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粘杆菌素甲基磺酸钠

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  • 【原创大赛】硫酸粘杆菌素方法开发纪要

    【原创大赛】硫酸粘杆菌素方法开发纪要

    话说为了应对市场需求,需要进行硫酸粘杆菌素的检测方法的开发,查找标准方法,大致浏览下用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质[/color][/url]进行检测,基本资源有满足,开始工作。[img]http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/default/emyc1007.gif[/img]1.化合物性质及结构先介绍下硫酸粘杆菌素,分子结构图如下:[img=,200,197]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/07/201707030927_01_3246897_3.gif[/img]分子式:2(C[sub]52[/sub]H[sub]98[/sub]N[sub]16[/sub]O[sub]13[/sub]).5(H[sub]2[/sub]SO[sub]4[/sub]),分子量:2801.27,纯度80.1%,PH3-7.5范围内稳定,为硫酸粘杆菌素A和硫酸粘杆菌素B的混合物。2. 配制标样。用十万分之一的天平,称取硫酸粘杆菌素10.20mg至10mL容量瓶中,用换算成硫酸粘杆菌素浓度C=2=1347.98mg/L,用体积比V[sub]1[/sub]+V[sub]2[/sub]=1+4的0.1甲酸乙腈溶液溶解,并配置成10mg/L工作液。3. 仪器方法建立。3.1质谱条件3.1.1寻找母离子硫酸粘杆菌素是由氨基酸缩合而成的碱性多肽类抗生素,在一级质谱中易与多个H +结合成多电荷正离子,初步选定流动相A1+B2=3+7,接双通,流速0.2mL/min,进浓度为5.0mg/L的标准品1μL,初始Fragment为100,用MS2 SCAN正模式扫描,得到ESI正离子模式全扫描质谱图如图所示,硫酸粘杆菌素的三电荷离子[sup]3 +[/sup]响应最高,,进而确定它们的母离子(m /z) 分别为390. 5、385. 8。[img=,400,249]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/07/201707030929_01_3246897_3.png[/img]3.1.2优化Fragment电压将扫描模式该为MS2 SIM模式,将得到的Precursor Ion输入,驻留时间Dwell设为20,Fragment从1v-200V范围设置,在其他仪器条件不变的情况下进样,得到不同Fragment下的响应强度图,初步选定其Fragment在100V左右,进一步在100左右细化Fragment,最终选定硫酸粘杆菌素A和B的Fragment为110V。[img=,400,249]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/07/201707030930_02_3246897_3.png[/img] [img=,400,249]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/07/201707030931_01_3246897_3.png[/img]3.1.3 ProductIon和CE优化将扫描模式选为Product Ion模式,将390.5和385.8作为Precursor Ion,MS2 From 100,MS2 To 400(包含母离子),Fragment选定优化好的110V,碰撞能按照CE=左右寻找,得到子离子,选定包含国标的离子,并得到大致CE范围,将扫描模式选为MRM模式,在得到的初步CE左右,进一步优化得到最佳的CE值。[align=center][img=,400,249]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/07/201707030932_01_3246897_3.png[/img][/align]综上,得到硫酸粘杆菌素的质谱条件,如下表: [b]表 1 目标化合物的质谱分析条件[/b][table=745][tr][td=1,2]No.[/td][td=1,2]中文名称[/td][td=1,2]英文名称[/td][td=1,2]CAS[/td][td]前体[/td][td]产物[/td][td]去簇电压[/td][td=1,2]碰撞能[/td][td]加速电压[/td][/tr][tr][td]离子[/td][td]离子[/td][td](V)[/td][td](V)[/td][/tr][tr][td=1,3]1[/td][td=1,3]硫酸粘杆菌素A[/td][td=1,3]Ceftriaxone Sodium[/td][td=1,3]1264-72-8[/td][td=1,3]390.5[/td][td] 384.7*[/td][td]110[/td][td]5[/td][td]4[/td][/tr][tr][td]378.8[/td][td]110[/td][td]8[/td][td]4[/td][/tr][tr][td]100.9[/td][td]110[/td][td]20[/td][td]4[/td][/tr][tr][td=1,3]2[/td][td=1,3]硫酸粘杆菌素B[/td][td=1,3]Ceftriaxone Sodium[/td][td=1,3]1264-72-8[/td][td=1,3]385.8[/td][td] 380.0*[/td][td]110[/td][td]5[/td][td]4[/td][/tr][tr][td]373.9[/td][td]110[/td][td]5[/td][td]4[/td][/tr][tr][td]100.9[/td][td]110[/td][td]20[/td][td]4[/td][/tr][/table][color=#231F20]注:[/color][color=#231F20]* [/color][color=#231F20]为定量离子。