切，但人们无法对其进行检测。” /p p 　　陶纬国团队是如何从人体血液中检测到大量磷酸化蛋白的呢?这要从三年前的一篇文献报道说起，当时陶纬国从这篇文章中了解到外泌体和微囊的结构，“当我看到类似于纳米微粒的外泌体、微囊结构时，我认为可能会有磷酸化蛋白被包裹在外泌体中，然后进入血液。如果真是这样，被外泌体包裹的磷酸化蛋白可能会避免被血液中的磷酸酶水解。”于是陶纬国团队对血液中的外泌体、微囊进行了超速离心分离、提取，然后用质谱进行检测。一周以后，实验结果让所有人都惊呆了，他们从中发现了几千个磷酸化蛋白。这个突破性的发现使得临床科学家们今后可以在1毫升血浆里找到几千个磷酸化的位点，并从中筛选出不同疾病的生物标志物。之后，陶纬国团队对乳腺癌病人血清中的磷酸化蛋白做了研究，发现乳腺癌病人体内的磷酸化蛋白与其病症密切相关。 /p p 　　那么，磷酸化蛋白液体活检何时能够应用临床呢?陶纬国回答说：“虽然现在还不好断言，但我认为3-5年内都有可能。”他进一步解释，随着质谱技术的显著提升，一些原来检测不到的生物标志物现在能够检测了，后面的工作主要是考察重复性有多好，假阳性有多低。 /p p 　　谈及未来的工作，陶纬国表示，一方面会继续做乳腺癌的磷酸化蛋白生物标志物确认的工作 另一方面也会做其他疾病磷酸化蛋白生物标志物找筛的工作，“还有很多其它疾病，比如阿尔茨海默病、帕金森综合征等，也都是蛋白磷酸化有关。” /p p 　　 span style=" color: rgb(255, 0, 0) " strong 质谱用于生物大分子检测的思考 /strong /span /p p 　　陶纬国教授做蛋白组学研究至今已有十几年，用到的研究工具主要是质谱。在攻读博士期间，陶纬国师从普渡大学著名质谱专家Graham Cooks教授。博士毕业后，陶纬国加入了西雅图系统生物研究所，在Leroy Hood教授(自动DNA测序仪发明人)和Ruedi Aebersold教授(著名蛋白质组学专家)课题组继续博士后研究。从那时起，陶纬国就开始了他的磷酸化蛋白质组学检测的研究，“重回普渡教书以后，我的工作基本上是围绕着怎么去提高磷酸化蛋白分析手段来开展的。质谱在我的工作扮演着中心角色，包括方法开发，蛋白生物标志物早筛，全靠质谱来做。”首先是早筛，用质谱(Orbitrap)筛选出相关的生物标志物(磷酸化蛋白) 然后对病人的样本进行检测，用统计学的方法对检测结果进行分类 最后，分析统计学上有意义的、跟病人相关的磷酸化蛋白。 /p p 　　在过去二三十年里，质谱在生物大分子检测方面有几个重要的技术突破。首先，80年代末90年代初， ESI和MALDI的出现，使质谱能够用于分析生物样品 第二，近十几年来，高分辨质谱的飞跃发展，大大提升生物大分子的分析效率。“我读博士后时(2002年)，很多仪器还是低分辨的，生物样品还是挺难做的，做完一个磷酸化的蛋白，单是数据库检索就要三天，而且，相对来说，得到的数据假阳性高。现在的高分辨质谱解谱很容易，差不多半个小时就够了，假阳性也降低很多。”此外，陶纬国还说到，“UPLC与质谱的结合在技术上是很大的进步，使色谱的分离效率赶上了质谱的速度，现在一个小时能检测到几千个蛋白，非常快。” /p p 　　同时，陶纬国也指出了目前利用质谱来检测生物大分子的难点。第一，生物样品基体复杂。“像我们实验室做磷酸化蛋白，它本身丰度就很低，假如样本不经过任何分离的话，谱图上将会只能看到高丰度蛋白。”第二，质谱检测假阳性比较高。“其实还是需要统计学算法方面的开发，来解决假阳性率高的问题，这也是现在很多质谱开发者在做的工作。” /p p 　　现如今质谱产品更新迭代非常快，对于质谱工作者来说，是好，也是坏。“新产品的确扫描速度更快了，精度更高。但是，也给质谱工作者带来了不小的压力。特别是像我们这种使用高分辨大仪器的，没有那么多钱换来换去。可是如果你想要紧跟前沿，这些新仪器又十分必要。”陶纬国说，这是目前质谱工作者普遍面临的两难境地。 /p p 　　 span style=" color: rgb(255, 0, 0) " strong 整合临床大数据 /strong /span /p p 　　2017年，陶纬国作为海外高层次人才被东南大学引进回国。谈及回国的初衷，陶纬国表示，国内拥有更多、更丰富的病人样本，这是他选择回国的原因之一。此外，国内对于高分辨质谱等大型仪器的投入力度也更大，有助于前沿研究的开展。谈到选择东南大学的原因，陶纬国说到：“东南大学的生物医学工程学院有转化医学，有生物，然后又有工程，包括产业化，比较适合我。” /p p 　　现在国内，整合医学大数据来服务大健康的概念很热，“在全国，包括南京，都已经有相关工作在开展”。从临床检测这个角度来说，陶纬国希望找到办法来整合DNA检测，microRNA检测，磷酸化蛋白检测几个维度的数据，从而获得更为精准的临床诊断结果。“比如检测一个肿瘤，通过对DNA、mRNA、磷酸化蛋白、糖基检测多维度数据的不断积累，数据会越来越多，结合人工智能、计算机算法，检测结果会越来越精准。 我回来能赶上这个机会也是不容易。”陶纬国如是说到。 /p p 　　目前，医学大数据的采集方式主要为第二代、第三代测序。“但是，质谱也是很重要的一块儿。”陶纬国指出，“比如乳腺癌，基因突变仅仅代表一种患病的可能性，但是到底有没有癌症还是要通过蛋白检测来确定，所以用质谱来检测蛋白的存在、活性、功能，比基因层面更可靠。所以，质谱检测肯定会慢慢跟上来。” /p p 　　陶纬国在东南大学生物医学工程学院的新实验室是电子生物国家重点实验室。对于自己的工作重心，陶纬国表示，现在是过渡时期，未来会逐步将重心转至国内。“国内实验室刚刚开始，看起来前途光明。” /p p 　 span style=" color: rgb(255, 0, 0) " strong 　热衷学界公益事务 出任CASMS主席 /strong /span /p p 　　作为质谱生物大分子检测方面的专家，陶纬国于2017年6月份当选北美华人质谱学会(CASMS)主席。该学会汇聚了众多顶尖的华人质谱学者，已经成为质谱学界重要的华人力量。在一年一度的“美国质谱年会(ASMS)”期间举行“北美华人质谱学术会议”已经成为CASMS的传统。据陶纬国介绍，CASMS已有二三十年的历史，目前注册人数在800人左右，覆盖了北美地区绝大部分优秀的华人质谱学者。ASMS每年参会人数6000-7000人，相当一部分是华人，中国面孔越来越多。“在美国，有很多华人学者做了非常出色的工作，但他们并没有获得相匹配的影响力和威望。” 陶纬国说，“我们学会的宗旨就是提升华人质谱学者在世界质谱领域的影响力。当然， 中国本身的国际地位的重要性是显而易见的。” /p p 　　CASMS的另一个宗旨是促进世界华人质谱界的互相交流。每两年召开一次的“世界华人质谱学术研讨会”是全世界华人的质谱盛会，汇聚了中国内地、台湾、香港、新加坡和北美地区的质谱学者，CASMS是该会议4个主办方之一。2016年，CASMS主办了第六届“世界华人质谱学术研讨会”，这是该会议首次在美国召开，恰逢该会议召开十周年。“我认为非常有意义，促进了两岸三地华人质谱学者的交流合作。我的亲身体会是通过这个会议结识了很多优秀学者，而在此前很多同仁相互间是不认识的。” /p p 　　未来，除了重要的线下会议组织工作，陶纬国希望通过加强线上日常交流，来使学会内部联系更为紧密。 /p p 　　 span style=" font-family: 楷体,楷体_GB2312, SimKai " strong 后记： /strong 临床质谱技术被认为是医学诊断的下一个“基因测序”，应用前景被普遍看好。质谱用于临床检验具有灵敏度高、特异性高、重现性好的优点，可在临床多个领域对传统诊断方法学进行替代。陶纬国教授团队的磷酸化蛋白研究进一步提升了临床质谱应用的含金量。基于该研究，临床科学家们将会找到更多可靠的疾病标志物，从而实现癌症等重大疾病的早期发现和精准诊断。 /span /p p style=" text-align: right " 采访编辑：李博 /p