白雀木醇

[font=宋体]蛋白纯化采用多种色谱技术，根据其性质的差异将产物分离。标签蛋白便于用亲和色谱法处理，亲和色谱法根据蛋白标签的生物识别来捕获靶蛋白。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]在所有色谱技术中，亲和色谱法占主要地位。事实上，亲和色谱是最特异、最有效的蛋白纯化技术，为靶蛋白纯化提供了合理的依据。它利用了生物分子识别的原理，即生物活性大分子与亲和配体形成特定的可逆复合物的能力。随着高价值蛋白的传统纯化方案被基于亲和色谱等先进的方法所取代，人们的关注重点转向了设计和选择具有高亲和力和特异性的配体。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]从用于生化表征的浓缩蛋白提取物的制备到治疗性重组蛋白的大规模生产，任何纯化过程都需要经济且足量地获得纯化蛋白。因此，下游处理面临的挑战是高产能、高分辨率和高成本效率。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]亲和色谱法适用于基于高特异性相互作用的生化混合物的分离。在纯化过程中可以利用具有明确特性的靶蛋白。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]离子交换色谱法是一种常见的蛋白纯化方法，该方法基于与离子交换器的亲和力分离离子和极性分子。可溶性分子在通过色谱柱时与带相反电荷的不溶性固定相结合。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]尺寸排阻色谱法，根据分子的大小和分子量分离分子。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]疏水作用色谱分离表面有疏水氨基酸侧链的靶蛋白，与疏水基团相互作用并结合在一起。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]下面是不同纯化方法的优缺点介绍：[/b][/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、亲和色谱法：[/font][/font][font=宋体]蛋白质特征：生物识别[/font][font=宋体]应用：受体和配体，酶和底物，抗原和抗体[/font][font=宋体][font=宋体]优点：[/font] [/font][font=宋体]①一次能够分离一种特定的蛋白[/font][font=宋体]②高回收率[/font][font=宋体]③快速分离[/font][font=宋体]缺点：要求配体具有高选择性[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]、离子交换色谱法[/font][/font][font=宋体]蛋白质特征：电荷[/font][font=宋体]应用：带电分子[/font][font=宋体][font=宋体]优点：[/font] [/font][font=宋体]①高准确度和精度[/font][font=宋体]②高基质耐受性[/font][font=宋体]③高选择性[/font][font=宋体]缺点：柱间不一致性[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3[/font][font=宋体]、尺寸排阻色谱法[/font][/font][font=宋体]蛋白质特征：大小[/font][font=宋体]应用：大分子，大分子复合物[/font][font=宋体][font=宋体]优点：[/font] [/font][font=宋体]①高回收率[/font][font=宋体]②明确的分离时间[/font][font=宋体]③可获得窄条带[/font][font=宋体][font=宋体]缺点：[/font][font=Calibri]MW [/font][font=宋体]的需求存在差异[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]4[/font][font=宋体]、疏水作用色谱法[/font][/font][font=宋体]蛋白质特征：疏水性[/font][font=宋体]应用：表面具有疏水氨基酸侧链的蛋白和多肽[/font][font=宋体][font=宋体]优点：[/font] [/font][font=宋体]①高选择性[/font][font=宋体]②温和、非变性条件[/font][font=宋体]缺点：相互作用强[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多关于[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/chromatography-purification][b]蛋白纯化方法[/b][/url]详情可以参看：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/chromatography-purification[/font][/font][font=Calibri] [/font]

[font=宋体][font=宋体]真核蛋白表达系统是一种广泛应用的蛋白表达方式，通常利用酵母、昆虫或哺乳动物细胞作为宿主。这种表达系统所生成的蛋白与目标[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]具有极高的相似性，能诱导高效蛋白表达。那么，在实施真核蛋白表达时，有哪些关键的纯化步骤呢？接下来，我们将详细解析这一过程。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]首先，我们要明确真核蛋白表达的纯化步骤是至关重要的环节。这些步骤不仅关系到最终产品的纯度和产量，还直接影响其生物活性和应用价值。因此，选择合适的纯化方法对于整个实验的成功至关重要。[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]真核蛋白表达及纯化步骤主要有以下几个方面：[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、重组质粒构建：将目的基因克隆进表达载体，常见的方法包括限制性切酶切割，基因合成等，根据连接酶说明，进行线性载体和目的基因片段的酶联，最后对质粒测序做好验证；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]、蛋白诱导表达：普适条件下查看蛋白是否表达，若不表达，更换载体，表达菌株等方法查看是否表达，如果表达，继续实验；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3[/font][font=宋体]、蛋白表达部位分析：分析蛋白是可溶性还是不溶性的表达，即在超声后上清表达还是沉淀表达；是否与你的目标蛋白表达部位相同，相同进行后续蛋白表达条件优化；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]4[/font][font=宋体]、蛋白表达优化：优化诱导[/font][font=Calibri]IPTG[/font][font=宋体]浓度、诱导温度，进行放大培养；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]5[/font][font=宋体]、蛋白纯化：根据目标蛋白的性质进行样本处理，然后进行亲和纯化，获取目的蛋白。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]真核表达系统的选择与应用[/b][/font][font=宋体]酵母蛋白表达系统[/font][font=宋体]酵母真核蛋白表达系统有甲醇酵母表达系统，酿酒酵母表达系统，裂殖酵母表达系统以及克鲁维酸酵母表达系统等，其中最早应用于基因工程的酵母是酿酒酵母，但现在运用最广泛的酵母表达系统还是甲醇酵母表达系统中的毕赤酵母真核蛋白表达系统。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]哺乳动物细胞表达系统[/font][font=宋体][font=宋体]哺乳动物细胞表达系统是真核表达系统中唯一可以表达复杂蛋白的系统，它能够指导真核表达蛋白进行正确折叠，提供复杂的[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]型糖基化和准确的[/font][font=Calibri]O[/font][font=宋体]型糖基化等多种翻译后加工功能，所以它和昆虫酵母系统比较更具有发展潜力，哺乳动物细胞真核表达的蛋白与天然真核表达蛋白的结构、糖基化类型和方式几乎相同且能正确组装成多亚基蛋白[/font][font=Calibri],[/font][font=宋体]但成本较高也一定程度上减缓了它的发展速度。哺乳动物细胞表达系统主要是通过改造宿主细胞来提高外源蛋白的表达效率，常用的宿主细胞有[/font][font=Calibri]CHO[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]COS[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]BHK[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]SP2 /0N[/font][font=宋体]等，哺乳动物转染方法[/font][font=Calibri]*[/font][font=宋体]有脂质体转染法，电穿孔法以及病毒转染等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-purification-techniques][b]蛋白纯化技术[/b][/url]：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-purification-techniques[/font][/font][font=Calibri] [/font]

[b]名称 木糖醇[/b] 　　[b]英文名[/b] Xylitol 　　[b]又名[/b] 戊五醇 　　它的分子式为[b]C5H12O5[/b],是一种五碳糖醇。 　　木糖醇原产于芬兰，是从白桦树、橡树、玉米芯、甘蔗渣等植物中提取出来的一种天然植物甜味剂。 　　 若无特别说明，人们很难将木糖醇与蔗糖分辨。 　　木糖醇低温品尝效果更佳，其甜度可达到蔗糖的1.2倍。木糖醇入口后往往伴有微微的清凉感，这是因为它易溶于水，并在溶解时会吸收一定热量。在一定程度上也有助于牙齿的清洁度，但是过度的食用也有可能带来腹泻等副作用，这一点也不可忽视。[size=4][b]木糖醇[/b][/size][url=http://baike.baidu.com/image/4075890a03884b3a94ca6b48][img]http://imgsrc.baidu.com/baike/abpic/item/4075890a03884b3a94ca6b48.jpg[/img][/url]

