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组蛋白乙酰转移酶

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组蛋白乙酰转移酶相关的方案

  • 多酸类组蛋白去乙酰化酶抑制剂的筛选及抗肿瘤活性研究
    多金属氧酸盐(polyoxometallates,POMs)由于结构的多样性以及其在分子尺寸、表面电荷分布、氧化还原电位、极性、酸性、溶解性及热稳定性等方面高度可调的分子特性,在材料,磁学,催化,尤其是医药科学等领域都有着广泛而重要的应用。肿瘤一直是威胁人类健康的一大顽疾。研究表明,组蛋白去乙酰化酶抑制剂(histone deacetylaseinhibitors,HDACi)可以通过改变组蛋白或转录因子的乙酰化状态诱导肿瘤细胞生长、分化或凋亡,具有明显的抗肿瘤活性。本论文首次将多酸类药物用于HDACi的筛选,从近400种POMs化合物中筛选出了五类13种与已知HDACi具有相同作用效果的多金属氧酸盐化合物。这五类POMs化合物分别是:1.夹心型钨锗酸盐化合物PA-304 PA-312 PA-313 PA-315 PA-317;2.三有机锡取代的钨锗酸盐化合物PA-320;3.过渡金属连接二钛取代的Keggin型钨磷酸盐形成的化合物PA-324 PA-331 PA-332PA-330;4.临床有机药物与Anderson型多阴离子形成的超分子化合物PA-301 PA-303;5.含Ti的三聚杂多钨锗酸盐化合物PA-334。实验中以PA-320为代表化合物,对其抗肿瘤活性做了初步的验证。绿色荧光蛋白质粒报告基因的荧光照片显示PA-320可以诱导绿色荧光蛋白发光增强,且发光的强度要强于已知临床组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA的作用效果。直观的说明PA-320可以刺激p21基因表达增加。逆转录PCR(RT-PCR)和DNA电泳的结果证实,不同浓度的PA-320处理的细胞,其细胞中p21基因的表达量与用临床组蛋白去乙酰化酶抑制剂BUA处理细胞后的作用效果相同。说明PA-320有和临床HDACi相同的作用功效,可以刺激p21基因的表达增加。据文献报道HDAC1对p21WAF1/CIP1基因的抑制作用最为显著。PA-320对瞬时转染的HDAC1-7的实验结果证实,在转染了HDAC1的同时加入一定浓度PA-320刺激后,p21WAF1/CIP1基因启动子报告基因的活性明显增强,HDAC1的活性明显受到抑制。瞬时转染HDAC实验证明多金属氧酸盐化合物PA-320可以很好的抑制HDAC的活性。MTT实验结果证实PA-320对Hela细胞,LNCaP细胞,293T细胞,SW620细胞四种癌细胞均有抑制作用。实验测得对四种癌细胞的IC50值分别为38.8679μg/ml,45.1477μg/ml,44.4783μg/ml和9.2771μg/ml。说明PA-320可以在相对较低的浓度下(100μg/ml),PA-320的抑制浓度也是比较低的。说明PA-320对肿瘤细胞有很好的抑制效果。
  • 使用 Agilent Cary 3500 紫外-可见分光光度计测定丙氨酸氨基转移酶催化活性浓度
    本研究参照《IFCC 在 37 ° C 酶催化活性浓度测量的原级参考方法第 4 部分:丙氨酸氨基转移酶催化浓度测定参考方法》[1],使用 Agilent Cary 3500 紫外-可见分光光度计对丙氨酸氨基转移酶 (ALT) 的催化活性浓度进行监测。该方法中的基本原理是:在 37 ° C 的恒温条件下,L-丙氨酸与 2-酮戊二酸在 ALT 的催化下生成丙酮酸和 L-谷氨酸,丙酮酸与烟酰胺腺嘌呤二核苷酸 (NADH) 在乳酸脱氢酶的作用下生成乳酸和 NAD+(如以下反应方程式所示);然后通过监测 339 nm 下 NADH 的氧化速率(即吸光度的下降速率)来测定丙氨酸氨基转移酶的催化活性浓度,二者呈正比关系。
