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氨基辛二酸酯

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  • 【原创大赛】黄酒中γ-氨基丁酸含量测定的辛酸历程

    【原创大赛】黄酒中γ-氨基丁酸含量测定的辛酸历程

    黄酒中γ-氨基丁酸含量测定的辛酸历程 近日实验室收到一批黄酒样品,该批黄酒是用发芽糙米为原料酿造而成,客户要求测定黄酒中的γ-氨基丁酸含量。由于之前实验室以丹磺酰氯为衍生试剂,建立了高效液相色谱法测定发芽糙米中γ-氨基丁酸含量的实验方法,并对实验方法的线性、精密度以及回收率进行了确认,均可以满足发芽糙米中γ-氨基丁酸含量测定要求,因此拿到黄酒样品后直接按照发芽糙米的前处理方法和色谱方法进行分析。链接如下:http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20141226/5591256/。然而事与愿违,在测定的液相色谱图中压根就没有见到γ-氨基丁酸的色谱峰,反而在11.5min左右有个小的色谱峰,其峰高与发芽糙米中γ-氨基丁酸峰高有点相似,初步怀疑是保留时间发生了漂移,与发芽糙米样品色谱图对比后发现,在发芽糙米样品色谱图中该保留时间处也出现了一个相似的小峰,因此将该色谱峰是γ-氨基丁酸的可能性排除。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/12/201412311333_530568_1669358_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/12/201412311334_530570_1669358_3.jpg 原本该实验到此结束,准备将实验结果反馈给客户:黄酒中γ-氨基丁酸的检测结果为“未检出”。为了保证数据的准确性和可靠性,在黄酒样品中进行加标实验,结果在加标的色谱图中也未在相应的保留时间出峰,而且11.5min左右的色谱峰也没有增大,因此决定先将“未检出”的结果搁置,并对实验方法进行分析。 经过对样品前处理过程和色谱方法的分析,觉得可能造成加标样品中γ-氨基丁酸未检出的原因可能有:(1)保留时间漂移。由于流动相需要调节pH值,同时样品前处理过程中也涉及到酸、碱溶液的使用,怀疑是流动相或者样品pH的改变导致保留时间的漂移,从而未在原有的保留时间出现应有的色谱峰。然而重新配制流动相和前处理样品,加标样品测定结果依然是“未检出”,对比加标和不加标样品的色谱图,两者几乎一样,也没有峰面积或峰高变化明显的色谱峰;(2)衍生试剂失效。丹磺酰氯对光和湿敏感,不稳定,放置时间久了会生产二氯亚砜并继续分解成其他物质,影响其在有机溶剂中的溶解度,也会影响结果。可是为了排除衍生试剂的问题,重新打开一瓶刚购置不久的丹磺酰氯试剂,并重新试验,结果仍然不理想;(3)衍生条件控制不当。之前用相似的方法测定牛磺酸含量以及测定发芽糙米中γ-氨基丁酸含量时曾出现过衍生过程条件控制不当造成衍生不完全或者不能衍生的情况,可是与黄酒样品同一批处理的γ-氨基丁酸标准溶液和发芽糙米样品均能衍生成功,并正常出峰,为何唯独黄酒样品不出峰呢?在百思不得其解之际,看到同事在滴定黄酒中总酸,忽然间若有所悟:黄酒中的γ-氨基丁酸需要在碱性条件下才能与丹磺酰氯发生衍生反应,而黄酒是酸性介质,pH值一般在3~5之间,同时黄酒为酿造产物,对酸碱性具有一定的缓冲能力。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/12/201412311336_530572_1669358_3.jpg 通过比较发现:黄酒为酸性样品,缓冲能力较强,按照发芽糙米样品前处理方法直接加入0.5mL 碳酸钠(pH9.8)可能不能达到合适的衍生反应条件,最终导致黄酒样品中γ-氨基丁酸“未检出”。 找到问题后调整实验方案,先将黄酒样品调整至中性,然后再按照发芽糙米样品方法进行前处理。调整实验方案后,黄酒样品中γ-氨基丁酸测定的色谱图如下图。从色谱图中可以发现,经过实验方案的调整黄酒样品中检出了γ-氨基丁酸的存在。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/12/201412311337_530573_166

