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  • 血浆外泌体在肺癌诊断中的应用

    血浆外泌体在肺癌诊断中的应用

    [align=center][font='times new roman'][size=16px]血浆外泌体[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]在肺癌诊断中的应用[/size][/font][/align][font='times new roman'][size=16px]引言[/size][/font][font='宋体']外泌体作为重要的信息载体,参与肿瘤的发生、进展、转移和化疗耐药等过程,外泌体携带大量的遗传物质,已成为液体活检最理想的分析目标。外泌体也是目前最有前途的非侵入性诊断和预后的生物标志物之一。目前,超速离心法是外泌体分离的金标准。为了实现外泌体的临床价值,本研究以超速离心法富集了人血浆中的外泌体,并对健康人及肺腺癌患者的血浆样品做了区分,用于下游的肺癌诊断[/font][font='宋体']。[/font][align=left][font='times new roman'][size=16px]血浆外泌体用于肺癌诊断的策略[/size][/font][/align]肺癌仍然是世界范围内癌症相关死亡的主要诱因,因为大多数患者被诊断时均为晚期。因此,我们初步评估了超速离心法富集外泌体用于肺癌诊断的潜在适用性。我们收集了6名健康捐赠者和6名肺癌患者的血浆样本。利用超速离心法富集1 mL血浆样本中的外泌体,对比健康捐赠者和肺癌患者的血浆外泌体,结合数据分析,评估血浆外泌体在监测肺癌诊断方面潜在的适用性。[align=left][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px]血浆中外泌体表征[/size][/font][/align]测试了超速离心法对复杂血浆样品的适用性。首先,利用纳米颗粒示踪分析对超速离心法得到的血浆外泌体进行了表征。如图(a)所示, 纳米颗粒示踪分析显示分离的外泌体粒径分布同样较窄,平均粒径为128.8 nm。与细胞上清样品类似,Western blot方法验证了分离外泌体的有效性。如图(b)所示,经富集后,典型的低丰度外泌体标记物同样得到了有效检测。以上结果证明,超速离心法能[img]" style="max-width: 100% max-height: 100% [/img]够成功的用于血浆中外泌体的富集。[align=center][font='黑体'][size=14px]图[/size][/font][font='黑体'][size=14px] (a)重悬液中血浆外泌体的[/size][/font][font='黑体'][size=14px]纳米颗粒示踪分析技术[/size][/font][font='黑体'][size=14px]表征,(b)[/size][/font][font='黑体'][size=14px]Western blot方法[/size][/font][font='黑体'][size=14px]表征血浆[/size][/font][font='黑体'][size=14px]外泌体标记物HSC70、TSG101、CD63和CD9[/size][/font][font='黑体'][size=14px]蛋白条带[/size][/font][/align][align=left][font='times new roman'][size=16px]血浆外泌体用于肺癌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]的[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]诊断[/size][/font][/align][font='宋体']我[/font]们收集了6名健康捐赠者和6名肺癌患者的血浆样本。利用超速离心法富集血浆样本中的外泌体。采用纳米颗粒示踪分析技术对血浆外泌体标进行表征。如图所示,与健康对照组相比,肺癌患者的血浆外泌体显著上调。对比健康捐赠者和肺癌患者的血浆外泌体,结合数据分析,证明血浆外泌体在监测肺癌诊断方面具有潜在的适用性。[align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/10/202310171534194891_9083_6197575_3.png[/img][font='黑体'][size=14px]图[/size][/font][font='黑体'][size=14px] [/size][/font][font='黑体'][size=14px]健康人与肺癌患者血浆中外泌体的[/size][/font][font='黑体'][size=14px]纳米颗粒示踪分析[/size][/font][font='黑体'][size=14px]技术[/size][/font][font='黑体'][size=14px]表征[/size][/font][/align][align=left][font='黑体'][size=18px]小结[/size][/font][/align]超速离心法可以高效、特异性地从人血浆中富集、纯化外泌体,在此我们评估了超速离心法在复杂血浆样品中的适用性。肺癌是全球癌症相关死亡的主要原因,因为在原发癌症扩散之前进行早期诊断具有挑战性。以6例肺癌患者(6例健康供者为对照)的人血浆为样本,进一步研究超速离心法富集外泌体在肺癌筛查和诊断中的应用。这些结果证实了血浆外泌体在肺癌筛查和监测中的应用潜力。

  • 血浆气质联用仪

    想问一下做血浆脂肪酸检测,血浆质控样品要经过怎样的处理才能混匀做成质控呀?先前涡旋三分钟定量分析有些脂肪酸RSD相差比较大?所以想问问大家是怎样做的?

