兽气单胞菌

猪肉为何会在黑夜里发出荧荧蓝光？昨天下午，北京市工商局对外揭晓“谜底”：通过抽检发现，这是一种叫荧光假单胞菌的细菌在“作祟”，与猪肉安全无关。　　专家介绍称，该细菌并不可怕，对正常人群不具有致病性。　　抽检未发现荧光增白物　　近期，有几位消费者反映在建欣苑菜市场、八里桥市场等处购买的猪肉，夜晚会发出荧光，担心吃了可能对身体有害。而这些肉都是从正规屠宰场批发，且肉身上有检验检疫章（本报12月12日曾报道）。　　近日，北京工商部门组织了抽检，由北京市食品安全监控中心对送检样本进行荧光增白物质和荧光假单胞菌检测，结果显示，送检样本均未检出荧光增白物质，不过都检出了荧光假单胞菌。　　猪肉煮熟可杀灭该细菌　　“荧光假单胞菌能产生黄绿色荧光色素而使猪肉发光”，中国农业大学微生物系教授王贺祥介绍，这种细菌在肉及肉制品、禽蛋类等蛋白质丰富的食品中，易生长繁殖。　　王贺祥说，荧光假单胞菌属于革兰氏阴性嗜冷菌，广泛存在于土壤、水、植物、动物活动环境中，也是存在于人类肠道的正常细菌，对正常人群不具有致病性，不必对其恐慌。　　如何杀灭猪肉上的细菌呢？王贺祥介绍，该菌在42℃就会停止生长，超过70℃，只需数秒即可杀死。　　市工商局也表示，消费者购买到的“发光猪肉”，可能在屠宰、储存、运输、销售等过程中污染了荧光假单胞菌，只要猪肉本身没有腐败变质，可以通过焯、炒、煮等方式将猪肉熟制后食用，不会对人体健康产生影响。

单核细胞增生李斯特氏菌及检验单核细胞增生李斯特氏菌是一种人畜共患病的病原菌。它能引起人畜李氏菌的疾病，感染后主要表现为败血症、脑膜炎和单核细胞增多。它广泛存在于自然界中，食品中存在的单增李氏菌对人类的安全具有危险，该菌在4℃的环境中仍可生长繁殖，是冷藏食品威胁人类健康的主要病原菌之一，因此，在食品卫生微生物检验中，必须加以重视。一、生物学特性1、形态与染色该菌为革兰氏阳性短杆菌，大小约为0.5μmх1.0-2.0μm,直或稍弯，两端钝圆，常呈V字型排列，偶有球状、双球状，兼性厌氧、无芽胞，一般不形成荚膜，但在营养丰富的环境中可形成荚膜，在陈旧培养中的菌体可呈丝状及革兰氏阴性，该菌有4根周毛和1根端毛，但周毛易脱落。2、培养特性该菌营养要求不高，在20--25℃培养有动力，穿刺培养2--5天可见倒立伞状生长，肉汤培养物在显微镜下可见翻跟斗运动。该菌的生长范围为2--42℃（也有报道在0℃能缓慢生长），最适培养温度为35--37℃，在pH中性至弱碱性（pH9.6）、氧分压略低、二氧化碳张力略高的条件下该菌生长良好，在pH3.8--4.4能缓慢生长，在6.5% NaCl 肉汤中生长良好。在固体培养基上，菌落初始很小，透明，边缘整齐，呈露滴状，但随着菌落的增大，变得不透明。在5-7%的血平板上，菌落通常也不大，灰白色，刺种血平板培养后可产生窄小的β-溶血环。在0.6%酵母浸膏胰酪大豆琼脂(TSAYE)和改良Mc Bride(MMA)琼脂上，用45°角入射光照射菌落，通过解剖镜垂直观察，菌落呈兰色、灰色或兰灰色。3、生化反应该菌触酶阳性，氧化酶阴性，能发酵多种糖类，产酸不产气，如发酵葡萄糖、乳糖、水杨素、麦芽糖、鼠李糖、七叶苷、蔗糖（迟发酵）、山梨醇、海藻糖、果糖，不发酵木糖、甘露醇、肌醇、侧金盏花醇、棉子糖、卫矛醇和纤维二糖，不利用枸橼酸盐，40%胆汁不溶解，吲哚、硫化氢、尿素、明胶液化、硝酸盐还原、赖氨酸、鸟氨酸均阴性，VP、甲基红试验和精氨酸水解阳性。4、血清型根据菌体（O）抗原和鞭毛(H)抗原，将单增李氏菌分成13个血清型，分别是1/2a、1/2b、1/2c、3a、3b、3c、4a、4b、4ab、4c、4d、4e 和“7”13 个血清型。致病菌株的血清型一般为1/2b、1/2c、3a、3b、3c、4a、1/2a和4b,后两型尤多。5、抵抗力该菌对理化因素抵抗力较强，在土壤、粪便、青储饲料和干草内能长期存活，对碱和盐抵抗力强，60-70℃经5-20min可杀死，70%酒精5min、2.5%石炭酸、2.5%氢氧化钠、2.5%福尔马林20min 可杀死此菌。该菌对青霉素、氨苄青霉素、四环素、磺胺均敏感。二、流行病学单增李斯特氏菌广泛存在于自然界中，不易被冻融，能耐受较高的渗透压，在土壤、地表水、污水、废水、植物、青储饲料、烂菜中均有该菌存在，所以动物很容易食入该菌，并通过口腔-粪便的途径进行传播。据报道，健康人粪便中单增李氏菌的携带率为0.6-16%,有70%的人可短期带菌，4-8%的水产品、5-10%的奶及其产品、30%以上的肉制品及15%以上的家禽均被该菌污染。人主要通过食入软奶酪、未充分加热的鸡肉、未再次加热的热狗、鲜牛奶、巴氏消毒奶、冰激凌、生牛排、羊排、卷心菜色拉、芹菜、西红柿、法式馅饼、冻猪舌等而感染，约占85-90%的病例是由被污染的食品引起的。该菌可通过眼及破损皮肤、粘膜进入体内而造成感染，孕妇感染后通过胎盘或产道感染胎儿或新生儿,栖居于子宫颈的该菌也引起感染，性接触也是本病传播的可能途径，且有上升趋势。三、致病性单增李氏菌进入人体后是否发病，与菌的毒力和宿主的年龄、免疫状态有关，因为该菌是一种细胞内寄生菌，宿主对它的清除主要靠细胞免疫功能。因此，易感者为新生儿、孕妇及40岁以上的成人，此外，酗酒者、免疫系统损伤或缺陷者、接受免疫抑制剂和皮质激素治疗的患者及器官移植者也易被该菌感染。该病的临床表现，健康成人个体出现轻微类似流感症状，新生儿、孕妇、免疫缺陷患者表现为呼吸急促、呕吐、出血性皮疹、化脓性结膜炎、发热、抽搐、昏迷、自然流产、脑膜炎、败血症直至死亡。单增李氏菌的抗原结构与毒力无关，它的致病性与毒力机理如下：1、寄生物介导的细胞内增生，使它附着及进入肠细胞与巨噬细胞；2、抗活化的巨噬细胞，单增李氏菌有细菌性过氧化物歧化酶，使它能抗活化巨噬细胞内的过氧物（为杀菌的毒性游离基团）分解；3、溶血素，即李氏杆菌素O，可以从培养物上清液中获得，为活化的细胞溶素，有α和β两种，为毒力因子。四、检验1、增菌培养取回的样品应在4℃下处理、存放和运送，如果是冷冻样品，则在检验前要保持冷冻状态。取25mL液体或25g半固体或固体样品放入含有225mL无选择性试剂增菌肉汤（EB）的均质杯中进行均质，然后转入三角瓶中，30℃培养4h，加入选择性试剂吖啶黄素、萘啶酮酸，继续培养20h和44h.。2、分离共培养24h和48h后，取EB培养物分别在OXA和LPM或加七叶苷/Fe3+LPM琼脂平板上划线。PALCAM琼脂可替代LPM琼脂。将OXA和PALCAM平板置于35℃培养24-48h，LPM平板在30℃培养24-48h。然后，把LPM平板放于解剖镜载物台上，以45°角入射光从平板下面照射平板，通过目镜垂直向下观察寻找可疑菌落。李斯特氏菌在LPM平板上呈有光泽的兰色或灰色。用已知阳性菌和阴性菌划线的平板作对照。加入七叶苷和Fe3+的LPM平板不用斜射光系统，选择可疑菌落的方法与在OXA上选择可疑菌落的方法相同。在OXA平板上李斯特氏菌菌落周围有一个黑色环，其它菌也可形成黑色环，但形成时间要在两天以上。李斯特氏菌在PALCAM和OXA平板上的菌落特征相似。在PALCAM和OXA或LPM平板上挑取5个或更多的典型菌落，分别划线于TSAYE平板上以得到更纯、更典型的单个菌落。食品检验中在TSAYE平板上纯化是必须的，因为在PALCAM和OXA或LPM平板上分离菌落时可能沾有不可见的受抑微生物。挑取5个典型菌落的原因是一个样品中可能分离到一种以上的李斯特氏菌。30℃TSAYE平板培养24-48h，如果不用于动力观察，也可在35℃培养。3、鉴定步骤（1）观察TSAYE平板通过斜射光观察，寻找呈兰灰至兰色菌落。在TSAYE上用已知菌作对照。（2）、从30℃或更低温度下培养的TSAYE平板上挑取典型菌落做成湿玻片在油镜下观察。湿玻片用0.85%生理盐水菌悬液制成。如果菌量太少，菌体黏附于载玻片上而呈现非运动性。李斯特氏菌是细短杆菌，可见轻微的旋转及翻滚。与已知的李斯特氏菌的对照相比，球形、大的杆状且快速泳动的都不是李斯特氏菌。（3）挑取典型菌落进行过氧化氢酶实验，李斯特氏菌呈过氧化氢酶阳性反应。（4）取16-24h的培养物进行革兰氏染色，李斯特氏菌呈革兰氏阳性杆菌。但是陈旧培养物革兰氏染色会发生变化，而且菌体可成球形。在染色过重的玻片上菌体有呈栅状排列的趋势，易误认为白喉菌而错判。（5）挑取典型菌落接种于TSBYE肉汤管中，35℃培养24h用做糖类发酵和其它生化项目实验。TSBYE肉汤管在4℃下可存放几天，也可反复接种。（6）在TSAYE平板上挑取典型菌落刺种到5%的绵羊血或马血琼脂平板上，刺种时避免触到平板底部和使琼脂破裂，同时设阳性对照（单核细胞增生李斯特氏菌和绵羊李斯特氏菌）和阴性对照（英诺克李斯特氏菌），35℃培养48h。单核细胞增生李斯特氏菌呈窄小的β-溶血环。（7）在明亮的光照下，观察经穿刺的血琼脂平板，单核细胞增生李斯特氏菌和西尔李斯特氏菌围绕穿刺点产生较清晰的β-溶血环，英诺克李斯特氏菌不产生溶血现象，而绵羊李斯特氏菌产生界限明显的较大溶血环，在此不要试图进行种间的区分，但要记录下溶血反应的特征，CAMP试验可区分它们间的溶血反应。（8）硝酸盐还原试验（选做）。用TSBYE肉汤培养物接种于硝酸盐肉汤中，35℃培养5天后，加入0.2mL试剂A，再加入0.2mL试剂B，混合，出现紫红色为阳性反应，表明硝酸盐已被还原，如无颜色出现，在试管内再加入少量锌粉，放置1h，如出现紫红色，表明硝酸盐仍存在，未被细菌还原。只有默氏李斯特氏菌还原硝酸盐，因此，从格氏李斯特氏菌中区分出默氏李斯特氏菌就必须进行这唯一的试验。本试验还有一等效试验，即加入0.2mL试剂A后，再加入0.2mL试剂C，出现橙色表明硝酸盐已被还原。如未出现颜色反应，也加入少量锌粉，若出现橙色表明硝酸盐未被还原。（9）将TSBYE培养物穿刺到SIM和MTM试管中，室温培养7天，每日观察，李斯特氏菌呈典型伞状生长。在MTM中伞状生长更典型。同时，30℃的TSBYE培养物在油镜下可见细菌作翻转运动。（10 ）将TSAYE肉汤培养物分别接种于0.5%（W/V）葡萄糖、麦芽糖、七叶苷、甘露醇、鼠李糖、木糖发酵管内（可选用倒立发酵管），35℃培养7天，呈阳性反应的李斯特氏菌产酸不产气，李斯特氏菌发酵鼠李糖和木糖的情况见下表。所有李斯特氏菌对葡萄糖、七叶苷、麦芽糖均能发酵，除格氏李斯特氏菌均不能发酵甘露醇。如果在OXA、PALCAM或加七叶苷/Fe3+的LPM分离平板上菌落色素很明显，则七叶苷试验可免做。

