请问用酶标仪怎么检测奶牛饲料中的蛋白与黄曲霉素??
专家好:如何对尿液中的百生肼,氧氟杀星和卷曲霉素的测定?
国标有要求饲料香味剂中必须检测黄曲霉毒素B1吗?如果要求检测,我想请教一下你们检测出来的大致有几个ppb的黄曲霉毒素B1含量?我们公司品管经理要求我们化验室给他检测香味剂中黄曲霉毒素B1,我作出来2.03ppb,用的拜发96孔试剂盒酶联免疫吸附法做的,结果那品管经理怀疑我的结果,郁闷!所以希望大家建言,谢谢!
【内容摘要】赭曲霉毒素是一种无色结晶化合物,溶于极性溶剂和稀的碳酸氢钠水溶液中,微溶于水。该化合物相当稳定,在乙醇中置冰箱避光保存一年以上而不破坏。有较高的耐热性,制罐头的豆子经漂白、加盐及在番茄酱中加热1h后,仍然能存留56%的赭曲霉毒素。赭曲霉毒素A是一种与人类健康密切相关的霉菌毒素,是人类可能的致癌剂。除了潜在的遗传毒性和致癌性外,赭曲霉毒素A也是一种具有免疫抑制、神经毒性以及致畸性的物质。赭曲霉毒素最初是从南非的赭曲霉毒株中分离出来的,由赭曲霉(Asper—gillus ochracets)、洋葱曲霉(Aspergillus alliaceus)、鲜绿青霉(PencillilJⅡlviridicatum)、徘徊青霉等代谢产生,包括7种结构类似的化合物,赭曲霉毒素A是其中毒性最强的物质,是自然界中的主要天然污染物。在一些国家的食品中,赭曲霉毒素A的污染率可达2%~30%。该化合物主要表现为肾脏毒性。在巴尔干地方性肾病流行区,6%~18%人群的血液中能检出赭曲霉毒素A。(1)结构与性质赭曲霉毒素是分子结构类似的一组化合物,包括赭曲霉毒素A、B、C、D和a等,其中赭曲霉毒素A是主要的污染物。赭曲霉毒素是一种无色结晶化合物,溶于极性溶剂和稀的碳酸氢钠水溶液中,微溶于水。在紫外光下赭曲霉毒素A呈绿色荧光。该化合物相当稳定,在乙醇中置冰箱避光保存一年以上而不破坏。有较高的耐热性,制罐头的豆子经漂白、加盐及在番茄酱中加热1h后,仍然能存留56%的赭曲霉毒素,赭曲霉毒素的化学结构如图4—2所示。(2)食品中赭曲霉霉素的来源与分布赭曲霉毒素是曲霉属和青霉属的某些菌种产生的二次代谢产物,产毒菌种见表4—2。[color=#075
最近看报纸上报到这方面的问题比较多,感觉将黄曲霉和黄曲霉毒素混为一谈,还说巴氏杀菌不能杀死黄曲霉毒素,哎我个人理解,黄曲霉是一种霉菌,是微生物,黄曲霉毒素是由其产生的一种真菌毒素,是一种化学物质,怎能用杀菌去杀死化学物质呢?
跪求强酸性阳离子交换树脂分离纯化黑曲霉发酵液中的柠檬酸方法,使用仪器核酸蛋白检测仪(波长多少?)实验步骤?实验所用洗脱剂?洗脱下来之后怎么检测柠檬酸含量?如何证明是柠檬酸?如何侧柠檬酸含量?。。。无语无助ing。。。目前在用280纳米核酸蛋白检测仪,恒流泵,记录仪,百分之一氨水洗脱,,下一步如何测柠檬酸含量啊啊啊啊,,,,,
黄曲霉毒素的污染在世界范围内广泛存在:包括谷物、坚果和籽类以及牛乳等,尤以玉米、花生被污染的程度最严重。其主要原因是食物在田间未收获前被黄曲霉等产毒菌浸染,在适宜的气温和湿度等条件下繁殖并产毒,或未经充分干燥,在储藏期间产生大量毒素。那么粮油如防中招呢?1.大米:应放在干燥、通风、阴凉的地方,不宜存放在木箱中,最好盛放在瓷缸内。不要将大米放在日光下暴晒,也不能放冰箱冷藏。怕大米生虫,可把整粒花椒拌入大米中。怕发霉,可按1公斤干海带保存100公斤粮食的比例,将其放入粮食中,七天后取出晒干,可反复利用。2.面粉:除避光通风、阴凉干燥保存外,可将整粒花椒、茴香用纱布包好,放在面粉表层。正常情况下,面粉最长可保存1年,秋季加工面粉可放到次年4月,冬季加工的可到次年5月,夏季加工的一般只能保存1个月左右。3.食用油:要采购正规厂家生产的食用油。存放时注意不要受阳光照射,不要放在火炉旁,应存放在阴凉处并盖好容器盖子,长时间塑料桶储油会使油产生异味。为防止油脂变质,可每500克油加入一粒维生素E胶囊,可使食用油一年内不氧化变味,还能增加营养。
各位大侠,我在用柱前衍生,高效液相做黄曲霉检测时,回收率只有百分之七十多,这样子能接受么?请问有用液相,柱前衍生做黄曲霉的前辈,你们的回收率是多少呀?我是用免疫亲和柱净化后再衍生的,能指点一下检测黄曲霉有那些地方是比较关键的控制点么?帮忙提高一下回收率,谢谢
[img=,690,690]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/07/202407090908329905_3489_5604214_3.jpg!w690x690.jpg[/img] 粮油小麦黄曲霉毒素检测仪的优点远不止我们已知的那些。首先,其高精度和准确性为食品安全检测提供了强有力的保障。这款仪器采用先进的生物传感技术和光学检测技术,能够准确、快速地检测小麦中的黄曲霉毒素含量,即使是微量的毒素也难以逃过它的"火眼金睛"。 其次,检测仪的操作简便性也极大地提高了检测效率。传统的检测方法通常需要复杂的操作步骤和专业的技术人员,而这款检测仪则采用一键式操作,即使是初学者也能在短时间内上手,降低了检测难度和人工成本。 此外,粮油小麦黄曲霉毒素检测仪还具有强大的数据处理能力。它能够实时记录检测数据,并通过内置的软件对数据进行分析和统计,帮助用户更好地了解小麦的品质和安全性。同时,这款仪器还支持数据导出和打印功能,方便用户进行数据的保存和分享。 最后,粮油小麦黄曲霉毒素检测仪的便携性也是其一大亮点。它采用小巧轻便的设计,方便用户随时随地进行检测。无论是在农田、仓库还是加工厂,只要需要检测小麦的黄曲霉毒素含量,这款仪器都能迅速投入使用,为食品安全保驾护航。 综上所述,粮油小麦黄曲霉毒素检测仪以其高精度、简便操作、强大的数据处理能力和便携性等优点,成为了保障食品安全的重要工具。
