[color=#444444]有没有哪位大侠做过叔亮氨酸的液相检测,文献里面查到1.用手性色谱柱,以2mM硫酸铜、5%异丙醇做流动相,流速1mL/min,254nm检测;2.同样是手性柱,用硫酸铜做流动相,检测波长为220nm。3.用C18柱,以0.25%磷酸二氢铵:甲醇=100: 5,检测波长205nm。4.另外有用OPA衍生后再检测的,检测波长340nm。由于目前没有标品,不知道叔亮氨酸的最大吸收波长在什么位置,叔亮氨酸上没有共轭结构,254nm检测是不是不靠谱啊?求有相关经验的大大指条明路[/color][img=,absmiddle]http://muchongimg.xmcimg.com/data/emuch_bbs_images/smilies/wink.gif[/img][img=,absmiddle]http://muchongimg.xmcimg.com/data/emuch_bbs_images/smilies/wink.gif[/img][color=#444444]另外听说手性柱金贵的很,求指教平时使用的注意点[/color][img=,absmiddle]http://muchongimg.xmcimg.com/data/emuch_bbs_images/smilies/biggrin.gif[/img]
[color=#444444]用OPA柱前衍生反向高效液相色谱测定L-叔亮氨酸的色谱图中出现了两个面积差不多的峰是什么原因?叔亮氨酸是手性氨基酸,流动相A用的是20mmol/ L 乙酸钠缓冲液,用1 %稀乙酸调p H 至71 2 流动相B ∶乙腈和甲醇混合液(1 ∶1),洗脱程序是等度洗脱,A:B是3:2. 求解释!!![/color]
内标跟着文献选的L-正亮氨酸,实验室正好有L-亮氨酸请问能用吗[img=,300,400]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/11/202211221916333293_727_5869599_3.jpg!w690x920.jpg[/img]
我的产物是L-叔亮氨酸,但高效用的标品是其盐酸盐,请问会有什么影响?[em0808]
哪位老师知道L-异亮氨酸的测定,请告知。谢谢!
大家好,我们在进行蛋白质修饰鉴定过程中,发现有异亮氨酸甲基化的修饰(采用二级CID碎裂模式),分析软件(BioPharmaView)中给定的修饰中也含有异亮氨酸,为了确定甲基化修饰的机理,我们推测,甲基化修饰在了异亮氨酸形成的肽键N上,对此我们使用etHCD碎裂模式进行二级碎裂,结果显示,甲基化并非修饰在肽键N上,我们查询文献并没有相关的报道,想问下各位大神,有知道蛋白中异亮氨酸发生甲基化是发生在哪个位置么?如果有文献支持就更好了。
我用GC MS 测20种氨基酸,MSTFA衍生,不加溶剂,HP 5-MS柱,70度,1min到5度/min,300度,得到的脯氨酸和异亮氨酸是一个峰,降低浓度也分不开,做SIM也分不开,请问谁遇到过这种情况?如何解决?
如题!求助亮氨酸快速检测方法!现有硅胶板层析法,速度较慢,耗时1h,不知谁有好的方法?
先简单 介绍——————做氨基酸 检测想了解详细资料,请自己到迪马科技官网自行下载http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/brow/em09510.gifPITC柱前衍生法18种天然氨基酸分析(异硫氰酸苯酯柱前衍生法)——序列号: D0241 适用范围 该方法适用于氨基酸注射液、动植物性食品和饲料中 Asp(天冬氨酸)、Glu(谷氨酸)、Ser(丝氨酸)、Gly(甘氨酸)、His(组氨酸)、Arg(精氨酸)、Thr(苏氨酸)、Ala(丙氨酸)、Pro(脯氨酸)、Tyr(酪氨酸)、Val(缬氨酸)、Met(蛋氨酸)、Cys(胱氨酸)、Ile(异亮氨酸)、Leu(亮氨酸)、Phe(苯丙氨酸)、Trp(色氨酸)、 Lys(赖氨酸)等 18种天然氨基酸的检测http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/03/201203131711_354396_2019107_3.jpg2 溶液配制 氨基酸储备液: 称取一定量氨基酸标准品,用 0.1 mol/L HCl水溶液溶解,胱氨酸为0.01 mol/L,酪氨酸为0.02 mol/L,其他氨基酸为 0.05 mol/L 氨基酸使用液: 将储备液用0.1 mol/L HCl水溶液稀释,得到浓度为 0.002 mol/L 的氨基酸单标和混标 内标液: 以正亮氨酸作为内标物。