2010年《GB 19301-2010 食品安全国家标准 生乳》发布，该标准出台后即被冠以 “挤奶时相当于苍蝇到处乱飞”、“中国牛奶倒退25年”、“中国生乳标准全球最差”等各种标签。时隔6年，生乳标准被再一次掀起波澜：今年4月份，中国农垦乳业联盟召开《中国农垦生鲜乳生产和质量标准》发布会，会议指出该标准菌落总数与欧盟和美国标准一致，并且按照欧盟标准规定了体细胞数。同期，黑龙江省奶业协会《黑龙江省生乳团体标准》，标准根据蛋白、脂肪、菌落总数、体细胞数对生鲜乳分了特级、一级、二级三个等级，并且提出特级标准已比肩欧美。为什么我国的生乳标准时至今日还被热议，菌落总数和体细胞指标有什么意义，我国和欧美针对这两项的规定到底有什么不同？以下将进行详细分析。[b]1. 指标解读：菌落总数[/b]菌落总数是指在一定微生物培养条件下每克（或每毫升）检样所生长出来的细菌群落总数。生乳中菌落总数的多少是评定质量的重要指标，目前被各国广泛采用。它可用来判定产品被细菌污染的程度及卫生质量，以便做出适当的卫生学评价。造成菌落总数超标的原因很多，挤奶环节控制不严是导致超标的主要原因，如挤奶器具不卫生特别是散户人工挤奶的情况，将会直接导致菌落总数不合格。[b]体细胞数[/b]牛奶体细胞数是指每毫升牛奶中的细胞总数，它是牛奶中的白细胞和脱落上皮细胞的总称。体细胞数是衡量牛乳房健康状况和原料奶质量的重要指标，它的升高可导致乳制品货架期缩短，风味发生改变。体细胞数高说明奶牛乳腺感染了微生物病原菌，通过不同的微生物检测或根据体细胞数升高状况诊断是否患有隐性乳房炎，此外，若奶牛患病也会因为系统免疫反应导致体细胞升高。2。[b] 标准比较：我国标准[/b]我国生乳现行标准GB 19301-2010，标准中对生乳的脂肪、蛋白质等理化指标，及微生物、污染物等指标做了规定，其中菌落总数要求为200万CFU/mL，但是并没有体细胞数的要求。[b]欧盟法规[/b]欧盟拥有完善的乳品质量安全监管体系，在其法规EC 853中对生乳的体细胞和菌落总数做了详细规定。 [table=100%][tr][td=1,1,25%] 类别项目[/td][td=1,1,20%] 生牛乳[/td][td=1,1,21%] 其他动物的生乳[/td][td=1,1,33%] 其他动物的生乳（用于加工乳制品，且加工过程中无加热工序）[/td][/tr][tr][td=1,1,25%] 菌落总数，万CFU/mL[/td][td=1,1,20%] ≤10[/td][td=1,1,21%] ≤15[/td][td=1,1,33%] ≤5[/td][/tr][tr][td=1,1,25%] 体细胞数，万个/mL[/td][td=1,1,20%] ≤40[/td][td=1,1,21%] /[/td][td=1,1,33%] /[/td][/tr][/table]欧盟非常注重标准的科学性，基于牛和其他动物如山羊的养殖条件、养殖规模等不同，分别设定了不同的微生物要求，虽然其他动物的生乳限量表面看来更低一些，但是如果用于生产无加热工艺的产品，则要求非常高。欧盟标准科学性的另一点体现在生产和收奶会设定不同限量。对于到达工厂后经过混合的牛乳，该法规指出其指标限量可以是牧场环节的三倍。因此准备生产乳制品的原料乳菌落总数限量为≤30万CFU/mL（如果该牛乳已经经过一定的加工，那么需要低于10万CFU/mL）。[b]美国法规[/b]美国《联邦法规》（CFR）第7卷对原料乳的指标限量、检测方法、不合格整改措施都做了具体规定，其中包括体细胞数和菌落总数。 [table][tr][td=1,1,155] 类别项目[/td][td=1,1,126] 生牛乳[/td][td=1,1,151] 山羊乳[/td][td=1,1,187] A级原料乳[/td][/tr][tr][td=1,1,155] 菌落总数，万CFU/mL[/td][td=1,1,126] ≤50[/td][td=1,1,151] ≤50[/td][td=1,1,187] ≤10（单个样本）≤30（杀菌前的混合样本）[/td][/tr][tr][td=1,1,155] 体细胞数，万个/mL[/td][td=1,1,126] ≤75[/td][td=1,1,151] ≤150[/td][td=1,1,187] ≤75[/td][/tr][/table]美国是非常提倡实施安全整改措施的国家，联邦法规中就有明显的体现。如对生乳中菌落总数的要求，法规规定每个奶户每月至少要有1次随机抽样，一旦出现不合格就会被警告，如果4次连续抽检中有两次不合格，那么将会在随后的3至21天再抽一个样品，如果仍然不合格，就需要整改直至获得满意的结果才可以继续对外供应牛乳。[b]Grade “A” Pasteurized Milk Ordinance[/b]除了CFR的要求，美国还有一个非常重要的法令《Grade “A” Pasteurized Milk Ordinance》，该标准适用于优级乳制品，标准包含收奶、运输、加工、包装等各环节的规范，可操作性非常强。标准中指出单个奶户的奶中菌落总数不得超过10万CFU/mL，不同奶户的奶经混合后，在杀菌前不得超过30万CFU/mL；体细胞方面，该法令指出单个奶户的奶中不得超过75万个/mL。和CFR一样，该标准也规定了不合格的处理措施。联邦政府以及各州会定期检查工厂，一旦发现问题就会临时吊销生产许可证，此后连续3周每周不少于2次取样检查，直至合格才准予恢复正常生产。[b]总结[/b]1. 我国设定的指标限量低于欧美，这与当时的制定背景息息相关。但实际上，由于最近几年政府和企业对生乳质量意识的提高，我国生鲜乳尤其是自有牧场的生乳的质量远高于国家标准规定。很多牧场逐步开始监控体细胞数量，优质牧场平均体细胞数可达10万个/mL以下。同时部分地区也根据当地生乳的质量优势，制定了一些高于国家要求的标准。2. 我国在指标设定方面的科学性有待提高，如上面提到的欧美在收奶及加工时设定不同指标限量，而我国目前收奶、贮奶都是一个限量，不利用保护奶农利益，更不利于指导企业实际生产。3. 缺乏对奶农的系统监管，如美国政府机构会长期监控每个奶场的生乳，制定整改措施并监控整改效果，这点值得我国学习。

下列哪类物质是酵母菌细胞壁主要的成分()。 A、甘露聚糖 B、脂质 C、无机盐 D、蛋白质

[size=5][font=宋体]实验室确定细菌生长密度和生长期，多根据经验和目测推断细菌的生长密度。在遇到要求较高的实验，需要采用分光光度计准确测定细菌细胞密度。[/font][font=Arial]OD600[/font][font=宋体]是追踪液体培养物中微生物生长的标准方法。以未加菌液的培养液作为空白液，之后定量培养后的含菌培养液。为了保证正确操作，必须针对每种微生物和每台仪器用显微镜进行细胞计数，做出校正曲线。实验中偶尔会出现菌液的[/font][font=Arial]OD[/font][font=宋体]值出现负值，原因是采用了显色的培养基，即细菌培养一段时间后，与培养基反应，发生变色反应。另外，需要注意的是，测试的样品不能离心，保持细菌悬浮状态。[/font][font=Arial][/font][font=Arial][/font][font=Arial] [/font][font=宋体]分光光度计的重要配件[/font][font=Arial] —— [/font][font=宋体]比色杯[/font][font=Arial][/font][font=Arial] [/font][/size][size=5][font=宋体]比色杯按照材质大致分为石英杯、玻璃杯以及塑料杯。根据不同的测量体积，有比色杯和毛细比色杯等。一般测试核酸和紫外定量蛋白，均采用石英杯或者玻璃杯，但是不适合比色法测定。因为反应中的染料（如考马斯亮兰）能让石英和玻璃着色，所以必须采用一次性的塑料杯。而塑料杯一般不适合用于在紫外范围内测试样品。[/font][font=Arial][font=宋体]由于另外测试的样品量不同，所以一般分光光度计厂家提供不同容积的比色杯以满足用户不同的需求。目前市场已经存在一种既可用于核酸、紫外蛋白质定量，亦可用于蛋白比色法测定的塑料杯，样品用量仅需50μl，比色杯单个无菌包装，可以回收样品。如Eppendorf UVette?塑料比色杯，是目前比色杯市场上一个革新。随着生命科学以及相关学科发展，对此类科学的实验研究提出更高的要求，分光光度计将是分子生物学实验室不可缺少的仪器，也成为微生物、食品、制药等相关实验室的必备设备之一。[/font][/font][/size]

细胞培养箱中的水盘里出现霉菌，虽然没有污染到细胞，而且也在水盘里加入新洁尔灭，但还是不放心，并且培养箱中现有很多细胞，请问有没有一种方法可以在不移除细胞的情况下能够消灭培养箱中的霉菌?已经长出霉菌，建议把所有细胞移出到其他培养箱。将这个培养箱全面消毒，喷酒精，紫外灭菌至少1个小时。因为我们组细胞染过菌，一旦培养箱不洁净，会导致所有培养细胞都要染菌的，爆发以后很可怕。培养箱出现霉菌很可能是水槽的水不够洁净，一定要用超净水超纯水来填充水槽，避免霉菌生长。要定期更换水槽中的纯水。一个月左右换一次。一个季度到半年要培养箱彻底灭菌一次。

新西兰乳制品巨头恒天然8月3日发布消息称，在三批次浓缩乳清蛋白粉中检出肉毒杆菌。多美滋、娃哈哈、可口可乐等多家企业涉案，并启动召回工作。　　肉毒杆菌的毒素被用来开发成生化武器，是世界上最毒的物质之一。此次婴儿配方奶粉和运动饮料使用了受肉毒杆菌污染的乳清蛋白粉，会有哪些风险？肉毒杆菌真的有这么恐怖吗？　　艺康(中国)食品安全经理陆有开告诉《第一财经日报》记者，肉毒杆菌(也叫肉毒梭菌)是一种产芽孢的革兰氏阳性杆菌，主要来源于土壤、水、水底沉积物及动物粪便等。　　“肉毒杆菌生长到一定数量时会产生神经毒素，这种神经毒素是世界上最毒的物质之一，可以抑制人体神经信号的传递，让人出现头晕、呼吸困难和肌肉乏力等症状，因此，有些国家把它开发成生化武器。”陆有开称。　　不过，肉毒杆菌对生长条件要求“苛刻”。陆有开说，肉毒杆菌需要在ph值4.6以上的非酸性食品和无氧气或很少氧气的环境下才能生长。肉毒杆菌生长体本身耐热性并不强，通常100℃烹煮过程就能将肉毒杆菌生长体杀死，但其在不良环境下芽孢的抵抗力更强，芽孢是细菌的休眠体，对干燥、热处理和消毒剂等具有很强的抵抗力，121℃热杀菌10秒左右才能杀死90%的肉毒杆菌芽孢。芽孢本身不能进行生长繁殖，也不能导致食品的腐败，但是，一旦碰到合适的条件，芽孢会发芽变成生长体而进行繁殖。肉毒杆菌最适合的生长温度范围为30℃~37℃，大部分菌株在10℃以下不能生长，但有的菌株在3℃以上就能生长。　　肉毒杆菌能在奶粉中生长吗？陆有开说，奶粉中的水分活度较低，因此肉毒杆菌在奶粉中不能生长。但这并不意味着奶粉中就完全不存在肉毒杆菌的芽孢。“在奶粉上检出的应该是肉毒杆菌的芽孢，它的来源估计是由杀菌工艺失效和杀菌后污染引起。”　　肉毒杆菌的中毒路径有两种，一种是对一岁以下的婴儿来说，吞食了含有肉毒杆菌毒素芽孢的食物，由于婴儿肠道内的正常肠道细菌群落还没有建立，肉毒杆菌毒素芽孢发芽生长产生毒素，导致婴儿中毒；另一种是对一岁以上的人群来说，由于他们的肠道菌群已经建立，肉毒杆菌毒素芽孢不可能发芽生长，因此，其致病性就是由于肉毒杆菌先行在食物中生长产生了毒素而使人致病。　　陆有开称，在西方，肉毒杆菌中毒案例主要发生在家庭自制罐头上。　　他说，目前的奶粉没有检测肉毒杆菌的项目和要求，根据风险评估的结果，在婴儿奶粉中，肉毒杆菌的风险要比其他致病菌风险小得多，如沙门氏菌和阪崎肠杆菌，也不可能将所有的致病菌都进行检测，这主要靠良好的操作规范和卫生保持来控制。

