微球菌属

变异链球菌的菌落特征与使用范围及培养方法！ 变异链球菌属于甲型溶血性链球菌类，菌体较小，呈圆形或卵圆形，常成双或以短链状排列，革兰染色呈阳性。它在胰蛋白胨培养基中和含有95％氮气及5％二氧化碳混合气体的环境下生长良好。 一、菌种简介平台编号：Bio-53150规格：冻干物拉丁属名：Streptococcus Mutans菌株名称：变异链球菌其他编号：ATCC700610培养基编号：116或114,5% CO2 or 厌氧培养温度：37培养时间：48 小时用途：对红霉素、利福平、利福霉素AMP、壮观霉素、链霉素敏感。血清型C。注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准）保藏条件：斜面菌种和安瓿瓶冻干菌种应在 2-8°C 保存。西林瓶菌种请置于-20°C 保存。甘油请置于-80°C。 二、培养基TSA+5%脱纤维蛋白羊血（血琼脂平板） 三、菌落特征变异链球菌在血平板培养基上呈旺溶血，菌落较小，呈灰白色、圆形，表面突起，菌落质地较硬，有嵌入培养基内生长的趋势。 四、菌种的培养1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种（一级种）、原种（二级种）和栽培种（三级种）三级。工业发酵的有用菌种，其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。2、挑选具有某种能力的有用菌种，也称种子制备，是指菌种在一定条件下，经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯生产菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备 菌种制备。4、保存在沙土管或冷冻管中的生产菌种，用无菌手续挑取少许，接入琼脂斜面培养基上，在25℃（或较高温度）下培养5～7天（或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子（对于霉菌类孢子制备，多数采用大米、小米之类的天然培养基）。5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液，接种到扁瓶固体培养基上，于25～28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在生产上延续使用半年左右。6、如果有些生产菌种不产孢子，如赤霉素产生菌或产孢子不多的，则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体，作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米浆），及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮，无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%～20%。 五、使用范围（1）合成培养基。合成培养基的各种成分完全是已知的各种化学物质。这种培养基的化学成分清楚，组成成分精确，重复性强，而且微生物在这类培养基中生长较慢。如高氏一号合成培养基、察氏（Czapek）培养基等。 （2）天然培养基。由天然物质制成，如蒸熟的马铃薯和普通牛肉汤，前者用于培养霉菌，后者用于培养细菌。这类培养基的化学成分很不恒定，也难以确定，但配制方便，营养丰富，培养效果好，所以常被采用。 （3）半合成培养基。在天然有机物的基础上适当加入已知成分的无机盐类，或在合成培养基的基础上添加某些天然成分，如培养霉菌用的马铃薯葡萄糖琼脂培养基。这类培养基能更有效地满足微生物对营养物质的需要。 六、注意事项1）冻干首次活化，干粉要全部用完，不能预留，用无菌吸管吸取 0.3ml 的培养液（即以上建议的培养基配方，不加琼脂）或者无菌水，滴入冻干管中，轻轻振荡至其溶解。吸取全部菌悬液，接种在培养基上（建议不超过 2 支平板）；2）经过冷冻干燥保藏，菌种处于休眠状态，复苏培养时可能会延迟生长，这时需较长的培养时间； 若您收到的是已复苏的培养物（非冻干菌），则可以直接用于您的实验，或根需要转接培养；如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；二次接种量要多，固体斜面培养基水分要少才能让菌体长得比较明显，液体培养要静止培养；3）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；4）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；5）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为2-25 年；6）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系；7）如若有菌种复苏不活或者污染等情况，请在收到菌钟后 2 个月内联系，逾期不予受理；8）打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛；9）安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍，并保持在火焰旁操作；10）甘油管使用：使用本甘油菌时可以不用完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用，但随着冻融次数的增加，细菌的活力会逐渐下降。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

美国近日发出G/SPS/N/USA/1643/Add.1通报，美食品药物管理局[FDA]公布了一项色素修改的最终法规。允许安全使用副球菌(Paracoccus)色素作为一种三文鱼饲料的色彩添加剂。球菌色素是由一种副球菌(bacterium Paracoccus carotinifaciens)非病原性及非毒性杆菌热杀干细胞组成的，可以含增量的碳酸以调节虾青素的含量。法规规定当虾青素单独或与其它虾青素染色剂联合使用时，成品饲料内副球菌染料中的虾青素的含量不得超过成品饲料的80mg/kg(72克/吨)。 　　上述法规已获批准。

伟业计量线上研讨会，老时间，老地方，每周五上午九点半伟业计量官网来相见！2021年8月20日（周五）上午9：30分，由北京北方伟业计量技术研究院主办的“食品中金黄色葡萄球菌和沙门氏菌的测定方法分享研讨会”即将开启，欢迎大家锁定伟业计量直播间！直播当天，研讨会讲师、助教将进行在线答疑，您有任何关于课程、研讨会以及伟业计量的问题，都可以在留言区进行提问。另外，我们还为当天参会的观众准备了惊喜活动，让您在兼具趣味性与创意性的视频教学中吸收知识。“食品中金黄色葡萄球菌和沙门氏菌的测定方法分享研讨会”课程表讲师简介：罗双群，副教授，中共党员，硕士研究生，食品检验技师，漯河市青年拔尖人才。主要从事食品检测专业教学工作和管理工作。先后任教《食品理化分析》、《食品微生物检验》和《食品感官评定》。发表论文10余篇，获得食品检测类专利4项、漯河市自然科学学术奖一等奖2项、二等奖4项，主持河南省高等学校重点科研项目1项，主持漯河市科研项目1项，参与并完成省级重点科研项目4项，参与河南省教育教改项目1项。本期线上研讨会课程安排详见下图：食品中金黄色葡萄球菌和沙门氏菌的测定方法分享研讨会时间课题专家课程简介第1节（09:30-10:20）《食品中金黄色葡萄球菌的测定》罗双群《金黄色葡萄球菌的测定》首先介绍了金黄色葡萄球菌的概述和仪器准备，重点介绍金黄色葡萄球菌的操作步骤及要点。10:20-10:30互动答疑、礼品抽取第2节（10:30-11:20）《食品中沙门氏菌的测定》罗双群《沙门氏菌的测定》分别介绍了沙门氏菌的定义、仪器试剂的准备、沙门氏菌的检验程序以及操作步骤及要点。重点从典型沙门氏菌的预增菌、增菌、平板分离、生化试验、革兰氏染色、血清学鉴定等6个方面介绍了沙门氏菌的操作步骤及要点。11:20-11:30互动答疑、礼品抽取 （关注伟业计量公众号（微信号bzwzcom），免费观看线上研讨会）温馨提示：伟业计量线上研讨会将于每周五上午09:30（节假日除外）定期举办。如果您是食品/环境/微生物等检测相关专业老师，有相关检测类课程想与我们交流分享，欢迎您加入伟业计量讲师团队，共享学术赋能，课酬丰厚，期待您的加入！联系助教：手机微信同号：15637658007

2月3日，中国科学院上海巴斯德研究所刘星课题组在Nature上，发表题为Streptococcal pyrogenic exotoxin B cleaves GSDMA and triggers pyroptosis的研究论文。该研究首次发现并报道化脓链球菌GAS毒力因子SpeB通过切割激活GSDMA触发皮肤上皮细胞焦亡并抑制其系统性感染。　　A族链球菌（Group A streptococcus，GAS），又称化脓链球菌（Streptococcus pyogenes），是自然界广泛存在的一种强毒力致病菌，可通过宿主皮肤及呼吸道黏膜感染并引发多种疾病，包括猩红热、丹毒、致命坏死性筋膜炎、中毒性休克及脓毒症等。全球每年约有7亿人受其感染（50多万死于中重度感染）。GAS的皮肤定植及侵袭能力与其分泌的毒力因子密切相关，其中关键毒力因子之一是链球菌热原外毒素B（streptococcal pyrogenic exotoxin B，SpeB）。GAS感染后临床严重程度与其SpeB表达量呈显著负相关，而具体分子机理尚不清晰。　　为探究SpeB在GAS侵袭性感染中功能，研究利用GAS小鼠皮肤感染模型，比较野生型及不同毒力因子缺失GAS菌株致病能力。结果显示，相比于野生型及其他毒力因子缺失菌株感染后出现的严重化脓和坏死性病变，SpeB缺失GAS菌株感染后感染部位未观察明显皮肤溃烂且中性粒细胞明显减少；同时，小鼠表现出更严重的系统性感染和死亡。通过原代皮肤角质细胞GAS感染实验发现，相比于其他菌株，GAS SpeB的缺失使其丧失诱导细胞焦亡样细胞死亡的功能，并促进其系统性感染。在此基础上，研究运用CRISPR/Cas9全基因组敲除筛选平台，筛选鉴定出SpeB诱发皮肤上皮细胞焦亡的关键蛋白：GSDMA——炎性细胞死亡（焦亡）关键执行者Gasdermins家族成员之一。进一步，研究从分子层面详细解析了SpeB激活GSDMA机制：SpeB特异性剪切GSDMA（而非Gasdermins家族其他成员），产生约27kDa的N-末端片段并诱导细胞焦亡；Edman测序和质谱分析发现SpeB切割GSDMA第246位氨基酸；胞内导入体外纯化的GSDMA 1-246aa片段可直接诱导细胞焦亡；脂膜试纸条和脂质体结合实验揭示GSDMA 1-246aa能够与细胞膜磷脂以及含有相应磷脂的脂质体结合；脂质体泄漏实验证明GSDMA 1-246aa能够在特定脂质体上成孔；序列比对结果显示该剪切位点在小鼠Gsdma1中保守；SpeB诱导的Gsdma1切割可诱发小鼠上皮细胞焦亡；小鼠GAS感染部位可检测到Gsdma1剪切；相比于野生型小鼠，Gsdma1的敲除使其对GAS感染更加敏感。　　该研究首次发现并报道皮肤上皮细胞（KCs，“宝船”）表达的GSDMA分子（“火炮”）既作为外源病原感受器识别化脓链球菌（GAS，“海盗船”）毒力因子SpeB（“钩锁”），同时作为免疫效应器在细胞膜上打孔（“炮筒”），释放炎性因子（“炮火”）引起细胞焦亡及皮肤化脓坏死性病变，以控制病原菌进一步系统性感染。该研究揭示了机体免疫防御应答中的新型机制——单一蛋白（GSDMA）同时作为病原菌感受器和宿主效应因子，并为由如化脓链球菌等致病菌感染引起的相关疾病的临床治疗提供了新靶点和新思路。　　论文链接

p 　　Luminex今天表示，美国食品和药物管理局已经为其ARIES sup & reg /sup A族链球菌检测试剂授予了510(k)许可证，这是中等复杂度的样品测试，用于从喉咙直接检测化脓链球菌擦拭标本。 /p p 　　该公司指出，这是FDA在过去24个月内已经在其ARIES系统上许可的第六种检测方法。 /p p 　　Luminex总裁兼首席执行官Homi Shamir在一份声明中表示，该公司的广泛呼吸系统提供了既有目标的检测方法，例如ARIES& reg A族链球菌检测试和可定制的疾病状态面板。通过我们广泛的呼吸测试方案，临床医生可以进入测试快速适应患者不同临床需要的灵活性。“ /p p 　　ARIES& reg A族链球菌实时PCR测试是Luminex呼吸测试菜单的一部分，还包括ARIES Bordetella测定，白血病流感A / B和RSV测定，NxTAG呼吸道病原体面板和Verigene呼吸道病原体Flex测试。 /p p 　　对A组链球菌感染的快速准确诊断对于确保及时开始适当的抗生素治疗至关重要，Luminex说，此外，侵袭性感染病例每年在美国造成多达1600例死亡。 /p p & nbsp /p

山东检验检疫局食品农产品中心青年专家高宏伟博士设计发明的“金黄色葡萄球菌快速检测试剂盒的制备和使用方法”近日以不菲的市场价格成功转让给青岛市高新区某企业。这标志着该项研究成果在获得领域内同行高度认可的同时，也在竞争激烈的生物技术市场赢得了一席之地。 　　2011年年末，一场“细菌门”的风波席卷冬日里的速冻食品行业，继思念、三全速冻食品后，湾仔码头也在南京市工商局公布的一份检测报告中被检出了金黄色葡萄球菌。当人们再一次为食品安全的问题焦虑纷扰的同时，一个直径只有0.5-1微米、平日里只闻其名、未见其“形”的小家伙——金黄色葡萄球菌迅速走进了普通百姓的视野。 　　小家伙制造大问题 　　据报道，全世界每年发生的食源性疾病近数十亿例，其中约有170万名15岁以下儿童因为食源性微生物污染引起腹泻而死亡。金黄色葡萄球菌是引起细菌性食物中毒的重要病原菌之一，在美国，每年超过18.5万人发生金黄色葡萄球菌食物中毒，占细菌性食物中毒的33%，每年损失约15亿美元 在日本，平均32.5%的食品存在金黄色葡萄球菌的污染 在加拿大，金黄色葡萄球菌中毒的发生率更高，占细菌性食物中毒的45%。近年来，在我国由金黄色葡萄球菌引起的食物中毒约占细菌性食物中毒事件的25%。金黄色葡萄球菌属于葡萄球菌属，在污染食品后，可以产生大量肠毒素，刺激食用者交感神经、双侧迷走神经的内脏的分支和脊髓，引起剧烈呕吐腹泻。由金黄色葡萄球菌引起的食物中毒已成为世界性的公共卫生问题。 　　新问题引出新课题 　　山东是我国食品农产品进出口第一大省，进出口总量占全国口岸四分之一至三分之一，已连续11年进出口食品农产品总量位居全国第一。每年，来自于世界各地的海量食品农产品在源源不断为当地经济注入活力的同时，也带来了巨大的食品安全风险。食品微生物污染一直是进出口食品安全的主要隐患，而其中金黄色葡萄球菌是最为重要的检测项目之一。仅2011年山东局技术中心微生物实验室完成了金黄色葡萄球菌3000余批次样品、上万项目次的检测工作、2012年截止到6月已完成金黄色葡萄球菌检测近8000项目次，同比增长30%。如此巨大的工作量以及还在继续快速增长的检测压力，向传统的检测技术提出了挑战，如何打破现状、创新技术体系成为一个检测人员绕不开的问题。 　　为了提升检测效率、缩短检测周期，针对国内外食品中金黄色葡萄球菌污染日趋严重的形势，该局食品农产品中心高宏伟博士等研究人员向国家质检总局申报了关于食源性致病菌新型高通量检测技术的研究课题。提出以更为快捷、简便、可视化的新型环介导等温扩增技术(LAMP)取代现有检测技术，全面提高金黄色葡萄球菌的检测灵敏度和精确度。 　　新发明攻克五个难关 　　金黄色葡萄球菌快速检测试剂盒的研制成功，在获得国家发明专利授权的同时，一举攻破了五个技术难关。 　　准确关。该发明针对金黄色葡萄球菌mecA基因的基本保守区的6个序列设计了两个特异性内引物和两个特异性外引物，是一种多位点多靶标的检测技术，与PCR技术的单区域双引物相比，在体系扩增过程中，具有更高的准确性和可靠性。该mecA基因的保守序列为金黄色葡萄球菌各不同血清型和菌株型所共有，保证了该种技术从种的水平上检测不同来源的金黄色葡萄球菌株的可靠性。 　　周期关。多引物的特性使其在具有高度链置换活性的DNA聚合酶作用下，具备更高的扩增效率。应用该种技术实施金黄色葡萄球菌检测，恒温下放置几十分钟即可完成检测，整个流程累计耗时1个小时左右，与传统检测方法动辄3、4天相比，缩短检测周期95%以上。 　　成本关。作为一种恒温扩增技术，该发明无须昂贵的PCR仪及配套电泳成像设备，只需水浴锅或其他简单温度加热装置即可，在仪器配置费用上可节省大笔购置费用。 　　环保关。由于可视化的特点，该种技术的检测结果无须使用特定光学呈相设备分析，只用肉眼直接目测观察即可对最终结果进行判定。在精简了分析流程的同时，也避免了具有强烈致癌的毒性凝胶染料的使用，省去了后续无害化处理步骤，解决了有毒有害的分子生物学试剂对环境安全的威胁问题。 　　场所关。目前，主流细菌鉴定方法包含了分离培养、免疫检测、PCR方法等，虽然原理各异，但对于环境及硬件设施条件都有特定要求，需要培养箱、微生物鉴定仪及PCR仪等必备仪器。而金黄色葡萄球菌LAMP快速检测试剂盒的问世解决了这一难题，一套试剂盒和一个简易温度控制设备即可组成一套便携式的现场检测装置，它可以走出实验室，摆脱时空限制，将检测关口前移，在任何需要的地方随时出现对可疑样品实施现场检测。 　　新专利产生四种效益 　　市场效益。与其他检测方法相比，具备完全自主知识产权的金黄色葡萄球菌试剂盒兼具了快速、精准化、便捷化、可视化及低成本化等五大优势，是山东检验检疫系统首个实现商业化成功转让的国家发明专利。该专利具有广阔的应用前景和领域，适合于有实际检测需求的各类企事业单位、机构和部门，能够在医疗、食品、卫生及环保等多个行业领域进行推广应用，一旦转化为商业化试剂盒将显现显著的市场效益。 　　生态效益。由于采用可视化的肉眼观察对结果进行直接判定，使得大量的后续的无害化处理措施得以省略，在节省成本的同时排除了传统的PCR检测凝胶电泳所使用的大量有毒有害试剂的使用，将其可能造成的生态环境安全风险降到最低。 　　生产效益。据统计，2011年食品安全在我国国民最关注热点问题排行榜高居第二位，类似于发生在湾仔码头等著名食品品牌的金黄色葡萄球菌污染事件，在给企业带来了公众信任危机的同时，给企业生产经营效益造成了重创。充分利用金黄色葡萄球菌LAMP快速检测试剂盒灵活机动不受时空限制的特点，打造食品产品的现场初筛和实验室系统性检测的多级检测网络，对于企业加强自检，实施源头管理，把好质量关、避免质量问题可能造成的巨大损失将起到关键性的作用。 　　社会效益。由金黄色葡萄球菌引起的食物中毒也已成为世界性的公共卫生问题，该专利的问世及下一步的市场化、产业化对于解决食品中金黄色葡萄球菌关键控制和检测技术的难题，保证国内及进出口食品安全，保障人民生命健康安全将产生积极的基础性推动作用。