在外聚餐时,餐桌上常会有赠送的餐前小吃——花生米,不过,如果你在金灿灿的花生米中无意夹到一颗变黑的,这时可千万不要往嘴里送,因为它们有可能已经被黄曲霉毒素污染而可能会对人体产生一定的危害。那什么是黄曲霉毒素呢?http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/07/201507071036_553899_2984502_3.jpg1黄曲霉毒素 黄曲霉毒素是一种由黄曲霉和寄生曲霉等真菌经过聚酮途径产生的次生代谢产物,是一组结构类似的化合物总称。迄今为止,已发现的黄曲霉毒素至少包含有黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1、M2、P1、Q1、H1、GM、B2a、G2a及毒醇等20种左右结构相似化合物。 通常黄曲霉毒素存在于土壤、动植物、各种坚果特别是花生和核桃中。在大豆、稻谷、玉米、通心粉、调味品、牛奶及奶制品、食用油等制品中也可能会发现黄曲霉毒素。2黄曲霉毒素在食物中的限量标准 根据我国国家标准GB2761-2011《食品中真菌毒素限量》的规定,我国食品中黄曲霉毒素B1允许量标准为:玉米及其制品、花生及其制品中不得超过20μg/kg;稻谷、糙米、大米和其他植物油脂中不得超过10μg/kg;小麦、大麦、其他谷物、发酵豆制品和其他熟制坚果及籽类中不得超过5μg/kg;部分调味品(如酱油、醋、酿造酱)中不得超过5μg/kg;婴幼儿配方食品中不得超过0.5μg/kg。乳及乳制品和特殊膳食用食品中黄曲霉毒素M1限量不得超过0.5μg/kg。3黄曲霉毒素的检测方法(1)薄层色谱法(TLC法) TLC法是测定黄曲霉毒素的经典方法,是我国测定食品及饲料中黄曲霉毒素B1的标准方法之一(GB/T5009.23-2006)。适用于各种食品中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的测定。(2) 免疫分析法 免疫化学分析法是以抗原抗体的免疫化学反应为基础进行抗原抗体含量测定的方法。用于黄曲霉毒素测定的免疫分析法主要有免疫亲和层析净化—荧光光度法、免疫亲和层析净化—高效液相色谱法、酶联免疫吸附法等。 免疫亲和层析净化—荧光光度法和免疫亲和层析净化—高效液相色谱法 免疫亲和层析技术的方法特异性好、灵敏度高,是目前我国现行国家标准推荐的方法之一(GB/T18979-2003),适用于玉米、花生及其制品(花生酱、花生仁、花生米)、大米、小麦、植物油脂、酱油、食醋等食品中黄曲霉毒素的测定。 酶联免疫吸附法(ELISA) ELISA法是应用抗原抗体特异性反应和酶的高效催化作用来测定黄曲霉毒素含量的免疫分析方法,其相对应的标准是GB/T5009.22-2003(第二法),适用于粮食、花生及其制品、薯类、豆类、发酵食品及酒类等各种食品中黄曲霉毒素B1的测定。4黄曲霉毒素的预防与控制措施(1) 挑选霉粒法 因黄曲霉毒素主要集中在霉坏、破损、皱皮、变色和虫蛀等的粮粒中,这些带毒颗粒比健康颗粒轻,外表也较易辨认,可用机械或人工掏除。(2) 植物油加碱去毒法 油料种子受黄曲霉毒素污染后,榨出的油中含毒素,可用碱炼法去毒。因为不溶于水的黄曲霉毒素在碱性条件下可形成香豆素钠盐而溶于水,故加减后用水洗可将毒素去除。(3) 加水搓洗法 在淘洗大米时,用手搓洗,随水倾去悬浮物,如此反复5~6次,煮熟后可去除大部分毒素。(4) 吸附去毒法 植物油受黄曲霉毒素污染,可利用活性白土和活性炭吸附,效果较好。(5)高温高压去毒法 黄曲霉毒素较耐高温,在280℃高温下才能分解,因此一般烹调温度下难以消除。但高温高压下去毒效果较好。(6) 碾磨去毒法 在粮食中,黄曲霉毒素大部分集中于脂肪较多的胚体和糠皮等部位。稻谷经精碾后95%的毒素可去除。玉米磨粉也有类似的效果。
黄曲霉毒素是由黄曲霉和寄生曲霉中产毒菌株所产生的有毒代谢产物,最主要的4种分别为:B1、B2、G1、G2。黄曲霉毒素具有很强的急性毒性,也有明显的慢性毒性及强致癌性。黄曲霉毒素主要污染粮、油及其制品,其中受污染最严重的是花生、棉籽、玉米及其制品;其次是稻米、小麦、大麦、高粱、芝麻等等【检测步骤】 样品处理:称取1g样品(大米、玉米、小麦、花生及其制品经过磨细其粒度小于2mm)于1瓶提取剂中,振摇2分钟,静置3分钟,用滤纸过滤,收集2mL样液于1个5mL离心管中,备用;萃取:用1mL一次性吸管吸取1mL萃取剂,加入到收集了样液的离心管中,振摇1分钟,静置分层后,取大约0.8mL的下层清液至点滴板的一个孔中,自然挥干或冷风吹干;样品检测:向点滴板上滴4滴缓冲液,使其充分溶解点滴板上的残留物;从检测卡袋中取出检测卡,在卡上做好样品编号标记;用吸管吸取点滴板上全部待检样液,滴入加样孔中,加样后开始计时,5-10分钟内观察结果;本方法是专家根据多次反复试验,开发出来的。可以广泛应用于,畜牧部门、养殖、饲料生产企业的现场快速检测。