革兰氏阳性芽孢杆菌和球菌，该类群中与食品关系密切的菌属如下。1．芽孢杆菌属(Bacillus)该属可形成芽孢，对不良环境条件有很强的抵抗力。需氧或兼性厌氧，绝大多数菌种产生过氧化氢酶。该菌广泛分布于土壤、植物、腐殖质及食品上。其中包括人和动物的病原性细菌炭疽芽孢杆菌(B．anthracis)、食物中毒性细菌蜡样芽孢杆菌(B．cereus)、昆虫的病原菌苏云金芽孢杆菌(B．thuringiensis)、可用于食品工业生产的枯草芽孢杆菌(B．subtilis)。此外，也包括一些可引起食品腐败变质和食物中毒的菌种。(1)蜡样芽孢杆菌(B．ccrcl2S)：该菌广泛分布于土壤、水、调味料、乳及咸肉中，污染牛乳后可产生卵磷脂酶，破坏脂肪球膜，使得脂肪不能很好地乳化，还可以产生类似凝乳酶的酶，使乳在酸度不高时即可发生凝固。蜡样芽孢杆菌的生长温度为10~48℃，pH值为4·9～9·3，发芽温度范围为1~59℃。该菌污染食品后，可以引起食品腐败变质，并且产生下痢性毒素、肠毒素、溶血素、呕吐毒素及肠管坏死毒素等，引起人食物中毒。(2)枯草芽孢杆菌(B．subtilis)：该菌菌落呈圆形或不规则形状，表面粗糙或有皱纹，呈奶油色或褐色，菌落形态与培养基成分有关。枯草芽孢杆菌污染面粉后，可以使发酵面团产生液化黏丝状现象，使烤制的面包**头出现斑点或斑纹，并且伴有异味。在肉类表面可产生黏液并有异味。在肉类罐头及其他肉制品上经常可以分离到该菌，但在密封的罐头中较少引起变质。在牛乳中生长，可以使牛乳变稠，有时在不变酸时使牛乳凝固，即产生所谓的甜凝乳现象。(3)巨大芽孢杆菌(B．megaterium)：该菌可以在含氨的环境中生长，不需要生长因子，无卵磷脂酶活性。在厌氧条件下，于葡萄糖肉汤中不生长，多数菌株可在培养基中产生黄、粉红、褐或黑色色素。适宜生长温度为28~37℃。该菌可以从鲜乳、消毒乳、于酪、肉类等食品中分离到，可使浓缩乳凝固并产生干酪味和气体，使肉类罐头变质胀罐。(4)嗜热脂肪芽孢杆菌(B．stearothermophilus)：该菌菌落为圆形或不规则圆形小菌落，表面光滑或粗糙，能在49～65℃范围内生长，对热的抵抗力很强。该菌在pH值5．0以下的培养基上不生长。该菌主要可引起罐藏食品和淀粉类食品的腐败。(5)凝结芽孢杆菌(B．coagulans)：该菌菌落为不透明的小菌落，生长温度范围为18～60℃，可在酸性条件下生长。在有氧条件下于葡萄糖肉汤中生长，产生醋酸、乳酸和CO2。在厌氧条件下主要产生乳酸，不产气。该菌能在pH值3．5～**5的食品中生长，引起食品变质，罐头食品变质后外观不膨胀。在炼乳罐头中，通常使乳形成坚实凝结，偶尔呈碎片状凝结，并有乳清析出。此种变质亦常发生于含有蔗糖的乳制品中。2．梭菌属(Clostridium)该属的绝大多数种为厌氧菌，只有少数种可在大气条件下生长，但在大气中不形成芽孢。该属菌形成的芽孢多呈球形，位于菌体中央，使菌体呈梭状。对不良环境条件具有极强的抵抗力。该属菌对营养的需要因菌种不同而异。可耐受2．5％～6．5％NaCl浓度的渗透压，对亚硝酸钠和氯敏感。梭菌广泛分布于土壤、下水污泥、海水沉淀物、腐败植物、食品、人和其他哺乳动物的肠道内。该属中的一些菌种如丁酸梭菌(C．butyricum)可分解碳水化合物产生各种有机酸(乙酸、丙酸、丁酸)和醇类(乙醇、异丙醇、丁醇)，在食品加工上可用于生产某些酸、醇和酮类。一些菌种如腐化梭菌(C．putrefaciENs)分解蛋白质和氨基酸，产生H2S、硫醇、甲基吲哚(粪臭素)等具有恶臭味的腐败产物，在乳中生长时可使乳中酪蛋白完全胨化，在熟肉上生长使肉变黑，在罐头中生长时，因产气使罐头发生膨胀。肉毒梭菌(c．botulinum)在食品中增殖时可产生肉毒毒素，当人们食入含有该毒素的食品时，可发生毒素型食物中毒，早期症状为全身无力、头痛、头晕，继而出现眼睑下垂、视力模糊、瞳孔散大、吞咽困难等症状直至死亡。此外某些梭菌如破伤风梭菌(C．terni)是人和动物的破伤风病病原菌。