食源性致病菌污染是乳制品安全问题的重要隐患之一。乳品中常见的食源性致病菌有金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、阪崎肠杆菌等。目前乳品致病菌检测以培养法为主，但此类方法操作较为繁琐并耗时长，不能满足检测时效的需求。在本期的推送中，探索了荧光定量PCR技术在乳品中金黄色葡萄球菌和沙门氏菌快速检测方面的应用，并进行了大量验证试验、实际检测，形成乳品中致病菌快速检测创新体系，该创新体系可以实现金黄色葡萄菌和沙门氏菌24h内完成增菌和检测。缩短了整体检测时间，并降低了检测成本，为进一步改良乳品中致病菌快速检测提供了可参考的数据。珀金埃尔默旗下的良润生物研发出创新检测体系，优化了样品前处理过程，并引入了荧光定量PCR分子检测技术，可以实现金黄色葡萄菌和沙门氏菌在24h内完成增菌和检测。扫描下方二维码，即可下载珀金埃尔旗下良润生物《乳品中致病菌快速检测解决方案》及《微生物快速检测产品信息》另外为更好的了解乳制品企业致病菌的检测需求，精准的提供致病菌检测解决方案，珀金埃尔默旗下良润生物展开线上有奖问卷调查。点击下方链接，即可访问调研页面。https://mp.weixin.qq.com/s/Pu5LRwaQSfCxsOp7ZNbbbg

各相关单位：按照宁夏化学分析测试协会团体标准工作程序，标准起草组已完成《一次性使用卫生用品中金黄色葡萄球菌检验 实时荧光 PCR 法》和《一次性使用卫生用品中环氧乙烷残留量的测定 气相色谱-质谱法》 2项团体标准征求意见稿的编制工作。现按照我协会《团体标准制修订程序》要求，公开征求意见。请有关单位及专家提出宝贵意见，并将征求意见表（附件）于2024年2月30日前反馈给秘书处。联系人：张小飞 电 话：13995098931邮箱：1904691657@qq.com 宁夏化学分析测试协会2024年1月30日 关于团标征求意见函 -1.30.pdf团标表格7-专家意见表.doc团体标准 一次使用卫生用品中金黄色葡萄球菌检验 实时荧光PCR法 征求意见稿.pdf团体标准-一次性使用卫生用品中环氧乙烷残留量 征求意见稿.pdf

各有关单位： 　　根据《中国食品科学技术学会团体标准工作管理办法》等规定，我学会组织起草了《葡萄球菌肠毒素测定 ELISA试剂盒法（征求意见稿）》团体标准。现公开征求意见，请于2023年8月11日前将相关意见反馈学会秘书处。 　　邮箱：zhanxiaoqingok@163.com 　　　附件： 　　 1.标准文本及编制说明.zip 　　 2.意见反馈表.docx　　中国食品科学技术学会 　　2023年7月10日

各有关单位：根据国家《团体标准管理规定》和《宁夏化学分析测试协会团体标准管理办法》，我协会对《一次性使用卫生用品中金黄色葡萄球菌检验 实时荧光PCR法》等4项团体标准进行了评审,已经通过了专家审查，现予以发布，自2024年5月30日起正式实施，特此公告。 序号标准号标准名称发布日期实施日期1T/NAIA0288-2024一次性使用卫生用品中金黄色葡萄球菌检验 实时荧光PCR法2024-05-172024-05-302T/NAIA0289-2024一次性使用卫生用品中绿脓杆菌检验 实时荧光PCR法2024-05-172024-05-303T/NAIA0290-2024一次性使用卫生用品中溶血性链球菌检验 实时荧光PCR法2024-05-172024-05-304T/NAIA0291-2024一次性使用卫生用品中环氧乙烷残留量的测定 气相色谱-质谱法2024-05-172024-05-30 2024协会团体标准公告-5.17.pdf

CIQA/TC10各成员及专家、各有关单位：根据《中国出入境检验检疫协会团体标准管理办法》及实施细则的规定，《乳与乳制品金黄色葡萄球菌定性检测 Petrifilm测试片法》团体标准征求意见稿已由中国出入境检验检疫协会进出口食品标准化技术委员会(CIQA/TC10)组织起草完毕，现进入征求意见阶段。请在30天内将意见和建议填写在《意见反馈表》中，于2024年10月31日前将书面意见以邮件形式反馈至CIQA/TC10秘书处。请务必留下您的姓名、单位名称及联系方式，便于联系。联系人：吴丽娜 13913973396 、于海俊15652826162邮箱：fcc@ciq.org.cn附件：1.团体标准《乳与乳制品金黄色葡萄球菌定性检测 Petrifilm测试片法》团体标准征求意见稿2.团体标准《乳与乳制品金黄色葡萄球菌定性检测Petrifilm测试片法》(征求意见稿)编制说明3. 意见反馈表中国出入境检验检疫协会2024年10月8日附件1.团体标准《乳与乳制品金黄色葡萄球菌定性检测 petrifilm测试片法》团体标准征求意见稿.docx附件2.团体标准《乳与乳制品金黄色葡萄球菌定性检测petrifilm测试片法》(征求意见稿)编制说明.docx

“嗜肉菌”在美致死数超艾滋病，研究指出美超市出售的肉类含大量强抗药性细菌，我专家称食品受其污染的机会很多。 　　据英国媒体日前报道，一家美国研究机构发现，在美国超市出售的肉类中，存在大量具有较强抗药性的细菌。其中一种名为金黄色葡萄球菌的“嗜肉菌”，每年在美国致死的人数超过了艾滋病。 　　研究人员发现，在美国超市常见的肉类中，普遍存在大量的细菌，其中半数以上对多种抗生素有抗药性。 　　这家名为TGRI的研究机构检验了从美国四个州以及华盛顿特区的26家超市购得的136份肉类样品。在样品中，研究人员发现了大量的金黄色葡萄球菌。研究人员称，在美国，每年因为被金黄色葡萄球菌感染而丧生的人数，甚至超过死于艾滋病的人数。 　　不过，研究人员认为，最严峻的问题是这些细菌的抗药性越来越强。研究发现，在肉类里发现的各种金黄色葡萄球菌中，高达96%的品种至少对一种抗生素具有抗药性，而一半以上能够抵抗三四种，甚至更多的抗生素。 　　研究人员指出，细菌之所以产生如此强大的抗药性，与人们对抗生素的大量使用有关，尤其是在肉畜养殖业当中。 　　专家解读 　　有“嗜肉菌”之称 可引起腹泻、食物中毒等 　　上午，地坛医院感染二科主任医师陈志海接受法制晚报记者采访时指出，金黄色葡萄球菌在自然界中无处不在，空气、水、灰尘及人和动物的排泄物中都可找到。因而，食品受其污染的机会很多。 　　据介绍，金黄色葡萄球菌有“嗜肉菌”之称，人体皮肤表面的破溃，大部分都会感染此菌，它可引起多种严重感染，比较常见的是腹泻、食物中毒、肺炎或败血症等。 　　北京大学第一医院感染管理科副主任于岩岩则表示，金葡菌本身耐药性并不是很强，高温可灭活，但它可以释放一种毒素，并可以耐热，一旦食用即可引起腹泻、食物中毒等。 　　“有一种比较厉害的金葡菌，可以抵抗多种抗生素，叫做耐甲氧西林金黄色葡萄球菌，简称MRSA。”陈志海说。临床上针对金葡菌，可以用一些比较低级的抗生素杀死，但是MRSA则需要使用万古霉素等高级别的抗生素才能消灭。 　　不过，普通人也无需过于担心，因为感染MRSA的情况，在医院内出现的机会比较大，而出现死亡情况，大多与患者本身的免疫能力较差有关。

无菌室的工作要尽可能减少交流。不允许在无菌室内谈笑。要尽可能减少在无菌室内走动。沉降菌技术必须按照规定的时间进行使用。工作人员进入无菌室工作之前必须做好前期准备工作。要按照规定穿戴经过特殊处理的服装、并对身体做好清洁、避免对检测品造成污染。在检测样品的提取过程中，工作人员要尽可能远离检测物品。避免检测物品受到细菌污染。检测样品提取之后要进行科学的保存，避免受到污染。提取过程要尽可能加快速度，不能将检测样品在空气中闲置太长的时间避免空气中的细菌对检测样品造成污染。检测样品的提取过程必须严格遵守无菌操作的程序。打开储存样品的时候，要使用浓度为75%的酒精对存在检测样品的器皿瓶口进行消毒，要使用酒精棉球作为消毒的重要工具。器皿的瓶口要进行两次以上的酒精消毒，提取工作完成之后要科学的安放检测样品，并且随时检查储存检测样品的空间，避免检测样品受到污染。食品微生物检验的主要内容与特点1、检验内容目前我国对食品微生物检验的根本要求是安全无毒害。在对食品微生物进行检验时，主要内容包括3点：（1）对食品污染程度的检验，以检验食品样本中菌落总数、大肠菌群总数和霉菌总数为主，这种检验方式，只能对样本的污染程度做出判断，不能说明食品是否存在安全问题。（2）对食品中致病菌的定性检验，即检验食品样本中是否存在某种或多种致病性微生物，常规检验的致病菌主要有金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、志贺氏菌、单核细胞增生李斯特氏菌、致泻大肠埃希氏菌、溶血性链球菌、蜡样芽孢杆菌、阪崎肠杆菌及副溶血性弧菌等。（3）对食品中致病菌的定量检验，即检验食品样本中某种或多种致病性微生物存在的量，通过检验结果结合科学数据，对食品样本的危害程度进行分析。2、食品微生物检验的特点（1）食品微生物检验涉及的微生物范围广，种属多。采集食品微生物检验样品比较复杂，要求高。食品微生物检验的研究对象包括：a.经食物传播的病原微生物，他们是人类疾病病原微生物、畜禽疫病的病原微生物和人畜共患传染病病原微生物，这几类微生物可达数百种；b.引起人类食物中毒的微生物及其毒素；c.引起食品腐败变质的微生物；d.食品工业微生物。可以说食品微生物检验接触的微生物类群、种属比其他专业微生物检验为多。（2）食品中待分离细菌数量少、杂菌量多，对检验工作干扰严重。食品微生物检验，其目的菌，如致病性微生物和食品中毒微生物及毒素，主要来源于生产加工、储存运输、销售等过程中污染的，在污染的微生物中，致病性微生物一般数量相对较少，却有大量的非致病性微生物污染，两者之间比较悬殊。（3）食品中微生物检验具有数量观念在GB 4789食品卫生微生物学检验方法中，对某些微生物的数量已经明确规定，除要检测食品污染程度指示菌，如菌落总数、大肠菌群的测定外，还有致病菌如金黄色葡萄球菌、产气荚膜梭菌、蜡样芽胞杆菌都需要菌数计算。诊断食物中毒仅做定性试验是不够的，还需要对致病菌定量检验。随着科技发展，各种致病菌的定量检验必将全面开展。食品微生物检验工作者必须不断摸索、积累，致病菌的定量检验，使其他致病菌的定量检验早日开展。（4）食品微生物检验需要准确性与快速性。食品生产后，为了保持新鲜程度，一般都是尽快的进入市场，转到消费者手中的，这就要求就检验工作尽快获得结果，保证食品的食用安全。另一方面，工厂化大规模生产的食品，每一批次数量较大，采样数量、采样方法和检验方法都直接影响到检验正确性和批量产品的处理，如果检验的结果不准确，将会造成严重的政治影响和经济损失。这一点是食品微生物检验工作必须注意的问题。（5）微生物检验具有一定法律性质。对食品的微生物检验，世界各国均制定有检验法规。作为食品微生物检验人员，在进行食品微生物检验时，均应按规定要求实施，不得任意更换其他方法。无菌操作的重要性所谓无菌，指的是不存在保证生命活动的营养细胞的状态。而无菌操作则是采用无菌的器械进行操作，防止微生物进入无菌范围的技术。在食品微生物检验中，无菌操作是重要的理念，只有采用无菌操作技术，保持食品样本在检验过程中不受到二次污染，才能保证检验结准确的反映出食品样本的卫生状况。在食品检验的各个环节，都有可能有微生物的进入，因此无菌操作技术应贯穿整个检验过程，如果有一个环节没有采用无菌操作，那么其他环节的无菌操作也将没有任何意义。无菌操作的具体应用1、取样食品微生物检验首先是从样本中无菌称取要求检验的质量，取样过程中使用的天平要经过消毒，检验用品如剪刀、药匙要经过170℃/2h 干热灭菌。取样过程严格按照无菌操作进行，才能保证食品样品的原始状态。前处理根据国标要求，取样后要对样品进行前处理。一般而言，称取 25g/ml 样品于盛有225ml无菌稀释液的无菌均质袋中均质，制备成1:10样品匀液进行检验。对于计数样品要，制备10倍系列稀释样品匀液，操作方法参见GB4789.2-2016。整个过程必须严格按照无菌操作进行。3、纯种分离在食品微生物检查过程中，为了更加准确的确定微生物群体，需要将疑似的目标菌从混杂的样品中分离出来，进而得到纯培养物。通常情况下，需要结合不同微生物的具体特性，针对性的选择培养基与培养条件，促进目标微生物的繁殖。或者通过使用某种抑制素，抑制除目标菌以外的杂菌生长，进而将其他杂菌淘汰。接着将培养物接种在固体培养基上形成目标菌的单菌落。这种单菌落还需要进行一定的纯化与鉴定，才能保障分离的菌株为纯菌株。在整个分离纯化过程中，通常需要用接种环把微生物的纯培养物从一个器皿转接到另一个器皿中培养。在这一过程中，如果不能严格按照无菌操作进行，很难保证检验结果的准确性。同时，实验人员应加强自身实验水平与操作能力，确保无菌操作技术熟练、准确。4、革兰氏染色革兰氏染色技术是食品微生物确认鉴定中重要的方法，将疑似的目标菌经过纯化分离后染色，在光学显微镜下观察微生物形态，能初步鉴定微生物是否是所检验的目标菌。革兰氏染色的操作步骤：涂片—初染—媒染—脱色—复染，整个过程中最重要的是涂片，涂片过程中必须严格无菌操作，避免杂菌混入，影响镜检结果。5、空白对照根据《GB4789.2-2016 食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定》，将营养琼脂培养基倾入加有1mL空白稀释液灭菌培养皿内作空白对照。空白对照的结果可以说明三个问题：