  • 重组蛋白表征——氧化分析
    已有结果表明酶的氧化修饰会抑制酶的活性。同样,重组蛋白的氧化也可能导致功能丧失。因此在蛋白质药物的开发和生产中,需要对氧化反应进行密切监测,因为它能改变蛋白质药物的生物活性、半衰期和免疫原性。在加工和储存过程中,蛋白质中的氨基酸很容易被氧化,这些氧化必须受到连续监测。蛋白质上某些蛋氨酸残基可能被氧化成蛋氨酸亚砜甚至蛋氨酸砜。蛋氨酸的氧化能导致失活、聚集,以及增加免疫原性。天冬酰胺残基的去酰胺化形成天门冬氨酸和异天门冬氨酸是蛋白质降解的另一个重要原因,尤其在长期储存条件下容易发生。谷氨酰胺残基也能发生去酰胺化,其反应速度比天冬酰胺慢一百倍,很少在重组蛋白中检测到。色氨酸和半胱氨酸也可能发生氧化。
  • 重组蛋白表征——肽图分析
    肽图分析是蛋白质鉴定,特别是重组蛋白鉴定的最常用的方法。它通过酶解(一般使用胰蛋白酶)将蛋白质打碎形成肽段,然后以可重现的方式进行肽段的分离和鉴定。肽图分析是一种非常有用的方法,已成为生物技术领域中最有价值的工具之一,它能检测和监控单个氨基酸改变、氧化、去酰胺化,以及其它降解形式。它还能直接检测常见的单克隆抗体修饰变异,如 N 端环化,C 端赖氨酸处理,N- 糖基化,以及内含子表达等非预期的变异。肽图是蛋白质及其酶解产物的指纹图谱,它能提供待测蛋白质的全面信息。肽图分析包含四个主要步骤,蛋白质的分离和纯化;肽键的选择性酶切;多肽的色谱分离;多肽的分析和鉴定。对测试样品与参考标准品或对照样品进行同步的酶解和分析。肽图应该包括足够数量的肽段以进行有效的分析;它不仅要提供蛋白质鉴定所需的必要信息,还应尽可能地涵盖完整的蛋白质序列。
  • 重组蛋白表征——生物过程监控
    蛋白质药物的开发和生产中,有效的过程监控技术是必不可少的。由于需要更好地了解生物生产过程,以及改善对产生重组蛋白的微生物的给料及其它相关参数的控制,所以需要快速有效的监测技术。生产过程也必须可靠、标准化、可转移并且不受人为因素影响,这进一步地推动了有效监测技术的需求。旨在缩短产品面市时间和确保最高效的生物生产工艺而进行的工艺开发提速也是一个强大的推动力。最后,遵守 FDA 和 EMA 关于过程分析技术 (PAT) 的指南也需要准确而可靠的监测技术。发酵、提取和纯化工艺达到合适的效率,对产品的成功至关重要。
  • 人抗组蛋白抗体(AHA)检测试剂盒
    人抗组蛋白抗体(AHA)检测试剂盒人抗组蛋白抗体(AHA)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围: 规格:96T/48T使用目的:本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人抗组蛋白抗体(AHA)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人抗组蛋白抗体(AHA)水平。用纯化的抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入人抗组蛋白抗体(AHA)抗原、生物素化的人抗组蛋白抗体(AHA)抗体、HRP标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人抗组蛋白抗体(AHA)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度
  • 人抗组蛋白(H2A-H2B)-DNA抗体/抗二聚体-DNA抗体检测试剂盒