[/color][color=#231f20]3.2 流动相条件液相条件的寻找,首先确定流动相,在双通的用乙腈+0.1%甲酸水=7+3、乙腈+0.1%甲酸水=5+5、乙腈+0.1%甲酸水=3+7 3种比例条件下看峰型和响应的大小,选定乙腈+0.1%甲酸水=7+3时出峰最好,然后乙腈+0.1%甲酸水=7+3、乙腈+0.1%甲酸水5mmol/L乙酸铵=7+3、0.1%甲酸乙腈+0.1%甲酸水=7+3,出峰强度和峰型与乙腈+0.1%甲酸水=7+3基本一样,确定硫酸粘杆菌素在流动相比例乙腈+0.1%甲酸水=7+3时出峰最佳,先接色谱柱,笔者试验Agilent EclipsePlus C18 RRHD 1.8μm2.1*100mm,Waters HSS T3 1.8μm,Agilent XDB-C18 1.8μm,最终发现Agilent XDB-C18 1.8μm,对目标化合物分离效果及峰型最好。[/color][color=#231f20][img=,400,249]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/07/201707030935_01_3246897_3.png[/img] [img=,400,249]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/07/201707030935_03_3246897_3.png[/img][/color][color=#231f20]4.用建立好的仪器方法配置标曲硫酸粘杆菌素 St50μg/L, 100μg/L,200μg/L,400μg/L,600μg/L.[/color][color=#231f20][img=,400,249]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/07/201707030937_01_3246897_3.png[/img] [img=,400,249]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/07/201707030937_02_3246897_3.png[/img][/color][color=#231f20]4.前处理条件 4.1.化合物分析粘杆菌素为多肽类抗生素,含有多个氨基,极性很强,易溶于水,微溶于甲醇等有机溶液,PH3-7.5范围内稳定,可用HLB和阳离子交换柱进行净化。[/color][color=#231f20]4.2试验方法[/color][color=#231f20]4.2.1 前期试验[/color][color=#231f20] 通过国标方法及文献资料,选择4%三氯乙酸+4%乙酸铅, 10%三氯乙酸:乙腈=3:7溶液作为提取溶剂, 提取离心后 ,用正己烷净化 ,过500mgHLB ,3mL水淋洗,3mL5%甲醇/水淋洗,6mL甲醇洗脱 35℃旋转蒸干或者N[sub]2[/sub]吹干上机分析,加标小瓶中理论值100μg/L,全程试剂空白,猪肉未知样品,及加标回收,均一样大,sp100μg/L有明显的基质干扰,单纯的标准品35℃旋转蒸干或者N[sub]2[/sub]吹干上机分析,无回收。4.2.2前期试验分析与总结:a.最终进样不能吹干或旋干,选择N[sub]2[/sub](35℃以下)吹至1mL以下;b.HLB洗脱接受后,溶液较浑浊,说明HLB净化效果不佳;c.提取液4%三氯乙酸+4%乙酸铅较其他两种浑浊;d.分析化合物有多个氨基可选择离子交换柱, WCX柱。[/color][color=#231f20]4.2.2 再次试验[/color][color=#231f20]称样5.0g--- 添加标准品1mg/L×100μL[/color][color=#231f20]---加入10%三氯乙酸:乙腈=3:7 15mL----充分混匀,超声20min,离心 [color=#231f20]----[/color]上清液倒入新离心管[/color][color=#231f20][color=#231f20]----[/color] 残渣继续用10%三氯乙酸:乙腈=3:7 10mL提取一遍[/color][color=#231f20][color=#231f20]----[/color]合并上清液,用氨水调PH=7[color=#231f20]----[/color] 加入10mL乙腈饱和的正己烷,充分混匀,离心 [color=#231f20]----[/color]弃去正己烷层,下层过WCX(200mg,6cc),甲醇水平衡[/color][color=#231f20] ----5mL水淋洗 ----5mL甲醇淋洗----6mL甲酸:甲醇=1:4洗脱,接收[color=#231f20]----[/color]用N2在40℃下吹至1mL左右,用水定容至2mL,过0.22μm滤膜。[/color][color=#231f20]线性范围:25μg/L,50μg/L,100μg/L,150μg/L,200μg/L基质标曲。得到如下谱图:[/color][color=#231f20][img=,400,249]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/07/201707030947_02_3246897_3.png[/img] [img=,400,249]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/07/201707030947_03_3246897_3.png[/img][/color][color=#231f20]回收率在70%左右。[/color][color=#231f20]综上:对于硫酸粘杆菌素,提取试剂用酸性,选用离子交换柱比HLB柱净化干净,定容之前溶液勿吹干(多次失败得出)。以上,是本人做硫酸粘杆菌素仪器方法开发时的一些经验和体会,希望能给大家带来帮助,也希望大家能多提提意见,共同进步,谢谢大家。[img]http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/default/em09511.gif[/img][/color][color=#231f20][/color][color=#231f20][/color][align=center][/align]

