改良琼脂

版主老师：请教您08版国标中菌落总数改营养琼脂为计数琼脂的优点是什么？两个培养基用的话区别大否？谢谢

请问下哪位大神知道，用什么方法和设备可以测琼脂糖的分子量？或者哪里有这种设备可以开展检查服务的，谢谢！

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菌落培养平板计数琼脂灭菌后，为什么是深红色，跟以前不一样颜色？琼脂也没有过期，灭菌是121℃，20分钟。问题出在哪里，这样的琼脂还能用吗？

[size=5]亚硫酸铋琼脂和胆硫乳琼脂倒入平板凝固后，总是有很多杂志，是不是琼脂出现了问题还是本身就是这样。谢谢[/size]

S.S琼脂，属()培养基。 A、营养 B、鉴别 C、选择 D、基础

[align=center][font='times new roman'][size=24px]2021.0[/size][/font][font='times new roman'][size=24px]7[/size][/font][font='times new roman'][size=24px].[/size][/font][font='times new roman'][size=24px]29[/size][/font][/align][align=center][/align][align=center][font='黑体'][size=20px]琼脂[/size][/font][/align][align=center][font='times new roman']陈珺宁[/font][/align][align=center][font='times new roman']（厦门大学化学化工学院）[/font][/align][font='times new roman']摘要：[/font][font='times new roman']琼脂是一种从某些海藻萃取的亲水胶体，在人们日常生产生活的各个领域中有广泛的应用。琼脂可以改善食品的质构，提升食品的品质，并且没有任何毒性，成为一种重要的食品添加剂，在食品工业中可以作为增稠剂、凝固剂、[/font][url=https://baike.baidu.com/item/%E6%82%AC%E6%B5%AE%E5%89%82][font='times new roman']悬浮剂[/font][/url][font='times new roman']、[/font][url=https://baike.baidu.com/item/%E4%B9%B3%E5%8C%96%E5%89%82][font='times new roman']乳化剂[/font][/url][font='times new roman']、保鲜剂和稳定剂等，被广泛应用。本文将对琼脂的理化性质、提取工艺与深加工、限量、标准、检测、应用等进行逐一介绍，有助于对该食品添加剂的了解。[/font][font='times new roman']关键词：[/font][font='times new roman']食品添加剂，琼脂，性质，提取，限量，[/font][font='times new roman']标准，检测，应用[/font][font='times new roman'][size=18px]0 [/size][/font][font='times new roman'][size=18px]引言[/size][/font][font='times new roman']琼脂（[/font][font='times new roman']agar[/font][font='times new roman']），又称琼胶、洋菜、洋粉或冻粉等，根据中华人民共和国药典记载，琼脂系自石花莱[/font][font='times new roman']Gelidium amansii Lamx[/font][font='times new roman']或其他数种红藻类植物中浸出并经脱水干燥的粘[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质[/color][/url]；按照美国药典定义，琼脂是一种从[/font][font='times new roman']Rhodophyceae[/font][font='times new roman']类的某些海藻萃取的亲水胶体。琼脂由琼脂糖和琼脂胶组成，是一种由半乳糖和半乳糖衍生物构成的长链形多糖。其中，半乳糖残基上不含硫酸基、甲氧基、丙酮酸基等基团，可发生凝胶化的长链中性多糖是琼脂糖；半乳糖残基上含有这些基团，不发生凝胶化的长链酸性多糖是琼脂胶[/font][font='times new roman']。[/font][font='times new roman'] [/font][font='times new roman'][size=13px][1[/size][/font][font='times new roman'][size=13px]、[/size][/font][font='times new roman'][size=13px]2][/size][/font][font='times new roman'][size=18px]1 [/size][/font][font='times new roman'][size=18px]理化性质[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]1.1 [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]溶解性[/size][/font][font='times new roman'][size=16px] [/size][/font][font='times new roman'][size=16px][1~3][/size][/font][font='times new roman']琼脂在水中的溶解度与温度呈一定的正相关。常温下，高纯度琼脂不溶于水、无机溶剂和有机溶剂，只微溶于乙醇胺和甲酰胺；加热条件下，琼脂可溶于水形成溶液。在[/font][font='times new roman']95~100℃[/font][font='times new roman']并间歇式搅拌条件下，或在[/font][font='times new roman']100~120℃[/font][font='times new roman']高压釜中，易制取[/font][font='times new roman']0~5% [/font][font='times new roman']琼脂溶液和用于铸模的[/font][font='times new roman']8~14% [/font][font='times new roman']琼脂溶液。琼脂也可在沸腾的低浓度乙醇（[/font][font='times new roman']30~50%[/font][font='times new roman']）溶液中溶解。其他研究发现，琼脂可以溶解于多种溶剂。常温下，干琼脂可以吸水溶胀，其吸水率达[/font][font='times new roman']20[/font][font='times new roman']倍；加热至[/font][font='times new roman']95℃[/font][font='times new roman']可溶于水，极易分散形成中性溶胶，其中琼脂糖含量比例越大，凝胶强度越高。[/font][font='times new roman'][size=16px]1.2 [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]黏度[/size][/font][font='times new roman'][size=16px] [/size][/font][font='times new roman'][size=16px][1~3][/size][/font][font='times new roman']琼脂凝固能力强，黏度较低，其中石花莱琼脂具有极强凝固能力、低黏度，工业琼脂因在提取过程中受化学试剂破坏具有较低的黏度。琼脂水溶液（溶胶）的黏度受原料的种类和质量，提取和加工条件，琼脂浓度、温度、加入电解质种类等测量条件影响而不同。当[/font][font='times new roman']pH = 4.5~9[/font][font='times new roman']时[/font][font='times new roman']，黏度相对稳定；当[/font][font='times new roman']pH = 6.0~8.0[/font][font='times new roman']时，黏度受老化或离子强度影响有较小变化。开始凝胶化时，在温度一定的条件下，黏度随凝胶现象持续时间的延长而增大，最终形成凝胶。此外，琼脂溶液在高温、电解质、无机酸或酸性盐类等处理后，黏度明显下降。[/font][font='times new roman'][size=16px]1.3 [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]絮凝性[/size][/font][font='times new roman'][size=16px] [/size][/font][font='times new roman'][size=16px][1][/size][/font][font='times new roman']琼脂溶液中加入[/font][font='times new roman']10[/font][font='times new roman']倍体积乙醇、[/font][font='times new roman']2-[/font][font='times new roman']丙醇或丙酮，可以定量从其水溶液中絮凝析出；也可以用饱和硫酸钙、硫酸铵或硫酸镁溶液，使琼脂溶液发生盐析。常温下，絮凝析出的琼脂能溶于水或其他溶剂，电解质浓度越大、絮凝温度越高越难溶解，但除非在体系中加入水，否则琼脂不会[/font][font='times new roman']发生凝胶化形成凝胶。[/font][font='times new roman'][size=16px]1.4 [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]凝胶性与滞后性[/size][/font][font='times new roman'][size=16px] [/size][/font][font='times new roman'][size=16px][1~3][/size][/font][font='times new roman']琼脂具有凝胶性，即使琼脂溶液浓度低至[/font][font='times new roman']0.004%[/font][font='times new roman']，常温下仍能形成凝胶，不需要任何助凝剂。琼脂凝胶有许多物理化学特性：具有热可逆性；其熔化温度受琼脂凝胶浓度和平均分子量影响；凝胶强度受原料种类、化学环境（如浓度、离子强度及[/font][font='times new roman']pH[/font][font='times new roman']等）和提取方法等影响；具有优良的相容性，可与大多数多糖类树胶或蛋白质溶液互溶；放置过程中发生轻微且缓慢的老化。值得注意的是，在多糖类树胶中，只有琼脂的凝胶化温度低于其熔化温度。琼脂溶胶的凝固点在[/font][font='times new roman']32~43℃[/font][font='times new roman']之间，琼脂凝胶的熔点在[/font][font='times new roman']7[/font][font='times new roman']5~90℃[/font][font='times new roman']之间，熔点远高于凝固点被称为[/font][font='times new roman']“[/font][font='times new roman']滞后现象[/font][font='times new roman']”[/font][font='times new roman']。