1.丹参酮IIA本实验尝试使用SPOLAR、MG、MGII、UG120等四款C18色谱柱,按照药典方法对客户提供的丹参药材粉末及丹参酮IIA对照品进行分析。其中,SPOLAR色谱柱能得到最好分离效果,如图1、2所示,样品中丹参酮IIA峰与其峰前杂质能得到良好分离,分离度为2.15,理论塔板数为13870;对照品丹参酮IIA峰理论塔板数也达到13228,均超过药典要求的2000,完全符合药典要求。2.丹酚酸B按照药典方法对客户提供的丹参药材粉末和丹酚酸B对照品进行分析,由于该流动相条件中含1%甲酸,酸性较强,因此我们使用了采用耐强酸色谱柱CAPCELL PAK C18 ACR,如图3、4所示,样品中丹酚酸B峰与其峰前后杂质均得到良好分离,分离度分别为2.84与2.06,理论塔板数为6519;因为丹酚酸B对照品出现裂峰,怀疑可能已经变质,所以未给出该结果,但其保留时间能与样品分析结果相对应,可定位丹酚酸B峰位置。样品中丹酚酸B峰理论塔板数超过药典要求的2000,该色谱柱能够符合药典要求。
水平式琼脂糖凝胶电泳是基因工程操作中最常规的实验方法,它简单易行,只需少量的DNA就能检测,其分辨效果比分光光度计法与溴化乙啶-标准浓度DNA比较法更高,更直接,检测DNA范围更广,其原理是溴化乙啶在紫外光照射下能发射荧光,当DNA样品在琼脂糖凝胶中电泳时,琼脂糖凝胶中的EB就插入DNA分子中形成荧光络合物;使得DAN发射的荧光,增强几十倍。而荧光的强度正比于DNA的含量,如将已知浓度的标准样品做琼脂糖凝胶电泳的对照,就可比较出待测样品的浓度。若用薄层分析扫描仪检测,则可精确地测得样品的浓度。电泳后的琼脂糖凝胶块直接在紫外光下照射拍照,只需5~10ng DNA ,就可以从照片上比较鉴别。如肉眼观察,可检测到0.01~0.1ng的DNA。