    人抗组蛋白(H2A-H2B)-DNA抗体/抗二聚体-DNA抗体检测试剂盒人抗组蛋白(H2A-H2B)-DNA抗体/抗二聚体-DNA抗体检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围: 规格:96T/48T使用目的:本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人抗组蛋白(H2A-H2B)-DNA抗体/抗二聚体-DNA抗体含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人抗组蛋白(H2A-H2B)-DNA抗体/抗二聚体-DNA抗体水平。用纯化的抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入人抗组蛋白(H2A-H2B)-DNA抗体/抗二聚体-DNA抗体抗原、生物素化的人抗组蛋白(H2A-H2B)-DNA抗体/抗二聚体-DNA抗体抗体、HRP标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人抗组蛋白(H2A-H2B)-DNA抗体/抗二聚体-DNA抗体呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度
  • 人组蛋白H2b(histon-H2b)检测试剂盒
    人组蛋白H2b(histon-H2b)检测试剂盒人组蛋白H2b(histon-H2b)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围: 规格:96T/48T使用目的:本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人组蛋白H2b(histon-H2b)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人组蛋白H2b(histon-H2b)水平。用纯化的抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入人组蛋白H2b(histon-H2b)抗原、生物素化的人组蛋白H2b(histon-H2b)抗体、HRP标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人组蛋白H2b(histon-H2b)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度
  • 人胆固醇酯转移蛋白(CETP)检测试剂盒
    人胆固醇酯转移蛋白(CETP)检测试剂盒人胆固醇酯转移蛋白(CETP)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围: 规格:96T/48T使用目的:本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人胆固醇酯转移蛋白(CETP)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人胆固醇酯转移蛋白(CETP)水平。用纯化的抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入人胆固醇酯转移蛋白(CETP)抗原、生物素化的人胆固醇酯转移蛋白(CETP)抗体、HRP标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人胆固醇酯转移蛋白(CETP)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度
  • 重组蛋白表征——电荷异构体分析
    在生产和纯化过程中,蛋白质能表现出多种电荷异质性改变。这些变化不仅影响 稳药物的定性,也影响活性,而且还可能导致有害的免疫反应。所以,开发和生产过程中蛋白药物的电荷异构体分析非常关键。电荷变异体的表征通常是用等电聚焦或离子交换色谱进行的。等电聚焦 (IEF) 通过等电点 (PI) 进行蛋白质的分离,常规用于重组蛋白电荷异构体的指纹图分析。与传统的平板凝胶等电聚焦电泳相比,毛细管等电聚焦电泳 (cIEF) 具有更高的分离度、分析速度,定量能力和自动化性能。