琼脂的许多用途基于其凝胶温度的高滞后性。[/font][font='times new roman']在相同浓度下，琼脂凝胶与其他可凝胶化的物质相比强度最大，其中低浓度凝胶可以保护分散体系、防止扩散作用和改善产品质地，高强度凝胶具有优良的弹性、强度、回复力、可逆性、相对透明性和相对渗透性等特性，均有一定的应用价值和市场前景。此外，琼脂凝胶存在较硬、易脆、粗糙、透明性较差和冷冻后脱水等缺点，但是可以通过与其他材料进行改善，比如与糊精、蔗糖等复合使用可以提高凝胶的强度，与卡拉胶复合使用可以提高弹性和柔软度，与明胶复合使[/font][font='times new roman']用可以提高凝胶的强度、透明度和黏弹性。[/font][font='times new roman'][size=16px]1.5 [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]非酸性降解与稳定性[/size][/font][font='times new roman'][size=16px] [1~3][/size][/font][font='times new roman']琼脂具有优良的稳定性，常温下很难降解，但大量黏度、衍射和凝胶强度实验与研究证明，在超声波、强[/font][font='times new roman']γ[/font][font='times new roman']射线辐射，及强烈搅拌和高温长时间处理后，琼脂的分子链发生断裂，导致琼脂分子量降低，部分理化性能恶化。此外，琼脂具有很强的抗酶解能力不会在人或动[/font][font='times new roman']物体内被酶解，绝大部分随排泄物排出体外。[/font][font='times new roman'][size=18px]2 [/size][/font][font='times new roman'][size=18px]提取与深加工[/size][/font][font='times new roman'][size=18px][4][/size][/font][font='times new roman'][size=16px]2.1 [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]琼脂提取工艺[/size][/font][font='times new roman']琼脂生产自石花莱[/font][font='times new roman']Gelidium amansii Lamx[/font][font='times new roman']或其他几种红海藻，在红海藻细胞壁中以碳水化合物（多[/font][font='times new roman']糖）的形式存在。[/font][font='times new roman'][size=13px][1] [/size][/font][font='times new roman']由于琼脂需求量的增加，琼脂提取工艺日益丰富和完善。目前，高温高压法、碱法、酶法辅助提取工艺应用较为广泛。[/font][font='times new roman']2.1.1 [/font][font='times new roman']高温高压法[/font][font='times new roman']高温高压法是琼脂提取的传统方法，主要流程为原料处理[/font][font='times new roman']→[/font][font='times new roman']浸泡[/font][font='times new roman'] → [/font][font='times new roman']煮胶[/font][font='times new roman'] → [/font][font='times new roman']过滤[/font][font='times new roman'] → [/font][font='times new roman']冷却[/font][font='times new roman'] → [/font][font='times new roman']脱水[/font][font='times new roman'] → [/font][font='times new roman']干燥[/font][font='times new roman']→[/font][font='times new roman']粉碎[/font][font='times new roman']→[/font][font='times new roman']包装。该提取工艺简单，琼脂分子破坏较少，提取率较高，但凝胶强度较低。高温高压法提取琼脂一般适用于硫酸基含量较低的原料，如石花莱。[/font][font='times new roman']2.1.2 [/font][font='times new roman']碱法提取工艺[/font][font='times new roman']碱法工艺常见有低温高碱、中温高碱和高温稀碱３种[/font][font='times new roman'], [/font][font='times new roman']主要流程为原料处理[/font][font='times new roman']→[/font][font='times new roman']碱处理[/font][font='times new roman']→[/font][font='times new roman']漂洗[/font][font='times new roman']→[/font][font='times new roman']酸处理[/font][font='times new roman']→[/font][font='times new roman']漂洗[/font][font='times new roman']→[/font][font='times new roman']漂白[/font][font='times new roman']→[/font][font='times new roman']漂洗[/font][font='times new roman']→ [/font][font='times new roman']煮胶[/font][font='times new roman'] → [/font][font='times new roman']过滤[/font][font='times new roman'] → [/font][font='times new roman']冷却[/font][font='times new roman'] → [/font][font='times new roman']脱水[/font][font='times new roman'] → [/font][font='times new roman']干燥[/font][font='times new roman'] → [/font][font='times new roman']粉碎[/font][font='times new roman']→[/font][font='times new roman']包装。中低温高碱法提取温度较低、生产工艺较易控制，但用碱量大、环境负担大、生产成本较高；高温稀碱法碱浓度较低，环境污染较小，但提取温度较高、生产工艺不易控制，且在高温条件下琼脂易被破坏，导致胶质流失、降低产率。目前，许多优化提取工艺条件的研究正在进行，以更好地利用碱法工艺提取琼脂。[/font][font='times new roman']2.1.3 [/font][font='times new roman']酶法辅助提取工艺[/font][font='times new roman']酶法辅助提取工艺是使用酶处理辅助碱法提取工艺，即利用纤维素酶在碱处理前或处理后作[/font][font='times new roman']用于藻体，加速破坏藻体的细胞壁，从而促进胶质溶出。酶法辅助提取工艺是对碱法提取琼脂的优化，可以提高琼脂的得率、凝胶强度，并且有效减少碱液和清洗水的用量，减轻环境负担。[/font][font='times new roman'][size=16px]2.2 [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]琼脂深加工[/size][/font][font='times new roman']琼脂具有分子量大、溶解性差等缺点，对琼脂进行适当处理，可以扩大其应用范围。琼脂深加工主要集中在利用琼脂提取琼脂糖和通过降解琼脂制备琼胶寡糖。[/font][font='times new roman']2.2.1 [/font][font='times new roman']琼脂糖提取[/font][font='times new roman']琼脂糖是琼脂的重要组成成分，提取方法主要有碘化钠法、乙酰化法、聚乙二醇法、十[/font][font='times new roman'] [/font][font='times new roman']六烷基氯化吡啶法（[/font][font='times new roman']CPC[/font][font='times new roman']）、二甲基亚砜法（[/font][font='times new roman']DMSO[/font][font='times new roman']）、[/font][font='times new roman']EDTA – Na[/font][font='times new roman'][size=13px]2[/size][/font][font='times new roman']法、[/font][font='times new roman']DEAE - [/font][font='times new roman']纤维素法、硫酸铵法、磷酸钠法、尿素法等，目的都是将琼脂中的硫琼脂和琼脂糖分离，纯化琼脂糖。[/font][font='times new roman']2.2.2 [/font][font='times new roman']琼胶寡糖制备[/font][font='times new roman']琼胶寡糖一般是指[/font][font='times new roman']DP[/font][font='times new roman']（[/font][font='times new roman']degree of polymerization[/font][font='times new roman']）为[/font][font='times new roman']2~10[/font][font='times new roman']的低聚糖[/font][font='times new roman'], [/font][font='times new roman']包括胶寡糖和新胶寡糖。琼胶寡糖具有重要的生理功能[/font][font='times new roman'], [/font][font='times new roman']在食品工业、医药工业、日用化工、生物工程等许多方面有广阔应用前景。[/font][font='times new roman'][size=13px][5] [/size][/font][font='times new roman']琼脂寡糖的制备方法主要有化学降解法和酶降解法，缪伏荣[/font][font='times new roman'][size=13px][5] [/size][/font][font='times new roman']和林坤城[/font][font='times new roman'][size=13px][4] [/size][/font][font='times new roman']等人对琼脂降解制备琼胶寡糖作出具体介绍。