称取一定量正亮氨酸,溶于 0.1 mol/L HCl水溶液,得到 0.02 mol/L 的正亮氨酸内标液 异硫氰酸苯酯溶液: 将 250 μl 异硫氰酸苯酯用乙腈乙腈定容至 10 ml,得到0.2 mol/L 异硫氰酸苯酯溶液 三乙胺溶液: 将1.4 ml三乙胺用乙腈定容至 10 ml,得到1.0 mol/L 三乙胺溶液 标准溶液衍生化 量取 200 µl氨基酸混合标准溶液(每种组分浓度均为 0.002 mol/L),置于 1.5 ml塑料离心管中,准确加入20 μl正亮氨酸内标溶液、100 µl 1 mol/L三乙胺乙腈溶液和100 µl 0.2 mol/L 异硫氰酸苯酯乙腈溶液,混匀,室温反应 1 小时,然后加入正己烷 400 µl,旋紧盖子后剧烈振荡5~10 s,静置分层,取 200 µl下层溶液与 800 µl水混合,0.22 µm 针式过滤器过滤,待分析。注: 通过控制原始样品质量或稀释等方法,使样品溶液中的氨基酸总量不超过0.04 mol/L 或3.0 g/L(两者中取最小值) 只有采用内标法分析时,才需要加入正亮氨酸作为内标物 衍生得到的样品溶液中含有50%的乙腈,这与流动相溶剂体系存在较大差距,因而需要加水稀释,否则会引起峰前沿或分叉迪马科技AAA氨基酸柱子 洗脱条件 http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/01/201701191656_646181_2019107_3.gifhttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/04/201104221943_290383_2019107_3.gif
山葡萄酒含有22种氨基酸,其中人体必需的8种氨基酸(指人体自身不能合成的氨基酸)有苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸、蛋氨酸、色氨酸等,总量为1350mg/L,占总氨基酸含量的45.6%,是一般葡萄酒的10~20倍;而一般葡萄酒只含有6~7种人体必需的氨基酸。
阿胶的含量测定的时候,对照品和供试品出的L-羟脯氨酸的理论塔板数都不够是怎么回事啊?就算供试品是处理的问题,但是对照品在处理上不复杂也没有出差错啊!求大师指教!
[em09503][em09503][em09502]人体八种必须氨基酸(第一种较为顺口)1.“一两色素本来淡些”(异亮氨酸、亮氨酸、色氨酸、苏氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸、蛋氨酸、缬氨酸)。2.“写一本胆量色素来”(缬氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸、亮氨酸、色氨酸、苏氨酸、赖氨酸)。3.鸡旦酥,晾(亮)一晾(异亮),本色赖。借来一两本淡色书。生糖、生酮、生糖兼生酮氨基酸:生酮+生糖兼生酮=“一两色素本来老”(异亮氨酸、亮氨酸、色氨酸、苏氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸、酪氨酸),其中生酮氨基酸为“亮赖”;除了这7个氨基酸外,其余均为生糖氨基酸。酸性氨基酸:天谷酸——天上的谷子很酸,(天冬氨酸、谷氨酸)碱性氨基酸:赖精组芳香族氨基酸在280nm处有最大吸收峰色老笨---只可意会不可言传. 一碳单位的来源肝胆阻塞死 (甘氨酸、蛋氨酸、组氨酸、色氨酸、丝氨酸)。(色氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸),顺序一定要记清,色 酪 苯丙,酶的竞争性抑制作用按事物发生的条件、发展、结果分层次记忆:1.“竞争”需要双方——底物与抑制剂之间;2.为什么能发生“竞争”——二者结构相似;3.“竞争的焦点”——酶的活性中心;4.“抑制剂占据酶活性中心”——酶活性受抑。糖醛酸,合成维生素C的酶古龙唐僧(的)内子(爱)养画眉(古洛糖酸内酯氧化酶)双螺旋结构的特点:右双螺旋,反向平行碱基互补,氢键维系主链在外,碱基在内维生素A总结V.A视黄醇或醛,多种异构分顺反。萝卜蔬菜多益善,因其含有V.A原。主要影响暗视觉,缺乏夜盲看不见,还使上皮不健全,得上干眼易感染。促进发育抗氧化,氧压低时更明显。DNA双螺旋结构:DNA,双螺旋,正反向,互补链。A对T,GC连,配对时,*氢键,,十碱基,转一圈,螺距34点中间。碱基力和氢键,维持螺旋结构坚。(AT2,GC3是指之间二个氢键GC间三个.螺距34点中间即3.4)RNA和DNA的对比如下:两种核酸有异同,腺鸟胞磷能共用。RNA中为核糖, DNA中含有胸。维生素B6B6兄弟三,吡哆醛、醇、胺。他们的磷酸物,脱羧又转氨。三羧酸循环乙酰草酰成柠檬,柠檬又成α-酮琥酰琥酸延胡索,苹果落在草丛中。β-氧化β-氧化是重点,氧化对象是脂酰,脱氢加水再脱氢,硫解切掉两个碳,产物乙酰COA,最后进入三循环。酮体酮体一家兄弟三,丙酮还有乙乙酸,再加β-羟丁酸,生成部位是在肝,肝脏 生酮肝不用,体小易溶往外送,容易摄入组织中,氧化分解把能功
L-谷氨酰氨L-亮氨酸L-吉氨酸L-异亮氨酸有标准的上传我!谢谢!