  • 55.2 厄贝沙坦血浆蛋白结合率测定

    作者:李寅;陈凤仪;张国添;杨辉;黄玉玲;谢清春;钟鸣; (广州市番禺区中心医院;广东药学院药物研究所;广州汉方现代中药研究开发有限公司;)摘要:目的:测定厄贝沙坦在人血浆中的蛋白结合率。方法:采用HPLC法测定厄贝沙坦的浓度。采用平衡透析法测定厄贝沙坦的人血浆蛋白结合率。结果:以Diamonsil C18(4.6 mm×250 mm,5μm)为色谱柱,以乙腈-0.02 mol/L磷酸二氢钾水溶液(磷酸调pH至2.6)(45∶55)为流动相,检测波长为245 nm,血浆样品中其他成分不干扰厄贝沙坦的测定,厄贝沙坦的线性范围为0.10~10.40μg/ml,定量下限为0.10μg/ml。厄贝沙坦的低、中、高浓度的蛋白结合率分别为93.0%、91.5%、92.3%。结论:厄贝沙坦具有较强的蛋白结合率。谱图:无

  • 血浆速冻技术的新进展

    血浆速冻技术的新进展血浆是抗凝全血经物理方法分离制备的一种血液成分,其临床应用是现代成分输血的重要组成部分,尤其是新鲜冰冻血浆(PPT),在临床治疗中更有其重要的作用。血浆是多种血浆蛋白质的混合物,其中包含白蛋白、免疫球蛋白和凝血因子类蛋白。为了有效的保护血浆内的有效成分,特别是凝血因子,并随着我国成分输血技术的发展,新鲜冰冻血浆及冷沉淀的制备技术及应用随之也越来越广泛。目前我国《血站基本标准》实施细则中第92条规定:制备新鲜冰冻血浆时,抗凝剂为CPD、CP2D、CPDA-1的血液应在8小时内分离并速冻;抗凝剂为ACD的血液应在6小时内分离并速冻。其质量要求: 含有全部凝血因子。血浆蛋白为6~8g/%;纤维蛋白原0.2~0.4g%;Ⅷ因子含量:≥0.7 IU/ml 规格。可以看出,时间和温度是制备出质量合格的新鲜冰冻血浆两个关键点,尤其是对于活性很高的凝血因子VIII和V,时间和温度是影响其活性的重要因素。中国医学检验杂志1995年3月第18卷第2期《血浆凝血因子测定的影响因素探讨》,作者通过对比经过不同温度和时间后FVIII含量发现:32℃条件下6小时活性只有48%,24小时5%4℃条件下6小时活性有95%,24小时剩29%。由于在血浆结冰过程中,凝血因子VIII含量与时间呈指数下降关系,所以速冻时间越短,凝血因子VIII和V的损失也就越小。国际上通用的标准是1个小时内速冻完成,如果能在30分钟内完成速冻,那么效果将会更好。因此要保证新鲜冰冻血浆及冷沉淀等成分的疗效,必需在采供血过程中控制好冷链和时间链,其中血浆速冻技术是其中一个重要环节,速冻的时间和效果将直接关系到血浆及冷沉淀产品的质量和疗效。 随着《中华人民共和国献血法》的实施和无偿献血的深入开展,血站的采血方式已由有偿献血时代的站内采血为主转向站外无偿流动采血。要达到采血后6h(或8 h)内分离血浆并冻结有时存在一定的困难。因此为保证临床使用新鲜冰冻血浆、血浆冷沉淀的质量尽可能的缩短血浆速冻的时间就显的尤为重要了。我国血站采用的血浆速冻技术主要经过了以下几个发展阶段:1、用超低温冰箱来进行血浆速冻。此种方法的主要不足在于:冰箱内空间有限,将血浆叠加在一起,上下接触不均匀。冰箱制冷效率有限,速冻时间较长(通常需要6-8h)。显然是达不到要求的。2、强制对流型速冻机。最初的血浆速冻设备我们称为强制对流型速冻机(blast freezer)。该类设备的设计思路来源于普通冰箱,也是使用空气作为冷媒。通过更强的制冷功率来得到低温空气,并且使冷空气快速的流动,加快冷空气与溶液的热交换来实现快速冻结的目的,因此,也称之为“冷风制冷”。由于这类设备内冷空气流动速度比冰箱内空气流动速度有了很大提高,使得制冷效果得到提高,缩短了血浆冻结的时间。对于超低温冰箱来说,这种方式使得速冻的时间已经得到了大大的缩短,但由于关键技术的不足,其速冻时间通常都需要2h。3、平板接触式速冻机。这类设备是根据最新的平板接触制冷技术制造而成。它通过改变传统的“空气”冷媒,用特制不锈钢作为冷媒,加快血浆热交换实现速冻,从而达到缩短速冻时间的目的。今天,我们来讲讲血浆速冻技术的新进展:平板接触式血浆速冻技术。平板接触式速冻(contact plate freezing)。该技术通过高效压缩机使金属板稳定在-50℃的温度,血浆袋通过与-50℃的低温金属板直接接触进行热传递,由于空气的热传导率仅为0.28 w/m•k,而金属的热传导率为58.02w/m•k是空气的上百倍。因此使得降温效率得到极大的提高,降温过程所需时间更少,因此可以得到更多的凝血因子,得到更好质量的新鲜冰冻血浆。平板接触式速冻技术,虽然出现的时间不长,但是它已经以其强大的技术优势已经在国际上占据了血浆速冻市场40%的份额。

