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溶菌酶鸡蛋白

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溶菌酶鸡蛋白相关的论坛

  • 加热蛋白溶菌酶能杀灭诺如病毒

    加热蛋白溶菌酶能杀灭诺如病毒日本东京海洋大学的一个研究小组日前宣布,在实验中发现,加热处理鸡蛋蛋白含有的溶菌酶,能灭活诺如病毒。这是由于溶菌酶能破坏包裹诺如病毒基因的外壳。诺如病毒会引发急性肠胃炎和食物中毒。这种病毒具有强大的感染力,只要有10至100个病毒体进入人体,就会导致感染,目前还没有有效的抗病毒剂。研究小组利用实验鼠的诺如病毒替代人类诺如病毒进行了实验。他们将蛋白中含有的溶菌酶在100摄氏度下加热40分钟,使其变性。接下来,将含有1%加热处理过的溶菌酶的溶液与实验鼠诺如病毒混合在一起,并观察了1分钟之后的变化。溶菌酶是蛋白等含有的一种能水解致病菌中黏多糖的碱性酶。研究人员发现,诺如病毒基因量大幅减少,以致无法检出,并观察到病毒体出现膨胀。他们认为这是由于包裹病毒基因的外壳被破坏导致的。研究人员指出,实验鼠诺如病毒和人类诺如病毒从遗传学上来看非常类似,所以这种加热变性处理的蛋白溶菌酶对人类诺如病毒应该也有效果。他们希望将其制成消毒喷雾剂,在下一年度达到实用化。

  • 用高效液相色谱怎么分离牛血清白蛋白和溶菌酶

    [color=#444444]实验需要定量牛血清白蛋白(BSA)和溶菌酶(LYZ)混合溶液中各自的含量是多少,用的是安捷伦1260高效液相,色谱柱C-18,25cm,300A,流动相A 0.1%三氟乙酸水溶液。流动相B 0.1%三氟乙酸乙腈溶液,但是怎么走梯度都分不开啊,总是在间隔不到1分中出峰。求大神指点[/color]

  • 美澳科学家成功将被煮熟鸡蛋变回生鸡蛋!!!!

    据美国全国广播公司财经频道报道,近日,美国加州大学欧文分校和澳大利亚弗林德斯大学的研究人员在实验中成功将煮熟的鸡蛋变回生鸡蛋。这一创新将极大地减少全球生物科技行业里癌症治疗、食物生产和其他部分的成本,总额约1600亿美元。这项研究被发表在期刊《ChemBioChem》上。还原只要几分钟据悉,该研究团队在实验中采用了多种不同的蛋白质材料,尝试将它们转化成可用的蛋白质,如溶菌酶。众所周知,鸡蛋的蛋清在煮熟的时候会变成白色,它富含蛋白质,加热后蛋白质长链展开,失去活性,然后重新组合成一种更紧密、更复杂的结构。因此,蛋清才从透明的粘液状变成白色有弹性的固体。该项目的研究人员发现了一种拆解复杂蛋白质链以使其恢复到原本结构的方法:首先,他们用一种化学物质液化熟鸡蛋的蛋白,然后用涡旋射流装置切断紧密缠结的蛋白质分子链以使它们正常重构。“是的,我们发明了一种不煮熟鸡蛋的方法。”加州大学欧文分校的化学分子生物学和生物化学教授格里戈·韦斯这样说道,“在文章里我们描述了一种可以分开纠缠的蛋白质使得它们可以再折起的设备。我们将鸡蛋蛋白在90摄氏度的温度下煮了20分钟,再将鸡蛋的一个关键蛋白质恢复到正常运转状态。”和其他研究人员一样,韦斯一直致力于有效地产生和回收有价值的分子蛋白质,这类蛋白质具有广泛的应用,但它们常常在形成时未进行正确的折叠,从而形成结构错误的形状,这导致它们几乎成为废物。“我们感兴趣的并不是处理鸡蛋的过程,而是演示这个过程有多强大。”韦斯说道,“真正的问题是你花了太多时间从试管上刮去胶性蛋白,而你需要某种回收这一材料的方法。”但常用方法非常昂贵也耗时:分子水平的透析大约要进行4天,“而新的过程只需要几分钟,它加速了上千倍。”很快会投入市场韦斯说道:“我们的研究不仅会省很多钱,更重要的是会省下大笔的时间,因为时间就是金钱。”对于该技术在癌症治疗方面的应用,他尤其乐观。癌症治疗技术中有一种是用实验室制成的抗体附着在癌细胞的蛋白质上,这样免疫系统就能摧毁这些癌细胞。在实验室制作抗体蛋白相当耗时且费用昂贵。韦斯说,这项技术可以大大减少制作抗体蛋白的时间和成本。例如,制药公司目前正在昂贵的仓鼠卵巢细胞上创造癌症抗体,这类细胞的蛋白质一般不会发生错误的折叠。快速而廉价地促进蛋白质的流水线加工,使得癌症治疗更能负担得起。工业奶酪的制造者、农民以及其他使用重组蛋白质的人,也可以因此获取更高利润。目前,加州大学欧文分校已经为该技术申请了专利,并将很快投入市场。加热蛋白溶菌酶能杀灭诺如病毒日本东京海洋大学的一个研究小组日前宣布,在实验中发现,加热处理鸡蛋蛋白含有的溶菌酶,能灭活诺如病毒。这是由于溶菌酶能破坏包裹诺如病毒基因的外壳。诺如病毒会引发急性肠胃炎和食物中毒。这种病毒具有强大的感染力,只要有10至100个病毒体进入人体,就会导致感染,目前还没有有效的抗病毒剂。研究小组利用实验鼠的诺如病毒替代人类诺如病毒进行了实验。他们将蛋白中含有的溶菌酶在100摄氏度下加热40分钟,使其变性。接下来,将含有1%加热处理过的溶菌酶的溶液与实验鼠诺如病毒混合在一起,并观察了1分钟之后的变化。溶菌酶是蛋白等含有的一种能水解致病菌中黏多糖的碱性酶。研究人员发现,诺如病毒基因量大幅减少,以致无法检出,并观察到病毒体出现膨胀。他们认为这是由于包裹病毒基因的外壳被破坏导致的。研究人员指出,实验鼠诺如病毒和人类诺如病毒从遗传学上来看非常类似,所以这种加热变性处理的蛋白溶菌酶对人类诺如病毒应该也有效果。他们希望将其制成消毒喷雾剂,在下一年度达到实用化。

