辛基琼脂糖凝胶

[em09511]请问各位，琼脂糖凝胶在什么地方运用比较多啊？我们公司自主研发了琼脂糖系列凝胶。有谁需要试用的吗？我可以提供样品。

我想要用葡聚糖凝胶色谱来分离纯化半刀豆球蛋白分子量是104000，它本身会结合葡萄糖，那用葡聚糖凝胶色谱还能不能分来，如果不行的话，琼脂糖凝胶可以不？琼脂糖凝胶我还没有用过，所以不知道DEAE琼脂糖凝胶 FF能不能用来分离，谢谢大家了！

电泳基本原理 迁移率（或泳动度）是指带电颗粒在单位电场强度下泳动的速度，可用下列公式计算： Ｕ =υ/E =(d/t)/(V/l) =dl/Vt Ｕ为迁移率（cm2•V-1•min-1）；υ为颗粒泳动速度（cm•s-1）；E 为电场强度（ V•cm-1）；d为颗粒泳动的距离（cm）；l为滤纸有效长度（cm）；V为实际电压（V）；t为通电时间（s或min）。通过测量d, l, V, t, 即可计算出被分离物质的迁移率。 1迁移率单位= 10-5 cm2•V-1•min-1在确定的条件下，某物质的迁移率为常数，是该物质的化学特征常数。 颗粒带净电荷多，直径小而接近于球形，则在电场中泳动速度快，反之则泳动速度慢。 迁移率还与分子的形状，介质粘度，颗粒所带电荷有关，迁移率与颗表面电荷成正比，与介质粘度及颗粒半径成反比。 影响琼脂糖电泳迁移的主要因素 电场强度 溶液的pH值 溶液的离子强度 电渗现象 温度的影响 支持物的影响 按分离原理分类： 1.区带电泳 2.移界电泳 3.等速电泳 4.聚焦电泳 按有无固体支持物分类 1. 纸上电泳 2. 醋酸纤维素膜电泳 3. 薄层电泳 4. 非凝胶性支持物区带电泳（支持物有：淀粉、纤维素粉、玻璃粉、硅胶） 5. 凝胶支持区带电泳（淀粉凝胶、聚丙稀酰胺凝胶、琼脂糖凝胶） 影响琼脂糖电泳迁移的主要因素 DNA的大小 DNA的构象 琼脂糖浓度 缓冲液 不同构像质粒 缓冲液 TAE：乙酸盐缓冲液 TBE：硼酸盐缓冲液 TPE：磷酸盐缓冲液 实验操作 1. 用胶带将洗净、干燥的水平板的边缘封住，形成一个胶模并水平放置。 2. 按水平板的长×宽×0.5cm胶厚，量取0.5×TBE，并按0.7％的浓度称取agarose琼脂糖，在微波炉或电炉上加热至全熔（清澈透明）。 3. 等凝胶温度降至大约50－60以下时，加入1 mg/L溴化乙锭（EB）至终浓度为0.5ug/mL ；摇匀并轻快地倒入水平板中，除掉气泡，插入梳子。 4. 凝固后，将梳子轻轻拔出。 5.去掉胶带，将水平板放入加有0.5×TBE电泳缓冲液的电泳槽中，并且使电泳缓冲液高出凝胶约1mm。 6.在parafilm膜上依次加： ddH2O 6ul,上样Buffer 2ul ,DNA 4ul 分别混匀后点样，记录点样次序。 7. 在水平板两边的点样孔中分别加入6 μ l的λΔΝΑ/EcoRI+HindIII marker。 8. 盖好电泳槽盖子，选择适当的电泳电压（≤5V/cm）及电泳方向(DNA阴极阳极），开始电泳。 9. 当色素接近胶的先端，停止电泳，样品在紫外灯下观察、成像℃

一、凝胶制备1. 微波炉溶解琼脂糖时，胶液沸腾冲溢出三角锥瓶微波炉加热时胶液可能发生剧烈沸腾，（1）总液体量不宜超过三角锥瓶的50%容量。（2）2%以上胶液设置中火加热。 （3）胶液剧烈沸腾时，停止加热，移开三角锥瓶，请戴上防热手套，小心摇动三角锥瓶，然后再次加热，胶液沸腾直至胶液清澈，保证琼脂糖完全溶解。 2. 琼脂糖电泳图像背景模糊不清：琼脂糖没有完全溶解会造成电泳图像背景模糊不清。完全溶解的琼脂糖胶液清澈，三角锥瓶内壁应没有粘附琼脂糖颗粒。 3.加热后水分蒸发，如需要应加入热的蒸馏水，补足到原来的重量，摇匀。 二、电泳1. DNA条带模糊，拖尾。 （1）DNA降解。避免核酸酶污染。 （2）DNA上样量过多。减少凝胶中DNA上样量。 （3）电泳缓冲液陈旧:电泳缓冲液多次使用后，离子强度降低，pH值上升，缓冲能力减弱，从而影响电泳效果。建议经常更换电泳缓冲液。 （4）电泳条件不合适。电泳时电压不应超过20 V/cm，温度＜30℃,巨大DNA链，温度应＜15℃，核查所用电泳缓冲液是否有足够的缓冲能力。 （5）DNA样含盐过高。泳前通过乙醇沉淀去除过多的盐。 （6）有蛋白污染。电泳前抽提去除蛋白。 （7）DNA变性。电泳前勿加热，用20 mM NaCl缓冲液稀释DNA。[/c

做了一小段时间的琼脂糖凝胶电泳, 有一些体会给新手们参考, 不当之处也请专家们指正.1. 加热时, 一定要煮沸, 以保证琼脂糖的完全溶解.2. 待溶液冷却至不烫手, 感觉温暖舒适时加EB. 一定要在通风柜里.3. 倒胶时, 可用干净的纸巾拭去气泡.4. 胶凝固后先倒入些电泳缓冲液以方便取梳子.5. 保证缓冲液淹过胶的边沿, 边沿部分常高出1-2mm.6. 有时需要大的上样孔, 可用胶带把几个相邻的梳齿粘在一起, 这种情况下, 尽量让胶液冷一些再倒胶.7. 如果只是为了看一下结果(不需要照相), 同一块胶可重复用1-3次. 有一次我跑了4遍, 条带很弱, 用加了EB的缓冲液(约10ul EB in 50ml 缓冲液)泡半小时后就如正常了.8. 要保存胶到第二天用, 可以保鲜膜包裹后放入4 度冰箱.9. TAE 电泳缓冲液也可重复使用, 至少10次没有问题.10. 为了防止电泳时两极缓冲液槽内pH和离子强度的改变，可在每次电泳后合并两极槽内 的缓冲液，混匀后再用。

请教一下各位：琼脂糖凝胶氢键吸附色谱介质，用于色谱柱中，请问哪里可以检测，主要检测PH、微球直径分布、澄清度、含硫量、胶强度，非常感谢！

[size=10px][b]一、琼脂糖凝胶电泳原理[/b] 琼脂糖凝胶电泳是一种重要的分子生物学研究方法，?它利用琼脂糖凝胶的网络结构，?通过电场作用使带电颗粒（?如DNA或RNA）?在凝胶中移动，?根据分子大小和电荷性质的不同实现分离。?这种技术不仅操作简单迅速，?而且具有高分辨率，?因此在基因操作中扮演着关键角色，[font='PingFang SC']其[b]原理主要基于DNA分子的两大特性：电荷效应和分子筛效应。[/b][/font] ?琼脂糖是一种天然的长链状聚合分子，它在沸水中溶解，当温度降至45℃时开始凝固并形成多孔刚性立体网状结构，其孔径的大小取决于琼脂糖的浓度。 [b]分子筛效应[/b]指的是琼脂糖凝胶由琼脂糖分子交联形成的网状结构，其孔径大小与琼脂糖浓度成反比。当DNA分子通过凝胶时，会受到凝胶孔径的阻碍。较小的DNA片段可以通过凝胶孔隙，而较大的DNA片段则会被阻挡，导致迁移速率降低。?? [/size][align=center][size=10px] [/size][/align][size=10px][b]电荷效应[/b]指的是DNA分子在碱性条件下（pH7）会电离，带负电荷。当DNA样品置于电场中时，在外加电场的作用下受到电场力的作用，向正极方向移动。DNA分子的迁移速率与其所带的电荷量成正比，而电荷量又与DNA片段的长度成正比。因此，在相同电场条件下，较长的DNA片段迁移速率较慢，而较短的DNA片段迁移速率较快。不同DNA的分子量大小及构型各不相同，因此它们在电泳中的迁移率也会有所不同，从而可分离出不同的区带。[b]为什么核酸条带显示荧光？[/b]主要便于观察，对核酸进行了染色。溴化乙锭EB是一种扁平状分子，在紫外光照射下能发射荧光。当EB与DNA分子形成EB-DNA复合物后，其发射的荧光强度比游离状态的EB提高10倍以上，且荧光强度与DNA的含量呈正比。 [b]二、?琼脂糖凝胶电泳的详细操作步骤（1%琼脂糖凝胶电泳为例） [font='Times New Roman', 'serif']1.安装制胶模具[/font][font='Times New Roman','serif']：[/font][/b]利用电泳托盘，安装制胶模具，水平放置于试验桌上。 [b][font='Times New Roman', 'serif']2.[/font]制备琼脂糖凝胶：[/b]将琼脂糖粉末溶解于缓冲液中，加热煮沸，冷却后凝固成凝胶。（根据电泳所需要的分辨率准备琼脂糖-电泳缓冲液凝胶溶液）[font='Times New Roman','serif'](1)[/font]称取[font='Times New Roman','serif']1g[/font]琼脂糖，放入盛有[font='Times New Roman','serif']100mL 0.5×TBE[/font]缓冲液的[font='Times New Roman','serif']500mL[/font]三角瓶中，摇匀用天平称量其重量，摇匀。在微波炉中，使琼脂糖完全溶解，放回天平上，加入蒸馏水补齐至初始重量。冷却至不烫手([font='Times New Roman','serif']55℃[/font]左右)，加入[font='Times New Roman','serif']100μL[/font][font='Times New Roman','serif']0.5mg/mL EB[/font]溶液(终浓度为[font='Times New Roman','serif']0.5 μg/mL[/font])，或加入[font='Times New Roman','serif']5-10μL[/font][font='Times New Roman','serif']StarGreen DNA Dye(GenStar)[/font]，摇匀。 [font='Times New Roman','serif'](2) [/font]将凝胶溶液倒入安装好的制胶模具中，凝胶厚度应在[font='Times New Roman','serif']3-5mm[/font]。 [font='Times New Roman','serif'](3) [/font]选择合适的梳子，梳子的插入深度应使齿的底部和板的表面距离在[font='Times New Roman','serif']0.5[/font]到[font='Times New Roman','serif']1.0mm[/font]。要检查梳子齿下方或之间是否有气泡，在室温下冷却凝固。 [font='Times New Roman','serif'](4) [/font]待凝胶充分凝固后，垂直向上小心拔出梳子，以保证点样孔完好。 [font='Times New Roman','serif'](5)[/font]将凝胶置入电泳槽中，加入[font='Times New Roman','serif']0.5×TBE[/font]缓冲液[font='Times New Roman','serif']，以浸没凝胶约1mm为合适。[/font] [/size] [size=10px][b][font='Times New Roman','serif']3[/font][font='Times New Roman','serif'].[/font]制备DNA样品：[/b]将DNA样品与上样缓冲液混合。[/size] [size=10px]把DNA样品和上样缓冲液混合，利用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]移液枪[/color][/url]把电泳样品加到没入缓冲液中凝胶槽中，在凝胶的两侧样品槽内加入合适的分子量标准品。[/size] [size=10px]上样量的多少根据样品中DNA片断的多少和大小而定，已知浓度的DNA用于估测样品质粒DNA的浓度。 [b][font='Times New Roman','serif']4.[/font]电泳：[/b]将DNA样品加载到凝胶上的样品孔中，在电场的作用下进行电泳。[/size] [size=10px]盖上电泳槽的盖子，正确连结电泳槽上的导线。电泳电压以正负电极的距离的一到五倍为合适（1到5V/cm）。如果电泳线连接正确，那么在进行电泳时可以看到有气泡从电泳槽内电极导线处产生，同时，在几分钟后，可见溴酚蓝条带从负极向正极移动，从上样槽内移入胶体。[/size] [size=10px][b]5.观察：[/b]当核酸样品移动到距离胶板下沿约1cm处时，停止电泳。电泳结束后，利用紫外灯观察DNA片段的迁移情况。当DNA样品在凝胶内移动到合适的距离时，关闭电源，去除电泳导线和电泳槽盖子。在室温下，用电泳缓冲液或水配制的EB溶液(0.5 μg/ml)对凝胶进行染色[b][font=-apple-system, helvetica, sans-serif]。[/font] 三、琼脂糖凝胶电泳的主要应用[/b] [/size] [size=10px][b]1.DNA片段的鉴定：[/b]通过比较DNA片段的迁移距离，与标准品进行对照，可以判断DNA片段的大小。[/size] [size=10px][b]2.DNA片段的分离：[/b]利用不同大小DNA片段的迁移速率差异，可以将DNA片段进行分离。[/size] [size=10px][b]3.DNA的纯化：[/b]通过电泳将目的DNA片段与其他杂质分离，得到纯化的DNA片段。（割胶回收）[/size] [size=10px][b]四、操作技巧和注意事项[/b][/size] [b][font='Times New Roman','serif'][size=10px]1.EB毒性[/size][/font][/b] [size=10px]EB是一种很强的诱变剂。在接触含有EB溶液时，应该全程戴手套和口罩。[/size] [size=10px]电泳中使用的溴化乙锭（EB）为中度毒性、强致癌性物质，务必小心，勿沾染于衣物、皮肤、眼睛、口鼻等。所有操作均只能在专门电泳区域操作，戴一次性手套，并及时更换。[/size] [b][font='Times New Roman','serif'][size=10px]2. 加热熔化琼脂糖[/size][/font][/b] [size=10px]用微波炉加热熔化琼脂糖时，溶液体积不能超过三角瓶容量的1/3，以免煮沸时溶液溢出。同时，琼脂糖必须完全熔化，否则可能导致电泳图像模糊不清。[/size] [b][font='Times New Roman','serif'][size=10px]3.凝胶厚度[/size][/font][/b] [size=10px]凝胶的厚度一般为4-6nm，若太厚可能会影响检测的灵敏度。待凝胶充分凝固后才能拔出梳子，以保证点样孔形状完好，防止漏样。[b][font='Times New Roman','serif']4.上样[/font][/b][/size] [size=10px]上样时，须先除去点样孔中的气泡，并且加样操作需小心谨慎，以免漏样或损坏胶孔。[/size] [b][font='Times New Roman','serif'][size=10px]5.电泳电压[/size][/font][/b] [size=10px]选择适当的电泳运行条件很重要，包括电压和距离。推荐的电压范围是4-6V/cm，电压太低会降低迁移率，电压太高会降低分辨率。[/size]