  • 请问头孢喹肟血浆样品液相色谱不出图是什么原因?

    [color=#444444]请教大神,走头孢喹肟血浆样品紫外高效液相色谱,标准品样能走出来,用血浆经前处理后的样就走不出来了,血浆前处理过程主要是用乙腈重复提两次,取上清液,然后氮吹干,进样,请问走不出峰是什么原因呢?急求,多谢![/color]

  • 血浆凝固酶实验

    大肠埃希菌也产生血浆凝固酶,可是通常做大肠埃希菌鉴定时没有做血浆凝固酶试验。而金黄色葡萄球菌要做。是什么原因?

  • 血浆样品衍生化

    今天给测试中心的一个老师打电话说了我的样品处理方式。我取血浆100ul,加入200ul的乙酸乙酯涡旋3min,然后高速离心12000r/min 10分钟,取上层清液进气质,测试中心的老师说这样不行,必须的衍生化,因为血浆中还有很多的甘油三酯,会污染气质,我看文献都没有衍生化呢?

  • 血浆处理方法

    本人用沉淀蛋白方法处理血浆样品,100ul血浆+100ul对照品(10ug/ml)+400ul乙腈沉淀后,离心取上清液吹干,100ul流动相复溶,进样20ul,用液相做的,结果发现峰面积比纯的10ug/ml对照品还要大,回收率大于100%,而空白样品中没有干扰,我就比较困惑了,不知道什么原因,请大家帮帮。多谢!

  • 寡糖在血浆中的提取方法

    五糖分子量在2000一下,想做其在血浆中的定量,已知其完全游离于血浆中不与血浆蛋白结合,用3KDa的超滤离心管离心取滤液进样但未出峰,是孔径太小还是提取方法不合适,求指教

  • 离子色谱柱能进血浆样品吗?

    做一个药物的药物动力学,样品是血浆基体,药物极性特强,含氮多碱性,在C18上基本不保留,想用离子色谱做试试,但没有查到离子色谱做血浆样品的文献,样品准备用乙腈沉淀蛋白后离心的上清液直接进样,离子色谱柱可以吗?