  • 急!征集动物源性食品中粘杆菌素的检测方法

    鄙人最近接到一个比较棘手的检测项目,做动物源性食品中的粘杆菌素,但相关的标准或是文献很是少,我是用了博纳艾杰尔的固相萃取柱处理,然后LC/MS进行检测,结果回收率还可以接受,但谱图不是很好。浓度低时谱图容易出现分叉或是肩峰,而且做一些样品后,峰形变的更不好。所以恳请哪位高手可以赐教,如何解决此类问题,是前处理的问题还是色谱柱的原因?不胜感激!

  • 【原创大赛】兽药之硫酸粘杆菌素高效液相色谱法检测

    【原创大赛】兽药之硫酸粘杆菌素高效液相色谱法检测

    兽药之硫酸粘杆菌素高效液相色谱法检测 硫酸粘杆菌素由多粘杆菌产生,对革兰氏阴性菌有很强的抗菌作用,治疗革兰氏阴性菌(大肠埃希菌等)引起的肠道疾病效果明显,常用作饲料添加剂。对绿脓杆菌感染(败血症、尿路感染、烧伤或外伤创面感染)也有很好的效果。用于饲料添加剂还有明显促生长作用,和磺胺嘧啶合用效果更好。 本品也有很多副作用,内服很少吸收,本品吸收后,对肾脏和神经系统均有明显毒性。使用时剂量过大或疗程过长,以及注射给药和肾功能不全时均有中毒危险。 所以这种东西对于某些症状疗效较好,但也得谨慎使用。检测某些产品中硫酸粘杆菌素的含量就显得尤为重要。下面我们就重点看看高效液相色谱法检测某饲料中硫酸粘杆菌素吧。实验部分原理 取适量该粉末样品加10%甲醇溶解超声提取,经进样器进入高效液相色谱系统,C18色谱柱分离,紫外检测器检测,保留时间定性,峰面积定量计算(外标法)。仪器及试剂1.仪器:高效液相色谱仪(紫外检测器)、分析天平、超声振荡器、溶剂过滤器2.试剂:甲醇、乙腈(均为色谱纯),纯净水,硼砂溶液样品处理 提取方法:取饲料样品适量,充分粉碎后过0.45mm孔径筛后,装入磨口瓶中备用。准确称取上一步处理过的饲料样品5g,加入150ml 10%的甲醇水溶液,超声波提取20min。将提取液全部转移到1000ml鸡心瓶中,70℃旋转蒸发器蒸至近干,用去离子水溶解并定容至1ml,0.45um有机微孔滤膜滤过,待测。色谱条件检测器:紫外检测器色谱柱:C18,4.6 X 250mm,5um检测波长:215nm流动相:乙腈:PH6.0的硼砂缓冲液=70:30(V:V)流速:1.0mL/min进样量:10ul柱温:室温目标物:硫酸粘杆菌素B,硫酸粘杆菌素A标准品色谱图:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/10/201410191339_518984_2498430_3.png标准品,三次平行进样交错叠加色谱图:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/10/201410191339_518985_2498430_3.png样品色谱图:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/10/201410191340_518986_2498430_3.png样品,三次平行进样交错叠加色谱图:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/10/201410191340_518987_2498430_3.png以下是定性、定量数据:序号保留时间(min)峰面积(μAu*s)标样-1113.5331262989 228.7671306312 标样-21[td=1