各位大哥，电泳仪怎么样维护比较好（主要做琼脂糖凝胶电泳的），还有一些注意事项的？比如……

各位大家好！可以告知琼脂糖介质的使用方法吗？谢谢！我这里有DEAE CM Q SP的，以及凝胶过滤的！

请问下哪位大神知道，用什么方法和设备可以测琼脂糖的分子量？或者哪里有这种设备可以开展检查服务的，谢谢！

琼脂糖电泳步骤之超级基础篇一、电泳前准备准备内容作用1.刷干净电泳制胶的梳子，板子，槽子，蒸馏水洗净晾干防止不必要的重复污染，减少外来的污染。梳子干净有利于梳孔的形成。2.检查电泳槽，根据情况更换buffer排除电泳槽的电极接触不良，确保buffer的缓冲能力，减少污染。3.根据DNA的分离范围选择合适的胶浓度并记录达到较好的分离效果，防止样过快跑出胶或者是过慢浪费时间。4.计算agarose的用量和制胶 buffer的用量记录，胶最终越薄越好。实验记录备查 二、制胶步骤注意事项1.称量agarose和bufferBuffer不要用成H2O，称量相对准确2.融胶，加热到胶产生大量的气泡时，拿出摇匀，继续加热到完全溶解，拿出摇匀，再加热到沸腾。非常热，小心烫手，另外注意不要加热过度使胶冲出瓶子。因此注意选择起码为胶体积2倍以上的瓶子。保证胶混匀和完全溶解，减少可能因此引起的胶中孔径不均匀影响分离效果。3.倒胶，可用水浴的办法使胶冷却到60度左右，即手可以握住瓶子的温度，沿着制胶板的一侧，缓缓地一次性倒入。梳子最好是预先放好并固定的，注意梳孔的体积能点的下所有的样。用枪头赶掉气泡。制胶的桌面相对水平。倒胶时尽量减少气泡的产生。EB如果在制胶时加入，在60度左右时加入，使终浓度为0.5ug/ml。不宜过低，染色成像不明显；不宜过高，导致背景太深。摇匀要沿着瓶壁摇动，尽量减少气泡产生的可能性。高浓度胶例如2%以上的EB很难摇匀，而且凝的速度也相对快，强烈建议跑完胶之后再用EB染色。4.室温凝胶30分钟过程中不要碰到梳子，尽量保持胶的位置不移动。时间不宜过久，导致胶干燥变形；不宜过短，影响胶内部孔径形成。5.拔梳子，放入电泳槽。缓缓地将梳子垂直从梳孔拔出，尽可能使梳子是同时从各个胶孔拔出的。暂时不用的胶最好放入电泳槽电泳液中浸泡。电泳液要浸没胶1mm。 三、上样电泳[

1.体系配制时候最关键的几个试剂一定要确定它们还有效、或者还没被污染：引物，酶，超纯水。这些东西最好自己收好，写上个人的名字放好，冰盒上记得带上橡皮筋，这样就不会因为别人翻冰箱时候把你的冰盒碰散了，试剂都碰掉。否则，你的试剂被污染了，到时候阴性对照狂出条带，再去找污染源很麻烦。而且配置体系时候要注意保持实验区的干净，事先可用小喷壶进行酒精喷雾，固定空气中的DNA，而且全程要戴手套，避免污染体系。2.pcr体系要摸准，最好用人家都做得很多的老体系来上手。3.要想得到漂亮的电泳图，可以在PCR开始时候就把胶倒上（前提是你的PCR总时间在1.5小时左右，并且1.5小时候之后你还在实验室.），让凝胶凉着，这样凝胶的上样孔会比较规则，胶体里面的其本身的孔径也会较规则。如果你要第二天再跑胶，千万记得把PCR完毕的样本放入4℃保存。第二天做时候建议把胶凉上25分钟左右。4.电泳上样时候建议使用排枪上样，不仅快速而且样本加到胶孔里的速度一致。当然，排枪上样最好选用进口枪头，国产枪头就不要想了。5.不管电泳室使用的频率高还是低，我都建议每次电泳时候更换电泳液，避免出现“︿”形条带。

1.体系配制时候最关键的几个试剂一定要确定它们还有效、或者还没被污染：引物，酶，超纯水。这些东西最好自己收好，写上个人的名字放好，冰盒上记得带上橡皮筋，这样就不会因为别人翻冰箱时候把你的冰盒碰散了，试剂都碰掉。否则，你的试剂被污染了，到时候阴性对照狂出条带，再去找污染源很麻烦。而且配置体系时候要注意保持实验区的干净，事先可用小喷壶进行酒精喷雾，固定空气中的DNA，而且全程要戴手套，避免污染体系。2.pcr体系要摸准，最好用人家都做得很多的老体系来上手。3.要想得到漂亮的电泳图，可以在PCR开始时候就把胶倒上（前提是你的PCR总时间在1.5小时左右，并且1.5小时候之后你还在实验室.），让凝胶凉着，这样凝胶的上样孔会比较规则，胶体里面的其本身的孔径也会较规则。如果你要第二天再跑胶，千万记得把PCR完毕的样本放入4℃保存。第二天做时候建议把胶凉上25分钟左右。4.电泳上样时候建议使用排枪上样，不仅快速而且样本加到胶孔里的速度一致。当然，排枪上样最好选用进口枪头，国产枪头就不要想了。5.不管电泳室使用的频率高还是低，我都建议每次电泳时候更换电泳液，避免出现“︿”形条带。

请问下哪位大神知道，用什么方法和设备可以测琼脂糖的分子量？或者哪里有这种设备可以开展检查服务的，谢谢！

请问有谁知道怎么可以让琼脂凝胶溶化，不用加热的方法。有没有什么化学药品能溶琼脂的？ 谢谢啦！

符合WHO、PulseNet网络标准文件规定的PFGE专用琼脂糖粉是哪些个品牌？

凝胶过滤填料的类型及性质 具有分子筛作用的物质很多，如浮石、琼脂、琼脂糖、聚乙烯醇、聚丙烯酰胺、葡聚糖凝胶等。层析用凝胶都是三维空间的网状高聚物，有一定的孔径和交联度。它们不溶于水，但在水中有较大的膨胀度，具有良好的分子筛功能。它们可分离的分子大小的范围广，相对分子质量在102～108范围之间。在柱层析分离中常用的凝胶有以下几类: 1.交联葡聚糖凝胶 交联葡聚糖凝胶的商品名称为Sephadex，由葡聚糖和3-氯-1.2-环氧丙烷(交联剂)以醚键相互交联而形成具有三维空间多孔网状结构的高分子化合物。交联葡聚糖凝胶，按其交联度大小分成8种型号如表3所示。交联度越大，网状结构越紧密，孔径越小，吸水膨胀就愈小，故只能分离相对分子质量较小的物质；而交联度越小，孔径就越大，吸水膨胀大，则可分离相对分子质量较大的物质。各种型号是以其吸水量(每g干胶所吸收的水的质量)的10倍命名，如，Sephadex G–25表示该凝胶的吸水量为每g干胶能吸2.5克水。在SephadexG–25及G–50中分别引入羟丙基基团，即可构成LH型烷基化葡聚糖凝胶。 表3 Sephadex1的种类与特性型号分离范围（分子量）吸水量（ml/g）最小溶胀时（h）床体积（ml）/（mg）20℃～25℃100℃G10＜7001.0±0.1312～3G15＜1 5001.5±0.2312.5～3.5G25＜5 0002.5±0.2314～6G501500～20 0008.0±0.3319～11G753 000～70 0007.5±0.524112～15G1004 000～15 00010.0±1.072115～20G1505 000～800 00015.0±1.572120～30G2005 000～30 000020.0±2.072130～40 交联葡聚糖凝胶在水溶液、盐溶液、碱溶液、弱酸溶液和有机溶剂中较稳定，但当暴露于强酸或氧化剂溶液中，则易使糖甘键水解断裂。在中性条件下，交联葡聚糖凝胶悬浮液能耐高温，用120℃消毒10分钟而不改变其性质。如要在室温下长期保存，应加入适量防腐剂，如氯仿、叠氮钠等，以免微生物生长。 交联葡聚糖凝胶由于有羧基基团，故能与分离物质中的电荷基团(如碱性蛋白质)发生吸附作用，但可借助提高洗脱液的离子强度得以克服。因此在进行凝胶层析时，常用含有NaCl的缓冲溶液作洗脱液。交联葡聚糖凝胶可用于分离蛋白质、核酸、酶、多糖、多肽、氨基酸、抗菌素，也可用于高分子物质样品的脱盐及测定蛋白质的相对分子质量。 2.琼脂糖凝胶 琼脂糖的商品名称有Sepharose(瑞典)、Bio-gelA(美国)、Segavac(英国)、Gelarose(丹麦)等多种，因生产厂家不同名称各异。琼脂糖是由D-半乳糖和3，6位脱水的L-半乳糖连接构成的多糖链，在温度10O℃时呈液态，当下降至45℃以下时，它们之间相互连接成线性双链单环的琼脂糖；再凝聚即呈琼脂糖凝胶。商品除Segavac外，都制备成珠状琼脂糖凝胶。琼脂糖凝胶按其浓度不同，分为Sepharose 2B(浓度为2％)、4B(浓度为4％)及6B(浓度为6％)。Sepharose与1，3-二溴异丙醇在强碱条件下反应，即生成CL型交联琼脂糖，其热稳定性和化学稳定性均有所提高，可在广泛pH溶液(pH3～14)中使用。通常的Sepharose只能在pH4.5～9.0范围内使用。琼脂糖凝胶在干燥状态下保存易破裂，故一般均存放在含防腐剂的水溶液中。 琼脂糖凝胶的机械强度和筛孔的稳定性均优于交联葡聚糖凝胶。琼脂糖凝胶用于柱层析时，流速较快，因此是一种很好的凝胶层析载体。