白藜芦醇是多酚类化合物，主要来源于蓼科植物虎杖的根茎提取物。白藜芦醇的测定方法为我司协助客户进行色谱柱筛选所做应用，实验结果表明：INERTSIL ODS-3做白藜芦醇拖尾因子1.1，钻石二代（Diamonsil C18（2））拖尾因子1.028，钻石一代（Diamonsil C18）拖尾因子1.097，极性改性反相色谱柱—思博尔（Spursil C18） 拖尾因子1.076。以下为白藜芦醇检测详细的测试条件和不同色谱柱分析结果，请您参考！样品制备制备方法：对照品溶液的配制：白藜芦醇对照品8mg（精确至0.02mg），准确加入80-90mL甲醇溶解，充分混匀，定容至100mL。 分析条件流动相：水:乙腈=70:30流速：1.0 mL/min柱温：35 ℃检测器：UV 303 nm进样量：10 μL

[font=宋体][font=宋体]体外重组蛋白表达技术已经渗透到生物学的各个领域。目前，体外重组蛋白表达系统主要有四类：原核表达系统、哺乳动物细胞表达、酵母表达系统及昆虫细胞表达。表达的一般实验包括载体构建[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]表达鉴定[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]蛋白纯化三大步骤。在构建载体阶段，除了一些必要的表达元件，还需要考虑的密码子优化和标签的选择。选择合适的标签不但有利于蛋白的纯化，促进蛋白的可溶性，同时也不能影响蛋白的结构功能和下游应用。本文详细介绍了几种蛋白纯化标签，帮助我们更好的设计实验。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]蛋白纯化标签比较[/b][/font][table][tr][td][b][font=微软雅黑]融合标签[/font][/b][/td][td][b][font=微软雅黑][font=微软雅黑]大小（[/font][font=微软雅黑]KD）[/font][/font][/b][/td][td][b][font=微软雅黑]功能[/font][/b][/td][td][b][font=微软雅黑]是否切除[/font][/b][/td][/tr][tr][td][font=微软雅黑]HIS[/font][/td][td][font=微软雅黑]0.84[/font][/td][td][font=微软雅黑][font=微软雅黑]有利纯化，能纯化可溶性[/font][font=微软雅黑]/包涵体蛋白[/font][/font][/td][td][font=微软雅黑]标签小，对蛋白无影响[/font][/td][/tr][tr][td][font=微软雅黑]GST[/font][/td][td][font=微软雅黑]26[/font][/td][td][font=微软雅黑]增强蛋白可溶性，仅能纯化可溶性蛋白，屏蔽毒性蛋白[/font][/td][td][font=微软雅黑]标签较大，影响较大[/font][/td][/tr][tr][td][font=微软雅黑]MBP[/font][/td][td][font=微软雅黑]44.4[/font][/td][td][font=微软雅黑]增强蛋白可溶性，屏蔽毒性蛋白[/font][/td][td][font=微软雅黑] [/font][/td][/tr][tr][td][font=微软雅黑]NusA[/font][/td][td][font=微软雅黑]55[/font][/td][td][font=微软雅黑]增强蛋白可溶性，屏蔽毒性蛋白[/font][/td][td][font=微软雅黑] [/font][/td][/tr][tr][td][font=微软雅黑]SOMO[/font][/td][td][font=微软雅黑]11.2[/font][/td][td][font=微软雅黑]增强可溶性，屏蔽毒性蛋白[/font][/td][td][font=微软雅黑] [/font][/td][/tr][/table][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=Calibri]HIS-Tag[/font][font=宋体]（组氨酸标签）[/font][/font][/b][font=宋体][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/poly-his-tag-protein-expression][b]HIS-Tag[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/poly-his-tag-protein-expression][b]蛋白纯化[/b][/url]的首选标签[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]HIS-Tag[/font][font=宋体]本身的特性对目的蛋白没有影响，不会形成二聚体；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]分子量较小，只有[/font][font=Calibri]0.84KD[/font][font=宋体]，对蛋白的下游应用不会产生影响；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]免疫原性低，可将纯化的蛋白直接注射动物进行免疫并制备抗体；[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]HIS-Tag[/font][font=宋体]与细菌的转录翻译机制兼容，有利于蛋白表达；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]可与其他标签构建双标签表达，可用于多种蛋白表达系统，纯化条件温和对蛋白影响较小。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]HIS-Tag[/font][font=宋体]由[/font][font=Calibri]6-10[/font][font=宋体]个组氨酸残基组成，分子量不到[/font][font=Calibri]0.84KD[/font][font=宋体]，，通常插入在目的蛋白的[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]末端或[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]末端。[/font][font=Calibri]HIS-Tag[/font][font=宋体]是目前原核表达最常用的标签，蛋白纯化完之后可以不需切除此标签，也不会对蛋白产生功能影响。同时，蛋白纯化步骤简便，纯化条件温和，对蛋白也不会产生太大影响。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=Calibri]GST-Tag[/font][font=宋体]（谷胱甘肽巯基转移酶标签）[/font][/font][/b][font=宋体][font=Calibri]GST-Tag[/font][font=宋体]相对分子质量较大，约为[/font][font=Calibri]26KD[/font][font=宋体]，插入在目的蛋白的[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]末端或[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]末端，大肠杆菌中常用在[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端。[/font][font=Calibri]GST([/font][font=宋体]谷胱甘肽巯基转移酶[/font][font=Calibri]) [/font][font=宋体]蛋白本身是一个在解毒过程中起到重要作用的转移酶。一般选择[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]标签的目的有两个，一是提高蛋白表达的可溶性，二是提高蛋白的表达量。蛋白表达纯化结束后需根据不同的蛋白应用而确定是否切除标签，标签较大，切除与否需根据下游应用考虑。如果要去除[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]融合部分，可用位点特异性蛋白酶切除。检测方法可用[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]抗体或表达的目的蛋白特异性抗体检测。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=Calibri]GST-Tag[/font][font=宋体]的优缺点[/font][/font][/b][font=宋体]增加外源蛋白的可溶性；[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]可在不同的宿主中表达，适用范围广；[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]可用不同的蛋白酶可以方便去除；[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]很好保留了蛋白的抗原性和生物活性，提高外原蛋白的稳定性；[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]高特异性，纯化方便且温和；[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]分子量较大，可能会影响蛋白质的功能和下游实验；[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]如果蛋白不可溶，很难用变性的方法纯化。[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]亲和纯化原理[/font][/font][/b][font=宋体][font=Calibri]GST [/font][font=宋体]亲和层析是利用[/font][font=Calibri]GST [/font][font=宋体]融合蛋白与固定的谷胱甘肽[/font][font=Calibri](GSH)[/font][font=宋体]通过硫键共价亲和，通过[/font][font=Calibri]GSH[/font][font=宋体]交换洗脱的原理来进行纯化 。该纯化柱中，凝胶手臂上通过硫键结合一个谷胱甘肽。然后利用谷胱甘肽与谷胱甘肽巯基转移酶（即[/font][font=Calibri]GST-tag[/font][font=宋体]（[/font][font=Calibri]26 KDa[/font][font=宋体]））之间酶和底物的特异性作用力，使得带[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]标签的融合蛋白能够与凝胶上的手臂谷胱甘肽结合，从而将带标签的蛋白与其他蛋白分离开。谷胱甘肽通常有氧化型[/font][font=Calibri]GSSG[/font][font=宋体]和还原型[/font][font=Calibri]GSH[/font][font=宋体]，当我们使用[/font][font=Calibri]GSH[/font][font=宋体]洗脱时，[/font][font=Calibri]GSH[/font][font=宋体]会与凝胶上的谷胱甘肽竞争结合融合蛋白，从而将目标蛋白洗脱。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/gst-tag-protein-expression][b]GST[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/gst-tag-protein-expression][b]标签蛋白[/b][/url]可直接从细菌裂解液中利用含有还原型谷胱甘肽琼脂糖凝胶[/font][font=Calibri](Glutathione sepharose)[/font][font=宋体]亲和树脂进行纯化。[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]标签蛋白可在温和、非变性条件下洗脱，因此保留了蛋白的抗原性和生物活性。[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]在变性条件下会失去对谷胱甘肽树脂的结合能力，因此不能在纯化缓冲液中加入强变性剂如：盐酸胍或尿素等。如果蛋白表达在包涵体中，可复性后再纯化。此外要去除[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]标签，可用位点特异性蛋白酶切除。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=Calibri]MBP-Tag[/font][font=宋体]（麦芽糖结合蛋白标签）[/font][/font][/b][font=宋体][font=Calibri]MBP[/font][font=宋体]（麦芽糖结合蛋白[/font][font=Calibri]maltose binding protein[/font][font=宋体]）， 残基数[/font][font=Calibri]346[/font][font=宋体]，分子量[/font][font=Calibri]42.5KDa[/font][font=宋体]，由大肠杆菌[/font][font=Calibri]K12[/font][font=宋体]的[/font][font=Calibri]malE[/font][font=宋体]基因编码，构建时刻放在[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端，用来提高可溶性（尤其是真核蛋白）。[/font][font=Calibri]MBP[/font][font=宋体]的折叠需要[/font][font=Calibri]DnaK-DnaJ-GrpE[/font][font=宋体]和[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]GroEL-GeoES[/font][font=宋体]两个分子伴侣系统的帮助，这可以使这些分子伴侣聚集到目的蛋白的附近帮助其正确折叠。另外，以标签蛋白形式存在的麦芽糖结合蛋白可以减少目的蛋白的降解，提高表达产物的水溶性，也为以后对目的蛋白的纯化提供了基础。麦芽糖结合蛋白能够被多糖树脂吸附，因此在过柱时，能够使融合蛋白与其它蛋白成份分离。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]MBP[/font][font=宋体]氨基酸序列：[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=Calibri]MBP[/font][font=宋体]标签的优缺点[/font][/font][/b][font=宋体]简单亲和纯化即可实现；[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]增加蛋白表达量和蛋白稳定性；[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]促进蛋白的可溶性和正确折叠；[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]标签较大，对蛋白的结构[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]功能会有一定影响。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=Calibri]NusA-Tag[/font][font=宋体]（转录终止[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]抗终止蛋白标签）[/font][/font][/b][font=宋体][font=Calibri]NusA[/font][font=宋体]是大肠杆菌自身的一种蛋白，即转录抗终止因子，残基数[/font][font=Calibri],495[/font][font=宋体]，分子量[/font][font=Calibri]:54.87KDa[/font][font=宋体]，由[/font][font=Calibri]1999[/font][font=宋体]年[/font][font=Calibri]Davia[/font][font=宋体]将[/font][font=Calibri]NusA[/font][font=宋体]从[/font][font=Calibri]4000[/font][font=宋体]种大肠杆菌蛋白库中筛得。[/font][font=Calibri]NusA[/font][font=宋体]不具有独立的纯化标签功能，所以要与其它标签[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]如[/font][font=Calibri]His[/font][font=宋体]标签[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]联用。利用原核表达时，[/font][font=Calibri]NusA[/font][font=宋体]标签可以明显的提高蛋白的可溶性，例如含有[/font][font=Calibri]NusA[/font][font=宋体]标签的人白介素[/font][font=Calibri]-3 [/font][font=宋体]融合蛋白[/font][font=Calibri](NusA/hIL-3 )[/font][font=宋体]在[/font][font=Calibri]37[/font][font=宋体]℃条件下诱导表达几乎全部可溶[/font][font=Calibri](97%)[/font][font=宋体]，而当其单独表达或融合[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]标签表达时都是包涵体形式。另外[/font][font=Calibri]NusA[/font][font=宋体]标签还可以提高不溶性靶蛋白如牛生长激素（[/font][font=Calibri]bGH)[/font][font=宋体]、人干扰素[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]γ [/font][font=Calibri](hIFN-[/font][font=宋体]γ[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]的可溶性。来自草木犀根瘤菌[/font][font=Calibri](Rizobiummeliloti)[/font][font=宋体]的酪氨酸激酶因为分子量大[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]超过[/font][font=Calibri]54kDa)[/font][font=宋体]并且基因含有大量稀有密码子，自身在大肠杆菌中无法过量表达，但是与[/font][font=Calibri]NusA[/font][font=宋体]融合后却可以高效表达。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]NusA[/font][font=宋体]氨基酸序列：[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=Calibri]NusA[/font][font=宋体]的优缺点[/font][/font][/b][font=宋体][font=宋体]可以提高蛋白质的溶解性，可选的标签有[/font][font=Calibri]NusA[/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri]MBP[/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]这些标签不能用专门的亲和基质纯化，融合蛋白构建时必须与可用于纯化的小亲和标签连用。尤其是当[/font][font=Calibri]NusA[/font][font=宋体]蛋白增加融合蛋白溶解性时，一些在大肠杆菌中表达为不溶性的蛋白在与[/font][font=Calibri]NusA[/font][font=宋体]在[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端融合时则变成可溶。但是由于它的分子量较大，导致靶蛋白的得率相对降低；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]NusA[/font][font=宋体]本身不具有独立的纯化标签功能，所以要与其它标签如[/font][font=Calibri]His[/font][font=宋体]标签联用；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]NusA[/font][font=宋体]对蛋白下游应用会有影响，如蛋白需进行结构分析（晶体衍射或核磁共振）。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=Calibri]SUMO[/font][font=宋体]（小泛素相关修饰物）[/font][/font][/b][font=宋体][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/sumo-tag-purification][b]SUMO[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/sumo-tag-purification][b]标签蛋白[/b][/url]是一种小分子泛素相关修饰蛋白，是存在于真核生物中高度保守的参与蛋白质小泛素化相关修饰的一类大蛋白。与[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]MBP[/font][font=宋体]或[/font][font=Calibri]NusA[/font][font=宋体]相比，[/font][font=Calibri]SUMO[/font][font=宋体]不仅可以作为重组蛋白表达的融合标签还具备分子伴侣的功能，能促进蛋白的正确折叠，对热和蛋白酶具有耐受性，更有助于保持目的蛋白的稳定性。此外，[/font][font=Calibri]SUMO[/font][font=宋体]标签有着与其配套的蛋白酶（专一性强），此蛋白酶识别的是[/font][font=Calibri]SUMO[/font][font=宋体]的三级结构，切割的特异性极高，不存在任何氨基酸的残留，因此适用于重组蛋白表达。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多详情可以关注[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-tag][b]蛋白标签[/b][/url]纯化：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-tag[/font][/font][font=Calibri] [/font]