在奶牛场生产出体细胞　　数及细菌含量低的牛奶　　奶牛场受到污染的牛奶一直会存在于整个生产链之中，虽然其后的生产程序可能会尽量减低牛奶的腐败程序以满足消费者的质量要求，但是品质却永远也比不上刚刚从奶牛乳房产出的牛奶了。因此，为消费者提供卫生乳制品的第一步开始于牛场。　　1. 体细胞数　　1.1体细胞的来源　　动物体抵御一些入侵细菌的措施之一就是将白细胞渗透到受感染区域。白细胞来自动物血液,被称为体细胞。以示与入侵微生物细胞的区别。正常情况下，少数白细胞可经乳腺而进入乳汁，但在病原菌入侵时，机体会向乳腺内释放大量的白细胞。若乳腺受到损害，也会造成乳腺上皮细胞脱落，成为乳汁内的体细胞的一部分，但不超过体细胞总数的百分之几。与细菌不同，体细胞一旦进入乳汁内，其总数是不会发生变化的。白细胞包括巨噬细胞、淋巴细胞和嗜中性细胞。正常乳中含有巨噬细胞，其作用是清除乳腺中的细菌和细胞碎片。淋巴细胞在抵抗感染的机制中起主要作用，此时要占体细胞总数的90%以上。体细胞数是变化的，在完全健康奶牛的乳汁中低于200000/亳升;乳腺感染严重，会高于5000000/毫升。　　1.2 高体细胞含量牛奶的缺点　　体细胞数偏高，表明牛奶产于受损或受感染的乳腺。细菌污染会极大降低牛奶的质量，而体细胞本身也对牛奶质量不利，特别是对这些用于生产发酵乳制品的牛奶。牛奶变质表现为：①牛奶味道变坏 ②牛奶的贮存期缩短 ③乳清量增加，酪蛋白的收缩性降低，导致奶酪产量下降。　　1.3 体细胞数的估测　　体细胞数(SCC，单位为：细胞数/亳升)可经显微镜人工测定，但耗费时间，一位技术员每天仅能测定很少的样品。体细胞数常常是由称为细胞计数器的电子仪器来测定，但该仪器较昂贵，不易搬运，这就得把奶样送到实验室去分析。在牛舍内实际上可采用一项简单的技术，即用化学试剂来测定白细胞的数量，其最初称为加州乳房炎测定(CMT)，但现有众多地方测定方法，如兰州乳房炎测定法(LMT)。CMT法可把牛奶评为0、T、1、2和3级，其大致相对应的细胞数为：　　CMT测试等级 大致体细胞数/毫升　　0 100,000　　T(=微量) 300,000　　1 900,000　　2 2,700,000　　3 8,100,000　　1.4 引起体细胞增高的因素　　1.4.1 乳房受到细菌感染。这大概是导致体细胞数增加的主要因素。　　1.4.2乳房受到损伤。奶牛的乳房并非不会受到损伤，比如经常由于地滑而摔伤乳房。有些奶牛，特别是那些乳房过度下垂的奶牛，站起来时容易踩到自己的乳房。乳房受到伤害，牛奶中体细胞数会暂时升高，随着伤口的愈合，体细胞数又会恢复正常。　　1.4.3 奶牛的年龄和泌乳阶段。老龄奶牛似乎更易患乳房炎，这样，体细胞数常常较高。美国的研究表明，未患乳房炎奶牛乳中的体细胞数并不随年龄的增加而提高。这样，随着年龄的增长，对于那些一生中某一阶段曾患过乳房炎的奶牛，其体细胞数增加的机率会增大。　　1.5 降低体细胞数。体细胞数值高常常是由于乳房受到了细菌所至，因此降低体细胞数值的最好方法就是防止感染。　　2. 乳中的细菌　　牛奶通常是老、幼、病、残者的食品，他们也最需要健康食品。奶牛场是微生物污染牛奶的理想环境，最危险的途径之一就是通过存在于乳房中并引起乳房炎的细菌而污染。这些细菌都是病原菌，对牛和人类都有害。　　一旦受到这样的污染，牛奶就成为劣质产品。加热处理可减缓或停止细菌的作用，但不管如何处理，这种牛奶仍就是含有活的或死的微生物及其所产生的生化物质。这些物质有的会降低乳制品的品质，有的对消费者的健康有害。来自粪便的细菌还会产生酶类和耐毒素。因此，防止乳制品被污染，应从提供优质鲜奶开始。　　细菌进入乳房引起乳房炎的许多途径与其污染牛奶的方式密切相关，有些细菌可引起乳房炎，随后进入牛奶。　　2.1牛奶中细菌的类型　　下表为牛奶中常见的微生物，经分离，也许可见到其它类型的微生物。大概有95%的乳房炎是由表中前三种细菌引起的。　　微生物 来 源 所产毒素 致病性　　奶牛 人类　　金黄色葡萄球菌 乳房炎　　人类污染　　环境　　牛粪 肠毒素 致病 致病　　无乳链球菌 乳房炎 致病 致病　　大肠埃西氏杆菌 乳房炎　　环境　　牛粪 耐热和不耐热肠毒素 致病 有些致病　　空肠弯曲菌 受感染的乳房　　牛粪 肠毒素 致病 致病　　小肠结肠炎耶尔森菌 牛粪　　沙门氏菌群 环境　　牛粪 肠毒素 致病 致病　　产单核细胞李斯特菌 环境　　牛粪　　饲料—特别是劣质青贮　　乳房炎(少数) 致病 致病　　结核分支杆菌 受感染乳房　　人类污染 致病　　牛分支杆菌 受感染乳房 致病 致病　　布鲁氏菌属 受感染乳房　　牛粪　　环境 致病 致病　　伯内特柯克斯体 牛粪　　受感染乳房 致病 致病　　普通变形杆菌 水　　环境　　假单包菌属 水　　环境　　2.2 乳房对乳房炎的抵御　　乳房低御感染的部位有两处, 其中之一就是乳头的通道一乳头管,乳头上有良好的括约肌,可使乳头口封闭,阻止异物进入通道。　　2.3 防止乳房暴露于细菌之中　　防止乳房炎最理想的方法首先是防止细菌接触乳房，这就涉及到奶牛管理的各个方面。　　2.3.1养牛设施。奶牛舍的设计标准与良好的人类住房的设计原则是相近的，其可归纳如下：　　① 尽量减少疾病的传播。　　② 奶牛拥有一个舒适和较干燥的环境。　　③ 应具备有效地消除废物的设施。　　④ 奶牛容易获得饲料以满足产奶的需要。　　⑤ 奶牛的环境条件不得发生急剧变化。　　⑥ 温度、太阳辐谢、湿度应尽量接近奶牛的“舒适区”。　　⑦ 奶牛易于接近饮水。　　⑧ 易于观察成母牛、育成牛的行为变化，特别是发情鉴定，还有牛群健康观测。　　⑨ 便于将奶牛从主要的饲养区域赶至一些特殊的地点，如挤奶台、配种架等。　　⑩ 整体设计应考虑到尽量节省劳动力。　　前三点直接涉及到奶牛所处的环境,但饲料也可成为传播微生物的潜在因素(见2.3.1.3)。　　2.3.1.1 栓系式牛舍。中国的许多奶农都采用了栓系式牛舍饲养奶牛，这种牛舍的设计对奶牛的环境卫生有很大的影响。设计原则之一就是既简便又能及时地将粪、尿与奶牛分开。再勤快的奶农也不可能整天在那儿清粪以避免奶牛卧下时弄脏牛体。奶牛是站立排粪尿的，因此，设计上就必须让粪尿直接排入粪尿沟内。荷斯坦牛舍牛床的尺寸应设计为：从饲槽后沿至粪尿沟前沿的长度为1.55-1.65米，而中国奶牛舍内的尺寸一般都为1.8—1.9米, 这样牛粪常被排泄于奶牛躺卧之处,常常污染牛腿、肋部和乳房。　　如果奶牛可直接将粪便排入粪尿沟内，说明其站立位置正对饲槽，如果奶牛斜向站立，粪尿将会排在牛床上。但可设置分隔栏，分隔出独立的牛床，以使奶牛保持正确的姿势。不一定一牛一隔栏，可两牛一隔。　　牛床应有某种铺垫，以保证栓系式牛舍奶牛肢蹄的健康。铺垫物应清洁、干燥。常采用的有秸秆、沙子、锯末，也可使用专用的橡胶垫。目前中国可生产这种橡胶垫，也买得到。使用时最重要的一点是不要太频繁冲洗橡胶垫。以免潮湿。　　2.3.1.2运动场。 在讨论牛奶质量时不宜过多叙述运动场设计的各个方面，必须强调的一点就是干燥。也就是说，如果是土地面，排水应通畅。在许多奶牛场之中，这与生产卫生牛奶是完全不相适应的。水泥运动场应铺成2-3的坡度，以便尽快排走雨水。若水泥地表地设计成沟槽状以增加牛蹄阻力，其方向应顺坡向而走。　　2.3.1.3饲养。有人奇怪为什么麽将饲养作为病菌传播的因素之一，但在中国它确实是紧密相关的。李斯特菌对动物和人类都是致病菌。在霉菌适宜的类似环境，特别是发酵度不足的青贮饲料，特别适宜李斯物菌增殖　　2.3.2 挤奶　　农业生产的挤奶过程是十分独特的,因为在充满了潜在有害微生物污染的环境中获得人类食品。正常的卫生标准应依据食品业的，而非农业的标准。在挤奶的过程中，存在着微生物对奶牛和牛奶污染的极大危险，其过程可分为三步：乳房准备、挤奶和乳房的后处理。　　2.3.2.1乳房准备。乳房准备基于以下三个原因：　　-刺激奶牛的泌乳反射。　　-保证泌乳过程中不受微生物的侵袭。　　-保证乳房上的污物不会污染牛奶。　　就象野生祖先母牛看到犊牛、闻到犊牛的气味、乳房受到犊牛碰撞而产生的反应一样，品种化的奶牛对擦洗和按摩乳房也产生同样的反应。奶牛对热水冲洗和按摩会习惯性地产生泌乳反应。但擦洗乳房的毛巾和挤乳工的手都会将细菌从一头奶牛传染到另一头奶牛，这是对奶牛健康最大的危险。正确操作的要求是：每头牛分别用洁净水冲洗。现代化的挤奶台采用软管和喷嘴冲洗乳房。用一桶水洗多头牛简直就是在奶牛之间传播病菌，这是不可原谅的错误。即使按照乳品厂的标准加入消毒剂，从一头奶牛到另一头奶牛的挤奶间隔时间也保证不了化学药品的消毒作用。如果增加消毒剂的浓度，乳房细薄的皮肤受到损害的程度就会加大，这也就促进了乳房内部微生物感染的机会。如果不具备软管、喷头这些条件，那麽，用一只手提喷水器也就足够冲洗乳房了。用于擦干乳房的毛巾是微生物的主要载体，再也找不到什麽比这更有效的东西在牛群中传播病原菌了。奶业发达国家主要采用一牛一纸擦试方法，也可采用洁净的报纸替代，虽然效果不如纸巾，但便宜，起码比反复使用毛巾要好的多。　　有些专家建议

革兰氏阳性芽孢杆菌和球菌，该类群中与食品关系密切的菌属如下。1．芽孢杆菌属(Bacillus)该属可形成芽孢，对不良环境条件有很强的抵抗力。需氧或兼性厌氧，绝大多数菌种产生过氧化氢酶。该菌广泛分布于土壤、植物、腐殖质及食品上。其中包括人和动物的病原性细菌炭疽芽孢杆菌(B．anthracis)、食物中毒性细菌蜡样芽孢杆菌(B．cereus)、昆虫的病原菌苏云金芽孢杆菌(B．thuringiensis)、可用于食品工业生产的枯草芽杆菌(B．subtilis)。此外，也包括一些可引起食品腐败变质和食物中毒的菌种。(1)蜡样芽孢杆菌(B．ccrcl2S)：该菌广泛分布于土壤、水、调味料、乳及咸肉中，污染牛乳后可产生卵磷脂酶，破坏脂肪球膜，使得脂肪不能很好地乳化，还可以产生类似凝乳酶的酶，使乳在酸度不高时即可发生凝固。蜡样芽孢杆菌的生长温度为10~48℃，pH值为4·9～9·3，发芽温度范围为1~59℃。该菌污染食品后，可以引起食品腐败变质，并且产生下痢性毒素、肠毒素、溶血素、呕吐毒素及肠管坏死毒素等，引起人食物中毒。(2)枯草芽孢杆菌(B．subtilis)：该菌菌落呈圆形或不规则形状，表面粗糙或有皱纹，呈奶油色或褐色，菌落形态与培养基成分有关。枯草芽孢杆菌**面粉后，可以使发酵面团产生液化黏丝状现象，使烤制的面包或馒头出现斑点或斑纹，并且伴有异味。在肉类表面可产生黏液并有异味。在肉类罐头及其他肉制品上经常可以分离到该菌，但在密封的罐头中较少引起变质。在牛乳中生长，可以使牛乳变稠，有时在不变酸时使牛乳凝固，即产生所谓的甜凝乳现象。(3)巨大芽孢杆菌(B．megaterium)：该菌可以在含氨的环境中生长，不需要生长因子，无卵磷脂酶活性。在厌氧条件下，于葡萄糖肉汤中不生长，多数菌株可在培养基中产生黄、粉红、褐或黑色色素。适宜生长温度为28~37℃。该菌可以从鲜乳、消毒乳、于酪、肉类等食品中分离到，可使浓缩乳凝固并产生干酪味和气体，使肉类罐头变质胀罐。(4)嗜热脂肪芽孢杆菌(B．stearothermophilus)：该菌菌落为圆形或不规则圆形小菌落，表面光滑或粗糙，能在49～65℃范围内生长，对热的抵抗力很强。该菌在pH值5．0以下的培养基上不生长。该菌主要可引起罐藏食品和淀粉类食品的腐败。(5)凝结芽孢杆菌(B．coagulans)：该菌菌落为不透明的小菌落，生长温度范围为18～60℃，可在酸性条件下生长。在有氧条件下于葡萄糖肉汤中生长，产生醋酸、乳酸和CO2**厌氧条件下主要产生乳酸，不产气。该菌能在pH值3．5～4．5的食品中生长，引起食品变质，罐头食品变质后外观不膨胀。在炼乳罐头中，通常使乳形成坚实凝结，偶尔呈碎片状凝结，并有乳清析出。此种变质亦常发生于含有蔗糖的乳制品中。2．梭菌属(Clostridium)该属的绝大多数种为厌氧菌，只有少数种可在大气条件下生长，但在大气中不形成芽孢。该属菌形成的芽孢多呈球形，位于菌体中央，使菌体呈梭状。对不良环境条件具有极强的抵抗力。该属菌对营养的需要因菌种不同而异。可耐受2．5％～6．5％NaCl浓度的渗透压，对亚硝酸钠和氯敏感。梭菌广泛分布于土壤、下水污泥、海水沉淀物、腐败植物、食品、人和其他哺乳动物的肠道内。该属中的一些菌种如丁酸梭菌(C．butyricum)可分解碳水化合物产生各种有机酸(乙酸、丙酸、丁酸)和醇类(乙醇、异丙醇、丁醇)，在食品加工上可用于生产某些酸、醇和酮类。一些菌种如腐化梭菌(C．putrefaciENs)分解蛋白质和氨基酸，产生H2S、硫醇、甲基吲哚(粪臭素)等具有恶臭味的腐败产物，在乳中生长时可使乳中酪蛋白完全胨化，在熟肉上生长使肉变黑，在罐头中生长时，因产气使罐头发生膨胀。肉毒梭菌(c．botulinum)在食品中增殖时可产生肉毒毒素，当人们食入含有该毒素的食品时，可发生毒素型食物中毒，早期症状为全身无力、头痛、头晕，继而出现眼睑下垂、视力模糊、瞳孔散大、吞咽困难等症状直至死亡。此外某些梭菌如破伤风梭菌(C．terni)是人和动物的破伤风病病原菌。**