[/font][font='times new roman'][size=18px]3 [/size][/font][font='times new roman'][size=18px]限量[/size][/font][font='times new roman']根据食品标法查询网的查询结果[/font][font='times new roman']，未查明具体食品中琼脂的最大使用量，结果均为适量使用即可。[/font][font='times new roman'][size=18px]4 [/size][/font][font='times new roman'][size=18px]标准[/size][/font][font='times new roman'][size=18px][6][/size][/font][font='times new roman']根据中华人民共和国卫生部于[/font][font='times new roman']2010[/font][font='times new roman']年[/font][font='times new roman']12[/font][font='times new roman']月[/font][font='times new roman']21[/font][font='times new roman']日发布、于[/font][font='times new roman']2011[/font][font='times new roman']年[/font][font='times new roman']2[/font][font='times new roman']月[/font][font='times new roman']21[/font][font='times new roman']日实施的《食品安全国家标准[/font][font='times new roman'] [/font][font='times new roman']琼脂（琼胶）[/font][font='times new roman'] GB 1975—2010[/font][font='times new roman']》的标准，对感官要求、理化指标、产品规格等技术要求作出详细规定。[/font][font='times new roman'][size=16px]4.1 [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]感官要求[/size][/font][font='times new roman']根据《食品安全国家标准[/font][font='times new roman'] [/font][font='times new roman']琼脂（琼胶）[/font][font='times new roman'] GB 1975—2010[/font][font='times new roman']》规定，琼脂具有类白色或淡黄色的色泽、呈均匀条状或粉状、无异味。[/font][font='times new roman'][size=16px]4.2 [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]理化指标[/size][/font][font='times new roman']根据《食品安全国家标准[/font][font='times new roman'] [/font][font='times new roman']琼脂（琼胶）[/font][font='times new roman'] GB [/font][font='times new roman']1975—2010[/font][font='times new roman']》规定，琼脂中水分（[/font][font='times new roman']w%[/font][font='times new roman']）[/font][font='times new roman']≤22%[/font][font='times new roman']，灰分（[/font][font='times new roman']w%[/font][font='times new roman']）[/font][font='times new roman']≤5%[/font][font='times new roman']，水不溶物（[/font][font='times new roman']w%[/font][font='times new roman']）[/font][font='times new roman']≤1%[/font][font='times new roman']，重金属（以[/font][font='times new roman']Pb[/font][font='times new roman']计）[/font][font='times new roman']≤20%[/font][font='times new roman']，铅（[/font][font='times new roman']Pb[/font][font='times new roman']）[/font][font='times new roman']≤5 mg/kg[/font][font='times new roman']，砷（[/font][font='times new roman']As[/font][font='times new roman']）[/font][font='times new roman']≤3 mg/kg[/font][font='times new roman']。其中逐一理化指标的检验方法在[/font][font='times new roman']GB[/font][font='times new roman']中均有明确给出。[/font][font='times new roman'][size=16px]4.3 [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]产品规格[/size][/font][font='times new roman']产品规格按凝胶强度不同划分，分为低强度、中强度、高强度、超高强度，即[/font][font='times new roman']20℃[/font][font='times new roman']下在[/font][font='times new roman']1.5%[/font][font='times new roman']琼脂溶液中，凝胶强度在[/font][font='times new roman']150~400 g/cm[/font][font='times new roman'][size=13px]3[/size][/font][font='times new roman']为低强度，在[/font][font='times new roman']401~800 g/cm[/font][font='times new roman'][size=13px]3[/size][/font][font='times new roman']为中强度，在[/font][font='times new roman']801~1200 g/cm[/font][font='times new roman'][size=13px]3[/size][/font][font='times new roman']为高强度，[/font][font='times new roman']1200 g/cm[/font][font='times new roman'][size=13px]3[/size][/font][font='times new roman']为超高强度。[/font][font='times new roman'][size=18px]5 [/size][/font][font='times new roman'][size=18px]检测[/size][/font][font='times new roman']《食品安全国家标准[/font][font='times new roman'] [/font][font='times new roman']琼脂（琼胶）[/font][font='times new roman'] GB 1975—2010[/font][font='times new roman']》中规定了琼脂的鉴别试验方法和多种理化指标及凝胶强度的测定方法，本文中简述规定中提到的鉴别试验、淀粉试验、水不溶物以及凝胶强度测定的实验方法[/font][font='times new roman'][size=13px][6] [/size][/font][font='times new roman']，其余理化指标的检测方法在[/font][font='times new roman']GB[/font][font='times new roman']中均有明确给出。[/font][font='times new roman'][size=16px]5.1 [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]鉴别试验[/size][/font][font='times new roman']取试样[/font][font='times new roman']1g[/font][font='times new roman']，加水[/font][font='times new roman']65mL[/font][font='times new roman']，煮沸[/font][font='times new roman']10min[/font][font='times new roman']，不断搅拌，用热水补足水分，放冷至[/font][font='times new roman']32℃[/font][font='times new roman']～[/font][font='times new roman']39℃[/font][font='times new roman']即凝结成半透明有弹性的凝胶状物，再加热至[/font][font='times new roman']85℃[/font][font='times new roman']开始熔化；再取适量条状试样的碎片，浸入[/font][font='times new roman']0.01mol/L[/font][font='times new roman']碘溶液中数分钟，染成棕黑色，取出后加水浸泡后[/font][font='times new roman']渐变紫色。[/font][font='times new roman'][size=16px]5.2 [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]淀粉试验[/size][/font][font='times new roman']取[/font][font='times new roman']0.5g[/font][font='times new roman']试样，加水[/font][font='times new roman']100mL[/font][font='times new roman']，煮沸溶解后放冷，加[/font][font='times new roman']2[/font][font='times new roman']滴[/font][font='times new roman']0.05mol/L[/font][font='times new roman']碘溶液，不得显蓝色。[/font][font='times new roman'][size=16px]5.3 [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]水不溶物的测定[/size][/font][font='times new roman']称取试样约[/font][font='times new roman'] 1.5g[/font][font='times new roman']（称准至[/font][font='times new roman'] 0.001g[/font][font='times new roman']）于[/font][font='times new roman'] 500mL [/font][font='times new roman']烧杯中，加水至[/font][font='times new roman'] 200mL[/font][font='times new roman']，盖上表面皿，加热煮沸溶解（加热时注意搅动）。