转化酶样凋亡蛋白酶

中文名称：蛋白酶英文名称：protease;proteinase其他名称：蛋白水解酶(proteolytic enzyme)定义：催化蛋白质中肽键水解的酶。根据酶的活性中心起催化作用的基团属性，可分为：丝氨酸/苏氨酸蛋白酶(编号：EC 3.4.21.-/EC 3.4.25.-)、巯基蛋白酶(编号：EC 3.4.22.-).、金属蛋白酶(编号：EC 3.4.24.-)和天冬氨酸蛋白酶(编号：EC 3.4.23.-)等。蛋白酶广泛存在于动物内脏、植物茎叶、果实和微生物中。微生物蛋白酶，主要由霉菌、细菌，其次由酵母、放线菌生产。该产品主要由上海斯诺美生物医学技术服务中心提供。

科技名词定义中文名称：蛋白酶英文名称：protease;proteinase其他名称：蛋白水解酶(proteolytic enzyme)定义：催化蛋白质中肽键水解的酶。根据酶的活性中心起催化作用的基团属性，可分为：丝氨酸/苏氨酸蛋白酶(编号：EC 3.4.21.-/EC 3.4.25.-)、巯基蛋白酶(编号：EC 3.4.22.-).、金属蛋白酶(编号：EC 3.4.24.-)和天冬氨酸蛋白酶(编号：EC 3.4.23.-)等。应用学科：生物化学与分子生物学（一级学科）；酶（二级学科）

想找提取胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶的文献，先谢谢各位了！1、猪胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶的分离和纯化，中国生化药物杂志，1988年 03期：1-5 2、胰岛素-胰酶联产工艺研究初报，生化药物杂志，1986年 04期：56-573、猪胰脏蛋白酶的生产，生化药物杂志，1984年 04期：1-44、亲和层析和离子交换组合技术分离胰脏中的蛋白酶及其抑制剂，生化药物杂志，1989年，1期：26-29。

您好！想请教蛋白酶酶解糖蛋白的具体问题，蛋白酶在酶解糖蛋白的过程中是否与糖蛋白上的糖链构象有关系？有相关方面的书籍或者文献可供参考吗？谢谢

请教下液相检测胰蛋白酶酶切效果，检测条件和柱子类型？

各位大侠：最近在做蛋白酶（5w分子量）检测，用的是大粒径（300A）的C4和C18，流动性换过三氟乙酸、甲酸和磷酸都不行，蛋白酶都出在死时间啊！！！愁死人了，谢谢各位高手指导。

请教各位，有同样采用蔡红的改良茚三酮方法测定土壤蛋白酶活性的吗？用酪酸钠做基质，为什么样品的吸光度值比对照样吸光度值低？同求靠谱实用的土壤蛋白酶测定的详细方法，万分感谢

谁有土壤蛋白酶测定的铜-磷酸盐比色法阿？能不能告诉我一下、在此谢谢大家乐真的是非常非常需要阿

方法GB/T5009.84-2003 其中的试剂蛋白酶 与蛋白酶K是一种物质么？请赐教！

请问下各位同仁，有哪位知道胶原蛋白酶活测定是用什么氨基酸制定标准曲线的？是不是不同的蛋白酶用不同的氨基酸制定标准曲线？

木瓜、苹果、菠萝、木瓜、猕猴桃等水果中都含有特殊的植物性蛋白酶，能够使肉嫩可口。可以把这些水果切成小块，或是榨成汁，在腌肉时加进去，就能起到“天然嫩肉粉”的功效。、猕猴桃等水果中都含有特殊的植物性蛋白酶，能够使肉嫩可口。可以把这些水果切成小块，或是榨成汁，在腌肉时加进去，就能起到“天然嫩肉粉”的功效。

我想问一下大家阿在用茚三酮方法测定蛋白酶的时候，有没有出现没有加土样、只加了明胶的对照样，吸光度特别大呢？谢谢各位不吝赐教阿，呵呵

苹果、菠苹果、菠萝、木瓜、猕猴桃等水果中都含有特殊的植物性蛋白酶，能够使肉嫩可口。可以把这些水果切成小块，或是榨成汁，在腌肉时加进去，就能起到“天然嫩肉粉”的功效。萝、木瓜、猕猴桃等水果中都含有特殊的植物性蛋白酶，能够使肉嫩可口。可以把这些水果切成小块，或是榨成汁，在腌肉时加进去，就能起到“天然嫩肉粉”的功效。

