钙调神经磷酸酶底物

[b][font='微软雅黑','sans-serif'][color=#FF6600]实验原理[/color][/font][/b][font='微软雅黑','sans-serif']碱性磷酸酶（alkaline phosphatase EC 3.1.3.1简称为ALPase）广泛存于微生物界和动物界。ALPase能催化几乎所有的磷酸单酯的水解反应，产生无机磷酸和相应的醇、酚或糖。它也可以催化磷酸基团的转移反应，磷酸基团从磷酸酯转移到醇、酚或糖等磷酸受体上。在磷的生物和化学循环过程中，ALPase起了及其重要的作用。在生物体内ALPase与磷的代谢直接相关，参与磷与钙物质的消化、吸收、分泌以及骨骼的形成等生理生化过程。ALPase的作用最适PH在碱性区域，一般在PH9.0~10.5范围内。Mg[sup]2+[/sup]对该酶的活力有显著的激活使用。[/font][font='微软雅黑','sans-serif']为了获得好的提取效果，在酶的制备过程，特别应注意以下几点：[/font][font='微软雅黑','sans-serif']（1）[/font][font='微软雅黑','sans-serif']选取来源丰富、酶含量高的新鲜材料。提取工作应在获得材料后立刻开始，否则应在低温下保存。[/font][font='微软雅黑','sans-serif']（2）[/font][font='微软雅黑','sans-serif']用盐分级沉淀是一种应用非常广泛的方法。碳酸铵是最常用的盐。操作时，要注意保持缓冲液的合适PH值和温度。在加碳酸铵时需事先将其研细，需缓慢加入并及时搅拌溶解，尽量防止泡沫形成，以免酶蛋白在溶液中表面变性。盐析生成的沉淀，要静置20min以上，以使沉淀完全，然后方可时行离心分离。[/font][font='微软雅黑','sans-serif']（3）[/font][font='微软雅黑','sans-serif']有机溶剂沉淀法也常用于蛋白质的分离提纯。丙酮和乙醇是使用最为广泛的两种有机溶剂。应注意在低温下操作，缓慢加入，充分搅拌，避免局部浓度过高放出大量热量而使酶蛋白变性。离心收集沉淀后，最好立即将其溶于适量缓冲液中，以避免酶活力的丧失。[/font][font='微软雅黑','sans-serif']（4）[/font][font='微软雅黑','sans-serif']在酶的制备过程中，每经一步处理，都需测定酶的活力和比活力。唯有比活力提高较大，提纯步聚才有效。[/font][align=left][font='微软雅黑','sans-serif'] [/font][font='微软雅黑','sans-serif']酶活力的分析：通常是以对—硝基苯磷酸二纳（pNPP)为底物，在PH10.1的碳酸盐缓冲液（含2mmol/L Mg[sup]2+[/sup]）的测活体系中检测酶催化pNPP水解产生黄色的对硝基苯（ pNP）在405 nm处有最大的吸收峰，可以根据OD[sub]4[/sub][sub]〇5[/sub]值的增加计算酶活力的大小。酶活力定义为在37℃下，以5mmol/L pNPP为底物，在pH 10.1的碳酸盐缓冲液含2 mmol/L Mg[sup]2+[/sup]的测活体系中每分钟催化产生1 mol/L pNP的酶量定为1个酶活力单位。酶的比活力定义为每mg蛋白所具有的酶活力单位数。 [/font][/align]

请问新购买的碱性磷酸酶怎么稀释？ 需要特殊的缓冲吗？

我在用磷酸苯二钠测定土壤碱性磷酸酶时，配制的磷酸苯二钠（用硼酸缓冲液配制）溶液，在暗处放置了将近五天后出现了一些絮状物，请问下，磷酸苯二钠是不是现配现用啊？万分感谢！

[color=#333333]磷酸酶对乳制品的质量有何影响[/color]

各位好，今天做了土壤酸性和碱性磷酸酶的标准曲线，采用的苯磷酸二钠的方法。结果反应液的颜色没什么变化，而且吸光度值没有趋势。请问这是什么情况。请大家帮助分析一下！救命的啊