用液相时遇到几个简单的问题不太清楚,请大家帮帮忙,谢谢! 1.查资料氨基柱的清洗要用5-10倍柱体积的含0.5- 1.0%NH3的50-50乙腈-水溶液冲洗,0.5- 1.0%是指体积百分数还是质量百分数呢? 2.拖尾峰的峰高比正常的峰高低吗?应该怎样积分,积半峰对吗? 3.氨基酸分析时,用的混标溶液含有18种氨基酸(氯化铵、天门冬氨酸Asp、谷氨酸Glu、丝氨酸Ser、甘氨酸Gly、组氨酸His、精氨酸 Arg、苏氨酸Thr、丙氨酸Ala、脯氨酸Pro、酪氨酸Tyr、缬氨酸Val、蛋氨酸Met、异亮氨酸Ile、亮氨酸Leu、苯丙氨酸Phe、赖氨酸 Lyb各 2.5μmol/mL 胱氨酸Cys 1.25μmol/mL),但只跑出17个峰,没有氯化铵的峰,氯化铵不属于胺类,添加在混标溶液中有什么作用呢?
一、实验目的掌握旋光法测定谷氨酸单钠的原理,熟悉旋光法测定谷氨酸单钠含量的方法。二、实验原理谷氨酸单钠分子结构中含有一个不对称碳原子,具有光学活性,能使偏振光面旋转一定角度,所以,可用旋光仪测定其旋光度,并根据旋光度换算成谷氨酸单钠的含量。三、仪器与试材1.仪器与器材旋光仪(精度±0.010),带有钠光谱D线589.3nm的钠光灯。2.试剂除特别说明外,实验中所用试剂均为分析纯,水为去离子水或蒸馏水。常规试剂:HCl。3.实验材料2~3种味精(纯度大于99%),各50g。四、实验步骤1.样品处理(1)称取样品10.0000g,加少量水溶解并全部移入100mL容量瓶中。(2)加20mILHCl,混匀,冷却至20℃后,补加水至刻度,摇匀。2.测定在20℃恒温室中,先用标准旋光角校正仪器。然后,将上述试液置于旋光管中(注意不能产生气泡),观测其旋光度,同时记录旋光管中溶液的温度。3.计算样品中谷氨酸单钠的含量按下式计算:a/LcX=─────────×10025.16+0.047×(20-t)式中,X为样品中谷氨酸钠的含量,%;a为实测试液的旋光度;L为旋光管的长度(即液层厚度),·dm;c为1mL试液中含谷氨酸钠的质量,g/mL;25.16为谷氨酸钠的比旋光度苫;t为溶液的温度,℃;0.047为温度校正系数。
用打油诗记住所有氨基酸六伴穷光蛋,酸谷天出门,死猪肝色脸,只携一两钱。一本落色书,拣来精读之。芳香老本色,不抢甘肃来。六伴穷光蛋:硫、半、光、蛋→半胱、光、蛋(甲硫)氨酸→含硫氨基酸酸谷天出门:酸、谷、天→谷氨酸、天门冬氨酸→酸性氨基酸死猪肝色脸:丝、组、甘、色→丝、组、甘、色氨酸→一碳单位来源的氨基酸只携一两钱:支、缬、异亮、亮→缬、异亮、亮氨酸→支链氨基酸一本落色书:异、苯、酪、色、苏→异亮、苯丙、酪、色、苏氨酸→生糖兼生酮拣来精读之:碱、赖、精、组→赖氨酸、精氨酸、组氨酸→碱性氨基酸芳香老本色:芳香、酪、苯、色→酪、苯丙、色氨酸→芳香族氨基酸不抢甘肃来:脯、羟、甘、苏、赖→脯、羟脯、甘、苏、赖氨酸→不参与转氨基的氨基酸
我有一个样品是三种氨基酸(亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸)的混合物。想测定氨基酸的含量,但是有检测机构讲纯的氨基酸浓度过高,用氨基酸分析仪测定误差大。请问这种说法对吗?不用氨基酸分析仪,用什么方法测定比较好?国内哪家机构比较权威?