粮食坚果黄曲霉毒素测定仪的适用范围非常广泛,主要涵盖了食品、农产品及其加工品中黄曲霉毒素的检测。具体来说,其适用范围包括但不限于以下几个方面: 粮食及其制品:包括各种谷物(如小麦、玉米、稻谷、大麦、高粱等)、杂粮(如小米、燕麦、荞麦等)以及它们的加工产品(如面粉、米粉、谷物制品等)。这些粮食是日常生活中重要的能量来源,但由于储存和加工过程中的不当处理,容易受到黄曲霉毒素的污染。 坚果与干果:坚果如花生、核桃、杏仁、开心果等,以及干果如葡萄干、无花果干等,都是人们常吃的零食或食材。由于它们富含油脂和蛋白质,更容易受到黄曲霉菌的侵染,从而产生黄曲霉毒素。 食用油:包括花生油、玉米油、大豆油等。这些油类在压榨或浸出过程中,如果原料含有黄曲霉毒素,那么油中也可能含有微量的毒素。 饲料:动物饲料也是黄曲霉毒素污染的重要领域。饲料中的黄曲霉毒素不仅会影响动物的健康和生产性能,还可能通过食物链传递到人类。 中药材:中药材在储存和加工过程中,也可能受到黄曲霉毒素的污染。特别是一些富含淀粉或油脂的中药材,更容易成为黄曲霉菌的滋生地。 其他食品:除上述列举的食品外,还有一些其他食品也可能受到黄曲霉毒素的污染,如调味品(辣椒粉、花椒粉等)、乳制品(如果酱、酸奶等含有坚果或谷物成分的制品)等。 粮食坚果黄曲霉毒素测定仪的适用范围广泛,能够快速、准确地检测食品中的黄曲霉毒素含量,为食品安全监管和质量控制提供重要技术支持。同时,随着技术的不断发展和应用领域的不断拓展,其适用范围还将进一步扩大。[img=,690,690]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/08/202408191630126849_8171_6238082_3.jpg!w690x690.jpg[/img]
粮食坚果黄曲霉毒素测定仪主要用于检测食品中的黄曲霉毒素含量,特别是针对粮食和坚果类食品。具体来说,它可以检测的物质主要包括以下几类: 黄曲霉毒素(AFT): 黄曲霉毒素是一类化学结构类似的化合物,均为二氢呋喃香豆素的衍生物。它们主要由黄曲霉(Aspergillus flavus)和寄生曲霉(A. parasiticus)等霉菌产生,存在于土壤、动植物以及各种坚果中,特别是容易污染花生、玉米、稻米、大豆、小麦等粮油产品。 黄曲霉毒素的种类较多,包括B1、B2、G1、G2等,其中B1的毒性最强,也是最常见的污染物质。 其他真菌毒素: 除了黄曲霉毒素外,一些粮食坚果黄曲霉毒素测定仪还可以检测其他类型的真菌毒素,如呕吐毒素(DON)、玉米赤霉烯酮(ZEN)等。这些毒素同样可能对食品和饲料造成污染,危害人类和动物的健康。 其他有害物质: 部分高端的粮食坚果黄曲霉毒素测定仪可能还具备检测其他有害物质的能力,如农药残留、抗生素残留、重金属等。这些检测项目的加入可以进一步提高食品安全检测的全面性和准确性。 样品类型: 该类测定仪广泛适用于粮食、坚果、食用油、饲料、中药材等多种样品类型的检测。这些样品在储存、加工和运输过程中都可能受到真菌毒素的污染,因此需要进行定期检测以确保食品安全。 综上所述,粮食坚果黄曲霉毒素测定仪是一种专门用于检测食品中黄曲霉毒素及其他有害物质的设备。通过采用先进的生物传感技术或化学分析原理,该类仪器能够快速、准确地检测出食品中的有害物质含量,为食品安全监管和质量控制提供重要技术支持。[img=,690,690]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/08/202408191641007062_938_6238082_3.jpg!w690x690.jpg[/img]
蒙牛黄曲霉毒素的超标,让我们看到了乳品行业并不像大家想象的那样,经历了三聚氰胺事件后会凤凰涅槃。在我看来,有顶风作案的嫌疑。也许有人攻击中国的乳品标准有多低,有多差,当然黄曲霉毒素的标准本身也有点问题,但这是后话。在我看来,在现行的乳品行业的体制下,不可能出现成品奶黄曲霉毒素超标的问题。我再强调一下,是成品奶。为什么呢?因为现在国家要求生鲜牛乳,也就是我们常说的生奶,对黄曲霉毒素要求批批检测。也就是说,如果生奶检出黄曲霉超标,不可能通过收奶环节,也就不可能被加工成成品。所以,在现行体制下,是不可能生产出黄曲霉毒素超标的牛奶。而现在这种情况明明就出现在我们的面前,而且是大品牌。我们可以试着推测一下这个问题背后的问题。生产出黄曲霉超标的成品奶,那肯定是原料中含有黄曲霉毒素,因为中间环节污染黄曲霉毒素的可能性很小。原料中含有黄曲霉毒素,那在收奶检测的时候为什么没有发现呢?这是第一个问题所在。 退一万步讲,即使检测人员在检测过程中有疏忽的地方,导致有一两个批次误判,那其他大多数也是合格的呀,讲这少量的放入大量合格的当中,相当于稀释了,其浓度也应该小于0.5才对啊,如果稀释后都超标,那疏忽的也太不应该了,高含量黄曲霉毒素很难被疏忽。我也是一名乳品检测人员,我也很想从检测的角度找到一个合理的答案,但是我分析不下去了。就像动车有那么多安全措施,不可能相撞的,最后不也撞了吗,这个事情我觉得也是一样,不可能发生的事情发生了。不管你信不信,反正黄曲霉毒素已经超标了。 其实我一向秉承的原则是:问题发生了并不可怕,可怕的对问题的隐瞒和对公众的忽悠,而不是去切实的解决问题,防止类似事件再次发生。蒙叉有个头头出来说:产品还没有销售出去。这一点我觉得让公众很难信服。套用很流行的一句话,不管你信不信,反正我不信。十月十八号生产的牛奶,到现在已经十二月份,将近过去了两个月,产品还在库房里面,没有销售。你信吗?不知道是啥产品,如果是百利包的灭菌奶,保质期只有三十到四十天,早就过期了。但从媒体给出的资料看,是盒装的,其保质期可能为六个月到八个月。即使是这样,在库房里面放两个月没有销售一盒,你信吗? 其实据我了解的情况,在南方一些地方,由于天气比较潮湿,可能会引起饲料的发霉,这样就会产生黄曲霉,进而会产生黄曲霉毒素。牛吃了饲料,在奶里面可能有残留,这一系列的问题,天气原因,完全可能理解。不能理解是如果生奶批批检测了,不可能出现黄曲霉毒素超标的牛奶;更不能理解的是,问题出了,拿出一系列忽悠消费者的言辞,来糊弄消费者和老百姓,呜呼,悲哀!!!