  • 木质素磺酸钠的应用

    木质素磺酸钠的英文叫:sodium lignin sulfonate它是一种天然高分子聚合物。具有很大的分散性。它还有一种有基化学产品,,由于分子 量和官能团的不同而具有不同程度的公散性。是一种表面的活性物质,能吸附在各种固体质点的表面上,可进行金属离子交换作用,也因为其组织结构上存在各种活性基,因而能产生缩合作用或与其他化合物发生氢键作用。还是以木质素磺酸钠为主要原料复配的。用途: 木质素磺酸钠是竹子制浆过程提取物,经过浓缩改性反应并喷雾干燥而成。产品为浅黄色自由流动性粉末,易溶于水,化学性质稳定,长期密封储存不分解。木质素系列产品是一种表面活性剂,可以通过改性、加工、复配等方法生产多个产品。主要用于树指,水泥,农药,橡胶,等等一些物质上,它的主要性能:1、 混凝土减水剂:系粉状低引气性缓凝减水剂,属于阴离子表面活性物质,对水泥有吸附及分散作用,能改善混凝土各种物理性能。2、 水煤浆添加剂:在制备水煤浆过程中加入本产品,能提高高磨机产量、维持制浆系统状况正常、降低制浆电耗,使水煤浆提高浓度,在气化过程中,氧耗、煤耗下降,冷煤气效率提高,并能使水煤浆降低粘度且达到一定的稳定性和流动性。3、 耐火材料及陶瓷坯体增强剂:在大规格墙地砖及耐火砖制造过程中,可以使坯体原料微粒牢固粘结起来,可使干坯强度提高20%—60%以上。4、 染料工业和农药加工的填充剂和分散剂:在用作还原染料及分散染料的分散剂和填充剂时,可使染料色力增高,着色更均匀,缩短染料研磨的时间;在农药加工中可作为填充剂、分散剂和悬浮剂,大大提高可湿性粉剂的悬浮率和润湿性能。

  • 亚甲蓝测烷基磺酸钠

    想用亚甲基蓝法测水溶液中的烷基磺酸盐,比如辛烷磺酸钠,不带苯环的磺酸盐,做过一次基本成比例,但R2估计只有1个9,后面重复就不成比例了,一会大一会小,有人知道这个标准到底适不适用不带苯环的烷基磺酸钠,求告知!