摘要 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）技术在微生物学检验中具有检测速度快、鉴定准确率高、检测成本低、检测通量高、可鉴定菌种类型广泛等特点。随着微生物质谱技术的快速发展和广泛应用，MALDI-TOF MS的规范化使用及管理、技术要点等内容亟须广泛普及，以更好推动该技术在临床微生物学实验室的高效使用。专家组通过对国内外相关指南共识及文献的阅读和讨论，结合我国MALDI-TOF MS的临床应用现状，就临床实际工作中存在的常见问题，对影响或决定MALDI-TOF MS技术规范化使用、结果准确解读、科研探索等方面存在的问题进行了反复和深入的讨论，最终形成本共识。随着实践经验的不断总结和临床研究的不断深入，编写组将不定期对共识内容进行更新和完善。基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（matrix-assisted laser desorption ionization time-of-flight mass spectrometry，MALDI-TOF MS）是一种新型软电离有机质谱技术，用于分析生物分子（如DNA、蛋白质、多肽、糖类等）和大分子量的有机分子 ［ 1 ］ ，使得微生物蛋白质指纹图谱进行菌种鉴定成为可能。随着MALDI-TOF MS仪器临床使用日渐广泛，越来越多的临床问题需要规范。本专家共识旨在对日常使用MALDI-TOF MS进行病原微生物鉴定的常见问题给出详细建议，仅供临床微生物学实验室参考。 一、概述 问题1： MALDI-TOF MS进行病原微生物鉴定的优势和局限性有哪些？推荐意见1 ：推荐MALDI-TOF MS作为细菌、酵母及酵母样真菌鉴定的首选方法之一。MALDI-TOF MS用于病原微生物鉴定，与临床常用微生物鉴定方法包括菌落和镜下形态学、生化、免疫学以及基因测序相比，具有明显的优势 ［ 2 , 3 ］ 。1.快速、简便、通量高：前处理及上机操作步骤操作简单，短时间内即可完成多标本检测。2.准确度高：MALDI-TOF MS的鉴定准确率为90.0%~95.0%，显著高于微生物生化鉴定系统 ［ 4 ］ 。MALDI-TOF MS检测的是保守且具有种特异性的核糖体蛋白，对近缘菌种的区分能力较传统方法更强，尤其对有重要临床意义的菌种鉴定有明显优势。例如对凝固酶阴性葡萄球菌和引起心内膜炎的HACEK群菌种 ［ 5 ］ 。3.鉴定范围广：相比生化鉴定方法，MALDI-TOF MS能鉴定更多的临床菌种，除了常见细菌，还适用于分枝杆菌、酵母及酵母样真菌、丝状真菌、专性厌氧菌等 ［ 6 ］ 。根据行业标准《医用质谱仪第2部分：基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪》（YY/T 1740.2-2021），商业参考谱图数据库应包含≥700种微生物 ［ 7 ］ 。4.检测成本低：试剂耗材（靶板、试剂、校准品）少、成本低。尽管MALDI-TOF MS有许多优势，但也需要注意该技术在微生物鉴定方面的局限性，主要包括以下几个方面：（1）部分近缘菌种鉴定易混淆。近缘菌种由于核糖体蛋白的内在相似性，使得谱图难以区分，包括但不限于大肠埃希菌/志贺菌属、蜡样芽孢杆菌复合群、肺炎链球菌和缓症链球菌群、洋葱伯克霍尔德菌复合群、鼻疽/类鼻疽伯克霍尔德菌、无色杆菌属、弗劳地柠檬酸杆菌复合群、阴沟肠杆菌复合群、沙门菌属、结核分枝杆菌复合群 ［ 6 ］ 。随着数据库的扩展和算法的改进，区分以上近缘菌种的能力会逐步改善。各制造商的易混淆菌种清单可参考相应的产品说明书。（2）混合菌鉴定困难。尽管有不少研究尝试对混合培养物进行鉴定 ［ 8 , 9 , 10 ］ ，但尚无可靠的混合菌鉴定系统投入临床使用，目前的MALDI-TOF MS准确鉴定仍需以获得纯菌落为前提。（3）仅适用于可体外培养并形成纯菌落的病原微生物。MALDI-TOF MS目前无法用于耶氏肺孢子菌、衣原体、立克次体等微生物的鉴定。（4）数据库存在局限性。MALDI-TOF MS的微生物鉴定性能依赖于制造商数据库中菌种的覆盖程度，建库菌株的数量和来源，入库谱图的质量等 ［ 3 ］ 。因此，当制造商数据库（包括临床库与科研库）无法满足用户当地的菌种鉴定需求时，实验室可以通过自建库进行补充，若自建库与本品牌的科研库鉴定发生冲突，应采用基因测序进行确认，参见问题11。 二、标本制备 问题2：在MALDI-TOF MS鉴定过程中，如何保证生物安全？推荐意见2： 确定或疑似高致病性的微生物，在鉴定前需依据其生物学特征进行充分灭活，确保生物安全。操作要点：（1）MALDI-TOF MS鉴定过程中，应根据《微生物和生物医学实验室生物安全通用准则》保证生物安全，包括对鉴定病原微生物的灭活、化学试剂的防护以及医疗废物处理等。（2）MALDI-TOF MS操作应在生物安全二级及以上实验室进行，涉及活菌操作应在二级生物安全柜内完成。（3）操作中使用的甲酸、乙腈及三氟乙酸（trifluoroacetic acid，TFA）等化学试剂，应做好通风，避免体表接触。（4）布鲁菌、炭疽芽孢杆菌、结核分枝杆菌以及疑似高致病性病原菌的质谱鉴定，需采用具有灭活效能的试剂进行相应处理，如乙醇、TFA ［ 11 , 12 , 13 ］ 。灭活后在二级及以上生物安全柜内使用甲酸乙腈提取法涂布靶板 ［ 13 ］ 。为保证生物安全，亦可增加预灭活步骤，如在平板中加入75%的乙醇溶液，完全覆盖培养物，静置30 min后挑取菌落鉴定。此外，建议对分枝杆菌额外增加高温灭活的步骤（80 ℃/90 min或95 ℃/30 min） ［ 11 ， 14 ］ 。问题3 不同类型病原微生物的前处理流程？推荐意见3： 推荐MALDI-TOF MS 鉴定不同类型的病原微生物时，采用适宜前处理方法进行操作，其中甲酸乙腈提取法应用范围较广。MALDI-TOF MS 鉴定前处理的主要目的是灭活病原微生物、破坏其细胞壁及提取胞内蛋白质。不同类型微生物细胞壁的结构和成分不同，破壁难易程度有别，从而直接影响蛋白质释放。因此需要选择适当的前处理流程，主要包括：直接涂抹法、原位甲酸提取法、甲酸乙腈提取法、双甲酸法等多种方法 ［ 6 ］ ， 图1 中总结了不同类型微生物的 MALDI-TOF MS 样品制备流程。图1 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱鉴定不同病原微生物适用的前处理方法高致病性微生物的鉴定，应在灭活后采用甲酸乙腈提取法。双甲酸法能有效提升丝状真菌的检出率 ［ 15 ］ ，且较甲酸乙腈提取法更简单。但无法保证对真菌的充分灭活，尤其是挑菌涂抹靶板过程中孢子可能溢散，需要考虑生物安全及交叉污染风险。部分分枝杆菌与丝状真菌等病原微生物细胞壁厚，即使采用推荐的前处理方法，谱图质量仍不理想，应摸索更适当的前处理方法，如添加超声（18 ℃下进行，40 W 峰值功率和50% 占空比超声 1 min ［ 16 ］ ）、冻融（‒ 75 ℃ 30 min或‒ 20 ℃ 60 min，室温融化 ［ 17 ］ ）等步骤。问题4: 培养基对MALDI-TOF MS鉴定病原微生物有什么影响？推荐意见4: 使用不同培养基通常对MALDI-TOF MS鉴定结果影响不大，推荐优选非选择性的固体培养基进行鉴定。用固体和液体培养基获得的图谱可能存在差异，研究表明液体培养基会降低某些微生物的鉴定准确率 ［ 18 , 19 , 20 ］ ，但绝大部分情况下对鉴定结果影响不大 ［ 3 ， 6 ］ 。尽管在液体培养基中微生物生长状态更为均一，但固体培养基更符合临床应用场景 ［ 21 , 22 ］ ，建议选择制造商推荐的培养基。不同固体培养基对于常见病原微生物的核糖体蛋白影响甚微，对鉴定准确性影响不大，但以下原因会对图谱质量产生影响 ［ 22 , 23 , 24 , 25 , 26 ］ 。培养基影响微生物蛋白质表达谱：MALDI-TOF MS蛋白质指纹图谱主要由核糖体蛋白和其他高丰度管家蛋白的信号组成。培养基对于前者影响小，但是可能会通过改变其他蛋白质的表达情况而影响谱图 ［ 23 ， 27 ］ ，具体机制不明。培养基成分造成的电离抑制效应：培养基含有多种选择性成分，包括抗菌药物、盐和酸碱指示剂等。盐是质谱的电离抑制剂，例如使用直涂法鉴定麦康凯培养基（MacConkey agar，MAC）培养的假单胞菌时，可能由于培养基中含有胆盐成分造成电离抑制而影响鉴定，但某些肠道分离株的鉴定似乎不受MAC成分的影响 ［ 26 ］ 。培养基中的色素可影响鉴定结果：虽然暂无培养基中色素影响质谱鉴定的报道，但Buskirk等 ［ 28 ］ 研究发现真菌色素会抑制解吸/电离过程，电离抑制存在浓度依赖性，在高黑色素浓度（5 000 ng/spot）下接近 100%，提示含色素的培养基如MAC可能具有类似的效果 ［ 26 ］ 。血琼脂培养基中的血红蛋白可对谱图造成干扰：生长在哥伦比亚血培养基上的金黄色葡萄球菌较甘露醇盐琼脂培养基上菌落具有更多的峰 ［ 27 ］ ，但不会改变菌种的鉴定结果 ［ 21 ］ 。问题5: 哪些临床标本可直接进行鉴定？推荐意见5: 推荐MALDI-TOF MS直接鉴定血培养阳性标本，按照标准操作流程，可有效缩短标本周转时间（turnaround time，TAT），但应注意其局限性。原则上MALDI-TOF MS鉴定需采用纯菌落，但有部分临床标本无须分纯培养即可直接进行质谱鉴定，包括血培养阳性标本、尿液标本、无菌体液标本，其中用血培养阳性标本直接鉴定较为成熟，能缩短TAT，满足临床快速诊疗的需求。血培养阳性标本：菌体的富集是影响阳性血培养直接鉴定效率的重要因素 ［ 29 , 30 ］ 。通过富集技术处理阳性血培养标本后，直接用MALDI-TOF MS进行鉴定 ［ 31 ］ ，主要方法有短时培养法、分离胶促凝管富集法和试剂盒富集法（ 图2 ）。此外，需关注血培养阳性样本的涂片革兰染色结果是否为单一病原微生物，如有两种及以上形态的病原微生物，可影响鉴定结果。图2 血培养阳性病原微生物的基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱鉴定方法尿液标本：研究表明尿路感染患者的尿液中有足够的菌量（≥10 5 CFU/ml），可直接进行病原微生物质谱鉴定，建议先用尿分析仪对菌量进行评估 ［ 32 ］ 。同样需要关注涂片革兰染色是否为单一病原微生物。参考步骤：（1）低速（2 000~4 000× g）离心去除白细胞、细胞碎片及黏液；（2）高速（10 000~14 000× g）离心沉淀菌体；（3）无菌水清洗沉淀后用甲酸乙腈提取法进行MALDI-TOF MS上机前处理 ［ 32 , 33 , 34 ］ 。无菌体液标本：脑膜炎患者的脑脊液标本的直接质谱鉴定方法报道相对较少 ［ 35 , 36 ］ ，主要因为标本中菌量较低，检测灵敏度无法保证。研究显示无菌体液如脑脊液 ［ 37 ］ 、腹腔积液 ［ 38 ］ 、关节滑液 ［ 39 , 40 ］ 标本可先接种于血培养瓶中进行培养增菌，在血培养仪报阳后进行质谱鉴定，同样能显著缩短TAT。此外，略过分纯培养步骤，直接用原始标本进行质谱鉴定病原微生物仍存在局限性：（1）无法鉴定混合微生物；（2）标本中人体细胞干扰或菌量不足可能导致鉴定结果不可靠 ［ 32 ， 41 ］ ，因此在进行无菌体液标本直接鉴定的同时，需要对此标本进行平行的传代培养，并在获得纯菌落后进行最终鉴定结果的确认。 三、结果分析与解读 问题6: 采集到质量较差的谱图时，如何分析原因？推荐意见6: 推荐采用新鲜菌落进行MALDI-TOF MS鉴定，针对不同病原微生物的特征，选择恰当的前处理方法提高谱图质量。合格的谱图应包含丰富的谱峰信息，体现在峰数量较多且分散、强度错落有致、分辨率较高、信噪比较高。在日常工作中，如果质控正常，采集到的谱图质量仍不理想，可能的原因如下 ［ 3 ， 6 ］ 。标本因素：（1）建议使用新鲜的菌落进行鉴定，此时微生物处于指数生长期，有利于采集到优质谱图；随生长时间延长，菌龄增加，影响谱图质量 ［ 42 ］ 。（2）肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌、隐球菌等黏液型菌落，由于细胞壁外有荚膜，导致破壁困难，鉴定性能下降 ［ 18 ］ ，建议使用棉签拂去菌落表面黏液，再挑取下层菌落进行点靶。前处理操作：若前处理方法选择不当，导致细胞壁破碎效果差，蛋白质释放不足，容易出现杂峰干扰、峰数量少、信号低等问题。点靶操作：因操作者手法问题造成点靶质量差，常见于以下几种情况（ 图3A~3D ）。（1）菌量过少（ 图3B ）可能造成谱图信号弱。（2）菌量过多（ 图3C ），涂靶过厚，容易造成谱图分辨率差、质量轴漂移等现象。（3）涂靶不均匀（ 图3D ），自动采集过程中容易采空，或者厚薄不均造成结晶分布不均，影响激光激发效果，重复性差。（4）培养基成分干扰，挑取菌落时混入培养基，涂靶后鉴定容易受到培养基峰的干扰。图3 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱点靶效果示意图（3A示菌量适宜，3B示菌量过少，3C示菌量过多，3D示涂靶不均匀）问题7: 当谱图质量合格但鉴定结果不理想时，如何分析原因？如何确定处理方法？推荐意见7: 当谱图质量合格但鉴定结果不理想时，推荐通过校准/质控排查仪器原因，观察菌落排查标本混合菌、污染等原因，最后考虑数据库的局限性，可用自建库进行改善。仪器原因：质量轴发生偏移，可能的原因包括未进行校准或校准不当、靶板平整度不合格、结晶不理想及其他仪器系统原因等。可通过在靶板不同区域进行质控/校准菌株的鉴定操作快速排查。当校准/质控未通过或不同区域质量轴差异较大时，需保证靶板的平整度，并及时对仪器进行校准。标本原因：（1）混合菌或者培养物被污染。如果标本在质谱鉴定前未获得纯菌落，谱图中可能含有多菌种谱峰信息，导致鉴定失败。建议重新挑取纯菌落，或者重新通过分纯培养获得纯菌落。（2）标本间交叉污染。操作不当导致的交叉污染，如靶板清洗不充分、不同靶点之间枪头混用、标本溢出靶点等，可能导致谱图信息混杂，影响鉴定结果。建议规范操作并按照说明书正确清洗靶板。（3）培养条件不同。当待测株与建库株的培养方法不一致时，可能鉴定失败。如部分丝状真菌在不同的培养基类型、培养天数、温度等条件下，可能会对谱图产生较大的影响 ［ 21 ， 43 ］ 。数据库原因：（1）数据库菌种覆盖度不足。如果数据库中未包含待测菌株的菌种参考谱图，则无法正确鉴定。（2）待测菌株与数据库中同种菌株差异较大。虽然数据库中包含待测菌种，但由于亚种、地域、标本来源、是否产黏液等因素导致的同种菌株之间差异性，鉴定结果可能不理想。问题8: 单个标本重复鉴定出现不同的鉴定结果，如何解读结果及处理？推荐意见8: 单个标本重复鉴定出现不同结果，多是由于鉴定未到种水平所致。可能匹配质谱易混淆的近缘菌种，也可能是由于分辨率不足/数据库菌种缺失导致的匹配到多个低置信度的同属不同种，如有必要需重新制样或进一步补充其他方法进行区分。多次采集/多点采集鉴定出现不同结果，考虑以下原因和相应处理流程。近缘菌种易混淆：MALDI-TOF MS对于部分亲缘关系相近的菌种没有足够的区分度。常见的易混淆结果是复合群内的不同种，如阴沟肠杆菌复合群，包括阴沟肠杆菌、阿氏肠杆菌、霍氏肠杆菌、神户肠杆菌等，也有可能是属内多个近缘菌种，如李斯特菌属里的单核细胞增生李斯特菌、无害李斯特菌、斯氏李斯特菌、威氏李斯特菌等，甚至可能是不同属的菌株混淆，如大肠埃希菌与志贺菌属。建议关注制造商的易混提示/低分辨提示，再根据临床是否需要鉴定到种水平采取相应措施。种特征不明显：谱图缺失种特异峰，分辨水平低，谱图与数据库中多个菌种匹配。通常体现为谱图质量不高，峰相对少，打分较低。建议采用提取法或者更充分的破壁方法进行前处理。数据库缺少待测菌种：此时谱图可能会与数据库中存在的近缘菌种匹配，得出多个结果。通常发生在少见罕见菌种鉴定，谱图质量好，但分数不高。若多个结果属于同一个属，建议质谱报告为属水平结果，并通过基因测序等其他方法进行种水平鉴定。混合菌和交叉污染：通常体现为不同菌种结果亲缘关系并不相近，且分数不高、峰较多。建议通过规范取样、制样来避免交叉污染；若是怀疑混合菌，进行重新分纯。问题9: 病原微生物采用不同方法鉴定，结果不一致时应如何处理？推荐意见9: 不同微生物鉴定方法学的适用性、病原谱、准确率有区别，当MALDI-TOF MS鉴定结果与其他方法不一致，推荐使用基因测序作为鉴定“金标准”。病原微生物鉴定常见方法包括形态学、生化、MALDI-TOF MS和基因测序鉴定，对于一些肠道病原菌还需补充血清凝集试验。目前实验室采用全自动微生物生化鉴定仪和MALDI-TOF MS较为广泛，而基因测序可作为难鉴定菌的备选方案 ［ 44 , 45 ］ 。基因测序方法中，Sanger测序能够实现大部分常见微生物的种水平鉴定，但某些菌种（如诺卡菌、非结核分枝杆菌等），其特征核酸序列片段（如16S rRNA）分辨力有限，无法准确鉴定，常需要联合多个特殊性片段测序，甚至需要全基因组测序 ［ 46 ］ 。在日常的微生物鉴定时，应明确所采用方法的局限性及所要达到的鉴定水平（属/复合群/种），选用适宜的鉴定技术，必要时采用多种方法确认。当不同方法鉴定结果不一致时，需要考虑如下因素：特定病原微生物采用不同方法学鉴定时的可信度：（1）肺炎链球菌和缓症链球菌群，质谱鉴定可能出现错误，而生化鉴定技术可作为补充 ［ 6 ］ ；（2）鲍曼不动杆菌复合群内菌种，生化鉴定方法尚无法有效鉴别，MALDI-TOF MS可明确区分复合群，基因测序可准确鉴定；（3）肠道致病菌，需补充血清凝集试验实现不同血清型的鉴别。所选择方法的病原菌谱：不同鉴定方法所能覆盖的病原菌谱存在差异，基因测序MALDI-TOF MS生化鉴定。若鉴定结果不一致，应考虑待测菌是否在所选方法的病原菌谱内。如按蚊伊丽莎白金菌可被质谱正确鉴定，但生化鉴定卡的病原菌谱并不包括此菌种，可能被误鉴定为脑膜炎脓毒伊丽莎白金菌。所选择方法的鉴定准确率：目前MALDI-TOF MS鉴定准确率已经接近分子方法，高于生化鉴定。不同方法结果不一致时，基因测序仍被认为是菌种鉴定的“金标准” ［ 47 ］ 。问题10: 不常见病原微生物的鉴定结果如何验证？推荐意见10： Sanger测序可用于验证不常见病原微生物的质谱鉴定结果，推荐16S 核糖体RNA（16S ribosomal RNA，rRNA）（细菌）/内转录间隔区（internal transcribed spacer，ITS）（真菌）作为靶基因，当无法鉴定到种水平，需要加测其他保守基因。对不常见病原微生物的鉴定结果，建议查询其基本信息，并采用其他方法学的复核和验证，优先选择基因测序。病原学分子鉴定技术可采取保守区核酸扩增和Sanger测序结合的方式，细菌靶基因首选16S rRNA基因，通过与数据库中已知序列比对，相似度超过98.7%为同一种 ［ 48 ］ ，无已知序列超过阈值则可能是新种；真菌首选ITS基因，通常使用相似度97.0%作为同种阈值 ［ 49 ］ 。当首选靶基因分辨率不足（不止一个种超过阈值）时，需加测其他保守基因，具体可参照临床和实验室标准协会（Clinical and Laboratory Standards Institute，CLSI）MM18 ［ 50 ］ 。基于测序技术的快速发展和成本的有效控制，亦可采用基因组测序技术实现不常见病原微生物的准确鉴定，基于基因组序列的平均核苷酸一致性分析，与模式菌株或参考菌株比对分值超过94.0%可认定为待鉴定菌种与模式菌株菌种一致 ［ 51 ］ 。问题11； 哪些病原微生物鉴定到种水平有重要临床意义？推荐意见11： 临床鉴定病原微生物需要尽可能鉴定到种水平。当质谱分辨率不足时，对于影响公共健康或影响临床决策的病原微生物，推荐采用其他鉴定方法报告到种水平。原则上临床鉴定病原微生物应尽可能鉴定到种水平。MALDI-TOF MS无法鉴定到种时，需根据临床意义判断是否可报告至复合群或属水平。如有必要到种水平，可采用改进前处理提高质谱鉴定分数、或辅以其他方法进一步鉴定。以下几种情况需报告到种水平甚至是亚种水平。影响公共健康、与严重疾病相关的病原微生物：细菌，如炭疽芽孢杆菌、鼠疫耶尔森菌、霍乱弧菌、白喉棒杆菌、单核细胞增生李斯特菌；真菌，如新型隐球菌与格特隐球菌、耳念珠菌等需要报告到种 ［ 52 ］ 。菌种间致病性存在差异的病原微生物：例如（1）肺炎链球菌是临床常见的致病菌，而口腔/缓症链球菌常被认为是定植菌 ［ 53 ］ 。（2）血培养常见污染菌如凝固酶阴性葡萄球菌、棒杆菌属、丙酸杆菌等，若≥2套被检出，应鉴定到种以判断其临床意义。（3）血液或无菌体液中的牛链球菌群常与肠道肿瘤密切相关，应鉴定至亚种水平 ［ 54 ］ 。（4）尿标本分离到的解脲棒杆菌常与肾结石相关 ［ 55 ］ ，而在乳腺组织、脓液分离出的克罗彭施泰特棒杆菌则与肉芽肿性乳腺炎相关 ［ 56 ］ ，需鉴定到种水平。（5）嗜水气单胞菌复合群常无需鉴定到种，但如该类细菌引起食源性腹泻需进行病原学溯源或引起肠外血流感染、尿路感染及组织脓肿时，应准确鉴定到种水平 ［ 57 ］ 。与经验使用抗菌药物相关的病原微生物：例如鲍曼不动杆菌尽管与皮特不动杆菌或医院不动杆菌同属于一个复合群，但鲍曼不动杆菌感染患者往往表现出更高的耐药率和病死率 ［ 58 , 59 , 60 ］ ，需要进行区分。真菌中容易产生耐药尤其是多药耐药的菌种，例如耳念珠菌