市面上出售琼脂糖填料的公司很多啊，不知道那家的比较好，有求各位了

请教大家，琼脂凝胶的孔径怎么测？还有它的分子链长？谢谢帮助！

凝胶电泳（英语：Gel electrophoresis）或称胶体电泳 是一大类技术，被科学工作者用于分离不同物理性质（如大小、形状、等电点等）的分子。凝胶电泳通常用于分析用途，但也可以作为制备技术，在采用某些方法（如质谱(MS)、聚合酶链式反应(PCR)、克隆技术、DNA测序或者免疫印迹）检测之前部分提纯分子。凝胶电泳仪 - 使用方法凝胶电泳被广泛用于分子生物学、遗传学和生物化学：1.大的DNA或者RNA分子通常利用琼脂糖凝胶电泳（agarose gel electrophoresis）分离，也可以使用聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）。2.蛋白质的凝胶电泳通常在加入十二烷基硫酸钠的聚丙烯酰胺凝胶中进行（SDS-PAGE），或者非变性凝胶电泳，或二维电泳。 SDS-PAGE 蛋白质凝胶电泳图。 3.毛细管电泳 　4.酶谱法（zymography） 5.变性梯度胶凝电泳（Denaturing Gradient Gel Electrophoresis，DGGE） 琼脂糖和聚丙烯酰胺可以制成各种形状、大小和孔隙度。琼脂糖凝胶分离DNA片度大小范围较广,不同浓度琼脂糖凝胶可分离长度从200bp至近50kb的DNA片段。琼脂糖通常用水平装置在强度和方向恒定的电场下电泳。聚丙烯酰胺分离小片段DNA(5-500bp)效果较好,其分辩力极高,甚至相差1bp的DNA片段就能分开。聚丙烯酰胺凝胶电泳很快,可容纳相对大量的DNA,但制备和操作比琼脂糖凝胶困难。聚丙烯酰胺凝胶采用垂直装置进行电泳。目前,一般实验室多用琼脂糖水平平板凝胶电泳装置进行DNA电泳。 琼脂糖主要在DNA制备电泳中作为一种固体支持基质,其密度取决于琼脂糖的浓度。在电场中,在中性pH值下带负电荷的DNA向阳极迁移,其迁移速率由下列多种因素决定:1、 DNA的分子大小。度琼脂糖凝胶中的迁移速率与DNA分子量对数成反比，分子越大则所受阻力越大，也越难于在凝胶孔隙中蠕行，因而迁移得越慢。 2、 琼脂糖浓度 一个给定大小的线状DNA分子,其迁移速度在不同浓度的琼脂糖凝胶中各不相同。DNA电泳迁移率的对数与凝胶浓度成线性关系。凝胶浓度的选择取决于DNA分子的大小。分离小于0.5kb的DNA片段所需胶浓度是1.2-1.5%,分离大于10kb的DNA分子所需胶浓度为0.3-0.7%, DNA片段大小间于两者之间则所需胶浓度为0.8-1.0%。 3、 DNA分子的构象DNA分子处于不同构象时,它在电场中移动距离不仅和分子量有关,还和它本身构象有关。相同分子量的线状、开环和超螺旋DNA在琼脂糖凝胶中移动速度是不一样的,超螺旋DNA移动最快,而开环双链DNA移动最慢。如在电泳鉴定质粒纯度时发现凝胶上有数条DNA带难以确定是质粒DNA不同构象引起还是因为含有其他DNA引起时,可从琼脂糖凝胶上将DNA带逐个回收,用同一种限制性内切酶分别水解,然后电泳,如在凝胶上出现相同的DNA图谱,则为同一种DNA。

第一节 概 述一. DNA的限制性内切酶酶切分析限制性内切酶能特异地结合于一段被称为限制性酶识别序列的DNA序列之内或其附近的特异位点上，并切割双链DNA。它可分为三类:Ⅰ类和Ⅲ类酶在同一蛋白质分子中兼有切割和修饰(甲基化)作用且依赖于ATP的存在。Ⅰ类酶结合于识别位点并随机的切割识别位点不远处的DNA，而Ⅲ类酶在识别位点上切割DNA分子，然后从底物上解离。Ⅱ类由两种酶组成: 一种为限制性内切核酸酶(限制酶)，它切割某一特异的核苷酸序列; 另一种为独立的甲基化酶，它修饰同一识别序列。Ⅱ类中的限制性内切酶在分子克隆中得到了广泛应用，它们是重组DNA的基础。绝大多数Ⅱ类限制酶识别长度为4至6个核苷酸的回文对称特异核苷酸序列(如EcoRⅠ识别六个核苷酸序列:5'- G↓AATTC-3')，有少数酶识别更长的序列或简并序列。Ⅱ类酶切割位点在识别序列中，有的在对称轴处切割，产生平末端的DNA片段(如SmaⅠ:5'-CCC↓GGG-3');有的切割位点在对称轴一侧，产生带有单链突出末端的DNA片段称粘性未端， 如EcoRⅠ切割识别序列后产生两个互补的粘性末端。5'…G↓AATTC…3' →5'… G AATTC…3'3'…CTTAA↑G …5' →3'… CTTAA G…5'DNA纯度、缓冲液、温度条件及限制性内切酶本身都会影响限制性内切酶的活性。大部分限制性内切酶不受RNA或单链DNA的影响。当微量的污染物进入限制性内切酶贮存液中时，会影响其进一步使用，因此在吸取限制性内切酶时，每次都要用新的吸管头。如果采用两种限制性内切酶，必须要注意分别提供各自的最适盐浓度。若两者可用同一缓冲液，则可同时水解。若需要不同的盐浓度，则低盐浓度的限制性内切酶必须首先使用，随后调节盐浓度，再用高盐浓度的限制性内切酶水解。也可在第一个酶切反应完成后，用等体积酚/氯仿抽提，加0.1倍体积3mol/L NaAc和2倍体积无水乙醇，混匀后置-70℃低温冰箱30分钟，离心、干燥并重新溶于缓冲液后进行第二个酶切反应。DNA限制性内切酶酶切图谱又称DNA的物理图谱，它由一系列位置确定的多种限制性内切酶酶切位点组成，以直线或环状图式表示。在DNA序列分析、基因组的功能图谱绘制、DNA的无性繁殖、基因文库的构建等工作中，建立限制性内切酶图谱都是不可缺少的环节，近年来发展起来的RFLP(限制性片段长度多态性)技术更是建立在它的基础上。构建DNA限制性内切酶图谱有许多方法。通常结合使用多种限制性内切酶，通过综合分析多种酶单切及不同组合的多种酶同时切所得到的限制性片段大小来确定各种酶的酶切位点及其相对位置。酶切图谱的使用价值依赖于它的准确性和精确程度。在酶切图谱制作过程中，为了获得条带清晰的电泳图谱，一般DNA用量约为0.5-1μg。限制性内切酶的酶解反应最适条件各不相同，各种酶有其相应的酶切缓冲液和最适反应温度(大多数为37℃)。对质粒DNA酶切反应而言， 限制性内切酶用量可按标准体系1μg DNA加1单位酶，消化1-2小时。但要完全酶解则必须增加酶的用量，一般增加2-3倍，甚至更多，反应时间也要适当延长。二. 凝胶电泳琼脂糖或聚丙烯酰胺凝胶电泳是分离鉴定和纯化DNA片段的标准方法。该技术操作简便快速，可以分辨用其它方法（如密度梯度离心法）所无法分离的DNA片段。当用低浓度的荧光嵌入染料溴化乙啶(Ethidium bromide， EB)染色，在紫外光下至少可以检出1-10ng的DNA条带，从而可以确定DNA片段在凝胶中的位置。此外，还可以从电泳后的凝胶中回收特定的DNA条带，用于以后的克隆操作。琼脂糖和聚丙烯酰胺可以制成各种形状、大小和孔隙度。琼脂糖凝胶分离DNA片度大小范围较广，不同浓度琼脂糖凝胶可分离长度从200bp至近50kb的DNA片段。琼脂糖通常用水平装置在强度和方向恒定的电场下电泳。聚丙烯酰胺分离小片段DNA(5-500bp)效果较好，其分辩力极高，甚至相差1bp的DNA片段就能分开。聚丙烯酰胺凝胶电泳很快，可容纳相对大量的DNA，但制备和操作比琼脂糖凝胶困难。聚丙烯酰胺凝胶采用垂直装置进行电泳。目前，一般实验室多用琼脂糖水平平板凝胶电泳装置进行DNA电泳。琼脂糖主要在DNA制备电泳中作为一种固体支持基质，其密度取决于琼脂糖的浓度。在电场中，在中性pH值下带负电荷的DNA向阳极迁移，其迁移速率由下列多种因素决定:1、DNA的分子大小:线状双链DNA分子在一定浓度琼脂糖凝胶中的迁移速率与DNA分子量对数成反比，分子越大则所受阻力越大，也越难于在凝胶孔隙中蠕行，因而迁移得越慢。2、琼脂糖浓度一个给定大小的线状DNA分子，其迁移速度在不同浓度的琼脂糖凝胶中各不相同。DNA电泳迁移率的对数与凝胶浓度成线性关系。凝胶浓度的选择取决于DNA分子的大小。分离小于0.5kb的DNA片段所需胶浓度是1.2-1.5%，分离大于10kb的DNA分子所需胶浓度为0.3-0.7%， DNA片段大小间于两者之间则所需胶浓度为0.8-1.0%。