很多朋友问这样一个问题：为什么毕赤酵母表达困难?他们自己也很纳闷，重组酵母pcr检测也证明目的基因重组了，但是诱导之后就是在表达上清中检测不到目的蛋白，仔细研究操作手册后仍然不知道原因。本人，根据自己的经验，采用倒推的方法，按实验过程从后向前分析，供大家参考：1、诱导之后表达上清中检测不到目的蛋白：分析1：检测的方法是否有问题，要考虑是不是蛋白表达量低而没有检测到? 如果是蛋白表达低，可以选择浓缩蛋白，具体的方法很多，有TCA、丙酮、浓缩柱等等方法，之前在本版已经发过帖，在此不赘述。 2、如果蛋白浓缩N倍之后仍然检测不到，那基本可以确证蛋白并不在上清中。那么蛋白到哪里去了，考虑是否没有分泌出来，而是在胞内，那就需要通过裂解酵母来检 测胞内蛋白，具体的方法很多，在此也不赘述，曾整理过相关破碎的帖子。 3、如果胞内也没有目的蛋白表达，那么基本可以确定蛋白并没有表达。 4、为什么没有表达呢?倒推回来就是诱导的过程了，诱导体系是什么?甲醇浓度是多少?培养问题是多少，转速是多少?这些都要注意。甲醇一般是0.5%-1.0%，本人用的 是0.5%，也有很多人也用1.0%，曾见过一个帖子，说超过1.5%反而会抑制表达，没有验证过，供大家参考。培养问题28-30度比较合适，转速250rpm比较合适，诱导 体系没有固定的体系，说明书上推荐的是BMGY到OD600 2~6，换到BMMY中OD600 为1左右。 5、如果诱导的过程也没有问题，那问题就复杂了，特别是重组酵母PCR检测证明目的基因确实已经发生了重组。这个时候是最郁闷的了，但是郁闷怎么办，还是要找原 因，在此我给的建议是先做RT-PCR证明mRNA水平的情况，也就是说有没有转录。如果转录了，后续的操作也没有问题(本帖的1、2、3、4项)，那么只有重新设计实 验，比如换酵母株，有文章上说：用GS115表达不出蛋白，换KM71H后，大部分克隆能表达。 6、有个帖子说的很好，在此和大家分享一下。 1、 菌株：用GS115表达不出蛋白，换KM71H后，大部分克隆能表达。 2、温度：　在28度和室温下诱导表达，表达水平可能都不低。 3、pH：手册上用6.0，pH提高到6.8，不表达的蛋白可能就表达出来。BMMY的pH7.0-7.5比较合适。国内外做的最好的rHSA，最适pH大概5-6左右。pH3的时 候yeast和peptone好像会沉淀的，可以用磷酸和磷酸二氢钾调，具体比例自己去试试。 4、偏爱密码子： codon bias一般不是主要的问题，你要表达的蛋白特性才是主要问题，酵母对分子量大(30KD以上)，结构复杂(如一些蛋白酶)，二硫键含量多的 蛋白往往不能有效表达，尤其是分泌表达。密码子改造对一些较小的而且结构简单的蛋白表达量的提高可能有一些作用。比如一位战友用Pichia酵母表达一个单链 抗体，29KD，含有2对二硫键，表达量约几毫克每升，选用酵母偏好密码子全基因合成后，表达量没有什么提高。 5、表达时间与空质粒转化对照：诱导时间长了以后，是会有很多蛋白分泌出来的，时间越长杂蛋白就越多，且分子量都比较大。最好做一个空质粒转化的对照， 这样就会比较肯定到底是不是自身的蛋白分泌的结果。 6、污染：每个样品从G418板上挑10个左右单克隆于2ml BMGY摇菌(30ml玻璃管，比LB管大一点)，纱布一般用8层，一天左右看着比较浑离心，留样1ml，余 1ml换2ml BMMY诱导表达，3,4层纱布足够了。 污染一般都是跟瓶口覆盖有关的原因造成的，只盖纱布肯定会污染。加盖报纸后，就再没遇到过污染。如果只用6层纱布，污染的可能当然很大，100ml三角瓶， 装量10ml培养液，用橡筋把8层纱布和2层报纸拴紧封口，空气浴摇床。 7、不表达：蛋白有没有表达就要看你的运气了，一般重复2-3次实验都没有表达菌株，这个蛋白就放弃表达了。 8、表达量： 30KD,10mg/L表达量已经很高，最直接的方法是发酵，一般提高5-10倍。大肠杆菌一样出现大团的超表达蛋白。 9、糖基化：酵母分泌表达的N糖基化是可以预测的，有如下序列：N X S/T就是潜在的糖基化位点，X为任意氨基酸，1个糖基化位点会加上1-3KD左右的糖基。另外可 能还有O糖基化话，但是无法预测其位点，不过很少听说表达蛋白有O糖基化的。如果胞内表达，不存在糖基化的问题。 10、表型与表达：重组SalI和BglII酶切产生单交换和双交换，结果就是产生Mut+和Muts表型的菌株;前者在甲醇诱导表达时生长快，消耗的甲醇多，后者生长慢，消耗 的甲醇少，所以诱导表达时Muts表型要求更高的菌体浓度。一般用Mut+表型的较多，但是对某些蛋白Muts菌株可能表达的更好，只有试试才知道你的蛋白用那种菌 株表达较好。 11、培养基 YPD：最基本的培养用;BMGY：诱导表达前培养用;BMMY：诱导表达用;MD：电转化后筛选his+用。 YEPD是不能代替BMGY的，因为有葡萄糖，这样残留的葡萄糖会影响下一步的诱导表达。不过有一种方法是可行的，就是用YPG培养基代替，只是把YEPD中的葡萄糖 用3%的甘油代替，也可以降低成本。摇瓶毕竟不能和发酵罐比，甘油残余会抑制甲醇利用。 BMGY、BMMY灭菌后才能加甲醇、磷酸钾、生物素。配制BMMY时也没必要用5%过滤除菌的甲醇，在灭菌后使用前加100%甲醇至你要的浓度。 YNB可以高压灭菌，没问题的，也可以0.22um过滤处理，天冬氨酸和苏氨酸要待培养基高压灭菌后加入;配YPD时可以加入YPD一起灭菌，但时间不能太长，温度不能 太高，一般121-125度12-15分钟足够了。若时间过长，温度过高，可能导致YPD焦化。glucose和含氮化合物在一起容易产生美拉德反应，这是配制培养基中的禁忌。 颜色很深的话，基本不能使用了。或者含有葡萄糖和/或YNB的培养基108度35min高压灭菌。 小量发酵其实可以把培养基成分中的YNB和生物素去除，培养基价格便宜，操作又方便，可以直接灭菌，效果也很好(效果不比含YNB的差)。 如果是用自己配置的培养基，如玉米浸提液、麦芽浸提液、麦麸浸提液等等，可以不用换液，采取添料来维持酵母对培养基的营养需要。 用无机盐进行大规模发酵，更省钱。更多有关蛋白表达纯化的相关资料，请点击：资料专区