  • 【求助】关于沙门菌检测中四硫磺酸钠亮绿培养基

    我们 按2010版中国药典做沙门菌检查时,阳性实验做到胆盐硫乳琼脂和麦康凯琼脂上划线,怎么做都没法检出有菌落生长。 后来为了查出原因,我们分别作了几个操作: 1.按药典步骤一步一步进行,先是肉汤,接种了沙门后培养24h后在胆盐硫乳上划线,同时也取肉汤培养物1ml接种至四硫磺酸钠亮绿培养基中,培养24h后在胆盐硫乳和麦康凯琼脂上划线。此实验的结果是,肉汤至胆盐硫乳上划线长出了菌落中心带黑色有的全部黑色的菌落,而由四硫磺酸钠亮绿培养基划线,什么菌落都没长。估计是四硫磺酸钠亮绿培养基出了问题,但是我们不知道问题所在,于是又往下做。 2.按药典现在肉汤中培养后转至四硫磺酸钠亮绿培养基,我们将四硫磺酸钠亮绿培养基的成分一一分开(四硫磺酸钠亮绿培养基是由四硫磺酸钠培养基中添加碘试液和亮绿试液所得,都按药典操作的),也就是,只用四硫磺酸钠培养基、添加了碘试液而未添加亮绿试液的四硫磺酸钠培养基、添加了亮绿而未添加碘试液的四硫磺酸钠培养基以及四硫磺酸钠亮绿培养基,培养24h后在胆盐硫乳和麦康凯上划线,发现四硫磺酸钠培养基和添加了碘试液而未添加亮绿试液的四硫磺酸钠培养基都长出了具有沙门菌特征的菌落,而添加了亮绿而未添加碘试液的四硫磺酸钠培养基和四硫磺酸钠亮绿培养基中未长出任何菌落。 结果显示的是只要培养基中添加了亮绿就没法检出,不知道是不是亮绿出了问题。但是,所有步骤都是按药典中进行的,亮绿试液和碘试液的配制都是的,相当的让人想不通。 究竟药典中设四硫磺酸钠亮绿培养基的意图只是增菌作用,还是也有选择作用,那后便胆盐硫乳和麦康凯不一样能鉴别么,四硫磺酸钠亮绿培养基这一步究竟有多大作用呢,可是药典出来了,又不可能不按其操作,毕竟客户都不明白其中的因果额。 唉~~,所以啊,又得麻烦大家了,有什么见解都给分析一下哈,多多益善,谢谢大家了^^

  • 环己基氨基磺酸钠

    想问下 诸位有没有测定环己基氨基磺酸钠的高手 请指点下小弟 小弟今天测定甜蜜素的回收率仅有13%求助 先问下各位对于高脂肪 高蛋白 高油 高糖 高淀粉 类的样品该如何处理 如何提高在这样的样品中提高回收率

  • 阴离子表面活性物质标准物质可以用十二烷基苯磺酸钠吗

    查 到的阴离子表面活性物质国标法,要求用直链烷基苯磺酸钠(平均相对分子质量为344.4),实验室买了十二烷基苯磺酸钠(平均相对分子质量为348.48,AR),可以使用十二烷基苯磺酸钠做LAS曲线吗,优级纯的买不到。北京坛墨质检科技有限公司的阴离子表面活性剂质控样,怎么样,我做的偏高很多。该企业,LAS质控样编号B1809099,浓度10.4mg/L,扩展不确定度0.8,我按国标法做的,算的浓度有13mg/L,怎么超出这么多?

  • 辛烷磺酸钠对出峰时间的影响

    辛烷磺酸钠和磷酸二氢钾配制成的流动性,辛烷磺酸钠大概是1.5g/L,最近原来的试剂供应商到货的是片状的,原先是粉末状的,其它信息都是一样的。用新到的试剂配制流动性检测时,发现出峰时间延迟了好几分钟,柱子仪器调查了都没问题,后来换就的辛烷磺酸钠配制流动性,用相同的仪器和柱子出峰时间和以前一样。现在得出的结论就是配制流动性的辛烷磺酸钠不同导致出峰时间提前。有可能发生这种事?有什么原理吗?