一）聚丙烯酰胺凝胶： 是一种人工合成凝胶，是以丙烯酰胺为单位， 由甲叉双丙烯酰胺交联成的，经干燥粉碎或加工成形制成粒状，控制交联剂的用量可制成各种型号的凝胶。交联剂越多，孔隙越小。聚丙烯酰胺凝胶的商品为生物胶－P （Bio-Gel P），由日本tosoh的TSKGEL的pw系列，适合蛋白和多糖的纯化。（二）交联葡聚糖凝胶（Sephadex）⑴Sephadex G交联葡聚糖的商品名为Sephndex，不同规格型号的葡聚糖用英文字母G表示，G后面的阿拉伯数为凝胶得水值的10倍。例如，G-25为每克凝胶膨胀时吸水2.5克，同样G-200克每克千胶吸水20克。交联葡聚糖凝胶的种类有G-10，G-15，G-25，G-50，G-75，G-100，G-150，和G-200。因此，“G”反映，凝胶的交联程度，膨胀程度及分部范围。⑵Sephadex LH-20，是—Sephadex G-25的羧丙基衍生物， 能溶于水及亲脂溶剂，用于分离不溶于水的物质。（三）琼脂糖凝胶： 商品名很多，常见的有，Sepharose（瑞典，pharmacia ），Bio-Gel-A（美国Bio-Rad）等。琼脂糖凝胶是依靠糖链之间的次级链如氢键来维持网状结构，网状结构的疏密依靠琼脂糖的浓度。一般情况下，它的结构是稳定的，可以在许多条件下使用（如水，pH4-9范围内的盐溶液）。琼脂糖凝胶在40℃以上开始融化，也不能高压消毒，可用化学灭菌活处理。（四）聚苯乙烯凝胶 商品为Styrogel ， 具有大网孔结构， 可用于分离分子量1600到40，000，000的生物大分子，适用于有机多聚物，分子量测定和脂溶性天然物的分级，凝胶机械强度好，洗脱剂可用甲基亚砜。 [b]8[/b]

关键词：单细胞凝胶电泳目的：为便于各室单细胞凝胶电泳试验结果的可比性背景知识：略原理：在细胞核中，DNA是环状附着在核基质上，细胞裂解过程中，核基质被溶解、抽提，DNA的结构则未发生变化。如果DNA链上存在缺口，则使DNA超螺旋变的松弛，DNA环向外展，同时由于暴露了阴电荷，在电场力的作用下，松动的DNA环向阳极迁移，但是由于这种松动的DNA环一端仍附着于核DNA，其迁移距离受到限制，因此尾长并不总是真实反映链缺口的多少。实际应当依靠尾长与尾部的荧光强度同时来进行分析。主体内容：操作步骤见下文主要参考文献：略操作步骤：1. 分离制备单细胞悬液：（1） 体外培养的细胞株：用胰酶消化，吹打成单细胞悬液（2） 体内脏器细胞：处死动物，取出脏器，于Hanks’液中制备成单个细胞悬液。2. 胶板制备：（1） 取20~50μl于56℃水浴中保温的0.5%普通熔点琼脂糖，铺于磨沙载玻片上，形成底胶。（2） 取100~150μl 0.5%普通熔点琼脂糖加在底胶上，再于其上加盖玻片，4℃冷凝10分钟。（3） 取下盖片，取50~100μl于37℃水浴中保温的1.0%的低熔点琼脂糖与50~100μl细胞悬液（105个细胞/ml）混匀，立即铺片，加上盖玻片，4℃冷凝10分钟。（4） 去掉盖玻片，取70~100μl于37℃水浴中保温的0.5%的低熔点琼脂糖铺片，加盖玻片，4℃冷凝。3. 细胞裂解与电泳：（1） 将制备好的胶板去掉盖玻片后，浸于4℃预冷的细胞裂解液中，4℃裂解1小时。（2） 取出胶板，放入电泳槽中，浸泡在电泳液中解旋20分钟。（3） 4℃电泳20分钟（25V，300mA）。4. 中和与染色：（1） 电泳结束，将胶板浸泡于中和液中，每次15分钟，共中和两次，注意更换中和液。（2） 取出胶板，置于染色架上，滴加5μg/ml的PI，暗处染色20分钟。（3） 蒸馏水脱色15分钟。5. 镜检和分析：（1） 在荧光显微镜下观察，绿光激发吸收滤片590nm。必要时照相记录。（2） 记数观察的细胞，记录彗星细胞出现的频率，用目镜测微尺测头长与全长，计算核DNA迁移距离。* * * * *使用两层凝胶法，经裂解、DNA解旋、电泳和中和得到湿琼脂糖凝胶片。将湿琼脂糖凝胶片置于冰冷无水乙醇中脱水10分钟，后置于空气中自发干燥。每人制备2张琼脂糖凝胶片。全部操作在采血后8小时内完成，操作过程中注意避光。脱水干燥的琼脂糖凝胶片装于含有干燥剂的载片盒中运回实验室。使用50μl 30μM的溴乙锭溶液染色、照相。使用单细胞凝胶电泳软件分析所有照片，每人随机测量100个以上细胞的尾长和olive尾矩，以尾长和olive尾矩的算术均数代表个体DNA损伤情况。

脉冲场凝胶电泳1）高分子量DNA琼脂糖凝胶块制备和加工1．收集10ml全血，加入30ml细胞裂解液。置冰浴中至少20min直至红细胞完全溶解。2．2000r/min离心10min，移去红色上清液，再次用细胞裂解液洗涤细胞，然后用PBS重悬细胞。3．稀释单细胞悬液并取一小份用Neubauer腔计数细胞。4．用PBS重悬细胞，以达到40μl PBS中含1百万个细胞比例（1百万个二倍体哺乳动物大约含有基因组DNA 10μg）5．用PBS配制2％浓度低熔点琼脂糖溶液并保持在50℃。6．将等体积（各1ml）细胞悬液与琼脂糖溶液于室温下混匀，立即倒入凝胶块模具中。7．静置20min让琼脂糖固化，用无菌塑料杯（通常用作划菌）将凝胶块自模具中取出并置入蛋白酶缓冲液中，加入2mg/ml的蛋白酶K。8．将带有凝胶块的蛋白酶K缓冲液于50℃保持2～3天。每个盛有50ml蛋白酶缓冲液的Falcon管可容纳多达100个凝胶块。9．蛋白酶K消化后，可将凝胶块保留在此缓冲液或0.5mol/L EDTA溶液中保存于4℃。10． 此外，继续将凝胶块用高压消毒过的TE缓冲液冲洗数遍的步骤。11． 将凝胶块放入装有TE及0.04mg/ml PMSF溶液的Falcon试管中，灭活残留的蛋白酶K。12． 室温下用TE溶液漂洗凝胶块数次，将凝胶块放入另一干净的试管，可直接用于酶切反应或用0.5mol/L EDTA，（pH8.0）4℃保存凝胶块。13． 若用EDTA保存凝胶块，取出后应用TE溶液室温下漂洗30 min×2次。2）大小标准物的制备 l λ多联体1．以TE缓冲液悬浮λ多联体（Boehringer MA宝灵曼公司产品），浓度为4μg/40μl。2．用等体积TE配制的2％低熔点琼脂糖（温度保持在45℃）混匀。3．移去混合液注入预冷的凝胶块模具中。4．室温下用TE及100 mmol/L NaCl溶液温育2天。l 酵母染色体1．从YPD（酵母提取物，蛋白胨和葡萄糖）培养基瓶皿中挑选单一克隆加入10ml YPD预培养的肉汤中，30℃下剧烈震荡生长24小时，然后加入200ml YPD肉汤，剧烈振荡24～48h（产量大约100块）。2．4000×g转速，离心10min，然后用50mmol/L EDTA/10 mmol/L Tris-HCl(pH7.5)溶液悬浮。3．仍以4000×g转速离心10min，再用SCE[1 mol/L 山梨醇，0.1mol/L枸椽酸钠，pH5.8及10 mmol/L EDTA (pH7.5)]溶液重悬。4．取稀释后的细胞悬液用Neubauer腔计数。5．溶液短暂离心后，再用SCE重悬细胞，使40μl SCE溶液中含5×107个细胞（相当于80μl体积的模块中含有5×107个细胞）。6．溶液与0.1mg/ml酵母扣糖酶100T和100mmol/Lβ-巯基乙醇混匀，37℃保温15～30min。7．细胞悬液与等体积的SCE配制的2％低熔点琼脂糖凝胶混匀，保持在50℃。8．将混合物移注入预冷的凝胶块模具中。9．凝胶块用含10 mmol/L二硫苏糖醇的SCE溶液37℃下振荡温育1～2小时。10． 将凝胶块移入蛋白酶缓冲液中，加入2mg/ml蛋白酶K，50℃温育48h。11． 用50 mmol/L EDTA/10 mmol/L Tris-HCl(pH7.5)溶液洗涤凝胶块3次，每次20min。12． 凝胶块可用此混合液于4℃保存或不用漂洗直接装载入凝胶中。3）琼脂糖凝胶块中DNA的限制性内切酶消化1．应使用消毒溶液及戴无菌手套以免DNA降解。2．在Falcon试管中用1×TE溶液漂洗凝胶块20min 3次，以去除EDTA。3．混合：酶反应缓冲液（高、中或低盐缓冲液），100 mmol/L亚精胺（只用于高盐缓冲液状态），10～20单位的内切酶。20单位的内切酶就足以过夜完全消化10μg DNA。4．设立一个除内切酶成分外含有混合物各组分的阴性对照，以检查是否有非特异性DNA降解。5．将琼脂糖凝胶块加入反应混合溶液中：通常用消毒过的手术刀或套环将凝胶块移入。6．若两种内切酶所需缓冲液条件一致，可以同时或先后用两种不同的酶进行消化（先用低盐缓冲液的酶消化，再调整盐浓度）。倘若首次消化的酶要求50℃条件，在第二个酶消化时要换缓冲液。7．若要进行部分消化，则首先在同一温度和反应时间用1：10稀释的酶进行尝试。4）凝胶电泳1．将0.8％的琼脂糖在0.25×TBE中熔化后冷却至50～60℃，立即注入凝胶框架中，并插入梳子。2．凝胶固化后小心地拔出齿梳，用2把无菌手术刀将DNA凝胶块上样。若用不同内切酶消化凝胶块，则取不同样品时应将手术刀片烧灼后冷却。将DNA大小标志物上样至凝胶的两旁。3．用1％液态低熔点琼脂糖凝胶（0.25×TBE配制）密封狭槽。4．若有气泡存在，用注射器驱赶气泡。5．一旦密封的低熔点琼脂糖已固化（大约10min），可将凝胶搁入腔室，并用电泳缓冲液覆盖过胶面。6．应设定合适的电压及转换时间（参考《分子医学技术》84页表8.1）并开始电泳。两个不同电泳方向的电流应相等。7．电泳结束后，凝胶用0.25×TBE配制成的EB（0.4μg/ml）染色。8．用泵自槽中排除缓冲液，续以双蒸水冲洗电泳槽。9．凝胶成像：DNA在曝光的过程中可能会形成缺口。10． 用0.25mol/L HCl漂洗凝胶30min，让DNA脱嘌呤，并有利于转移。11． 凝胶用碱（变性溶液中）变性20min，两次，续以中性溶液1～5min。12． 采用标准Southern印迹方案将DNA转印至尼龙膜上。一般来说，印迹PFGE凝胶的时间较普通凝胶印迹时间长（约48h）。