1 沙门氏菌基本概况及食品污染状况沙门氏菌（Salmonella）是一种无芽孢、无荚膜的革兰氏阴性杆菌。除雏鸡白痢沙门氏菌和鸡伤寒沙门氏菌外，其余都有鞭毛，能运动。多数具有菌毛，能吸附于细胞表面，发酵葡萄糖、麦芽糖和甘露糖产酸产气，不发酵乳糖和蔗糖，不产生吲哚，不分解尿素，多数产硫化氢，不液化明胶，MR、VP 实验阴性（王辉等 2008）。沙门氏菌是肠杆菌科中最重要的病原菌属，目前全世界已发现约 2500 种血清型，这些血清型均可引起食源性疾病（Humphrey 2000）。与人类疾病有关的血清型主要包括伤寒沙门氏菌，甲、乙和丙型副伤寒沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌、猪霍乱沙门氏菌、肠炎沙门氏菌、鸭沙门氏菌和新港沙门氏菌等，其中以鼠伤寒沙门氏菌、肠炎沙门氏菌及猪霍乱沙门氏菌最为常见。在国际上公认的沙门氏菌中有三个血清型以中国地名命名，分别是上海沙门氏菌（Salmonella Shanghai）、自贡沙门氏菌（Salmonella Zigong）和广州沙门氏菌（SalmonellaGuangzhou）（王辉等 2008）。进食被沙门氏菌污染的食品后，沙门氏菌可通过肠道上皮细胞经毛细血管和淋巴管进入血液，导致菌血症和全身感染。同时，沙门氏菌被巨噬细胞胞饮并内化时产生极强的内毒素，从而引起腹泻、发热及肠道炎症反应。沙门氏菌源于家畜、家禽、人类及鼠类的粪便之中，常污染的食品为鸡肉、猪肉、牛肉、鱼肉、香肠、火腿、熏肉制品和鸡蛋等（藤仁明 2007；Schroeter et al. 1994）。孙晓林等（2008）对兰州市肉与肉制品微生物污染状况研究结果表明，生猪胴体和肉样沙门氏菌检出率分别为 7.5%和 14%。洪文展（2005）发现深圳市售肉品沙门氏菌污染率为 26.2%。Capita 等（2003）对西班牙的鸡肉感染沙门氏菌情况做了调查，结果显示 49%的鸡肉含有沙门氏菌。Uyttendaele 等（1997）对比利时禽肉及其制品中沙门氏菌的流行状况研究表明，1993 年沙门氏菌的平均污染率为 19.4%，1994 年为 24.1%，1995 年为21.9%，1996 年为 36.7%。此外，Bosilevac 等（2009）对美国零售牛肉的研究结果、Berends等（1997）对猪胴体及猪肉的研究结果和 Jorgensen 等（2002）对市售生鸡肉沙门氏菌的污染状况研究均表明沙门氏菌广泛存在于食品性动物、动物胴体、零售肉及肉制品食品之中。

培养基的高压灭菌及效果验证消毒灭菌在医学实践上有着重要意义。它可切断传播途径、控制感染扩散造成的危害；也可杀灭物品或器皿上的细菌，防止医院感染；在微生物检验的领域中，消毒灭菌是保正感染的病原学检验不受外来微生物污染的前提。（一）术语消毒( disinfection)、灭菌(sterilization)、抑菌(bacteriostasis)、防腐（antisepsis）和无菌( asepsis)是常用术语。下面就术语概念加以叙述。(1)灭菌：是用适当的物理或化学手段将物品中活的微生物杀灭或除去的方法。本法适用于制剂、原料、辅料及医疗器械等物品的灭菌。（如外科器械、注射器、基础培养基灭菌等。）(2)消毒：是破坏物体上活的病原微生物的方法，但不包括细菌芽胞和非病原微生物。如用酒精溶液浸泡体温计、新洁尔灭液擦拭检查台等。用于消毒的化学物品称消毒剂( dis-infectant)。一般而言，消毒对象是指物体而不是机体。(3)防腐：直接使用防腐剂(antiseptics)破坏或抑制活的病原微牛物的方法。如外科手术前碘液擦洗皮肤、双氧水清创伤口或杀菌肥皂清冼双手等。(4)无菌：防止感染病原体进入灭菌组织或物品的操作技术称无菌操作。无菌即为不存在活的微生物。用于消毒灭菌的物理方法有热力、电离辐射、超声波、过滤等。这里介绍热力消毒灭菌法。高热破坏微生物蛋白质、核酸、细胞壁和细胞膜，从而导致微生物死亡。受高热作用后，蛋白质分子运动加快，肽链连接键断裂，蛋白变性凝固；细胞膜功能受损使胞内物质漏出，细菌内外环境平衡失调。不同种类微生物对热的耐受力不同，多数无芽胞细菌经55-60℃作用30-60分钟后死亡，100℃时迅速死亡。有芽胞细菌则对高温有强的抵抗力，如肉毒芽胞梭菌煮沸需3—5小时才死亡。热力灭菌分干热灭菌法和湿热灭菌法两大类，相同温度下后者较前告效力大，其原因是：①湿热环境中菌体蛋白易凝固；②湿热穿透力比干热大；③湿热蒸气变为液态时可释放潜热，迅速提高被灭菌物体的温度。1．干热（dry heat）灭菌法(1)焚烧。直接点燃或在焚烧炉内进行，仅适用于废弃物品或动物尸体。(2)烧灼。直接以火焰灭菌，适用于微生物学实验室接种环、针和试管口等灭菌。(3)干烤。在干烤箱内进行，加热至150-180℃ 2-4小时达到灭菌效果，适用于高温下不变质、不被破坏和不蒸发的物品，如玻璃器皿、瓷器，不能用于塑料、棉、纸制品。2．湿热( moist heat)消毒灭菌法(1)巴氏消毒法。巴氏消毒法(pasteurization)是用较低温度杀灭液体中的病原微生物或特定微生物而保持物品中所需的不耐热成分的方法。此法由巴斯德创立，用于酒类消毒而得名。目前用于牛乳消毒。方法有两种：一种为71.6℃加热15秒，另一种为63-66℃加热30分钟。大多采用第一种方法。(2)煮沸法。在1个大气压下，水煮沸后温度达100℃，煮沸5分钟后可杀死一般细菌繁殖体。如于水中加入2%碳酸钠，可将其沸点提高至105℃，既可促进芽胞的杀灭，又可防止金属器皿生锈。(3)流通蒸气消毒法。又称常压蒸气消毒法，常用附诺(Amold)流通蒸气灭菌器，利用1个大气压下100℃水蒸气进行消毒，10-30分钟后细菌繁殖体被杀死，但对芽孢作用不大。(4)间歇灭菌法（fractional sterilization）。采用间歇方式达到灭菌目的。将灭菌物品置于阿诺流通蒸气灭菌器内，100℃加热15-30分钟，每日1次，连续3次。每次灭菌后取出物品置37℃孵育箱过夜，致残存的芽胞发育成繁殖体，次日再通过流通蒸气灭菌器加热而被杀灭。如此反复，既可杀灭芽胞，又可使不耐高温的物质免受影响。若某些物质不耐100摄氏度，则可将温度下降至75-80℃，每次加热时间延长到30-60分钟，常用血清凝固器对吕氏血清培养基和L-J培养基的灭菌属此方法。(5)高压蒸气火菌法。利用密闭的耐高压蒸气灭菌器(autoclave)，在蒸气不外溢的条件下，使锅内压力增高，随之蒸气温度也增高。通常在103.4kPa压力下蒸气温度达到121.3℃，维持15-20分钟，可杀灭所有的繁殖体和芽胞。本法适用于耐高温、耐湿物品的灭菌，如普通培养基、生理盐水、手术敷料等。（二）下向主要介绍高压蒸气灭菌器灭菌效果的验证方法高压蒸气灭菌器使物品灭菌后达到无菌要求，这是药品实验中的基本保证。高压灭菌器灭菌效果是否合格足实验成败的最基础最关键的首要步骤。除少数培养基只需加热溶解，不需高压灭菌外，大部分培养基均需121℃高压灭菌15-30分钟。尤其是对无菌试验培养基灭菌不彻底，直接关系到对药品的无菌试验结果。因此必须认真对高压灭菌器进行灭菌效果的验证。为此我们提供了进行灭菌效果验证的一个简易可行的方法。1．试验材料(1)嗜热脂肪芽胞杆菌纸片。嗜热脂肪芽胞杆菌(Bacillus stearothermophilus)ATCC7053是本法常用的生物指示菌，含芽胞量5-lO5 CFU/片。(2) 121℃压力蒸气灭菌化学指示卡。(3)溴甲酚紫胨水培养基116℃高压灭菌20分钟后备用。(4)O—150℃留点温度计2．方法与结果将嗜热脂肪芽胞杆菌纸片（以下简称菌片）用无菌镊子放人密封试管中。化学指示卡和留点温度计放入敞口试管中。以上两种试管各准备5-10份。分别放置在高压灭菌器蒸气口处、底部排气口处及底部出水口处或上下左右中间5处。如灭菌器为二层，则需放10处。留点温度计标化合格后方可用于验证试验。检测前，需将温度计的水银柱甩至40℃以下。每次监测后留点温度计的温差应存l℃之间，则说明灭菌器内的温度分布是均匀的。灭菌后的菌片应在严格无菌操作条件下放入灭菌后的溴甲酚紫胨水培养基内56-60℃培养24-48小时，观察颜色变化。如培养基变为黄色，说明菌片中的嗜热脂肪芽胞杆菌尚未完全灭活，细菌仍可在培养基中生长，分解葡萄糖产酸变为黄色。如培养基颜色不变化仍为紫色，则说明芽胞已灭活。同时要用未经灭菌的纸片放入培养基内作为阳性对照，不加纸片的空白培养基作为阴性对照。化学指示卡上的指示色块，在高压蒸气灭菌时，由淡黄色变为黑色。随着颜色变化的深浅，并与对照色相比，可判断灭菌效果是否达到要求。化学指示卡应在干燥处保存。遇潮会变色，影响灭菌效果的观测。高压蒸气灭菌必须使蒸气顺利进入灭菌器内，与灭菌物品接触，并将原有的冷空气排出方可达到灭菌的效果。要进行空载热分布和满载热穿透力验证(满载时不超过总体积的2/3)。二种验证各重复三次，共做六次。5个点六次试验表明温度均在121℃，化学指示卡变黑；程度与对照色一致；培养基均未改变颜色，说明高压蒸气灭菌效果合格。高压灭菌器属于强检仪器，但强检只是对仪器物理参数的考核。所以做过强检的灭菌器还必须进行灭菌效果的验证。一些单位常常忽略了这个重要的问题。国内市售的手提灭菌器，往往仪器指针达到所需的温度，但灭菌物品的实际温度却未达到要求。导致灭菌物品不彻底，影响实验结果。培养基灭菌不彻底，影响培养基的使用及结果判断。因此高压蒸气灭菌器无菌效果的验证是一个必须引起重视的问题。（三）灭菌时的注意事项使用高压蒸气灭菌器时，首先应注意在开放蒸气的同时，排除灭菌器内的冷空气。必须将器内冷空气全部排除后，才可关闭排气孔。假如灭菌器内仍存留有部分空气时，刚压力表上虽已达到了某一压力值，但器内之温度仍未达到相应之度数。存留的空气越多，刚二者相差也越大。差也越大，器内温度不足，灭菌则不彻底。 转

我想问下，只做了绿脓菌实验，怎么报结果呀？CN板上是淡黄色菌，紫外下有荧光，望老师不吝赐教

[font=微软雅黑][color=#333333]单核细胞增生李斯特氏菌（Listeria monocytogenes）在自然界分布非常广泛，是一种革兰阳性菌，兼性厌氧，不产芽孢，可以运动。它主要以食物为传染媒介，是最致命的食源性病原体之一。[/color][/font][font=微软雅黑][color=#333333][/color][/font][font=微软雅黑][color=#333333]单核细胞增生李斯特氏菌在环境中无处不在，在绝大多数食品中都能找到单核细胞增生李斯特氏菌。乳制品、肉类、蛋类等都已被证实是单核细胞增生李斯特氏菌的感染源。单核细胞增生李斯特氏菌中毒严重的可引起血液和脑组织感染，很多国家都已经采取措施来控制食品中的单核细胞增生李斯特氏菌，并制定了相应的限量要求。[/color][/font][font=微软雅黑][color=#333333][/color][/font][b][font=微软雅黑][color=#333333]单增李斯特属于革兰氏阳性短杆菌，可以在表面形成生物膜，[/color][/font][/b][font=微软雅黑][color=#333333]冰冻温度下存活，具有一定的耐酸性、耐盐性，会引起胃肠炎，严重时会侵袭人的大脑，造成脑膜炎，由于其危害较大，并且还能形成生物膜，食品加工厂一旦感染，很难有效控制，而对于生物膜的降解一般消毒剂也很难去除。[/color][/font][font=微软雅黑][color=#333333][/color][/font][font=微软雅黑][color=#333333]出口食品对于李斯特的要求严格，近期美国和欧盟通报我国出口的金针菇及乳制品被检出李斯特菌超标，实施自动扣留。[/color][/font][font=微软雅黑][color=#333333][/color][/font][b][color=#333333]单增李斯特菌高风险污染源食品：熟肉制品及即食生肉制品 ，干酪、再制干酪制品，冷冻饮品，即食鲜切果蔬，即食生物动物性水产制品 其他需要控制的即食食品[font=微软雅黑]（转载自[/font][font=system-ui, -apple-system, BlinkMacSystemFont, 'Helvetica Neue', 'PingFang SC', 'Hiragino Sans GB', 'Microsoft YaHei UI', 'Microsoft YaHei', Arial, sans-serif][color=rgba(0, 0, 0, 0.298039)]食品微生物工程师[/color][/font][font=微软雅黑]）[/font][/color][/b]