据美国食品药品管理局(FDA)消息,2011年12月6日美国嘉吉动物营养公司宣布对两个区域品牌的狗粮实施召回,原因是产品经检测黄曲霉毒素超标。这两个品牌狗粮分别为"River Run" 以及"Marksman2",产自嘉吉路易斯安那州厂区,生产日期为2010年12月1日至2011年12月1日。产品在美国15个州或地区有售。嘉吉公司建议消费者将问题产品退回。截至目前尚未出现事故报告,嘉吉公司其它宠物食品没有问题。
用液相色谱检测黄曲霉毒素B1的最小检出量是多少啊?最好有文献支持!谢谢!
2015年就开始执行的新药典,要求黄曲霉毒素B1不得过5μg/kg;黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素G2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素B2总量不得过10μg/kg。必检黄曲霉毒素的药材种类有:1. 根及根茎类:远志。2. 果实种子类:大枣、肉豆蔻、决明子、麦芽、陈皮、使君子、柏子仁、胖大海。莲子、桃仁、槟榔、酸枣仁、薏苡仁。3. 动物类:水蛭、地龙、全蝎、蜈蚣、僵蚕。
rt黄曲霉毒素B1是山东局的,花生中的黄曲霉毒素B1蛋白质是辽宁局的玉米粉中的蛋白质含量以干基计有哪位筒子也做这两个比对的,出来讨论一下啦
用黑曲霉第2代斜面上的菌株如何制作甘油冻存管?20%的甘油里面需要有0.05%的吐温80吗?配制20%的甘油是用生理盐水还是用PH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液?
梅雨季节湿度很大,库存的饲料很容易发霉变质,其实这样的饲料不能再用于饲喂。有的养鸡户舍不得浪费继续饲喂,结果导致鸡群发生黄曲霉素中毒。1 致病机理黄曲霉毒素是高毒性和高致癌性毒素,由黄曲霉菌、寄生曲霉和软毛青霉产生。它与细胞核和线粒体DNA结合,造成蛋白质合成受损,干扰肝肾功能,抑制免疫系统。蛋鸡表现为食欲不振,产蛋率下降,死亡率提高。2 刨检变化剖检时可见肝肾肿大、苍白,皮下出血,心包积水,胆囊扩张,卡他性肠炎;镜检可见肝脂肪变形、胆囊增生。剖检可见肺、气囊有针尖至米粒大小的米白色或淡黄色结节,结节软而富有弹性充满乳酪状的内容物。3 治疗原则鉴于黄曲霉对蛋鸡造成的危害,它的防治非常重要,应采取以下措施:(1)加强饲料管理,防止饲料发霉。(2)要经常检查饲料,饲料仓库要严防霉变,仓库应通风、干燥。(3)要搞好卫生,食槽、饮水槽应每天洗刷,尽量晒干后再用。(4)一旦发病,须及时隔离病鸡,清除地面垫草和表面土,再用20%新鲜石灰水彻底喷洒消毒。全群用制霉菌素口服拌料治疗,连用5d。
固相萃取-高效液相色谱法检测乳品中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1摘要:建立测定乳品中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1含量的固相萃取-高效液相色谱方法。样品经乙腈提取,ProElut AFT固相萃取柱净化,以正己烷和三氟乙酸衍生后,通过DiamonsilC18(2)色谱柱分离,流动相为水、乙腈和异丙醇,梯度洗脱,流速1 mL/min,荧光检测器检测,激发波长365nm,发射波长435 nm,外标法定量。结果表明5种黄曲霉毒素在0.01~5μg/L范围内线性关系良好。样品加标回收率在80%~100%之间,相对标准偏差1.58%~4.21%,方法检出限为牛奶:0.02~0.06μg/kg,奶粉:0.04~0.12 μg/kg。 黄曲霉毒素(AFT)是一类化学结构类似的化合物,均为二氢呋喃香豆素的衍生物。黄曲霉毒素是主要由黄曲霉和寄生曲霉产生的次生代谢产物,是现在发现的毒性和致癌性最强的天然污染物,其毒性是氰化钾的10倍,砒霜的68倍。黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1是最为常见且最重要的五种衍生物,可存在于土壤、坚果、谷物、食用油、及乳制品中。由于新生儿童免疫系统不完善,抵抗力较弱,所以婴幼儿食品尤其是奶粉、牛奶中黄曲霉毒素的检测尤为重要。 目前,黄曲霉毒素的检测方法有薄层色谱法(TLC)、酶联免疫吸附法(ELISA)、高效液相色谱-荧光法(HPLC-FLD);高效液相色谱-质谱联用法(HPLC-MS)。TLC法对人和环境的污染系数大,操作繁琐,灵敏度不高,很难普及。ELISA方法虽然操作简单,但定量不精确,易出现假阳性结果。HPLC-MS法仪器昂贵,检测成本较高,而HPLC-FLD操作简单,选择性好,灵敏度高,定量准确,同时仪器价格适中,适宜推广。另外,乳制品成分复杂、蛋白含量高、含有多种维生素及微量元素,所以样品净化在检测过程中占有重要的地位,目前的净化方法主要采用免疫亲和柱(IAC)净化和其它固相萃取柱净化,如石墨化碳黑柱;CN柱;HLB柱等。IAC虽然选择性好但是价格昂贵、储存条件苛刻、保存期短,其它固相萃取柱净化过程中涉及步骤较多,且净化效果一般。故本文选择ProElutAFT固相萃取柱结合高效液相色谱荧光检测器测定乳品中黄曲霉毒素,方法灵敏度高,步骤简单,净化效果好,成本较低,适合推广。1 实验部分1.1仪器与试剂岛津LC-20A高效液相色谱仪,RF-20A荧光检测器,柱温箱,涡旋混合器(予华仪器),高速离心机(予华仪器),旋转蒸发仪(予华仪器),12孔固相萃取装置(迪马公司),Diamonsil C18(2),250 mm×4.6 mm,5 μm色谱柱(迪马公司),ProElut AFT固相萃取柱(迪马公司)。乙腈、甲醇、异丙醇均为色谱纯(迪马公司),黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1标准品浓度10 μg/mL(Sigma)。