酸性磷酸酶0.25U/ul怎么配，购买的袋子上写的是0.5-3.0U/mg

测定转化，过氧化氢，脲，磷酸酶的方法和微生物Ｃ／Ｎ的测定方法！cyh010＠.com

用的磷酸苯二钠法，里面所用的26二溴醌氯亚胺试剂，大家都用的哪里的？进口的还是国产的？进口的视乎很贵啊，有没有国产的？在哪里可以买到啊？？各位帮帮忙了啊？？

第五章 基因工程 5.1 基因工程的四大要素及其实施要点1.工具酶1)限制性内切酶2)连接酶3)修饰酶4)DNA聚合酶：A. DNA聚合酶I；B. Klenow fragmentC. T4 or T7 DNA polymeraseD. Taq DNA polymeraseE. RT: 依赖RNA的 DNA polymerase5)依赖于DNA的RNA聚合酶6)T4噬菌体多核苷酸激酶TK：磷酸化7)碱性磷酸酶:脱磷酸细菌碱性磷酸酶(B. Alkaline Phosphatase)小牛肠碱性磷酸酶(Calf intestinal Phosphatase) 2.目的基因的分离方法及其用途 分离方法基因分离的物理化学方法鸟枪法cDNA文库的建立与基因的分离直接从特定的mRNA中分离基因基因组文库的建立和基因的分离从蛋白质入手分离编码此蛋白的基因基因的化学合成利用PCR or RT-PCR分离基因 用途研究该基因的全貌与内涵，如详细分析其结构，功能及其调控与正常基因对比，寻找异常基因的异常点，进而探索疾病发生的分子生物学机理及治疗对策研究生物种系进化与相关同源性应用某种基因的大量表达，生产所需要的蛋白质或多肽改良某些目的基因，以改良品种建立基因疗法。选用某种正常基因，引入患者体内，治疗某些先天性遗传疾病。 3.基因工程载体一、定义二、载体具备3 的条件：三、载体的种类：质粒载体细菌用的表达载体λ载体粘粒载体M13噬菌体载体真核细胞用载体人工染色体（YAC，8 BAC，9 PAC，10 MAC） 4.受体细胞和重组基因的导入[si

根据1961年国际酶学会议规定：1个酶活力单位是指在特定条件（25℃，其它为最适条件）下，在1分钟内能转化1微摩尔底物的酶量，或是转化底物中1微摩尔的有关基团的酶量，缩写为1U或者1IU。现在一些生化产品供货商对酶用的很多都是自己的定义1unit而不是1U，那这二者之间是否可以换算得到一个转换系数？比如酸性磷酸酶A供货商的酶活定义为：One unit will hydrolyze 1.0 μmole of p-nitrophenyl phosphate per min at pH 4.8 at 37 °C. B供货商的酶活定义为：Specific activity: ~ 17 U/mg (40oC, pH 5.0, 4-Nitrophenyl phosphate). 问题：A供货商的1unit是否是1U？A供货商的1unit与B供应商的1U是否一致？另外对于国际酶活力概念中提到的“在25°C条件下，其他为最适条件”是否温度必须为25°C条件下测得才为酶活国际单位，还是比如在其他温度下入37°C或者40°C等不同温度测得的也为国际酶活力单位IU？

哪位同仁有新发布的国家标准　钙镁磷肥　GB　24012-2006　，2006年12月1日实施，过磷酸钙　GB　24013-2006。

我在用磷酸苯二钠测定土壤碱性磷酸酶时，配制的磷酸苯二钠（用硼酸缓冲液配制）溶液，在暗处放置了将近五天后出现了一些絮状物，请问下，磷酸苯二钠是不是现配现用啊？万分感谢！

检测植酸酶时使用的植酸钠（肌醇六磷酸钠，sigma P3168）可用哪种型号的底物替代？

高手请教一下，XPS 分析中磷酸三钙Ca3(PO4)2和磷酸镁Mg3(PO4)2的结合能(binding energy)应该是多少，我看了好多资料都没查到。谢谢。

[font=宋体][size=3]我用磷酸苯二钠比色法想测土壤磷酸酶的活性，具体应该怎么做，我查了些文章，都没有很具体的操作。我是刚刚接触酶活性这一块，感觉一头雾水。非常感谢[/size][/font]