趁热用已干燥恒重（前后两次质量之差不大于[/font][font='times new roman'] 0.001g [/font][font='times new roman']为恒重，冷却操作时需严格保持冷却时间的统一）的砂芯坩埚减压过滤，并用热水充分洗涤烧杯和砂芯坩埚，然后将砂芯坩埚于[/font][font='times new roman']105℃±2℃[/font][font='times new roman']电热干燥箱内烘至恒重。[/font][font='times new roman'][size=16px]5.4 [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]凝胶强度的测定[/size][/font][font='times new roman']5[/font][font='times new roman'].4.1 [/font][font='times new roman']凝胶强度测定的原理[/font][font='times new roman']将试样制成一定浓度和体积的凝胶，用凝胶强度仪测定凝胶在[/font][font='times new roman']15s[/font][font='times new roman']～[/font][font='times new roman']20s[/font][font='times new roman']内的抗破砝码质量，根据温度换算系数，计算样品凝胶强度。[/font][font='times new roman']5.4.2 [/font][font='times new roman']凝胶强度的测定方法[/font][font='times new roman']制备琼脂凝胶试样，将其放在凝胶强度测定仪的试样座中心位置上，按凝胶强度测定仪说明书进行操作，移动手柄使砝码添加装置杆下端与凝胶表面接触，加大力度使凝胶的表面发生破裂（端点进入凝胶约[/font][font='times new roman']4mm[/font][font='times new roman']以上），记录此时凝胶强度值，同时，测量凝胶的温度。[/font][font='times new roman'][size=18px]6 [/size][/font][font='times new roman'][size=18px]应用[/size][/font][font='times new roman']琼脂因其独特的物理化学性质，在食品、医药、微生物学、实验室应用等许多方面具有广泛的应用。[/font][font='times new roman'][size=16px]6.1 [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]食品[/size][/font][font='times new roman']琼脂具有凝固性和稳定性，在食品工业中可以作为增稠剂、凝固剂、[/font][url=https://baike.baidu.com/item/%E6%82%AC%E6%B5%AE%E5%89%82][font='times new roman']悬浮剂[/font][/url][font='times new roman']、[/font][url=https://baike.baidu.com/item/%E4%B9%B3%E5%8C%96%E5%89%82][font='times new roman']乳化剂[/font][/url][font='times new roman']、保鲜剂和稳定剂等，被广泛用于制造各种糖果、果冻、饮料、冷饮、焙烤制品、速食食品和保健食品、禽类和肉类食品、肉制品、酿造行业等等。[/font][font='times new roman']6.1.1 [/font][font='times new roman']糖果[/font][font='times new roman']在糖果生产中，琼脂作为胶凝剂，主要用于制造软糖。[/font][font='times new roman'][size=13px][2] [/size][/font][font='times new roman']琼脂凝胶软糖是大众的产品，深受广大消费者的青睐，如无花果等水果琼脂软糖或果汁软糖，价廉物美、销量可观。[/font][font='times new roman'][size=13px][1][/size][/font][font='times new roman']琼脂主要依靠其凝胶特点制作软糖，具有含水量高、透明、柔软、有弹性、货架期长的特点。[/font][font='times new roman'][size=13px][3] [/size][/font][font='times new roman']根据琼脂的凝胶能力[/font][font='times new roman'],[/font][font='times new roman']软糖中的琼脂用量一般在[/font][font='times new roman']1[/font][font='times new roman']％[/font][font='times new roman']~2.5[/font][font='times new roman']％，碳水化合物以蔗糖为主，[/font][font='times new roman']淀粉糖浆为辅，其比例约为[/font][font='times new roman']3[/font][font='宋体']∶[/font][font='times new roman']2[/font][font='times new roman']。用琼脂制造的软糖的透明度、品质及口感均优于其它软糖。琼脂虽然作为传统的凝胶物质在糖果制作中长久应用，但实践表明其口感特性比较单一。近年来也常添加明胶、变性淀粉、果汁[/font][font='times new roman']/[/font][font='times new roman']果泥或瓜果等，有助于糖果配合物料组成的多样性，有利于风味与口感的改进。[/font][font='times new roman'][size=13px][2[/size][/font][font='times new roman'][size=13px]、[/size][/font][font='times new roman'][size=13px]7][/size][/font][font='times new roman']6.1.2 [/font][font='times new roman']果冻[/font][font='times new roman'] [/font][font='times new roman']在果冻制造过程中添加琼脂，可为稳定剂和胶凝剂，使颗粒悬浮均匀、不沉淀、不分层。根据琼脂的胶凝能力，一般用量为[/font][font='times new roman'] 0.15[/font][font='times new roman']％[/font][font='times new roman']~0.3[/font][font='times new roman']％。[/font][font='times new roman'][size=13px][2][/size][/font][font='times new roman']6.1.3 [/font][font='times new roman']饮料[/font][font='times new roman']琼脂用在饮料类产品中可作为助悬剂，使饮料中固型物悬浮均匀、不下沉。其悬浮时间及保质期长，是其它助悬剂无法代替的，产品透明度、流动性会更好、口感爽滑无异味。在果粒饮料中表现出优异的悬浮效果，使用浓度为[/font][font='times new roman']0.001[/font][font='times new roman']％[/font][font='times new roman']~0.005[/font][font='times new roman']％即可使果粒悬浮均匀。[/font][font='times new roman'][size=13px][2] [/size][/font][font='times new roman']6.1.4 [/font][font='times new roman']冷饮[/font][font='times new roman']琼脂用于冷饮食品，如冰棒、冰淇淋等各种冷冻制品，可减少冰晶，提高抗热融性，使产品更加爽口。在冰淇淋生产中，琼脂可改善冰淇淋的组织状态，提高冰淇淋的黏度和膨胀率，防止冰晶析出，使制品组织细腻轻滑，使用量为[/font][font='times new roman']0.3[/font][font='times new roman']％左右。[/font][font='times new roman'][size=13px][2] [/size][/font][font='times new roman']琼脂与刺槐豆胶、[/font][font='times new roman']明胶相配合，在冷饮食品的质地和香味稳定性方面起到极优异的作用，并能防止脱水收缩和表面结皮。作为稳定剂的最佳浓度是：琼脂[/font][font='times new roman']0.12[/font][font='times new roman']％、刺槐豆胶[/font][font='times new roman']0.07[/font][font='times new roman']％、明胶[/font][font='times new roman']0.20[/font][font='times new roman']％。[/font][font='times new roman'][size=13px] [1][/size][/font][font='times new roman']6.1.5 [/font][font='times new roman']焙烤制品[/font][font='times new roman']琼脂可以作为一种略起粘结作用的添加剂，被广泛地用于多种焙烤食品中[/font][font='times new roman'],[/font][font='times new roman']如焙烤食品生产厂将琼脂用于曲奇饼、奶油夹心派的外壳、含果仁的果冻、馅饼或派的馅、糕饼甜心表层的酥皮、蛋白酥皮筒等。琼脂也可以作为保湿剂，也成功用于面包和糕饼甜心中防干燥。[/font][font='times new roman'][size=13px][1] [/size][/font][font='times new roman']琼脂还可以作为填充剂和膨松剂，可代替淀粉制造麦片糊、无淀粉面包和餐后点[/font][font='times new roman']心，制作为低热能食品，同时对面包和饼干也起到了保湿、保险的作用。[/font][font='times new roman'][size=13px][2] [/size][/font][font='times new roman']在上述这些类型的产品中，琼脂使用的量约在[/font][font='times new roman']0.1[/font][font='times new roman']％～[/font][font='times new roman']1[/font][font='times new roman']％的范围内。