[align=center][font='times new roman'][size=24px]2021.0[/size][/font][font='times new roman'][size=24px]7[/size][/font][font='times new roman'][size=24px].[/size][/font][font='times new roman'][size=24px]29[/size][/font][/align][align=center][/align][align=center][font='黑体'][size=20px]琼脂[/size][/font][/align][align=center][font='times new roman']陈珺宁[/font][/align][align=center][font='times new roman']（厦门大学化学化工学院）[/font][/align][font='times new roman']摘要：[/font][font='times new roman']琼脂是一种从某些海藻萃取的亲水胶体，在人们日常生产生活的各个领域中有广泛的应用。琼脂可以改善食品的质构，提升食品的品质，并且没有任何毒性，成为一种重要的食品添加剂，在食品工业中可以作为增稠剂、凝固剂、[/font][url=https://baike.baidu.com/item/%E6%82%AC%E6%B5%AE%E5%89%82][font='times new roman']悬浮剂[/font][/url][font='times new roman']、[/font][url=https://baike.baidu.com/item/%E4%B9%B3%E5%8C%96%E5%89%82][font='times new roman']乳化剂[/font][/url][font='times new roman']、保鲜剂和稳定剂等，被广泛应用。本文将对琼脂的理化性质、提取工艺与深加工、限量、标准、检测、应用等进行逐一介绍，有助于对该食品添加剂的了解。[/font][font='times new roman']关键词：[/font][font='times new roman']食品添加剂，琼脂，性质，提取，限量，[/font][font='times new roman']标准，检测，应用[/font][font='times new roman'][size=18px]0 [/size][/font][font='times new roman'][size=18px]引言[/size][/font][font='times new roman']琼脂（[/font][font='times new roman']agar[/font][font='times new roman']），又称琼胶、洋菜、洋粉或冻粉等，根据中华人民共和国药典记载，琼脂系自石花莱[/font][font='times new roman']Gelidium amansii Lamx[/font][font='times new roman']或其他数种红藻类植物中浸出并经脱水干燥的粘[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质[/color][/url]；按照美国药典定义，琼脂是一种从[/font][font='times new roman']Rhodophyceae[/font][font='times new roman']类的某些海藻萃取的亲水胶体。琼脂由琼脂糖和琼脂胶组成，是一种由半乳糖和半乳糖衍生物构成的长链形多糖。其中，半乳糖残基上不含硫酸基、甲氧基、丙酮酸基等基团，可发生凝胶化的长链中性多糖是琼脂糖；半乳糖残基上含有这些基团，不发生凝胶化的长链酸性多糖是琼脂胶[/font][font='times new roman']。[/font][font='times new roman'] [/font][font='times new roman'][size=13px][1[/size][/font][font='times new roman'][size=13px]、[/size][/font][font='times new roman'][size=13px]2][/size][/font][font='times new roman'][size=18px]1 [/size][/font][font='times new roman'][size=18px]理化性质[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]1.1 [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]溶解性[/size][/font][font='times new roman'][size=16px] [/size][/font][font='times new roman'][size=16px][1~3][/size][/font][font='times new roman']琼脂在水中的溶解度与温度呈一定的正相关。常温下，高纯度琼脂不溶于水、无机溶剂和有机溶剂，只微溶于乙醇胺和甲酰胺；加热条件下，琼脂可溶于水形成溶液。在[/font][font='times new roman']95~100℃[/font][font='times new roman']并间歇式搅拌条件下，或在[/font][font='times new roman']100~120℃[/font][font='times new roman']高压釜中，易制取[/font][font='times new roman']0~5% [/font][font='times new roman']琼脂溶液和用于铸模的[/font][font='times new roman']8~14% [/font][font='times new roman']琼脂溶液。琼脂也可在沸腾的低浓度乙醇（[/font][font='times new roman']30~50%[/font][font='times new roman']）溶液中溶解。其他研究发现，琼脂可以溶解于多种溶剂。常温下，干琼脂可以吸水溶胀，其吸水率达[/font][font='times new roman']20[/font][font='times new roman']倍；加热至[/font][font='times new roman']95℃[/font][font='times new roman']可溶于水，极易分散形成中性溶胶，其中琼脂糖含量比例越大，凝胶强度越高。[/font][font='times new roman'][size=16px]1.2 [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]黏度[/size][/font][font='times new roman'][size=16px] [/size][/font][font='times new roman'][size=16px][1~3][/size][/font][font='times new roman']琼脂凝固能力强，黏度较低，其中石花莱琼脂具有极强凝固能力、低黏度，工业琼脂因在提取过程中受化学试剂破坏具有较低的黏度。琼脂水溶液（溶胶）的黏度受原料的种类和质量，提取和加工条件，琼脂浓度、温度、加入电解质种类等测量条件影响而不同。当[/font][font='times new roman']pH = 4.5~9[/font][font='times new roman']时[/font][font='times new roman']，黏度相对稳定；当[/font][font='times new roman']pH = 6.0~8.0[/font][font='times new roman']时，黏度受老化或离子强度影响有较小变化。开始凝胶化时，在温度一定的条件下，黏度随凝胶现象持续时间的延长而增大，最终形成凝胶。此外，琼脂溶液在高温、电解质、无机酸或酸性盐类等处理后，黏度明显下降。[/font][font='times new roman'][size=16px]1.3 [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]絮凝性[/size][/font][font='times new roman'][size=16px] [/size][/font][font='times new roman'][size=16px][1][/size][/font][font='times new roman']琼脂溶液中加入[/font][font='times new roman']10[/font][font='times new roman']倍体积乙醇、[/font][font='times new roman']2-[/font][font='times new roman']丙醇或丙酮，可以定量从其水溶液中絮凝析出；也可以用饱和硫酸钙、硫酸铵或硫酸镁溶液，使琼脂溶液发生盐析。常温下，絮凝析出的琼脂能溶于水或其他溶剂，电解质浓度越大、絮凝温度越高越难溶解，但除非在体系中加入水，否则琼脂不会[/font][font='times new roman']发生凝胶化形成凝胶。[/font][font='times new roman'][size=16px]1.4 [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]凝胶性与滞后性[/size][/font][font='times new roman'][size=16px] [/size][/font][font='times new roman'][size=16px][1~3][/size][/font][font='times new roman']琼脂具有凝胶性，即使琼脂溶液浓度低至[/font][font='times new roman']0.004%[/font][font='times new roman']，常温下仍能形成凝胶，不需要任何助凝剂。琼脂凝胶有许多物理化学特性：具有热可逆性；其熔化温度受琼脂凝胶浓度和平均分子量影响；凝胶强度受原料种类、化学环境（如浓度、离子强度及[/font][font='times new roman']pH[/font][font='times new roman']等）和提取方法等影响；具有优良的相容性，可与大多数多糖类树胶或蛋白质溶液互溶；放置过程中发生轻微且缓慢的老化。值得注意的是，在多糖类树胶中，只有琼脂的凝胶化温度低于其熔化温度。琼脂溶胶的凝固点在[/font][font='times new roman']32~43℃[/font][font='times new roman']之间，琼脂凝胶的熔点在[/font][font='times new roman']7[/font][font='times new roman']5~90℃[/font][font='times new roman']之间，熔点远高于凝固点被称为[/font][font='times new roman']“[/font][font='times new roman']滞后现象[/font][font='times new roman']”[/font][font='times new roman']。琼脂的许多用途基于其凝胶温度的高滞后性。[/font][font='times new roman']在相同浓度下，琼脂凝胶与其他可凝胶化的物质相比强度最大，其中低浓度凝胶可以保护分散体系、防止扩散作用和改善产品质地，高强度凝胶具有优良的弹性、强度、回复力、可逆性、相对透明性和相对渗透性等特性，均有一定的应用价值和市场前景。此外，琼脂凝胶存在较硬、易脆、粗糙、透明性较差和冷冻后脱水等缺点，但是可以通过与其他材料进行改善，比如与糊精、蔗糖等复合使用可以提高凝胶的强度，与卡拉胶复合使用可以提高弹性和柔软度，与明胶复合使[/font][font='times new roman']用可以提高凝胶的强度、透明度和黏弹性。[/font][font='times new roman'][size=16px]1.5 [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]非酸性降解与稳定性[/size][/font][font='times new roman'][size=16px] [1~3][/size][/font][font='times new roman']琼脂具有优良的稳定性，常温下很难降解，但大量黏度、衍射和凝胶强度实验与研究证明，在超声波、强[/font][font='times new roman']γ[/font][font='times new roman']射线辐射，及强烈搅拌和高温长时间处理后，琼脂的分子链发生断裂，导致琼脂分子量降低，部分理化性能恶化。此外，琼脂具有很强的抗酶解能力不会在人或动[/font][font='times new roman']物体内被酶解，绝大部分随排泄物排出体外。[/font][font='times new roman'][size=18px]2 [/size][/font][font='times new roman'][size=18px]提取与深加工[/size][/font][font='times new roman'][size=18px][4][/size][/font][font='times new roman'][size=16px]2.1 [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]琼脂提取工艺[/size][/font][font='times new roman']琼脂生产自石花莱[/font][font='times new roman']Gelidium amansii Lamx[/font][font='times new roman']或其他几种红海藻，在红海藻细胞壁中以碳水化合物（多[/font][font='times new roman']糖）的形式存在。[/font][font='times new roman'][size=13px][1] [/size][/font][font='times new roman']由于琼脂需求量的增加，琼脂提取工艺日益丰富和完善。目前，高温高压法、碱法、酶法辅助提取工艺应用较为广泛。[/font][font='times new roman']2.1.1 [/font][font='times new roman']高温高压法[/font][font='times new roman']高温高压法是琼脂提取的传统方法，主要流程为原料处理[/font][font='times new roman']→[/font][font='times new roman']浸泡[/font][font='times new roman'] → [/font][font='times new roman']煮胶[/font][font='times new roman'] → [/font][font='times new roman']过滤[/font][font='times new roman'] → [/font][font='times new roman']冷却[/font][font='times new roman'] → [/font][font='times new roman']脱水[/font][font='times new roman'] → [/font][font='times new roman']干燥[/font][font='times new roman']→[/font][font='times new roman']粉碎[/font][font='times new roman']→[/font][font='times new roman']包装。该提取工艺简单，琼脂分子破坏较少，提取率较高，但凝胶强度较低。高温高压法提取琼脂一般适用于硫酸基含量较低的原料，如石花莱。[/font][font='times new roman']2.1.2 [/font][font='times new roman']碱法提取工艺[/font][font='times new roman']碱法工艺常见有低温高碱、中温高碱和高温稀碱３种[/font][font='times new roman'], [/font][font='times new roman']主要流程为原料处理[/font][font='times new roman']→[/font][font='times new roman']碱处理[/font][font='times new roman']→[/font][font='times new roman']漂洗[/font][font='times new roman']→[/font][font='times new roman']酸处理[/font][font='times new roman']→[/font][font='times new roman']漂洗[/font][font='times new roman']→[/font][font='times new roman']漂白[/font][font='times new roman']→[/font][font='times new roman']漂洗[/font][font='times new roman']→ [/font][font='times new roman']煮胶[/font][font='times new roman'] → [/font][font='times new roman']过滤[/font][font='times new roman'] → [/font][font='times new roman']冷却[/font][font='times new roman'] → [/font][font='times new roman']脱水[/font][font='times new roman'] → [/font][font='times new roman']干燥[/font][font='times new roman'] → [/font][font='times new roman']粉碎[/font][font='times new roman']→[/font][font='times new roman']包装。中低温高碱法提取温度较低、生产工艺较易控制，但用碱量大、环境负担大、生产成本较高；高温稀碱法碱浓度较低，环境污染较小，但提取温度较高、生产工艺不易控制，且在高温条件下琼脂易被破坏，导致胶质流失、降低产率。目前，许多优化提取工艺条件的研究正在进行，以更好地利用碱法工艺提取琼脂。[/font][font='times new roman']2.1.3 [/font][font='times new roman']酶法辅助提取工艺[/font][font='times new roman']酶法辅助提取工艺是使用酶处理辅助碱法提取工艺，即利用纤维素酶在碱处理前或处理后作[/font][font='times new roman']用于藻体，加速破坏藻体的细胞壁，从而促进胶质溶出。酶法辅助提取工艺是对碱法提取琼脂的优化，可以提高琼脂的得率、凝胶强度，并且有效减少碱液和清洗水的用量，减轻环境负担。[/font][font='times new roman'][size=16px]2.2 [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]琼脂深加工[/size][/font][font='times new roman']琼脂具有分子量大、溶解性差等缺点，对琼脂进行适当处理，可以扩大其应用范围。