DNA 序列分析技术是现代生命科学研究的核心技术之一，而双脱氧核苷酸链终止法(Sanger法)是目前使用最普遍的DNA 序列分析技术。在基于Sanger法的全自动DNA 测序技术中，测序反应产生的DNA 片段是荧光标记的，这些片段经过平板胶电泳或毛细管电泳得到分离，荧光分子被激发而发光，发出的光信号被检测系统检测。Sanger法的优势在于可以分析未知DNA 的序列，且单向反应的读序能力较长，目前的技术可以达到1000bp以上。 在实际工作中，很多情况需要对已知序列的DNA 片段进行序列验证，而这种分析往往测几十bp就可以满足需要.在这种情况下，Sanger法未必是最合适的ＤＮＡ序列分析技术。新发展的Pyrosequencing(焦磷酸测序)技术应该是目前最适合这些应用的ＤＮＡ序列分析技术。Pyrosequencing技术是新一代DNA 序列分析技术，该技术对DNA 的序列分析无须进行电泳，DNA 片段无须荧光标记，因此相应的仪器系统无须荧光分子的激发和检测装置.本文将就Pyrosequencing技术的原理和应用进行介绍和讨论．一、Pyrosequencing技术的原理首先通过PCR制备待测序的DNA模板，PCR的引物之一是用生物素标记的。PCR产物和偶连avidin的Sepharose微珠孵育，DNA双链经碱变性分开；纯化得到含生物素标记引物的待测序单链，并和测序引物结合成杂交体。Pyrosequencing技术是由四种酶催化的同一反应体系中的酶级连反应，四种酶是：DNA聚合酶（DNA polymerase）、硫酸化酶(ATP sulfurylase)、荧光素酶(luciferase)和双磷酸酶(apyrase).反应底物为adenosine 5´ phosphosulfate (APS)、荧光素(luciferin)。反应体系还包括待测序DNA单链和测序引物。反应体系配置好后就可以加入底物dNTP进行序列分析了。测序反应是这样进行的：在每一轮测序反应中，只能加入四种dNTP（dATP S，dTTP，dCTP，dGTP）之一，如该dNTP与模扳配对，聚合酶就可以催化该dNTP掺入到引物链中并释放焦磷酸基团（PPi）。掺入的dNTP和释放的焦磷酸是等摩尔数目的.注意：反应时deoxyadenosine alfa-thio triphosphate (dATP S)是dATP的替代物，因为DNA聚合酶对dATP S的催化效率比对dATP的催化效率高，且dATP S不是荧光素酶的底物。硫酸化酶催化APS和PPi形成ATP，ATP和焦磷酸的摩尔数目是一致的。ATP驱动荧光素酶介导的荧光素向氧化荧光素(oxyluciferin)的转化，氧化荧光素发出与ATP量成正比的可见光信号。光信号由CCD摄像机检测并由pyrogram™反应为峰。每个峰的高度(光信号)与反应中掺入的核苷酸数目成正比。ATP和未掺入的dNTP由双磷酸酶降解，淬灭光信号，并再生反应体系。然后就可以加入下一种dNTP。 Pyrosequencing技术的原理： 随着以上过程的循环进行，互补DNA链合成，DNA序列由Pyrogram的信号峰确定。商品化的Pyrosequncing试剂盒通过以下几点来保证反应的有效进行:底物浓度已最佳化，高质量的三磷酸腺苷双磷酸酶保证了所有的dNTP被降解，包括ATP和dATPαS；dNTP降解速率慢于掺入速率，有利于dNTP充分掺入；ATP合成速率快于ATP水解速率，使的ATP浓度和光产生正比于掺入的dNTP数目。有必要指出的是:Pyrosequencing技术可以确定一个模板的20-30bp的序列。有的研究者经过改进而使该技术的读序长度增加一倍以上。为了增加信噪比，在Pyrosequencing技术中，用dATPαS取代dATP，因为dATPαS可以比dATP被DNA聚合酶更有效利用，也更有利于阅读富含T的区域，且dATPαS不是荧光素酶的底物。但dATPαS是两种异构体SpdATPαS和RpdATPαS的混合物，聚合酶只能利用SpdATPαS。因此，为了得到最佳反应效率，必需使反应体系中保持最佳浓度的SpdATPαS，但同时增加了相应浓度的无用的RpdATPαS。dATPαS被双磷酸酶降解后的产物是双磷酸酶的抑制剂，所以随着反应进行，被双磷酸酶降解的dATPαS的降解产物浓度越来越大，双磷酸酶的活性越来越低。这可能是Pyrosequencing技术测序长度很短（20-30bp）的主要原因之一。新的革新就在于在反应体系中只加入SpdATPαS，这样一来可以大大降低dATPαS降解产物的浓度，维持双磷酸酶较长时间的活性。目前这个革新可以使Pyrosequencing技术的测序长度增加最少一倍，达到50至上百bp。