  • CNS_17.035_溶菌酶

    CNS_17.035_溶菌酶

    [align=center][font='宋体'][size=29px]溶菌酶[/size][/font][/align][size=24px]赵浩博[/size][size=12px]溶菌酶又称细胞壁质酶或[/size][size=12px] N- 乙酰胞壁质聚糖水解酶。1922 年英国细菌学家 A. Fleming 发现人的唾液、 眼泪中存[/size][size=12px]在有溶解细菌细胞壁的酶,[/size][size=12px] 因其具有溶菌作用, 故命名为溶[/size][size=12px]菌酶。[/size][size=12px] 此后在人和动物的多种组织、 分泌液, 及某些植物、[/size][size=12px]微生物中也发现了溶菌酶的存在。[/size][size=12px] 随着研究的不断深入, 发[/size][size=12px]现不仅有溶解细菌细胞壁的溶菌酶,[/size][size=12px] 还有作用于真菌细胞壁[/size][size=12px]的种类,[/size][size=12px] 同时对其作用机制也有了更进一步的了解。 近几[/size][size=12px]年,[/size][size=12px] 人们根据溶菌酶的溶菌特性, 将其应用于医疗、 食品、[/size][size=12px]畜牧及生物工程中。[/size][size=12px]溶菌酶来源不同,其分子大小不一样,其氨基酸排列顺序也有所不同,如:[/size][size=12px] T4 噬菌体溶菌酶由 164 个[/size][size=12px]氨基酸组成,分子量为[/size][size=12px] 19 ku;鸡蛋溶菌酶只有 129 个[/size][size=12px]氨基酸,其分子量约为[/size][size=12px] 14.3 ku;人溶菌酶由 130 个氨[/size][size=12px]基酸残基组成,分子量为[/size][size=12px] 14.6 ku;植物中分离出的溶[/size][size=12px]菌酶,其分子量较大,约为[/size][size=12px] 24 ku~29 ku。各种溶菌酶[/size][size=12px]的等电点在[/size][size=12px] 10.7~11.5 之间,化学性质十分稳定, pH 在1.2~11.3 范围内剧烈变化时,其结构几乎不变,活性不[/size][size=12px]受影响,此外,溶菌酶对热也极为稳定,在[/size][size=12px] pH3.0 条件[/size][size=12px]下,沸水浴中加热[/size][size=12px] 60 min 其活力仍保持 90 %以上。[/size][size=12px]目前鸡蛋清溶菌酶是研究最清楚的一种溶菌酶并已投入商业化生产。它是由[/size][size=12px] 18 种 129 个氨基酸残基[/size][size=12px]构成的单一肽链,有[/size][size=12px] 4 个 S-S 键的氨基酸 Cys,等电点[/size][size=12px]约为[/size][size=12px] 11.1,最适溶菌温度为 45 ℃~50 ℃, pH 为 6.0~7.0。在酸性环境中,溶菌酶对热的稳定性很强, pH4~7[/size][size=12px]范围内,[/size][size=12px] 100 ℃处理 1 min 仍有近 100 的活力, 210 ℃加[/size][size=12px]热[/size][size=12px] 1.5 h 仍具有活性;在中性水溶液中,溶菌酶可维持[/size][size=12px]数天而不失去活性;在碱性条件下,其稳定性较差[/size][size=12px]。[/size][font='宋体'][size=14px]1. [/size][/font][font='宋体'][size=12px]溶菌酶的理化性质[/size][/font][size=12px]溶菌酶纯品呈白色、微黄或黄色的结晶体或无定形粉末,无异味,微甜,易溶于水,不溶于丙酮、乙醚。溶菌酶遇碱易被破坏,但在酸性环境下,溶菌酶对热的稳定性很强,在[/size][size=12px]pH值为4-7时,100℃处理1min,仍能较好地保持活力:pH值为3时,能耐100℃加热处理45min。 [/size][size=12px]溶菌酶化学性质非常稳定,当[/size][size=12px]pH值在一定范围内剧烈变化时,其结构几乎不变。溶菌酶不可逆变性的临界点是77℃,随溶剂的变化,不可逆变性临界点也发生变化,当溶菌酶所处溶液pH值小于1时,不可逆变性临界点降低到43℃。[/size][size=12px]溶菌酶最适[/size][size=12px]pH为5.3~6.4,可用于低酸性食品防腐;溶菌酶作为防腐剂安全性高,可被冷冻或干燥处理,且活力稳定。 [/size][size=12px]溶菌酶对几种变性剂的敏感程度为[/size][size=12px]:二恶烷二甲基乙酰胺二甲基甲酰胺丙酮,并且随溶剂用量的增加而直线下降。[/size][font='宋体'][size=14px]2. [/size][/font][font='宋体'][size=12px]溶菌酶的制备[/size][/font][size=12px]目前溶菌酶可以以鸡蛋清和蛋壳膜为材料提取制得,常用的方法有亲和层析法、离子交换树脂法、直接结晶法和聚丙烯酸沉淀法等。[/size][size=12px]亲和层析法是利用蛋白质和酶的生物学特异性,即蛋白质或酶与其配体之间所具有的专一性亲和力而设计的色谱技术。酶一底物复合物形成之后,在一定的条件下分离复合物便得到纯净的酶。常常使用的吸附剂为几丁质及其衍生物,如:几丁质粉、羧甲基几丁质、几丁质包埋纤维素、脱氨几丁质粉、[/size][size=12px]N-酰化壳聚糖、脱氨再生几丁质凝胶。[/size][size=12px]离子交换法是利用离子交换剂与溶液中的离子之间所生的交换反应来进行分离的,分离的效果较好,广泛用于微量组分的富集。一般流程为:鲜蛋一预处理一搅拌吸附一上柱洗脱一等电点沉淀一透析一喷雾干燥一成品。[/size][size=12px]溶菌酶在等电点以下较广泛的[/size][size=12px]pH值范围内,分子带正电荷,可吸附于弱酸性阳离子交换树脂上,洗脱后盐析,可得溶菌酶沉淀,再进行精制可得成品。蛋清吸附724树脂,洗涤缓冲液洗脱,硫酸铵溶液盐析透析,用NaOH去碱性蛋白,冻干溶菌酶,冻干粉沉淀干燥得到溶菌酶。在5—10℃下,将新鲜蛋清540kg加入到已处理好的80kg 724树脂中,搅拌吸附6h,在0—5℃静置过夜。倾出上层蛋清,树脂离心甩干,用蒸馏水反复洗去黏附的卵蛋白,然后将树脂装入柱内,用0.15mol/L、pH=6.5磷酸缓冲溶液约150L洗涤树脂,再用约600L的10%硫酸铵溶液洗脱,收集洗脱液。洗脱液中加硫酸铵,使最终含硫酸铵量为40%,有白色沉淀生成,冷处放置过夜。虹吸上层清液,沉淀吸滤抽干,再用1倍蒸馏水溶解沉淀呈稀糊状,然后装入透析袋,在约5℃的条件下,对蒸馏水透析24h左右,中间换水2—3次。离心去除沉淀,沉淀再用少量水洗一次,洗液与离心液合并。再往透析清液中慢慢加入1mol/L氢氧化钠溶液,同时不断搅拌,使pH值上升到8.0—9.0,如有白色沉淀,即离心除去。然后用3mol/L盐酸调pH=5.0,冷冻干燥,即得白色片状溶菌酶。也可将离心液用3mol/L盐酸调pH=3.5,在搅拌下缓慢加入5%的固体氯化钠,在约5℃的温度下静置48h,离心,沉淀用0℃丙酮洗涤,干燥,即得溶菌酶。[/size][size=12px]在蛋清中加入一定量的碘化物或碳酸盐等盐类,并调[/size][size=12px]pH值至9.5—10.0,溶菌酶会以结晶形式慢慢析出,而大多数蛋白质仍然在溶液。在超滤浓缩脱盐后,为获得较纯产品,采用结晶纯化酶液经超滤处理后,用NaOH调整pH 9.5,离心去除。上清液在缓缓搅拌下,加NaCl至5%,静置一周,得粗结晶。结晶溶于pH 4.6醋酸水中,分去不溶物后,进行重结晶,结晶的最终得率为60%左右。即每公斤蛋清中可得重结晶品近1.3 g,活力测定为8000U/mg。 [/size][size=12px]聚丙烯酸沉淀法为将提取过滤后含酶洗脱液,首先经过吸附步骤,即将过滤后的澄清溶液用[/size][size=12px]20%的NaOH溶液调pH至6.0,在调pH值的过程中不停的搅拌。有少量的乳白色沉淀析出,然后加入15%聚丙烯酸,立即有白色沉淀析出,加至pH值为3.0为止,静置17个小时进行静析,得到粘附于底部的乳白色胶状物。第二步解离,将前步得到的溶菌酶聚丙烯酸凝聚物。加入少量蒸馏水并用0.5 mol/L的碳酸钠,将其溶解,转移后,将pH值调到9.5。加入5%CaCl2溶液将溶菌酶聚丙烯酸解离,至无沉淀析出,然后过滤,得到澄清溶液。第三步盐[/size][size=12px]析,将所得澄清溶液加入[/size][size=12px]5%的NaCI溶液搅拌均匀。放入冰箱调温度为0℃。待有晶体析出后,用无水乙醇洗涤数次,置恒温培养箱中40℃条件下干燥称重。[/size][font='宋体'][size=14px]3. [/size][/font][font='宋体'][size=12px]溶菌酶的应用[/size][/font][font='宋体'][size=12px]本文主要从溶菌酶在食品添加剂中的应用展开进行论述。[/size][/font][size=12px]3[/size][size=12px].1 用于水产、肉类的防腐[/size][size=12px]将溶菌酶应用于水产品、肉类的保鲜防腐,目前已做了大量的研究。如早在[/size][size=12px] 2001 年前陈舜胜等就研[/size][size=12px]究了溶菌酶复合保鲜剂在冷藏([/size][size=12px]5 ℃)与冰藏(0 ℃~1 ℃)[/size][size=12px]条件下对虾、带鱼段、扇贝柱和柔鱼的保鲜效果,结果表明,使用溶菌酶([/size][size=12px]0.05 %)复合保鲜液浸泡后冷藏或[/size][size=12px]用溶菌酶([/size][size=12px]0.05 %~0.08 %)复合保鲜液制备保鲜冰冰[/size][size=12px]藏,与常规保鲜方法相比,可将上述水产品的保鲜期延长约一倍的时间。[/size][size=12px]2012 年张观科又报道:采用溶[/size][size=12px]菌酶、[/size][size=12px]Nisin、甘氨酸、VC、山梨酸钾、NaCl 等不同的配比[/size][size=12px]的复合生物保鲜剂在不同温度对牡蛎进行保鲜贮藏研究。结果表明,采用[/size][size=12px] Nisin 和溶菌酶配合的生物保鲜[/size][size=12px]剂的保鲜效果最佳(在[/size][size=12px]-3 ℃微冻条件下,保藏 30 天后[/size][size=12px]感官性状仍然良好)[/size][size=12px] 。而钱曦利用海藻糖、蜂胶、茶多[/size][size=12px]酚、魔芋葡甘露聚糖、[/size][size=12px]Nisin、溶菌酶、壳聚糖和姜汁 8种[/size][size=12px]天然保鲜剂对鹿肉保鲜进行研究,结果表明:单独使用时,溶菌酶对鹿肉样品就有较明显的抑菌作用(最佳抑菌浓度为[/size][size=12px] 0.5 %);而采用复合天然保鲜剂(茶多[/size][size=12px]酚、溶菌酶、海藻糖、[/size][size=12px]Nisin 复合)效果更好,可以有效的[/size][size=12px]提高鹿肉的货架期至[/size][size=12px] 36 d。从以上研究结果来看,溶菌[/size][size=12px]酶尤其是它在与其他保鲜剂按一定比例复合使用时,对水产及肉类能起到较好的防腐保鲜效果。[/size][size=12px]3[/size][size=12px].2 在低度酒类、饮料中的应用[/size][size=12px]日本已成功的使用鸡蛋清溶菌酶代替水杨酸作防腐剂用于清酒的防腐[/size][size=12px]。在国内,倪瑛和钟立人研[/size][size=12px]究了溶菌酶在葡萄酒生产中的应用。因为在葡萄酒生产中乳酸菌会将苹果酸转变为乳酸,但如果在酒精发[/size][size=12px]酵的前期就完成了这种反应,会对葡萄酒的感官产生不良影响,而控制乳酸菌生长的传统方法是使用[/size][size=12px] SO2,[/size][size=12px]但[/size][size=12px] SO2 的使用不仅对人体产生毒性,同样影响葡萄酒[/size][size=12px]的品质。因此,倪瑛等尝试将溶菌酶替代或补充[/size][size=12px] SO2 调[/size][size=12px]控乳酸菌的生长,结果显示,在葡萄原汁中加入[/size][size=12px] 0.1 %~0.15 %的溶菌酶,乳酸菌生长被抑制;在白葡萄酒中溶[/size][size=12px]菌酶剂量加至[/size][size=12px] 0.5 %时,可完全抑制苹果酸向乳酸的转[/size][size=12px]变。此外,将溶菌酶用于饮料防腐也有报道,如常凯等将溶菌酶([/size][size=12px]0.05 %) 、甘氨酸和 NaCl 进行复配用于生[/size][size=12px]产脱脂山核桃乳,其抑菌效果较显著,降低了山核桃乳的杀菌强度,延长了产品货架期。从以上结果看,在葡萄酒的生产中溶菌酶可作为[/size][size=12px]SO2 天然的、安全的替代或补充品来抑制乳酸菌的生[/size][size=12px]长,在其他低度果酒中也可做类似的尝试;同样将溶菌酶用饮料的防腐也有较显著的效果。[/size][size=12px]3[/size][size=12px].3 在乳制品中的应用[/size][size=12px]由于溶菌酶对肠道中腐败性微生物有特殊的杀灭作用,同时可直接或间接地促进肠道中双歧杆菌的增殖[/size][size=12px]。因此,有大量有关溶菌酶应用于婴幼儿奶粉的[/size][size=12px]专题论述[/size][size=12px] 冯棋琴,等:溶菌酶在食品工业中的研究进展[/size][size=12px]35研究报道,如刘浩强等研究了鸡蛋溶菌酶对婴幼儿[/size][size=12px]配方奶粉的抑菌效果,结果表明,婴幼儿配方奶粉在喷雾干燥后添加[/size][size=12px] 10 mg/100 mL~50 mg/100 mL 的鸡蛋[/size][size=12px]溶菌酶效果最好。张明江[/size][size=12px]等关于婴幼儿配方奶粉中[/size][size=12px]溶菌酶的添加工艺的研究也得出了相似的结论,既奶粉喷雾干燥后添加[/size][size=12px] 500 mg/L 的溶菌酶抑菌效果最好。[/size][size=12px]3[/size][size=12px].4 在水果保鲜上的应用[/size][size=12px]水果经过溶菌酶处理,其表面的细菌被有效的抑制或杀灭,从而延长水果的保鲜期。胡晓亮等[/size][size=12px]采用溶[/size][size=12px]菌酶与溶菌酶复合保鲜剂对马陆葡萄进行涂膜保鲜,结果表明:溶菌酶单独使用有一定的保鲜效果,但将溶菌酶([/size][size=12px]0.1 %)和海藻酸钠(1 %)复合使用对抑制马陆[/size][size=12px]葡萄的感官品质下降效果更为显著,在([/size][size=12px]4±1) ℃条件下[/size][size=12px]贮藏[/size][size=12px] 25 d 后,仍保持果实的硬度和组织形态,质量损[/size][size=12px]失率仅为[/size][size=12px] 9.34 %。[/size][size=12px]溶菌酶本身作为一种天然蛋白质,能在胃肠内作为营养物质被消化和吸收,对机体无毒性,也不会在体内残留,安全性很高,加之有效的防腐特性,溶菌酶已受到了食品行业的青睐。但目前实际应用的且已商品化的是鸡蛋清溶菌酶,它的抗菌谱较窄,只对[/size][size=12px] G+细菌起作用,底物特异性[/size][size=12px]强,且投入[/size][size=12px]/效率低,这限制了它们的广泛使用。为了扩[/size][size=12px]大溶菌酶使用领域及防腐效果,可以将鸡蛋清溶菌酶与其他天然保鲜剂(如海藻糖、茶多酚、[/size][size=12px]Nisin、溶菌酶、[/size][size=12px]壳聚糖等)配合使用。[/size][size=12px]此外,随着科学技术的发展,人们还可以采用一些高科技手段(如采用微生物发酵法生产溶菌酶,采用酶修饰法合成溶菌酶复合物如溶菌酶[/size][size=12px]-环糊精、溶菌酶-半乳甘露聚糖等)生产并改良溶[/size][size=12px]菌酶。经过改良的溶菌酶不仅抗菌活性稳定,而且具有良好的乳化性能。当这些杀菌谱广、成本低、安全性高溶菌酶复合剂以及人工合成溶菌酶商品化时,溶菌酶的使用范围定会越来越广,将会在各行业发挥不可估量的作用。[/size][font='宋体'][size=14px]4. [/size][/font][font='宋体'][size=12px]溶菌酶的限量,检测与标准[/size][/font][size=12px]溶菌酶可水解细菌的细胞壁[/size][size=12px], 造成藤黄微球菌的溶解而引起溶液吸光度值的降低。[/size][size=12px]一个溶菌酶活力单位定义为[/size][size=12px]25 ℃ ,pH 6.2 条件下, 使用藤黄微球菌悬浊液在450 nm 处每分钟引[/size][size=12px]起吸光度变化为[/size][size=12px]0.001 所需溶菌酶的量。[/size][size=12px]试剂和材料[/size][size=12px]藤黄微球菌:ATCC4698 或 CICC10680。[/size][size=12px]0.1 mol/L 磷酸盐缓冲液:pH 6.2。[/size][size=12px]称取[/size][size=12px]11.70 g 磷酸二氢钠(NaH[/size][font='宋体'][size=12px]2[/size][/font][size=12px]PO[/size][font='宋体'][size=12px]4[/size][/font][size=12px] 2H[/size][font='宋体'][size=12px]2[/size][/font][size=12px]O) 、7.86 g 磷酸氢二钠(Na[/size][font='宋体'][size=12px]2[/size][/font][size=12px]HPO[/size][font='宋体'][size=12px]4[/size][/font][size=12px]12H[/size][font='宋体'][size=12px]2[/size][/font][size=12px]O) 及0.372 g[/size][size=12px]乙二[/size][size=12px]胺四乙酸二钠 (EDTA-[/size][font='宋体'][size=12px]2[/size][/font][size=12px]Na)于无菌水中并稀释定容至1000mL。调整缓溶液pH至6.2±0.1。[/size][size=12px]注[/size][size=12px]: 用小份缓冲溶液检查pH, 以避免缓冲溶液被污染。如果需要, 通过加入更多的磷酸二氢钠溶液或磷酸氢二钠[/size][size=12px]溶液调整[/size][size=12px]pH。[/size][size=12px]溶菌酶标准品: 蛋清溶菌酶。[/size][size=12px]底物溶液: 用磷酸盐缓冲液制备50 mL 藤黄微球菌悬浊液。 使用前, 底物于37 ℃ 培养30 min。[/size][size=12px]该底物溶液室温下可稳定[/size][size=12px]2 h。 以磷酸盐缓冲液调分光光度计零点, 然后测定底物溶液的吸光度,450 nm 下读数应为0.70±0.1。[/size][size=12px]仪器和设备[/size][size=12px]分光光度计: 精度±0.001。pH 计。[/size][size=12px]注[/size][size=12px]: 所用的器皿应保持无菌, 保证工作环境的清洁。[/size][size=12px]分析步骤[/size][size=12px]试样溶液的制备[/size][size=12px]准确称取[/size][size=12px]100 mg±0.1 mg 试样, 置于50 mL 容量瓶中, 用约25 mL 磷酸盐缓冲液搅拌溶解并稀释[/size][size=12px]定容[/size][size=12px], 充分混匀。 再转移3 mL 上述试样制备溶液至100 mL 容量瓶中, 用磷酸盐缓冲液搅拌溶解并稀[/size][size=12px]释定容。[/size][size=12px]标准溶液的制备[/size][size=12px]精确称取[/size][size=12px]50 mg 蛋清溶菌酶标准品于50 mL 容量瓶中, 用约25 mL 磷酸盐缓冲液搅拌溶解并稀释[/size][size=12px]定容[/size][size=12px], 充分混匀(如果需要, 冷冻该溶液以备后续测定)。转移3 mL 上述标准制备溶液至100 mL容量[/size][size=12px]瓶中[/size][size=12px], 用磷酸盐缓冲液搅拌溶解并稀释定容。测定[/size][size=12px]取[/size][size=12px]3 份标准溶液和3 份试样溶液进行测定。[/size][size=12px]25 ℃ 室温下, 将1 cm 比色皿放入分光光度计, 用磷酸盐缓冲液调整吸光度零点。 吸2.9 mL 底物[/size][size=12px]溶液于比色皿[/size][size=12px], 最初450 nm 处吸光度应为0.70±0.10,3 min 之内初始吸光度值变化应小于或等于0.003 时, 方可开始测定。 吸取0.1 mL 标准溶液加入底物溶液, 充分混合。 记录3 min 吸光度值的变[/size][size=12px]化[/size][size=12px], 每15s 记录一次吸光度值。 每分钟吸光度值变化应在0.03~0.08, 若不在要求范围需调整试样溶液[/size][size=12px]的浓度。[/size][size=12px] 重复操作测定试样溶液。[/size][size=12px]反应[/size][size=12px]1 min 后稳定, 计算时忽略最初1 min 的读数。[/size][size=12px]结果计算[/size][size=12px]酶活力[/size][size=12px] X , 按式计算:[/size][align=center][size=12px]X =(A[/size][font='宋体'][size=12px]1[/size][/font][size=12px] -A[/size][font='宋体'][size=12px]2[/size][/font][size=12px])[/size][size=12px]/([/size][size=12px]2 × m ×0.001[/size][size=12px])[/size][/align][size=12px]式中[/size][size=12px]:[/size][size=12px]A1 ———[/size][size=12px]试样在[/size][size=12px]450 nm [/size][size=12px]处反应[/size][size=12px]1 min [/size][size=12px]时的吸光度[/size][size=12px] [/size][size=12px]A2 ———[/size][size=12px]试样在[/size][size=12px]450 nm [/size][size=12px]处反应[/size][size=12px]3 min [/size][size=12px]时的吸光度[/size][size=12px] [/size][size=12px]m ———用于分析的试样制备溶液中的溶菌酶质量, 单位为毫克(mg) [/size][size=12px]2 ———获得1 min 和3 min 吸光度读数所用的时间, 单位为分钟(min) [/size][size=12px]0.001———由单位溶菌酶每分钟引起的吸光度降低的值。[/size][size=12px]试验结果以平行测定结果的算术平均值为准。[/size][size=12px] 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差[/size][size=12px]值不大于算术平均值的[/size][size=12px]10%。[/size][size=12px]最终对于溶菌酶的检测要求罗列如下:[/size][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/08/202108081546089787_7027_1608728_3.png[/img][align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/08/202108081546090379_7253_1608728_3.png[/img][/align][align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/08/202108081546091326_4621_1608728_3.png[/img][/align][size=12px]注:本标准适用于以鸡蛋清为原料[/size][size=12px], 经提取、精制等工艺制得的食品添加剂溶菌酶。[/size][size=12px]溶菌酶作为一种天然球状蛋白质,[/size][size=12px] 能促进营养物质被人[/size][size=12px]体消化吸收,[/size][size=12px] 对人体无毒性, 也不会在体内残留, 是一种安[/size][size=12px]全性很高的食品保鲜剂、[/size][size=12px] 营养保健品和药品。 由于每一类型[/size][size=12px]的溶菌酶都有其最适的作用条件,[/size][size=12px] 而且底物特异性强, 因[/size][size=12px]此,[/size][size=12px] 在应用溶菌酶时, 必需注意以下几个事项: ①充分掌握[/size][size=12px]溶菌酶的酶学特性,[/size][size=12px] 掌握食品中的营养成分、 pH 值、 食盐[/size][size=12px]浓度等影响溶菌酶效果的因素以及造成某种食品腐败的主要微生物群体,[/size][size=12px] 采用适当的添加量和添加方法才能收到应有的[/size][size=12px]防腐效果。[/size][size=12px] ②为了有效的发挥溶菌酶作用效力, 可以考虑与[/size][size=12px]其它物质配伍使用。[/size][size=12px] 如将溶菌酶与甘氨酸混合使用, 其防腐[/size][size=12px]效果则远远高于单独使用溶菌酶。[/size][size=12px] 因为甘氨酸含量达到一定[/size][size=12px]程度时,[/size][size=12px] 能抑制微生物细胞壁的合成, 这种作用对革兰氏阳[/size][size=12px]性菌和阴性菌均有效,[/size][size=12px] 从而增了溶菌酶效力的发挥。 也可[/size][size=12px]以考虑与植酸、[/size][size=12px] 聚合磷酸盐等配伍使用, 以增强溶菌酶革兰[/size][size=12px]氏阴性细菌的抑菌作用。[/size][size=12px] 不管与哪种物质配伍使用, 使用之[/size][size=12px]前都要进行小试。[/size][size=12px]参考文献:[/size][font='宋体'][size=14px][1] [/size][/font][font='宋体'][size=12px]GB 1886.257-2016,食品安全国家标准 食品添加剂 溶菌酶[s].[/s][/size][/font][font='宋体'][size=14px][2] [/size][/font][font='宋体'][size=12px]范林林[/size][/font][font='宋体'][size=12px], 林楠, 冯叙桥,等. 溶菌酶及其在食品工业中的应用[J]. 食品与发酵工业, 2015, 41(003):248-253.[/size][/font][font='宋体'][size=14px][3] [/size][/font][font='宋体'][size=12px]冯棋琴[/size][/font][font='宋体'][size=12px], 周立梅, 高文功,等. 溶菌酶在食品工业中的研究进展[J]. 食品研究与开发, 2015, 000(005):134-136[/size][/font][font='宋体'][size=14px][4] [/size][/font][font='宋体'][size=12px]张新宝[/size][/font][font='宋体'][size=12px], 陈红兵. 溶菌酶的性质及其在食品防腐中的应用[J]. 江西食品工业, 2008(4):42-45[/size][/font]