[/font][font='times new roman'][size=13px][1][/size][/font][font='times new roman']6.1.6 [/font][font='times new roman']速食食品和保健食品[/font][font='times new roman'][size=13px][1] [/size][/font][font='times new roman']琼脂素食食品和保健食品中也有重要应用，例如它可以添加用于谷类食品（如麦片）、肉食代用品（如人造肉、素肉等）和素食者食用的甜食与点心中。[/font][font='times new roman']6.1.7 [/font][font='times new roman']禽类和肉类罐头[/font][font='times new roman']在禽类和肉类罐头中，琼脂作为胶冻剂和赋形剂，其用量可以是罐头中清汤的[/font][font='times new roman']0.5[/font][font='times new roman']％～[/font][font='times new roman']2.0[/font][font='times new roman']％，以消除罐头中食品组织发生脆碎。[/font][font='times new roman']6.1.8 [/font][font='times new roman']肉制品[/font][font='times new roman']琼脂作为肉制品的辅料，具[/font][font='times new roman']有提高肉制品的品质、保护其风味等特性。[/font][font='times new roman'][size=13px][3] [/size][/font][font='times new roman']琼脂用于灌制香肠、熏制或腓制肉制品，可明显保护其胶体以防止其风味散失。烹调的火腿可浇盖含有琼脂和抗坏血酸的溶液，包装以后，琼脂处理过的肉制品比未处理的和只用抗坏血酸单独处理的肉制品更能保持原有的风味。[/font][font='times new roman'][size=13px][2][/size][/font][font='times new roman']6.1.9 [/font][font='times new roman']酿造行业[/font][font='times new roman']琼脂在酿造行业，作为啤酒、酱油和食用醋的澄清剂以加速和改善产品澄清。[/font][font='times new roman'][size=13px][2] [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]6.2 [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]医药[/size][/font][font='times new roman'][size=16px][1] [/size][/font][font='times new roman']琼脂可以广泛地用作轻泻剂，在人体肠中不会被消化，在充分水化的情况下，如同纤维素一样，起到增大排泄物体积和促进肠道蠕动的作用，并且无刺激性和可以达到润肠的效果。在放射科中，琼脂常作为钡餐中硫酸钡的悬浮剂。琼脂常常在缓释胶囊药物栓塞药、外科润滑剂，以及许多乳剂类型的药物中用作为起多种功能的添加剂。在药片中，琼脂用作为赋形剂和崩解剂。[/font][font='times new roman'][size=16px]6.3 [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]微生物学[/size][/font][font='times new roman']琼脂在微生物学中获得了最有价值的应用。在低浓度下，琼脂即可阻止氧进入液体介质中，可以用于在暴露于空气中的营养肉汤进行厌氧菌的培养。在液体介质中使用的琼脂浓度通常在[/font][font='times new roman']0.007[/font][font='times new roman']％～[/font][font='times new roman']0.08[/font][font='times new roman']％。[/font][font='times new roman'][size=13px][1] [/size][/font][font='times new roman']在制作微生物的培养基的过程中，可以通过添加琼脂作为凝固剂来将[/font][url=https://baike.baidu.com/item/%E6%B6%B2%E4%BD%93%E5%9F%B9%E5%85%BB%E5%9F%BA/8509492][font='times new roman']液体培养基[/font][/url][font='times new roman']转化为固体培养基或[/font][url=https://baike.baidu.com/item/%E5%8D%8A%E5%9B%BA%E4%BD%93%E5%9F%B9%E5%85%BB%E5%9F%BA/3410252][font='times new roman']半固体培养基[/font][/url][font='times new roman']。[/font][font='times new roman'][size=16px]6.4 [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]实验室应用[/size][/font][font='times new roman'][size=16px][1] [/size][/font][font='times new roman']琼脂可以提高颗粒度测量的精确度，可以对包含有固体颗粒的悬浮液的浓度进行测定，亚甲基蓝、甲苯胺蓝、硫堇和频那氰醇等染料可以通过琼脂的作用而发生可逆的聚合。蛋白质可以通过琼脂凝胶作电泳迁移，用于铁蛋白、卵清蛋白、血红蛋白和胃蛋白酶的解析。琼脂钠和琼脂铵、琼脂糖和琼脂糖钠在球蛋白电泳、免疫扩散诊断技术、凝胶过滤和分子大小排阻色谱等技术中是很有应用价值的。琼脂还能稳定胆固醇溶液。[/font][font='times new roman'][size=18px]7 [/size][/font][font='times new roman'][size=18px]总结与展望[/size][/font][font='times new roman']琼脂由琼脂糖和琼脂胶组成，是一种由半乳糖和半乳糖衍生物构成的长链形多糖，具有特殊的理化性质，并因此在食品、医药、微生物、实验室等均有广泛的应用。据不完全统计，目前没有明确规定琼脂的最大使用量，适量使用即可。食品安全国家标准对琼脂的感官要求、理化指标和产品规格等均作出详细规定，并给出了与琼脂相关的检测方法。琼脂产业的发展[/font][font='times new roman']具有重要的经济效益、社会效益和生态效益，同时还直接或间接地成为构建海洋渔业生态链和海洋渔业产业经济链不可或少的纽带。随着琼脂在食品工业的广泛应用，必将具有广阔的市场前景。[/font][font='times new roman'][size=13px][2][/size][/font][font='times new roman']参考文献：[/font][font='times new roman'][[/font][font='times new roman']1] [/font][font='times new roman']琼脂[/font][font='times new roman'][J].[/font][font='times new roman']明胶科学与技术[/font][font='times new roman'],2005(03):123-130.[/font][font='times new roman'][2] [/font][font='times new roman']李琴梅[/font][font='times new roman'],[/font][font='times new roman']戚勃[/font][font='times new roman'].[/font][font='times new roman']琼脂的物化特性及其在食品工业中的应用[/font][font='times new roman'][J].[/font][font='times new roman']中国食品添加剂[/font][font='times new roman'],2009(06):170-174.[/font][font='times new roman'][3] [/font][font='times new roman']宋雪健[/font][font='times new roman'],[/font][font='times new roman']王洪江[/font][font='times new roman'],[/font][font='times new roman']张东杰[/font][font='times new roman'].[/font][font='times new roman']琼脂在食品中的应用研究进展[/font][font='times new roman'][J].[/font][font='times new roman']现代农业科技[/font][font='times new roman'],2017(12):267-268+272.[/font][font='times new roman'][4] [/font][font='times new roman']林坤城[/font][font='times new roman'].[/font][font='times new roman']琼脂提取及深加工研究进展[/font][font='times new roman'][J].[/font][font='times new roman']福建农业科技[/font][font='times new roman'],2018(09):56-60.[/font][font='times new roman'][5] [/font][font='times new roman']缪伏荣[/font][font='times new roman'],[/font][font='times new roman']李忠荣[/font][font='times new roman'].[/font][font='times new roman']琼胶的降解及其产物的开发应用[/font][font='times new roman'][J].[/font][font='times new roman']现代农业科技[/font][font='times new roman'],2007(02):125+128.[/font][font='times new roman'][6] GB 1975-2010, [/font][font='times new roman']食品安全国家标准　食品添加剂　琼脂[/font][font='times new roman']([/font][font='times new roman']琼胶[/font][font='times new roman'])[s].[/s][/font][font='times new roman'][7] [/font][font='times new roman']朱肇阳[/font][font='times new roman'].[/font][font='times new roman']凝胶型糖果[/font][font='times new roman'] [/font][font='times new roman']第五部分[/font][font='times new roman']——[/font][font='times new roman']琼胶及琼胶软糖[/font][font='times new roman'][J].[/font][font='times new roman']食品工业[/font][font='times new roman'],1992(05):2-7.[/font]