[font=宋体][font=宋体]亲和层析是应用生物高分子与配基可逆结合的原理，将配基通过共价键牢固结合于载体上而制得的层析系统。这种可逆结合的作用主要是靠生物高分子对它的配基的空间结构的识别。常用的生物亲和关系有酶[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]底物、底物类似物、抑制剂、激活剂、辅因子，抗体[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]抗原，激素[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]受体蛋白、载体蛋白，外源凝集素[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]多糖、糖蛋白、细胞表面受体，核酸[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]互补核苷酸序列、组蛋白、核酸结合蛋白等，具有高效、简单、快速的优点，是当前最为理想的分离纯化蛋白的方法。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]亲和层析纯化步骤：[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、捕获阶段[/font][/font][font=宋体]在样品捕获阶段，通过将速度和容量进行优化组合，使样品中的目标产物被有效的分离、浓缩和稳定化处理。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]捕获阶段一般选择亲和层析，离子交换层析或者疏水层析，通过吸附作用使样品和杂质实现分离。如果样品带有标签，第一步可以选择标签蛋白亲和层析；如果样品不带有标签，可以考虑使用离子交换[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]疏水层析。由于捕获阶段一般样品量较大，杂质较多，所以捕获阶段分辨率不是特别主要考虑的因素，可以主要考虑增加上样量和速度。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]、中度纯化阶段[/font][/font][font=宋体]在中度纯化阶段，应将注意力集中于将目标样品和大多数大体积的杂质分开。在中度纯化阶段，速度不是最重要的因素，因为经过捕获阶段样品体积会缩减。中度纯化阶段一般建议使用离子交换层析或者疏水层析进一步提高样品的纯度。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3[/font][font=宋体]、精细纯化阶段[/font][/font][font=宋体]在精细纯化阶段，关注的重点就是如何达到高分辨率，从而完成最终的纯化。在此前的步骤中已经去除了大部分的污染物和杂质。如果需要达到较高的分辨率，可能会在此步骤造成一些回收率的损失。精细纯化阶段一般建议使用高分辨率的分子筛或者高分辨率的离子交换层析柱。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]亲和层析纯化优缺点：[/b][/font][font=宋体][font=Calibri]1. [/font][font=宋体]亲和层析法是分离蛋白质的一种极为有效的方法，它经常只需经过一步处理即可使某种待提纯的蛋白质从很复杂的蛋白质混合物中分离出来，而且纯度很高。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2. [/font][font=宋体]是最有效的生物活性物质纯化方法，它对生物分子选择性的吸附和分离，可以取得很高的纯化倍数。此外蛋白在纯化过程中得到浓缩，结合到亲和配基后，性质更加 稳定，其结果提高了活性回收率。此外它可以减少纯化步骤，缩短纯化时间，对不稳定蛋白的纯化十分有利。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3. [/font][font=宋体]除特异性的吸附外，仍然会因分子的错误认别和分子间非选择性的作用力而吸附一些杂蛋白质，另洗脱过程中的配体不可避免的脱落进入分离体系。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]4. [/font][font=宋体]载体较昂贵，机械强度低，配基制备困难，有的配基本身要经过分离纯化，配基与载体耦联条件激烈等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多详情可以参看义翘神州[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-purification-by-ac][b]亲和层析纯化蛋白[/b][/url]：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-purification-by-ac[/font][/font]