琼脂深加工主要集中在利用琼脂提取琼脂糖和通过降解琼脂制备琼胶寡糖。[/font][font='times new roman']2.2.1 [/font][font='times new roman']琼脂糖提取[/font][font='times new roman']琼脂糖是琼脂的重要组成成分，提取方法主要有碘化钠法、乙酰化法、聚乙二醇法、十[/font][font='times new roman'] [/font][font='times new roman']六烷基氯化吡啶法（[/font][font='times new roman']CPC[/font][font='times new roman']）、二甲基亚砜法（[/font][font='times new roman']DMSO[/font][font='times new roman']）、[/font][font='times new roman']EDTA – Na[/font][font='times new roman'][size=13px]2[/size][/font][font='times new roman']法、[/font][font='times new roman']DEAE - [/font][font='times new roman']纤维素法、硫酸铵法、磷酸钠法、尿素法等，目的都是将琼脂中的硫琼脂和琼脂糖分离，纯化琼脂糖。[/font][font='times new roman']2.2.2 [/font][font='times new roman']琼胶寡糖制备[/font][font='times new roman']琼胶寡糖一般是指[/font][font='times new roman']DP[/font][font='times new roman']（[/font][font='times new roman']degree of polymerization[/font][font='times new roman']）为[/font][font='times new roman']2~10[/font][font='times new roman']的低聚糖[/font][font='times new roman'], [/font][font='times new roman']包括胶寡糖和新胶寡糖。琼胶寡糖具有重要的生理功能[/font][font='times new roman'], [/font][font='times new roman']在食品工业、医药工业、日用化工、生物工程等许多方面有广阔应用前景。[/font][font='times new roman'][size=13px][5] [/size][/font][font='times new roman']琼脂寡糖的制备方法主要有化学降解法和酶降解法，缪伏荣[/font][font='times new roman'][size=13px][5] [/size][/font][font='times new roman']和林坤城[/font][font='times new roman'][size=13px][4] [/size][/font][font='times new roman']等人对琼脂降解制备琼胶寡糖作出具体介绍。[/font][font='times new roman'][size=18px]3 [/size][/font][font='times new roman'][size=18px]限量[/size][/font][font='times new roman']根据食品标法查询网的查询结果[/font][font='times new roman']，未查明具体食品中琼脂的最大使用量，结果均为适量使用即可。[/font][font='times new roman'][size=18px]4 [/size][/font][font='times new roman'][size=18px]标准[/size][/font][font='times new roman'][size=18px][6][/size][/font][font='times new roman']根据中华人民共和国卫生部于[/font][font='times new roman']2010[/font][font='times new roman']年[/font][font='times new roman']12[/font][font='times new roman']月[/font][font='times new roman']21[/font][font='times new roman']日发布、于[/font][font='times new roman']2011[/font][font='times new roman']年[/font][font='times new roman']2[/font][font='times new roman']月[/font][font='times new roman']21[/font][font='times new roman']日实施的《食品安全国家标准[/font][font='times new roman'] [/font][font='times new roman']琼脂（琼胶）[/font][font='times new roman'] GB 1975—2010[/font][font='times new roman']》的标准，对感官要求、理化指标、产品规格等技术要求作出详细规定。[/font][font='times new roman'][size=16px]4.1 [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]感官要求[/size][/font][font='times new roman']根据《食品安全国家标准[/font][font='times new roman'] [/font][font='times new roman']琼脂（琼胶）[/font][font='times new roman'] GB 1975—2010[/font][font='times new roman']》规定，琼脂具有类白色或淡黄色的色泽、呈均匀条状或粉状、无异味。[/font][font='times new roman'][size=16px]4.2 [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]理化指标[/size][/font][font='times new roman']根据《食品安全国家标准[/font][font='times new roman'] [/font][font='times new roman']琼脂（琼胶）[/font][font='times new roman'] GB [/font][font='times new roman']1975—2010[/font][font='times new roman']》规定，琼脂中水分（[/font][font='times new roman']w%[/font][font='times new roman']）[/font][font='times new roman']≤22%[/font][font='times new roman']，灰分（[/font][font='times new roman']w%[/font][font='times new roman']）[/font][font='times new roman']≤5%[/font][font='times new roman']，水不溶物（[/font][font='times new roman']w%[/font][font='times new roman']）[/font][font='times new roman']≤1%[/font][font='times new roman']，重金属（以[/font][font='times new roman']Pb[/font][font='times new roman']计）[/font][font='times new roman']≤20%[/font][font='times new roman']，铅（[/font][font='times new roman']Pb[/font][font='times new roman']）[/font][font='times new roman']≤5 mg/kg[/font][font='times new roman']，砷（[/font][font='times new roman']As[/font][font='times new roman']）[/font][font='times new roman']≤3 mg/kg[/font][font='times new roman']。其中逐一理化指标的检验方法在[/font][font='times new roman']GB[/font][font='times new roman']中均有明确给出。[/font][font='times new roman'][size=16px]4.3 [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]产品规格[/size][/font][font='times new roman']产品规格按凝胶强度不同划分，分为低强度、中强度、高强度、超高强度，即[/font][font='times new roman']20℃[/font][font='times new roman']下在[/font][font='times new roman']1.5%[/font][font='times new roman']琼脂溶液中，凝胶强度在[/font][font='times new roman']150~400 g/cm[/font][font='times new roman'][size=13px]3[/size][/font][font='times new roman']为低强度，在[/font][font='times new roman']401~800 g/cm[/font][font='times new roman'][size=13px]3[/size][/font][font='times new roman']为中强度，在[/font][font='times new roman']801~1200 g/cm[/font][font='times new roman'][size=13px]3[/size][/font][font='times new roman']为高强度，[/font][font='times new roman']1200 g/cm[/font][font='times new roman'][size=13px]3[/size][/font][font='times new roman']为超高强度。[/font][font='times new roman'][size=18px]5 [/size][/font][font='times new roman'][size=18px]检测[/size][/font][font='times new roman']《食品安全国家标准[/font][font='times new roman'] [/font][font='times new roman']琼脂（琼胶）[/font][font='times new roman'] GB 1975—2010[/font][font='times new roman']》中规定了琼脂的鉴别试验方法和多种理化指标及凝胶强度的测定方法，本文中简述规定中提到的鉴别试验、淀粉试验、水不溶物以及凝胶强度测定的实验方法[/font][font='times new roman'][size=13px][6] [/size][/font][font='times new roman']，其余理化指标的检测方法在[/font][font='times new roman']GB[/font][font='times new roman']中均有明确给出。[/font][font='times new roman'][size=16px]5.1 [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]鉴别试验[/size][/font][font='times new roman']取试样[/font][font='times new roman']1g[/font][font='times new roman']，加水[/font][font='times new roman']65mL[/font][font='times new roman']，煮沸[/font][font='times new roman']10min[/font][font='times new roman']，不断搅拌，用热水补足水分，放冷至[/font][font='times new roman']32℃[/font][font='times new roman']～[/font][font='times new roman']39℃[/font][font='times new roman']即凝结成半透明有弹性的凝胶状物，再加热至[/font][font='times new roman']85℃[/font][font='times new roman']开始熔化；再取适量条状试样的碎片，浸入[/font][font='times new roman']0.01mol/L[/font][font='times new roman']碘溶液中数分钟，染成棕黑色，取出后加水浸泡后[/font][font='times new roman']渐变紫色。[/font][font='times new roman'][size=16px]5.2 [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]淀粉试验[/size][/font][font='times new roman']取[/font][font='times new roman']0.5g[/font][font='times new roman']试样，加水[/font][font='times new roman']100mL[/font][font='times new roman']，煮沸溶解后放冷，加[/font][font='times new roman']2[/font][font='times new roman']滴[/font][font='times new roman']0.05mol/L[/font][font='times new roman']碘溶液，不得显蓝色。[/font][font='times new roman'][size=16px]5.3 [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]水不溶物的测定[/size][/font][font='times new roman']称取试样约[/font][font='times new roman'] 1.5g[/font][font='times new roman']（称准至[/font][font='times new roman'] 0.001g[/font][font='times new roman']）于[/font][font='times new roman'] 500mL [/font][font='times new roman']烧杯中，加水至[/font][font='times new roman'] 200mL[/font][font='times new roman']，盖上表面皿，加热煮沸溶解（加热时注意搅动）。趁热用已干燥恒重（前后两次质量之差不大于[/font][font='times new roman'] 0.001g [/font][font='times new roman']为恒重，冷却操作时需严格保持冷却时间的统一）的砂芯坩埚减压过滤，并用热水充分洗涤烧杯和砂芯坩埚，然后将砂芯坩埚于[/font][font='times new roman']105℃±2℃[/font][font='times new roman']电热干燥箱内烘至恒重。[/font][font='times new roman'][size=16px]5.4 [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]凝胶强度的测定[/size][/font][font='times new roman']5[/font][font='times new roman'].4.1 [/font][font='times new roman']凝胶强度测定的原理[/font][font='times new roman']将试样制成一定浓度和体积的凝胶，用凝胶强度仪测定凝胶在[/font][font='times new roman']15s[/font][font='times new roman']～[/font][font='times new roman']20s[/font][font='times new roman']内的抗破砝码质量，根据温度换算系数，计算样品凝胶强度。[/font][font='times new roman']5.4.2 [/font][font='times new roman']凝胶强度的测定方法[/font][font='times new roman']制备琼脂凝胶试样，将其放在凝胶强度测定仪的试样座中心位置上，按凝胶强度测定仪说明书进行操作，移动手柄使砝码添加装置杆下端与凝胶表面接触，加大力度使凝胶的表面发生破裂（端点进入凝胶约[/font][font='times new roman']4mm[/font][font='times new roman']以上），记录此时凝胶强度值，同时，测量凝胶的温度。[/font][font='times new roman'][size=18px]6 [/size][/font][font='times new roman'][size=18px]应用[/size][/font][font='times new roman']琼脂因其独特的物理化学性质，在食品、医药、微生物学、实验室应用等许多方面具有广泛的应用。[/font][font='times new roman'][size=16px]6.1 [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]食品[/size][/font][font='times new roman']琼脂具有凝固性和稳定性，在食品工业中可以作为增稠剂、凝固剂、[/font][url=https://baike.baidu.com/item/%E6%82%AC%E6%B5%AE%E5%89%82][font='times new roman']悬浮剂[/font][/url][font='times new roman']、[/font][url=https://baike.baidu.com/item/%E4%B9%B3%E5%8C%96%E5%89%82][font='times new roman']乳化剂[/font][/url][font='times new roman']、保鲜剂和稳定剂等，被广泛用于制造各种糖果、果冻、饮料、冷饮、焙烤制品、速食食品和保健食品、禽类和肉类食品、肉制品、酿造行业等等。