磷酸液（40%）中的钙、镁、铁、钾、钠、氯、铅，其中铁含量是百分级的，这样的样可以用ICP-MS法，将样品稀释1000倍后可以直接进样分析吗

生命活动与蛋白质的动态变化密切相关, 很多情况下某些蛋白质是通过各种翻译后修饰来完成或改变其功能。在数量众多的蛋白质翻译后修饰中，蛋白质磷酸化修饰无疑是最重要的一类，它是指通过蛋白激酶（Protein kinase，PK）介导的酶促反应把磷酸基团从一个化合物转移到另一个化合物上的过程（Figure 1所示），是生物体内存在的一种普遍的调节方式。现今发现的所有人类蛋白质中超过30%可被磷酸化修饰，这一修饰在细胞信号的传递过程中占有极其重要的地位，与生命活动的许多过程都密切相关，对此的研究已经成为蛋白质科学的热点之一。 http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2012/09/1346918444_small.jpg磷酸化多肽（主要指肽链中的酪氨酸、丝氨酸和苏氨酸残基的侧链羟基被磷酸化生成酸式磷酸酯的修饰多肽）是研究蛋白质磷酸化过程的必不可少的工具，它可作为磷酸酶模型底物，或作为可产生抗磷酸化蛋白抗体的抗原，也可以在确定磷酸化蛋白的物理参数时作为参考化合物等。因此磷酸化多肽的合成在过去的几年中吸引了相当大的兴趣，目前已确定了较为成熟的合成路线，使磷酸化多肽的合成趋于常规。目前磷酸化多肽的合成主要有两个策略：后磷酸化法（Global phosphorylation）和单体法（Building block approach），如Figure 2所示。前者是在多肽序列合成结束后再在固相载体上对丝氨酸、苏氨酸或酪氨酸的侧链羟基进行磷酸化，可以在同一次合成中同时得到带有和不带有磷酸化位点的多肽；而后者则将适当保护的磷酸化氨基酸直接引入到多肽序列中，操作较前者更为简单，现已成为磷酸化多肽合成的首选策略。在采用单体法构建磷酸化多肽时，目前广泛采用的原料为侧链单苄基保护的氨基酸：Fmoc-AA(PO(OBzl)OH)-OH (AA = Ser, Thr or Tyr)。这类保护的磷酸化位点由于侧链磷酸化基团的离子化而产生较大的位阻效应，并且磷酸化位点的引入往往能促进肽链二级结构的形成，故而磷酸化位点及其后的氨基酸的引入会比较困难。这些问题在合成含有多个磷酸化位点的多肽时将会变得尤为严重，往往会使最终产物的组成非常复杂，难以进行纯化，甚至直接导致合成的失败。http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2012/09/1346918477_small.jpg一般来讲，增加投料量和延长反应时间都能促使连接反应趋于完全，但增加投料量无疑会提高合成成本，对于较昂贵的带有保护的磷酸化氨基酸更是这样，而延长反应时间则可能增加其它副反应发生的风险，故而在合成磷酸化多肽时，需要对氨基酸投料量、反应方法以及反应时长等进行优化调整以期达到更理想、更经济的合成效果。我们有针对性地对磷酸化多肽合成条件进行了探索和调整，采用最终的优化条件成功合成了含有多达六个磷酸化丝氨酸残基的多肽：FAM-Ahx-X(pS)XX(pS)X(pS)X(pS)XX(pS)X(pS)-NH2（客户肽，详细序列未给出；其氨基端标记FAM以进行荧光检测），经过RP-HPLC纯化后最终纯品的纯度高达95%（见Figure 3）。http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2012/09/1346918493_small.jpg参考文献：1. P. Cohen, “The Role of Protein Phosphorylation in Neural and Hormonal Control of Cellular Activity”, Nature, 1982, 296 (5858): 613-620.2. From: http://en.wikipedia.org/wiki/Protein_kinase.3. L. A. Pinna, A. Donella-Deana, “Phosphorylated Synthetic Peptides as Tools for Studying Protein Phosphatases”, Biochim. Biophys. Acta., 1994, 1222 (3): 415-431.4. W. C. Chan, P. D. White, “Fmoc Solid Phase Peptide Synthesis-A Practical Approach” (2000), Oxford University Press.