木糖醇，即戊五醇，为糖醇的一种，是一种可以作为蔗糖替代物的五碳糖醇，是木糖代谢的产物，木糖广泛存在于各种植物中，但由于含量低，提取成本高，故食品生产过程中通过木糖的加氢还原得到木糖醇。木糖醇的甜度与蔗糖相当，但热量比蔗糖低很多。木糖醇在体内的代谢途径与一般糖类不同，不需要胰岛素的参与，大部分分解成二氧化碳从肺部经过呼吸排出体外，不会升高血糖,因此木糖醇常被作为糖尿病人的甜味剂,木糖醇食品：添加有木糖醇的休闲食品都可称为木糖醇食品。看来木糖醇替代白糖是有科学依据的。同时糖尿病人需要注意的是无糖食品，并不是绝对的“无糖”无糖食品：根据国家标准《预包装特殊膳食用食品标签通则》规定，"无糖"的要求是指固体或液体食品中每100克或100毫升的含糖量不高于0.5克。无糖食品里面，可能含有淀粉水解物类作为甜味来源，也就是淀粉糖浆、果葡糖浆、麦芽糖之类。这些糖浆升高血糖、变成能量的效率，未必会比蔗糖慢。曾见过这样的产品，添加了葡萄糖浆或淀粉糖浆，还号称无糖食品。而这些配料，升高血糖的速度甚至可能快于白糖。其次，中国大部分无糖产品都用的是高效甜味剂，特别是合成甜味剂，比如安塞蜜、甜蜜素、糖精、阿斯巴甜等。但是，这些东西的甜度是蔗糖的几百倍。那么如原来的配方中，100克产品要加40克蔗糖，现在只需加零点几克甜味剂就够了，用什么来凑体积呢？一般来说，用来做填充的大都是淀粉、淀粉水解物或糊精之类。

木糖醇，即戊五醇，为糖醇的一种，是一种可以作为蔗糖替代物的五碳糖醇，是木糖代谢的产物，木糖广泛存在于各种植物中，但由于含量低，提取成本高，故食品生产过程中通过木糖的加氢还原得到木糖醇。木糖醇的甜度与蔗糖相当，但热量比蔗糖低很多。木糖醇在体内的代谢途径与一般糖类不同，不需要胰岛素的参与，大部分分解成二氧化碳从肺部经过呼吸排出体外，不会升高血糖,因此木糖醇常被作为糖尿病人的甜味剂,木糖醇食品：添加有木糖醇的休闲食品都可称为木糖醇食品。看来木糖醇替代白糖是有科学依据的。同时糖尿病人需要注意的是无糖食品，并不是绝对的“无糖”无糖食品：根据国家标准《预包装特殊膳食用食品标签通则》规定，"无糖"的要求是指固体或液体食品中每100克或100毫升的含糖量不高于0.5克。无糖食品里面，可能含有淀粉水解物类作为甜味来源，也就是淀粉糖浆、果葡糖浆、麦芽糖之类。这些糖浆升高血糖、变成能量的效率，未必会比蔗糖慢。曾见过这样的产品，添加了葡萄糖浆或淀粉糖浆，还号称无糖食品。而这些配料，升高血糖的速度甚至可能快于白糖。其次，中国大部分无糖产品都用的是高效甜味剂，特别是合成甜味剂，比如安塞蜜、甜蜜素、糖精、阿斯巴甜等。但是，这些东西的甜度是蔗糖的几百倍。那么如原来的配方中，100克产品要加40克蔗糖，现在只需加零点几克甜味剂就够了，用什么来凑体积呢？一般来说，用来做填充的大都是淀粉、淀粉水解物或糊精之类。所以糖尿病人千万不能被无糖二字蒙蔽哦！

请问用原子荧光做99.95%纯度的钼全分析准确率有多高??

什么是白藜芦醇？白黎芦醇，化学名称为芪三酚，分子式C14H12O3，分子量228.25，产生于葡萄叶表皮和浆果果皮中，是植株对真菌病害感染反应的结果。它以游离态(顺式-、反式-)和糖苷结合态(顺式-、反式-)两种形式存在，且均具有抗氧化效能，是葡萄中的一种重要的植物抗毒素。白黎芦醇能够阻止低密度脂蛋白的氧化，因而具有潜在的防心血管疾病、防癌、抗病毒及免疫调节作用。白藜芦醇对人体有什么作用？作为葡萄酒的一种功能性成分，白藜芦醇的作用主要表现为它的抗氧化特性。具体来说，白藜芦醇对人体具有以下重要作用：1．抗菌作用Jeandert 和Sbaghi.等的研究表明,葡萄受到葡萄霜霉菌侵染后，离坏死果实较近且没有受到侵染的部位,白藜芦醇的含量很高，能有效地抑制坏死区的扩展。2．抗癌、抗诱变作用1997年1月，美国芝加哥伊利诺斯大学药学院的 John Pezzuto教授领导的研究小组在著名的美国《科学》杂志上，发表了题为《葡萄的天然产物白藜芦醇的抗癌活性》的论文，引起医学科学界的轰动。论文证明白藜芦醇能有效抑制与癌症各过程相关的细胞活动，也就是说，在癌症发生的起始、增进和扩展三个主要阶段，白藜芦醇都有防癌活性，并对癌症发生的三个阶段全部抑制。上述的研究论文还指出，在桑葚、花生、葡萄等72种植物中，发现有白黎芦醇，其中尤以葡萄中含量高，特别是葡萄果皮和红葡萄酒中含量最多。据此，美国研究癌症的专家已经向人们提出防癌新建议：多吃葡萄；吃葡萄不吐葡萄皮。并且认为，通常的葡萄酒饮酒量一般已可达到白黎芦醇的有效量。此外，白藜芦醇还具有防治冠心病、高血脂症、抗氧化、扫除自由基、抗血栓、抗炎症和抗过敏等作用。