  • 【讨论】圆二色光谱法鉴定多肽中氨基酸的构型

    待鉴定的样品为合成多肽的副产物,怀疑其中一个或多个氨基酸是D型构象(其对照品是全L型构象),现想验证这一假设。首先想到用测其旋光度和全L型对照品旋光度进行对比的方法进行鉴别,但测定旋光度需要样品量较多,而该待鉴定样品仅2-5mg,方法不可行。于是想采用圆二色光谱的方法鉴别,不知采用此方法需多少量的样品?如果该样品和全L型对照品的圆二色光谱不一致,能否用此方法断定两者是对应或非对应异构体(两者的分子量相同,氨基酸组成也相同)?谢谢指教!

  • 氨基己二酸固相萃取问题

    氨基己二酸固相萃取问题

    [font=&]各位老师,最近在摸索一种氨基酸(氨基己二酸)的固相萃取方法,现在用的MAX混合强阴离子交换萃取柱。先用了100ppb标准品过柱,甲醇、水、5%氨水活化,上样后水甲醇淋洗,这几步收集的液体中都没有检测到物质流出,最后用5%甲酸甲醇洗脱,回收率很低大概70%,试过提高甲酸含量,还尝试过甲醇里加入了一些乙酸乙酯,效果都不好。[/font][font=&]因为这种物质也是氨基酸,之前也尝试过混合强阳离子MCX,也是最后氨水甲醇洗脱的时候根本洗不下来,各位老师帮忙分析下到底该怎么提高回收率。谢谢大家![/font][img=,453,194]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/02/202302140927204801_8900_5688672_3.png!w453x194.jpg[/img]

  • 二硫代氨基甲酸酯类农药用酸性氯化亚锡产生CS2响应过高

    各位老师,我在检二硫代氨基甲酸酯类农药时,参照标准SN/T 4675.18-2016出口葡萄酒中二硫代氨基甲酸酯残留量的测定。用1ml水代替样品,加入代森锰锌(浓度:1ppm)10μL,加入氯化亚锡盐酸溶液(15g氯化亚锡,溶于430ml盐酸中,用水稀释至1000ml)9ml,顶空+FPD硫滤光片测定,结果二硫化碳峰信号过载。想请教一下各位老师,有遇到过类似情况的吗,如此低浓度的代森锰锌能产生那么多二硫化碳?

  • 【实战宝典】氨基酸衍生产物可以放置多久?

    [b][font=宋体]问题描述:液相色谱测氨基酸,用[/font]2,4-[font=宋体]二硝基甲苯衍生以后放入棕色容量瓶中,冰箱冷藏保存。[/font]4[font=宋体]天后进样发现单标中多出来几个小峰,目标峰也变小了,且峰型分叉,是不是衍生物发生了降解?[/font][font=宋体]解答:[/font][/b][font=宋体]([/font]1[font=宋体])液相色谱测氨基酸,建议衍生产物现配现用,如果是荧光检测,大部分氨基酸在衍生[/font]2h[font=宋体]后荧光响应会逐渐下降,下降到一定程度后稳定;但是有几种氨基酸衍生产物的荧光响应值下降的非常明显。[/font][font=宋体]([/font]2[font=宋体])液相色谱测氨基酸通常采用在线柱后衍生的方式进行。[/font][font=宋体]([/font]3[font=宋体])针对做一个对照品溶液的稳定性实验,即以第一天配制的对照品为样品,每天配制一组新的相同浓度的对照品来测定第一天配制的对照品的含量,看其情况就可以知道稳定性。[/font][font='微软雅黑','sans-serif'][color=black][back=white]领取更多《实战宝典》请进:[url]http://instrument-vip.mikecrm.com/2bbmrpI[/url][/back][/color][/font][font='微软雅黑','sans-serif'][color=black][back=white] [/back][/color][/font]

  • 二硫代氨基甲酸盐(或酯)类农药怎样定性?