大家好，请教一个问题如题，六氟磷酸锂是锂电池电解液的原料，怎么检测六氟磷酸锂中的金属杂质如钾钠钙镁等元素的含量呢，是用原子吸收还是ICP呢，有国家标准或行业标准码，请知道的帮帮我，谢谢。。。

[size=5]测钙镁和单测钙为什么用不同的溶液调PH值？1。测钙用4%NaOH溶液调PH值2。测钙镁用的氨水缓冲溶液为什么过一周以后同样的方法测钙镁时发现钙镁含量居然降低了1000多毫克/升？[/size]

哪位高手有土壤尿酶，磷酸酶，蛋白酶，天门冬酰胺酶的具体测定方法，小女万分感谢！[em09509]

干土可以么？测定酶的活性！谢了！

[b][size=4]求助土壤蔗糖酶活性采用3，5二硝基水杨酸比色法的详细步骤；脲酶活性采用苯酚钠比色法测定的详细步骤；磷酸酶活性的测定方法及步骤[/size][/b]

化学反应过程中的能量以光的形式释放出来，成为化学发光，有些生物体在能量代谢的过程中通过消耗ATP也可发光，为生物发光。化学发光 常用物质包括二氧乙烷衍生物、鲁米诺及衍生物、和丫啶酯。这些试剂可用于各种标本分析、HPLC检测和流动注射分析系统。二氧乙烷衍生物在碱性磷酸酶的作用下水解，形成一种高能量的中间体，这种中间体进一步分解后释放出光子，此类有代表性的物质是AMPPD和CSPD。此方法最为广泛的应用是基于碱性磷酸酶和β半乳糖苷酶的分析系统。碱性磷酸酶（AP）的测定 检测AP，β-葡糖苷酸酶活性的方法是使用一种有商品供应的稳定的1，2-二氧乙烷衍生物，这种发光底物的发光时间为数分钟至数小时。发光强度直接与酶的浓度相关。这种底物可用于1) 微孔板的免疫分析，DNA 探针捕获法和报告基因分析法, 2) 用于蛋白质和核酸分析的96-孔斑点膜。鲁米诺 是一种最古老的和最常用的试剂，在碱性条件下可被过氧化物氧化，同时发光，鲁米诺和过氧化物之间的氧化还原反应需要催化剂，这种催化剂一般为多价金属离子、过氧化物酶如铁、辣根过氧化物酶等，此种方法常用于检测过氧化物、重金属、过氧化物酶的含量，以及由此衍生的检测自由基、进行毒物分析和基于过氧化物酶和葡萄糖氧化酶的分析方法。丫啶酯及衍生物 在碱性条件下可产生瞬时发光，将其作为标记物，已广泛用于免疫分析和分子杂交。

如题我是新人算的和同事算的不一样呢？如：0.05mg磷酸二氢铵 + 0.003mg硝酸镁 磷酸二氢铵 ：含量99.5% 硝酸镁 英文显示：element：Mg ； 浓度：10000mg/L（20℃） ；matix：Mg(NO3)2如果我每个样基改进5ul，那么浓度就是0.01mg/ul磷酸二氢铵 + 0.0006mg/ul硝酸镁=0.01g/ml磷酸二氢铵 + 0.0006g/ml硝酸镁我配100ml基改就需要 ：1g磷酸二氢铵+0.06g硝酸镁硝酸镁浓度为10000mg/L=10mg/ml，需要0.06g硝酸镁=6ml——请问对吗？铬的基改是0.015mg 硝酸镁那岂不是要30ml？

前一段时间做实验，感觉买的化学试剂可能不纯，但又不知道该如何检测纯度，甚至不知道该如何向供应商反应这一现象。具体的情况是这样的：配制用于检测血清中碱性磷酸酶的试剂，检测方法如下：对硝基苯磷酸酯在碱性磷酸酶的作用下分解成对硝基苯（405nm特异吸收），通过监测对硝基苯的生成速度，来确定样本中碱性磷酸酶的含量。以前很多批次配制的碱性磷酸酶检测试剂在405nm的吸收都比较低（0.28左右），这次吸光度高了（0.34）左右，我怀疑是对硝基苯磷酸酯不纯有一小部分分解成对硝基苯了，但是我不知道该如何检测这种化学试剂的纯度，请各位大侠支支招。

我现在要做土壤蛋白酶、脲酶、磷酸酶和脱氢酶，标准曲线已经做出来了，但是测定土壤的时候，搞不清分光光度计中参比是什么？

各位：最近公司需求检测奶粉中的维生素B1,B2,B6，参照的是GB 5413.11，GB 5413.12，GB 5413.13—2010中的方法。其中需要配制一种混合酶溶液，具体操作如下：混合酶溶液：称取2.345 g 木瓜蛋白酶（活力单位≥600 U/g）、1.175 g 淀粉酶（活力单位≥4000 U/g）和1.000 g 酸性磷酸酶（活力单位≥4000 U/g），用水定容至50 mL。临用前配制。想咨询的是其中的木瓜蛋白酶、 淀粉酶及酸性磷酸酶应该买哪一种的，如果各位有做过的话，麻烦赐教。最好能告知：供应商及对应的货号。万分感谢！