分别取标准品各10 μL于10 mL容量瓶中,甲醇定容至刻度,配置成10ng/mL中间液,0-4 ℃避光保存。1.2色谱条件色谱柱:Diamonsil C18(2),250 mm×4.6 mm,5 μm;流速:1 mL/min;检测器:FLD,Ex: 365 nm,Em: 435nm;柱温:30 ℃;进样量:20 μL;流动相:A-水;B-异丙醇 : 乙腈=3 : 2;梯度程序:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/07/201507171533_556047_2452211_3.png1.3样品提取1.3.1牛奶、原料乳等液态奶制品称取2 g样品,加入2mL乙腈,涡旋混合1 min,再加入4 mL乙腈,涡旋混合1 min,4000 rpm,离心5 min,取上清液4 mL,作为上样液待净化。1.3.2奶粉等固体奶制品称取2 g样品,加入5mL水,涡旋混合2 min,样品与水充分混匀,加入5 mL乙腈,涡旋混合1 min,再加入10 mL乙腈,涡旋混合1 min,4000 rpm,离心5 min,取上清液5 mL,作为上样液待净化。1.4样品净化用10mL乙腈活化ProElut AFT固相萃取柱,将上样液加入柱中(流速控制每滴/两秒),接收流出液,采用10 mL乙腈洗脱样品(流速控制每滴/两秒),收集流出液,合并流出液,在40 ℃下减压蒸馏浓缩至大约2 mL,向旋蒸瓶中加入5 mL无水乙醇,继续减压蒸馏至完全干燥,依次加入0.5 mL正己烷和0.5 mL三氟乙酸,旋好玻璃塞充分混匀衍生液,45 ℃静置10 min,然后挥干衍生液,用10%乙腈水溶液定容至0.5 mL,待检测。2结果与讨论2.1色谱条件的选择分别考察了不同比例的甲醇-水、乙腈-水、乙腈-异丙醇-水为流动相对五种黄曲霉毒素分离的影响,结果表明,在A相为水,B相为异丙醇: 乙腈=3 : 2条件下进行梯度洗脱,可使五种黄曲霉毒素达到很好的分离效果(图1)。原因为乙腈中加入异丙醇可降低流动相极性,增加样品与色谱填料间的吸附-脱附次数,从而增加分离度。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/07/201507171534_556048_2452211_3.png2.2提取溶剂的选择比较了正己烷、甲醇、乙腈对黄曲霉毒素的提取效果,结果表明用正己烷提取时会产生乳化现象,且会提取出大量脂肪,影响净化效果;甲醇提取同时可除掉部分蛋白,但是也会有少量脂肪溶解;乙腈作为提取溶剂既可除掉绝大多数蛋白质,同时对油脂的溶解度大大降低,因此本实验采用乙腈作为提取溶剂。2.3固相萃取柱的选择对于乳及乳制品类样品,采用固相萃取柱进行样品进化是必不可少的步骤。本文采用了硅胶、氨基、PSA、C18、CARB、AFT填料的固相萃取柱,发现采用硅胶柱时黄曲霉毒素回收率极低,应该是样品与硅羟基形成了部分死吸附导致;采用氨基柱、PSA柱净化,可吸附少量的油脂及酸性杂质;采用C18柱可吸附弱极性和中等极性的维生素、脂肪等杂质,但这些固相萃取柱都不能达到同时吸附样品中多种干扰物的效果。AFT萃取柱为黄曲霉毒素检测专用多功能净化柱,可在保证高回收率的前提下同时吸附蛋白、脂肪、维生素、微量元素等干扰物,达到很好的净化效果(图2、图3)。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/07/201507171536_556049_2452211_3.pnghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/07/201507171536_556050_2452211_3.png2.4回收率结果分别对牛奶、奶粉进行加标回收试验,每个样品平行测定6次,计算回收率及RSD值(表1、表2)。结果表明,牛奶中添加的黄曲霉毒素回收率为83%-93%、RSD为1.5%-2.8%;奶粉中添加黄曲霉毒素回收率为75%-96%、RSD为1.7%-4.2%,结果满意。3.结论黄曲霉毒素毒性强,若存在于食品中尤其是婴幼儿食品中会对人类造成极大的伤害。本文建立测定乳品中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1含量的固相萃取-高效液相色谱方法,本方法通用性强、灵敏度高、重现性好、结果准确,符合现代技术的发展趋势。 参考文献1、 GB\T5009.24-2010 食品中黄曲霉毒素M1和B1的测定2、GB\T17480-2008 饲料中黄曲霉毒素B1的测定-酶联免疫吸附法3、 AzizA. Fallah. Food and Chemical Toxicology,2009,47:1872-18754、 SN/T1664-2005 牛奶和奶粉中黄曲霉毒素M1、B1、B2、G1、G2含量的测定5、 王娜,潘治利等. 花生中黄曲霉毒素检测方法的研究,安徽农业科学,2008,36(2