菌落总数测定中，GB4789.1-2010版本中的平板计数琼脂培养基和过去2003版中的营养琼脂对菌落计数有什么区别？营养琼脂还能用吗？虽然我做过对比，感觉差异不大，但是还需要大家讨论的结果哦！

各位，请问谁有测定琼脂分子量的经验，或者哪里可以测定琼脂分子量的机构？

新买的营养琼脂要验收，用什么菌株进行验收？

琼脂扩散是抗原抗体在凝胶中所呈现的一种沉淀反应。抗体在含有电解质的琼脂凝胶中相遇时，便出现可见的白色沉淀线。这种沉淀线是一组抗原抗体的特异性复合物。如果凝胶中有多种不同抗原抗体存在时，便依各自扩散速度的差异，在适当部位形成独立的沉淀线，因此广泛地用于抗原成分的分析。琼脂扩散实验可根据抗原抗体反应的方式和特性分为单向免疫扩散、双向免疫扩散、免疫电泳、对流免疫电泳、单向及双向火箭电泳实验。一、单向琼脂扩散实验1. 材料（1）诊断血清（抗体：抗人IgG或IgA免疫血清）（2）待检血清（抗原）：人血清http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2013/02/B1361084631_small.jpg （3）参考血清：全国统一人血清免疫球蛋白参考血清（批号不同，免疫球蛋白含量不同）。（4）其它：生理盐水、琼脂粉、微量进样器、打孔器、玻璃板、湿盒等。2. 方法（1）将适当稀释（事先滴定）的诊断血清与予溶化的2%琼脂在60℃水浴预热数分钟后等量混合均匀制成免疫琼脂板。（2）在免疫琼脂板上按一定距离（1.2~1.5 cm）打孔，见图1。（3）向孔内滴加1：2，1：4，1：8，1：16，1：32稀释的参考血清及1：10稀释的待检血清，每孔10 μl，此时加入的抗原液面应与琼脂板一平，不得外溢。（4）已经加样的免疫琼脂板置湿盒中37℃温箱扩散24小时。（5）测定各孔形成的沉淀环直径（mm），用参考血清各稀释度测定值绘出标准曲线，再由标准曲线查出被检血清中免疫球蛋白的含量。二、双向琼脂扩散实验1. 材料（1）诊断血清：兔抗人血清（2）待测血清：人血清（3）阴性对照血清（4）其它：生理盐水、琼脂粉、载玻片、打孔器、微量进样器等。2. 方法（1）取一清洁载玻片，倾注3.5~4.0 ml 加热熔化的1%食盐琼脂制成琼脂板。（2）凝固后，用直径3 mm 打孔器，孔间距为5 mm。孔的排列方式如图2所示。http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2013/02/A1361084537_small.jpg（3）用微量进样器于中央孔加抗体，于周围孔加各种抗原。加样时勿使样品外溢或在边缘残存小气泡，以免影响扩散结果。（4）加样后的琼脂板收入湿盒内置37℃温箱中扩散24~48小时。（5）结果观察：若凝胶中抗原抗体是特异性的，则形成抗原—抗体复合物，在两孔之间出现一清晰致密白色的沉淀线，为阳性反应。若在72小时仍未出现沉淀线则为阴性反应。实验时至少要做一阳性对照。出现阳性对照与被检样品的沉淀线发生融合，才能确定待检样品为真正阳性。（6）结果分析：琼脂扩散结果受许多因素影响。①抗原特异性与沉淀线形状的关系：在相邻两完全相同的抗原与抗体反应时，则可出现两单沉淀线的融合。反之，如相邻抗原完全不同时，则出现沉淀线之交叉；两种抗原部分相同时，则出现沉淀线的部分融合。见图3。http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2013/02/A1361084538_small.jpg②抗原浓度与沉淀先导形状的关系：两相邻抗原浓度相同，形成对称相融合的沉淀线；如果两抗原浓度不同，则沉淀线不对称，移向低浓度的一边。见图4。http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2013/02/A1361084539_small.jpg③温度对沉淀线的影响：在一定范围内，温度扩散快。通常反应在0~37℃下进行。在双向扩散时，为了减少沉淀线变形并保持其清晰度，可在37℃下形成沉淀线，然后置于室温或冰箱（4℃）中为佳。④琼脂浓度对沉淀线形成速度的影响：一般来说，琼脂浓度越大，沉淀线出现越慢。⑤参加扩散的抗原与抗体间的距离对沉淀线形成的影响：抗原、抗体相距越远，沉淀线形成的越慢，所以在微量玻片法时，孔间距离以0.25~0.5 cm 为好，距离远影响反应速度。当然孔距过远，沉淀线的密度过大，容易发生融合，有碍对沉淀线数目的确定。⑥时间对沉淀线的影响：沉淀线形成一般在1~3天出现，14~21天出现的数目最多。玻片法可在1~2小时出现，一般观察72小时，放量过久可出现沉淀线重合消失。

最近做菌落总数，营养琼脂总会在培养两日后部分干瘪凹陷下午，配制过程都是和往常一样，煮沸分装使用，可是不管倒多少毫升最后都会有部分干瘪凹陷，实在找不出原因

三糖铁琼脂培养基( l ）成分 蛋白胨 20g 硫酸亚铁 0.2g 牛肉浸出粉 5g 硫代硫酸钠 0.2g 乳糖 10g 002％酚磺酞指示液 12.5ml 蔗糖 10g 琼脂 12～15g 葡萄糖 1g 水 1000ml 氯化钠 5g ( 2 )制法 除乳糖、蔗糖、葡萄糖、指示液、琼脂外，取上述成分，混合，加热使溶解，调pH 值使灭菌后为7.3 士0.1 ，加入琼脂，加热溶胀后，再加入其余成分，摇匀，分装，121 ℃ 灭菌15 分钟，制成高底层（2 ～3cm ) 短斜面。( 3 )用途 用于初步鉴别肠杆菌科细菌对糖类的发酵反应和产生硫化氢试验。 方法和结果观察：取可疑菌落或斜面培养物，做高层穿刺和斜面划线接种，置35 ℃ 培养24～ 48 小时，观察结果。培养基底层变黄色为葡萄糖发酵阳性，斜面层变黄色为乳糖、蔗糖发酵阳性；底层或整个培养基呈黑色表示产生硫化氢。