液氮槽vaporphase长期储存。-20℃不可超过1小时，以防止胞内冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃冰箱中，惟存活率稍微降低一些。（2）程序降温：利用已设定程序的等速降温机以-1～-3℃/分钟之速度由室温降至（-80℃以下）-120℃，再放在液氮槽vaporphase长期储存。适用于悬浮型细胞与hybridoma之保存。3、步骤：（1）冷冻前24-48小时更换半量或全量培养基，使细胞处于指数生长期。（2）配制冷冻保存溶液(使用前配制)：另取一离心管，加入培养基、血清，逐滴加入二甲基亚砜（DMSO）至20%浓度，即制成双倍的冻存液，置于室温下待用。（3）离心收集培养之细胞，用加血清的培养基重悬起细胞，取少量细胞悬浮液(约0.1ml)计数细胞浓度及冻前存活率。（4）取与细胞悬液等量的冻存液，缓慢逐滴加入细胞悬液，并晃动试管，制成细胞冻存悬液（DMSO最后浓度为5～10％），使细胞浓度为1～5×106cells/ml，混合均匀，分装于已标示完全之冷冻保存管中，1～2ml/vial，并取少量细胞悬浮液作污染检测。严密封口后，注明细胞名称、代数、日期。然后进行冻存。4、注意事项：（1）欲冷冻保存之细胞应在生长良好(logphase)且存活率高之状态，约为80～90％致密度。冷冻前检测细胞是否仍保有其特有性质，例如hybridoma应在冷冻保存前一至二日测试是否有抗体之产生。（2）细胞在液氮中可长期冻存无限时间，而不会影响细胞活力；在-70度可保存数月。（3）注意冷冻保护剂之品质。DMSO应为试剂级等级，无菌且无色(以0.22micron　FGLP　Telflon过滤或是直接购买无菌产品，如Sigma D-2650)，以5～10ml小体积分装，4℃避光保存，勿作多次解冻。Glycerol亦应为试剂级等级，以高压蒸汽灭菌后避光保存。在开启后一年内使用，因长期储存后对细胞会有毒性。本方法中先制备双倍冻存液，可避免DMSO直接加入时释放的热量对细胞的损伤。缓慢逐滴加入细胞悬液是使细胞逐步适应高渗，可降低细胞受损。DMSO可能引起部分白血病细胞株的分化，可换用10%甘油冻存。（4）冷冻保存之细胞浓度：①normal human fibroblast:1～3×106cells/ml②hybridoma:1～3×106cells/ml，细胞浓度不要太高，某些hybridoma会因冷冻浓度太高而在解冻24小时后死去。③adherent tumor lines:5～7×106，依细胞种类而异。Adenocarcinoma解冻后须较高之浓度，而HeLa只需1～3×106cells/ml④other suspensions:5～10×106cells/ml，human lymphocyte须至少5×106cells/ml。（5）冷冻保护剂浓度为5或10％DMSO，若是不确定细胞之冷冻条件，在做冷冻保存之同时，亦应作一个backup culture，以防止冷冻失败。（6）冻存可用10%～90%的血清，一般高浓度血清有助于维护细胞活力，此处介绍20%终浓度有利于细胞悬浮而少沉积（4度时），复苏存活率在80%～90%以上，对原代培养细胞，以90%血清冻存更为有效。二、冷冻细胞活化1、冷冻细胞之活化原则为快速解冻，以避免冰晶重新结晶而对细胞造成伤害，导致细胞之死亡。2、细胞活化后，约需数日，或继代一至二代，其细胞生长或特性表现才会恢复正常(例如产生单株抗体或是其它蛋白质)。3、材料37℃恒温水槽、新鲜培养基、无菌吸管/离心管/培养瓶、液氮或干冰容器4、步骤：（1）操作人员应戴防护面罩及手套，防止冷冻管可能爆裂之伤害。（2）自液氮或干冰容器中取出冷冻管，检查盖子是否旋紧，由于热胀冷缩过程，此时盖子易松掉。（3）将新鲜培养基置于37℃水槽中回温，回温后喷以70%酒精并擦拭之，移入无菌操作台内。（4）取出冷冻管，立即放入37℃水槽中快速解冻，轻摇冷冻管使其在1分钟内全部融化，以70%酒精擦拭保存管外部，移入无菌操作台内。（5）取出解冻之细胞悬浮液，缓缓加入有培养基之培养容器内(稀释比例为1:10～1:15)，混合均匀，放入CO2培养箱培养。取0.1ml解冻细胞悬浮液作存活测试。（6）解冻后是否立即去除冷冻保护剂(例如DMSO或glycerol)，依细胞种类而异，一般而言，大都不需要立即去除冷冻保护剂。惟若要立即去除，则将解冻之细胞悬浮液加入含有5-10ml培养基之离心管内，离心1000rpm，5分钟，移去上清液，加入新鲜培养基，混合均匀，放入CO2培养箱培养。（7）若不需立即去除冷冻保存剂，则在解冻培养后隔日更换培养基。三、细胞计数与存活测试1、原理：（1）计算细胞数目可用血球计数盘或是Coultercounter粒子计数器自动计数。（2）血球计数盘一般有二个chambers，每个chamber中细刻9个1mm2大正方形，其中4个角落之正方形再细刻16个小格，深度均为0.1mm。当chamber上方盖上盖玻片后，每个大正方形之体积为1mm2×0.1mm=1.0x10-4ml。使用时，计数每个大正方形内之细胞数目，乘以稀释倍数，再乘以104，即为每ml中之细胞数目。（3）存活测试之步骤为dyeexclusion，利用染料会渗入死细胞中而呈色，而活细胞因细胞膜完整，染料无法渗入而不会呈色。一般使用蓝色之trypan blue染料，如果细胞不易吸收trypan blue，则用红色之Erythrosin bluish。计算细胞活率：活细胞数/（活细胞数+死细胞数）×100%。计数应在台盼兰染色后数分钟内完成，随时间延长，部分活细胞也开始摄取染料；因为台盼兰对蛋白质有很强的亲和力，用不含血清的稀释液，可以使染色计数更为准确。2、材料：0.4%w/v trypan blue(GibcoBRL15250-061)；Erythosin bluish stain；取0.1gram Erythrosin bluish(SigmaE-9259)及0.05gram preservative methyl paraben(SigmaH-3647)溶于100mlCa++/Mg++freesaline；血球计数盘及盖玻片(Hemocytometerandcoverslip)；计数器(counter)；低倍倒立显微镜；粒子计数器(Coultercounter,CoulterElectronics)。白细胞稀释液（4%乙酸溶液）。3、步骤：（1）取50μl细胞悬浮液与50μl trypan blue(orErythrosinbluish)等体积混合均匀于1.5ml小离心管中。（2）取少许混合液(约15μl)自血球计数盘chamber上方凹槽加入，盖上盖玻片，于100倍倒立显微镜下观察，活细胞不染色，死细胞则为蓝色(或红色-Erythrosin bluish)。（3）计数四个大方格之细胞总数，再除4，乘以稀释倍数(至少乘以2，因与trypanblue等体积混合)，最后乘以104，即为每ml中细胞悬浮液之细胞数。若细胞位于线上，只计上线与右线之细胞(或计下线与左线之细胞)。注：4大格细胞总数×稀释倍数×104/4=细胞数/ml；每一大格的体积=0.1cm×0.1cm×0.01cm=10-4ml计数板计数时，最适浓度为5～10×105细胞/ml，此范围外计数误差偏大。高浓度细胞悬液，可取出部分作稀释或连续稀释后计数。5、范例：T75 monolayer culture制成10ml细胞悬浮液，取0.1ml溶液与0.1ml trypan blue混合均匀于试管中，取少许混合液加入血球计数盘，计数四大方格内之细胞数目。活细胞数/方格：55，62，49，59；死细胞数/方格：5，3，4，6；细胞总数=243平均细胞数/方格=60.75；稀释倍数=2；细胞数/ml：60.75×104×2（稀释倍数）=1.22×106；细胞数/flask（10ml）：1.22×106×10ml=12.2×106存活率：225/243﹦92.6%