  • 真假鸡蛋?傻傻分不清楚

    鸡蛋含有丰富的蛋白质,是人们理想的既经济又必不可少的天然食品。近年来,关于“人造鸡蛋”“橡皮蛋”的传言愈演愈烈,导致市民在购买鸡蛋时难免有隐隐的担忧。那么,究竟是否有假鸡蛋的存在呢?真假鸡蛋又如何鉴别呢?市检测院食品检测所专家称,“假鸡蛋”多由饲养或保存不当产生鸡蛋含有丰富的蛋白质,仅次于母乳,是人们理想的既经济又必不可少的天然食品。据统计,每年我国人均鸡蛋消耗量超过100个。但近年来,关于“人造鸡蛋”“橡皮蛋”的传言愈演愈烈,导致市民在购买鸡蛋时难免有隐隐的担忧。那么,究竟是否有假鸡蛋的存在呢?真假鸡蛋又如何鉴别呢?专家检测并未发现人造鸡蛋网络上有传言称,人造鸡蛋使用碳酸钙制造外壳,用海藻酸钠和明胶伪造蛋清。一颗人造鸡蛋的成本仅为0.1元,长期食用会造成白血病、孕妇难产、老年痴呆症等严重后果。而橡皮蛋则指蛋黄非常有弹性、用双指用力挤压仍不裂开的鸡蛋。有网友称,把它往地板一扔,如橡皮球一样蹦起半米多高。针对这些传言,深圳市计量质量检测研究院食品检测所(以下简称“食品检测所”)近年来对此进行了深入研究,并组织检测人员在深圳的市场里,随机购买了80个鸡蛋样品进行检测,未出现数据异常样品。同时,检测人员对鸡蛋样品的构造进行了观察。80个鸡蛋样品均具有蛋壳、蛋壳膜、蛋白、蛋黄、系带和胚盘的典型结构,未发现疑似人造鸡蛋的情况。没有检测出人造鸡蛋,并不代表人造鸡蛋就不存在。那到底有没有人造鸡蛋呢?对此,专家没有给出绝对的答案,只是表示人造鸡蛋成本会非常高,如果有人想以制售人造鸡蛋来谋利可能性不大。专家解释称,鸡蛋中天然含有活性较高的溶菌酶,所以溶菌酶活性是辨别鸡蛋真伪的重要指标之一。虽然溶菌酶是一种食品添加剂,但作为添加剂使用的溶菌酶较为昂贵,一公斤大约需要2000元,因此,如果人造鸡蛋想靠添加溶菌酶蒙混过关,在成本上是行不通的。那为何会屡屡出现“假鸡蛋”的传言呢?食品检测所的专家说,传言中所谓的假鸡蛋,大多是由于饲养或保存不当产生的。就拿“橡皮蛋”来说,由于饲料中使用了棉籽饼,若棉酚含量过高,就会导致“橡皮蛋”产生,其次也有可能是储存温度过低,导致水分流失。三种方法鉴定真假鸡蛋据专家介绍,深圳食品检测所成功研发了三种鉴定真假鸡蛋的方法。方法一:蛋白质组学鉴定蛋白质是生命的重要组成部分,每个生命机体包含有成千上万种蛋白质。专家说,把这些蛋白质使用双向电泳技术呈现出来,就构成了这个生命的蛋白质指纹图谱,和这个物种一一对应,犹如时下流行的“二维码”。食品检测所的检测人员通过广泛收集不同产地、不同品种的鸡蛋样品,绘制了鸡蛋的蛋白质组鉴别模型,即鸡蛋的生命“二维码”。专家介绍道,若市民对购买的鸡蛋真假存有怀疑,可将鸡蛋送至食品检测所进行检验。市面上销售的鸡蛋均可和该生命“二维码”进行比对,从而判定真伪。方法二:卵白蛋白定量据了解,卵白蛋白是鸡蛋中主要的营养物质,内含人体生长发育必需的氨基酸,且种类齐全、数量充足。卵白蛋白是鸡蛋中最主要的蛋白质,约占鸡蛋蛋白质含量的55%,鸡蛋去壳全重的2.7%(27mg/g)以上。据专家透露,鉴于卵白蛋白在蛋类中的特征性,而且按照传言中的说法,人造鸡蛋中是不含有卵白蛋白的,因此食品检测所研发了卵白蛋白的定量方法,可以快速鉴定鸡蛋的真伪。方法三:溶菌酶活性测定鸡蛋中天然含有活性较高的溶菌酶,所以溶菌酶活性也是辨别鸡蛋真伪的重要指标之一。据悉,食品检测所建立了溶菌酶活性测定方法,并已获批国家标准,可判定鸡蛋样品是否为人造。专家支招:如何挑选鲜鸡蛋目前市场上鸡蛋的品种众多,如何挑选才能安全放心地食用呢?对此,深圳市计量质量检测研究院高级工程师张世伟建议,市民要到正规的超市和店铺去购买鸡蛋。此外,真正的鸡蛋应具有包括卵壳、卵壳膜、卵白(即蛋清)卵黄(即蛋黄)、胚胎等典型生物学结构。因此,市民可将完整的鸡蛋对着光源照射,能看到鸡蛋一头有气室,将鸡蛋打破后,可以看到蛋黄、蛋白和白色的系带,同时可闻到淡淡的腥味,无臭味。若具备以上特点的,就可判定为真鸡蛋。很多市民认为,比起普通鸡蛋,土鸡蛋的营养价值更高。因此,市面上比普通鸡蛋价格高一到两倍的土鸡蛋颇受市民欢迎。而研究结果表明,土鸡蛋和普通鸡蛋的营养价值相似,其风味主要是由于土鸡蛋含有更高的脂类所致。除此以外,挑选鸡蛋应选择外壳完整无裂缝的。鸡蛋在运输、储存及包装等过程中,由于震动、挤压等原因,有的鸡蛋会造成裂缝、裂纹,容易被细菌侵入,若放置时间较长就不宜食用。专家建议,食用鸡蛋应完全煮熟以后再吃。鸡蛋的保质期受气温、湿度的影响较大。通常来说,温度在2~5℃时,鸡蛋的保质期为40~60天;在15℃以下,保质期为30天左右;当夏季温度高于25℃时,鲜鸡蛋保质期为7~10天。专家建议,市民购买鸡蛋后应尽快食用并冷藏保存,保障鲜鸡蛋的安全和营养。(来源:深圳晚报)

  • 引用 在发酵工艺角度看蛋白表达

    本文引用自发酵《在发酵工艺角度看蛋白表达》引用发酵 的 在发酵工艺角度看蛋白表达在分子生物学角度讲,找到或合成外源蛋白基因,构建质粒,并导入细胞以表达具有生物活性的折叠正确的蛋白,是一种成熟的常规技术。目前,包括酶,抗原,抗体,激素,其他小分子调节蛋白在内的很多蛋白,都已经用这种技术实现了工业化生产。在具体的工艺选择上,历史沿袭习惯和表达体系的选择,对工艺稳定性,成本,有巨大的影响。 目前,常用的蛋白表达系,有3个类别:1,大肠杆菌表达系。大肠杆菌的遗传背景十分清楚,代谢相对简单,发酵副产物少,在不是很严格的情况下,是表达蛋白的首选。通过按经验选择合适的菌株及合适的质粒,既可以以包涵体的形式得到大量的目标蛋白,又可以在细胞外得到可溶性蛋白,是常见的一种表达系。2,酵母菌表达系。用酵母做表达系,理由之一,也是遗传背景清楚,而且,当蛋白分子量过小,不能形成包涵体时,或蛋白的二硫键过多,不易体外复性时,酵母菌就成了合适的选择。另外,酵母对蛋白也会有一个简单的修饰,近似于高等动物的蛋白糖基化过程。这样,在合成在体液中发挥作用的蛋白,而且,又不能(技术水平限制)用动物细胞时,就可以退而求其次的选用酵母菌表达。一般是用信号肽把蛋白导出细胞,在发酵液中以可溶性蛋白的形式存在。这也是一个常见的表达系。3,动物(或说,人的)细胞表达系。这种情况,在纯度或毒性方面有较高要求的产品应用。一般国外产品应用较多,国内还没有用动物细胞表达蛋白实现商业化生产的报道。由于技术限制,国内工业化生产用这个方法目前还有较大难度。这3种表达系,各自有自己的优缺点。首先,在潜在的毒性影像方面讲,由于和真核生物亲缘关系太远,大肠杆菌就最不合适。其次是酵母菌。而在表达量和代谢控制成本上来讲,酵母菌和动物细胞又是差强人意的。现在,很多蛋白习惯性的选用酵母菌做表达系,就是因为早期提取蛋白技术低下,而动物细胞培养技术又不过关的原因所致。目前,虽然提取工艺提高了,但作为蛋白这种高附加值产品,运作成本集中在销售而不是生产,所以,降低生产成本的诉求很低。站在降低开发难度的角度讲,一方面,质粒构建和质粒与菌株的匹配方面依赖大量经验,另一方面,发酵工艺策略选择与发酵工艺优化又需要很大的投入,所以,技术开发部门沿用自己熟悉的,已经积累了大量经验的表达系,是合理的。不过,随着分子技术进一步的发展,分子技术进入低附加值的产品领域又是必然的,降低生产成本就变的越来越必要了。 大肠杆菌表达系有两种得到外源蛋白的方法:1,缓慢的表达,得到可溶性蛋白,这种方法产量和酵母菌表达类似,与酵母菌比,不具有明显的优势,一般是有做大肠杆菌传统的研究机构生产小分子蛋白的一种沿袭性做法。2,使用T7启动子表达蛋白,这样,高速的蛋白表达速率使蛋白来不及折叠,在细胞内形成非水溶性的包涵体。最后目标蛋白可以达到总细胞质量的15%-25%,这样,就为降低成本提供了一种可能。不过,在使用T7启动子表达时,也存在两个难点:1,蛋白的复性技术,如果形成可溶性蛋白,那利用(使用分子技术加载在目标蛋白上)信号肽,只要过一遍柱子就能分离得到纯度非常高的,具有生物活性的产品,而形成包涵体,对提取,复性就有较高的要求,特别是二硫键的存在,会对复性产生很大的影响。在目前国内和国际流行技术看,并不是所有的蛋白都能在预定成本下复性的。2,任何情况下,高产都是代谢网络互相依赖与作用的结果。在如此高的表达量下,甚至细胞的形态都已经发生很大变化,正常代谢受到严重干扰,以至于放大时,摇瓶工艺对发酵工艺几乎没有任何参考价值。发酵工艺策略的选择将直接依赖于工程人员在生化,生理水平对菌株的理解,而匮乏可资参考的数据资料。发酵工艺的优化要离开摇瓶经验在发酵罐上逐步进行,这样,整个发酵工艺的确立就需要比想象中要大得多的人员与时间的投入。另外,再说一下糖基化的问题。在动物细胞内合成的折叠正确的蛋白,在分泌入体液前会有一个糖基化的过程,加上一个糖链就不会很快被蛋白酶当做折叠错误的蛋白水解掉。但是以微生物为表达系表达的蛋白,不具有动物细胞的修饰过程,用大肠杆菌表达的目标蛋白,很快会在血液中被降解。解决或回避这个问题,有两种方法:1,用动物细胞表达,一般,是用癌化的人类细胞。由于动物细胞培养技术要求过高,在国外比较昂贵的医药中有应用,国内不常见。2,由于酵母菌也有一个对蛋白的粗略的修饰过程,可以用酵母菌表达目标蛋白。这个技术,国内国外都在用,可以是一个权宜之计。主要难点集中在对合适菌株的分子水平的改造,以达到尽可能接近满意的修饰效果。这样,就可以在不同目标蛋白上表达系和发酵工艺上做出选择。如果是小分子,无糖基化修饰或不在体液中发挥作用的蛋白,可以选择大肠杆菌和酵母菌表达系,得到可溶性蛋白,然后提取。如果分子量合适,并对生产成本有诉求,而且可以比较方便的复性,则选用大肠杆菌表达系,得到包涵体,然后复性。如果是需要在体液中发挥活性并有糖基化要求的 蛋白,则选用经过分子生物学改造的酵母菌表达系。当然,并不是任何一个实验室都同时拥有或擅长所有的方向的。而难点,往往集中在以下3个方面:1,大肠杆菌蛋白包涵体复性。2,糖基化修饰。3,发酵工艺(工程菌株的工业水平)的确定。做工程一般是理科实验室的弱项,而工科实验室做基础又很少,在把工科和理科结合方面,我们实验室还是有经验和成功先例的。下面,以溶菌酶为例,阐述一下蛋白表达系的选择和工艺的确定。溶菌酶是一类具有种属差异的非特异性免疫物质,在动物界中普遍存在,种类繁多,其实,在植物和微生物中也有发现。但研究最多的还是动物。开发兽用溶菌酶,主要是想作为抗生素的替代物,作为添加剂使用。因此是一个低附加值的产品。下面一切的工作,都会围绕“兽用”和“低附加值”展开。首先,比较几种常见和认为有效的溶菌酶,杀菌效果最好的是人的溶菌酶,但考虑到潜在的危险(具有对人溶菌酶产生抗性,并使抗性基因扩散),舍尔求其次,用了鸟类蛋清溶菌酶,作为表达对象。然后,在得到溶菌酶蛋白的一级结构后,对此进行了分析。此蛋白不会用于体液内,故没有糖链修饰的问题。分子量不是很大,但也不太小,130左右的氨基酸构成,足以形成包涵体,这就为用大肠杆菌表达系高效表达提供了可能。讨厌的是有4个二硫键,其中有两个在结构复杂区域,折叠正确有一定的困难。但是,如果用酵母菌做,可能没法解决成本问题,即便优化工艺现在过去了,也不会是最终版本----肯定会有人用大肠杆菌做。所以,结论就是必须知难而进,拿下复性工艺。另外,由于是低附加值产品,发酵吨位就不能太小。以往分子生物学流行的50升,100升小罐发酵,肯定是不行的。发酵罐的放大,除了溶氧,剪切力发生变化,更重要的是搅拌线速度改变了胞外酶以及包括细胞本身的代谢方式和速度。在胞内体现就是氧化还原电势的改变,这在工艺上会带来很多麻烦。虽然说,一般是放大后产量往往提高,但放大过程中,小罐的经验就不能照搬了。同时,也因为是低附加值产品,发酵过程中诸如质粒丢失等稳定性要求,就很高了,应为只有稳定,才能控制成本。这样,工艺就成了第二个难点。明白这些之后,按照大肠杆菌的喜好,合成了溶菌酶的基因。然后构建质粒,导入细胞。在摇瓶水平表达溶菌酶。在筛选复性条件的同时,就同时在发酵罐水平对工艺稳定性进行了优化。首先,为了进一步提高质粒稳定性,对初始培养基进行了重新设计。并改动发酵工艺策略,由于是胞内产物,我们应用高细胞密度发酵控制法延长限制性生长时间(不能用经典发酵的延长对数期生长时间的办法,对工程菌不适合,会造成质粒丢失,代谢紊乱等一系列问题),提高细胞量,并改变了诱导时机,得到了稳定的高产,具体数据比较枯燥,就不在此展开了。提取方面,经过不懈的努力,我们也掌握了比较成功的复性条件(具体由另外人员负责,也不做详细介绍了)。这样,工艺才基本拼凑好。进一步优化,在试生产多次重复时在进行。以上,是外源蛋白表达的粗略的技术和工艺的过程。