大家都知道,真菌毒素是一类毒性极强的剧毒物质,尤其是黄曲霉毒素,1993年被世界卫生组织的癌症研究机构划定为Ⅰ类致癌物。其危害性在于对人及动物的肝脏有破坏作用,表现为肝细胞变坏、坏死、最终导致器官严重损伤。如图:[IMG]http://hxwlei.cn/ob/UploadFiles/2008-4/241127152428.jpg[/IMG]玉米中的黄曲霉[IMG]http://hxwlei.cn/ob/UploadFiles/2008-4/241127254986.jpg[/IMG]黄曲霉毒素对天竺鼠肝脏的影响:摄入量越大,肝脏越苍白。[IMG]http://hxwlei.cn/ob/UploadFiles/2008-4/241127974261.jpg[/IMG]火鸡使用加有10ppm的黄曲霉毒素三个星期后,出现严重的口腔疾病。 目前对真菌毒素的测定不在乎以下几种方式:薄层色谱法(TLC)、高效液相色谱法(HPLC)和酶联吸附免疫法(ELISA)。TLC虽然简便,但重复性差;HPLC灵敏度高,但仪器昂贵,且需要真菌毒素的标准物,接触太多对操作人员的身体有巨大损伤;ELISA虽然简单安全,但由于酶本身的不稳定性,可能带来假阳、阴性结果,精度有待提高。 为了开发一种简单、快速、灵敏、准确的分析方法,美国VICAM(维康)公司与哈佛大学、麻省理工学院、约翰-霍普金斯大学、AOAC、美国农业部等著名大学和政府机构通力合作,发明研制了一系列的以单克隆免疫亲和柱为分离手段,用荧光计、紫外灯作为检测工具的分析方法。[IMG]http://hxwlei.cn/ob/UploadFiles/2008-4/241133832331.jpg[/IMG][img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=86436]VICAM荧光计介绍[/url] [img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=86437]黄曲霉毒素分析系统技术性能[/url]
一、概述:黄曲霉毒素主要是两种霉菌黄曲霉及 A.paraticus的二级代谢物。这些霉菌在湿热的环境和耕作土地上污染的植物产生。黄曲霉毒素M1(Aflatoxin M1,AFM1)属于自然界强烈的致癌物质之一,是从牛奶中分离出来的黄曲霉毒素的代谢产物。本试剂盒利用酶联吸附测定法(ELISA)对牛奶和奶粉中的AFM1含量进行快速、定量检测。二、原理本试剂盒是利用直接竞争酶联吸附微孔模式进行检测,灵敏度可达20 ng/kg(ppt)。样品或标准品中游离的黄曲霉毒素M1与酶标抗原竞争结合包被在微孔中的抗体上的结合位点,奶制品黄曲霉毒素M1快速检测,经洗板洗去多余的酶标抗原与黄曲霉毒素M1后加入反应底物,上海佑隆生物科技有限公司,佑隆生物科技,其与酶标物作用而成蓝色,加入反应停止液后颜色由蓝色转变为黄色,黄色越深则表明黄曲霉毒素M1越少,用酶标仪在450 nm处测定光吸收值可准确定量检测样品中的黄曲霉毒素M1的污染水平。三、实验需要但试剂盒不提供的试剂和仪器1、试剂:庚烷,二氯甲烷,甲醇,PBS缓冲液(pH 7.2,奶制品黄曲霉毒素M1快速检测,3.35 g Na2HPO4 ▪ 12H2O,0.2 g KH2PO4,0.2 g KCl,8 g NaCl,加蒸馏水至1000 ml)2、仪器:微孔板酶标仪,涡旋振荡器或超声波粉碎仪或摇床,离心机及离饣心管,20 μL、200 μL、1 mL[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]移液器[/color][/url][/color][/url],氮吹仪或旋转蒸发仪。四、结果判定用酶标仪在450 nm处测得每孔的光吸收值(A)绘制标准曲线。通过标准曲线可准确定量样品中黄曲霉毒素M1的含量。通过标准曲线计算所得值乘以样品处理的稀释因子即为实际样品中黄曲霉毒素M1的含量。标准曲线:横坐标为黄曲霉毒素M1标准品浓度,纵坐标为百分比(即各标准品孔和样品孔光吸收值除以0 ppt标准品孔光吸收值再乘以100%所得)
用的是柱后碘衍生法,第一次检测G1G2两个峰特别大,限度10最后算的总量是60,第二次重新粉样再检测总量是2,G1G2峰也明显变小。第一次检测时那两个峰就很不正常,之前也做过多次制马钱子的黄曲霉检测,从来没做出这么大的峰。是什么原因造成的呢?第一次是和远志同时检测的,但是远志就是正常峰。
[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=86887]出口 粮谷 棕曲霉毒素A 残留量 薄层扫描法 [/url]
共享应用,继续。。。花生油和粮谷中黄曲霉毒素检测提取称取2.0 g样品,加入8 mL 85%乙腈水,振荡2 min,超声10 min,6000 rpm离心2 min,收集上清液,待净化。SPE柱净化——ProElut AFT-3 12mL(CAT:65915)将待净化液加入柱中,收集2 mL流出液,在50 ℃水浴下减压蒸干,用初始流动相定容到1mL,过膜上机分析。UPLC 条件:色谱柱:Leapsil C18,100×2.1 mm,2.7 μm (Cat#:86005)流 速:0.3 mL/min 进样量:5 μL 柱 温:40 ℃流动相:乙腈:0.1%甲酸水梯度 时间(min) 0 6 7 15 乙腈(%) 30 70 30 30 0.1%甲酸水(%) 70 30 70 70 质谱条件:电离模式:ESI 扫描方式:正离子扫描检测方式:多反应监测 电喷雾电压:5500 V雾化气压力:50 psi 辅助气压力:50 psi气帘气压力:20 psi 离子源温度:500 ℃粮谷及油类样品中黄曲霉毒素检测(添加水平10ug / kg)的添加回收结果(%) 基质 AFB1 AFB2 AFG1 AFG2 AFM1 花生油 94.0 102.4 106.6 93.2 96.2 糙米 96.0 99.2 87.2 108.4 87.6 高粱 94.4 93.8 86.4 95.0 92.6 小米 96.8 90.6 112.8 91.4 89.0 http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/08/201608251327_606734_1987954_3.png