在分析的时候, D-谷氨酸叔丁酯用液相测试方法请大家讨论一下!
实验室里的氨基酸仪没办法做检定/校准,好不容易找了家有相同仪器的实验室,想做一个仪器比对。该怎么做评价?有什么依据没?如下是两个仪器的测试结果,请各路高手指点指点。天门冬氨酸101.7101.3苏氨酸101.9101.7丝氨酸101.2101.8谷氨酸101.8100.5甘氨酸101.8101.9丙氨酸101.5101.5缬氨酸101.2100.2蛋氨酸100.7100.6异亮氨酸101.3100.2亮氨酸101.5102.3酪氨酸101.4102.2苯丙氨酸102.0101.1赖氨酸101.9101.4组氨酸101.9100.6精氨酸101.9101.8脯氨酸101.697.9
小米赖氨酸含量较低。如果缺乏赖氨酸,会导致蛋白质利用率下降。熬小米粥时,加一把花生即可。花生蛋白质的含量在20%以上,其中赖氨酸含量较高,和小米搭配有助于提升蛋白质利用率。
丙氨酸和亮氨酸的纸色谱法比移值是多少
肽 链 设 计简 介 多肽是复杂的大分子, 因此每条序列在物理和化学特性上都是独特的。有些多肽合成很困难, 另有些多肽虽然合成相对容易, 但纯化困难。最常见的问题是许多肽不溶于水溶液, 因此在纯化中, 这些疏水肽必须溶于非水溶剂中,或特殊的缓冲液, 而这些溶剂或缓冲液很可能不适合应用于生物实验系统, 因此研究人员不能使用该多肽达到自己的目的, 因此下面是对于研究人员设计多肽的一些建议。合成困难肽的选择1. 减少序列长度 由于肽的长度增加导致粗产物纯度降低, 小于15个残基的肽能较容易得到。当肽链长度增加到20个残基以上时, 正确产物的量就是一个主要考虑的问题。在许多实验中, 降低残基数低于20往往能得到更好的结果。2. 减少疏水残基数 疏水残基占明显优势的肽,尤其在距C端7-12个残基的区域,常常引起合成困难。这通常被认为是由于合成中形成b折叠片,这样产生不完全配对。在这些例子中, 用1个或几个极性残基置换, 或加入Gly或Pro以打开肽结构可能会有帮助。3. 减少"困难"残基 有多个Cys、Met、Arg、Try残基通常难于合成。Ser通常可作为Cys的非氧化替换。改善可溶性的选择1. 改变N端或C端 对于酸性肽 (即pH值为7时带负电荷), 我们推荐乙酰化(N端乙酰化, C端保持自由羧基), 以增加负电荷。而对于碱性肽 (即pH值为7时带正电荷), 我们推荐氨基化 (N端自由氨基, C端氨基化), 以增加正电荷。2. 缩短或加长序列 某些序列含有大量疏水氨基酸, 如Trp、Phe、Val、Ile、Leu、Met、Tyr和Ala等, 当这些疏水残基大于50%通常难于溶解。为了增加肽的极性, 加长序列可能会有帮助。另外一种选择是通过减少疏水残基的方法降低肽链的长度以增加极性。肽链极性越高, 就越有可能溶于水。3. 加入可溶性残基 对于某些肽链而言, 加上一些极性氨基酸能改善可溶性。我们推荐给酸性肽的N端或C端加上Glu-Glu。给碱性肽的N端或C端加上Lys-Lys。如果不能加入带电荷基团, 可以将Ser-Gly-Ser加到N端或C端。但是, 肽链的两端不能改变时, 该方法则不可行。4. 通过置换一个或多个残基改变序列 肽链的可溶性可通过改变序列内某些残基来改善。通常单个残基的替换就能显著改善其疏水性, 而这种改变通常是较为保守的, 如用Gly代替Ala。5. 通过选用不同"框架"来改变序列 如果能用某个序列来制备许多长度一定的相互串连或重叠的多肽, 则可以用改变各个多肽起始点的方法来实现改变序列的目的。其原理是: 在同一多肽的亲水和疏水残基间创造新的更好的平衡, 或将同一多肽内的"困难"残基(比如2个Cys)放进两个不同的多肽而不是集于同一分子内。特殊氨基酸残基对肽链特性影响的一些要点 对于由遗传密码编码的二十种氨基酸及蛋白质中常见的其他氨基酸, 按其特性可以用几种方法进行分类。下面列出了最常见的氨基酸的三字母代码和单字母代码,以及不同的分类方法。氨基酸的代码丙氨酸 Ala A 甲硫氨酸 Met M半胱氨酸 Cys C 天门冬酰胺 Asn N天门冬氨酸 Asp D 脯氨酸 Pro P谷氨酸 Glu E 谷氨酰胺 Gln Q苯丙氨酸 Phe F 精氨酸 Arg R甘氨酸 Gly G 丝氨酸 Ser S组氨酸 His H 苏氨酸 Thr T异亮氨酸 Ile I 缬氨酸 Val V赖氨酸 Lys K 色氨酸 Trp W亮氨酸 Leu L 酪氨酸 Tyr Y蛋白质中常见的其他氨基酸羟脯氨酸胱氨酸焦谷氨酸肽链设计中常见的其它氨基酸1. α-氨基丁酸 (Cys的置换物)2. β-氨基丙氨酸 (Ala的直链异构物)3. 