抗生素的不当使用一方面贻误病情、导致复发感染，甚至造成人体菌群紊乱，诱导其它疾病的发生，另一方面则加速耐药菌乃至“超级细菌”的出现。因此，如何实现“快、准、狠”的抗生素精准用药既是精准医学的重要前沿，也是遏制耐药性蔓延的核心挑战之一。而准确全面的抗菌效果评价技术是抗生素精准用药的前提与基础。近日，中国科学院青岛生物能源与过程研究所单细胞中心与中山大学光华口腔医学院合作发表了基于重水标记单细胞拉曼成像的药物抗菌效果评价技术，在单个细菌细胞精度快速测量药物对细胞代谢活性的抑制性。以此为基础提出的“基于代谢活性的最低抑菌浓度”(“MIC-MA”指数)，与目前临床用药普遍依据的“最低抑菌浓度”(“MIC”指数)相比具有重要的特色与优势，因此有望成为指导临床精准用药的新标准之一。该工作近期发表于《分析化学》(Analytical Chemistry)。　　据专家估算，目前在必须使用抗生素治疗的临床案例中，高达30~50%存在着治疗方案制定、抗生素选择或抗生素疗程等方面的错误 在重症监护中，约30~60%的抗生素处方均存在非必要抗生素的滥用、非对症抗生素或者非最佳抗生素组合方案等问题。与此同时，目前每年约有70万人死于耐药菌感染 到2050年，这一数目将激增至每年1000万人，大约为每年死于各种癌症的病人总数。因此，2016年9月22日联合国大会193个成员国共同签署了历史性宣言，承诺通力合作扫除“超级耐药病菌”。2016年8月26日中国国家卫计委等14部门联合印发的《遏制细菌耐药国家行动计划(2016-2020)》中明确提出，要“加强抗菌药物应用和耐药控制体系建设”和“完善抗菌药物应用和细菌耐药监测体系”。准确全面的抗菌效果评价技术是抗生素精准用药的前提与基础，但是，临床需求与技术现状的矛盾如此紧迫和突出，以至于2016年9月8日美国NIH悬赏二千万美元，专门激励细菌耐药性临床快检技术的研发。　　迄今为止，MIC指数，即体外培养细菌24小时后能抑制培养基内病原菌生长的最低药物浓度，一直是微生物药敏试验、抗菌药效评价和临床抗菌方案制定的主流标准与主要依据之一。然而其测量不仅耗时耗力，且对难以实验室培养或生长缓慢的病菌无能为力。尤其关键的是，MIC只能从抑制细胞数目扩增这一角度反映与测量药效，却无法检测处于“NGMA”(Non-Growing but Metabolically Active)状态的病菌，即在药物作用下已经不再增殖但仍然具备代谢活性的存活细胞。这种状态的病菌在临床上十分常见，如果在抗菌治疗中成为漏网之鱼，将贻误病情，引起复发性感染，进而诱导耐药菌乃至“超级细菌”的频繁出现。因此根据MIC制定抗菌治疗方案有可能出现“不够快、不够准、不够狠”的情况。　　针对上述瓶颈问题，研究人员开发了基于拉曼组(Ramanome)的细菌药物应激效应成像技术(如图)，有效地克服了上述缺陷。该研究以导致龋病的变形链球菌(Streptococcus mutans)与多种临床常见抗菌药物为模式，证明单细胞拉曼成像能够精确测量细胞利用胞外重水(D2O)分子的速率，而后者与该细胞的代谢活跃程度呈高度的正相关。因此与重水标记耦合的单细胞拉曼成像能够从对微生物代谢活性抑制的角度定量测量药效，让处于“NGMA”状态的细胞无所遁形，从而使抗菌治疗方案“够准”。同时，由于该方法具备单个细菌细胞的精度，因此对于绝大部分细菌、古菌和真菌，该方法能够测量同一样品内不同细胞之间在抗菌效应上的差异程度，评价病菌细胞群体或群落在药物作用下是否已被“赶尽杀绝”，从而使抗菌治疗方案“够狠”。实验还证明，该方法能够在半小时内快速区分氟耐受型和氟易感型的变形链球菌，这一高度灵敏性对于评价抗菌效果是否“够快”具有重要意义。　　基于上述重水标记单细胞拉曼成像技术，研究人员提出了名为“基于代谢活性的最低抑菌浓度”(“MIC-MA”指数)的抗菌药效指标，即药物作用8个小时后所有细胞其代谢活性彻底、且全都被抑制的最低药物剂量。对于特定病菌和特定抗菌药物，MIC-MA指数与MIC指数显著不同。在该研究测试的三种抗菌药物的MIC剂量下，尽管变形链球菌细胞群体已经不再生长与扩增，但大部分的细胞都仍然保持着一定的代谢活性。事实上，在高达60倍MIC的氨苄西林剂量时，仍然存在高比例的“NGMA”状态的变形链球菌细胞，这导致在抗生素压力消失时病菌“星火燎原”，发生复发性感染。这说明MIC-MA在评价抗菌药效是否“快、准、狠”等方面，与目前临床上普遍参照的MIC相比，具有重要的特色与优势。　　此外，传统MIC检测将受试微生物作为同质化的群体来看待，忽视了针对细胞之间药效异质性的考察与评价。而MIC-MA在单个细胞精度的药敏性与药效检测，对于研究考察耐药性形成与微进化机制等方面具有重要意义。　　单细胞中心前期已经证明拉曼组能够快速区分细胞药物应激机制(Teng L, et al, Sci Rep, 2016)。因此，拉曼组技术预期将成为指导“个体化”临床精准用药与耐药性快检的新手段与新标准之一，同时，也为新型抗菌药物筛选与研发提供了崭新的共性技术平台。　　青岛能源所单细胞中心研究员徐健和中山大学光华口腔医学院教授凌均棨为论文的共同通讯作者，联合培养博士生陶一帆是论文的第一作者。该工作获得了国家自然科学基金委、中科院生物高通量检测分析技术服务网络(STS)等的支持。　　论文信息：　　Yifan Tao, Yun Wang, Shi Huang, Pengfei Zhu, Wei E. Huang, Junqi Ling*, Jian Xu*. Metabolic-activity based assessment of antimicrobial effects by D2O-labeled Single-Cell Raman Microspectroscopy. Anal. Chem., 2017, DOI:10.1021/acs.analchem.6b05051.　　Lin Teng, Yun Wang, Xiaojun Wang, Honglei Gou, Ren Lihui, Tingting Wang, Yun Wang, Yuetong Ji, Wei E. Huang, Jian Xu, Label-free, rapid and quantitative phenotyping of stress response in E. coli via ramanome. Sci Rep, 2016. 6:34359. DOI:10.1038/srep34359.基于重水标记单细胞拉曼成像的药物抗菌效果评价技术示意图