请问各位，腊肉制品中，那几种蛋白酶比较活跃，对风味影响较大？活性容易测定吗？

菠萝、猕猴桃、木瓜等水果含有蛋白酶，会破坏消化道黏膜，带来“沙嘴”“剌嗓子”等不适。一般来说，水果成熟度越高，蛋白酶活性越差，因此，要尽量选成熟度高的水果。）菠萝、猕猴桃、木瓜等水果含有蛋白酶，会破坏消化道黏膜，带来“沙嘴”“剌嗓子”等不适。一般来说，水果成熟度越高，蛋白酶活性越差，因此，要尽量选成熟度高的水果。

谁知道蛋白酶的活力如何进行检测？

出现未知肽，是什么原因老师们好，我把酪蛋白用胰蛋白酶，酶切后，再通过载体分离的方法，分离出的多肽，有三条在库里边收不到，这是什么原因啊？

我们现在要测土壤中的蛋白酶，但方法中有个1%精胶是什么啊？请各位高手指教！！谢谢

请问各位，腊肉制品中，那几种蛋白酶比较活跃，对风味影响较大？活性容易测定吗？

各位前辈，高手们，在些先向各位问声好！请问各位有谁知道菠萝中蛋白酶活性的测定方法？请不吝赐教啊！万分感谢！！！

最近在做土壤蛋白酶，可是做了几次提出来的待测液体在比色的时候总是茶色，不知道是为什么？ 我是按照关松萌的土壤酶及其研究法上的茚三酮比色法做的，不知道问题到底出在哪里，希望大家能给我指点迷津，方便的话可以给我发邮件，我的邮箱是 xiaoyu589@163.com 谢谢啦！

在哪能买到药用复合消化酶、脂肪酶、酒曲蛋白酶？

请教各位老师，胰蛋白酶里的常规阴阳离子怎么前处理啊？因为我之前做的都是无机物，所以没有经验。我知道有机物有氧弹燃烧能做，但是实验室没有该设备，有老师做过相关的实验吗？

我正在做细胞色素C 胰蛋白酶酶解后[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]测序，我想请教一下酶解的条件。酶的用量，时间，温度,pH,还有缓冲溶剂的配置