简介多年以来，商品肉鸡频繁发生的肌胃腺胃炎发生的根源集中指向了霉菌毒素。如果是由于饲料污染或鸡舍环境污染尚可解决，但越来越多雏鸡出壳后就已经感染导致各种症状的出现且没有好的治疗策略，需要孵化场从根本上采取措施。[align=center][img]http://5b0988e595225.cdn.sohucs.com/images/20180416/c03d0343b8bb4c23bc4a29c91d947d5e.jpeg[/img][/align]孵化场孵化场是种蛋经21天的孵化变成1日龄雏鸡的重要场所，能够完成这一系列变化的孵化条件也是细菌和霉菌生长繁殖的最理想的条件。在孵化器内，温度大约为99.700F(一36.50c)，这一温度对于微生物的生长非常有利。孵化器内有加热(通过水或电)和冷却(通过空气或水)系统，当利用水进行冷却时，会发生冷凝现象，这会加剧刺激细菌的繁殖。为保持孵化器内有最佳的氧气，二氧化碳比例，还配备了通风系统。在出雏器内，大量的微生物存在于已出壳雏鸡周围的空气内。雏鸡出壳时，出雏器内还会产生更多的微生物、绒毛及雏鸡粪便。孵化厅内最重要的一点是要尽量减少种蛋及雏鸡与有害细菌和霉菌的接触，因此高效的卫生清洁措施是非常必要的。[align=center][img]http://5b0988e595225.cdn.sohucs.com/images/20180416/cfcc2ea54af843c9ac9e12e735860bd5.jpeg[/img][/align]孵化场霉菌污染关于霉菌本身的话，其实是真菌的一种，由于能产生孢子所以相当顽固，如果只是处理菌体本身，可能很快又会长起来。种蛋产出后往往容易受到环境和空气中细菌的污染，不仅影响其自身的孵化，而且污染孵化设备，传播各种疾病。种蛋的表皮外壳上不同程度的带有病菌(如沙门氏菌、巴氏杆菌、大肠杆菌、亚利桑那菌等)，虽然从蛋壳结构上看，种蛋有胶质层，蛋壳和内膜等几道自然屏障，但这些屏障对病菌的阻止能力有限。随着时间的推移，蛋面被污染，蛋面温度高，湿度大时，这些细菌(特别是霉菌)在壳上很容易繁殖，突破其阻止侵入蛋内，有些病菌会直接导致胚胎死亡，臭烂腐败；有些病菌则在雏禽孵出后发病死亡，并传染给没死亡雏禽的后代。严重影响种蛋的质量、对孵化极为不利，据测定，刚产下来的蛋表面有100-300个细菌，经1小时后可繁殖到 4000-5000个以上。[align=center][img]http://5b0988e595225.cdn.sohucs.com/images/20180416/4b0d5c29c1004a09a1343cf96036bb9d.jpeg[/img][/align]种蛋霉菌污染危害种蛋产出后往往容易受到环境霉菌的污染，如果种蛋入孵前不进行消毒，随着时间的延长，霉菌不断繁殖增多，这些霉菌附着在蛋体表面并且大量繁殖并侵人蛋内，不仅影响孵化效果,更严重的是污染孵化器和用具，传染各种疾病，并可能将疾病传播给雏鸡。尤其是雏鸡白痢病，危害很大。因此，给种蛋进行消毒，可以消除蛋壳上的病原微生物，减少胚胎死亡，而且还能提高鸡苗的成活率，因此种蛋的消毒非常重要。[align=center][img]http://5b0988e595225.cdn.sohucs.com/images/20180416/0b482a9c0c15443a95ff241204c2d77d.jpeg[/img][/align]种蛋消毒剂的选择随着规模化养鸡场及孵化场的发展，人们已经逐步懂得了消毒的重要性。在生产中使用消毒剂消毒，已经成为种蛋消毒的主要方式。但在实践生产中，实际情况比较复杂，对消毒剂的要求很高。单一消毒剂都存在着一些固有的缺陷，穿透有机物能力弱，受环境温度影响大，使用浓度高。消毒剂应选用无色、无味、无毒、无残留、无腐蚀性、无刺激性、对人体没有伤害；能迅速溶解于水并能快速释放出杀菌有效成分；对各种天然水中所含的各种类型的致病微生物都有强烈的杀灭作用；不与水中的无机物和有机物起反应或产生有毒的化合物；并且作用时操作简单方便。而奥克泰士D10型的出现，屏蔽了传统消毒剂的缺陷，提高了现代孵化场的效率，是种蛋消毒最理想选择。[align=center][img]http://5b0988e595225.cdn.sohucs.com/images/20180416/d323a26b817045f29f7a01e9698b3f71.jpeg[/img][/align]奥克泰士D10奥克泰士D10是德国原装进口产品，主要成分为食品级过氧化氢银离子。无毒、无色、无味、无残留、无腐蚀性，具有润湿、乳化、分散、渗透、去污、消毒和杀菌等功能。易溶于水，性能稳定，高效广谱等效用。作为新一代的生态型灭菌、消毒剂，以其独有的生产技术，基于“银离子”以及“食品级过氧化氢”，成为领先全球的产品。 产品达到ISO 9001和ISO 14001标准，IFS国际食品标准认证、欧盟EMAS检测认证、德国莱茵TUV认证等。经过了欧盟及众多国外研究机构组织检测，在被欧洲大多数国家广泛应用的同时，在澳大利亚、北美也被作为最新一代的杀菌、消毒剂而被认可。奥克泰士D10拥有强效的广谱杀菌效果，在杀灭病原体细菌，生物膜，藻类，酵母，真菌和病毒等物质时效果显著，产品功效是经过近200种细菌学，生物学，病毒学和毒物学的测试和验证过的。能穿透和破坏微生物的细胞壁和细胞膜，进入细胞内部使其关键性功能成分（例如：DNA和酶）坏死，从而导致细胞死亡。（食品级）过氧化氢是一种强氧化剂，释放的氧分子（初生态氧）将微生物的酶系统氧化。银离子妨碍细菌(酶)的基本的新陈代谢功能或影响他们的隔膜结构(微量活动)。 这两种成份都针对同一个目标，共同提高其性能(潜在的共同协作) 。无论是食品级过氧化氢还是银离子，对病原菌细胞内所有成分的破坏都是不可逆转的，这就保证了杀菌的彻底性，同时更重要的是，由于这种独特的机理也保证了病原菌不会产生耐药性。不仅如此，产品中银离子的加入更是起到了画龙点睛的作用，银离子对过氧化氢还能起到稳定剂和催化剂的作用，去除了过氧化氢的缺点（不稳定、在接近碱性环境下几乎没有杀菌能力等），强化了它的优点，产生了1＋1＞2的效应，使奥克泰士D10的杀菌效力更快速、更持久。[align=center][img]http://5b0988e595225.cdn.sohucs.com/images/20180416/3a772d83306e480d814b01bd856150e4.jpeg[/img][/align]奥克泰士D10产品特点1、完全环保，完全生物可分解，对人体无害，无腐蚀性，无残留，无抗药性。2、无色，无气味，无味道，不起沫，完全溶于水，使用安全，从而也保证了种蛋消毒过程中的灭菌率。3、杀灭细菌、真菌、病毒、阿米巴原虫等各种类型致病微生物。4、防治微生物重复污染种蛋。5、见效快，作用时间长，效果明显，能完全杀死有害菌。6、应用弹性大：在低浓度时，依然有显著效果，在高达95摄氏度时仍然能起作用。7、奥克泰士D10是世界公认的具有广谱、高效的消毒技术，直接作用于细菌的细胞膜，使其损伤，导致新陈代谢障碍直至死亡；直接破坏病毒的核糖核酸或脱氧核糖核酸直至杀灭。8、奥克泰士杀菌消毒彻底无死角，无残留，环保高效无二次污染。9、奥克泰士杀菌能力强，其杀菌能力是紫外线灯的1.5-5倍，比氯高1倍，在水中的杀菌速度比氯快600-3000倍。[align=center][img]http://5b0988e595225.cdn.sohucs.com/images/20180416/1a195379b94e4a66af4f1ebb3cc5be9b.jpeg[/img][/align]

除少数培养基只需加热溶解，不需高压灭菌外，大部分培养基均需121℃高压灭菌15-30分钟。尤其是对无菌试验培养基灭菌不彻底，直接关系到试验结果。因此必须认真对高压灭菌器进行灭菌效果的验证。 1．试验材料(1) 嗜热脂肪芽胞杆菌纸片。嗜热脂肪芽胞杆菌(Bacillus stearothermophilus) ATCC7053是本法常用的生物指示菌，含芽胞量5-l05 CFU/片。(2) 121℃压力蒸气灭菌化学指示卡。(3) 溴甲酚紫胨水培养基116℃高压灭菌20分钟后备用。(4) 0-150℃留点温度计。2．方法与结果将嗜热脂肪芽胞杆菌纸片（以下简称菌片）用无菌镊子放人密封试管中。化学指示卡和留点温度计放入敞口试管中。以上两种试管各准备5-10份。分别放置在高压灭菌器蒸气口处、底部排气口处及底部出水口处或上下左右中间5处。如灭菌器为二层，则需放10处。留点温度计标化合格后方可用于验证试验。检测前，需将温度计的水银柱甩至40℃以下。每次监测后留点温度计的温差应存1℃之间，则说明灭菌器内的温度分布是均匀的。灭菌后的菌片应在严格无菌操作条件下放入灭菌后的溴甲酚紫胨水培养基内56-60℃培养24-48小时，观察颜色变化。如培养基变为黄色，说明菌片中的嗜热脂肪芽胞杆菌尚未完全灭活，细菌仍可在培养基中生长，分解葡萄糖产酸变为黄色。如培养基颜色不变化仍为紫色，则说明芽胞已灭活。同时要用未经灭菌的纸片放入培养基内作为阳性对照，不加纸片的空白培养基作为阴性对照。化学指示卡上的指示色块，在高压蒸气灭菌时，由淡黄色变为黑色。随着颜色变化的深浅，并与对照色相比，可判断灭菌效果是否达到要求。化学指示卡应在干燥处保存。遇潮会变色，影响灭菌效果的观测。高压蒸气灭菌必须使蒸气顺利进入灭菌器内，与灭菌物品接触，并将原有的冷空气排出方可达到灭菌的效果。要进行空载热分布和满载热穿透力验证(满载时不超过总体积的2/3)。二种验证各重复三次，共做六次。5个点六次试验表明温度均在121℃，化学指示卡变黑；程度与对照色一致；培养基均未改变颜色，说明高压蒸气灭菌效果合格。高压灭菌器属于强检仪器，但强检只是对仪器物理参数的考核。所以做过强检的灭菌器还必须进行灭菌效果的验证。一些单位常常忽略了这个重要的问题。国内市售的手提灭菌器，往往仪器指针达到所需的温度，但灭菌物品的实际温度却未达到要求。导致灭菌物品不彻底，影响实验结果。培养基灭菌不彻底，影响培养基的使用及结果判断。因此高压蒸气灭菌器无菌效果的验证是一个必须引起重视的问题。

灭菌是指杀灭物体中所有微生物的繁殖体和芽孢的过程。消毒是指用物理、化学或生物的方法杀死病原微生物的过程。 灭菌的原理就是使蛋白质和核酸等生物大分子发生变性，从而达到灭菌的作用，实验室中最常用的就是干热灭菌和湿热灭菌。 干热灭菌是利用高温使微生物细胞内的蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。细胞内的蛋白质凝固性与其本身的含水量有关，在菌体受热时，当环境和细胞内含水量越大，则蛋白质凝固就越快，反之含水量越小，凝固缓慢。因此，与湿热灭菌相比，干热灭菌所需温度高（160～170℃），时间长 （1～2h）。但干热灭菌温度不能超过 180℃。否则，包器皿的纸或棉塞就会烧焦，甚至引起燃烧。 高压蒸气灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸气。待水蒸气急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀，继续加热，此时由于蒸气不能溢出，而增加了灭菌器内的压力，从而使沸点增高，得到高于 100℃的温度。导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。 在同一温度下，湿热的杀菌效力比干热大。其原因有三：一是湿热中细菌菌体吸收水分，蛋白质较易凝固，因蛋白质含水量增加，所需凝固温度降低，二是湿热的穿透力比干热大，三是湿热的蒸气有潜热存在。这种潜热，能迅速提高被灭菌物体的温度，从而增加灭菌效力培养基

[b]　　细胞储存液氮罐有哪些常见问题?[/b]　　1. 液氮泄漏：由于液氮的低温特性，液氮罐可能会发生泄漏。泄漏会导致液氮罐内的温度上升，从而影响细胞样品的保存质量。　　2. 结霜过多：在液氮罐内频繁开启和关闭时，可能会导致罐壁结霜过多，影响细胞样品的保存效果。　　3. 罐口密封不严：如果细胞储存液氮罐的罐口密封不严，空气和水分可能会进入罐内，影响细胞样品的保存质量。　　4. 细胞样品冻结：如果液氮罐内的温度过低或未能均匀冷却，细胞样品可能会被过度冻结，导致细胞死亡或质量下降。[b]　　如何解决细胞储存液氮罐常见问题?[/b]　　1. 液氮泄漏：定期检查液氮罐的密封性能，确保无泄漏现象发生。如果发现泄漏，需要及时修复或更换受损部件。　　2. 结霜过多：减少频繁开启和关闭液氮罐的次数，避免罐壁结霜过多。若结霜现象已经发生，可以使用专门工具清除结霜，保证罐壁干燥。　　3. 罐口密封不严：定期检查罐口密封圈的状态，确保其完好无损。如有损坏，及时更换密封圈，确保罐口密封性良好。　　4. 细胞样品冻结：在存放细胞样品前，先将液氮罐内的温度均匀冷却至适宜的范围。此外，可以根据细胞样品的特点，选择合适的冷冻液进行保存，以降低细胞冻结的风险。[url=http://www.mvecryoge.com/]金凤液氮罐[/url]　　[b]其他需要注意的事项[/b]　　1. 定期检查液氮罐的液位：液氮罐内的液位应保持在适当范围内，避免过高或过低。定期检查液位，并根据需要添加或排除液氮。　　2. 正确使用细胞冻存管：选择质量好的细胞冻存管，确保其密封性良好，以防止细胞样品受到空气和水分的污染。　　3. 定期清理液氮罐：定期清理液氮罐内的污垢和杂质，保持罐内干净整洁。清理时应注意安全，避免直接接触液氮和使用有害化学物质。　　4. 避免频繁开启和关闭液氮罐：频繁开启和关闭液氮罐会导致温度变化，影响细胞样品的保存效果。因此，在使用过程中应尽量减少开启和关闭液氮罐的次数。　　细胞储存液氮罐是保存细胞样品的重要设备，但在使用过程中常会遇到一些问题。通过定期检查液氮罐的密封性能、控制结霜、保证罐口密封性和正确保存细胞样品，可以有效解决液氮泄漏、结霜过多、罐口密封不严和细胞样品冻结等常见问题。此外，定期检查液位、正确使用细胞冻存管、定期清理液氮罐和避免频繁开启和关闭液氮罐也是需要注意的事项。只有正确使用和维护细胞储存液氮罐，才能保证细胞样品的长期保存质量和稳定性。