HD5000 多谱超分辨菌落成像系统HD5000多谱超分辨菌落成像系统是迅数科技2020出品、软硬件顶级配置的旗舰机型，符合人体工学的全金属机箱设计，精致、坚固。独特设计的平皿莱因伯格照明系统，具有156种组合照明模式，可为平皿、多孔板菌落、细胞克隆、病毒蚀斑拍摄华美的影像，是图像数据保存、文献发表的有力工具。4/3英寸超大面阵CMOS传感器与大视场高清定焦镜头搭配，菌落影像通透、色彩细腻，完美展现培养基深层微小菌落，抑菌圈轮廓清晰、锐利，保证了图像分割的精度和重现性。软件功能丰富、易用，融菌落计数、抑菌圈测量、菌种筛选三大功能于一体。可实现：快速统计、多算法高级统计、网格滤膜、3M测试片、典型菌筛选、菌株特性描述、双圈分析、抑菌圈测量。。。 微生物平皿成像的“数字影棚” l “数字影棚”的光源控制 专业设计的平皿载样舱，可实现培养皿的雾光漫反射照明、悬浮暗视野照明、彩色凌透背光照明、多谱莱茵伯格照明，紫外激发照明，拍出不同寻常的科研级精美照片。 光源控制器采用隐藏式吸弹门设计，具6路照明选择开关、4通道无级亮度调节、双通道色温调节、12路彩色背景选择、12路莱因伯格光选择。 l 多谱莱因伯格照明多谱莱因伯格照明是迅数独创的平皿大视场暗域照明技术，12通道不同波长的可见激发光以环幕逆透射聚光照明菌落，辅以不同的彩色凌透光，可构成156种组合照明模式，使培养基形成均匀的背景色，菌落勾勒出鲜亮的自然色泽与轮廓。无需化学染色，即可使菌落或细胞克隆实现无损光着色，便于观察细微结构，识别、计数。莱因伯格照明实际样张： l 悬浮式暗视野照明 悬浮式暗视野由暗域轮廓光与黑色背景构成。柔和的白色LED轮廓光，使平皿中央到边缘的菌落得到均匀的照明，而光线几乎穿透培养基，形成黑色背景下的亮色菌落，菌落与培养基形成高反差，可清晰勾勒菌落轮廓。超分辨率 锐利展现菌落细节1.1英寸大视场高清定焦镜头，通过较大程度地控制多种像差，无论是暗视野照明、雾光漫反射照明、莱因伯格照明，都能呈现高分辨力、高对比度的画质。 2100万像素 4/3英寸超大面阵彩色SONY CMOS 传感器，采用双层降噪技术，具有极高的灵敏度以及超低噪声，能以无损图像品质呈现细微的色差和丰富的细节信息。 高保真镜头与大面阵相机的完美搭配，更能区分不同菌落、菌落与杂质、菌落与培养基之间的差异，从而提高菌落计数、筛选的精度。 更多图像算法 提高菌落计数精度 迅数创造性地研究出适合复杂菌落分割计数的快速活动轮廓模型、多相水平集活动轮廓模型等先进的图像分割技术，实现了复杂菌落、高难度平皿的准确计数。 (a) 水平集函数示意 (b) 曲线演化过程水平集活动轮廓模型的基本原理图像识别分割案例：多粘连细菌菌落计数 微小菌的识别计数：适合支原体、AMES 、嗜冷菌分析 真菌菌落计数滤膜菌落的识别计数 显色菌落的识别计数 高效、精确 菌种数字化筛选l 无损伤的多谱光学染色识别技术 通过多光谱莱茵伯格照明的光学染色技术，让菌落或克隆形成鲜艳的颜色，便于观察、辨别菌落的色彩和纹理细节，结合染色抗干扰精密统计技术，可以提高不同菌落识别的精度，减少培养基不平整、杂质干扰的影响。 l 不同菌群自动分类识别 微生物研究中有时需要在多菌混杂情况下把目标菌分类统计出来。不同菌种菌落的色泽、大小、轮廓存在微小特征差异。HD5000的“单色分类统计、指定多色筛选、多色自动聚类”工具可实现高精度识别某一类菌落，或自动聚类区分不同颜色的菌落。 l 双圈分析通过精确测量透明外圈直径和菌落直径，自动计算二者面积比和直径比，并根据比值的大小自动排序，定位出相应的菌落。适用于“抑菌圈、透明圈、变色圈、生长圈、水解圈、溶磷圈、排油圈、溶钙圈、溶血圈”分析，辅助抗生素、酶制剂、有机酸产生菌和石油、农药降解菌的高效筛选。 l 病毒滴度分析-蚀斑/噬菌斑计数 悬浮式暗视野照明使得敏感细菌菌层为白色，烈性噬菌斑形成的透明斑为黑色；莱茵伯格照明可让结晶紫或中性红染色的细胞层着色明艳，病毒空斑更易观察。影像的锐度与反差，帮助实现蚀斑/噬菌斑的准确分割和精确计数。 l 菌丝生长速率分析工具 菌丝生长速率、菌丝生长抑制率、对峙培养分析、室内毒力测定等实验常采用十字交叉法测量菌落直径。由于多数霉菌菌落蔓延、疏松、边缘发散不规则，测量的人为误差大，效率低。迅数“霉菌一键测量”模块，只需用“魔棒”在菌落边缘点击一次，即可瞬间测出大霉菌的面积、周长、长径、短径。 l 免疫学研究 迅数-多区域统计算法可以轻松实现任意多个区域的同步一键计数，可用于肺炎链球菌荚膜多糖特异性抗体调理吞噬杀菌试验（OPKA）和抗体依赖补体介导的体外血清杀菌试验（SBA） l 多孔板克隆计数 高分辨率的HD5000还可用于多孔板的克隆成像。莱茵伯格照明能使结晶紫染色的肿瘤或干细胞克隆鲜艳明亮；悬浮式暗视野照明，可使软琼脂克隆形成高反差的图像，自动计数大于50um的克隆或细胞团。 l Spot assay 点阵分析 Spot assay常用于检测不同培养液中细菌或酵母的生长率、培养液的连续梯度稀释或某个菌株基因突变型的高通量筛选 。“多区域动态调节统计”适用于此类分析。 抑菌圈自动测量l Szone 抑菌圈多模式测量技术抑菌圈测量常采用钢圈双碟法、纸片法、琼脂打孔法，由于试验环节诸多因素，如：抗生素溶液浓度、培养基质量、PH值、试验菌菌龄、培养时间等，使得最后形成的抑菌圈有些轮廓清晰，有些边缘模糊或不整齐并伴有破裂现象。 迅数“自动检测、拟圆逼近、三点定圆”三种算法，可适应不同类型抑菌圈的测量。 l 高对比、高分辨成像---保证测量精度 抑菌圈测量的关键是准确找到透明圈与底层菌的“边界线”。迅数专利设计的悬浮式暗视野，使得透明的抑菌圈构成“黑背景”，与周边灰白色的菌层形成高反差。 测量精度取决于数字影像画质，而镜头与相机的组合对画质至关重要。HD5000采用光学分辨率达150LP/mm的大靶面定焦镜头，将通透无畸变的光信号通过4/3英寸大面阵CMOS芯片相机，转为高清细腻的抑菌圈数字图像。 l 抗生素效价测定 提供一剂量法、二剂量法、三剂量法及合并计算。一剂量法符合美国药典，二剂量法和三剂量法符合中国药典2020版。仪器重复性自检，测量相对误差≤0.002mm；均匀性自检，相对误差≤0.1％。主要功能与技术指标一、 照明系统? 全封闭钢铝合金机箱（32×34×46cm）：精密、坚固，确保光密闭? 平皿载样舱：下拉式铝合金隔断窗，消除环境杂散光干扰，阻断紫外泄露、避免灰尘进入? 雾光漫反射照明1) 96颗LED列阵与纳米反射材料构成嵌入式雾光系统， 360°连续漫反射，凸显菌落色泽和纹理，消除玻璃培养皿折射形成的光斑、光环。2) 色温变化范围：3100K－5800K 照度范围 50-—7000 Lux 3) LED寿命≧20000 小时? 悬浮暗视野照明白色LED光源，照度范围 100—5500 Lux 显色指数74%? 彩色（12色）凌透背光照明1) 可调式LED导光列阵，形成均匀、高亮的12种色彩透射光2) 照度均匀度大于90%，确保培养皿边缘与中间得到均匀照明? 多谱莱茵伯格照明1) 12通道可见激发光、环幕逆透射，与凌透背光可构成156种组合照明模式2) 多光谱模式可降低培养基不平整、色变的影响，减少琼脂杂质的干扰3) 无损光着色技术与抗干扰精密统计技术结合，增强菌落之间细微颜色差异辨别，显著提高菌落识别、筛选的精度? 紫外反射光源：254nm用于腔体消毒、紫外诱变 ；366nm 可用于荧光激发? 光源控制器1) 隐形弹吸式控制面板，6路照明选择开关、4通道无级亮度调节、双通道色温调节2) 照明组合 自由切换 二、 数字成像? 1.1英寸大靶面高清工业定焦镜头，镜头中央与边缘都保持150 lp/mm的分辨率? 超大面阵CMOS相机： SONY 4/3英寸彩色CMOS 传感器， 分辨率：2100万像素 单像素尺寸：4.54X4.54um三、 菌落分析模块1. 基本菌落计数功能? 平皿类型：倾注、涂布、膜滤、螺旋平皿、3M纸片 ? 全皿菌落统计：菌落总数统计，并按25档尺寸分类显示? 区域选择统计：可选择圆形、矩形、任意圈定区域进行统计? 多域平行统计：一次性多区域同步统计；多区域“镂空”统计? 直径分类统计：设置直径范围，统计特定大小的菌落? 鼠标点击统计：快速标记、添加菌落，适合培养皿边缘菌落的计数? 菌落粘连分割：自动分割相互粘连的菌落，链状菌落由用户选择分割或不分割2. 快速菌落统计? 滚轮参数调节统计（4种）：均质平皿、背景不均、微小菌落、彩色背景? 一键响应统计（3种）：单色统计、霉菌统计、反式统计3. 高级菌落统计? 动态调节统计：可对统计结果进行动态调节修正，快速获取最佳统计效果。? 偏差预估统计：适用于菌落颜色多且复杂的情况。? 水平集多模型算法：搜索运算，获取最佳图像分割效果，适应培养基背景变换? 特定菌落统计：根据菌落色泽、大小、轮廓特征，识别特定菌落? 反式统计：适合菌落类型极其复杂而培养基背景均匀? 高粘连菌统计：适合多重粘连菌的分割计算? 杂菌、杂质剔除：根据形态、尺寸、颜色的区别，进行自动杂菌、杂质剔除? 螺旋菌落统计：根据FDA标准自动计数螺旋平板，支持指数模式、缓慢指数模式、均一模式、比例模式、草坪模式等。兼容美国SBI、西班牙IUL螺旋接种仪。 4. 网格滤膜与3M测试片? 黑色实线网格一键统计? 3M细菌总数测试片、3M金黄色葡萄球菌测试片：一键统计? 3M大肠菌群测试片、3M大肠杆菌/大肠菌群快速测试片：一键统计+人工选择5. 典型菌筛选? 单色分类统计：根据颜色精度、扩散度和菌落大小、轮廓特征，筛选特定菌落? 多色自动聚类：根据颜色聚类精度，自动区分24种不同颜色的菌落? 指定多色筛选：一次筛选1-8种指定颜色菌落? 透明圈特性分析：适用于抑菌圈、水解圈、变色圈、溶钙圈、溶血圈、排油圈、溶磷圈分析? 双色圈自动筛选6. 菌落特征描述? 细菌、酵母：颜色、大小、形状、表面形态、边缘、光泽、透明度等特征，智能描述和排序? 霉菌、放线菌：正面颜色、反面颜色、大小、表面形态、边缘、质地等特征，智能描述和排序7. 微生物限度分析工具? 培养基适用性检查? 控制菌检查-菌落形态8. 专项分析? 防霉检测：定量分析防霉等级? 多区域串联统计：适合培养基背景不均匀的复杂菌落? 多区域并联统计：适合多孔板、OPKA、SBA分析9. 高级工具? 网格清除：消除滤膜网格背景干扰? 人工计数修正：添加或删除菌落? 排除污染区域：鼠标勾勒任意污染区域，自动剔除污染区域的菌落数? 背景文字清除：自动消除记号笔干扰? 人工粘连分割：手动分割多重粘连菌落? 参数自动换算：培养皿直径、样本稀释度输入，实现自动换算? 文字、图形标注：各类绘图工具和中英文文字嵌入10. 标定与测量? 仪器标定：仪器自带标定、人工修正标定? 一键式快速测量：一键测定大菌落，适合真菌、放线菌的单菌落分析? 全皿自动测量：全皿菌落的等效直径、面积、长短径、周长、圆度分析? 多向标尺测量、手动精确测量：长度、角度、弧度、面积、弧线、任意曲线11. 图像处理? 图像调节：灰度图、负相图转换；亮度、对比度、饱和度调节；RGB调节? 图像增强：锐化、自适应增强? 图像滤波：中值滤波、高通滤波、高斯滤波、低通滤波、队列滤波、高通高斯? 边缘检测：Sobel算子、Robert算子、Laplace算子、垂直检测、水平检测? 形态学运算：腐蚀、膨胀、开运算、闭运算四、 数据安全与管理1. “系统、数据、操作、复核”四重系统架构，分设职能与权限，确保数据信息的安全、完整和真实? 系统管理员（最高层）：负责创建、管理所有操作员与审核员的账户和登入密码。确保操作员与操作员之间、操作员与审核员之间的账户隔离与数据隔离。? 数据管理员（副高层）：负责全部测试数据的档案管理、以及计算机的数据库管理。封存所有审核通过的测试报告或将原始图片、测试数据备份、导出，保证了数据的完整性、安全性。? 操作员：负责培养皿菌落的测试、自检、修正、形成电子报告、递交审核、对审核通过后的文件进行报告打印。? 复核员：负责对操作员递交的测试报告进行审核。核查数据输入与处理过程，但无权修改；对存疑报告作“审核退回”处理，要求操作员重新测试；对“审核通过”的报告将永久性存档，无论审核员还是操作员都无权再删除，以确保数据的原始性和真实性。2. 数据存储与导出? 以电子数据为主，记录：样本来源、编号、稀释度、平皿图片、识别效果、计数值、所用统计工具、参数设置、修正情况，确保记录信息完整。? 满足质量审计，存储的电子数据能以PDF或Excell格式打印输出3. 水印签章技术、防篡改技术、测试流程智能重构技术，实现有效的审计追踪? 防篡改技术1) 采用多用户登入管理，所有操作员、审核员的名字，被系统自动记录在操作流程和测试报告中；所有操作日期、审核日期，由计算机自动生成，避免错填或伪造。2) 全部操作流程，包括：菌落图片、培养皿尺寸、样本稀释度、统计工具、所用参数、测试所得的菌落总数、自检修正后的菌落总数等，由计算机自动记录在数据库中，操作员无法进行改动，为后续审计提供全部真实数据。? 水印签章技术“审核通过”的测试报告会自动生成操作员和审核员的账户电子签名，并在报告上加印防伪的“审核通过”水印签章。? 测试流程的智能重构技术1) “复核员”打开“等待审核”的测试记录，计算机自动复原操作员的全部流程和测试环境，包括：当时所测的培养皿图片、测试结果、培养皿尺寸、样本稀释度、采用的统计工具及所用参数、测试所得的菌落总数、修正情况… … 2) 通过测试环境和测试流程的重现，复核员可以追溯操作员的全部操作，复核测试结果的准确性，达到审计追踪目的。五、 抑菌圈分析模块1. Szone 抑菌圈多模式测量技术? 自动检测：基于抑菌圈轮廓的精确边缘检测，适合边缘清晰、圆形抑菌圈? 拟圆逼近：基于抑菌圈轮廓的圆形拟合逼近，适合边缘破裂、非标准圆形抑菌圈 ? 人工检测：鼠标点击抑菌圈边缘上三点成圆，适合边缘模糊的抑菌圈2. 抗生素效价测定? 一剂量法效价检测：适合美国药典? 二剂量法、三剂量法及合并计算：适合中国药典2020版? 重复性自检：相对误差≤0.01%、重复测量精度 ≤0.002mm ? 均匀性自检：相对误差≤0.05%? 台间测量差异≤0.2%3. 舒巴坦敏感β-内酰胺酶检验? 纯水验证：根据（A）、（B）、（D）产生抑菌圈，D-C≧3， B-A≦3 ，判定系统成立? 自动检测三个平行样本的（A）、（B）、（C）、（D）抑菌圈，并数据导入? 自动计算平行试验平均值，智能判别结果的阴阳性。? 无效报告自动预警六、 仪器规格与配置? 多谱超分辨菌落成像系统主机1台? 菌落分析软件、自动抑菌圈测量软件、抗生素效价测定软件、舒巴坦敏感β-内酰胺酶检验软件? 高端一体电脑:：双核四线程CPU/4G内存/1T硬盘/23"高清屏，Windows 10系统 杭州迅数科技有限公司 浙江省杭州市西湖区西湖科技园西园八路11号B座405室 邮编：310030 联系电话：0571-85125132、85020452、85124851 网址：www.shineso.com E-mail：shineso@shineso.com创新点：?全球首创的平皿大视场多光谱莱因伯格照明系统?具有156种组合照明模式?2100万像素4/3英寸超大面阵CMOS传感器与1.1英寸大靶面高清定焦镜头搭配，画质惊人迅数HD5000 多谱超分辨菌落成像系统