摘要激光扫描共聚焦显微镜作为80年代发展起来的一种高精度分子细胞生物学分析仪器，具有组织细胞断层扫描、活细胞动态荧光监测、三维图像重建、共聚焦图像定量分析等先进功能，在近年的细胞凋亡这一研究热点中得到了大量创造性的应用。本文拟就对激光扫描共聚焦显微镜在凋亡的形态学、分子水平变化及重要生理过程三方面研究中的应用及其成果做一综述。细胞凋亡(apoptosis)是不同于细胞坏死的一种细胞主动死亡方式，并由特定的基因控制。凋亡细胞在形态上出现变圆皱缩、染色质浓缩边集、核碎裂、凋亡小体形成等变化，并最终由非炎症过程清除。由于细胞凋亡独特地影响着机体的细胞发育和代谢，在监测和清除肿瘤细胞与突变细胞等方面也可能发挥重要的作用，近年来受到了细胞生物学、分子生物学、免疫学等多学科的广泛关注。激光扫描共聚焦显微镜(laser scaing confocal microscopy, LSCM)是80年代发展起来的一种高精度分子细胞生物学分析仪器，辅以各类免疫荧光探针或荧光染料与被测物质特异性结合，不仅可观察固定的细胞组织切片，还可对活细胞的结构、分子和离子进行实时动态地观察和检测。在细胞凋亡的研究中，激光扫描共聚焦显微镜已被广泛地应用于形态学、分子水平监测及重要生理改变等各方面，其中不乏新颖之处，并获得了大量成果，以下将就此做一简单的介绍。激光扫描共聚焦显微镜与凋亡的形态学激光扫描共聚焦显微镜用点光源扫描标本的光学横断面，以代替普通光学显微镜所使用的场光源，并用探测针孔滤去离焦光线，所以消除了来自焦平面以外的衍射或散射光的干扰，可实现高清晰、高分辨率的组织细胞断层扫描。并且由于激光扫描共聚焦显微镜采用数字化成像，因而辅以一定的软件就能对图像进行定量分析及三维重建等操作。过去对细胞凋亡的形态学研究方法局限于活性细胞和组织切片染色、荧光镜观察，或者石蜡切片原位末端标记法。由于普通光镜的分辨率和清晰度有限，而电镜又显然不适合对凋亡这一复杂动态过程的监测，激光扫描共聚焦显微镜的应用使人们对细胞凋亡的形态学观察分析提高到了一个前所未有的新水平。细胞核核膜的破坏对于染色质聚集并形成凋亡小体起重要作用。lamin是构成核片层的蛋白质，位于核膜的内表面，由caase-6介导的lamin裂解可影响核膜的完整性。在McCall等的研究中，对果蝇卵子发生晚期的细胞凋亡现象进行了动态观察。以单抗mAb101标记其哺育细胞核内膜的laminDm0（哺乳类laminB的同源体），用激光扫描共聚焦显微镜加以观察。正常哺育细胞到11期时，染色的lamin呈弥散的雾状分布并围绕核周，而dcp-1GLC哺育细胞即使到了较晚的14期时，仍然显示界线明确的染色。可见dcp-1突变体在核lamin蛋白的酶切或解聚方面存在缺陷。细胞器Li 等在对C(6)-酰基鞘氨醇诱导胞内囊泡产生的研究中，在不产生中毒效应的情况下，加入10microM C(6)-酰基鞘氨醇以诱导鼠纤维母细胞(3T3-L1和3T3-F442A)凋亡。观察到囊泡的形成与C(6)-酰基鞘氨醇的诱导呈时间依从和剂量依从关系。大量小泡在其加入后8小时内出现，并且随时间而增大；大泡最终分布在核周，而小泡分布在细胞边缘。用抗-溶酶体膜蛋白抗体和共聚焦免疫荧光显微分析，证明增大的囊泡为晚期内吞体/溶酶体。另外，胞内的细胞器都有其适用的荧光探针，如高尔基复合体常用的探针有Dceramide、BODIPY ceramide等，内质网常用的有Dil、DiOC6等，经标记均可进行精细的观察。当然，激光扫描共聚焦显微镜在形态学中的优势更在于其对图像的三维重建功能，从而揭示过去只能在平面上显现的凋亡细胞在三维空间中的结构；而对细胞凋亡的动态过程，它可以用三维加时间的四维方式进行观察，来获取最逼真的形态学资料。凋亡过程中一些特征性的三维形态变化正期待着进一步具体的工作去发现。激光扫描共聚焦显微镜对凋亡细胞的分子水平监测随着分子生物学突飞猛进的发展，关于细胞凋亡分子机制的研究已有了很大的突破。细胞凋亡的信号传递途径及其调控涉及到大量的酶级联反应、生物大分子的空间转移等。而激光扫描共聚焦显微镜以其定性、定量、定时的优点，结合众多荧光探针的应用，成为了研究细胞凋亡分子水平变化的有力手段。