  • 39.9 高效液相色谱法测定人血浆中华法林浓度

    作者: 李毅(湖南省安乡县人民医院,湖南,安乡,415600)摘要: 目的 建立利用高效液相色谱法测定人血浆中华法林浓度的方法.方法采用二氯甲烷-正己烷(1∶1)对血浆样品进行萃取,高效液相色谱外标法进行含量测定.色谱柱为Diamonsil C18(250mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈-水-冰醋酸(65∶35∶1),流速1ml/min,紫外检测器检测波长308nm,柱温30℃.结果华法林的保留时间为8.2min,定量线性范围0.05-5.0μg/ml. 血浆中华法林萃取同收率为85.3%89.8%(n=5),方法回收率101.3%103.6%(n=5),日内及日间RSD均小于8%(n=5)。结论本方法快速准确,可用于华法林血药浓度监测。谱图:无

  • 迪马产品应用有奖问答09.23(已完结)——血浆中利多卡因的测定

    迪马产品应用有奖问答09.23(已完结)——血浆中利多卡因的测定

    10,抽取5个版友);中奖名单:玲儿响叮当(注册ID:jshbhh)捌道巴拉巴巴巴(注册ID:v3082413)大川之子,纵横四海(注册ID:chuangu120)翠湖园(注册ID:hhx050)sixingxing(注册ID:v2889187)http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/09/201609231507_611891_1610895_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/09/201609231507_611892_1610895_3.png【注意事项】同样的答案,每人只能发一次PS:该贴浏览权限为“回贴仅作者和自己可见”,回复的版友仅能看到版主的题目及自己的回答内容,无法看到其他版友的回复内容。下午3点之后解除,即可看到正确答案、获奖情况及所有版友的回复内容。=======================================================================血浆中利多卡因的测定方法:SPE基质:血浆应用编号:101288化合物:利多卡因固定相:ProElut PLS色谱柱/前处理小柱:ProElut PLS 30mg / 1ml 100/pkg样品前处理:1、样品准备 制备2 - 3 mL 血浆,取1 mL 血浆与1 mL 水混匀,待净化。2、净化 a 活化: 依次将1 mL 甲醇、1 mL 水加入ProElut PLS 30 mg/1 mL (Cat.#68002),流出液弃去; b 上样: 将样品加入小柱,流出液弃去; c 淋洗: 1 mL 5% 甲醇水溶液淋洗,淋洗液弃去,将小柱抽干; d 洗脱: 1 mL 甲醇洗脱,收集洗脱液; e 重新溶解:40 oC 下氮气吹干洗脱液,1 mL 流动相定容色谱条件:色谱柱:Diamonsil C18(2) 200 x 4.6 mm ID, 5 μm (Cat. #99602) HPLC应用101350文章出处:P040关键字:血浆,利多卡因,SPE,ProElut PLS摘要:适用于人与动物血浆中利多卡因的检测。谱图:http://www.dikma.com.cn/Public/Uploads/images/p91%20copy.png图例:1. 立多卡因

  • 【讨论】液质的血浆前处理

    请高手指点。我前一阵做血浆中的药物检测,用的是AB公司的UP[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]/MS,血浆前处理采用乙腈:水=1:1沉淀蛋白,结果[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质[/color][/url]检测时,柱压飙升,采用的是水-甲醇梯度洗脱,0-5min,0-100%甲醇,请问造成柱压飙升是不是因为蛋白没有除净?怎样才能把血浆处理得更干净呢?谢谢

  • 血浆提取qiuzhu

    新手,我现在有一份血液,没药物的,做工作曲线。我是直接加甲醇沉淀蛋白后上清就是血浆吗?然后加标曲溶液就是工作曲线了?