  • 推翻上一次的结论,配置了10个月的环己烷氨基磺酸钠和刚配置的环己烷氨基磺酸钠没有区别

    推翻上一次的结论,配置了10个月的环己烷氨基磺酸钠和刚配置的环己烷氨基磺酸钠没有区别 前段时间做了一个测试,配置了10个月的环己烷氨基磺酸钠标准溶液上机测试,感觉存在问题。 https://bbs.instrument.com.cn/topic/8404909_1_1_2_1_1 但是上次上机测试室存在问题,这次分别对10个月的环己烷氨基磺酸钠标准溶液和刚配置的环己烷氨基磺酸钠标准溶液进行衍生化处理。 浓度分别是10μg/ml、50μg/ml、500μg/ml 10个月的编号分别是10-1、50-1、500-1,新配置的编号是10-2、50-2、500-2 先看看浓度为10μg/ml的色谱图,蓝色的为10-2,黑色的为10-1,后面第三个小色谱峰为环己烷氨基磺酸钠的衍生物 这样看起来,新配置的标准溶液面积还要微微小于已经配置了10个月的环己烷氨基磺酸钠标准溶液。 [img=,690,371]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/09/202409181051539608_1886_5979722_3.png!w690x371.jpg[/img] 再看看浓度为50μg/ml的环己烷氨基磺酸钠的标准溶液色谱图 蓝色的为50-1,黑色的为50-2,后面第三个小色谱峰为环己烷氨基磺酸钠的衍生物 这样看起来,两个色谱峰相加后,看起来,新配置的标准溶液面积和10个月的环己烷氨基磺酸钠标准溶液的面积差不多,浓度也应该是相差不大。 [img=,690,364]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/09/202409181054148691_1246_5979722_3.png!w690x364.jpg[/img] 再看看浓度为500μg/ml的环己烷氨基磺酸钠的标准溶液色谱图 黑色的为500-1,蓝色的为50-2,后面第三个小色谱峰为环己烷氨基磺酸钠的衍生物 明显可以看出来,新配置的环己烷氨基磺酸钠标准溶液的面积要小于已经配置了10个月的环己烷氨基磺酸钠标准溶液面积,想当然的浓度也要小了。 [img=,690,414]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/09/202409181059211505_9762_5979722_3.png!w690x414.jpg[/img] 最后说一下,只所以新配置的环己烷氨基磺酸钠标准溶液的面积还小与10个月前的环己烷氨基磺酸钠标准溶液,应该是我配置新的标准溶液时,使用的50ml容量瓶,再往容量瓶加入10000μg/ml的环己烷氨基磺酸钠时,只从安剖瓶中吸取出了4.8ml,最终定容到50ml,相当于这个标准溶液最终浓度只是960μg/ml,因此用这个标准溶液配置的10、50、500的标准溶液使用液都会小一些,从而导致新的标准溶液要比10个月前的标准溶液浓度还要小。 但是我们可以得出最终的结论,正常2-8摄氏度冷藏保存,1000μg/ml的环己烷氨基磺酸钠标准溶液10个月是没有问题的,浓度几乎没有变化。

  • 【讨论】有没有版友用液质测定甜蜜素(环己基氨基磺酸钠)?

    有没有版友用液质测定环己基氨基磺酸钠?手里的标准是SN/T1948-2007进出口食品中环己基氨基磺酸钠的检测方法 液相色谱-质谱/质谱法 开始看了方法觉得比较简单,相关的仪器参数也都在附录中有了,样品处理也比较简单可是实际做的时候发现根本不像想象的那样简单设置参数的时候发现存在太多问题仔细看标准才发现,标准中的方法是针对于一款液质使用的,其他型号的仪器需要自己摸索方法条件我们的仪器是waters的液质quattro premier XE作方法的时候发现和标准中的母离子和子离子都对不上,不知是何原因?是我们的方法不合适?还是仪器不同造成的差别?期待做过的版友给点建议!!

  • 靛蓝二磺酸钠测定臭氧的问题

    做这个实验的时候,要先标定硫代硫酸钠的浓度,再用硫代硫酸钠标定靛蓝二磺酸钠,国标上说标定靛蓝二磺酸钠的时候要水浴在16±1℃中,大约要水浴多久才可以溶液温度和水温平衡?标定最后约用30ml,0.005mol/l的硫代硫酸钠,算出靛蓝二磺酸钠的浓度约为27mg/l,做出标线的吸光度才0.801。求助各位!

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