DNA大分子DNA断裂以及染色质的异常凝聚，是细胞凋亡的关键，同时也是细胞核在细胞凋亡中具有标志性的变化。Columbara等报道将激光扫描共聚焦显微镜与原位TdT和Poll免疫荧光技术相结合，进而确定双链和单链DNA的断裂点。而在对细胞凋亡和细胞坏死区别的研究中，Kreel等在培养的K562细胞中加入放线菌素D以诱导凋亡，并对细胞的DNA片段进行了3’-末端标记。经激光扫描共聚焦显微镜观察发现K562细胞凋亡早期有大量DNA片段出现，且DNA片段弥散分布于除核仁外的细胞核区。伴随着凋亡的进展，细胞核内出现大量高标记密度的圆形小体。而采用NaN3或快速冻融法使细胞坏死，经激光扫描共聚焦显微镜观察证实，在坏死开始阶段并无DNA片段的出现，至少在坏死发生24小时后才有DNA片段产生。Caase家族Caases是一组高度保守的半胱氨酸蛋白酶，目前发现有11个成员。多数细胞凋亡是以Caase家族蛋白的激活并作用于其关键底物而实现的，而caases激活的关键又在于该家族蛋白间的级联反应，因此caases被认为是细胞凋亡的中心环节和执行者，成为研究的热点。Mandal等用激光扫描共聚焦显微镜对细胞凋亡中激活的caase-3的重分布进行了研究。用丁酸处理细胞后，观察到DNA-PKcs的裂解与caase-3的激活成正相关，而Bcl-2的过度表达则可抑制上述两个过程。同时还证明（1）激活后的caase-3重分布到核区，（2）裂解局部的DNA-PKcs和PARP（polyADP-ribosepolymerase，聚腺苷二磷酸核糖多聚酶），（3）裂解产物又被释放到核外的细胞液。caase-3的抑制物四肽DEVD-CHO又可抑制上述的三个连续的步骤。该研究提示：激活的caase-3在核内的重分布构成了丁酸所诱导的细胞凋亡中的一个重要凋亡信号。另外，在用激光扫描共聚焦显微镜对Q79诱导大鼠神经元凋亡的研究中，Sanchez等发现了Q79对caase-8的聚集和激活，而对caase-8的抑制则阻止了被诱导的细胞凋亡；加以Westernblot分析，还建立了caase-8的激活和某些神经退行性疾病（如舞蹈病）的联系。Grazyme丝氨酸蛋白酶grazyme为另一种重要的凋亡信号分子，对某些caase家族蛋白也有激活作用。Trapani等就证明了杀伤淋巴细胞利用穿孔素和grazymeB的协同作用来诱导靶细胞的凋亡，在其研究中通过激光扫描共聚焦显微镜观察到（1）50%细胞的胞核内快速聚集了以FITC荧光标记的grazymeB（最长7分钟，t1/2为2分钟），然后发生凋亡；（2）其它的细胞只有细胞液内有FITC-grazyme B的摄取，避免了凋亡。此间至少在13分钟后才有DNA碎片的出现，说明核内的grazyme B聚集出现在凋亡的执行阶段之前。并且通过对核内液的处理（加入70KDa FITC-dextran），间接观察到grazyme B的转移并非是因为核膜受caases的作用而破损，而是由于穿孔素的协同。其它以上的介绍显示，激光扫描共聚焦显微镜在检测活细胞酶活性动态变化方面有着突出的优势。实际上，对于细胞凋亡的分子机制这样一个极其复杂的课题，激光扫描共聚焦显微镜的应用远不只限于上述的几种离子和大分子，而是渗透到了大量的分枝课题中去。如在对重要的凋亡负调控蛋白Bcl-2的研究中，Beham等利用基因毒性损害（genotoxic damage）诱导细胞凋亡，并以Bcl-2蛋白抑制其凋亡过程。用激光扫描共聚焦显微镜和Immunoblotting观察显示，Bcl-2的作用在于阻止了诱导产生的p53蛋白向核内的转运。而Ohsawa等对独立于caase家族的另一种重要蛋白酶—组织蛋白酶进行了研究，用血清剥夺法诱导PC12细胞凋亡，并用激光扫描共聚焦显微镜监测了其精细超微结构改变过程和细胞内组织蛋白酶B和D的免疫活度的对比变化。又如，在人胰岛淀粉样多肽（hIA）的研究中，Hiddinga等用表达hIA的质粒转染COS-1细胞诱导凋亡，辅以免疫组化染色，用激光扫描共聚焦显微镜证明了hIA在细胞的内质网和高尔基复合体内呈簇状沉积，并与细胞