正亮氨酸 (亮氨酸的线性侧链异构物)氨基酸按其亲水性、疏水性可分亲水性氨基酸: D, E, H, K, Q, R, S, T, 羟脯氨酸, 焦谷氨酸疏水性氨基酸: A, F, I, L, M, P, V, W, Y, α-氨基丁酸, β-氨基丙氨酸, 正亮氨酸C和G属于未定类其它的分类方法在温和条件下氧化的氨基酸--C, M脱氨或脱羧基的氨基酸--N, Q蛋白制备中易降解的氨基酸--M, W带正电荷的氨基酸--K, R, H带负电荷的氨基酸--D, E 当下列疏水氨基酸, 即Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Met, Phe, Trp存在于C端时,通常引起合成及纯化的困难, 这主要是因为它们难溶于水。如果您看见这些氨基酸, 即Cys、His、Pro 普遍存在于序列中或在C端时, 则在常规的固相合成中需要特殊的固相支持物。在用普通的固相支持物时, 在二肽阶段, 由于环化引起的损失非常高。在许多例子中, 甚至导致所有链从固相支持物上损失, 但是若C端为氨基化Pro时, 或者用特殊的PEG-聚苯乙烯固相支持物时, 能使产量大为提高, 则不会发生这种现象。
Waters质谱做质量数校正,其中LE(亮氨酸脑啡肽)溶液快用完了,waters800说买的话需要买一套,可是里面很多根本用不到,有用的只有两个,感觉很浪费呀,不知道大家是怎么办的?可以买sigma的自己配吗?
氨基酸是氨基和羧基的一类有机化合物的通称。生物功能大分子蛋白质的基本组成单位,是构成动物营养所需蛋白质的基本物质。是含有一个碱性氨基和一个酸性羧基的有机化合物。无色晶体,熔点极高,一般在200℃以上。不同的氨基酸其味不同,有的无味,有的味甜,有的味苦。各种氨基酸在水中的溶解度差别很大,并能溶解于稀酸或稀碱中,但不能溶于有机溶剂。近年来,随着技术的发展,检测氨基酸的种类及含量的方法很多,目前测定氨基酸的方法主要有氨基酸分析仪法、高效液相色谱法、毛细管电泳法及液相色谱-质谱联用法等。本文主要是通过高效液相串联质谱法来对16种氨基酸的含量进行测定,方法简单,快速,不用柱前衍生,节省试剂和成本,为保健品中氨基酸的含量测定提供了新方法。1实验部分1.1 仪器和试剂 16种氨基酸的混合标准品,(包括丙氨酸、精氨酸、天冬氨酸、胱氨酸、谷氨酸、组氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、赖氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、苏氨酸、酪氨酸、缬氨酸、丝氨酸)安捷伦;乙腈(色谱纯)CNW;乙酸铵(色谱纯);乙酸(色谱纯)。超声波清洗器(EQ-500);DHG-9240A型电热恒温鼓风干燥箱(上海鸿都电子科技有限公司);BPZ-6090Lc型真空干燥箱(上海一恒科学仪器有限公司);高效液相色谱仪(安捷伦1260);色谱柱:安捷伦poroshell 120 EC-C18柱(4.6mm×50mm,2.7μm);质谱(API3200)美国AB公司。1.2 色谱条件色谱柱:以十八烷基硅烷健合硅胶为填充剂(柱长15cm,内径4.6mm,粒径2.7μm )或同等性能的色谱柱;柱温:40℃;流速:0.5 ml/min;进样量:5μL ;流动相:流动相A:称取0.386g乙酸铵,加水500mL溶解,用乙酸调pH至3.5;流动相B:乙腈,梯度洗脱:时间(分钟)流动相A(%)流动相B(%)0.0090100.00-5.0090→8010→205.00-9.0080→9020→101.3质谱条件1.3.1以电喷雾电离源(ESI)阳离子模式,气帘气20psi,碰撞气6,喷雾电压5500V,离子源温度600°C,雾化气是50 psi,辅助气是50 psi,时间9min。1.3.2 16种氨基酸的质谱参数,见表1。表1 16氨基酸的质谱参数氨基酸Q1Q3TIMEDPEPCECXP丙氨酸90.144.2353510153精氨酸175.2116353010153天冬氨酸134.474354110153胱氨酸241.174.11002610153谷氨酸148.2102353010153组氨酸156.1110353510163亮氨酸132.386.1352610113异亮氨酸132.286352610113赖氨酸147.3130353010153蛋氨酸150.1104352510103苯丙氨酸166.4120352510143脯氨酸116.270353510143苏氨酸120.174.3354110153酪氨酸182.3136353510153缬氨酸118.272354110153丝氨酸106.160.23530101331.4 标准品溶液的配制量取16种氨基酸的混合标准品1ml,置于50ml容量瓶,加0.1%甲酸水定容,摇匀即得标准品贮备液。