[b]　一、定期清洁细胞储存液氮罐[/b]　　细胞储存液氮罐在使用过程中会随着时间的推移产生霜冻或冰层，这可能会影响罐内的温度稳定性。因此，定期清洁细胞储存液氮罐是必不可少的保养步骤之一。清洁细胞储存液氮罐的方法有很多种，常见的包括使用软布擦拭罐体内外表面，使用棉签或刷子清理冰层，当然还可以使用专业的清洁剂进行清洗。需要注意的是，在清洁细胞储存液氮罐时要特别小心，避免对罐体造成损坏。[b]　　二、定期检查密封性能[/b]　　细胞储存液氮罐的密封性能对于保持罐内温度稳定至关重要。因此，定期检查细胞储存液氮罐的密封性能是保养的另一个重要步骤。检查密封性能的方法有很多种，例如可以通过观察罐体是否有冷气逸出或外界空气进入来判断密封性能。如果发现细胞储存液氮罐的密封性能不佳，应及时更换密封件或进行修理。[b]　　三、避免频繁开启细胞储存液氮罐[/b]　　频繁开启细胞储存液氮罐会导致罐内温度的波动，从而影响样本的质量和活性。因此，为了保护样本并延长细胞储存液氮罐的使用寿命，我们应该尽量避免频繁开启罐盖。当需要取出或放入样本时，最好一次性将所有需要的样本处理完毕，减少开启罐盖的次数。[url=http://www.mvecryoge.com/]金凤液氮罐[/url]　　四、注意细胞储存液氮罐的放置位置　　细胞储存[url=http://www.cnpetjy.com/]液氮罐[/url]的放置位置也是影响其保养效果的重要因素。首先，细胞储存液氮罐应该远离任何可能产生震动或振动的设备，以避免对罐内样本造成损坏。其次，应将细胞储存液氮罐放置在通风良好、温度稳定的环境中，避免暴露在阳光直射或过高的温度下。这些措施可以有效地保护细胞储存液氮罐，并延长其使用寿命。　　总结起来，保养细胞储存液氮罐的关键在于定期清洁、检查密封性能、避免频繁开启和注意放置位置。通过合理使用和保养细胞储存液氮罐，我们可以确保样本的质量和活性，并延长细胞储存液氮罐的使用寿命。希望本文提供的保养技巧能够对读者有所帮助，使其更好地使用和保养细胞储存液氮罐。

市质监局近期对本市生产、销售的糕点、饼干、面包和炒货等4类共411种食品开展了抽查。昨天公布的结果显示，400种合格，总体合格率为97.3%，其中糕点、饼干、炒货的合格率分别为99.3%、96%、94.3%，面包全部合格,4类食品总体质量状况较好。　　这次抽查发现的主要问题是：有个别食品酸价、霉菌计数、菌落总数、大肠菌群、二氧化硫残留等指标超标。　　昨天市质监局曝光了2种质量问题严重的食品及其企业：广东省金禾食品工业有限公司去年9月27日生产的金禾牌蛋酥（160g/件），其霉菌计数超标3倍多；上海企强工贸有限公司分公司去年12月25日生产的企强牌糖衣花生仁（202g/件），其霉菌计数超标高达120倍。　　对抽查不合格的产品，本市质监部门已要求销售单位撤柜，涉及本市生产企业的已督促企业主动召回，对质量问题严重的企业已立案查处，将依法做出行政处罚。

[b][size=12px][font=微软雅黑]关于蜡样芽孢杆菌[/font][font=微软雅黑][/font][/size][/b][size=12px][font=微软雅黑]1、蜡样芽胞杆菌[i][/i]为革兰氏阳性大杆菌，大小为1-1.3×3-5μm，兼性需氧，[/font][b][font=微软雅黑]形成芽胞[/font][/b][font=微软雅黑]，芽胞不突出菌体，菌体两端较平整，多数呈链状排列，与炭疽杆菌相似。引起食物中毒的菌株多为周鞭毛，有动力。[/font][font=微软雅黑][/font][/size][size=12px][font=微软雅黑]2、[/font][font=微软雅黑]培养特性　　[/font][b][font=微软雅黑]蜡样芽胞杆菌生长温度为25-37℃，最佳温度30-32℃。在肉汤中生长混浊有菌膜或壁环，振摇易乳化[/font][/b][font=微软雅黑]。在普通琼脂上生成的菌落较大，直径3-10mm，灰白色、不透明，表面粗糙似毛玻璃状或融蜡状，边缘常呈扩展状。[/font][font=微软雅黑][/font][/size][size=12px][font=微软雅黑]3、[/font][font=微软雅黑]耐热性　　蜡杆芽胞杆菌耐热，[/font][b][font=微软雅黑]其37℃16小时的肉汤培养物的D80℃值（在80℃时使细菌数减少90%所需的时间）约为10-15分钟；使肉汤中细菌（2.4×107/mL）转为阴性需100℃20分钟。其游离芽胞能耐受100℃30分钟，而干热灭菌[i][/i]需120℃60分钟才能杀死[/font][/b][font=微软雅黑]。[/font][font=微软雅黑][/font][/size][font=微软雅黑][size=12px]4、在欧洲大都由甜点、肉饼、色拉和奶、肉类食品引起；在我国主要与受污染的米饭或淀粉类制品有关。　蜡样芽胞杆菌食物中毒通常以夏秋季（6-10月）最高。引起中毒的食品常于食前由于保存温度不当，放置时间较长或食品经加热而残存的芽胞以生长繁殖的条件，因而导致中毒。[font=微软雅黑]（转载自[/font][font=system-ui, -apple-system, BlinkMacSystemFont, 'Helvetica Neue', 'PingFang SC', 'Hiragino Sans GB', 'Microsoft YaHei UI', 'Microsoft YaHei', Arial, sans-serif]食品微生物工程师[/font][font=微软雅黑]）[/font][/size][/font]

据澳大利亚媒体报道，澳大利亚南澳州沙门氏菌疫情创5年来新高，接近2010年发病率的2倍。卫生部门认为，鸡蛋被清洗后，更容易感染沙门氏菌。据报道，人们把脏鸡蛋表层污垢洗去的同时，实际上可能把病菌引入多孔的蛋壳内部，引发食物中毒。尽管很难确定沙门氏菌疫情由单一个原因造成的，但卫生部门已发布公众安全警报，呼吁民众在食物的准备、烹饪和储存过程中应当特别小心。截至10月24日，今年共确诊1056起沙门氏菌感染病例，而2010年全年共有668起病例。去年，共有1210起患病记录，但在每年的这个时候，去年的病例下降了215起。公共卫生服务机构（Public Health Services）的南澳卫生主任巴凯特（Kevin Buckett）博士称，沙门氏菌病例在南澳创5年新高，这些病例往往很难查明原因，食品安全比以往任何时候都更加重要。鸡蛋是均衡饮食的重要内容，应引起重视。巴凯特称，破裂和脏蛋应予以丢弃，因为这些蛋可能含有细菌，如沙门氏菌。还有就是不要洗脏蛋，因为蛋的壳是含细孔的，洗涤时反而可能帮助细菌从鸡蛋外壳渗入到鸡蛋里面。巴凯特提醒，含有生鸡蛋的加工食品，诸如蛋黄酱或生鸡蛋奶昔存在病菌滋生的高风险。尽量保持生鸡蛋新鲜，食用前保持食物冷藏，任何时候不要将食物与生鸡蛋从冰箱中取出超过两个小时。

7月29日，香港食物安全中心发布的最新一期食物安全报告称，16800个食物样本中发现了40个不合格样本，其中黄大仙华润万家超市出售的雀巢脱脂高钙牛奶饮品，被检出蜡样芽孢杆菌超标，含量为每毫升含1300万个，与法定上限(每毫升10万多个)相比超标120倍。饮用后可能导致呕吐、腹泻等食物中毒症状。据了解，香港食品安全中心调查的起因是接到一起消费者投诉，之后于6月8日在香港黄大仙华润万家超市抽取了一个236毫升雀巢脱脂高钙牛奶样本，产品同月10日过期。　　　　雀巢在其官方网表示：“此种产品在中国大陆并没有销售。”　　　　8月1日上午，雀巢中国公司集团事务部经理何彤接受《法制周报》记者采访时表示，香港检出的问题高钙脱脂产品在内地并没有销售。何彤表示，这次不合格属于个案。何彤表示，这种牛奶是香港生产的，保质时间只有7天，所以不可能销售到很远的地方去。　　　　广州乳业专家接受记者采访时表示，芽胞杆菌含量超标只有两种可能：第一，奶源受到了污染;第二，二次加工时候受到了污染。芽胞杆菌含量超标130倍，那么这个奶污染的就已经相当严重了，喝多了可以使人中毒。另据奶业专家陈渝表示，“至于到底是奶源、生产、运输等哪个环节出了问题，还需要进一步跟踪确认。”　　　　东方艾格农业咨询公司分析师陈连芳在接受记者采访时表示，“有一种可能是因为企业生产工艺的管理过失，由于相关人士疏忽，致使细微颗粒进去;第二种可能是该批次的原料本身或许超标，所以再严格的生产程序也必然导致此款牛奶的蜡样芽胞杆菌超标。”　　　　当前，雀巢中国公司已经表示，香港食物安全中心随后已经从有关奶品厂及零售商处再次抽取了两个同类型的奶类样本进行测试，结果全部合格。业内人士黄先生对雀巢公司“不合格样品属于个案”的说法表示不同的看法。黄先生表示，雀巢这种说法很牵强，值得商榷，毕竟采样有一定的随机性，出事的概率小并不能排除此款脱脂高钙牛奶或者是雀巢旗下其他款式牛奶再次出现类似质量问题的可能，所以现在的当务之急是切实查找“超标样品属于个案”的真正原因所在。

一、目的要求 学习并掌握芽孢染色法。 二、基本原理 芽孢染色法是利用细菌的芽孢和菌体对染料的亲合力不同的原理，用不同染料进行着色，使芽孢和菌体呈不同的颜色而便于区别。芽孢壁厚、透性低，着色、脱色均较困难，因此，当先用一弱碱性染料，如孔雀绿（malachite green）或碱性品红（basicfuchsin）在加热条件下进行染色时，此染料不仅可以进入菌体，而且也可以进入芽孢，进入菌体的染料可经水洗脱色，而进入芽孢的染料则难以透出，若再用复染液（如番红液）或衬托溶液（如黑色素溶液）处理，则菌体和芽孢易于区分。三、器材 枯草芽孢杆菌，蜡状芽孢杆菌（Bacillus cereus），生孢梭菌（Clostridium sporogenes）； 孔雀绿染液，番红水溶液，苯酚品红溶液，黑色素溶液等。 四、操作步骤 方法1、 （1）将培养24小时左右的枯草芽孢杆菌或其他芽孢杆菌，作涂片、干燥、固定。 （2）滴加3—5滴孔雀绿染液于已固定的涂片上。 （3）用木夹夹住载玻片在火焰上加热，使染液冒蒸汽但勿沸腾，切忌使染液蒸干，必要时可添加少许染液。加热时间从染液冒蒸汽时开始计算约4—5分钟。这一步也可不加热，改用饱和的孔雀绿水溶液（约7．6％）染10分钟。 （4）倾去染液，待玻片冷却后水洗至孔雀绿不再褪色为止。 （5）用番红水溶液复染1分钟，水洗。 （6）待干燥后，置油镜观察，芽孢呈绿色，菌体呈红色。 方法2、 （1）取二支洁净的小试管，分别加入0．2ml无菌水，再往一管中加入1—2接种环的蜡状芽孢杆菌的菌苔，另一管中加入1—2接种环的生孢梭菌的菌苔，两管各自充分混合成浓厚的菌悬液。 （2）在菌悬液中分别加入0．2ml苯酚品红溶液，充分混合后，于沸水浴中加热3—5分钟。 （3）用接种环分别取上述混合液2—3环于两片载玻片上，涂薄，风干后，将载玻片稍倾斜于烧杯上，用95％乙醇冲洗至无红色液流出。 （4）再用自来水冲洗，滤纸吸干。 （5）取1—2接种环黑色素溶液于涂片处，立即展开涂薄，自然干燥后，油镜观察，在淡紫灰色背景的衬托下，菌体为白色，菌体内的芽孢为红色。