前段时间，速冻食品出问题充斥着大家的眼球，三全、思念、湾仔码头等国内知名速冻食品品牌产品，纷纷被检出金黄色葡萄球菌超标，而先前有品牌公开表示，现行国标，金黄色葡萄球菌是不得检出的，但是当时正在征求意见的新国标里，则可限量检出，如果按照新国标，则产品合格。 近日，卫生部对速冻食品中金黄色葡萄球菌超标的争论有了明确答案。2011年11月24日卫生部发出通知，新国标修订速冻食品中金黄色葡萄球菌将由不得检出变为限量检出。今年12月21日起，新国标将正式实施。卫生部同时也明确，食品安全国家标准《速冻面米制品》(GB19295-2011)，将于2011年12月21日起正式施行。根据速冻面米制品检验和监测情况，借鉴国际组织和相关国家管理规定，新国标采用了国际食品微生物标准委员会采样原则，调整金黄色葡萄球菌、沙门氏菌规定，删除志贺氏菌规定，取消霉菌指标，修订了菌落总数、大肠菌群等指标，使其更具科学性和合理性。据悉，新国标适用范围包括了饺子、馄饨、包子、粽子、汤圆等速冻预包装食品。 金黄色葡萄球菌 (Staphyloccocus aureus Rosenbach) 是人类的一种重要病原菌，隶属于葡萄球菌属（Staphylococcus），有&ldquo 嗜肉菌"的别称，是革兰氏阳性菌的代表，可引起许多严重感染。金黄色葡萄球菌在自然界中无处不在，空气、水、灰尘及人和动物的排泄物中都可找到。因而，食品受其污染的机会很多。美国疾病控制中心报告，由金黄色葡萄球菌引起的感染占第二位，仅次于大肠杆菌。金黄色葡萄球菌肠毒素是个世界性卫生难题，在美国由金黄色葡萄球菌肠毒素引起的食物中毒，占整个细菌性食物中毒的33%，加拿大则更多，占到45%，我国每年发生的此类中毒事件也非常多。金黄色葡萄球菌是人类化脓感染中最常见的病原菌，可引起局部化脓感染，也可引起肺炎、伪膜性肠炎、心包炎等，甚至败血症、脓毒症等全身感染。金黄色葡萄球菌广泛分布于空气、土壤中，人和动物是主要携带者，通常存在于５０％或更多健康人群的鼻腔、咽喉、头发和表皮中，对热敏感，一般烹饪煮熟即可杀灭。通常在金黄色葡萄球菌大于１０的５次方菌落数／克时可能产生致病性肠毒素，引起食物中毒。 金黄色葡萄球菌的普遍存在及操作不当而容易引起中毒，所以，无论是先前的零检出还是目前的限量检出都需要引起食品企业的重视，要加强产品的卫生学检验，而高压灭菌器（高压灭菌锅）是不可或缺的工具。 目前市面上，高压灭菌器品种繁多，有进口的有国产的，产品质量参差不齐。在业内质量口碑最好的当属日本ALP高压灭菌器（东南科仪总代理www.sinoinstrument.com）。日本ALP高压灭菌器具备《进口压力容器生产许可证》 、《进出口锅炉压力容器安全性能检验证书》以及高压灭菌锅上的压力表和减压阀，送当地计量部门计量后取得计量证书。日本ALP高压灭菌器的安全性能卓越，依靠温度传感器来控制温度，并有压力感应器，在温度或压力异常时会自动切断电源，确保安全，相比较单纯的依靠压力表了解内部压力情况，无需人为查控，安全性更高。如需更高级的配置，可选择日本ALP公司生产的CLG系列高压灭菌器，内置了温度和压力双重传感器，可以自动感应温度和压力的对应关系，确保不会有压力异常的情况出现，安全性更强。日本ALP公司的CL系列高压灭菌器，采用机械锁和电子锁双锁装置，如果锁出现故障或盖子没有盖好，仪器不会启动；在灭菌完成后，仪器需降至80度以下及常压，电子锁才能开启，可防止意外烫伤。同时，好的进口高压灭菌锅在内部的金属腔体表面并不会直接外露不锈钢，而是会有一层绝缘镀层，以防止漏电伤人。其它的安全功能，如防止干烧情况的缺水保护功能，电极故障指示，异常时间指示等等。 速冻食品新国标的实施，ALP高压灭菌器给企业带来安全健康的保证，为之检测保驾护航。同时给到消费者放心及健康。 免费服务热线：400-113-3003 广州：天河北路华庭路4号富力天河商务大厦1506-07（510610） 电话：020-83510088（十线）　83510550　83510358 传真：020-83510388 北京：海淀区学清路9号汇智大厦B1217室（100085） 电话：010-62268660　62260833　62238029 传真：010-62238297 上海：延安西路1358号迎龙大厦4A-1室（200052） 电话：021-52586771/72/73 传真：021-52586778杭州：杭州市文二路207号耀江文欣大厦510室（310012） 电话：0571-88068711 88068722 传真：0571-88068733 成都：高升桥路2号瑞金广场2-6E（610041） 电话：028-68597087 028-68597088 传真：028-68597089 西安：陕西省西安市朱雀大街132#阳阳国际B座21106室 (710061) 电话：029-62221598 传真：029-62221599 深圳：深圳市南山区科技园 电话：0755-86623748 传真：0755-86623748 香港：九龙荃湾柴湾角街77-81号致利工业大厦C座16/F 电话：852-25650348 传真：852-24169253 mail:dongnan@sinoinstrument.com http://www.sinoinstrument.com　www.sinoinstrument.cn

利用动态学分析方法为您揭秘细菌生长细菌，一种非常微小的细胞生物，它既可以在生物科技领域中广泛运用，造福于人类，也会给人类带来许多致命的疾病。抗生素的出现帮人类解决了很多问题，肺结核、炭疽等疾病统统都被消灭了，但抗生素是一把双刃剑，过度依赖和滥用抗生素，导致越来越多耐药菌的出现，已经引发了一个全球性的巨大的健康危机。目前，许多制药公司都在研发对抗这些耐药致病菌的有效化合物，而如何筛选和鉴定这些化合物的功效是微生物学家们面临的挑战。本篇技术文章中我们将以粪肠球菌为例，为您讲述如何利用动态学分析方法监测细菌生长。我们使用SpectraMax i3x 多功能微孔板读板机对含有GFP蛋白表达质粒的粪肠球菌菌株OG1RF进行长时间的细菌生长曲线的动态监测。本篇文章中，我们使用 SoftMax® Pro7.0( 或更高版本 ) 数据采集和分析软件进行细菌生长曲线的检测。在SoftMax® Pro7.0软件中可以同时读取细胞生长密度值和 GFP 荧光信号值，然后进行各种动力学数据分析和数据转换，如将GFP信号值归一化为细菌密度。值得一提的是，SoftMax® Pro7软件在做长时间动态监测时支持“暂停”和“恢复”动力学读数功能，从而这个功能方便您在进行长时间实验中，将微孔板取出进行加药处理或其它实验的检测，然后再将微孔板放回仪器内继续之前的长时间监测实验，并且所有数据将会自动以时间序列进行排列。下载请联系美谷分子仪器

卫生部近日发布通知，就《食品安全国家标准食品中致病菌限量》征求意见。新标准对食品中可能出现的沙门氏菌、志贺氏菌、金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌等8种致命菌的含量作了明确规定。 　　新标准规定了肉及肉制品、水产品、蛋制品、粮食制品、豆类制品、焙烤及油炸类食品、糖果、巧克力类及可可制品、调味品、即食食品等17类食品的致病菌含量。其中，对所有采用罐头工艺加工生产的食品，统一规定“罐头工艺生产的食品符合商业无菌”。据卫生部有关人士介绍，该标准在制定过程中，充分考虑到我国的实际情况，结合我国食物中毒的高危食品和致病菌的风险，分析了致病菌对我国各类食品可能产生的风险，同时还参考了国际组织和发达国家的相关标准。

益生菌活菌计数方法现状 随着益生菌功能研究的深入，益生菌越来越多地应用于食品和保健食品中，“ 活菌数”是保证其相关产品质量的一个关键指标。提高益生菌活菌计数方法的准确性和稳定性，可以为企业生产过程中对益生菌相关产品质量的控制、提升食品质量安全水平提供技术支撑，同时可以更好地应用于监管部门的专项抽查、风险监控、执法检验等活动中。 目前较普遍使用的益生菌活菌计数方法是参照国家标准GB 4789.35-2010《食品安全国家标准食品微生物学检验乳酸菌检验》。 食品用乳酸菌主要分为两大类:一类是食品加工用乳酸菌 第二类是具有健康功能的活的乳酸菌，又称益生菌。与食品加工用乳酸菌特征指标不同的是，益生菌产品的活菌数通常都很高，可达到100亿至1000亿以上，而冷冻干燥菌粉原料中活菌数甚至可达到1000亿至10000亿，且生产日活菌添加量与保质期内活菌稳定性通常是益生菌产品最关键的质量标准和功效指标，也是衡量益生菌原料与终端产品市场价值最核心与关键的因素。现行国标在实际应用中发现，进行高活菌密度、某些特殊剂型及配方或含有某些新菌种的益生菌产品的活菌计数时，常常出现结果不稳定或检验结果明显低于生产时活菌添加量的情况。 影响计数结果最主要的影响因素包括稀释液和计数培养基。样品稀释时，三个因素对活菌的准确计数影响最大:稀释比例、稀释液组成和pH值。综述前人的研究经验(2):样品制备的稀释比例为1:5-1:10 稀释后样品悬液的pH值最好与最佳生长pH值-致 因益生菌具有氧敏感性,稀释液中应该含有抗氧化剂。日本研究者Masamichi MUTO和Fumiaki ABE等(2010年)在研究了多种稀释液配方后认为，Mitsuoka' s缓冲液适用于含有严格厌氧的双歧杆菌活菌产品的稀释，该缓冲液含有磷酸盐、半胱氨酸和吐温80,前2个成分分别具有缓冲能力、抗氧化能力，而吐温80则可改善产品在稀释液中的分散能力。(3)目前国标方法选用的培养基如下:以MRS琼脂(厌氧)为总乳酸菌计数培养基 在含有多菌种的产品中，以添加有莫匹罗星抗生素的MRS琼脂(厌氧)作为双岐杆菌选择性计数培养基，以MC琼脂(需氧)为嗜热链球菌选择性计数培养基，以总乳酸菌数减去双歧杆菌和嗜热链球菌数为乳杆菌数。但是,近年来,综述多个研究结果(2, 3)，RCM培养基可提高冷冻干燥双歧杆菌的活菌计数准确性。 此外，本实验室多年来采用GB 4789 .34-2003《食品卫生微生物学检验双岐杆菌检验》中推荐的TPY琼脂培养基用于乳酸菌的计数，发现其用于益生菌产品的活菌计数结果较稳定。 为此，本研究比较了两种稀释液及几种计数培养基对两类代表性益生菌产品(冷冻干燥活菌粉原料和益生菌颗粒产品)活菌计数结果的影响，以确定更符合益生菌产品特点的活菌计数方法。