白藜芦醇及其糖苷是广泛存在于葡萄属植物中的一种具有保健作用的植物应激素，具有顺式和反式两种构型。通常条件下，多数方法不能同时测定4种异构体，因而测定结果不能真实反映葡萄酒中白藜芦醇异构体的含量。 迪马科技建立的《葡萄酒中白藜芦醇苷和白藜芦醇的测定》方案，无需样品提取过程，调节pH 后，直接使用ProElut BLC 白藜芦醇检测专用固相萃取柱进行净化，高效液相色谱法检测。可以为选择葡萄品种、改进酿造工艺、判断红酒真伪及质量等等方面提供重要的参考。[color=#ff0000][b]专用柱优势：[/b][/color] ProElut BLC 柱填料由多种吸附剂按照一定的比例分层填装而成，采用多种作用机理去除葡萄酒中酚类化合物，如黄酮、花色素、单宁等，适用于各类葡萄酒中白藜芦醇的检测；本产品是商品化的成品柱，吸附剂稳定性好，不受外界环境因素影响，保证实验结果的重现性和准确性；过柱过程中操作步骤简单，有机溶剂用量少，减少对人体的危害同时提高工作效率。 以下为详细解决方案，敬请参考！[align=center][color=#0000ff][b]葡萄酒中白藜芦醇苷和白藜芦醇的测定[/b][/color][/align][color=#0000ff][b]1、适用范围[/b][/color] 本方案适用于葡萄酒中顺反式白藜芦醇苷和顺反式白藜芦醇的检测。[color=#0000ff][b]2、标准品配制[/b][/color][b](1) 标品① 储备液[/b]：反式白藜芦醇苷1000 μg/mL：溶剂为甲醇；反式白藜芦醇1000 μg/mL：溶剂为甲醇。[b]② 混合标准溶液制备：[/b]顺反式白藜芦醇苷混标：取1 mL反式白藜芦醇苷1000 μg/mL储备液于透明10 mL带盖玻璃管中，在254 nm和365 nm混合波长下避光照2 h，取40 μL用30%乙腈水稀释至1 mL，同时制备40 μg/mL反式白藜芦醇苷溶液，进行HPLC分析，采用外标法以峰面积进行计算，得反式白藜芦醇苷浓度295 μg/mL、即顺式白藜芦醇苷浓度705 μg/mL；顺反式白藜芦醇混标：取1 mL反式白藜芦醇1000 μg/mL储备液于透明10 mL带盖玻璃管中，在254 nm和365 nm混合波长下避光照2 h，取40 μL用30%乙腈水稀释至1 mL，同时制备40 μg/mL反式白藜芦醇溶液，进行HPLC分析，采用外标法以峰面积进行计算，得反式白藜芦醇浓度405 μg/mL、即顺式白藜芦醇浓度595 μg/mL；四种物质混合标准溶液：取等体积的顺反式白藜芦醇苷混标和顺反式白藜芦醇混标混匀，得到四种物质混标，浓度分别为：反式白藜芦醇苷浓度147.5 μg/mL、顺式白藜芦醇苷浓度352.5 μg/mL、反式白藜芦醇浓度202.5 μg/mL、顺式白藜芦醇浓度297.5 μg/mL；[b](2) 加标方法：[/b]取四种物质混合标准溶液400 μL，加至5 mL样品中。[color=#0000ff][b]3、样品制备[/b][/color]取约50mL样品于100 mL烧杯中，用氨水调节样品pH至6.0，取出5 mL待净化（如需进行回收率测试，在此步骤加入混合标准品）。[color=#0000ff][b]4、净化——ProElut BLC 6 mL（Cat.# 65918）[/b][/color]a活 化： 依次加入5 mL甲醇、5 mL水，流出液弃去；b上 样： 加入待净化液，流出液弃去；c淋 洗： 加入5 mL 30%甲醇水，流出液弃去，推干小柱；d洗 脱： 加入5 mL甲醇，收集流出液；e重新溶解： 将流出液在55 ℃下氮吹至低于1 mL，用流动相定容至5 mL，供HPLC分析。[color=#0000ff][b]5、色谱条件[/b][/color][b]色谱柱： Platisil ODS 250 × 4.6 mm, 5 μm（Cat.# 99503）[/b]流 速： 1.0 mL/min检测器： 303 nm柱 温： 30 ℃进样量： 20 μL流动相： 乙腈：水 =30:70[color=#0000ff][b]6、添加回收结果[/b][/color][align=center]白藜芦醇苷和白藜芦醇的HPLC检测的添加回收结果[/align][table=96%][tr][td][align=center][b]目标物[/b][/align][/td][td][align=center][b]添加水平（mg/L）[/b][/align][/td][td][align=center][b]甘露之城干红葡萄酒（%）[/b][/align][/td][td][align=center][b]空白含量（mg/L）[/b][/align][/td][/tr][tr][td][align=center]反式白藜芦醇苷[/align][/td][td][align=center]11.8[/align][/td][td][align=center]101.27[/align][/td][td][align=center]4.43[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]顺式白藜芦醇苷[/align][/td][td][align=center]28.2[/align][/td][td][align=center]103.91[/align][/td][td][align=center]4.74[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]反式白藜芦醇[/align][/td][td][align=center]16.2[/align][/td][td][align=center]100.00[/align][/td][td][align=center]0.98[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]顺式白藜芦醇[/align][/td][td][align=center]23.8[/align][/td][td][align=center]101.24[/align][/td][td][align=center]0.66[/align][/td][/tr][/table][align=center]白藜芦醇苷和白藜芦醇的HPLC检测的添加回收结果[/align][table=96%][tr][td][align=center][b]目标物[/b][/align][/td][td][align=center][b]添加水平（mg/L）[/b][/align][/td][td][align=center][b]拉菲葡萄酒（%）[/b][/align][/td][td][align=center][b]空白含量（mg/L）[/b][/align][/td][/tr][tr][td][align=center]反式白藜芦醇苷[/align][/td][td][align=center]11.8[/align][/td][td][align=center]100.23[/align][/td][td][align=center]7.00[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]顺式白藜芦醇苷[/align][/td][td][align=center]28.2[/align][/td][td][align=center]100.42[/align][/td][td][align=center]9.89[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]反式白藜芦醇[/align][/td][td][align=center]16.2[/align][/td][td][align=center]102.03[/align][/td][td][align=center]2.83[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]顺式白藜芦醇[/align][/td][td][align=center]23.8[/align][/td][td][align=center]100.54[/align][/td][td][align=center]2.64[/align][/td][/tr][/table][color=#0000ff][b]7、色谱图[/b][/color][align=center][color=#0000ff][b][img]http://www.dikma.com.cn/UploadImage/edit/images/1-1(24).jpg[/img][/b][/color][/align][align=center]白藜芦醇苷和白藜芦醇的标准液相色谱图[/align][align=center][/align][align=center][img]http://www.dikma.com.cn/UploadImage/edit/images/1-2(13).jpg[/img]甘露之城干红葡萄酒（空白样品）的液相色谱图[/align][align=center][/align][align=center][img]http://www.dikma.com.cn/UploadImage/edit/images/1-3(4).jpg[/img]甘露之城干红葡萄酒（加标样品）的液相色谱图[/align][align=center][img]http://www.dikma.com.cn/UploadImage/edit/images/1-4(3).jpg[/img]拉菲葡萄酒（空白样品）的液相色谱图[/align][align=center][/align][align=center][img]http://www.dikma.com.cn/UploadImage/edit/images/1-5(3).jpg[/img]拉菲葡萄酒（加标样品）的液相色谱图[/align][align=center][/align][color=#0000ff][b]葡萄酒中白藜芦醇苷和白藜芦醇的测定相关产品信息：[/b][/color][table=649][tr][td][align=center][b]货号[/b][/align][/td][td][align=center][b]名称[/b][/align][/td][td][align=center][b]规格[/b][/align][/td][/tr][tr][td=3,1][align=center][b]样品前处理[/b][/align][/td][/tr][tr][td][align=center]65918[/align][/td][td][align=center]ProElut BLC[/align][/td][td][align=center]6 mL, 30/pk[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]244358[/align][/td][td][align=center]12管防交叉污染真空SPE萃取装置[/align][/td][td][align=center]12位[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]4803[/align][/td][td][align=center]1,3,6mL柱管通用连接器[/align][/td][td][align=center]15/pk[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]4806[/align][/td][td][align=center]考克(控制流量)[/align][/td][td][align=center]15/pk[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]99011[/align][/td][td][align=center]真空/正压两用泵，无油[/align][/td][td][align=center]1/pk[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]99013[/align][/td][td][align=center]抽滤瓶套装[/align][align=center](包括硅橡胶管2米,2L抽滤瓶及橡胶塞)[/align][/td][td][align=center]1/pk[/align][/td][/tr][tr][td][align=center][color=#ff0000]30039[/color][/align][/td][td][align=center]FitMax针头式过滤器 Nylon[/align][/td][td][align=center]13 mm,0.22 μm 100/pk[/align][/td][/tr][tr][td][align=center][color=#ff0000]30040[/color][/align][/td][td][align=center]FitMax针头式过滤器 Nylon[/align][/td][td][align=center]13 mm,0.45 μm 100/pk[/align][/td][/tr][tr][td=3,1][align=center][b]色谱柱及保护柱[/b][/align][/td][/tr][tr][td][align=center]99503[/align][/td][td][align=center]通用型反相液相色谱柱[/align][align=center]Platisil ODS[/align][/td][td][align=center]250 × 4.6 mm, 5 μm[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]6201[/align][/td][td][align=center]EasyGuard C18 保护柱[/align][/td][td][align=center]10 × 4.0 mm 1/pk[/align][align=center]2个柱芯+1个柱套[/align][/td][/tr][tr][td=3,1][align=center][b]HPLC溶剂Ÿ 缓冲盐Ÿ 离子对试剂[/b][/align][/td][/tr][tr][td][align=center]50102[/align][/td][td][align=center]甲醇 HPLC级[/align][/td][td][align=center]4 L[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]50101[/align][/td][td][align=center]乙腈 HPLC级[/align][/td][td][align=center]4 L[/align][/td][/tr][tr][td=3,1][align=center][b]通用色谱产品[/b][/align][/td][/tr][tr][td][align=center]52401B[/align][/td][td][align=center]瓶架/蓝色（现货）[/align][/td][td][align=center]50孔[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]52401A[/align][/td][td][align=center]瓶架/白色（现货）[/align][/td][td][align=center]50孔[/align][/td][/tr][tr][td][align=center][color=#ff0000]1034[/color][/align][/td][td][align=center]样品瓶（棕色/螺纹）[/align][/td][td][align=center]2 mL, 100/pk[/align][/td][/tr][tr][td][align=center][color=#ff0000]1035[/color][/align][/td][td][align=center]样品瓶盖/含垫（已经组装）[/align][/td][td][align=center]100/pk[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]H80465[/align][/td][td][align=center]HPLC 进样针[/align][/td][td][align=center]25 μL[/align][/td][/tr][/table]红色产品货号#30039、#30040、#1034、#1035火热促销中