[/font][font='times new roman']6.1.1 [/font][font='times new roman']糖果[/font][font='times new roman']在糖果生产中，琼脂作为胶凝剂，主要用于制造软糖。[/font][font='times new roman'][size=13px][2] [/size][/font][font='times new roman']琼脂凝胶软糖是大众的产品，深受广大消费者的青睐，如无花果等水果琼脂软糖或果汁软糖，价廉物美、销量可观。[/font][font='times new roman'][size=13px][1][/size][/font][font='times new roman']琼脂主要依靠其凝胶特点制作软糖，具有含水量高、透明、柔软、有弹性、货架期长的特点。[/font][font='times new roman'][size=13px][3] [/size][/font][font='times new roman']根据琼脂的凝胶能力[/font][font='times new roman'],[/font][font='times new roman']软糖中的琼脂用量一般在[/font][font='times new roman']1[/font][font='times new roman']％[/font][font='times new roman']~2.5[/font][font='times new roman']％，碳水化合物以蔗糖为主，[/font][font='times new roman']淀粉糖浆为辅，其比例约为[/font][font='times new roman']3[/font][font='宋体']∶[/font][font='times new roman']2[/font][font='times new roman']。用琼脂制造的软糖的透明度、品质及口感均优于其它软糖。琼脂虽然作为传统的凝胶物质在糖果制作中长久应用，但实践表明其口感特性比较单一。近年来也常添加明胶、变性淀粉、果汁[/font][font='times new roman']/[/font][font='times new roman']果泥或瓜果等，有助于糖果配合物料组成的多样性，有利于风味与口感的改进。[/font][font='times new roman'][size=13px][2[/size][/font][font='times new roman'][size=13px]、[/size][/font][font='times new roman'][size=13px]7][/size][/font][font='times new roman']6.1.2 [/font][font='times new roman']果冻[/font][font='times new roman'] [/font][font='times new roman']在果冻制造过程中添加琼脂，可为稳定剂和胶凝剂，使颗粒悬浮均匀、不沉淀、不分层。根据琼脂的胶凝能力，一般用量为[/font][font='times new roman'] 0.15[/font][font='times new roman']％[/font][font='times new roman']~0.3[/font][font='times new roman']％。[/font][font='times new roman'][size=13px][2][/size][/font][font='times new roman']6.1.3 [/font][font='times new roman']饮料[/font][font='times new roman']琼脂用在饮料类产品中可作为助悬剂，使饮料中固型物悬浮均匀、不下沉。其悬浮时间及保质期长，是其它助悬剂无法代替的，产品透明度、流动性会更好、口感爽滑无异味。在果粒饮料中表现出优异的悬浮效果，使用浓度为[/font][font='times new roman']0.001[/font][font='times new roman']％[/font][font='times new roman']~0.005[/font][font='times new roman']％即可使果粒悬浮均匀。[/font][font='times new roman'][size=13px][2] [/size][/font][font='times new roman']6.1.4 [/font][font='times new roman']冷饮[/font][font='times new roman']琼脂用于冷饮食品，如冰棒、冰淇淋等各种冷冻制品，可减少冰晶，提高抗热融性，使产品更加爽口。在冰淇淋生产中，琼脂可改善冰淇淋的组织状态，提高冰淇淋的黏度和膨胀率，防止冰晶析出，使制品组织细腻轻滑，使用量为[/font][font='times new roman']0.3[/font][font='times new roman']％左右。[/font][font='times new roman'][size=13px][2] [/size][/font][font='times new roman']琼脂与刺槐豆胶、[/font][font='times new roman']明胶相配合，在冷饮食品的质地和香味稳定性方面起到极优异的作用，并能防止脱水收缩和表面结皮。作为稳定剂的最佳浓度是：琼脂[/font][font='times new roman']0.12[/font][font='times new roman']％、刺槐豆胶[/font][font='times new roman']0.07[/font][font='times new roman']％、明胶[/font][font='times new roman']0.20[/font][font='times new roman']％。[/font][font='times new roman'][size=13px] [1][/size][/font][font='times new roman']6.1.5 [/font][font='times new roman']焙烤制品[/font][font='times new roman']琼脂可以作为一种略起粘结作用的添加剂，被广泛地用于多种焙烤食品中[/font][font='times new roman'],[/font][font='times new roman']如焙烤食品生产厂将琼脂用于曲奇饼、奶油夹心派的外壳、含果仁的果冻、馅饼或派的馅、糕饼甜心表层的酥皮、蛋白酥皮筒等。琼脂也可以作为保湿剂，也成功用于面包和糕饼甜心中防干燥。[/font][font='times new roman'][size=13px][1] [/size][/font][font='times new roman']琼脂还可以作为填充剂和膨松剂，可代替淀粉制造麦片糊、无淀粉面包和餐后点[/font][font='times new roman']心，制作为低热能食品，同时对面包和饼干也起到了保湿、保险的作用。[/font][font='times new roman'][size=13px][2] [/size][/font][font='times new roman']在上述这些类型的产品中，琼脂使用的量约在[/font][font='times new roman']0.1[/font][font='times new roman']％～[/font][font='times new roman']1[/font][font='times new roman']％的范围内。[/font][font='times new roman'][size=13px][1][/size][/font][font='times new roman']6.1.6 [/font][font='times new roman']速食食品和保健食品[/font][font='times new roman'][size=13px][1] [/size][/font][font='times new roman']琼脂素食食品和保健食品中也有重要应用，例如它可以添加用于谷类食品（如麦片）、肉食代用品（如人造肉、素肉等）和素食者食用的甜食与点心中。[/font][font='times new roman']6.1.7 [/font][font='times new roman']禽类和肉类罐头[/font][font='times new roman']在禽类和肉类罐头中，琼脂作为胶冻剂和赋形剂，其用量可以是罐头中清汤的[/font][font='times new roman']0.5[/font][font='times new roman']％～[/font][font='times new roman']2.0[/font][font='times new roman']％，以消除罐头中食品组织发生脆碎。[/font][font='times new roman']6.1.8 [/font][font='times new roman']肉制品[/font][font='times new roman']琼脂作为肉制品的辅料，具[/font][font='times new roman']有提高肉制品的品质、保护其风味等特性。[/font][font='times new roman'][size=13px][3] [/size][/font][font='times new roman']琼脂用于灌制香肠、熏制或腓制肉制品，可明显保护其胶体以防止其风味散失。烹调的火腿可浇盖含有琼脂和抗坏血酸的溶液，包装以后，琼脂处理过的肉制品比未处理的和只用抗坏血酸单独处理的肉制品更能保持原有的风味。[/font][font='times new roman'][size=13px][2][/size][/font][font='times new roman']6.1.9 [/font][font='times new roman']酿造行业[/font][font='times new roman']琼脂在酿造行业，作为啤酒、酱油和食用醋的澄清剂以加速和改善产品澄清。[/font][font='times new roman'][size=13px][2] [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]6.2 [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]医药[/size][/font][font='times new roman'][size=16px][1] [/size][/font][font='times new roman']琼脂可以广泛地用作轻泻剂，在人体肠中不会被消化，在充分水化的情况下，如同纤维素一样，起到增大排泄物体积和促进肠道蠕动的作用，并且无刺激性和可以达到润肠的效果。在放射科中，琼脂常作为钡餐中硫酸钡的悬浮剂。琼脂常常在缓释胶囊药物栓塞药、外科润滑剂，以及许多乳剂类型的药物中用作为起多种功能的添加剂。在药片中，琼脂用作为赋形剂和崩解剂。[/font][font='times new roman'][size=16px]6.3 [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]微生物学[/size][/font][font='times new roman']琼脂在微生物学中获得了最有价值的应用。在低浓度下，琼脂即可阻止氧进入液体介质中，可以用于在暴露于空气中的营养肉汤进行厌氧菌的培养。在液体介质中使用的琼脂浓度通常在[/font][font='times new roman']0.007[/font][font='times new roman']％～[/font][font='times new roman']0.08[/font][font='times new roman']％。[/font][font='times new roman'][size=13px][1] [/size][/font][font='times new roman']在制作微生物的培养基的过程中，可以通过添加琼脂作为凝固剂来将[/font][url=https://baike.baidu.com/item/%E6%B6%B2%E4%BD%93%E5%9F%B9%E5%85%BB%E5%9F%BA/8509492][font='times new roman']液体培养基[/font][/url][font='times new roman']转化为固体培养基或[/font][url=https://baike.baidu.com/item/%E5%8D%8A%E5%9B%BA%E4%BD%93%E5%9F%B9%E5%85%BB%E5%9F%BA/3410252][font='times new roman']半固体培养基[/font][/url][font='times new roman']。[/font][font='times new roman'][size=16px]6.4 [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]实验室应用[/size][/font][font='times new roman'][size=16px][1] [/size][/font][font='times new roman']琼脂可以提高颗粒度测量的精确度，可以对包含有固体颗粒的悬浮液的浓度进行测定，亚甲基蓝、甲苯胺蓝、硫堇和频那氰醇等染料可以通过琼脂的作用而发生可逆的聚合。蛋白质可以通过琼脂凝胶作电泳迁移，用于铁蛋白、卵清蛋白、血红蛋白和胃蛋白酶的解析。琼脂钠和琼脂铵、琼脂糖和琼脂糖钠在球蛋白电泳、免疫扩散诊断技术、凝胶过滤和分子大小排阻色谱等技术中是很有应用价值的。琼脂还能稳定胆固醇溶液。[/font][font='times new roman'][size=18px]7 [/size][/font][font='times new roman'][size=18px]总结与展望[/size][/font][font='times new roman']琼脂由琼脂糖和琼脂胶组成，是一种由半乳糖和半乳糖衍生物构成的长链形多糖，具有特殊的理化性质，并因此在食品、医药、微生物、实验室等均有广泛的应用。据不完全统计，目前没有明确规定琼脂的最大使用量，适量使用即可。食品安全国家标准对琼脂的感官要求、理化指标和产品规格等均作出详细规定，并给出了与琼脂相关的检测方法。琼脂产业的发展[/font][font='times new roman']具有重要的经济效益、社会效益和生态效益，同时还直接或间接地成为构建海洋渔业生态链和海洋渔业产业经济链不可或少的纽带。随着琼脂在食品工业的广泛应用，必将具有广阔的市场前景。[/font][font='times new roman'][size=13px][2][/size][/font][font='times new roman']参考文献：[/font][font='times new roman'][[/font][font='times new roman']1] [/font][font='times new roman']琼脂[/font][font='times new roman'][J].[/font][font='times new roman']明胶科学与技术[/font][font='times new roman'],2005(03):123-130.[/font][font='times new roman'][2] [/font][font='times new roman']李琴梅[/font][font='times new roman'],[/font][font='times new roman']戚勃[/font][font='times new roman'].[/font][font='times new roman']琼脂的物化特性及其在食品工业中的应用[/font][font='times new roman'][J].[/font][font='times new roman']中国食品添加剂[/font][font='times new roman'],2009(06):170-174.[/font][font='times new roman'][3] [/font][font='times new roman']宋雪健[/font][font='times new roman'],[/font][font='times new roman']王洪江[/font][font='times new roman'],[/font][font='times new roman']张东杰[/font][font='times new roman'].[/font][font='times new roman']琼脂在食品中的应用研究进展[/font][font='times new roman'][J].[/font][font='times new roman']现代农业科技[/font][font='times new roman'],2017(12):267-268+272.[/font][font='times new roman'][4] [/font][font='times new roman']林坤城[/font][font='times new roman'].[/font][font='times new roman']琼脂提取及深加工研究进展[/font][font='times new roman'][J].[/font][font='times new roman']福建农业科技[/font][font='times new roman'],2018(09):56-60.[/font][font='times new roman'][5] [/font][font='times new roman']缪伏荣[/font][font='times new roman'],[/font][font='times new roman']李忠荣[/font][font='times new roman'].[/font][font='times new roman']琼胶的降解及其产物的开发应用[/font][font='times new roman'][J].[/font][font='times new roman']现代农业科技[/font][font='times new roman'],2007(02):125+128.[/font][font='times new roman'][6] GB 1975-2010, [/font][font='times new roman']食品安全国家标准　食品添加剂　琼脂[/font][font='times new roman']([/font][font='times new roman']琼胶[/font][font='times new roman'])[s].[/s][/font][font='times new roman'][7] [/font][font='times new roman']朱肇阳[/font][font='times new roman'].[/font][font='times new roman']凝胶型糖果[/font][font='times new roman'] [/font][font='times new roman']第五部分[/font][font='times new roman']——[/font][font='times new roman']琼胶及琼胶软糖[/font][font='times new roman'][J].[/font][font='times new roman']食品工业[/font][font='times new roman'],1992(05):2-7.[/font]