1.5 供试品溶液的制备 精密称取样品约0.1g,置于25ml磨口的具塞比色管内,加6mol/L盐酸15ml,加入0.2g苯酚,用旋转混合仪和超声仪使样品充分分散并溶解,充氮气,盖紧塞子,置于110℃±1℃的恒温干燥箱内,水解22小时,取出冷却,过滤,用纯化水冲洗比色管,将水解液全部转移至50mL容量瓶中,用纯化水定容至刻度,摇匀,精密吸取1mL于10mL容量瓶中,置于真空干燥箱内,于40℃~50℃减压干燥(真空干燥箱内放入五氧化二磷作为干燥剂),干燥后残留物用0.1%甲酸水定容至刻度,摇匀,经0.45μm的微孔滤膜过滤,即得。1.6 线性实验将标准品贮备液稀释成0.004nmol/μl,0.008nmol/μl,0.012nmol/μl,0.016nmol/μl,0.020nmol/μl浓度梯度,每个浓度以5μL注入色谱系统。1.7 精密度实验将标准品贮备液稀释至一定的浓度,按色谱、质谱条件进行测定,连续进样6次。1.8 加样回收率实验精密称取五分的供试品,每份加入0.020nmol/μl标准品溶液5ml,定容。以5μL注入色谱系统。1.9供试品的测定 把1.5制备好的供试品溶液,以5μL注入色谱系统。以标准液的峰面积和浓度,通过外标法做曲线算出样品的浓度。2 结果与讨论2.1 色谱行为由于保健品中的氨基酸,用高效液相荧光法要进行柱前衍生,成本很高而采用液质联用法,不需要衍生,可大大节约成本,用流动相(0.35g乙酸铵加水0.5L溶解,然后加入0.5L乙腈,混合,用乙酸调pH=3.5)时,5min就能把16种氨基酸全部流出。采用液质联用法,通过MRM模式进行母离子及相应的子离子进行检测,能达到准确的分离和定量,见图1 。 从左到右,分别为丙氨酸、精氨酸、天冬氨酸、胱氨酸、谷氨酸、组氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、赖氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、苏氨酸、酪氨酸、缬氨酸、丝氨酸。图1 16种氨基酸标准品的碎片离子色谱峰2.2 质谱行为在ESI(+)阳离子检测方式下,16种氨基酸的质谱定量分析,在质谱条件下,失去NH3形成+ 峰,或失去HCOOH重排生成+ 峰,从而进行色谱分离。2.3 线性回归方程和最低检测限以标准品的5个梯度浓度与其峰面积进行线性回归,拟合线性回归方程为Y=aX + b,相关系数r2 及最低检测限(S/N(信噪比)=3时,可测得标准品的最低检测限)见表2。表2 16种氨基酸线性回归方程、相关系数、最低检测限氨基酸Y=aX + b相关系数(r2)最低检测限(nmol/μl)丙氨酸Y=3.09e+006X + 6.95e+0030.99810.0013精氨酸Y=2.31e+007X + 1180.99990.0005天冬氨酸Y=3.45e+006X + 1.07e+0040.99760.0008胱氨酸Y=8.44e+005X + 1.72e+0030.99660.0006谷氨酸Y=7.6e+006X + 1.46e+0040.99840.0006组氨酸Y=7.58e+007X + 5.98e+0030.99990.0004亮氨酸Y=6.06e+007X + 5.24e+0040.99880.0001异亮氨酸Y=8.15e+007X + 6.26e+0040.99960.0001赖氨酸Y=1.24e+007X + 2.67e+0040.99780.0003蛋氨酸Y=1.34e+007X + 5.14e+0030.99890.0001苯丙氨酸Y=7.42e+007X + 4.08e+0040.99910.0001脯氨酸Y=7.9e+007X + 5.57e+0040.99970.0003苏氨酸Y=9.67e+006X + 2.49e+0040.99770.0003酪氨酸Y=1.76e+007X + 2.89e+0040.99920.0003缬氨酸Y=2.41e+007X + 3.31e+0040.99740.0003丝氨酸Y=1.06e+007X + 2.63e+0040.99810.00132.4 方法的精密度和重复性 取浓度0.012nmol/μl的16种氨基酸混合标准品连续进样6次。