[font=宋体][font=宋体]离子交换层析[/font][font=Calibri](IEX)[/font][font=宋体]是一种主要基于蛋白净电荷的色谱分离方法，通常用于追踪脱酰胺和琥珀酰亚胺的形成。[/font][font=Calibri]IEX[/font][font=宋体]有两种类型：阳离子交换和阴离子交换层析法。当缓冲液[/font][font=Calibri]pH[/font][font=宋体]值高于此[/font][font=Calibri]IP[/font][font=宋体]时，蛋白带负电（阴离子）；当[/font][font=Calibri]pH[/font][font=宋体]值低于此[/font][font=Calibri]IP[/font][font=宋体]时，蛋白带正电（阳离子）。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]所有蛋白都表现出净电荷，这取决于蛋白氨基酸组成和任何共价连接的修饰。蛋白净电荷受溶解它的溶剂[/font][font=Calibri]pH[/font][font=宋体]所影响，因为溶剂会与蛋白进行氢离子交换。通常情况下，蛋白与[/font][font=Calibri]IEX[/font][font=宋体]的结合必须通过反复试验来确定，使用一系列[/font][font=Calibri]pH[/font][font=宋体]值的溶剂以确定蛋白保留的最佳[/font][font=Calibri]pH[/font][font=宋体]。通常溶剂的[/font][font=Calibri]pH[/font][font=宋体]值与[/font][font=Calibri]pI[/font][font=宋体]相差约一个[/font][font=Calibri]pH[/font][font=宋体]单位就足以实现蛋白结合。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]离子交换层析优缺点介绍：[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]离子交换层析法是一种常用的分离分析技术，具有分离效率高、操作简单、可靠性高、灵敏度高等优点。其优点如下：[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]分离效率高：离子交换层析法可以快速、有效地分离各种生物分子和配体，对于复杂的生物样品可以获得较高的分离效果。[/font][font=宋体]操作简单：离子交换层析法的操作相对简单，不需要过多的手动操作，可以自动化进行，减少了人为误差。[/font][font=宋体]可靠性高：离子交换层析法的分离过程相对稳定，分离结果重现性好，可以用于大规模的分离分析。[/font][font=宋体]灵敏度高等优点：离子交换层析法对于低浓度的样品也能够获得较好的分离效果，对于痕量物质的分离和鉴定具有重要意义。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体]但是，离子交换层析法也存在一些缺点：[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]生产率低：离子交换层析法的生产率相对较低，对于大规模的分离分析可能不太适合。[/font][font=宋体]需要使用大量的缓冲液和洗脱液：离子交换层析法需要使用大量的缓冲液和洗脱液，对于环境保护有一定的影响。[/font][font=宋体]对样品条件要求严格：离子交换层析法对于样品的条件要求比较严格，对于不同性质的样品需要使用不同的离子交换剂和分离条件。[/font][font=宋体]总的来说，离子交换层析法是一种有效的分离分析方法，但是也存在一些缺点，需要根据具体的实验条件和要求进行选择和使用。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多关于[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/chromatography-purification]蛋白层析纯化[/url]详情可以关注：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/chromatography-purification[/font][/font]

请教有木糖，木糖醇，木酮糖的色谱分析经验的朋友，有没有此类物质分析方法的文章？柱子应如何选择？

木糖醇、山梨醇、麦芽糖醇……这样的名词越来越多出现在了食品中，普通消费者根本搞不清。记者昨从宁波市质监局获悉，宁波马上将启动《食品中木糖醇、山梨醇、麦芽糖醇、甘露糖醇、乳糖醇和异麦芽酮糖醇的测定》的国家方法标准起草工作。　　有关专家介绍，许多食品生产企业在食品中添加木糖醇等代糖物质，但相关研究表明某些代糖物质对人体有致病的可能性。我国目前在检测代糖食品方面的方法标准尚属空白。宁波将启动的这项国家方法标准起草工作将于2008年年底前完成。

什么是木糖醇　　营养师宋新称：木糖醇是从白桦树和橡树等植物中提取出来的一种天然植物甜味剂，由于木糖醇不容易被微生物发酵产生酸性物质，所以能减少龋齿菌和齿垢的产生，对预防龋齿有一定的功效。木糖醇也会让人发胖　　很多人从吃木糖醇口香糖开始，在心理上认为木糖醇热量低，所以在吃其他木糖醇食物的时候没有节制。但是实际上，木糖醇吃多了也会发胖。而且从理化性质来讲，木糖醇是偏凉的，它不被胃酶分解，直接进入肠道，吃多了对胃肠会有一定刺激，可能引起腹部不适、胀气、肠鸣。由于木糖醇在肠道内吸收率不到20%，容易在肠壁积累，易造成渗透性腹泻。　　在欧美国家，含有木糖醇的食品，都会在标签上注明“过量摄取可能会导致腹泻”这样的消费提示。但在国内市场销售的食品，却鲜见这种标识。某知名口香糖生产商表示，其生产的木糖醇口香糖中“木糖醇含量较低，并不足以引起腹泻”，因此这类标识“没有必要”。尽管如此，营养师还是提醒说，以中国人的体质，一天摄入木糖醇的总量不能超过50克。光嚼嚼口香糖应该没什么问题，但如果吃大量的其他木糖醇食品，就需要注意用量了过量食用会使血脂升高　　糖尿病患者由于体内的胰岛素分泌功能紊乱，不能食用过多的糖，就连少量的糖也可能引起不良后果。目前，我国有3000万左右的糖尿病患者，就是说，涉及3000万左右的家庭要慎重地选择饮食。这也使许多商家抓住了赚钱机会，大量生产无糖食品。于是，出现了越来越多的“适宜”糖尿病人服用的食品，比如超干啤酒、南瓜汁饮料、无糖奶粉、无糖饼干、无糖麦片、无糖口香糖、无糖糖果等等。　　营养师说，糖尿病病人因不能食用精制的糖类，用木糖醇来做调味品是个不错的选择。但需要注意的是，木糖醇和葡萄糖一样，由碳、氢、氧三种物质组成，在人体内氧化后可释放出热能。木糖醇在代谢初期，可能不需要胰岛素参与，但在代谢后期，则需要胰岛素的促进。　　进食木糖醇后，对正常人血糖升高的幅度和速度都低于葡萄糖和蔗糖，但糖尿病病人一旦摄入多了，会产生副作用，造成血中甘油三酯升高，引起冠状动脉粥样硬化，故糖尿病病人也不宜多食木糖醇。尤其对那些患有由胰岛素诱发的低血糖的人，木糖醇更是禁用的

