氯氨基三

按照Agela氨基酸方法包中18中氨基酸检测方法检测18中氨基酸标准品。方法操作：各种溶液的配制： 1） 三乙胺乙腈溶液：取三乙胺一瓶，加乙腈8.6ml，混匀。2） 异硫氰酸苯酯乙腈溶液：取异亮氰酸苯脂1瓶，加乙腈2ml，混匀。3） 流动相A：称取15.2g醋酸钠，加水1850ml，溶解后用冰醋酸调pH至6.5，然后加入乙腈140ml，混匀，用0.45um滤膜过滤。 流动相B：80%乙腈4） 正亮氨酸内标溶液：称取正亮氨酸约10mg，加0.1mol/L 盐酸溶液10ml 溶解，混匀。 氨基酸标准溶液的衍生：准确量取氨基酸标准溶液200ul，置于1ml离心管中，往离心管中准确加入正亮氨酸内标溶液20ul，然后往离心管中 加入三乙胺乙腈溶液100ul，异硫氰酸苯酯乙腈溶液100ul，混匀，室温放置1小时，然后加入正己烷400ul，振摇后放置10分钟，取下层溶液（PTC-AA），用0.45um针头滤器过滤。实验条件：色谱柱： Venusil-AA，5μm，100A，4.6x250mm柱温： 44℃流速： 1.0ml/min进样量： 2μL检测波长： 254nm实验室温度： 22-25℃梯度条件：时间（min）0215253333.1

[color=#444444]用安捷伦氨基酸分析包遇到的问题——基线鼓包和三组氨基酸达不到基线分离，请各位大神帮忙看看是什么原因导致的[/color][color=#444444]样品：多肽酸水解后通过0.45um膜，取其续滤液[/color][color=#444444]色谱柱： Agilent ZORBAX Eclipse AAA 4.6*150mm 5um[/color][color=#444444]流动相：A相：40mM NaH2PO4 (pH=7.8) [/color][color=#444444] B相：甲醇：乙腈：H20=45:45:10[/color][color=#444444]NaH2PO4 是国药分析级，甲醇、乙腈是色谱纯，H2O是密理博纯水仪制水[/color][color=#444444]检测波长：338nm、262nm[/color][color=#444444]流速：2.0ml/min[/color][color=#444444]柱温： 40℃[/color][color=#444444]梯度 时间min A B[/color][color=#444444] 0 100 0[/color][color=#444444] 1.9 100 0[/color][color=#444444] 18.1 43 57[/color][color=#444444] 18.6 0 100[/color][color=#444444] 22.3 0 100[/color][color=#444444] 23.2 100 0[/color][color=#444444] 26 100 0[/color][color=#444444]问题一、色谱柱使用了一段时间后在7-9min出现鼓包，影响了氨基酸的定量[/color][color=#444444]问题二、重现不了安捷伦的图谱，Gly/Thr、Val/Met、Phe/Ile达不到基线分离。[/color][color=#444444]以下图谱 依次为：基线鼓包的标准品图谱、正常[color=#444444]标准品图谱、基线鼓包的空白、三组氨基酸没有基线分离、[color=#444444]安捷伦分析包标准品图谱[/color][/color][/color][color=#444444][img=基线鼓包的标准品图谱,690,92]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/08/201808111349098857_8471_2847808_3.png!w690x92.jpg[/img][img=正常的标准品图谱,690,95]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/08/201808111349138951_9551_2847808_3.png!w690x95.jpg[/img][img=基线鼓包空白,690,88]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/08/201808111349170968_4339_2847808_3.png!w690x88.jpg[/img][img=三组氨基酸没达到基线分离,690,95]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/08/201808111349213418_3759_2847808_3.png!w690x95.jpg[/img][img=安捷伦分析包标准品图谱,690,245]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/08/201808111349245791_912_2847808_3.png!w690x245.jpg[/img][img=安捷伦分析包标准品图谱,690,245]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/08/201808111349245791_912_2847808_3.png!w690x245.jpg[/img][/color]