计算峰面积和保留时间的RSD值。结果见表3。表3 16种氨基酸峰面积和保留时间的相对标准偏差氨基酸峰面积RSD(%)保留时间RSD(%)丙氨酸4.480.57精氨酸4.670.34天冬氨酸4.570.44胱氨酸3.780.56谷氨酸3.360.24组氨酸3.330.13亮氨酸2.750.1异亮氨酸2.930.23赖氨酸4.790.43蛋氨酸3.920.09苯丙氨酸2.170.11脯氨酸4.540.28苏氨酸4.110.37酪氨酸3.610.13缬氨酸2.350.23丝氨酸3.280.162.5加样回收率实验,见表4。表4 16种氨基酸峰的回收率实验结果氨基酸平均回收率(%)RSD(%)丙氨酸94.114.05精氨酸82.912.73天冬氨酸82.694.66胱氨酸83.153.95谷氨酸98.234.1组氨酸78.671.61亮氨酸98.284.99异亮氨酸102.713.03赖氨酸98.584.49蛋氨酸95.983.34
用PITC衍生化测定甘氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺的含量测定步骤:1. 用纯水配制甘氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺的混合液,其浓度都大约为0.05mg/mL,得到甘氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺的混合标准溶液。2. 配制1.2%PITC乙腈溶液和14%TEA乙腈溶液。3. 衍生化过程:取200uL氨基酸混合标准溶液于1.5mL离心管中,然后加入100uL1.2%PITC乙腈溶液和100uL14%TEA乙腈溶液,摇震使其混合均匀,然后于水浴锅中水浴加热1小时,然后加入500uL正己烷萃取两次,最后取下层液200uL于HPLC瓶中,然后再加入400uL水稀释,用HPLC分析。 色谱条件:柱子:Agilent SB-Aq 250mm*4.6mm, 5um流动相A:50mM NaAC (pH=6.5)流动相B:50mM NaAC (pH=6.5):ACN=1:1Time:0-10-25-40minB%:5%-5%-95%-95%进样量10uL 出现问题:1. 甘氨酸和谷氨酰胺衍生化峰会分叉。2. 会出现很多杂峰,尤其是在强洗脱部分。
[font=黑体, SimHei][size=16px][color=#0070c0]点击链接查看更多:[url]https://www.woyaoce.cn/service/info-35770.html[/url]肽粉检测项目:[/color][/size][/font][font=黑体, SimHei][size=16px]1.低聚肽含量检测[/size][/font][font=黑体, SimHei][size=16px]2.低聚肽分子量分布检测[/size][/font][font=黑体, SimHei][size=16px]3.粗蛋白含量检测[/size][/font][font=黑体, SimHei][size=16px]4.灰分检测[/size][/font][font=黑体, SimHei][size=16px]5.粗脂肪含量检测[/size][/font][font=黑体, SimHei][size=16px]6.氨基酸检测:天冬氨酸、苏氨酸、丝氨酸、谷氨酸、脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、组氨酸、赖氨酸、精氨酸、色氨酸、胱氨酸[/size][/font][color=#0070c0][font=黑体, SimHei][size=16px]肽粉检测范围[/size][/font][/color][font=黑体, SimHei][size=16px]小麦低聚肽粉、肽藻粉、大豆肽粉、海洋鱼低聚肽粉、玉米低聚肽粉、复合低聚肽粉、牛骨低聚肽粉、植物低聚肽粉等[/size][/font][color=#0070c0][font=黑体, SimHei][size=16px]检测周期[/size][/font][/color][font=黑体, SimHei][size=16px]:样品测试周期一般为7-15个工作日。[/size][/font][color=#0070c0][font=黑体, SimHei][size=16px]检测费用[/size][/font][/color][font=黑体, SimHei][size=16px]:工程师根据检测项目进行报价。