黄曲霉毒素(AFT)是一类化学结构类似的化合物,均为二氢呋喃香豆素的衍生物。黄曲霉毒素是主要由黄曲霉 (aspergillus flavus) 寄生曲霉 (a.parasiticus) 产生的次生代谢产物,在湿热地区食品和饲料中出现黄曲霉毒素的机率最高。黄曲霉毒素主要有B1,B2 ,G1 ,G2 以及另外两种代谢产物M1 ,M2.其中M1 和M2是从牛奶中分离出来的.B1,B2 ,G1 ,G2 ,M1 和 M2 在分子结构上十分接近.。毒性:远远高于氰化物、砷化物和有机农药的毒性,其中以B1毒性最大。当人摄入量大时,可发生急性中毒,出现急性肝炎、出血性坏死、肝细胞脂肪变性和胆管增生。当微量持续摄人,可造成慢性中毒,生长障碍,引起纤维性病变,致使纤维组织增生。AFT的致癌力也居首位,是目前已知最强致癌物之一。黄曲霉毒素进入机体后,在肝脏中的量较其他组织器官为高,说明肝脏可能受黄曲霉毒素的影响最大。肾脏、脾脏和肾上腺也可检出,肌肉中一般不能检出。黄曲霉毒素如不连续摄入,一般不在体内积蓄。一次摄入后约1周即经呼吸、尿、粪等将大部分排出。
一、背景信息 近日,媒体曝光了广西梧州和广东肇庆两地市场所出售的部分散装花生油存在黄曲霉毒素超标情况。黄曲霉毒素是什么?毒性怎样?本期将为您解读。 二、专家解读 (一)黄曲霉毒素的污染在世界范围内广泛存在。 黄曲霉毒素(Aflatoxin,AF)最早被发现于1960年,是黄曲霉(Aspergillus flavus)和寄生曲霉(Aspergillusparasiticus)的次级代谢产物,目前已分离鉴定出12种以上,常见的有黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1、M2、B2a、G2a、BM2a和GM2a等。黄曲霉毒素的热稳定性非常好,常规烹调和加热法不易分解。 世界范围内黄曲霉毒素的污染相当广泛,包括谷物、坚果和籽类以及牛乳等,尤以玉米、花生被污染的程度最严重。其主要原因是食物在田间未收获前被黄曲霉等产毒菌浸染,在适宜的气温和湿度等条件下繁殖并产毒,或未经充分干燥,在储藏期间产生大量毒素。食用油也存在容易受黄曲霉毒素污染的问题,但通过原料筛选、碱炼、吸附等控制手段可以使成品油中黄曲霉毒素降到非常低的水平。 (二)摄入量决定黄曲霉毒素是否引起急性中毒。 世界范围内曾报道数起人类的黄曲霉毒素急性中毒,如非洲的霉木薯饼中毒,印度的霉玉米中毒等。2004-2005年肯尼亚暴发了迄今史上最大规模的黄曲霉毒素急性中毒事件,中毒千余人,死亡125人,中毒玉米中检出黄曲霉毒素B1的含量高达4400ppb(μg/kg),是罕见的黄曲霉毒素中毒事件。黄曲霉毒素中毒的症状一般为一过性发烧、呕吐、厌食、黄疸、腹水、下肢浮肿等肝中毒症状,严重者出现暴发性肝功能衰竭、死亡。 根据我国及世界其他国家的标准规定,黄曲霉毒素的含量如果在安全限量范围之内,并不会对消费者的健康构成风险。 (三)全球已高度重视对食品中黄曲霉毒素的控制。 黄曲霉毒素B1是影响人和动物健康的主要真菌毒素之一,也是全球食品安全控制中最主要的真菌毒素。2003年联合国粮农组织(FAO)发布的全世界食品和饲料真菌毒素法规报告中显示,除国际食品法典委员会(CAC)的规定以外,全球100多个国家和地区制定了各类食品中黄曲霉毒素限量标准。食品中黄曲霉毒素B1的限量范围为1-20ppb,黄曲霉毒素总量(AFB1、B2、G1、G2)的限量范围为0-35ppb。 2011年我国发布的《食品安全国家标准 食品中真菌毒素限量》(GB2761-2011)中规定花生及其制品中黄曲霉毒素B1的限量为20ppb。 (四)“土榨油”看似原生态实存安全隐患。 近年来,“纯天然”和“原生态”成为部分消费者的追求,除了购买“土榨油”外,也有使用家用榨油机自制油的方式。对于这两种榨油方式,专家认为存在较大安全隐患。除了原料品质是否过关的问题,“土榨油”或自榨油还存在下列问题:未经过精炼加工,杂质多,易氧化变质;榨油设备不易彻底清洗干净,残留的油渍及谷物残渣在氧化后会产生霉变,食品安全隐患很大;此外,资源利用率低,会造成很大浪费。 三、专家建议 (一)科研人员应加大“从田间管理到加工过程”对黄曲霉毒素污染及控制手段的研究力度,为保证食品安全提供更加有效的科技支撑。 (二)以玉米、花生等为主要原料的食品生产、加工企业,特别是“土榨油”生产作坊,应严格执行食品安全国家标准和相关技术规范,积极采取有效措施,重视原料安全,严格把关每一个生产环节,确保产品的质量和安全。 (三)媒体应注重全面、科学、客观报道,采用相应领域权威专家的专业观点,以正确解读国家相关标准法规,引导消费者理性认识和理解黄曲霉毒素的危害,避免公众过度恐慌。 (四)消费者应注意培养良好的消费习惯,注意产品的标签、标识,做到在保质期内妥善储藏。特别应注意通过正规可靠渠道购买食用油,不要片面迷信“纯天然”和“原生态”制品。来源:国家食药监局
【产品简介】黄曲霉毒素B1(AFB1)是目前已知的化学物质中致癌性最强的一种,国家质检总局规定黄曲霉毒素B1是大部分食品的必检项目之一。本产品的检测灵敏度为20μg/kg,配合说明书中样品处理方法,检测范围可达到5μg/kg~100μg/kg。检测DDGS的检测限为30μg/kg~100μg/kg。【检测范围】检测样品包括小麦、玉米等谷物及饲料样品。【产品组成】黄曲霉毒素B1免疫胶体金快速检测卡(50条/盒) 样品稀释液 (4ml/样品,)滴管(1个/袋)干燥剂(1片/袋)【样品制备】饲料及谷物1、准确称取2.0g有代表性的均匀粉碎的试样于离心管中,再准确量取2mL纯净水和4mL乙酸乙酯,将瓶塞盖紧密封,充分振荡5min,静置或4000rpm离心得上清液,将上清液用吸管取出2ml到蒸发皿或小烧杯中,水浴蒸干或用氮吹仪/电吹风吹干。2、根据所需检测限,按下表选择适量水(遇油脂含量≥8%的样品,按下表选择适量样品稀释液),用吸管反复冲洗,彻底溶解吹干后的所有固体,静置5min。出现分层,取下层液体即样品提取液用于检测。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/07/201207202127_378925_1641058_3.jpg酒糟蛋白饲料(DDGS)准确称取2.0g有代表性的均匀粉碎的试样于离心管中,再准确移取2mL纯净水和4mL乙酸乙酯,将瓶塞盖紧密封,充分振荡5min,静置或4000rpm离心得上清液。取上清1ml,水浴蒸干或用氮吹仪/[font='Times