    二硫代氨基甲酸盐(或酯)类农药怎样定性?丙森锌代森铵代森联代森锰锌代森锌福美双福美锌在2763中有7种农药的残留物都是二硫代氨基甲酸盐(或酯),以二硫化碳表示。可以知道具体是哪一种吗?

  • 【转帖】氨基酸的主要化学反应

    氨基酸的主要化学反应(一)茚三酮反应茚三酮反应(ninhydrin reaction)这是氨基酸的α-NH2所引起的反应。α-氨基酸与水合茚三酮一起在水溶液中加热,可发生反应生成蓝紫色物质。首先是氨基酸被氧化分解,放出氨和二氧化碳,氨基酸生成醛,水合茚三酮则生成还原型茚三酮。在弱酸性溶液中,还原型茚三酮、氨和另一分子茚三酮反应,缩合生成蓝紫色物质。所有氨基酸及具有游离α-氨基的肽都产生蓝紫色,但脯氨酸和羟脯氨酸与茚三酮反应产生黄色物质,因其α-氨基被取代,所以产生不同的衍生物。此反应十分灵敏,根据反应所生成的蓝紫色的深浅,在570nm波长下进行比色就可测定样品中氨基酸的含量。也可在分离氨基酸时作为显色剂定性、定量地测定氨基酸。 (二)氨基酸与2,4-二硝基氟苯的反应 此反应又称桑格反应(Sanger reaction)。在弱碱性(pH 8~9)、暗处、室温或40℃条件下,氨基酸的α-氨基很容易与2,4-二硝基氟苯(缩写为FDNB)反应,生成黄色的2,4-二硝基氨基酸(dinitrophenyl amino acid,简称DNP-氨基酸)。该反应由F. Sanger首先发现。多肽或蛋白质的N-末端氨基酸的α-氨基也能与FDNB反应,生成一种二硝基苯肽(DNP-肽)。由于硝基苯与氨基结合牢固,不易被水解,因此当DNP-多肽被酸水解时,所有肽键均被水解,只有N-末端氨基酸仍连在DNP上,所以产物为黄色的DNP-氨基酸和其它氨基酸的混合液。混合液中只有DNP-氨基酸溶于乙酸乙酯,所以可以用乙酸乙酯抽提并将抽提液进行色谱分析,再以标准的DNP-氨基酸作为对照鉴定出此氨基酸的种类。因此2,4-二硝基氟苯法可用于鉴定多肽或蛋白质的N-末端氨基酸。(三)氨基酸与苯异硫氰酸(PITC)的反应 此反应又称艾德曼反应(Edman reaction)。在弱碱性条件下,氨基酸的α-氨基可与苯异硫氰酸(phenylisothiocyanate, PITG)反应生成相应的苯氨基硫甲酰氨基酸(简称PTC-氨基酸)。在酸性条件下,PTC-氨基酸环化形成在酸中稳定的苯乙内酰硫脲氨基酸(phenylthiohydantoin,简称PTH)。蛋白质多肽链N-末端氨基酸的α-氨基也可有此反应,生成PTC-肽,在酸性溶液中释放出末端的PTH-氨基酸和比原来少一个氨基酸残基的多肽链。PTH-氨基酸在酸性条件下极稳定并可溶于乙酸乙酯,用乙酸乙酯抽提后,经高压液相层析鉴定就可以确定肽链N-末端氨基酸的种类。该法的优点是可连续分析出N端的十几个氨基酸。瑞典科学家P. Edman首先使用该反应测定蛋白质N-末端的氨基酸。氨基酸自动顺序分析仪就是根据该反应原理而设计的。(四)α-羧基的反应 氨基酸的α-羧基和一般的羧基一样,可以和碱作用生成盐,其中重金属盐不溶于水。氨基酸的羧基还能与醇类作用,被酯化生成相应的酯。酯化作用在人工合成多肽中常用来保护氨基酸的α-羧基。例如,氨基酸在无水乙醇中通入干燥氯化氢气体,或加入二氯亚砜,然后回流,生成氨基酸酯的盐酸盐。氨基酸的α-羧基被还原可产生相应的α-氨基醇,例如被氢硼化锂还原的反应。此性质在蛋白质一级结构的测定中是鉴定C-末端氨基酸的一种方法。(五)R基的反应 氨基酸的R侧链含有官能团时也能发生化学反应,例如丝氨酸、苏氨酸和羟脯氨酸均为含有羟基的氨基酸,所以能形成酯。酪氨酸的R侧链含有苯酚基,具有还原性,所以可利用此性质定量地测定蛋白质。另外,苯酚基和组氨酸中的咪唑基具有芳香环或杂环的性质,能与重氮化合物(如对氨基苯磺酸的重氮盐)结合而生成棕红色的化合物,此反应可用于定性、定量测定。此外,半胱氨酸的侧链上的巯基(-SH)的反应性能高,在碱性溶液中容易失去硫原子并且容易被氧化而生成胱氨酸。另外,极微量的某些重金属离子,如Ag+、Hg2+,都能与-SH基反应,生成硫醇盐,从而导致含-SH酶失活。