  • 高速逆流色谱双水相体系分离蛋白质

    色谱CHINESE JOURNAL OF CHROMATOGRAPHY2005 Vol.23 No.1 P.12-17 高速逆流色谱双水相体系分离蛋白质Separation of Proteins in Aqueous Two-Phase Systems with High-Speed Counter-Current Chromatography郅文波  邓秋云  宋江楠  顾铭  欧阳藩  摘 要:利用多分离柱高速逆流色谱仪,研究了聚乙二醇1000(PEG1000)-磷酸盐双水相体系的固定相保留率及该体系对蛋白质混合物和鸡蛋清样品的分离.以14.0%PEG1000-16.0%磷酸盐体系的上相为固定相,在流速0.6mL/min和转速900 r/min的条件下,固定相的保留率达到33.3%.在pH 9.2的PEG1000-磷酸盐双水相体系中,细胞色素C、溶菌酶和血红蛋白的分配系数差异最大,采用该pH值的14.0%PEG1000-16.0%磷酸钾盐双水相体系,在流速1.0 mL/min和转速850 r/min的条件下,成功地分离了这3种蛋白质的混合物.鸡蛋清中的主要蛋白质成分--卵转铁蛋白、卵白蛋白和溶菌酶在pH 9.2的15.0%PEG1000-17.0%磷酸钾盐体系中也具有最大的分配系数差异.采用该体系,在流速1.0 mL/min和转速850 r/min的条件下,成功地分离了鸡蛋清样品,得到的卵白蛋白、溶菌酶和卵转铁蛋白的电泳纯度分别为100%,100%和60%,收率均大于90%.关键词:高速逆流色谱 双水相体系 蛋白质 分离纯化分类号:O658  文献标识码:A文章编号:1000-8713(2005)01-0012-06 作者简介:郅文波,男,博士研究生,E-mail:zhiwenbo@163.com.通讯联系人:欧阳藩,男,教授,Tel:(010)82627061,Fax:(010)62561822,E-mail:fouyang@home.ipe.ac.cn. 作者单位:郅文波(中国科学院过程工程研究所生化工程国家重点实验室,北京,100080)      邓秋云(上海同田生化技术有限公司,上海,200122)      宋江楠(中国科学院过程工程研究所生化工程国家重点实验室,北京,100080)      顾铭(中国科学院过程工程研究所生化工程国家重点实验室,北京,100080)      欧阳藩(中国科学院过程工程研究所生化工程国家重点实验室,北京,100080)  [img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=23113]高速逆流色谱双水相体系分离蛋白质[/url]

  • 【转帖】NusA技术:显著增强大肠杆菌表达可溶、活性蛋白

    70kDa)中的七个得到了可溶性表达,而其它的融合标签(GST,MBP和hexahistidine)系统则只得到了四个可溶性表达的蛋白。表1. 用大量的目标蛋白评估NusA标签对提高融合蛋白可溶性的作用参考文献a目的蛋白数目目的插入序列种属目标蛋白大小范围NusA融合蛋白可溶性比例Shih等(2002)40酵母,哺乳动物,植物,昆虫9-10060Korf等(2005)75人6-12760bKohl等(2008)96人1-11844ca. Korf等和Kohl等的研究中包含了六组氨酸标签。b. 可溶性蛋白量大于等于10%即认为该融合蛋白可溶。c. 纯化后的融合蛋白如果在SDS-PAGE后考染在合适位置出现条带即认为可溶。Korf等的还发现对于定位于真核细胞细胞器,质膜或者骨架的蛋白,相对于其它标签系统来讲,NusA标签是最好的可溶性表达的选择。Kohl等(2008)也发现只要在20-25℃诱导表达,NusA标签能够大大提高难表达的蛋白比如膜蛋白的可溶性。与Korf等的研究结果一致,Kohl等也发现25℃诱导表达比30℃或37℃诱导表达可以纯化得到更多的NusA融合蛋白。切除NusA标签获得后保持活性且正确折叠的蛋白表2总结了16个采用NusA标签成功获得可溶性蛋白,在切除标签后这些蛋白仍有正确折叠结构和活性。大部分这种研究是是关于分子量小于或接近20kDa的目标蛋白。纯化后的目标蛋白产量范围在1.5-100mg/L。趋化因子和细胞因子可以得到高达30-100mg/L的产量。其它关于这些蛋白表达和纯化的有参考价值信息包括:■ 植物磷酸烯醇式丙酮酸—羧化酶激酶(Ermolova 2003)——目标蛋白切除标签后用BDA(蓝色葡聚糖)亲和层析树脂纯化。纯化后蛋白的催化活性比未切除标签的融合蛋白高50倍。■ Xklp3a,Tep3Ag和E8R(De Marco 2004)——用蛋白酶切割后,His-融合的TEV和NusA被Ni2+离子亲和色谱选择性去除。与Ni2+亲和结合的标签被紧密地结合在树脂上,在流出液中则可以得到纯化的目的蛋白。所有这三种蛋白在纯化后都正确折叠且均一分散在溶液中。纯化的膜结合蛋白E8R牛痘病毒蛋白在Tris缓冲液中除去NusA后出现了沉淀,然而加入0.02%的月桂酰基麦芽糖苷和150mM的氯化钠后,蛋白又重新变得可溶。■ 环麦芽糖糊精酶(Turner 2005)——这个蛋白属于α-淀粉酶家族。这个家族的蛋白通常在大肠杆菌中很难以活性形式表达出来。将其与肠激酶混合孵育24小时以上会使其活性逐渐增强,直到达到未经肠激酶处理过的融合蛋白的2倍以上,这也说明标签的存在降低了该酶的活性。可以用固化了Cu2+的亲和层析柱去除切除的融合标签。■ 八种人趋化因子(Magis-trelli 2005)——所有的蛋白都在OrigamiTM B菌株中表达提高它们在胞质中的二硫键形成率。在趋化因子编码序列的C端引入了AviTMTag(亲和素)生物素化序列。切割后的细胞趋化因子可以用单体的亲和素树脂亲和层析与切割下的NusA标签和蛋白酶混合物分离开。所有切割纯化后的蛋白在细胞趋化实验中都显示了活性,而没有一个融合蛋白有这样的活性。■ 蚯蚓血红蛋白(Karlsen 2005)——酶切后,用分子筛分离纯化蚯蚓血红蛋白,纯化后的蛋白通过圆二色谱检测得到的α-螺旋结构与模型预期结果一致,且纯化后的蛋白可以以单体的形式稳定保存。■ 人白介素-29(Li 2006)——用S-蛋白亲和层析比Ni2+亲和层析可以得到更纯的目的蛋白。将融合蛋白N端的NusA/His•Tag®/S•Tag™标签切掉后,用链亲和素琼脂去除生物素标记的凝血酶。用水疱性口膜炎病毒(VSV)处理固定的人羊膜上皮细胞(WISH 细胞)后,通过检测纯化的IL-29对细胞的保护效应来检测其抗病毒活性。■ 人干扰素-λ2(Li 2007)——酶切后,用Novagen提供的EKaptureTM琼脂除去重组的肠激酶。先用纯化后的干扰素-λ2处理WISH细胞,24小时后加入VSV病毒,可以观察到干扰素-λ2可以有效地保护细胞免于病毒介导的病变。表2. 切除NusA标签获得后保持活性且正确折叠的蛋白参考文献目的蛋白目的蛋白分子量(kDa)切割用蛋白酶融合蛋白亲和层析固定介质纯化后目的蛋白产量(mg/L)Ermolova等(2003)植物磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶激酶32凝血酶Ni2+1.5De Marco等(2004)Xklp3ATep3AgE8R15NRa32bTEV酶TEV酶TEV酶Ni2+5.02.54.0Turner等(2005)环麦芽糖糊精酶69肠激酶Cu2+1.6Magistrelli等(2005)八种人趋化因子8-21Xa因子Ni2+30-100Karlsen等(2005)蚯蚓血红蛋白15TEV酶Ni2+NRaLi和He(2006)人白介素-2920凝血酶S-蛋白60Li和Huang(2007)人干扰素-λ220肠激酶Ni2+65a. 未报道b. 根据NCBI报道预测的全长蛋白分子量与NusA标签融合且具有活性的蛋白 与这些切除NusA标签后保持活性且正确折叠的蛋白不同,还有很多报道指出目的蛋白在“NusA-目的蛋白”的融合形式时具有很好的活性。比如单链(ScFv)催化活性抗体14D9(Zheng 2003),来自Aequorea victoria的绿色荧光蛋白(Nallamsetty 2006),人二氢叶酸还原酶(Nallamsetty 2006),来自Ensis directus蛏子的精氨酸酶激酶(Compaan 2003),来自B. thuringiensis的修饰δ-内毒素(Kumar 2005),人BCMA跨膜受体(Guan 2006),植物α-双加氧酶1(Liu 2006),以及来自Plasmodium falciparum的b-ketoacyl-acyl载体蛋白合成酶(Lack 2006)等,反映了各种不同背景的蛋白都显示出了与NusA标签融合后的活性。NusA标签提高蛋白可溶性的可能机制 Houry(1999)等揭示NusA蛋白是分子伴侣GroEL在体内的必须底物。而GroEL与其共作用因子GroES是大肠杆菌唯一的在所有生长条件下必需的分子伴侣系统。Douette等(2005)研究了融合蛋白NusA-UCP1(uncoupling protein 1)的可溶产量。UCP1是一种线粒体膜蛋白。这些作者发现16℃培养时,当GroEL共过表达的情况下,融合蛋白的可溶性有更大的提高。这个结果也表明NusA与分子伴侣途径相作用,从而阻止参与蛋白的聚集。总结 已有充分的证据证明NusA标签系统能显著提高多种不同来源蛋白的可溶性表达,而这些蛋白在单独表达时往往形成不可溶的包涵体。在一些研究报告中,用蛋白酶切除NusA标签能使目的蛋白仍保持正确折叠和生物学活性;相反,在另外许多报道中也指出当目的蛋白与NusA融合而非切除时,融合蛋白也同样具有活性。NusA标签系统的成功至少部分地是由于其与大肠杆菌分子伴侣系统相互作用的结果。

  • 建议不要生吃鸡蛋

    向您建议不要生吃鸡蛋。生鸡蛋除了容易携带沙门氏菌等致病菌,还有抗胰蛋白酶,可以抑制蛋白质的分解,影响肠道对蛋白质的吸收。

  • 【资料】乳清蛋白的介绍

    乳清蛋白定义:一种存在于几乎所有哺乳动物乳汁中的蛋白质,由123个氨基酸残基组成,其氨基酸序列和立体结构均与溶菌酶同源,是乳糖合酶的一个亚基。 所属学科:生物化学与分子生物学(一级学科);氨基酸、多肽与蛋白质(二级学科) 乳清蛋白主要成分  β-乳球蛋白   具备最佳的氨基酸比例,支链氨基酸含量极高,对促进蛋白质合成和减少蛋白质分解起着重要的作用,有助于健身爱好者塑造优美体型。   α-乳白蛋白   是必需氨基酸和支链氨基酸的极好来源,也是唯一能与金属元素和钙元素结合的乳清蛋白成分。最近的研究更发现,它可能具有抗癌功能。此外乳白蛋白在氨基酸比例结构方面,以及在功能特性上与人乳都非常相似的。临床研究显示,富含α-乳白蛋白的婴儿配方奶粉是安全的。   免疫球蛋白   具有免疫活性,能够完整地进入近端小肠,起到保护小肠粘膜的功能。   乳铁蛋白   抗氧化,消灭或抑制细菌,促进正常细胞生长,提高免疫力。   作为乳清蛋白(优恩乳清蛋白)特有的一种蛋白质组分,乳铁蛋白可以为运动员带来几种重要的益处。牛奶乳铁蛋白在成年人体内是以完整蛋白质的形式被吸收的,其健康益处包括潜在抗菌活性和抗病毒特性,防止致病微生物在肠道内生长,刺激免疫系统和调节组织损伤造成的炎症。乳铁蛋白在铁和骨骼代谢方面的重要作用是运动员尤为关心的。   在乳清中发现的乳铁蛋白被证实对骨骼代谢也具有直接的益处。在细胞培养研究中,乳铁蛋白具有促进造骨细胞和软骨细胞增殖的功能,并能增加其生理含量,这一效果超过其他骨骼生长因子,如IGF-1和TGFb。乳铁蛋白在骨骼代谢中具有合成的作用对于骨骼健康和预防骨质疏松症具有重要意义。   并且,肌体内的氧气输送离不开铁。乳铁蛋白(铁传递蛋白的一种)的一个重要功能是使血液中的细胞结合铁。乳铁蛋白阻隔并溶解铁,从而控制肠道代谢中的可利用铁。因此,乳铁蛋白在维持血红细胞、血色素和氧气运输的健康调节方面也担当重要作用。