两次测量结果都表明30％分析纯过氧化氢的准确百分含量都达到37％，药品都是刚买的，我是将过氧化氢先稀释（500倍）后，再用草酸钠标定过的高锰酸钾滴定的。哪位高手能给我分析一下其中的原因？

木糖醇有关物质[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相[/url]，用DB1701毛细管柱，半乳糖醇和山梨醇分离度达不到2.0，请问有谁做过这个项目吗？

甲醇沉淀法除血清中蛋白时，加入甲醇的比例是多少．多谢指教！[em62]

版友们，有测过威百亩残留的吗？以前的方法都是将其转化为异硫氰酸甲酯后，采用GC-FID检测，现在有直接能测定威百亩的方法吗？大家有什么建议也可以说下，谢谢了啊 ！！！！！！！！（不是咆哮体）

[color=#DC143C]木糖醇[/color][img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2009/10/200910242315_177838_1610969_3.gif[/img]基本简介　　分子立体模型名称 木糖醇　　英文名 Xylitol

[font=宋体]蛋白质是包括人类在内的各种生物有机体的重要组成成分，是生命的物质基础之一。生物体的生长、发育、遗传和繁殖等一切生命活动都离不开蛋白质。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]随着分子生物学、结构生物学、基因组学等研究的不断深入，人们意识到仅仅依靠基因组的序列分析来试图阐明生命活动的现象和本质是远远不够的。只有从蛋白质组学的角度对所有蛋白质的总和进行研究，才能更科学地掌握生命现象和活动规律，更完善地揭示生命的本质。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]由此许多学者将生命科学领域的研究焦点从基因转向蛋白质，使蛋白质成为揭示生命活动现象和分子生物学机理的重要研究对象。研究蛋白质首要的步骤是将目的蛋白从复杂的大分子混合物中分离纯化出来，得到高纯度具有生物学活性的目的物。因此，高效的纯化技术和手段是蛋白质研究的重要基础和关键之一。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]蛋白纯化的目的[/font] [/font][/b][font=宋体][font=宋体]蛋白纯化的目的是将目标蛋白质从细胞裂解液的全部组分中分离出来，同时仍保留蛋白的生物学活性及化学完整性。蛋白质的分离和提纯工作是一项艰巨而繁重的任务，需根据蛋白的特性选择合适的纯化方法来提高获得的蛋白制品的纯度。[/font] [/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]蛋白纯化的原理[/font] [/font][/b][font=宋体][font=宋体]不同蛋白质的氨基酸序列及空间结构不同，导致其在物理、化学、生物学等性质上存在差异，利用待分离蛋白质与其它蛋白质性质上的差异，即可以设计出一套合理的蛋白纯化方案。蛋白的纯化大致分为粗分离阶段和精细纯化阶段两个阶段。粗分离阶段主要将目的蛋白和其他细胞成分如[/font] [font=Calibri]RNA[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]DNA [/font][font=宋体]等分开，常用的方法为硫酸铵沉淀法。精细纯化阶段的目的是把目的蛋白与其他大小及理化性质接近的蛋白区分开来，[/font][/font][b][font=宋体][font=宋体]常用的方法有：凝胶过滤层析、离子交换层析、疏水层析、亲和层析等。[/font] [/font][/b][font=宋体] [/font][b][font=宋体]①[/font][font=宋体]凝胶过滤层析[/font][/b][font=宋体]凝胶过滤层析（又叫做分子筛）是根据样品的分子大小对样品进行分离的一种简单温和的层析技术。凝胶过滤层析也称分子筛层析、排阻层析，是利用具有网状结构的凝胶的分子筛作用，根据被分离物质的分子大小不同来进行分离。不同于离子交换层析和亲和层析，凝胶过滤的层析样品不与层析柱料结合，因此，缓冲液成分不直接影响分辨率。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]原理：层析柱中的填料是球状颗粒的惰性的多孔网状结构的柱料，多是交联的聚糖[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]如葡聚糖或琼脂糖[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]类物质。在加入样品之后，样品中的小分子物质能进入球状填料内部，在柱子中停留时间较长；而大分子物质不能进入球状填料内部，停留时间较短。所以当样品经过凝胶过滤层析柱分离后，样品中的不同分子大小的物质就可以被分离开了。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]特点：[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]根据分子大小和形状进行分离[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]是一种非吸附的分离方式[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]缓冲液成分不直接影响分辨率，只需要一种缓冲液[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]操作便捷[/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]②[/font][font=宋体]离子交换层析[/font][/b][font=宋体]离子交换层析是目前蛋白质分离纯化中应用最广泛的方法之一。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]原理：不同蛋白等电点差异，分子大小差异，在同一个流动相中电荷密度分布不同，电荷量不等，与具有相反电荷的离子交换介质结合强度不同，在流动相洗脱时保留时间不同，从而得以分离。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体]特点：[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]根据分子大小和等电点差异进行分离[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]灵敏度高，重复性，选择性好，分析速度快[/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]③[/font][font=宋体]疏水层析[/font][/b][font=宋体]原理：疏水层析是依据蛋白质疏水性差异分离的。即根据蛋白质和疏水介质表面的疏水基团的可逆相互作用进行分离。蛋白的疏水性在高离子强度下被增强，因此在高离子强度环境中结合，通常采用降低离子强度的方式进行洗脱。独特的吸附分离模式使得疏水层析成为硫酸铵盐析后或离子交换高盐洗脱后理想的纯化方式。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]特点：[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]采用了盐的水溶液作为流动相，色谱条件温和，生物大分子的活性回收率很高。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]蛋白质在[/font][font=Calibri]HIC[/font][font=宋体]操作过程中是高盐上样，低盐洗脱（高盐浓度的样品不必作处理就可直接上样）。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]在一次色谱中可同时实现出去盐酸胍、蛋白质复性和分离三个目的。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]温度升高，蛋白质天然折叠伸展，暴露出更多内部疏水集团，使蛋白质的[/font][font=Calibri]HIC[/font][font=宋体]保留发生变化。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]色谱填料稳定性好，盐水体系作流动相无环境污染。[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]④[/font][font=宋体]亲和层析[/font][/b][font=宋体][font=宋体]原理：[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-purification-by-ac][b]亲和层析[/b][/url]是应用生物高分子与配基可逆结合的原理，将配基通过共价键牢固结合于载体上而制得的层析系统。这种可逆结合的作用主要是靠生物高分子对它的配基的空间结构的识别。常用的生物亲和关系有酶[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]底物、底物类似物、抑制剂、激活剂、辅因子，抗体[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]抗原，激素[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]受体蛋白、载体蛋白，外源凝集素[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]多糖、糖蛋白、细胞表面受体，核酸[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]互补核苷酸序列、组蛋白、核酸结合蛋白等，具有高效、简单、快速的优点，是当前最为理想的分离纯化蛋白的方法。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多详情可以参看蛋白纯化技术[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]方法：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-purification-techniques[/font][/font][font=Calibri] [/font]