  • 经典非组蛋白 eEF1A 甲基化可促进肿瘤发生
    赖氨酸甲基化的生物学功能表征在组蛋白上、表观遗传学和染色质生物学的调节,如组蛋白甲基化,包括 H3K4,H3K9,H3K36 和 H3K79 等,这些修饰通过调控表观遗传学参与了生长发育和疾病,特别是肿瘤的发生发展。除了组蛋白之外,人们越来越多的认识到非组蛋白(如 p53,RB,RelA)受赖氨酸甲基化调节。
  • 组蛋白去乙酰化酶抑制剂SAHA诱导骨髓瘤细胞的凋亡
    采用锥虫蓝拒染法、四氮唑蓝比色法检测SAHA 对U266细胞增殖的影响。AllllexinV和PI染色后应用流式细胞仪检测SAHA 作用U266细胞的凋亡率,Hoechst33342染色法检测凋亡细胞的形态。Western-blot方法检测信号转导通路Ras/Raf/Mek/Erk相关蛋白的表达水平。
  • 人载脂蛋白A1(apo-A1)ELISA试剂盒检测步骤
    apo-A1 简介载脂蛋白A1是一种蛋白质,由APOA1基因编码。作为高密度脂蛋白颗粒的主要成分,它在脂质代谢中具有特殊作用。APOA1基因位于第11条染色体上,具体位置为11q23-q24,该基因包含4个外显子。APOA1编码一个28.1kDa的蛋白质,由243个氨基酸组成;通过质谱数据观察到21个肽。载脂蛋白A1是血浆中高密度脂蛋白颗粒的主要蛋白成分。从肠道细胞分泌的乳糜微粒也含有载脂蛋白A1,但它在血液中迅速转移到高密度脂蛋白。该蛋白作为高密度脂蛋白颗粒的一个组成部分,通过接受细胞内的脂肪(包括动脉壁内的巨噬细胞,这些巨噬细胞已被氧化的低密度脂蛋白颗粒摄入的脂肪超载),使脂肪分子外流到其他地方,包括回到低密度脂蛋白颗粒或到肝脏排泄出来。它是卵磷脂胆固醇转移酶(LCAT)的辅助因子,该酶负责大多数血浆胆固醇酯的形成。载脂蛋白A1还被分离为前列环素(PGI2)稳定因子,因此可能有抗凝血作用。它经常被用作预测心血管疾病的生物标志物。
  • SEC-MALS技术表征重组蛋白分子量和聚集水平
    本应用中使用粒径2 um的TSKgel UP-SW2000尺寸排阻色谱柱并配合Tosoh Bioscience的超高灵敏度光散射检测器LenS3使用,可对重组蛋白的绝对分子量及其聚集水平进行精确测量和表征。
  • 支持包括疫苗在内的重组蛋白开发的先进NMR方法
    NMR在疫苗和重组蛋白领域有着悠久的历史(1,2),其中包括许多诺贝尔奖项(3)。Kurt Wü therich(瑞士)因“核磁共振波谱法测定溶液中生物大分子的三维结构”而获得诺贝尔化学奖(2002年)。凭借其在高阶结构测定中的能力,以及其定量性质,NMR在几十年来一直是一种强大、稳定且应用普遍的技术。
  • 人基质金属蛋白酶11(MMP11)ELISA试剂盒实验步骤
    MMP11 简介Stromelysin-3(SL-3)也被称为基质金属蛋白酶-11(MMP-11),是一种由MMP11基因编码的酶。基质金属蛋白酶(MMP)家族的蛋白质参与正常生理过程中细胞外基质的分解,如胚胎发育、生殖和组织重塑,以及疾病过程,如关节炎和转移。大多数MMP是以非活性原蛋白的形式分泌的,当被细胞外蛋白酶裂解时被激活。然而,该基因所编码的酶在构成性分泌途径中被呋喃酶在细胞内激活。另外,与其他MMP不同的是,这种酶能裂解α-1蛋白酶抑制剂,但对细胞外基质的结构蛋白降解较弱。
  • 天津兰力科:表面活性剂与血红蛋白的作用对转移电子数的影响
    将不同浓度(0.15- 10.0 mmol/L)的双十二烷基二甲基溴化铵(DDAB)和血红蛋白(Hb)依次修饰到热解石墨电极(PG)上, 制备了稳定的Hb-DDAB/PG电极. 利用循环伏安和紫外光谱研究了Hb-DDAB/PG电极的性质.由Laviron模型得到的转移电子数表明该电化学反应由双电子过程逐步过渡到单电子过程, 进而证明DDAB膜厚的增加导致血红蛋白亚基间作用的减弱和亚铁血红素的释放.