[/size][/font][color=#0070c0][font=黑体, SimHei][size=16px]肽粉检测流程[/size][/font][/color][font=黑体, SimHei][size=16px]1.寄样(或上门取样)[/size][/font][font=黑体, SimHei][size=16px]2.根据实验复杂程度进行报价。[/size][/font][font=黑体, SimHei][size=16px]3.双方确定,签订保密协议,开始实验[/size][/font][font=黑体, SimHei][size=16px]4.完成实验[/size][/font][font=黑体, SimHei][size=16px]5.邮寄检测报告,提供后期服务。[/size][/font][color=#0070c0][font=黑体, SimHei][size=16px]肽粉检测标准[/size][/font][/color][font=黑体, SimHei][size=16px]GB/T 22492-2008 大豆肽粉[/size][/font][font=黑体, SimHei][size=16px]GB/T 22729-2008 海洋鱼低聚肽粉[/size][/font][font=黑体, SimHei][size=16px]SB/T 10634-2011 淡水鱼胶原蛋白肽粉[/size][/font][font=黑体, SimHei][size=16px]QB/T 4707-2014 玉米低聚肽粉[/size][/font][font=黑体, SimHei][size=16px]QB/T 2879-2007 海洋鱼低聚肽粉[/size][/font]
[align=left]《NY/T 3001-2016 饲料中氨基酸的测定 毛细管电泳法》等83项标准业经专家审定通过,现批准发布为中华人民共和国农业行业标准,自2017年4月1日起实施。[/align]本分析方法用于测定饲料和饲料原料中的下列氨基酸:精氨酸、赖氨酸、 酪氨酸、苯丙氨酸、组氨酸、亮氨酸和异亮氨酸(总量)、蛋氨酸、缬氨酸、脯氨酸、苏氨酸、丝氨酸、丙氨酸、甘氨酸、半胱氨酸、色氨酸、谷氨酸和天门冬氨酸。[url=http://www.instrument.com.cn/netshow/SH103892/Product-C0105-0-0-1.htm]高效毛细管电泳仪[/url]是一种快速、简便的分析仪器,可应用于该标准采用LUMEX的毛细管电泳仪及等。多个行业,可进行定性和定量分析。仪器性价比高,无需要色谱柱,维护成本趋于零。俄罗斯已有多家企业顺利应用。
1.电喷雾离子源(ESI)正离子模式。2.亮氨酸脑啡肽作校正液[img=TIC图,690,517]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709121717_01_2257353_3.jpg[/img]问题:1.如何确定TIC对应峰的分子离子峰2.分子离子峰质量数是加氢得到的,还是加钠或者其他的
实时校正用的LE亮氨酸脑啡肽,做了lockspray校正了,在MS tune界面调整veff值让质量数=556.2771,在样品TIC查看lockspray通道质量数却显示556.31**,这是为什么呢[img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/12/202112181436239704_3414_5413462_3.png[/img]
很多种类的极性化合物分离条件。 UDP-葡萄糖 UDP-葡萄糖、UDP-半乳糖、磷酸半乳糖 葡萄糖 蔗糖 红细胞中的UDP-葡萄糖、UDP-半乳糖、三磷酸腺苷(ATP) ADP-葡萄糖、CDP-葡萄糖 糖核苷酸 胞嘧啶、胸腺嘧啶、尿嘧啶、鸟嘌呤、腺嘌呤 三磷酸腺苷(ATP)、一磷酸腺苷(AMP) 黄嘌呤-磷酸、鸟嘌呤-三磷酸 体液中的黄嘌呤、尿酸、次黄嘌呤 色胺、五羟色胺、多巴胺 L-天冬氨酸、L-精氨酸 L-精氨酸、L-赖氨酸、L-组氨酸 谷氨酸、赖氨酸 亮氨酸、异亮氨酸 L-甲硫氨酸、L-谷氨酸 甲基琥珀酸、戊二酸、草酸、肌酸、4-羟脯氨酸、天冬氨酸、鸟氨酸 叶酸 抗坏血酸 胆汁酸 柠檬酸、马来酸、反式乌头酸 马来酸、富马酸 3-羟基肉桂酸 矮壮素、甲哌啶 苯海拉明 4-二甲氨基吡啶 草甘膦 三聚氰胺、三聚氰酸 胍