近日，英国《每日邮报》援引相关机构的研究结果报道：公厕座便器上每平方英寸(合6.45平方厘米)“潜伏”大约80个细菌，而轿车方向盘、变速杆和后座等部位的同样面积上所检测到的细菌数量接近800个，几乎是公厕座便器的10倍。 　　汽车真有这么脏吗?根据有关机构的研究表明，车内空气环境质量之恶劣，堪比垃圾填埋场，并且科研人员还在汽车内检测到了10级致病菌中的三甲选手。 　　中国科学院所属中科理化环境分析研究中心通过气象色谱法、称重法、撞击法、擦拭法等四种实验方法，对车辆的TVOC(总挥发性有机化合物)、可吸入颗粒物、菌落总数和菌种等情况涉及汽车空气状况的物质进行了全面的检测与研究，并最终发布了一份“汽车空气质量检测报告”。 　　据悉，本次汽车空气质量检测，共检测了50个样品，而这些样品汇集了包括：大众、通用、丰田、本田、马自达等在内的数十个主流汽车品牌旗下的主力车型，至于车辆的使用年限则从1年到15年不等，相对应的行驶里程则在1-27万公里之间。可以说，本次检测的样品基本覆盖了我国当下汽车使用的现状，而由此所获得的结果。应该说，也极具真实性与权威性。 　　根据检测报告显示，除可吸入颗粒物基本符合国家标准(0.15mg/)外，TVOC、菌落总数情况堪忧。特别是菌落总数方面的情况让人触目惊心。根据《国家室内空气质量标准》，TVOC应0.60mg/，但本次检测的结果，汽车内TVOC超标30%(平均数) 在菌落总数方面，国家标准为1000cfu/，而实际结果为2174.75cfu/(平均值)，超标近174.75%。如果与更严格的新加坡标准相比，此次测得的车内空气质量更是超标了近449.5%。此外，研究人员还在某部车内测得了22603cfu/的惊人数据，要知道垃圾填埋场的标准也仅为2500cfu/(新加坡标准)。 　　在中科理化环境分析研究中心进行的汽车空气质量全面检测中，研究人员不仅检测了可吸入颗粒物、TVOC和菌落总数的数据，并且对车内菌种的情况，进行分析。根据报告显示，研究人员从样本车内检测出，包括：金黄葡萄球菌、大肠杆菌、霉菌、绿脓杆菌和肺炎链球菌在内的多种病菌。此外，研究人员综合各类因素后，认为车内应该还会存在溶血性链球菌、白色念珠菌、沙门氏菌、蜡质芽孢杆菌、节杆菌和感冒病毒等在内的数十种病菌。 　　在诸多菌类中金黄葡萄球菌、肺炎链球菌和溶血性链球菌这三种病菌应该引起我们的重视。根据细菌的致病性，通常可以将致病细菌封为10个等级，而我们刚刚说到的那三种病菌，在其中恰恰位列三甲。 　　金黄色葡萄球菌是人类的一种重要病原菌，隶属于葡萄球菌属，可引起局部化脓感染，也可引起肺炎、伪膜性肠炎、心包炎等，甚至败血症、脓毒症等全身感染。并且有“嗜肉菌"的别称。根据统计，在美国由金黄色葡萄球菌肠毒素引起的中毒，占整个细菌性食物中毒的33%，加拿大则更多，占到45%，我国每年发生的此类中毒事件也非常多。 　　肺炎链球菌简称肺炎球菌，它是引发人类大叶性肺炎的元凶。根据《病原微生物生物实验室生物安全管理条例》中的有关规定，人间传播的微生物名录(待颁布)肺炎链球菌属于三类，也就是最危险的一类。 　　溶血性链球菌又称沙培林对热，可引起皮肤、皮下组织的化脓性炎症、呼吸道感染、流行性咽炎的爆发性流行以及新生儿败血症、细菌性心内膜炎、猩红热和风湿热、肾小球肾炎等病态反应。 　　相比TVOC和菌落总数的超标，在专家看来，金黄葡萄球菌、肺炎链球菌和溶血性链球菌的大量存在，是对健康的更大危险，作为位居致病细菌三甲的细菌，它们不仅致病性更强，同时被灭杀的难度也更大。可以说，它们的存在就如同一个个隐形的杀手，对人民的健康造成了直接，但又是相当隐蔽的危险。

2013.8.21，FDA批准美国第一个质谱仪检测系统用于自动识别已知能导致人体严重疾病的细菌和酵母的上市。该质谱仪系统VITEK MS能鉴定出193不同微生物，可在一系列自动化测试过程中进行192种不同的测试，而且每个测试只需要大约一分钟。 　　谱仪系统VITEK MS可以鉴别诸如念珠菌、隐球菌和马拉色氏霉菌属组的酵母茵和葡萄球菌科、链球菌科、肠杆菌科、假单胞菌科和类杆属组的细菌，这些酵母茵和细菌跟皮肤感染、肺炎、脑膜炎和血液感染有关。HIV或AIDS、癌症治疗或器官移植后的抗排斥治疗损害或削弱免疫系统的患者特别容易受到这些细菌感染。 　　VITEK MS采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术,该技术利用激光打破酵母和细菌标本成小颗粒,形成一个独特的微生物模型。VITEK MS在检测系统数据库自动将这些微生物模型与193种已知的酵母和细菌进行比对，从而鉴别微生物。 　　此与其他要求大量微生物繁殖来检测的鉴别方法相比,质谱分析方法只需要少量的酵母或细菌繁殖,所以只要微生物生长到可视程度后就可以马上开始检测，通常在在18到24小时内。传统的方法需要五天才能得出相同的鉴别结果。 　　FDA通过新型分类程序审查了VITEK MS,这是对一些新型低中度风险且不完全等同于已知合法市售的医疗设备的调控途径。 　　VITEK MS再临床上用于鉴别由人体标本培养得到的微生物，它与联合其它临床和实验室发现相互结合，从而辅助诊断细菌和真菌感染。 　　VITEK MS的制造商为北卡罗来纳州达勒姆的生物梅里埃公司。

上海家乐福超市紧急下架问题批次产品 　　“思念”未了 三全“水饺”也被曝细菌超标 　　“思念”水饺被检出金黄色葡萄球菌事件余波未了，三全水饺却也跟着传来“不安全”的信息。日前，三全水饺被广州市工商局查出细菌超标，有意思的是这种细菌和“思念”如出一辙，也是金黄色葡萄球菌。虽然三全方面表示已经追溯召回问题产品，但部分超市采购人员表示并没接到企业通知。上海家乐福表示第一时间已要求对问题批次产品撤柜。 　　不久前，北京市工商局在对思念牌一批次水饺的抽检中，检测出了金黄色葡萄球菌 而根据现行的国家标准规定，速冻水饺“不得检出”该菌种。这批水饺也立即被下架召回。思念方面在接受记者采访时则表示，查出细菌的原因主要是天气较热，在物流环节出了问题导致这一批次产品不合格，并对此表示道歉，上海方面家乐福等超市第一时间对问题批次产品予以下架。 　　想不到，该事件余波未了，三全水饺日前也被广州市工商局查出含有金黄色葡萄球菌，这两款问题产品分别是“三全灌汤水饺(猪肉玉米蔬菜)”、“三全灌汤水饺(三鲜)”。同时，被查出细菌超标的还有“海霸王经典包心鱼丸”。消息一出，三全食品方面回应称，问题产品系今年8月工商局一次例行超市抽检的样品，三全食品获悉抽检结果的当天就将该批次产品全部下架、封存，随即启动产品回溯机制，并将同批次全部产品统一追回并销毁。对方在表达歉意的同时，也强调公司自从8月开始就进一步加强了质量管控力度，尤其在原料采购、制作工序等重要环节大幅增加抽检频次和抽样数量。 　　虽然三全方面表示已经及时追溯召回这些问题产品，但沪上部分超市采购人员表示并未接到相关的通知。前次对思念问题水饺第一时间采取下架措施的上海家乐福昨天告诉记者，三全的相关召回通知是否送达收悉还需进一步确认。不过，根据此次监测结果，家乐福方面已于第一时间发布全国撤架通知，要求所有相关门店将涉及品牌的问题批次下架，包括三全，海霸王等产品。 　　这么多知名品牌连续被曝所生产的食品含有金黄色葡萄球菌，无疑让消费者担心不已。对此，有关专家指出，无需对“金黄色葡萄球菌”过度恐慌，只要在70℃以上温度的水里煮熟，即可将其杀死，所以对于生制的速冻食品，买回后应按照包装上的说明进行保存和蒸煮，因此市民不必过度担心。

左氧氟沙星滴眼液为微黄色至淡黄色或淡黄绿色的澄明液体。适用于葡萄球菌属、链球菌属、肺炎球菌、细球菌属、肠球菌属等所引起的眼睑炎、睑腺炎、泪囊炎、结膜炎、睑板腺炎、角膜炎等眼部疾病。为防止滴眼液在使用和保存过程中被微生物污染，往往会添加适量的抑菌剂，因此，抑菌剂的合理使用和质量控制已成为保障滴眼液安全性、有效性的关键问题之一。月旭科技为大家带来左氧氟沙星滴眼液中抑菌剂的含量测定方案。色谱条件色谱柱：月旭Xtimate® C18（4.6×250mm，5μm）。流动相：水相（每1000mL水中加入三乙胺4mL和磷酸7mL）:乙腈=35:65；检测波长：214nm；柱温：30℃；流速：1.0mL/min；进样量：20μL。谱图和数据1. 空白溶剂2. 苯扎溴铵对照品溶液3. 供试品溶液满量程图局部放大图结论使用月旭Xtimate® C18（4.6×250mm，5μm）色谱柱，在此色谱条件下，可以满足检测要求。产品信息

广泛用于洗手液、肥皂、牙膏等卫生用品 美国两大机构正在调查其安全性 　　广告里，当洗手液、肥皂、牙膏等卫生用品标榜“能杀死更多细菌”时，是不是更能引起你的注意?不过，杀菌却不一定安全。 　　美国《纽约时报》今晨报道称，这些卫生用品中的常见活性成分——三氯生的安全性遭到质疑，美国食品药品监督管理局(FDA)正在对其安全性进行审查。 　　广泛用于洗手液、肥皂、牙膏等卫生用品 　　报道称，三氯生是洗手液、肥皂、牙膏等卫生用品中常见的活性成分，能有效杀灭细菌等微生物。40多年前，三氯生面世，当时主要用于手术前的清洗。 　　目前，三氯生被广泛应用于肥皂、厨房砧板，以及牙膏等产品。高露洁全效牙膏就含有该成分。 　　美国疾病控制和预防中心指出，现在三氯生的使用非常普遍。 　　报道称，有研究显示，在动物实验中，三氯生可能会改变体内的激素分泌，或导致细菌产生抗药性。因此，一些消费者组织和美国国会议员要求禁止在杀菌产品中添加这种化合物。 　　此外，FDA曾表示，含三氯生的肥皂和普通的肥皂比起来，功效上没有什么区别。不过，这一结论自然引起制造商的不满。 　　三氯生安全性 遭美两大机构调查 　　报道称，几个月前，FDA曾表示，将对三氯生的安全性进行研究。不过FDA表示，研究结果什么时候能出炉尚不确定。 　　此外，美国环境保护署也正在对三氯生的安全性进行调查。 　　在美国，整个洗手液市场达到7.5亿美元，其中抗菌剂和抗菌洗手液就占了一半，因此三氯生的调查对这些制造商而言是个相当危险的信号。 　　其实，几十年前科学家就曾对三氯生的安全性表示过担忧。 　　去年，马萨诸塞州众议员爱德华马基曾向FDA施压，要求其对三氯生在洗手液等产品中的使用进行管理。 　　与此同时，爱德华马基呼吁禁止在洗手液、和食品接触以及儿童产品中使用三氯生。 　　美国第五大畅销洗手液品牌Dial Complete表示，目前并没有确凿证据证明三氯生对人体有害。相反的，研究显示，三氯生确实能有效杀灭细菌。 　　由于消费者组织已对三氯生发出反对的声音，一些企业已经不再使用该成分。不过，报道称，高露洁仍将继续使用三氯生，因为高露洁全效牙膏已经证明对抵抗牙龈炎有效。 　　●记者追访 　　是否安全需长期研究 　　上午，朝阳医院职业病与中毒科主任郝凤桐接受本报记者采访时表示，由于三氯生被广泛地应用于生活用品中，它的安全性要根据它可能存在的风险来判断，例如一些日常生活用品可能会污染食品。 　　不过，它的安全性等问题，需要进行长期的研究，通过一定人群的数据积累，才能进行评价。 　　三氯生是二氯苯氧氯酚的俗称，是外用高效抗菌消毒剂，可杀灭金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等细菌及白色念珠菌等真菌，对病毒(如乙型肝炎病毒等)也有抑止作用。