请问平板计数琼脂高压后为什么变色了，还能用吗，急救，谢谢大家了

做微生物时，是把样品加到凝固的琼脂上？？？还是先加样品到培养皿，后加琼脂！？？谢谢解决。我是菜鸟，刚学

请教一下各位，用于水质细菌参数粪大肠菌群、总大肠菌群检测的营业琼脂要怎么做验收呢？先谢谢各位

琼脂扩散是抗原抗体在凝胶中所呈现的一种沉淀反应。抗体在含有电解质的琼脂凝胶中相遇时，便出现可见的白色沉淀线。这种沉淀线是一组抗原抗体的特异性复合物。如果凝胶中有多种不同抗原抗体存在时，便依各自扩散速度的差异，在适当部位形成独立的沉淀线，因此广泛地用于抗原成分的分析。琼脂扩散实验可根据抗原抗体反应的方式和特性分为单向免疫扩散、双向免疫扩散、免疫电泳、对流免疫电泳、单向及双向火箭电泳实验。一、单向琼脂扩散实验1. 材料（1）诊断血清（抗体：抗人IgG或IgA免疫血清）（2）待检血清（抗原）：人血清http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2013/02/B1361084631_small.jpg （3）参考血清：全国统一人血清免疫球蛋白参考血清（批号不同，免疫球蛋白含量不同）。（4）其它：生理盐水、琼脂粉、微量进样器、打孔器、玻璃板、湿盒等。2. 方法（1）将适当稀释（事先滴定）的诊断血清与予溶化的2%琼脂在60℃水浴预热数分钟后等量混合均匀制成免疫琼脂板。（2）在免疫琼脂板上按一定距离（1.2~1.5 cm）打孔，见图1。（3）向孔内滴加1：2，1：4，1：8，1：16，1：32稀释的参考血清及1：10稀释的待检血清，每孔10 μl，此时加入的抗原液面应与琼脂板一平，不得外溢。（4）已经加样的免疫琼脂板置湿盒中37℃温箱扩散24小时。（5）测定各孔形成的沉淀环直径（mm），用参考血清各稀释度测定值绘出标准曲线，再由标准曲线查出被检血清中免疫球蛋白的含量。二、双向琼脂扩散实验1. 材料（1）诊断血清：兔抗人血清（2）待测血清：人血清（3）阴性对照血清（4）其它：生理盐水、琼脂粉、载玻片、打孔器、微量进样器等。2. 方法（1）取一清洁载玻片，倾注3.5~4.0 ml 加热熔化的1%食盐琼脂制成琼脂板。（2）凝固后，用直径3 mm 打孔器，孔间距为5 mm。孔的排列方式如图2所示。http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2013/02/A1361084537_small.jpg（3）用微量进样器于中央孔加抗体，于周围孔加各种抗原。加样时勿使样品外溢或在边缘残存小气泡，以免影响扩散结果。（4）加样后的琼脂板收入湿盒内置37℃温箱中扩散24~48小时。（5）结果观察：若凝胶中抗原抗体是特异性的，则形成抗原—抗体复合物，在两孔之间出现一清晰致密白色的沉淀线，为阳性反应。若在72小时仍未出现沉淀线则为阴性反应。实验时至少要做一阳性对照。出现阳性对照与被检样品的沉淀线发生融合，才能确定待检样品为真正阳性。（6）结果分析：琼脂扩散结果受许多因素影响。①抗原特异性与沉淀线形状的关系：在相邻两完全相同的抗原与抗体反应时，则可出现两单沉淀线的融合。反之，如相邻抗原完全不同时，则出现沉淀线之交叉；两种抗原部分相同时，则出现沉淀线的部分融合。见图3。http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2013/02/A1361084538_small.jpg②抗原浓度与沉淀先导形状的关系：两相邻抗原浓度相同，形成对称相融合的沉淀线；如果两抗原浓度不同，则沉淀线不对称，移向低浓度的一边。见图4。http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2013/02/A1361084539_small.jpg③温度对沉淀线的影响：在一定范围内，温度扩散快。通常反应在0~37℃下进行。在双向扩散时，为了减少沉淀线变形并保持其清晰度，可在37℃下形成沉淀线，然后置于室温或冰箱（4℃）中为佳。④琼脂浓度对沉淀线形成速度的影响：一般来说，琼脂浓度越大，沉淀线出现越慢。⑤参加扩散的抗原与抗体间的距离对沉淀线形成的影响：抗原、抗体相距越远，沉淀线形成的越慢，所以在微量玻片法时，孔间距离以0.25~0.5 cm 为好，距离远影响反应速度。当然孔距过远，沉淀线的密度过大，容易发生融合，有碍对沉淀线数目的确定。⑥时间对沉淀线的影响：沉淀线形成一般在1~3天出现，14~21天出现的数目最多。玻片法可在1~2小时出现，一般观察72小时，放量过久可出现沉淀线重合消失。

孔板琼脂成球分析（反映单个细胞的生长） （一）实验材料：LLC-ASD细胞 琼脂粉 超纯水 含5%FBS的DMEM培养基(含抗生素) 超净台 漩涡振荡仪 倒置显微镜 （二）基本步骤： (1)制单细胞悬液： 收集对数生长期的LLC-ASD细胞，计数后用含5%FBS的DMEM培养基极限梯度稀释得5ml 1×103个/ml，剩余的细胞重新收集，以便以后做RT-PCR验证实验。 (2)制底层琼脂： 用蒸馏水制备1%的琼脂液，待琼脂液温度刚刚不烫手时，在15ml离心管中加入5ml 1%的琼脂和5ml 5%FBS的DMEM培养基(含抗生素)，迅速用漩涡振荡仪混合均匀，即刻向6孔板中每孔加入1ml混合液，摇匀铺平，待冷却凝固后，作为底层琼脂，置于超净台中备用。 (3) )制底层琼脂： 用蒸馏水制备1%的琼脂液，待琼脂液温度刚刚不烫手时，在15ml离心管中加入4.5ml 1%的琼脂和4.5ml 5%FBS的DMEM培养基(含抗生素)，迅速用漩涡振荡仪混合均匀，再加入1ml 1×103个/ml的LLC-ASD细胞单细胞重悬液，用漩涡振荡仪混合均匀，得含细胞数100个/ml的0.1% 的琼脂培养基混合液。迅速向6孔板中各孔加入1ml混合液，摇匀铺平，待冷却凝固后，即为上层琼脂， (4)加培养基，观察计数： 向6孔板每孔缓慢沿壁加入1ml5%FBS的DMEM培养基(含抗生素)后放入培养箱持续培养8~10天，第4天开始每天在倒置显微镜下检查，到80%以上的细胞形成100个细胞以上的克隆球时终止培养，此时计数形成50个细胞以上的克隆球的数目，作为此孔的克隆球数。 (5)每孔克隆球数除以100，作为此孔克隆率，统计分析。 注意： 1 此实验最重要的是把握好时机，即不可动作过快，使得过热的琼脂液破坏培养基和细胞，又不可动作过慢，使得琼脂过早凝固。 2 用漩涡振荡仪时一定要充分混匀混合液，否则最终单细胞无法固定于琼脂中。具体时间视混合液体积和琼脂比例而定。