  • 人磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)检测试剂盒
    人磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)检测试剂盒人磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围: 规格:96T/48T使用目的:本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)水平。用纯化的抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入人磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)抗原、生物素化的人磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)抗体、HRP标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度
  • 大豆胰蛋白酶抑制因子的测定
    实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大豆胰蛋白酶抑制因子(STI)水平。用纯化的大豆胰蛋白酶抑制因子(STI)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入大豆胰蛋白酶抑制因子(STI),再与HRP 标记的大豆胰蛋白酶抑制因子(STI)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的大豆胰蛋白酶抑制因子(STI)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),通过标准曲线计算样品中大豆胰蛋白酶抑制因子(STI)浓度。
  • 重组蛋白表征——氨基酸分析
    每个蛋白质或多肽都具有特定的氨基酸序列,即氨基酸组成。因此氨基酸组成分析可作为蛋白质或多肽的鉴定方法。氨基酸分析用于从药物发现到生产的整个过程,以确保批次之间的相似性和一致性。它也经常被用于确定裂解蛋白质所用的蛋白酶的种类。氨基酸分析也是精确测定蛋白质含量的常用工具。氨基酸分析涉及四个基本步骤,首先是将蛋白质酸解为独立的氨基酸。接着对氨基酸进行标记以使它们适合紫外或荧光检测。然后对衍生化的氨基酸进行色谱分离。最后根据标记物的强度测定每个氨基酸的相对含量。一个理想的氨基酸定量分析应当具备快速、灵敏的衍生化手段和分析技术。安捷伦1260 Infinity 或者1290 Infinity 液相色谱系统和安捷伦ZORBAX Eclipse Plus C18 柱可以满足这些要求,采用邻苯二甲醛(OPA) 衍生化伯氨基酸,9- 芴甲酸(FMOC) 衍生化仲氨基酸;完成自动的在线衍生化后,进行可靠的液相色谱分析。该系统可以快速、准确、灵敏和高重现地完成氨基酸分析。
  • 人衣原体蛋白酶样活性因子(CPAF)检测试剂盒
    人衣原体蛋白酶样活性因子(CPAF)检测试剂盒人衣原体蛋白酶样活性因子(CPAF)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围: 规格:96T/48T使用目的:本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人衣原体蛋白酶样活性因子(CPAF)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人衣原体蛋白酶样活性因子(CPAF)水平。用纯化的抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入人衣原体蛋白酶样活性因子(CPAF)抗原、生物素化的人衣原体蛋白酶样活性因子(CPAF)抗体、HRP标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人衣原体蛋白酶样活性因子(CPAF)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度
  • 拉曼+乳腺癌早筛+外泌体蛋白表征
    吉林大学的徐抒平教授课题组利用 SERS 技术,对比分析了不同类型乳腺癌细胞系中的3种外泌体蛋白(CD9、CD63和FAK),这3种外泌体蛋白有望用于转移性乳腺癌的早期诊断,相关文章发表在 Analytical Chemistry 上。
  • 凯氏定氮仪测定重组人源胶原蛋白中蛋白质含量
    重组人源胶原蛋白是基于人体皮肤Ⅲ型胶原蛋白的原始基因序列,选择水溶性强、生物活性高的部分进行拼接重组得到的重组蛋白序列的产物,在医用材料、化妆品、食品保健领域具有很大的应用潜力。重组人源胶原蛋白通常与凝胶混合制成高粘度制剂,或通过浓缩的方式制称固体浓缩蛋白,需通过测定其蛋白含量以检验制剂的有效添加量,是其质量检验的重要环节。本方案基于《GB5009.5 食品安全国家标准 食品中蛋白质的测定》,给出了利用凯氏定氮法测定其蛋白质含量的方法。
  • 环氧树脂载体蛋白/酶固定化工艺