  • 鸡蛋的认知误区

    鸡蛋的认知误区

    [align=center][b][img=,690,460]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/08/201808161614292325_3650_676_3.png!w690x460.jpg[/img][/b][/align][b]误区一 鸡蛋怎么吃营养都一样[/b]鸡蛋吃法多种多样,就营养的吸收和消化率来讲,煮蛋为100%,嫩炸为98%,炒蛋为97%,老炸为81. 1%,开水、牛奶冲蛋为92. 5%,生吃为30%~50%。可见,煮鸡蛋是最佳的吃法,但要注意细嚼慢咽,否则会影响吸收和消化。[b]误区二 煮鸡蛋的时间越长越好[/b]鸡蛋煮的时间过长,蛋黄中的亚铁离子与蛋白中的硫离子化合生成难溶的硫化亚铁,很难被吸收。油煎鸡蛋过老,鸡蛋清所含的高分子蛋白质会变成低分子氨基酸,这种氨基酸在高温下常可形成对人体健康不利的化学物质。煮鸡蛋最好是凉水下锅,水开了再煮5分钟左右即可。这时鸡蛋稍带溏心状,营养成分最利于人体吸收。[b]误区三 土鸡蛋比普通鸡蛋营养好[/b]人们普遍认为土鸡蛋比普通鸡蛋营养价值更高,但是权威检测数据显示,饲料鸡蛋与土鸡蛋的营养价值相差不大,之所以人们认为土鸡蛋更好吃更有营养价值,是因为土鸡蛋中的脂肪含量更高,吃起来有一种油油的,口感更香更好吃,符合人们的口味。[b]误区四 蛋黄颜色越黄营养越好[/b]正常情况下,蛋黄颜色较深的鸡蛋营养稍好一些,蛋黄的颜色与其含有各种色素有关,其中一些色素如胡萝卜素等的确具有营养价值。不过,现有的“技术”很容易让蛋黄颜色加深,不仅与营养无关,还会带来安全隐患。[b]误区五 蛋壳颜色越深,营养价值越高[/b]鸡蛋壳的颜色与营养价值的关系并不大,分析表明,鸡蛋的营养价值高低主要取决于饲料的营养结构与鸡的摄食情况,与蛋壳的颜色无多大关系。从感官上看,蛋清越浓稠,表明蛋白质含量越高,蛋白的品质越好。[align=center][img=,690,605]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/08/201808161614525095_4831_676_3.jpg!w690x605.jpg[/img][/align][b]误区六 生鸡蛋比熟鸡蛋更有营养[/b]有些人觉得,食物一经煮熟,就会流失其营养价值。认为生吃鸡蛋可以获取比熟鸡蛋更多的营养价值。其实不然,生吃鸡蛋很可能会把鸡蛋带有的细菌(例如大肠杆菌)吃进肚子,造成肠胃不适并引起腹泻,而且生鸡蛋中的蛋清里有一种抗胰蛋白酶的物质,会阻碍人体对于蛋白质的消化和吸收,浪费营养物质。[b]误区七 “初生蛋”更有营养[/b]到目前为止,其实没有任何检测结果能够表明,“初生蛋”(母鸡下的头几个蛋)比后来的蛋更有营养,这是典型的商家炒作概念。[b]误区八 产妇要多吃鸡蛋[/b]产妇坐月子时大量吃鸡蛋是我国一个习俗,但吃鸡蛋并非吃的越多越好,吃多了身体不能消化吸收,还会增加肠胃负担,时间长了还容易引起胃病。除了每天吃一两个鸡蛋,产妇还要吃肉类、奶类、豆类、粮食和果蔬,以达到膳食平衡。

  • 【讨论】鸡蛋6种错误吃法

    你知道这么吃鸡蛋是有毒的吗?想不到吧?平时经常吃的东西居然会变成毒药如果你还在用这些错误的方法吃鸡蛋,那么你可要注意了!  鸡蛋是天然食物中,富含大量的维生素和矿物质及有高生物价值的蛋白质。是人类最好的营养来源之一。总的来说,鸡蛋的功效可以概括为,健脑、延年、益智、保护肝脏以及防治动脉硬化等疾病,还有就是预防癌症。但是你知道吗?用错误的方法吃鸡蛋,这么好的营养品就会变成毒品!下面的几种方法就是吃鸡蛋的错误方法,比对一下,看看你平时有没有用正确的方法吃鸡蛋!不对的话,要马上更正过来哦!1.生吃  有些人觉得,食物一经煮熟,就会流失其营养价值。所以很多人喜欢生吃蔬菜、生吃海鲜。同样,有人认为生吃鸡蛋可以获取比熟鸡蛋更多的营养价值。但是,其实不然,生吃鸡蛋很可能会把鸡蛋中含有的细菌(例如大肠杆菌)吃进肚子去,造成肠胃不适并引起腹泻。并且,值得一说的是,鸡蛋的蛋白含有抗生物素蛋白,需要高温加热破坏,否则会影响食物中生物素的吸收,使身体出现食欲不振、全身无力、肌肉疼痛、皮肤发炎、脱眉等症状。2.隔夜  鸡蛋其实是可以煮熟了之 后 ,隔天再重新加热再吃的。但是,半生熟的鸡蛋,在隔夜了之后吃却不行!鸡蛋如果没有完全熟透,在保存不当的情形下容易滋生细菌,如造成肠胃不适、胀气 等情形。  同时,有的人认为鸡蛋煮越久越好,这也是错误的。因为鸡蛋煮的时间过长,蛋黄中的亚铁离子与蛋白中的硫离子化合生成难溶的硫化亚铁,很难被吸收。油煎鸡蛋过老,边缘会被烤焦,鸡蛋清所含的高分子蛋白质会变成低分子氨基酸,这种氨基酸在高温下常可形成对人体健康不利的化学物质。

  • 关于鸡蛋的8大疑惑 如何挑选鸡蛋?

    鸡蛋是我们日常生活中经常食用的食物之一,在生活中我们常常可以看到关于鸡蛋的疑惑:诸如,鸡蛋要怎么挑选、鸡蛋可以存放多久等。关于鸡蛋的这些疑惑你都有吗?  如何识别变质鸡蛋?  买鸡蛋最怕买到变质的,如何识别变质的鸡蛋呢?不妨试试这三招教:一掂,用手掂掂其轻重,新鲜鸡蛋通常较重。二摇,在耳边摇摇,由于新鲜鸡蛋较实,摇晃起来没响声。三看,鸡蛋壳表面粗糙的通常较新鲜。变质蛋接触空气时间久,蛋壳较光滑。  蛋黄颜色越深越好?  蛋黄的颜色是取决于鸡所吃的食物。户外散养的鸡吃的食物是五花八门,有蔬菜、虫子、杂粮、野草等,再加上气候、水源和土壤的差异,蛋黄的颜色也就有很大区别。  因此,蛋黄颜色越深并不代表鸡蛋营养越高。  鸡蛋可以在冰箱里放多长时间?  鸡蛋能保鲜多久?成都市第三医院营养科临床营养师余婉婷告诉记者,在当下的季节、温度中,鸡蛋在冰箱中最多能保持新鲜15天,若不放冰箱,至多10天。  蛋壳上有细小的孔隙分布在表面,当鸡蛋转为次新鲜时,细菌逐渐侵入,到了陈鸡蛋阶段,通过蛋壳孔隙进入鸡蛋的细菌就已超标,放置更久甚至会长霉、发出臭味。变质鸡蛋可能含沙门氏菌等细菌。余医生称,误食后易引起胃肠道不良反应,腹泻、腹胀、呕吐等等。  蛋壳颜色越深越有营养?  鸡蛋壳的颜色实际上是受基因控制的,这是自然界的物种长期进化过程中,所产生的个体遗传结构的差异。鸡蛋壳的颜色是受到母鸡子宫内腺体分泌的棕色素影响,当色素沉积在蛋壳外面的釉质层,鸡蛋壳就颜色偏深,呈现出红色。  其实无论是白色羽毛的母鸡和别的颜色的母鸡,产出的鸡蛋在营养成分上是没有区别的,红色的鸡蛋并不会比白色鸡蛋的营养价值高。  蛋黄胆固醇高一点都不能吃吗?  鸡蛋清的主要营养成分为蛋白质、维生素和矿物质。相比而言,蛋黄的营养其实更为丰富,含有人体所需要的多种脂溶性维生素、蛋白质、不饱和脂肪酸,还有磷,铁等元素。  所以,普通人适量吃一些鸡蛋黄有益无害。儿童吃鸡蛋黄还能促进大脑、骨骼的发育,有利于儿童的成长。  但对于高血压、高血脂和冠心病人,鸡蛋黄确实不宜多吃,但也没必要完全不吃,建议每天吃半个蛋黄。  鸡蛋煮多久比较合适?  鸡蛋煮的时间太短,蛋清还没凝固,其中的沙门氏菌没有完全杀灭,鸡蛋中的抗营养物质(卵抑制剂、生物素结合蛋白)也未完全去除,根本不能完整的剥开蛋皮食用。  煮的时间适中,蛋黄微微凝固,细菌被完全杀死,抗营养物质去除。另一方面,鸡蛋中的不饱和脂肪酸、胆固醇、维生素E未被氧化或氧化程度最小。蛋白质变性刚刚好,蛋清、蛋黄都很软嫩。  如果煮的时间延长,鸡蛋中的维生素E、脂肪、胆固醇被氧化,煮的时间越长,鸡蛋中宝贵的ω-3族不饱和脂肪酸氧化程度越高。如果继续煮,不仅鸡蛋中的营养成分进一步氧化损失,蛋黄表面也会产生对健康不利的黑膜。  建议将鸡蛋放入冷水中,煮至水沸的状态下再保持3-5分钟为宜。  鸡蛋煎着吃更有营养?  煎鸡蛋时,鸡蛋中的脂肪、蛋白质以及其他维生素都会被油的高温所破坏掉。如果鸡蛋煎得过老,蛋白可能被烤焦,在高温下会形成有毒物质。另外,鸡蛋煎着吃,可能使人摄入超量的油脂,引起血脂增高。因此,吃鸡蛋时,最好采用蒸、煮的做法,这样才能保证鸡蛋的营养不被过多的破坏。  糖心蛋营养会更好吗? 很多人在煮鸡蛋或煎鸡蛋时,会做成糖心蛋或是只单面煎蛋,并认为这种鸡蛋不仅吃起来口感鲜嫩,而且鸡蛋的营养不会被破坏。  其实,这种做法对健康的伤害是很大的。虽然鸡蛋看似有蛋壳的包裹会很干净,但实际上蛋壳上有许多细细的小孔,各种细菌都能通过这些小孔进入到鸡蛋内部。研究表明,没有熟透的鸡蛋,其中的细菌无法被完全杀死,而这些细菌中可能还有使人致病的致病菌。如果人吃了病原菌未被完全杀死的鸡蛋,就可能会出现恶心、发热、上吐下泻等现象。因此,在吃鸡蛋时,最好让鸡蛋完全熟透。

  • 【分享】生吃鸡蛋有害健康

    很多人认为越接近自然的东西越有营养,生吃比熟吃更有营养。这种观点有其正确性的一面,也有错误的一面,如鸡蛋,就不宜生吃。其原因在于:  一.吃生鸡蛋易患传染性疾病  因生鸡蛋中有大量的细菌,尤其是病鸡下的蛋,生吃后可出现干呕、腹痛、腹泻、浑身无力等症状。  二.吃生鸡蛋可造成营养成分的大量浪费  (1)生鸡蛋中有抑制胃蛋白酶活性和肠蛋白酶活性的抗胰蛋白酶,使鸡蛋中的大量蛋白质无法被人体消化吸收。不被吸收的蛋白质在体内可产生很多有害物。抗胰蛋白酶受热会失去活性,因此煮熟鸡蛋有利于营养物质的消化吸收。  (2)生鸡蛋中含有一种蛋白,可以和人体生物素发生反应,生成难以被人体消化的物质,导致人体生物素缺失。生物素不足可影响人体对其他营养物质进行消化,引起消化不良和营养物质缺乏。熟鸡蛋中这种蛋白质变性,所以日常生活中最好不食用生鸡蛋。

  • 【讨论】鸡蛋的那些事

    上次看了鸡蛋不能横着放后,对鸡蛋的知识来了兴趣,最近搜了些这方面的知识[b]蛋的营养价值[/b]蛋是人类重要的食品之一,常见的蛋,包括鸡蛋、鸭蛋、鹅蛋、鹌鹑蛋等,它们的营养成分和结构都大致相同,其中以鸡蛋最为普遍.蛋由蛋壳、蛋黄、蛋白和蛋系带等部分所组成,分别具有以下的营养价值:蛋壳蛋壳含有丰富的碳酸钙,非常容易消化吸收,是补充钙质的最佳来源.在正常情况下,每天取约2公克的蛋壳研成粉状食用,可预防因钙质不足、骨量减少而导致的腰酸背痛、容易骨折或罹患骨质疏松症.蛋黄蛋黄含有丰富的蛋白质、脂肪、钙、卵磷脂和铁质等营养成分.其中卵磷脂被肠胃吸收之后,可促进血管中胆固醇的排除,有预防动脉粥样化的功用.且卵磷脂经消化吸收之后,可生成胆碱,这种物质与脑部的神经传达作用有关,可促进学习、记忆的能力,达到预防老人痴呆的功效.胆碱还可预防肝脏积存过量脂肪,避免形成脂肪肝及改善肝脏机能.而蛋黄所含的铁质,利用率最高,是最补血的天然食品.蛋白蛋白中含有一种叫白蛋白的蛋白,具有清除活性氧的作用,可增强人体免疫力,达到防癌的功效.且蛋白中的卵白蛋白,经消化酵素分解之后,可以产生一种溶解酶,可活化巨噬细胞,抵抗外来病菌的入侵,提高身体的免疫力.蛋系带蛋黄左右有两条白色的索状物,就是蛋系带,它是蛋白的一部分,也是优质蛋白质的来源.它还含有一种燕窝也有的成分,叫「涎酸」,具有抗氧化作用,可与侵入人体的病毒结合,进而消灭病毒,防止感染的产生,并且有预防癌变的作用.此外,中医药古籍《本草纲目》记载:蛋性味甘平,能安5脏、安心神 能定惊、安胎,具有养阴、健脾、补肺等作用,且补而燥,常吃能去病延年,最适合成长中的儿童、青少年、

  • 鸡蛋误区一二三

    [b]误区一 鸡蛋怎么吃营养都一样[/b]鸡蛋吃法多种多样,就营养的吸收和消化率来讲,煮蛋为100%,嫩炸为98%,炒蛋为97%,老炸为81. 1%,开水、牛奶冲蛋为92. 5%,生吃为30%~50%。可见,煮鸡蛋是最佳的吃法,但要注意细嚼慢咽,否则会影响吸收和消化。[b]误区二 煮鸡蛋的时间越长越好[/b]鸡蛋煮的时间过长,蛋黄中的亚铁离子与蛋白中的硫离子化合生成难溶的硫化亚铁,很难被吸收。油煎鸡蛋过老,鸡蛋清所含的高分子蛋白质会变成低分子氨基酸,这种氨基酸在高温下常可形成对人体健康不利的化学物质。煮鸡蛋最好是凉水下锅,水开了再煮5分钟左右即可。这时鸡蛋稍带溏心状,营养成分最利于人体吸收。[b]误区三 土鸡蛋比普通鸡蛋营养好[/b]人们普遍认为土鸡蛋比普通鸡蛋营养价值更高,但是权威检测数据显示,饲料鸡蛋与土鸡蛋的营养价值相差不大,之所以人们认为土鸡蛋更好吃更有营养价值,是因为土鸡蛋中的脂肪含量更高,吃起来有一种油油的,口感更香更好吃,符合人们的口味。[b]误区四 蛋黄颜色越黄营养越好[/b]正常情况下,蛋黄颜色较深的鸡蛋营养稍好一些,蛋黄的颜色与其含有各种色素有关,其中一些色素如胡萝卜素等的确具有营养价值。不过,现有的“技术”很容易让蛋黄颜色加深,不仅与营养无关,还会带来安全隐患。[b]误区五 蛋壳颜色越深,营养价值越高[/b]鸡蛋壳的颜色与营养价值的关系并不大,分析表明,鸡蛋的营养价值高低主要取决于饲料的营养结构与鸡的摄食情况,与蛋壳的颜色无多大关系。从感官上看,蛋清越浓稠,表明蛋白质含量越高,蛋白的品质越好。[align=center][img=,690,605]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/08/201808161614525095_4831_676_3.jpg!w690x605.jpg[/img][/align][b]误区六 生鸡蛋比熟鸡蛋更有营养[/b]有些人觉得,食物一经煮熟,就会流失其营养价值。认为生吃鸡蛋可以获取比熟鸡蛋更多的营养价值。其实不然,生吃鸡蛋很可能会把鸡蛋带有的细菌(例如大肠杆菌)吃进肚子,造成肠胃不适并引起腹泻,而且生鸡蛋中的蛋清里有一种抗胰蛋白酶的物质,会阻碍人体对于蛋白质的消化和吸收,浪费营养物质。[b]误区七 “初生蛋”更有营养[/b]到目前为止,其实没有任何检测结果能够表明,“初生蛋”(母鸡下的头几个蛋)比后来的蛋更有营养,这是典型的商家炒作概念。[b]误区八 产妇要多吃鸡蛋[/b]产妇坐月子时大量吃鸡蛋是我国一个习俗,但吃鸡蛋并非吃的越多越好,吃多了身体不能消化吸收,还会增加肠胃负担,时间长了还容易引起胃病。除了每天吃一两个鸡蛋,产妇还要吃肉类、奶类、豆类、粮食和果蔬,以达到膳食平衡。

  • 【讨论】鸡蛋的蛋白质含量到底有多高?