  • 31.1 HPLC法测定大鼠体内血浆和唾液中槐果碱含量的方法学建立

    31.1 HPLC法测定大鼠体内血浆和唾液中槐果碱含量的方法学建立

    【作者】 李秋红; 张丹丹; 李纯; 韩华;【Author】 Li Qiuhong Zhang Dandan Li Chun Han Hua (Pharmaceutical School Clinical Department,Heilongjiang University of Chinese Medicine,Harbin 150040)【机构】 黑龙江中医药大学药学院临床药学教研室;【摘要】 目的:建立测定大鼠体内血浆和唾液中槐果碱含量的HPLC分析方法。方法:采用色谱柱:Diamonsil(R)C18柱150mm×4.6mm,流动相:甲醇-0.1‰三乙胺水溶液(60:40,v:v),检测波长:220nm,柱温:30℃,流速:0.8ml/min。结果:槐果碱血浆和唾液的相对回收率分别为92.7%~96.6%和94.8%~113.0%,日内、日间精密度RSD10%,血浆和唾液中槐果碱浓度在8~160μg/mL和2~40μg/mL范围内相关系数分别为0.9994和0.9995,线性关系良好。结论:首次建立槐果碱唾液样品检测方法以及用HPLC法同时测定大鼠体内血浆和唾液中的含量方法,为槐果碱的临床药动学研究提供了新的方法学基础。 更多还原【Abstract】 This is a study to determine sophocarpine in rats’ plasma and saliva using HPLC approach.We made the study under the following parameters:Diamonsil(R)C 18 Column at 150mm×4.6mm,methanol-water containing 0.1‰triethy- lamine (60:40,v:v) for mobile phase,a detection wave length at 220 nm,a temperature at 30℃,and a flow-rate of 0.8 mL/min.The study has produced the following results:a relative recovery of sophocarpine in plasma and saliva at 92.7%~96.6%,and 94.8%~113.0% respectively;the RSD of intra... 更多还原【关键词】 HPLC; 槐果碱; 血浆; 唾液; 【Key words】 HPLC; Sophocarpine; Plasma; Saliva; http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/08/201208061030_381710_2352694_3.jpg

  • 血浆样品含量

    使用液相色谱检测血浆中样品含量注意事项,已经操作步骤?还有开始能够检测出样品含量一段时间和为什么检测不出呢?很迷惑

  • 预试中内标和样品响应减小,血浆的差异?

    小女在做方法学时,用的血浆在-20℃冰箱中放了很久(几个月),实验中也没什么异常,做预试时,用新鲜的空白血浆添加样品和内标,响应比同等条件下的老血浆小了百分之十左右,大家有没有遇到过类似情况呀,急啊,还望各位大侠赐教~~

  • 求助多肽药物血浆样品液相进样前处理方法

    本人正在使用岛津HPLC做一条肽的药代动力学,用的C18硅胶柱,流动相是水和乙腈梯度洗脱(都含有千分之一三氟乙酸),求做过多肽血浆样品的高手给一些血浆处理方法的建议,目前使用乙腈沉淀法发现峰几乎检测不到,加了点甲酸好一点。参考文献中做万古霉素的方法,血浆样品加入25%三氯乙酸酸与乙腈(2:1),药品的峰还是特别小。使用乙酸乙酯萃取法也做了,提取下层水层,也是没有峰,而且血浆中杂蛋白特别多。多肽药做血浆样品是不是不能用乙腈沉淀法呢?调整乙腈的比例会出现理想的效果吗?最近几天测纯样品(当天解冻的)不加到血浆里发现目标峰面积表小很多,内标就比较正常,不清楚是柱效问题还是紫外检测器问题。以上问题求高手给一些建议,感激涕零!

  • 血浆样品,稀释与不稀释对药物浓度的影响

    本人是做药代动力学方面的工作。经常测定药物在体内代谢后的浓度,例如在血浆中,全血中血清中等。但是本人外行,一直不清楚一些道理,例如血浆用水稀释倍数对药物浓度有什么影响,红细胞如何破裂,有的药物容易进入红细胞,而有的药物游离在血浆中。哪位大仙有相关的文献啊!急用,十分感谢!

  • SPE 萃取血浆,总是堵. 如何解决?

    SPE 规格是 3mL 35mg.250uL 的血浆加2mL 缓冲液混匀之后上样. 结果有的SPE柱堵的非常严重. 血浆样品即使加高负压也不能透过SPE柱.药物含量很低,不能再减少血浆体积了.请问,哪位大侠知道如何解决这个"堵"的问题?