[color=#fe2419][size=2]维权声明：本文为lpr20原创作品，本作者与仪器信息网是该作品合法使用者，该作品暂不对外授权转载。其他任何网站、组织、单位或个人等将该作品在本站以外的任何媒体任何形式出现均属侵权违法行为，我们将追究法律责任。[/size][/color][color=#0084a0][size=3][size=2]一 氨基酸的性质[/size][/size][/color] [size=2] 氨基酸，英文名称amino acid ，是指同时含有一个或多个氨基和羧基的脂肪族有机酸，是生物功能[color=#000000]大分子[/color]蛋白质的基本组成单位，是构成动物营养所需蛋白质的基本物质。根据氨基和羧基的位置，有α氨基酸和β氨基酸等类型。参与蛋白质合成的常见的是20种L-α-氨基酸。 天然氨基酸均为α-氨基酸。[color=#0084a0]二 氨基酸的理化性质[/color] （1）都是无色结晶。熔点约在230°C以上，大多没有确切的熔点，熔融时分解并放出CO2；都能溶于强酸和强碱溶液中，除胱氨酸、酪氨酸、二碘甲状腺素外，均溶于水。 （2）具有两性。大多数氨基酸都呈显不同程度的酸性或碱性，呈显中性的较少。所以既能与酸结合成盐，也能与碱结合成盐。 （3）由于有不对称的碳原子，因此具有旋光性，由于空间的排列位置不同，有两种构型：D型和L型，组成蛋白质的氨基酸，都属L型。[color=#0084a0]三 目前的主要检测方法[/color] 目前氨基酸的检测主要可以分两大类：化学法和色谱法。 其中化学法有很多种类，详见[/size][url=http://baike.baidu.com/view/15155.htm][size=2]氨基酸的化学检测法[/size][/url][size=2]，色谱法主要是[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/3p][color=#3333ff]离子色谱[/color][/url]结合电化学检测器，这个在学校的时候做过一段时间，分离度、定量都不错，不过仪器价格挺贵的，用的是戴安600，据老师说价格好贵，没具体问多钱。[color=#0084a0]四 本实验前言[/color] 样品是公司科研部门送来检测一下纯度，首先确定方法。化学法太麻烦，很多都是显色反应，显色剂手头又没有，如果打申购购买的话来不及了，而且本实验室又没有[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/3p][color=#3333ff]离子色谱[/color][/url]，所以就想用手头有的[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相[/url]来试试。[color=#0084a0]五 实验的准备工作[/color] 从氨基酸的理化性质可以看出，直接用GC肯定是不行的，高温熔融即分解，所以考虑用衍生化处理的办法，氨基酸不是有羧基吗？这玩意儿上面的氢应该很活泼，用硅烷化把那个氢保护了应该就稳定了，做[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相[/url]应该问题不大，说干就干，手头有高活性的硅烷化试剂（具体名称略去，反正呢是很贵的那种，极高活性的，常温即可上保护基），处理后用手头的色谱柱进行分离，结果如下。========================================================仪器型号：GC-2014C载气：He分析柱：DB-1检测器：FID柱温程序：60度，10度/min升温样品：L-丙氨酸（样品需经硅烷化衍生化具体过程：取大约20mg样品至样品瓶中，加入硅烷化试剂0.2ml，用60度水浴加热60分钟，如果溶解性差，可以滴加3-5滴的DMF，如果处理后还有未溶解样品，过滤，将清液进样检测）参考图如下[/size]=========================================================================[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2010/09/201009291326_247968_1621482_3.jpg[/img]=====================================================================================[size=2][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相[/url]分离后，经过GC-MS确认结构，图上1.87的峰为样品羧基被硅烷化后的产物，3.83的产物是羧基和氨基（一个氢）都被硅烷化的产物。[color=#fe2419]六 实验存在的问题[/color]1.由于柱子是DB-1,不是手性柱子，因此不同构型的氨基酸无法分离，即不能确定是L型的还是D行的氨基酸，如果两个构型混合则无法分离，只能分离其他杂质。2. 即使用的是活性极高的硅烷化试剂，溶解性能也很有限，并且放置时间要长，甚至还需要适当的加热，但是温度不宜过高，过高硅剂易分解。3.定量略显粗糙，我就用面积归一化法简单定了一下，好多杂质种类未知，因此很难校正。由于上述三个因素，实际上本实验的实际应用价值很有限，拿出来和大家分享，大家讨论是否还有上升空间。=============================================[color=#d6006d]特别感谢[b]pingguwu版友提供的文献，文献提供了另外的一种衍生化方法，以丁醇酯化，三氟乙酸酐酰化的办法来衍生化氨基酸，GCMS来测定，大家可以结合讨论。[/b][/color][/size]