    [size=4]之前好像在哪看到一个贴,说蛋白的蛋白质含量几乎为100%,也就是说鸡蛋的蛋白全是蛋白质。感觉有点可疑,真的有那么高吗?刚刚百度了一下,上面的数据是蛋白的蛋白质为13%。两个数据差好远哦。不知道有没有坛友们做过?[/size]

  • 蛋白酶相关知识

    中文名称:蛋白酶英文名称:protease;proteinase其他名称:蛋白水解酶(proteolytic enzyme)定义:催化蛋白质中肽键水解的酶。根据酶的活性中心起催化作用的基团属性,可分为:丝氨酸/苏氨酸蛋白酶(编号:EC 3.4.21.-/EC 3.4.25.-)、巯基蛋白酶(编号:EC 3.4.22.-).、金属蛋白酶(编号:EC 3.4.24.-)和天冬氨酸蛋白酶(编号:EC 3.4.23.-)等。蛋白酶广泛存在于动物内脏、植物茎叶、果实和微生物中。微生物蛋白酶,主要由霉菌、细菌,其次由酵母、放线菌生产。该产品主要由上海斯诺美生物医学技术服务中心提供。

  • 6种吃法让鸡蛋营养尽失

    一、鸡蛋与豆浆同食降低营养价值  人们经常食用豆浆冲鸡蛋,认为两者都富含蛋白质,食之对身体有益,从科学饮食角度讲,豆浆性味甘平,含植物蛋白、脂肪、碳水化合物、维生素、矿物质等很多营养成分,单独饮用有很好的滋补作用。  但两者不宜同食。因为生豆浆中含有胰蛋白酶抑制物,它能抑制人体蛋白酶的活性,影响蛋白质在人体内的消化和吸收,鸡蛋的蛋清里含有粘性蛋白,可以同豆浆中的胰蛋白酶结合,使蛋白质的分解受到阻碍,从而降低人体对蛋白质的吸收率。  二、吃未熟鸡蛋易引起腹泻  鸡蛋蛋白含有抗生物素蛋白,会影响食品中生物素的吸收,使身体出现食欲不振、全身无力、肌肉疼痛、皮肤发炎、脱眉等症状。鸡蛋中含有抗胰蛋白酶,影响人体对鸡蛋蛋白质的消化和吸收。未熟的鸡蛋中这两种物质没有被分解,因此影响蛋白质的消化、吸收。鸡蛋在形成过程中会带菌,细菌会穿过蛋壳上的小孔,进入蛋内,而未熟的鸡蛋又不能将细菌杀死,轻则会引起腹泻。因此鸡蛋要经高温煮后再吃,不要吃未熟的鸡蛋。  生鸡蛋的蛋白质结构致密,有很大部分不能被人体吸收,只有煮熟后的蛋白质才变得松软,人体胃肠道才可消化吸收。生鸡蛋有特殊的腥味,会引起中枢神经抑制,使唾液、胃液和肠液等消化液的分泌减少,从而导致食欲不振、消化不良。  三、炒鸡蛋放味精破坏鲜味  鸡蛋中含有氯化钠和大量的谷氨酸,这两种成分加热后天生谷氨酸钠,有纯正的鲜味。味精的主要成分也是谷氨酸钠,炒鸡蛋时假如放进味精,会影响鸡蛋本身合成谷氨酸钠,不但破坏鸡蛋的鲜味,对菜肴起不到增加鲜味的作用。  四、吃煮老的鸡蛋影响吸收  鸡蛋煮老未必更好,因为一项研究文献表明,鸡蛋煮老后会增加营养素的损失和脂肪的氧化。研究发现,煮老的蛋和炒鸡蛋相比,其维生素E的损失要大16%,而且脂肪氧化程度要高30.4%。研究者还发现,对于富含omega-3脂肪酸的鸡蛋来说,烹调会增加其脂肪氧化程度3-9倍之多。鸡蛋煮得时间过长,蛋黄表面会形成灰绿色硫化亚铁层,很难被人体吸收。蛋白质老化会变硬变韧,鸡蛋会变得很硬,既不好吃,又影响消化吸收。  煮蛋小贴士:把鸡蛋放冷水中,大火煮开之后,马上转最小火,四五分钟之后把火关掉,用余热把鸡蛋焖熟。这样煮出来的鸡蛋,蛋清柔嫩,蛋黄滋润,吃起来就美味多了。  五、鸡蛋与糖同煮导致血液凝固  因为在长期加热的条件下,鸡蛋中的氨基酸与糖之间会发生化学反应,结果生成一种叫糖基赖氨酸的化合物,破坏了鸡蛋中对人体十分有益的氨基酸成分。所产生的化合物不仅不容易被人体所吸收,还带有毒性,而且这种物质有凝血作用,进进人体后会造成危害。  如需在煮鸡蛋中加糖,应该等稍凉后放进搅拌,味道不减。  六、熟鸡蛋用冷水浸后存放易变质  一些人常将煮熟的鸡蛋浸在冷水里,利用蛋壳和蛋白的热膨胀系数不同,使蛋壳轻易剥落,但这种做法不卫生。  其实新鲜鸡蛋外表有一层保护膜,可以令蛋内的水分不易挥发,也有防止微生物侵进。当鸡蛋煮熟后,蛋壳上的薄膜会被破坏掉,令蛋内气腔的一些气体逸出,此时鸡蛋置于冷水内会负气腔内温度骤降并呈负压,冷水和微生物可通过蛋壳和壳内双层膜上的气孔进进蛋内,存放时会更易变质。

  • 【第三届原创大赛】“假鸡蛋”传闻的澄清与鸡蛋真假鉴别方法

    【第三届原创大赛】“假鸡蛋”传闻的澄清与鸡蛋真假鉴别方法

    [size=5][size=4][color=#f10b00]维权声明:本文为[/color][color=#fe2419]ecoli[/color][/size][color=#f10b00][size=4][font=Times New Roman]原创作品,本作者与仪器信息网是该作品合法使用者,该作品暂不对外授权转载。其他任何网站、组织、单位或个人等将该作品在本站以外的任何媒体任何形式出现均属侵权违法行为,我们将追究法律责任。[/font][/size][/color][b]“假鸡蛋”传闻的澄清与鸡蛋真假鉴别方法[/b][/size][size=3]农业部家禽品质监督检验测试中心(扬州)[/size][size=2]一 媒体报道2005年3月,广州日报发表了一篇关于假鸡蛋的新闻报道《地下工厂人造鸡蛋流入广州 长期食用会导致痴呆》;2005年国际毒理学杂志《The Internet Journal of Toxicology》发表了一篇由香港学者Alexander Tse-Yan Lee撰写的评论-Faked Eggs: The World's Most Unbelievable Invention,对中国大陆的假鸡蛋事件进行了评述。2006年11月,齐鲁晚报报道山东济南出现假鸡蛋;2007年1月中安在线报道北京出现人造鸡蛋;2007年8月,郑州日报报道郑州夜市出售人造鸡蛋。其后相关报道越来越多,在全国各地均有发现。在最近的6月3日,扬子晚报就报道了江苏南京有居民在超市中购买到疑似假鸡蛋。使用新华网的新闻检索功能,可检索到100多篇的新闻报道,而使用google 检索“假鸡蛋",共有186万条结果,可见媒体和消费者对假鸡蛋极为关注。相关报道中指出有人使用海藻酸钠、碳酸钙和柠檬黄等化学制剂制作“假鸡蛋”并大量低价销售。有很多市民买到疑似假鸡蛋后,送到质检机构去检测,但却因为没有相关标准,无法对鸡蛋的真假进行鉴定。二 鸡蛋的构造鸡蛋,又名鸡卵、鸡子,是母鸡所产的卵,其外有一层硬壳,内则有气室、蛋白及蛋黄部分,它富含各种营养,是人类常食用的食品之一。若鸡蛋经受精,约经过21天会孵出小鸡。一个完整的鸡蛋由五部分组成,即蛋壳、蛋壳膜、蛋白、蛋黄、胚盘或胚珠。(1)蛋壳约占全蛋体积的12%。蛋壳是由内层的棱形体和外层的多层体构成的,蛋壳上有气孔与内外相通,各种蛋壳上的气孔分布是不均匀的,数量也是不相同的,一般蛋的纯端气孔较多,大约有151个/cm2,蛋的尖端气孔较少,只有100个/cm2,蛋的腰部有140个/cm2左右。蛋壳的最外面有一层胶质状护壳膜,称胶护膜或外蛋壳膜,它是一种无定形结构,透明,具有光泽,无色,可溶性蛋白质物质。新产下的蛋,胶护膜封闭上气孔,随着蛋的存放,胶护膜逐渐脱掉,空气进入,水分向外排出。(2)蛋壳膜蛋壳的内层是一层白色的薄膜,叫壳膜,内外二层,外层紧贴着蛋壳,叫外壳膜,其厚度仅为0.015mm内层附着在外壳膜的里面,叫做蛋白膜或内壳膜,其厚度较外壳膜厚,为0.05mm。蛋壳膜内外两层之间是气室。气室是由于鸡蛋自体内排出后,受到外界温度的影响,使蛋白冷却收缩和蛋内水分蒸发所形成的。气室的大小可以表明鸡蛋贮存时间的长短以及保存条件的好坏。(3)蛋白约占全蛋的60%,蛋白分系带与系带层浓蛋白(或内浓蛋白),内稀蛋白,浓蛋白(或外浓蛋白),外稀蛋白四层。内浓蛋白在卵黄周围旋转,两端扭曲形成系带,小头系带螺旋方向为右旋,大头系带为左旋,系带的重量一般小头比大头重得多。系带具有弹性,它能随着禽蛋贮存时间的延长而逐渐变细且失去弹性,品质极差的鸡蛋系带可完全与蛋黄脱离,并逐渐消失。系带层浓蛋白是直接包贴着蛋黄膜上的一层浓蛋白。新鲜鸡蛋,浓厚蛋白量较多,而存放时间较长的种蛋,则稀薄蛋白含量增加,所以鸡蛋在认可的温度条件下,经长时期的保藏,浓厚蛋白就逐渐转化为液体状态,并且不能看到像新鲜鸡蛋那样的多层结构。(4)蛋黄占全蛋的30%~32%,在鸡蛋最里面浓稠不透明,呈半流动的乳状粘稠物是蛋黄,在蛋黄的最外层有一层透明的薄膜称蛋黄膜,它是由粘蛋白组成的内、外层和由胡萝卜素组成的中层构成的,蛋黄膜平均厚度为16μm,占蛋黄重的2%-3%。蛋黄膜具有一定的弹性,蛋越新鲜,其弹性越强,随保存时间的延长,蛋黄膜弹性下降,稍加震动,即可破裂,而出现散黄蛋。蛋黄的颜色并不是在所有蛋中都是相同的,它受饲料中色素的影响很大,如玉米核黄素可以增进蛋黄的色素,过量的亚麻油粕粉,使蛋黄变成绿色。(5)胚珠或胚盘胚珠是没有分裂的次级卵母细胞,受精后次级卵母细胞经过分裂后形成胚盘。胚盘处于蛋黄的表面,是由蛋黄中心通向蛋黄外部的细颈上的一个色淡、细小的圆盘状物体,胚盘是正圆形,直径约为3-5mm;胚珠是椭圆形,长径约为2.5mm。完整鸡蛋结构示意图如下:[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2010/09/201009101457_242900_1608554_3.jpg[/img]1.Eggshell 蛋壳;2.Outer membrane 蛋壳外膜;3.Inner membrane 蛋壳内膜;4.Chalaza 系带;5.Exterior albumen (outer thin albumen) 稀蛋白;6.Middle albumen (inner thick albumen) 浓蛋白;7.Vitelline membrane 卵黄膜;8.Nucleus of pander 潘德尔核;9.Germinal disk (blastoderm) 胚盘;10.Yellow yolk 黄色蛋黄;11.White yolk 白色蛋黄;12.Internal albumen 内层蛋白;13.Chalaza 系带;14.Air cell 气室;15.Cuticula 蛋壳胶护膜三 假鸡蛋能造出来吗?市场上的“假鸡蛋”是“假鸡蛋”吗?3.1 报道的假鸡蛋制作方法假鸡蛋,又名人造鸡蛋,是指使用化学药品人工合成的鸡蛋, 是我国近年发生的一系列重大黑心食品事件的主角之一。根据相关报道可以看出,假鸡蛋具有如下特点:假鸡蛋外表、颜色和重量都和真鸡蛋差不多,但没有鸡蛋应有的腥味;鸡蛋壳表面粗糙,往往有不规则的突起;打破后,极易散黄;鸡蛋煮熟后,蛋黄坚实且有弹性似乒乓球。根据相关报道资料表明,假鸡蛋的蛋壳由碳酸钙、石蜡及石膏粉制作。而蛋清、蛋白则主要由海藻酸钠,再加上明矾、明胶、色素等制成。蛋清是将海藻酸钠加进水造成溶液后,不断搅拌而制成的。做好蛋清后,加入如柠檬黄一类的色素后,就变成了蛋黄。蛋壳是由纸和硅胶制作,把硅胶和固化剂调匀,反复刷在鸡蛋和纸片上。一个多小时后,硅胶变硬。将纸片的外侧剪开,把包在里面的真鸡蛋取了出来,这就变成了蛋壳模具。将树脂、滑石粉等放在一起迅速搅拌,然后倒入模具里,反复摇晃,好让原料均匀地挂在蛋壳模具的内壁上。大约10分钟后,一个假蛋壳产生了。用针管将做好的“蛋清”慢慢推进去,估摸有一半“蛋清”时,再推入“蛋黄”,最终再用“蛋清”充满。最后用一点树脂将蛋壳上的针孔抹匀。有关“人造鸡蛋”技术的网站上说,“生产只需要厨房厨具,不用机电,原料各地均有售。每个蛋成本只有5分钱,最低售价2角,一人日产1500个左右”。3.2 相关调查假鸡蛋初始报道出现于2005年左右,但通过google检索,可以找到上海市地方志办公室商检志1982年对“橡皮蛋”问题的调查记录:在白壳鲜鸡蛋的出口中,1982年出现了“橡皮蛋”(即鸡蛋煮熟后蛋黄坚实且有弹性似橡皮球,故称橡皮蛋)的质量问题。上海市商检局经调查研究,摸清了产生“橡皮蛋”的原因,主要是对产蛋鸡饲喂棉籽粕后而产生的鸡蛋变异,蛋黄呈棕褐色,蛋白呈微红色;煮熟后,蛋白略带微红色,较僵硬,蛋黄呈圆形,胶质状,不易破碎,切开蛋黄呈橡皮状波纹。经分析检验,发现鸡蛋中含有棉酚所致。以后采取了对应性措施,从而控制了“橡皮蛋”出口。在1988年的《饲料研究》杂志第三期上,一篇名为《“橡皮蛋”的成因和预防》的论文这样描述:据上海市禽蛋公司反映,近年来从外地调进的鲜蛋中,常检出含游离棉酚的“橡皮蛋”,有的地区高达5%,已影响市场供应和出口。经调查,其原因是:一、农民缺乏使用棉饼的科学知识,自配鸡饲料,添加20%~30%未去毒的棉饼,每公斤饲料含游离棉酚高达200~300ppm,是专家建议游离棉酚允许含量的10到15 倍。二、用猪料喂鸡。2009年3月《齐鲁晚报》报道了任永兴利用化工原料制造假鸡蛋。为此,国家蛋鸡产业体系郓城综合试验站进行了调查。通过对十几户养鸡场和鸡蛋经销商调查了解到,郓城县境内并无人造假鸡蛋流入市场。市场上充斥的异常鸡蛋有多种原因。①山东市场上有不少为调节市场供应而在青岛冷冻保存过的鸡蛋。鸡蛋经冷冻存放后蛋清发生质变,卵膜变松,蛋清变稀薄,而且还发生粘壳、散黄,甚至霉变、发臭,不能食用,造成口感和正常鸡蛋有很大的差异。②春节期间积压的鸡蛋,这些经过长时间存放后的鸡蛋也会腐败变味,但是鸡蛋经销商和小贩为了利益依然销售。③由于豆粕原料价格过高,很多养鸡户使用了比例过高的棉籽粕等杂粕代替豆粕。使用不当会引起鸡的中毒,而且蛋鸡容易产下“橡皮蛋”。2007年,连云港有市民从超市购买鸡蛋,煮熟后发现蛋黄坚实如同乒乓球,投诉至相关机构,鸡蛋生产企业为证明所售鸡蛋为真鸡蛋,送样至本中心进行检测。我中心对鸡蛋的蛋品质、蛋白含量、脂肪含量等指标进行了测定,其结果与正常鸡蛋并无区别。湖南长沙市也曾报道过《问题鸡蛋熟后蛋黄可当球抛,工商检验称合格》的新闻。湖南省食品测试分析中心对市场上的“橡皮鸡蛋”进行了分析和检测,根据检验报告显示,抽取的“橡皮鸡蛋”样品指标全部合格。3.4 目前有壳鲜鸡蛋造假的可能性极低从前述相关调查结论可以看出,所谓的“假鸡蛋”大多是鸡蛋在生产和流通过程中因为饲料成分、保存条件、存放时间等原因而导致的鸡蛋变异现象,而非人工制造。为弄清“假鸡蛋”这一现象的原因以及“假鸡蛋”是否真的存在,我们收集相关资料,进行了进一步的分析,得出以下初步认识:①从相关媒体所披露的“假鸡蛋”制作配方,制作“蛋黄”、“蛋清”的原材料基本相同,只是蛋黄添加了色素而已。理论上说,煮熟之后的蛋黄、蛋清都应该成橡皮状,但大多媒体报道中市民购买的“假鸡蛋”煮熟之后,只有蛋黄成橡皮球状。②鸡蛋构造并不是那么简单,除了蛋壳、蛋清和蛋黄外,鸡蛋还有蛋壳膜、系带和胚盘等肉眼可识别明显特征构造。那些报道的假鸡蛋制作方法,根本无法成功仿制这些结构。③用模具加工的蛋壳外观粗糙,蛋壳厚度难以均匀,没有蛋壳内膜,鸡蛋打破后,眼观极易识别。相关报道中披露的制作方法,虽然原料成本较低,但不能机械化生产,制作繁琐,耗时长,考虑到人工和时间,其成本并不低,应该无暴力可图。所以,我们认为壳蛋中出现假鸡蛋的可能性不大,网站上那些极力宣传假鸡蛋制作方法的,其主要目的应是为了骗取学费。这和以前那些做蚂蚁、蝎子等特种养殖推广的骗术如出一辙。但这并不意味着我们对假鸡蛋事件就可以不去过问,首先市场上出现的这些问题鸡蛋,其质量安全确实是存在问题的;其次,从近年来出现的一系列食品掺假和质量安全事件可以看出,消费者对食品安全关注度越来越高,而我们的安全监管体系和质量检测技术研究还处于一种被动的状态。就算现在市场上没有假鸡蛋,不意味着明天也没有,某些人造假的能力不可小视。制造带壳假鸡蛋比较困难,但以液态蛋销售的产品却极易作假。首先液态蛋搅拌均匀后形态不易识别,只能从所含物质上进行区分;其次,液态蛋一般用于加工其它商品,比如蛋糕、蛋粉等,不直接食用,不易被发现;此外,液态蛋在生产和保存过程中,为延长保存期,增加色泽和适口性等,不法生产者极可能在其中添加防腐剂、抗菌剂、色素和调味剂等其它有害物质。而随着我国食品加工业的发展,我国液态蛋的生产近年来也逐渐增多,液态蛋制品的比重必将越来越大。[/size]