对速冻食品中金黄色葡萄球菌超标的争论有了明确答案。昨日(11月25日)，卫生部发出通知，今年12月21日起，新国标将正式实施，这意味着，速冻食品中，金黄色葡萄球菌将由不得检出变为限量检出。 　　此前，三全、思念、湾仔码头等国内知名速冻食品品牌产品，纷纷被检出金黄色葡萄球菌超标，而有品牌公开表示，现行国标，金黄色葡萄球菌是不得检出的，但是当时正在征求意见的新国标里，则可限量检出，如果按照新国标，则产品合格。 　　而卫生部昨日的通知，也明确，食品安全国家标准《速冻面米制品》(GB19295-2011)，将于2011年12月21日起正式施行。卫生部表示，新标准根据致病菌风险评估结果，调整了沙门氏菌、金黄色葡萄球菌的限量规定，使其更具科学性和合理性。 　　据悉，新国标适用范围包括了饺子、馄饨、包子、粽子、汤圆等速冻预包装食品。卫生部有关负责人说，在2011年12月21日前，鼓励企业按照新标准组织生产经营。自2011年12月21日起，企业必须按照新标准组织生产经营。 　　■ 回应 　　三全食品：已召回并销毁不合格产品 　　在《速冻面米制品》食品安全国家新标准中，金黄色葡萄球菌的限制数量由原来的“不得检出”改为限量检出。对此，三全食品相关负责人昨日表示，对新国标不便做出评论。 　　对于新国标的发布，有消费者担心，企业前期被曝光检测出含有金黄色葡萄球菌的产品，在新国标发布后已经属于合格产品，那前期企业召回的产品是否会继续流向市场，未召回完的产品是不是就不再继续召回了? 　　三全上述负责人昨日表示，依照国家规定，企业已经对检测出的几个不合格批次产品在全国范围内启动了召回程序，召回的产品全部销毁。“已检测出不符合旧国标的产品就要全部召回，召回的产品更不会二次流向市场。”该负责人称。 　　■ 追问 　　“金葡菌”检测标准是否降低? 　　检验方法已修订，新标准“更科学合理” 　　多品牌速冻食品被查出金黄色葡萄球菌超出现行标准以来，很多地方的超市采取了下架措施，同时，食品标准也再次陷入“降低门”的质疑中。昨日，作为标准的制定者之一，中国疾控中心营养与食品安全所研究员刘秀梅说，降低的结论是不对的。 　　刘秀梅说，过去，在微生物检验方法中没有定量的检测方法，也就不可能规定检出这个食品里含有多少致病菌。但是目前，随着引进一些微生物定量检测方法，金黄色葡萄球菌检验方法已被修订，在这一背景下，就可以给金黄色葡萄球菌规定限量值。所以，新标准在采样范围、采样量和限量要求中，应该是更科学、更合理的。 　　新国标是否被企业“绑架”? 　　“标准制定借鉴国际相关规定，但也要考虑国情” 　　企业召回的不合格速冻食品，在12月21日后按新国标可能又合格了。有市民质疑，新国标是否是相关大企业提出? 　　对此，刘秀梅表示，标准修订的全过程是认真推敲的，指标并不是企业提出来，是专家借鉴了国际食品法典和国际食品微生物标准委员会的规定。 　　该标准从2006年立项到2008年完成了初步的版本。参与单位是中国食品科学技术学会等。“在这个过程中，有记载的研讨会至少有7次，参与标准研讨和提出意见的有300多人，我们的编制说明就有25页。” 　　不过刘秀梅坦言，制定的食品安全标准，保证安全是第一，但还要考虑到我国国情和行业产业的发展。她说，国际食品法典委员会2011年新修订的程序手册上说，“(包括标准在内)的风险管理是一个与各利益相关方磋商后，权衡各种政策方案……并在必要时，选择适当的预防和控制措施的过程。”

超级病菌是一种耐药性细菌。这种超级病菌能在人身上造成浓疮和毒疱，甚至逐渐让人的肌肉坏死。更可怕的是，抗生素药物对它不起作用，病人会因为感染而引起可怕的炎症，高烧、痉挛、昏迷直到最后死亡。这种病菌的可怕之处并不在于它对人的杀伤力，而是它对普通杀菌药物——抗生素的抵抗能力，对这种病菌，人们几乎无药可用。2010年，英国媒体爆出：南亚发现新型超级病菌NDM-1，抗药性极强，可全球蔓延。 　　超级病菌的历史 　　1920年，医院感染的主要病原菌是链球菌。 　　1960年，产生了耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌(MRSA)，MRSA取代链球菌成为医院感染的主要菌种。耐青霉素的肺炎链球菌同时出现。 　　1990年，耐万古霉素的肠球菌、耐链霉素的“食肉链球菌”被发现。 　　2000年，出现绿脓杆菌，对氨苄西林、阿莫西林、西力欣等8种抗生素的耐药性达100% 肺炎克雷伯氏菌，对西力欣、复达欣等16种高档抗生素的耐药性高达52%-100%。 　　2010年,研究者发现携有一个特殊基因的数种细菌具有超级抗药性，可使细菌获得超级抗药性的基因名为NDM-1。同年10月巴西大规模爆发KPC超级病菌导致多名感染者丧生。 　　抗生素的发展历史 　　1877年，Pasteur和Joubert首先认识到微生物产品有可能成为治疗药物，他们发表了实验观察，即普通的微生物能抑制尿中炭疽杆菌的生长。 　　1928弗莱明爵士发现了能杀死致命的细菌的青霉菌。青霉素治愈了梅毒和淋病，而且在当时没有任何明显的副作用。 　　1936年，磺胺的临床应用开创了现代抗微生物化疗的新纪元。 　　1944年在新泽西大学分离出来第二种抗生素链霉素，它有效治愈了另一种可怕的传染病：结核。 　　1947年出现氯霉素，它主要针对痢疾、炭疽病菌，治疗轻度感染。 　　1948年四环素出现，这是最早的“广谱”抗生素。在当时看来，它能够在还未确诊的情况下有效地使用。今天四环素基本上只被用于家畜饲养。 　　1956年礼来公司发明了万古霉素，被称为抗生素的最后武器。因为它对G+细菌细胞壁、细胞膜和RNA有三重杀菌机制，不易诱导细菌对其产生耐药。 　　1980年代喹诺酮类药物出现。和其他抗菌药不同，它们破坏细菌染色体，不受基因交换耐药性的影响。 　　1992年，这类药物中的一个变体因为造成肝肾功能紊乱被美国取缔，但在发展中国家仍有使用。 　　超级病菌产生的原因 　　基因突变是产生此类细菌的根本原因。但在自然状况下，变异菌在不同微生物的生存斗争中未必处于优势地位，较易被淘汰。 　　抗生素的滥用则是这类细菌今日如此盛行的导火线!由于人类滥用抗生素，使得原平衡中的优势种被淘汰，而这种“抗抗生素”的细菌则树立成长的成为了优势种，取得了生存斗争的优势地位，从而得以大量繁衍、传播。 　　综上，基因突变是产生此类细菌的根本原因，抗生素的滥用对微生物进行了定向选择，导致了超级细菌的盛行。所以，一方面，我们在寻找解决途径的同时，必须注意对抗生素等物质的使用。否则，超级细菌的生存状况将迅速从“优势”走向“盛世”。另一方面，我们应该积极探索，继续寻找解决方案，而不能过分悲观，因为优势与盛世的距离从不小于劣势与失败。 　　超级病菌怎样传播？ 　　(1)经血传播：如输入全血、血浆、血清或其它血制品，通过血源性注射传播 　　(2)胎源性传播：如孕妇带毒者通过产道对新生儿垂直传播 　　(3)医源性传播：如医疗器械被乙肝病毒污染后消毒不彻底或处理不当，可引起传播 用1个注射器对几个人预防注射时亦是医源性传播的途径之一 血液透析患者常是乙型肝炎传播的对象 　　(4)性接触传播：近年国外报道对性滥交、同性恋和异性恋的观察肯定证实 　　(5)昆虫叮咬传播：在热带、亚热带的蚊虫以及各种吸血昆虫，可能对病毒传播起一定作用 　　(6)生活密切接触传播：与病毒携带者长期密切接触，唾液、尿液、血液、胆汁及乳汁，均可污染器具、物品，经破损皮肤、粘膜而传播。

上一篇推文，我们介绍了WIGGENS的CGQ生物量在线监测系统监测微生物或细胞的生长阶段，本期我们介绍生物量监测对微生物（细胞）效能评价/菌种筛选的应用。 首先我们来看一篇使用CGQ系统监测生物量的已发表文献。 Bruder et al. (2016):Parallelised onlinebiomass monitoring in shake flasks enables efficient strain and carbon sourcedependent growth characterisation of Saccharomycescerevisia (MicrobialCell Factories). Bruder对酿酒酵母的高效菌株（CEN.PK2-1C）和碳源依赖性生长特性监测。 上图中生物量曲线（OD值）是CGQ系统实时在线测量。葡萄糖浓度和酒精浓度用在线生化分析仪进行实时在线监测的数据。 从上图的数据曲线中我们可以清晰的看出生物生长量与培养基中葡萄糖浓度和酒精产量三者的关联性。发酵过程希望使用的菌种是能够更高效率的将糖类等底物转化为酒精。底物与产物的效能比是对酿酒酵母菌株效能的最直接评价。 CGQ和生化分析仪的在线监测联合使用，可以对菌种的综合效能进行直观评价。 对微生物或细胞的突变体研究，是寻找高效菌种的一种有效手段。突变体与野生型的对比研究，用于对突变体进行效能评估。 上图是德国最格赖夫斯瓦尔德大学（成立于1456年），使用CGQ系统对Staphylococcus aureus（金黄葡萄球菌）野生型和突变体生物量分析。 作为菌种筛选的有力工具，CGQ系统可以对同一培养条件下，或不同培养条件下的生物量进行实时监控，根据生物量的监测数据对菌种筛选提供数据支持。 CGQ与生化分析仪同时使用，可以对多参数相关性进行综合评估，有效的拓展了应用范围，可以通过多参数变化，对微生物效能进行综合评价。更多的CGQ生物量监测应用，请参考如下文献：[1]Tripp et al (2017):Establishing a yeast-based screening system for discovery of human GLUT5inhibitors and activators (Nature – Scientific Reports)[2]Bruder, S. &Boles, E. (2017): Improvement of the yeast based (R)-phenylacetylcarbinol productionprocess via reduction of by-product formation (Biochemical EngineeringJournal).[3]Gottardi et al. (2017):De novo biosynthesis of trans-cinnamic acidderivatives in Saccharomycescerevisiae (AppliedMicrobiology and Biotechnology).[4]Bracharz et al. (2017):The effects of TORC signal interference on lipogenesis in theoleaginous yeast Trichosporonoleaginosus (BMCBiotechnology). [5]Bruder et al. (2016):Parallelised onlinebiomass monitoring in shake flasks enables efficient strain and carbon sourcedependent growth characterisation of Saccharomycescerevisia (MicrobialCell Factories).

各种肉类、巧克力、饮料等内含沙门氏菌、金黄色葡萄球菌的限量值，首次有了明确的标准。昨日，卫生部发布征求食品安全国家标准《食品中致病菌限量》的征求意见稿，该标准拟自正式发布后6个月施行，这是我国首次制定食品中致病菌限量标准。 　　标准制定考虑潜在危害 　　据介绍，在标准制定过程中，充分考虑了致病菌或其代谢产物对健康造成实际或潜在危害的证据，原料中致病菌状况，加工过程对致病菌状况的影响，贮藏、销售和食用过程中致病菌状况的变化，食品的消费人群，致病菌指标应用的成本/效益分析等因素。 　　本次标准制定中梳理分析的标准共计562项。 　　标准提出了沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌、单核细胞增生李斯特氏菌、大肠埃希氏菌等几种主要致病菌，在对肉制品、水产制品、即食蛋制品、粮谷类制品、巧克力类及可可制品、即食加工果蔬、饮料及冷冻饮品类、即食调味品、坚果籽实制品共9类食品进行了限量要求。 　　其中，公众比较熟悉的沙门氏菌在各类食品中的限量值均为0,也就是说，样品中不得检出这类病菌，金黄色葡萄球菌在各类食品中的限量则均为100CFU/g. 　　乳制品不含在该标准 　　此外卫生部表示，非即食生鲜类食品中的致病菌污染主要通过生产加工过程标准进行控制，不在本标准中进行规定 乳与乳制品已清理完毕，也不包含在该标准之中。 　　卫生部表示，食品中致病菌限量标准是食品安全基础标准的重要组成部分。工作组参考分析了欧盟、澳新、日本、美国、香港、台湾等地区食品中的致病菌限量标准及其规定制定了这一标准。

根据《食品安全法》规定，我部组织制订了《食品安全国家标准 食品中致病菌限量》(征求意见稿)，现公开征求意见。请于2011年2月16日前按以下方式反馈意见：传真010-67711813或电子邮箱foodsafetystandards@gmail.com. 　　附件： 　　1.《食品安全国家标准 食品中致病菌限量》(征求意见稿).doc 　　2.《食品安全国家标准 食品中致病菌限量》(征求意见稿)编制说明.doc 　　二○一○年十二月十六日 　　标准表1 食品中致病菌限量标准 食品 致病菌指标 采样方案及限量 （若非指定，均以/25 g或/25 mL表示） 检验方法 备注 n c m M 肉及肉制品 沙门氏菌 5 0 0 - GB 4789.4 - 单核细胞增生李斯特氏菌 5 0 0 - GB 4789.30 适用于熟肉制品和即食生肉制品。 金黄色葡萄球菌 5 0 100 CFU/g - GB 4789.10 空肠弯曲菌 5 0 0 - GB/T 4789.9 适用于预制肉制品。 大肠埃希氏菌O157:H7/NM 5 0 0 - GB/T 4789.36 适用于预制牛肉制品。 水产品 沙门氏菌 5 0 0 - GB 4789.4 - 单核细胞增生李斯特氏菌 5 0 0 - GB 4789.30 适用于生食水产品和熟制水产品。 副溶血性弧菌 5 0 0 - GB/T 4789.7 适用于熟制水产品。 副溶血性弧菌 5 0 100 MPN/g - 适用于生食水产品和预制水产品。 蛋制品 沙门氏菌 5 0 0 - GB 4789.4 - 粮食制品 沙门氏菌 5 0 0 - GB 4789.4 - 单核细胞增生李斯特氏菌 5 0 0 - GB 4789.30 适用于熟制粮食制品。 金黄色葡萄球菌 5 1 100 CFU/g 1000 CFU/g GB 4789.10 适用于熟制粮食制品。 金黄色葡萄球菌 5 1 1000 CFU/g 10000 CFU/g 适用于生制粮食制品。 豆类制品 沙门氏菌 5 0 0 - GB 4789.4 - 金黄色葡萄球菌 5 0 0 - GB 4789.10 单核细胞增生李斯特氏菌 5 0 0 - GB 4789.30 焙烤及油炸类食品 沙门氏菌 5 0 0 - GB 4789.4 - 金黄色葡萄球菌 5 0 0 - GB 4789.10 糖果、巧克力类及可可制品 沙门氏菌 5 0 0 - GB 4789.4 - 蜂蜜及其制品 沙门氏菌 5 0 0 - GB 4789.4 - 单核细胞增生李斯特氏菌 5 0 0 - GB 4789.30 加工水果 沙门氏菌 5 0 0 - GB 4789.4 - 金黄色葡萄球菌 5 0 0 - GB 4789.10 藻类制品 沙门氏菌 5 0 0 - GB 4789.4 - 副溶血性弧菌 5 0 0 - GB/T 4789.7 单核细胞增生李斯特氏菌 5 0 0 - GB 4789.30 饮料类 沙门氏菌 5 0 0 - GB 4789.4 - 金黄色葡萄球菌 5 0 0 - GB 4789.10 冷冻饮品 沙门氏菌 5 0 0 - GB 4789.4 - 金黄色葡萄球菌 5 0 0 - GB 4789.10 发酵酒及其配制酒 沙门氏菌 5 0 0 - GB 4789.4 - 金黄色葡萄球菌 5 0 0 - GB 4789.10 调味品 沙门氏菌 5 0 0 - GB 4789.4 - 金黄色葡萄球菌 5 0 0 - GB 4789.10 适用于除香辛料外的其它调味品。 副溶血性弧菌 5 0 0 - GB/T 4789.7 适用于水产调味品。 脂肪，油和乳化脂肪制品 沙门氏菌 5 0 0 - GB 4789.4 适用于含水乳化油脂(大于1%为限值)。 金黄色葡萄球菌 5 0 0 - GB 4789.10 果冻 沙门氏菌 5 0 0 - GB 4789.4 - 金黄色葡萄球菌 5 0 0 - GB 4789.10 即食食品 沙门氏菌 5 0 0 - GB 4789.4 适用于表中未列出的其他即食食品 单核细胞增生李斯特氏菌 5 0 0 - GB 4789.30