琼脂扩散试验为什么会出现孔底渗漏现像，加完样品后应该放在多少度自由扩散和平皿需要倒置湿盒中孵育吗

营养琼脂不凝固、、、这是为什么呢？

营养琼脂凝固了怎么化开？是不是还要在高压锅中蒸？

我现在碰到了一个难题，CNAS上要求：所有实验室用的培养基及试剂使用之前都要进行验证，但是如何验证呢？平板计数琼脂如何验证呢？北京陆桥的琼脂不稳定，有哪位高手可以告诉我，平板计数琼脂如何验证？那实验室用的其他培养基及试剂如何验证？先谢谢了

一、凝胶制备1. 微波炉溶解琼脂糖时，胶液沸腾冲溢出三角锥瓶微波炉加热时胶液可能发生剧烈沸腾，（1）总液体量不宜超过三角锥瓶的50%容量。（2）2%以上胶液设置中火加热。 （3）胶液剧烈沸腾时，停止加热，移开三角锥瓶，请戴上防热手套，小心摇动三角锥瓶，然后再次加热，胶液沸腾直至胶液清澈，保证琼脂糖完全溶解。 2. 琼脂糖电泳图像背景模糊不清：琼脂糖没有完全溶解会造成电泳图像背景模糊不清。完全溶解的琼脂糖胶液清澈，三角锥瓶内壁应没有粘附琼脂糖颗粒。 3.加热后水分蒸发，如需要应加入热的蒸馏水，补足到原来的重量，摇匀。 二、电泳1. DNA条带模糊，拖尾。 （1）DNA降解。避免核酸酶污染。 （2）DNA上样量过多。减少凝胶中DNA上样量。 （3）电泳缓冲液陈旧:电泳缓冲液多次使用后，离子强度降低，pH值上升，缓冲能力减弱，从而影响电泳效果。建议经常更换电泳缓冲液。 （4）电泳条件不合适。电泳时电压不应超过20 V/cm，温度＜30℃,巨大DNA链，温度应＜15℃，核查所用电泳缓冲液是否有足够的缓冲能力。 （5）DNA样含盐过高。泳前通过乙醇沉淀去除过多的盐。 （6）有蛋白污染。电泳前抽提去除蛋白。 （7）DNA变性。电泳前勿加热，用20 mM NaCl缓冲液稀释DNA。[/c

在做大肠杆菌时 ，为什么要将菌移种到营养琼脂斜面上，有什么作用？

各位大家好！可以告知琼脂糖介质的使用方法吗？谢谢！我这里有DEAE CM Q SP的，以及凝胶过滤的！

[em09511]请问各位，琼脂糖凝胶在什么地方运用比较多啊？我们公司自主研发了琼脂糖系列凝胶。有谁需要试用的吗？我可以提供样品。

沙氏琼脂培养基（SDA）用途：用于医药工业洁净室（区）沉降菌的测试（GB/T 16294—2010）用法：取上述成分除琼脂，混合，微热溶解，调节ph值使灭菌后为5.6 ±0.2，假如琼脂，加热融化后，分装，灭菌，冷却至约60℃，在无菌操作要求下倾注约20ml至无菌平皿（￠90mm3 ）中。加盖后在室温放至凝固。平皿培养及保存：制备好的培养基平皿宜在2℃-8℃保存，一般以一周为宜或按厂商提供的标准执行。采用适宜方法在平皿上做好培养基的名称、制备日期记录的标记。

电泳基本原理 迁移率（或泳动度）是指带电颗粒在单位电场强度下泳动的速度，可用下列公式计算： Ｕ =υ/E =(d/t)/(V/l) =dl/Vt Ｕ为迁移率（cm2•V-1•min-1）；υ为颗粒泳动速度（cm•s-1）；E 为电场强度（ V•cm-1）；d为颗粒泳动的距离（cm）；l为滤纸有效长度（cm）；V为实际电压（V）；t为通电时间（s或min）。通过测量d, l, V, t, 即可计算出被分离物质的迁移率。 1迁移率单位= 10-5 cm2•V-1•min-1在确定的条件下，某物质的迁移率为常数，是该物质的化学特征常数。 颗粒带净电荷多，直径小而接近于球形，则在电场中泳动速度快，反之则泳动速度慢。 迁移率还与分子的形状，介质粘度，颗粒所带电荷有关，迁移率与颗表面电荷成正比，与介质粘度及颗粒半径成反比。 影响琼脂糖电泳迁移的主要因素 电场强度 溶液的pH值 溶液的离子强度 电渗现象 温度的影响 支持物的影响 按分离原理分类： 1.区带电泳 2.移界电泳 3.等速电泳 4.聚焦电泳 按有无固体支持物分类 1. 纸上电泳 2. 醋酸纤维素膜电泳 3. 薄层电泳 4. 非凝胶性支持物区带电泳（支持物有：淀粉、纤维素粉、玻璃粉、硅胶） 5. 凝胶支持区带电泳（淀粉凝胶、聚丙稀酰胺凝胶、琼脂糖凝胶） 影响琼脂糖电泳迁移的主要因素 DNA的大小 DNA的构象 琼脂糖浓度 缓冲液 不同构像质粒 缓冲液 TAE：乙酸盐缓冲液 TBE：硼酸盐缓冲液 TPE：磷酸盐缓冲液 实验操作 1. 用胶带将洗净、干燥的水平板的边缘封住，形成一个胶模并水平放置。 2. 按水平板的长×宽×0.5cm胶厚，量取0.5×TBE，并按0.7％的浓度称取agarose琼脂糖，在微波炉或电炉上加热至全熔（清澈透明）。 3. 等凝胶温度降至大约50－60以下时，加入1 mg/L溴化乙锭（EB）至终浓度为0.5ug/mL ；摇匀并轻快地倒入水平板中，除掉气泡，插入梳子。 4. 凝固后，将梳子轻轻拔出。 5.去掉胶带，将水平板放入加有0.5×TBE电泳缓冲液的电泳槽中，并且使电泳缓冲液高出凝胶约1mm。 6.在parafilm膜上依次加： ddH2O 6ul,上样Buffer 2ul ,DNA 4ul 分别混匀后点样，记录点样次序。 7. 在水平板两边的点样孔中分别加入6 μ l的λΔΝΑ/EcoRI+HindIII marker。 8. 盖好电泳槽盖子，选择适当的电泳电压（≤5V/cm）及电泳方向(DNA阴极阳极），开始电泳。 9. 当色素接近胶的先端，停止电泳，样品在紫外灯下观察、成像℃

请问下琼脂盐桥能否用在DMSO二甲亚砜溶剂中，另一边接KCL水溶液，琼脂盐桥中是不是还是加KCL 的水溶液呢？还有就是非水溶液条件下是不是要接Ag/AgCl参比必须接双盐桥吧，比如说工作电解池装氯化锌的DMSO溶液，中间是不是应该装KCl的DMSO溶液，最后接KCl水溶液？工作池与中间池之间连接盐桥应该充KCl的DMSO溶液吗，能否用鲁金毛细管与工作电极连接呢？非常感谢！