  • “蛋白变性”的望文生义

    现在人们是越来越注重食品健康了,于是任何关于某种食品不健康的说法都能吸引一堆眼球。有人说自己买的乳清蛋白粉不容易溶在水中,立刻有人跳出来说千万不能用热水,蛋白质会变性。于是有一堆看起来对蛋白质有一点了解的人纷纷附和,大谈如何保持蛋白不变性。 很多人看到“蛋白变性”这个词,就望文生义地想到“变质”“变坏”,仿佛“变性”了就有害健康了。最常见的还有一个例子,反对微波炉的人总是说微波炉会导致蛋白质的变性。 蛋白质通常是由20种不同的氨基酸组成的,不同的蛋白质只是各种氨基酸的组成和连结方式不同。因为各种氨基酸的理化特性不同,它们会互相影响,最后会像积木一样形成一定的空间结构。通常也就说是蛋白质的天然构象。如果因为某种原因,蛋白质分子失去了它的天然构象,被称为变性。而蛋白质被吃到肚子里,首先要被水解(消化)成一个个的氨基酸分子,才能被吸收。而在多数情况下,变性的蛋白更容易被水解。可见,蛋白质变性对于食物来说,不仅不是“变质”,而且是好事。 我们所吃的所有蛋白,比如肉、鱼、鸡蛋、牛奶、豆浆、豆腐,作熟的过程就是蛋白质变性的过程。豆浆中的蛋白质不变性是变不成豆腐的。而作为商品出售的各种蛋白粉,多数都经过了高温灭菌和干燥处理,早已经变性了。对于某些产品而言,适当的工业处理甚至能够提高蛋白质的品质。比如大豆中的蛋白,其蛋白质质量指数(蛋白质消化校正计分)是0.91 ,但是经过分离纯化高温干燥等处理之后,就能达到1了。还有相当多的蛋白质产品甚至经过了酶解处理,以获得更好的理化特性。那些蛋白质,不仅是空间构象,连化学结构都变了,更是“变性”得深入。

  • 【讨论】鸡蛋煮几分钟最好???

    【讨论】鸡蛋煮几分钟最好???

    [img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2008/08/200808100949_102998_1622447_3.jpg[/img]煮鸡蛋看似简单,却不好把握火候,时间过短会使蛋黄不熟,时间过长会使鸡蛋变老不好吃。煮不熟的鸡蛋危害大。生鸡蛋不但存在沙门氏菌污染问题,还有抗酶蛋白和抗生物素蛋白两种有害物。前者会影响蛋白质的消化吸收;后者能与食物中的生物素结合,导致人体生物素缺乏,产生精神倦怠、肌肉酸痛等症状。而鸡蛋一经煮熟,上述两种物质才会被破坏。 鸡蛋煮几分钟最好???

  • 【原创】功能性蛋白

    功能性蛋白及一例分析自19世纪中叶荷兰化学家Gerardus Mul-der从动物组织和植物体中提取出蛋白质以来,人们发现了越来越多的蛋白质,据估计生物界中蛋白质的种类可达1010~1012之多;在这如此众多的蛋白质中,功能性蛋白发挥着极其重要的生理功能 。功能性蛋白也有人称其为活性蛋白。它们的特点是都有识别功能,能与其他分子特异性结合.完成各种复杂的生命活动:在结构上主要是一些球状蛋白质。1 功能性蛋白的种类按其作用方式不同可分为酶蛋白、运输蛋白、运动蛋白、免疫球蛋白、毒蛋白、激素蛋白(1)酶蛋白: 细胞的生长和繁殖、代谢物的合成和分解、能量的产生和利用,这些过程所需要的物质都是通过无数的生物化学反应来提供的.而这些反应又都是在一类特殊蛋白质—酶蛋白的催化下完成的。酶的催化效率极高,且具有高度的专一性,也正是这种高度的专一性使一种特定的酶只能作用于一种或少数几种结构相似的化合物,这就要求有各种不同的酶去作用于不同的化合物。在酶的作用下,生物细胞才得以合成各种复杂的化合物,也才能使各种大分子物质被分解、吸收和利用.且这些反应都要在适合于生物体本身的温度、压力和pH值等非常温和的条件下进行,能使生物细胞按照这种方式进行化学变化是蛋白质最重要的功能之一。常见的酶蛋白如淀粉酶使淀粉分解形成葡萄糖,蛋白酶、肽酶使蛋白质分解为氨基酸;溶菌酶使细菌细胞壁中的肤聚糖被破坏;凝血系统酶的有序作用使凝血过程得以有条不紊地进行.合成酶能合成多种体内所需要的大分子物质。应用举例:由于近年来鱼粉资源价格上涨,冷向军等人通过向鱼粉含量较低(10﹪)的饲料个添加蛋白酶AG使鱼的前肠蛋白酶有显著提高。同样有实验证明在玉米-豆粕型粮食中添加蛋白酶可以改善肉鸡的生长性能,提高蛋白质的消化率。(2)运输蛋白:有些蛋白质起载体的作用可以运输特定的物质到达必须的部位,使其完成特定的功能,这种蛋白质称为运输蛋白。如哺乳动物的血红蛋白能将氧从氧气充裕的肺内运送到各个组织中去:血清蛋白能与游离脂肪酶等多种物质结合,并将这些物质在脂肪组织与身体的其他部位间运送(最典型的β1-脂蛋白可随血流运输脂肪),铁传递蛋白能传递血液中的铁。无脊椎动物体内的血蓝蛋白,大豆根瘤中的豆血红蛋白也起着输送氧气的作用。另外还有一些能携带物质通过细胞膜进出细胞的蛋白质,如细菌过膜运输中的载体蛋白等,它们都属于运输蛋白。(3)运动蛋白:参与运动功能的蛋白质种类较多如脊椎动物中骨骼肌的主要成分就是肌动蛋白和肌球蛋白,肌肉的收缩就是靠着这两种互相联系的平行丝状蛋白相对滑动来完成的;细菌的运动器官——鞭毛也是由鞭毛蛋白组成的;绿藻的运动也离不开蛋白质;有丝分裂的完成,精子的运动等都与运动蛋白有关,所以绝大多数生物的运动和收缩过程都是运动蛋白参与的结果。应用举例:邱永忠等人在研究烟草花叶病毒(TMV)在植物细胞间的运动时发现用体外定位突变引起L株上,被点突变的DNA体外转录成RNA后感染感病烟草,结果定位突变的L株表型30kD蛋白基因四种位点不同的移码突变和一种基因中间大部分缺失的突变体均使病毒不能感染植株。这证明TMV 30kD蛋白与病毒运动有关,而与病毒复制无关。同时因为胞间连丝一般只能让小于1kD的分子通过,其通透范围远小于病毒颗粒,也小于折叠的病毒核酸分子,Wolf等实验证明正时因为30kD蛋白才使得植株分子半径扩散了三倍多。(4)免疫球蛋白:指具有抗体活性的动物蛋白。主要存在于血浆中,也见于其他体液、组织和一些分泌液中。脊椎动物的免疫系统能抵抗外来的入侵物质,如病毒、细菌以及其他机体的细胞,当外来的这些入侵物质(抗原)进入机体后就会激发机体的免疫系统而产生特异性的免疫球蛋白(抗体),通常每一种抗体对于相应的某一特定抗原具有高度的专一性,抗原与抗体结合形成抗原-抗体复合物.使入侵物质——抗原失活而排出体外,从而消除外来物质对机体的干扰。由此看来蛋白质不仅参与了高等动物的免疫反应,而且起着重要的作用,由于抗原和抗体结合的高度专一性,必然有数量众多的抗体作用于不同的抗原物质,据估计抗体的类型可能有10O万种,即免疫球蛋白可能有100万种之多。(5)毒蛋白:动物、植物和微生物都可以产生某些特殊的物质来防御敌害,这些物质中绝大多数是蛋白质类物质,由于它们对高等动物具有毒性,故称为毒蛋白。蝎类能产生毒性很强的蝎毒蛋白.用来攻击敌害,保护自己;蛇类产生的神经毒素和心赃毒素其主要成分也是小分子量的蛋白质;毒蘑菇中的相当一部分蘑菇毒素也是蛋白质;细菌产生的毒素,毒性极强的肉毒梭菌毒素(人的致死量小于19m)和破伤风痉挛毒素、白喉杆菌毒素等外毒素均是蛋白质。应用举例:王峰等人研究核糖体失活蛋白(RIPS)是一类能够抑制细胞核糖体合成蛋白质,从而导致宿主死亡的毒蛋白,广泛存在于植物、细菌中。发现其在在细胞内的转运途径研究很多,目前较为清楚的是逆向转运途径,其中以蓖麻毒素、志贺菌毒素、霍乱毒素为代表,大体过程为:内吞一内吞小体一高尔基体一内质网一胞液。(6)激素蛋白:是由特殊细胞所产生的一类物质,它们通过与靶细胞或系统内其它器官的相互作用来发挥其代谢上的功能,其实许多激素本身就是蛋白质,这样的蛋白质称为激素蛋白,它们在生物合成上具有重要的功能。如胰高血糖素、胰岛素、胃泌素、生长激素、促甲状腺激素、促肾上腺皮质激素和促脂解激素等均是蛋白