我在做一个课题，将糖类用琼脂糖凝胶电泳分离后，染色，再定量。现在的问题是到底用凝胶成像系统准确些，还是用薄层扫描仪效果好些？看国外的文献，用的是一种叫做“光密度计”的设备，国内难以找到。我的老板曾去相关实验室访问，他说对方用的是薄层扫描仪。我在想是否凝胶成像系统会更好些。不知各位高人有无好的建议给我？

关键词:中检所网站 中检所标准品 中检所对照品 药检所标准品 药检所对照品 中检所标准物 质药检所标准物质摘要:凝胶色谱技术是六十年代初发展起来的一种快速而又简单的分离分技术，由于设备简单、操作方便，不需要有机溶剂，对高分子物质有很高的分离效果。目前已经被生物化学、分子生物学、生物工程学、分子免疫学以及医学等有关领域广泛采用，不但应用于科学实验研究，而且已经大规模地用于工业生产。 　　一、基本理论　　(一)分子筛效益　　一个含有各种分子的样品溶液缓慢地流经凝胶色谱柱时，各分子在柱内同时进行着两种不同的运动：垂直向下的移动和无定向的扩散运动。大分子物质由于直径较大，不易进入凝胶颗粒的微孔，而只能分布颗粒之间，所以在洗脱时向下移动的速度较快。小分子物质除了可在凝胶颗粒间隙中扩散外，还可以进入凝胶颗粒的微孔中，即进入凝胶相内，在向下移动的过程中，从一个凝胶内扩散到颗粒间隙后再进入另一凝胶颗粒，如此不断地进入和扩散，小分子物质的下移速度落后于大分子物质，从而使样品中分子大的先流出色谱柱，中等分子的后流出，分子最小的最后流出，这种现象叫分子筛效应。具有多孔的凝胶就是分子筛。各种分子筛的孔隙大小分布有一定范围，有最大极限和最小极限。分子直径比凝胶最大孔隙直径大的，就会全部被排阻在凝胶颗粒之外，这种情况叫全排阻。两种全排阻的分子即使大小不同，也不能有分离效果。直径比凝胶最小孔直径小的分子能进入凝胶的全部孔隙。如果两种分子都能全部进入凝胶孔隙，即使它们的大小有差别，也不会有好的分离效果。因此，一定的分子筛有它一定的使用范围。综上所述，在凝胶色谱中会有三种情况，一是分子很小，能进入分子筛全部的内孔隙;二是分子很大，完全不能进入凝胶的任何内孔隙;三是分子大小适中，能进入凝胶的内孔隙中孔径大小相应的部分。大、中、小三类分子彼此间较易分开，但每种凝胶分离范围之外的分子，在不改变凝胶种类的情况下是很难分离的。对于分子大小不同，但同属于凝胶分离范围内各种分子，在凝胶床中的分布情况是不同的：分子较大的只能进入孔径较大的那一部分凝胶孔隙内，而分子的可进入较多的凝胶颗粒内，这样分子较大的在凝胶床内移动距离较短，分子较小的移动距离较长。于是分子较大的先通过凝胶床而分子较小的后通过凝胶床，这样就利用分子筛可将分子量不同的物质分离。另外，凝胶本身具有三维网状结构，大的分子在通过这种网状结构上的孔隙时阻力较大，小分子通过时阻力较小。分子量大小不同的多种成份在通过凝胶床时，按照分子量大小“排队，凝胶表现分子筛效应。　　(二)色谱柱的重要参数　　⑴柱体积：柱体积是指凝胶装柱后，从柱的底板到凝胶沉积表面的体积。在色谱柱中充满凝胶的部分称为凝胶床，因引柱体积又称“床”体积，常用Vt 表示。　　⑵外水体积：色谱柱内凝胶颗粒间隙，这部分体积称外水体积，亦称间隙体积，常用Vo表示。　　⑶内水体积：因为凝胶为三维网状结构，颗粒内部仍有空间，液体可进入颗粒内部，这就分间隙的总和为内水体积，又称定相体积，常用Vi表示。 不包括固体支持物的体积(Vg)。　　⑷峰洗脱体积：是指被分离物质通过凝胶柱所需洗脱液有体积，常用Ve 表示。当使用样品的体积很少时，(与洗脱体积比较可以忽略不计)，在洗脱图中，从加样到峰顶位置所用洗脱液体积为Ve。 当样品体积与洗脱体积比较不能忽略时，洗脱体积计算可以从样品体积的一半到峰顶位置。当样品很大时，洗脱体积计算可以从应用样品开始到洗脱峰升高的弯曲点(或半高处)。　　二、凝胶的种类及性质　　(一)交联葡聚糖凝胶(Sephadex)　　⑴Sephadex G交联葡聚糖的商品名为Sephndex，不同规格型号的葡聚糖用英文字母G表示，G后面的阿拉伯数为凝胶得水值的10倍。例如，G-25为每克凝胶膨胀时吸水2.5克，同样G-200克每克千胶吸水20克。交联葡聚糖凝胶的种类有G-10，G-15，G-25，G-50，G-75，G-100，G- 150，和G-200。因此，“G”反映，凝胶的交联程度，膨胀程度及分部范围。　　⑵Sephadex LH-20，是─Sephadex G-25的羧丙基衍生物， 能溶于水及亲脂溶剂，用于分离不溶于水的物质。　　(二)琼脂糖凝胶：　　商品名很多，常见的有，Sepharose(瑞典，pharmacia )，Bio-Gel-A(美国Bio-Rad)等。琼脂糖凝胶是依靠糖链之间的次级链如氢键来维持网状结构，网状结构的疏密依靠琼脂糖的浓度。一般情况下，它的结构是稳定的，可以在许多条件下使用(如水，pH4-9范围内的盐溶液)。琼脂糖凝胶在40℃以上开始融化，也不能高压消毒，可用化学灭菌活处理。　　(三)聚丙烯酰胺凝胶：　　是一种人工合成凝胶，是以丙烯酰胺为单位， 由甲叉双丙烯酰胺交联成的，经干燥粉碎或加工成形制成粒状，控制交联剂的用量可制成各种型号的凝胶。交联剂越多，孔隙越小。聚丙烯酰胺凝胶的商品为生物胶-P (Bio-Gel P)，由美国Bio-Rod厂生产，型号很多，从P-2至P-300共10种，P 后面的数字再乘1000就相当于该凝胶的排阻限度。　　(四)聚苯乙烯凝胶商品为Styrogel ， 具有大网孔结构， 可用于分离分子量1600到40，000，000的生物大分子，适用于有机多聚物，分子量测定和脂溶性天然物的分级，凝胶机械强度好，洗脱剂可用甲基亚砜。　　三、实验技术　　(一)层析柱 层析柱是凝胶层析技术中的主体，一般用玻璃管或有机玻璃管。层析柱的直径大小不影响分离度，样品用量大，可加大柱的直径，一般制备用凝胶柱，直径大于2厘米，但在加样时应将样品均匀分布于凝胶柱床面上。此外， 直径加大，洗脱液体体积增大，样品稀释度大。分离度取决于柱高，为分离不同组分，凝胶柱床必须有适宜的高度，分离度与柱高的平方根相关，但由于软凝胶柱过高挤压变形阻塞，一般不超过1米。分族分离时用短柱，一般凝胶柱长20-30厘米，柱高与直径的比较5:1─10:1，凝胶床体积为样品溶液体积的 4-10倍。 分级分离时柱高与直径之线为20:1─100:1，常用凝胶柱有50×25厘米，10×25厘米。层析柱滤板下的死体积应尽可能的小，如果支掌滤板下的死体积大，被分离组分之间重新混合的可能性就大，其结果是影响洗脱峰形，出现拖尾出象，降低分辩力。在精确分离时，死体积不能超过总床体积的1/1000。　　(二)凝胶的选择 根据所需凝胶体积，估计所需干胶的量。 一般葡聚糖凝胶吸水后的凝胶体积约为其吸水量的2倍，例如Sephadex G-20的吸水量为20，1 克Sephadex G─200吸水后形成的凝胶体积约40ml。凝胶的粒度也可影响层析分离效果。粒度细胞分离效果好，但阻力大，流速慢。一般实验室分离蛋白质采用 100-200号筛目的的Sephadex G-200效果好， 脱盐用Sephadex G-25、G-50，用粗粒，短柱，流速快。　　(三)凝胶的制备 商品凝胶是干燥的颗粒使用前需直接在欲使用的洗脱液中膨胀。为了加速膨胀，可用加热法，即在沸水浴中将湿凝胶逐渐升温至近沸，这样可大大中速膨胀，通常在 1-2小时内即可完成。特别是在使用软胶时， 自然膨胀需24小时至数天，而用加热法在几小时内就可完成。这种方法不但节约时间，而且还可消毒，除去凝胶中污染的细菌和排除胶内的空气。　　(四)样品溶液的处理 样品溶液如有沉淀应过滤或离心除去，如含脂类可高速离心或通过Sephadex G-15短柱除去。样品的粘度不可大，含蛋白为超过4%，粘度高影响分离效果。上柱样品液的体积根据凝胶床体积的分离要求确定。分离蛋白质样品的体积为凝胶床的1-4%(一般约0.5-2ml)，进行分族分离时样品液可为凝胶床的10%，在蛋白质溶液除盐时，样品可达凝胶床的20-30%。 分级分离样品体积要小，使样品层尽可能窄，洗脱出的峰形较好。　　(五)防止微生物的污染 交联葡

脉冲场凝胶电泳以其重复性好、分辨力强而被誉为细菌分子分型技术的“金标准”。它可以用于的分子DNA的分离，其分辨范围可达10Mb。PFGE选用识别稀有酶切位点的限制性内切酶切割基因组DNA，获得的DNA大片段在外加脉冲电场的低浓度琼脂糖凝胶中分离，产生数量有限的DNA条带。其原理是DNA分子在脉冲电场中随着电泳方向的改变不断改变其分子构象，挤过凝胶间隙。小的DNA分子比大的分子重新定向快，在凝胶中移动快，从而使小分子DNA片段与大片段相分离，同时较大的DNA片段也能被有效分离，在凝胶上按染色体片段长度的不同而呈现出电泳带型。