食品中黄曲霉毒素的测定,主要有TLC、ELISA、HPLC 等方法,TLC法灵敏度和重现性较差;ELISA法重现性差,易受样品基质干扰假阳性率高,仅能作为筛选方法。近年来,由于HPLC法具有灵敏度和准确度高、方法重现性好等优点,现已成为黄曲霉毒素分析的主要手段。HPLC法测定黄曲霉毒素,一般使用灵敏度和选择性较好的荧光检测器。但由于黄曲霉毒素的荧光强度会受溶剂影响,正相色谱中,B1和B2的荧光强度仅稍低一点,不需衍生化;而在常用的反相色谱中,B1和G1两种异构体荧光强度很弱,需进行衍生化,提高其荧光强度,灵敏度才能满足一般食品法规的限量。衍生化的方法一般有柱前和柱后两类, 柱前衍生一般使用三氟乙酸,柱后衍生有碘液、过溴化吡啶溴以及电化学和光化学等方法。近年来,很多标准方法利用免疫亲合柱净化,HPLC柱后衍生对花生和玉米等农产品和食品中黄曲霉的含量进行了分析,方法检出限能够达到1 μg/kg以下。Q1。免疫亲和柱的填料是什么,它是怎样工作的,为什么要用它? 免疫亲合柱对于欧们学化学的好像陌生了一点,不过你把它当成一种层析柱就行了。它的所谓填料就是固定了抗体的凝胶(黄曲霉毒素的柱子一般是单克隆抗体),基于抗原抗体反应进行工作,专一性很强,再加上另一种原理(反相或正相液相色谱)的分离,即使你把它当作确证方法也能说的过去。其实免疫亲和柱净化后的样品已经非常干净,直接加溴水也可在荧光分光光度计上进行测定,也是AOAC 991。31正式方法。现在还有一种普通霉菌毒素净化柱(不是免疫柱)要便宜一些,能做的霉菌毒素品种也多,但是专一性就差些。Q2。Kobra cell可以在线产生溴,这对分析有什么作用?是可以提高灵敏度吗?如果是,溴是如何与黄曲霉素反应的?络合?氧化?还是别的什么? 由欧以上的论述,应该说是提高反相HPLC分析中黄曲霉毒素B1、G1的灵敏度。反应原理欧还真的没研究,可能和柱后衍生类似(氧化?),考虑到进入精益求精的要求还是不乱猜了吧。Q3。看到书上说黄曲霉素的毒性是KCN的10倍,是砒霜的68倍。晕啊。。。操作时有没有特别的个人防护措施?这个阿胖讲得差不多了,方法也就是用次氯酸钠溶液泡器皿,当然最好不要自己称固体标样,那东东有静电,很容易飞出来,买溶液就行了。要补充的1、就是没阿胖讲的那么可怕,对欧盟出口花生及制品的检测实验室都使用免疫亲和柱净化-HPLC—RF法确证,每年可能要做上万个样品。2、HPLC法的干扰比酶免方法不知道要小多少,有的HPLC筛选方法,提取后不净化就直接进样了,也很少有干扰。采用哪种方法主要是和要求有关,如果让洋人拿着鞭子在后面抽着干,肯定是要用HPLC法;如果就骗骗中国的官僚和老百姓,那就像啊胖说的,酶免法又省钱有省事,嘿嘿。。。。3、GB/T 5009的TLC法,净化方法很差,UV灯下看上去是一条亮带,满足国标20PPB的限量都很勉强,这一点你可看看旧贴http://www.sepu.net/dvbbs/dispbbs.asp?BoardID=5&replyID=47615&id=18220&skin=0欧论述的也差不多了。1、AOAC方法简述25g均匀样品,加入氯化钠5 g和125 mL甲醇:水(7+3),均质2min,过滤。取15 mL滤液加30 mL水,再次过滤后,取10 mL过免疫亲和柱,2×10 mL水洗柱,最后用1 mL甲醇洗脱黄曲霉毒素,用水定容至2 mL,供HPLC测定。HPLC条件:色谱柱:4.6×250 mm, 5 μm,C18;流动相:甲醇-乙腈-水(1+1+3);流速:1.0 mL/min; 柱后衍生试剂:100 mg碘溶于2 mL甲醇,加水至200 mL。流速0.3 mL/min;衍生化温度:70 ℃;衍生化时间:55 s;激发波长:360 nm;发射波长: 420 nm;进样量:50 μL。3. 方法技术指标:免疫亲和柱净化,HPLC柱后衍生化的方法回收率(1) 2000年AOAC协同试验结果B1: 82- 109 %(添加水平:1.0- 5.0 ng/g)B2: 77- 123 %(添加水平:0.2- 0.8 ng/g)G1: 58- 93 %(添加水平:1.0- 5.0 ng/g)G2: 62- 105 %(添加水平:0.2- 0.8 ng/g)(2) 1991年AOAC协同试验结果B1: 77- 90 %(添加水平:5.8- 17.5 ng/g)B2: 55- 70 %(添加水平:0.83- 2.5 ng/g)G1: 76- 98 %(添加水平:2.5- 7.5 ng/g)G2: 36- 55 %(添加水平:0.83- 2.5 ng/g)碘衍生化方法的反应温度要70 ℃,需要单独的柱温箱,还要一个打衍生剂的泵。故可以采用以下两种方法来代替碘溶液作柱后衍生(1)过溴化吡啶溴(PBPB)衍生色谱柱:4.6×250 mm, 5 μm,C18;流动相:水-乙腈-甲醇(6+2+3);流速:1.00 mL/min;衍生化溶液:25 mg PBPB (CAS: 39516-58-3)溶于500 mL水,室温下避光可保存5天;衍生化溶液流速:0.30 mL/min;衍生化反应管:55 cm × 0.5 mm id. 衍生化反应温度:室温。(2)电化学反应池衍生色谱柱:4.6×250 mm, 5 μm,C18;流动相:水-乙腈-甲醇(6+2+3),每升加350 μL HNO3 (5 mol/L),同时溶解120 mg KBr;衍生化反应池:Kobra cell Rhone Diagnostics Technologies Ltd.,衍生化操作电流:100 μA。