  • 【资料】氨基酸与肽

    1.1概述1.1.1氨基酸基本的理化性质 一、基本物理学性质 包括基本组成和结构、溶解性、酸碱性质、立体化学、熔点、沸点、光学行为、旋光性、疏水性等。 (一)溶解性质根据氨基酸侧链与水相互作用的程度可将氨基酸分作几类。含有脂肪族和芳香族侧链的氨基酸,如Ala、Ile、Leu、Met、Pro、Val及Phe、Tyr,由于侧链的疏水性,这些氨基酸在水中的溶解度均较小;侧链带有电荷或极性集团的氨基酸,如Arg、Asp、Glu、His、Lys和Ser、Thr、Asn在水中均有比较大的溶解度;但根据电荷及极性分析也有一些例外,如脯氨酸属于带疏水基团的氨基酸,但在水中却有异常高的溶解度。 (二)氨基酸的疏水性 氨基酸的疏水性,是影响氨基酸溶解行为的重要因素,也是影响蛋白质和肽的物理化学性质(如结构、溶解度、结合脂肪的能力等)的重要因素。 按照物理化学的原理,疏水性可被定义为:在相同的条件下,一种溶于水中的溶质的自由能与溶于有机溶剂的相同溶质的自由能相比所超过的数值。估计氨基酸侧链的相对疏水性的最直接、最简单的方法就是实验测定氨基酸溶于水和溶于一种有机溶剂的自由能变化。 一般用水和乙醇之间自由能变化表示氨基酸侧链的疏水性,将此变化值标作△G′。 不同氨基酸的△G′值如下表所示。当氨基酸的△G′值为正时,其侧链具有疏水性,倾向于处在蛋白分子的内部; △G′为负时,其侧链是亲水的,倾向于处在蛋白分子的表面。需要注意的是,赖氨酸通常是蛋白质分子中亲水性的氨基酸残基,但它的△G′是正值,这是由于它的侧链含有优先选择有机环境的4个-CH2-基。 (三)氨基酸的光学性质 氨基酸中的苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸分子中由于有共轭体系,因此可以吸收近紫外光。它们的最大吸收波长(λmax)分别为260nm、275nm、278nm;在吸收最大波长光线的时候还会发出荧光。

  • 请教大侠!关于黄酒中氨基酸PITC衍生杂质峰的问题!

    本人在做氨基酸分析,用的是黄酒中氨基酸的测定方法行业标准编制说明 标准,十八种氨基酸混标进样,由于仪器限制,使用的是二元梯度,标准是三元,两者的区别只是峰的分离度。但是实验中总是有杂质峰,而且重复性很好,保留时间、峰面积是一致的,怀疑是衍生副产物。单标进样仍然有,而且几乎是一个单标对应一个杂质峰。并不是所有杂质峰都出现,说明不是样品、流动相的问题。认为问题就出在衍生过程中,有做过的是否也由这些杂质峰?