  • 融合蛋白纯化小攻略-融合蛋白常见问题解析

    月旭科技秉持分享传承生物制药相关技术,汇集生物制药相关细分技术,以生物技术分享传承和助力发展为初衷,月旭材料是集生物分离纯化介质研发、生产、销售于一体的高新技术企业。公司专注生物分离填料的研制和生物工艺下游技术工艺开发。有琼脂糖微球填料,葡聚糖微球填料,琼脂糖交联葡聚糖微球填料,琼脂糖交联纤维素微球填料,琼脂糖交联纤维素交联葡聚糖微球填料,涵盖离子交换,亲和,排阻和疏水等多款高品质填料。[b]融合蛋白不挂金属螯合亲和层析柱01 [/b][color=#1a237e][b]可能原因:[/b][/color][b]超声的功率不对( 太大,蛋白炭化,太小,蛋白没有释放)[/b][color=#fcb441]解决方法:[/color]改变超声功率或超声前尝试添加溶菌酶增加细胞破碎率。[b]02 [/b][color=#1a237e][b]可能原因:[/b][/color][b]组氨酸标签暴露不完全[/b][color=#fcb441][b]解决方法:[/b][/color]在变性条件下( 用4-8 M 脲,或4-6 M 盐酸胍) 进行纯化,常规Ni-6FF(IDA) ,在变性条件下镍离子容易脱落,此时可选择[b]耐受变性剂的螯合填料(推荐月旭材料的亲和填料Ni Tanrose FF(NTA)。03 [/b][color=#1a237e][b]可能原因:[/b][/color][b]His标签丢失[/b][color=#fcb441][b]解决方法1:[/b][/color]WB 检查His 是否表达,上游构建,改变His-tag 的位置(C- 端或N- 端),必要时增加His 个数。[color=#fcb441][b]解决方法2:[/b][/color]孵育的时间不够,降低流速和增加孵育的时间。[color=#fcb441][b]解决方法3:[/b][/color]改变螯合的金属离子,寻找到最佳的结合金属离子。[color=#fcb441][b]解决方法4:[/b][/color][b]选择高载量高特异性的螯合填料(月旭材料的亲和填料 Ni Tanrose FF(IDA) )。融合蛋白结合在螯合填料上洗脱不下来01 [/b][color=#1a237e][b]可能原因:[/b][/color][b]洗脱条件太温和(融合蛋白质仍然结合在柱上,结合力较强)[color=#fcb441]解决方法:[/color][/b]增加咪唑的梯度洗脱或降低pH 来找出最佳的洗脱条件。[b]02 [/b][color=#1a237e][b]可能原因:[/b][/color][b]降低pH 的方法洗脱,若pH 低于3.5,会导致镍离子脱落[color=#fcb441]解决方法:[/color][/b]改变洗脱办法,咪唑竞争性洗脱。[b]03 [/b][color=#1a237e][b]可能原因:[/b][/color][b]蛋白已沉淀在柱上[color=#fcb441]解决方法1:[/color][/b]减少上样量,或使用咪唑的线性梯度而不是分步洗脱以降低蛋白的浓度。试用去污剂或改变NaCl 的浓度,或在变性条件( 去折叠) 下洗脱( 用4-8 M 脲,或4-6 M 盐酸胍)。[b][color=#fcb441]解决方法2:[/color][/b]蛋白在柱上变性固化,用0.5M氢氧化钠洗柱。[b]04 [/b][color=#1a237e][b]可能原因:[/b][/color][b]非特异性疏水或其他相互作用[color=#fcb441]解决方法:[/color][/b]加非离子去污剂到洗脱缓冲液(如:2% Triton X-100)或增加NaCl 的浓度。[b]05 [/b][color=#1a237e][b]可能原因:[/b][/color][b]在填料表面形成高密度融合蛋白的聚集[color=#fcb441]解决方法:[/color][/b]选择合适载量的填料,切勿一味追求高载量。[b]镍柱使用中出现棕色是怎么回事01 [/b][color=#1a237e][b]可能原因:[/b][/color][b]缓冲液中DTT的影响, DTT会对镍柱的颜色和纯化效率有很大的影响,在碱性的缓冲液条件下,镍离子会被DTT还原生成棕色的沉淀,所以要尽量避免DTT的参与。[color=#fcb441]解决方法:[/color][/b]若样品中含有DTT,在上样之前, 我们推荐采用不含还原性试剂的空白运行来除去任何较弱结合的镍离子;空白运行方法(使用不含还原剂的平衡液和洗脱液)1)5倍柱体积的双蒸水洗柱 ;2)5倍柱体积的平衡液洗柱;3)5倍柱体积的洗脱液洗柱;4)10倍柱体积的平衡液平衡。当不使用时,勿将Ni Tanrose 6FF(IDA)保存于含还原性试剂的缓冲液中。

  • 鸡蛋的十大谬误

    1.红壳鸡蛋比白壳鸡蛋有营养   过去人们一直认为红壳蛋更有营养,红壳蛋市场价格比白壳的贵约0.2元/斤。实际上,检测表明,蛋壳的颜色与营养无关。鸡蛋的营养与饲料有关。不过,近来我发现市场上红壳蛋和白壳蛋价格一样了。  2.农家鸡蛋(土鸡蛋)更有营养   真正的农家蛋(假冒的不算)可能会更好吃一些,但检测表明,在营养素含量方面,农家蛋并不比洋鸡蛋(蛋鸡场的鸡蛋)更多。   3.“初生蛋”更有营养   没有任何证据表明,“初生蛋”(母鸡下的头几个或若干个蛋)比后来的蛋更有营养。是典型的炒作概念。   4.蛋黄颜色越黄营养越好   蛋黄颜色与其含有各种色素有关,其中一些色素如胡萝卜素等的确具有营养价值。不过,现有的“技术”很容易让蛋黄颜色加深,而与营养无关。相信“红心鸭蛋”的案例大家还没有忘记吧。   5.“毛蛋”是滋补品   毛蛋即“死胎蛋”,是鸡蛋孵化至半途的胚胎,在很多地方(至少辽宁的很多城市)作为滋补品食用(常是烧烤)。实际上,毛蛋营养价值并不高。而且,常含有很多细菌,非常不卫生。   6.煮鸡蛋时间越长越好   关于这个问题,深圳营养师培训学校(baoanbaikang.soxsok.com)专家说“吃鸡蛋最好的状态,就是蛋清已经凝固,而蛋黄处于半凝固或流动的状态。这样既可以保证消化吸收率,又可以避免营养素损失”。   7.生吃鸡蛋更有营养   生吃鸡蛋会干扰生物素(一种B族维生素)的吸收,虽然偶尔的、不是经常的生吃鸡蛋并不会导致生物素缺乏,但生吃鸡蛋总是不太卫生。要知道,母鸡生蛋和排便是同一套管道,很容易污染的。   8.产妇要多吃鸡蛋   产妇大量吃鸡蛋的古老习俗,在食物极大丰富的今天,已经成了不折不扣的谬误。产妇应该吃各种各样(包括肉蛋奶豆类粮食蔬菜和水果)的食物(鸡蛋每天一二个足矣),以达到膳食平衡。那种“小米粥+鸡蛋”的做法是非常愚蠢的。   9.“功能鸡蛋”比普通鸡蛋好   所谓“功能鸡蛋”是指通过饲料技术使鸡蛋富含锌、碘、硒、钙等营养素。这听起来是很好的,但在实际生活中,因为没有标准也没有检测,很容易假冒的。   10.鸡蛋不要和豆浆一起吃   主张“鸡蛋不要和豆浆一起吃”的人说:“生豆浆”中含有胰蛋白酶抑制物,它能抑制人体蛋白酶的活性,影响蛋白质(比如鸡蛋中)在人体内的消化和吸收。问题是,没有人喝生豆浆,我们都喝熟的,豆浆加热之后,胰蛋白酶抑制物就被破坏,不起作用了。所以鸡蛋和豆浆一起吃没有任何问题。

  • 【资料】吃鸡蛋十个误区害人不浅

    http://image.elegantliving.ceconline.com/360000/360100/20100831_03_01.jpg  误区之一:鸡蛋与白糖同煮  很多地方有吃糖水荷包蛋的习惯。其实,鸡蛋和白糖同煮,会使鸡蛋蛋白质中的氨基酸形成果糖基赖氨酸的结合物。这种物质不易被人体吸收,会对健康产生不良作用。 http://image.elegantliving.ceconline.com/360000/360100/20100831_03_02.jpg  误区之二:生鸡蛋更有营养  有人认为,生吃鸡蛋有润肺及滋润嗓音功效。事实上,生吃鸡蛋不仅不卫生,容易引起细菌感染,而且并非更有营养。生鸡蛋里含有抗生物素蛋白,影响食物中生物素的吸收,容易使身体出现食欲不振、全身无力、肌肉疼痛、皮肤发炎、脱眉等“生物素缺乏症”。生鸡蛋的蛋白质结构致密,并含有抗胰蛋白酶,有很大部分不能被人体吸收,只有煮熟后的蛋白质才变得松软,才更有益于人体消化吸收。  另外,生鸡蛋还有特殊的腥味,也会引起中枢神经抑制,使唾液、胃液和肠液等消化液的分泌减少,从而导致食欲不振、消化不良。因此,鸡蛋要经高温煮熟后再吃,不要吃未熟的鸡蛋。

  • 【转帖】鸡蛋不宜与啥食物同食

    鸡蛋为雉科动物鸡的卵,又名鸡卵、鸡子,味甘性平,具有滋阴润燥,养心安神,养血安胎,延年益寿之功。鸡蛋是大众喜爱的食品,鲜鸡蛋所含营养丰富而全面,营养学家称之为“完全蛋白质模式”,被人们誉为“理想的营养库”。  其主要营养成份有:  1.蛋白质:鸡蛋含丰富的优质蛋白,每100克鸡蛋含12.7克蛋白质,两只鸡蛋所含的蛋白质大致相当于150克鱼或瘦肉的蛋白质。鸡蛋蛋白质的消化率在牛奶、猪肉、牛肉和大米中也是最高的。 鲜鸡蛋含的蛋白质中,主要为卵蛋白(在蛋清中)和卵黄蛋白(主要在蛋黄中)。其蛋白质的氨基酸组成与人体组织蛋白质最为接近,因此吸收率相当高,可达99.7%。  2.脂肪:每100克鸡蛋中含脂肪11.6克,大多集中在蛋黄中,以不饱和脂肪酸为多,脂肪呈乳融状,易被人体吸收。  3.氨基酸:鸡蛋中蛋氨酸含量特别丰富,而谷类和豆类都缺乏这种人体必需的氨基酸,所以,将鸡蛋与谷类或豆类食品混合食用,能提高后两者的生物利用率。  4.其他微营养素:鸡蛋还有其它重要的微营养素,如钾、钠、镁、磷,特别是蛋黄中的铁质达7毫克/100克;蛋中的磷很丰富,但钙相对不足,所以,将奶类与鸡蛋共同食用可营养互补。鸡蛋中维生素a、b也很丰富。

  • 蛋白胨和胰蛋白胨

    本文引用自cheney《蛋白胨和胰蛋白胨简介》蛋白胨是将肉、酪素或明胶用酸或蛋白酶水解后干燥而成的外观呈淡黄色的粉剂,具有肉香的特殊气息。蛋白质经酸、碱或蛋白酶分解后也可形成蛋白胨。蛋白胨富含有机氮化合物,也含有一些维生素和糖类。它可以作为微生物培养基的主要原料,在抗生素、医药工业、发酵工业、生化制品及微生物学科研等领域中的用量均很大。不同的生物体需要特定的氨基酸和多肽,因此存在着各种蛋白胨,一般来说,用于蛋白胨生产的蛋白包括动物蛋白(酪蛋白、肉类)和植物蛋白(豆类)等两种。能为微生物提供C源、N源、生长因子等营养物质。因此,蛋白胨从来源上可分为动物性蛋白胨和植物性蛋白胨。胰胨、肉胨、骨胨等都是动物性蛋白胨,而大豆蛋白胨等则是植物性蛋白胨。动物性来源的蛋白胨还有:蚕蛹蛋白胨、血液蛋白胨等。   不同来源的蛋白质和不同的水解条件,其水解物中组成可千差万别。所以胨往往是一个复杂的多肽混合物。可溶于水,过热不凝固,在饱和硫酸铵中不发生沉淀但可为蛋白质沉淀剂所沉淀。可用作微生物和动物细胞培养基、特种功能性食品和化妆品的配料,也有用作啤酒等产品的稳定剂。胰蛋白胨,又称胰酪蛋白胨(Casein Tryptone)、胰酶消化酪蛋白胨(Pancreatic digest of casein),是一种优质蛋白胨,是以新鲜牛肉和牛骨经胰酶消化,浓缩干燥而成的浅黄色粉末。具有色浅、易溶、透明、无沉淀等良好的物理性状。含有丰富的氮源、氨基酸等,可配制各种微生物培养基,用于细菌的培养、分离、增殖、鉴定,以及无菌试验培养基、厌氧菌培养基等细菌生化特性试验用培养基的配置。胰蛋白胨还广泛应用于高品质的抗生素、维生素、医药工业,氨基酸、有机酸、酶制剂、黄原胶等发酵工业,生化制品及微生物学科研等领域中的用量均很大,临床用于抗炎消肿,工业上用于皮革制造,生丝处理,食品加工。在国际市场上,胰蛋白胨也属于货紧价昂的短线品种之一。   胰酪蛋白胨质量标准及其检验标准:   常规各项理化指标:   1. 澄清度(磷酸盐、碱性沉淀):无沉淀、澄清   2. 2%水溶液:透明   3. 酸碱度:6-7   4. 氨基氮:≥3%   5. 色氨酸:≥0.8%   6. 胨含量:≥80%   7. 总氮:≥13%   8. 水份:≤5%   9. 灰份:≤6%   10. 氯化钠:≤0.2%胰蛋白胨特指用胰蛋白酶酶解酪蛋白生成的蛋白胨产物,与一般蛋白胨的区别在于酶解工艺处理上,属于水解度更高、胨分子量更小更均衡的蛋白胨。

  • 如何识别“真假鸡蛋”

    假鸡蛋最近被炒得火热了  可以整容、可以隆胸,可以改头换面,却不曾想连鸡蛋都可以造假。 假鸡蛋的蛋壳由碳酸钙、石蜡及石膏粉造成。而蛋清、蛋白则主要由海藻酸钠,再加上明矾、明胶、色素等造成。蛋清是将海藻酸钠加进水造成溶液后,不断搅拌而制成的。而蛋黄的主要成份同样是海藻酸钠液,再加入如柠檬黄一类的色素后,放进模具中,然后放入氯化钙溶液中凝固而成。长期食用这种假鸡蛋有可能会导致记忆力衰退、痴呆等严重后果  识别假鸡蛋方法:首先是摸,假鸡蛋蛋壳比较光滑,真鸡蛋不管是从视觉上还是手感上来说都比假鸡蛋粗糙一些;其次是看,煮熟以后,假鸡蛋的蛋白呈灰白色,真鸡蛋的蛋白呈奶白色;第三是闻,把鸡蛋打碎了来闻一闻,真的鸡蛋会有腥味,而假鸡蛋是没有的;第四是吃,在打鸡蛋的过程中,假鸡蛋黄很容易打进去以后就散了,而且在炒的过程中很难凝固,真的鸡蛋的蛋黄和蛋清都是分开的,在炒的过程中也很快就凝固了。

  • 鸡蛋可不能这样吃

    一、鸡蛋与豆浆同食降低营养价值人们经常食用豆浆冲鸡蛋,认为两者都富含蛋白质,食之对身体有益,从科学饮食角度讲,豆浆性味甘平,含植物蛋白、脂肪、碳水化合物、维生素、矿物质等很多营养成分,单独饮用有很好的滋补作用。但两者不宜同食。因为生豆浆中含有胰蛋白酶抑制物,它能抑制人体蛋白酶的活性,影响蛋白质在人体内的消化和吸收,鸡蛋的蛋清里含有粘性蛋白,可以同豆浆中的胰蛋白酶结合,使蛋白质的分解受到阻碍,从而降低人体对蛋白质的吸收率。

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