液质不能测蛋白酶解样品。杂志丰度太高。冲柱子也不管用。

我想做大米中硫胺素，请问用哪种蛋白酶和淀粉酶？？以前没用过，上网看蛋白酶 和淀粉酶都分好几种，请问用哪种，多谢！！

各位帮帮忙吧，愁死了快要为什么我在测土壤蛋白酶的时候，配的铜-磷酸盐缓冲液有大量蓝色沉淀生成呢？配的方法是：铜-磷酸盐溶液：（a）27.3克CuCl2.2H2O溶于1升水中；（b）64.5克Na2HPO4.12H2O溶于500mL水中，加7.2克NaOH，稀释至1升；（c）57.21克Na2B4O7溶于1500毫升水中，加100毫升0.1NHCl稀释至2升。使用前按1：2：2（体积比）将溶液（a）、（b）、（c）混合。大家帮忙看下对吗？先谢谢啦

可选择性杀伤HIV感染细胞,为HIV药物生产提供新思路经过多年的科技攻关，近日，香港中文大学教授邵鹏柱学科组与中科院昆明动物研究所研究员郑永唐学科组合作，从玉米中获得了一种能够选择性地杀伤艾滋病病毒（HIV）感染细胞的蛋白酶突变体。该研究成果为研发特异性靶向HIV感染细胞的新型抗HIV药物提供了新思路和新策略。 据悉，HIV存在潜藏机制可以长期潜伏在细胞中而逃逸宿主免疫系统的攻击，目前已上市的抗HIV药物均不能选择性地杀伤感染细胞而根除病毒。郑永唐认为，新的研究思路对开发新型抗HIV药物显得非常重要，研究具有选择性地杀伤HIV感染细胞而保护正常细胞不受伤害的抗艾滋病药物是极有前景的方向。 核糖体失活蛋白（RIPs）具有RNA N-糖苷酶活性，可以阻遏延长因子EF-1或EF-2与核糖体的结合，抑制蛋白质的生物合成。因此，RIPs具有很高的细胞毒性，常常被开发成为免疫毒素、抗病毒或抗肿瘤药物。RIP分为3类：I型、II型和III型。其中，III型RIP以玉米RIP为代表，先合成无活性的含有一段25氨基酸的内部失活结构域的前体蛋白，前体蛋白被切除该结构域后才成为有活性的核糖体失活蛋白。 在香港研究资助局、科技部“973”项目、国家重大科技专项、中科院等项目的资助下，邵鹏柱、郑永唐等对玉米RIP的内部失活结构域进行一系列的结构修饰和改造，获得了对HIV-1蛋白酶特异识别并激活的玉米RIP突变体。细胞水平实验的研究表明，突变体对未感染细胞毒性低，但突变体进入HIV-1感染细胞后则可被细胞内的HIV-1蛋白酶识别并切割去除失活结构域转变成为活性蛋白，从而选择性地杀伤HIV-1感染细胞。同时，通过增加突变体进入细胞的效率，对HIV-1感染细胞的杀伤力更强。突变体也可以被HIV-1蛋白酶耐药株的蛋白酶识别并激活，因此突变体对HIV-1蛋白酶耐药株感染细胞也有很好的选择杀伤性。

可选择性杀伤HIV感染细胞,为HIV药物生产提供新思路　　经过多年的科技攻关，近日，香港中文大学教授邵鹏柱学科组与中科院昆明动物研究所研究员郑永唐学科组合作，从玉米中获得了一种能够选择性地杀伤艾滋病病毒（HIV）感染细胞的蛋白酶突变体。该研究成果为研发特异性靶向HIV感染细胞的新型抗HIV药物提供了新思路和新策略。　　据悉，HIV存在潜藏机制可以长期潜伏在细胞中而逃逸宿主免疫系统的攻击，目前已上市的抗HIV药物均不能选择性地杀伤感染细胞而根除病毒。郑永唐认为，新的研究思路对开发新型抗HIV药物显得非常重要，研究具有选择性地杀伤HIV感染细胞而保护正常细胞不受伤害的抗艾滋病药物是极有前景的方向。　　核糖体失活蛋白（RIPs）具有RNA N-糖苷酶活性，可以阻遏延长因子EF-1或EF-2与核糖体的结合，抑制蛋白质的生物合成。因此，RIPs具有很高的细胞毒性，常常被开发成为免疫毒素、抗病毒或抗肿瘤药物。RIP分为3类：I型、II型和III型。其中，III型RIP以玉米RIP为代表，先合成无活性的含有一段25氨基酸的内部失活结构域的前体蛋白，前体蛋白被切除该结构域后才成为有活性的核糖体失活蛋白。　　在香港研究资助局、科技部“973”项目、国家重大科技专项、中科院等项目的资助下，邵鹏柱、郑永唐等对玉米RIP的内部失活结构域进行一系列的结构修饰和改造，获得了对HIV-1蛋白酶特异识别并激活的玉米RIP突变体。细胞水平实验的研究表明，突变体对未感染细胞毒性低，但突变体进入HIV-1感染细胞后则可被细胞内的HIV-1蛋白酶识别并切割去除失活结构域转变成为活性蛋白，从而选择性地杀伤HIV-1感染细胞。同时，通过增加突变体进入细胞的效率，对HIV-1感染细胞的杀伤力更强。突变体也可以被HIV-1蛋白酶耐药株的蛋白酶识别并激活，因此突变体对HIV-1蛋白酶耐药株感染细胞也有很好的选择杀伤性。　　该研究成果已在国际学术期刊《核酸研究》（Nucleic Acids Research）上发表。