  • 氨基酸标液配制及定量方式,求教

    刚接触饲料中氨基酸的检测,打算用OPA柱前衍生—液相色谱法来做。购买了氨基酸的固体粉末,每一种氨基酸约0.1g。用0.1%的盐酸溶液来配制?但是不知道是稀释到什么程度,看一些资料的氨基酸结果浓度的表示方式都是** %,标准溶液是** pmol/L。因为之前一直都是做食品的,用的单位都是mg/kg或者mg/L。想不明白应该如何配制配液。氨基酸检测一般是用单标定量,还是曲线定量?外标?内标?谢谢!

  • 【分享】奶粉打假,测氨基酸更精确

    为制定国家标准提供依据,减少假冒的婴幼儿配方奶粉;运用植物-土壤相互作用,治理湘江流域矿区重金属污染……昨日,在中南林业科技大学召开的产学研工作会议上,一项项该校的科技成果成为关注焦点。省教育厅厅长张放平说,2006年至2009年,全省高校共计转让技术创新成果1319项,为企业提供技术服务3041项,自办企业转让科研成果683项,总计新增产值1134亿元,为全省经济发展注入了源头活水和强劲动力。 研究婴幼儿配方奶粉的中南林业科技大学食品科学与工程学院的任国谱老师对记者说,婴幼儿配方奶粉中蛋白质含量是一个宏观指标,可以通过添加很多非乳蛋白来实现,客观上给造假者提供了机会。而蛋白质是由氨基酸构成的,直接检测氨基酸的组成模式,要比对蛋白质的检测精确和可靠得多。为了寻找婴幼儿配方奶粉中必需氨基酸的打假模式,他们的项目根据中国奶牛品种和地域的分布,采集相应的生鲜奶样,分析其氨基酸组成,规定婴幼儿配方奶粉的必需氨基酸模式,大大减少假奶粉的机会。 中南林业科技大学联合湖南省环境保护研究所,围绕湘江流域污染治理、农村重金属污染治理等开展合作,技术成果“景观型-组合人工湿地污水处理技术”目前已在长沙市河西先导区洋湖、梅溪湖、雨花区圭塘河、湘潭市水府庙水库、昆明滇池等地进行推广应用。

  • 【求助】急!异硫氰酸苯酯(PITC)衍生测18氨基酸方法求助

    最近在用异硫氰酸苯酯(PITC)检测氨基酸的时候出现了一个怪问题:17个氨基酸只有前面9种氨基酸可以出峰,剩下的氨基酸都不能出峰。液相条件什么都是一样的,换了新柱子问题仍然存在。一开始怀疑由于现在天气凉了衍生不充分,就放在25℃水浴中衍生2小时,问题仍然存在。让我很是苦恼。调整梯度程序、温度都不管用。液相也很正常。下面是我的液相条件:请各位高手帮忙啊!5色谱条件色谱柱: Sepax AA专用柱,4.6*250mm,由苏州赛分科技有限公司提供。检测波长:254nm。柱温:40℃。流动相A: 醋酸钠溶液:乙腈=93:7 (V/V)。流动相B: 乙腈:水=4:1(V/V)。进样量:5ul流速:1mL/min(注:分析结束后使用20%乙腈水溶液清洗,再用100%乙腈清洗后储存) 表1 梯度洗脱程序 时间/min 流动相A/% 流动相B/% 0 100 0 2 100 0 14 93 7 29 70 30 32 50 50 33 0 100 39 0 100 39.1 100 0 45 100 0 6 氨基酸标准溶液和样品溶液的衍生(设2个重复)6.1 17AA衍生准确量取氨基酸标准溶液400μl,置5.0ml塑料离心管中,加入三乙胺乙腈溶液(2.10)200μl,异硫氰酸苯酯乙腈溶液(2.11)200μl,混匀,室温放置1小时,然后加入正己烷800μl,振摇后放置10分钟,取下层溶液(PTC-AA),用一次性注射器吸取上清液用0.45μm针式过滤器过滤。准确量取样品溶液400μl,置5.0ml塑料离心管中,加入三乙胺乙腈溶液(2.10)200μl,异硫氰酸苯酯乙腈溶液(2.11)200μl,混匀,室温放置1小时,然后加入正己烷800μl,振摇后放置10分钟,取下层溶液(PTC-AA),用一次性注

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