  • 21.4 兔血浆中地非三唑(DL111-IT)高效液相色谱荧光检测方法

    21.4 兔血浆中地非三唑(DL111-IT)高效液相色谱荧光检测方法

    【作者】 何敏; 姚彤炜;【Author】 HE Min and YAO Tong-wei*(Department of Pharmaceutical Analysis and Drug Metabolism, College of Pharmac eutical Sciences, Zhejiang University, Hangzhou 310031, China)【机构】 浙江大学药学院药物分析与药物代谢研究室; 浙江大学药学院药物分析与药物代谢研究室 浙江杭州310031; 浙江杭州310031;【摘要】 目的 建立兔血浆中DL111 IT的高效液相色谱荧光检测法。方法 血浆样品和内标格列本脲经氯仿提取后 ,选用DiamonsilODS C18柱 (15 0mm× 4 . 6mm ,5 μm) ,乙腈 - 0 . 0 2 5mol·L-1磷酸氢二铵缓冲溶液 (磷酸调pH 5 .0 ) (6 0 .4 0 ,V/V)为流动相 ,流速 1 0mL·min-1,荧光检测 (λex=2 5 0nm ,λem=332nm)。结果 DL111 IT在浓度 1 .0 0~ 2 0. 0 0ng·mL-1范围内呈良好线性 ,r=0. 9996 ,n =5。高 (2 0 . 0 0ng·mL-1)、中 (10 . 0 0ng·mL-1)、低 (1 .0 0ng·mL-1) 3个质控样本平均提取回收率分别为85 . 3%± 1 .3% ,84 .9%± 2 . 7% ,85 . 8%± 1 .8% ,方法回收率分别为 99 .5 %± 0 . 4 % ,10 2 . 1%± 1. 8% ,10 .1 3%± 2 .4 % ;日内(n =5 )和日间 (n =5 )RSD分别低于 3 .0 %和 7. 0 %... http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/07/201207301441_380565_2379123_3.jpg

  • 【求助】如何用牛血清白蛋白配制空白血浆?

    有谁知道如何用牛血清白蛋白配制空白血浆?文献报道如下:Reconstituted plasma was prepared by dissolving 0.8 g of NaCl, 0.02 g of NaCl, 0.02 g of KH2PO4, 0.11 g Na2HPO4 and 4 g of bovine albumin (Sigma, St. Louis, MO, USA) in 100 ml of water.但是0.8 g of NaCl, 0.02 g of NaCl肯定有一个是重复的,哪位大侠知道如何配制啊

  • 【求助】液相测定血浆问题,怎么做?

    我是学医的,最近老板叫我看有关用高效液相测定人血浆中氯吡格雷的血药的文献,以便下一步开展这方面的科研任务,我也看了一下文献,但是我对文献当中的关于血浆样品处理方法还是不是很清楚,感觉文献当中讲的有些太简洁了,有可能是我不是专门搞这方面的研究的问题的吧。我想请教大家关于血浆样品该怎样处理啊,越具体越好!谢谢大家了!

  • 【求助】有没有人做过血浆样品未经任何处理就进样?

    我做血浆样品有半个月了,预考察药物在血浆中的稳定性(水解反应的过程)用血浆样品直接进样发现蛋白对药物的检测有干扰,后来改了条件,好不容易运行出来了,但第二次又不能重现;也用超离心的办法虽然做出来了,但每次预处理花的时间长,不能监测反应的过程(反应1小时多就完成了)。谁做过这方面的阿,还望指教!!!

  • [求助] 空白血浆有干扰,求处理方法!急!

    各位大侠!我是刚毕业的本科生,我做生物等效性的,在处理空白血浆的时候一直有干扰峰,换流动相没法消除,分不开峰,现急求血浆处理方法,我准备用5%高氯酸沉淀蛋白的方法,但是对于高氯酸沉淀后,取上清液直接进样有点担心,PH值合适吗?能直接进样吗?会不会伤柱子啊?请各位大侠帮帮新人!先谢谢啦!我做了好多次了,空白一直有干扰,是新鲜的空白血,应该不会污染到的.

  • 【讨论】血浆样品及胆汁、尿液前处理方法

    大家讨论一下:血浆样品处理方法的前处理方法哪个好,比如液液萃取,还是沉淀蛋白法好?有听说血浆样品用沉淀蛋白法比较好,胆汁尿液之类的样品用液液萃取法比较多,大家有什么经验分享一下吧

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