    环氧树脂是现成的载体;没有强制的活化步骤。然而再开始固定程序前,可以使用具有所需缓冲液的步骤清洗。由于环氧基团倍蛋白石/酶基团的亲和攻击打开,所以会发生固定化。环氧开环将在载体与蛋白/酶亲核基团之间形成共价键。 蛋白质/酶固定化试验通常是分批进行的,用搅拌或轨道振动筛(不要使用磁棒搅拌器),以保持树脂悬浮状态,避免产生泡沫,这通常是蛋白质变性的结果。所提供的建议必须作为一般准则加以考虑,并不是针对所有具体的固定案例都详尽无遗。
  • 人半胱氨酸蛋白酶抑制剂B(CSTB)检测试剂盒
    人半胱氨酸蛋白酶抑制剂B(CSTB)检测试剂盒人半胱氨酸蛋白酶抑制剂B(CSTB)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围: 规格:96T/48T使用目的:本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人半胱氨酸蛋白酶抑制剂B(CSTB)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人半胱氨酸蛋白酶抑制剂B(CSTB)水平。用纯化的抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入人半胱氨酸蛋白酶抑制剂B(CSTB)抗原、生物素化的人半胱氨酸蛋白酶抑制剂B(CSTB)抗体、HRP标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人半胱氨酸蛋白酶抑制剂B(CSTB)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。
  • RP-HPLC-MS 方法分析几种蛋白的胰蛋白酶酶解多肽产物的条件优化
    本文采用胰蛋白酶酶解蛋白的方法,得到各种蛋白的肽谱,比较几款不同的反相色谱柱在分离蛋白酶解片断时的差异,同时借助质谱,评价蛋白酶解产物- 多肽在酸性或者碱性流动相条件下表现出分离性能的差异。
  • RP-HPLC-MS 方法分析几种蛋白的 胰蛋白酶酶解多肽产物的条件优化
    本文采用胰蛋白酶酶解蛋白的方法,得到各种蛋白的肽谱,比较几款不同的反相色谱柱在分离蛋白酶解片断时的差异,同时借助质谱,评价蛋白酶解产物- 多肽在酸性或者碱性流动相条件下表现出分离性能的差异。
  • 人抗胰蛋白酶(AT)检测试剂盒
    人抗胰蛋白酶(AT)检测试剂盒人抗胰蛋白酶(AT)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围: 规格:96T/48T使用目的:本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人抗胰蛋白酶(AT)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人抗胰蛋白酶(AT)水平。用纯化的抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入人抗胰蛋白酶(AT)抗原、生物素化的人抗胰蛋白酶(AT)抗体、HRP标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人抗胰蛋白酶(AT)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度
  • 使用反相高效液相色谱-蒸发光散射法(RP-HPLC-ELSD) 对 PEG 偶联重组蛋白注射剂中的吐温 20(聚山梨酯 20)进行分析
    本文介绍了利用 Agilent 1260 Infinity Ⅱ 四元液相色谱系统、Agilent 1290 Infinity Ⅱ ELSD 检测器和 Agilent Poroshell 120 SB-C18, 3.0 mm × 150 mm, 2.7 μ m 色谱柱对 PEG 偶联重组蛋白注射剂中的吐温 20 进行定量分析的简单灵敏的方法。该方法采用含三氟乙酸(0.1% TFA) 的乙腈和水溶液为流动相,以梯度条件对注射剂中吐温 20 进行分离分析。该方法操作方便,灵敏度高,具有良好的线性关系、精密度和准确度,为生物制药企业测定PEG 偶联的一类重组蛋白制剂中的吐温 20 辅料提供一种可选的解决方案。
  • 使用反相高效液相色谱-蒸发光散射法(RP-HPLC-ELSD) 对 PEG 偶联重组蛋白注射剂中的吐温 20(聚山梨酯 20)进行分析
    本文介绍了一种对实际 PEG 偶联重组蛋白注射液中吐温 20 进行高效分离的方法。该方法采用 Agilent 1260 Infinity II Prime 液相色谱系统、1290 Infinity II ELSD 检测器和 Poroshell 120 SB-C18 色谱柱。1290 Infinity II ELSD 为吐温 20 提供了较高的检测灵敏度和较好的精密度结果。吐温 20 的 LOD 和 LOQ 分别为 5 μ g/mL 和 10 μ g/mL,在 10–200 μ g/mL 浓度范围表现出良好的线性,且实际样品的测定值在理论值的± 10% 范围内,表明该方法可以实现准确定量分析。针对客户测定实际重组蛋白制剂(如偶联PEG)中吐温 20 的分析需求,本文所述的方法可作为一种可靠的解决方案。
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