小鼠胚胎细胞

自去年10月开始，分子生物学家Katsuhiko Hayashi就陆陆续续收到了许多夫妻的邮件，这些夫妻大多人到中年，仍然在为了一件事情焦急：要一个孩子。其中有一位英国的更年期妇女，希望到他位于日本京都大学的实验室，在他的帮助下怀上孩子，她写道：“这是我唯一的愿望。”这些请求开始于Hayashi一篇文章的发表——他原以为只有发育生物学家才会对他的实验结果感兴趣。在体外条件下，利用小鼠的皮肤细胞创造可以发育成精子和卵子的原始生殖细胞（PGCs）。为了证明这些实验室培养的原始生殖细胞与自然发育而成的原始生殖细胞类似，他利用它们生成了卵子，进而创造小鼠生命。他表示，这个创造出来的小鼠生命仅仅是他研究的一个“副产品”，他的研究将意味着更多——利用不孕妇女的皮肤细胞为她们提供可受精的卵细胞。与此同时他还提出，男性的皮肤细胞也可以用来创造卵子，同样，女性的皮肤细胞也可以生成精子。（事实上，研究结果发表后，许多同性恋发邮件给Hayashi ，索要更多的信息。）尽管这是一项创新研究，但是公众的广泛关注还是令Hayashi和他的教授Mitinori Saitou感到非常惊讶。他们花了十多年不断挖掘哺乳动物配子产生的微妙细节，然后在体外条件下重新创建该过程——一切都是为了科研，而非医疗。现在他们的方法使研究人员能够创建无限的原始生殖细胞，这种在以前很难获得的珍贵细胞的正常供应有助于推动哺乳动物生殖研究。但是，当他们将这个科学挑战自小鼠到猴子，再到人类推进时，这一过程被公众定义为治疗不孕不育的过程，于是相关的道德争议随之出现。“毫无疑问，他们在小鼠身上给这一领域带来了重大的改变，” 洛杉矶加州大学的生育专家Amander Clark说，“但是，在这项技术展示它的实用性之前，我们必须讨论一下使用这种方式创造配子的伦理问题。”回到最初在小鼠体内，胚胎发育一周后，便出现约40个左右的原始生殖细胞。这个小小的细胞团进而在雌性小鼠体内形成成千上万的卵细胞，在雄性小鼠体内每天都能生成几百万个精细胞，并能够遗传小鼠的全套遗传信息。Saitou想要了解在这些细胞发育过程中受到了那些信号的控制。在过去的十年中，Saitou已经通过辛苦研究确定了几个基因——包括Stella, Blimp1 和Prdm14 ——这些基因的某种组合在某些时候对于PGCs的发育起到了至关重要的作用。利用这些基因作为标记，可以从其他细胞中筛选原始生殖细胞以观察这些细胞的变化。2009年，在日本神户的RIKEN发育生物学中心，他发现，当培养条件适当时，在精确的时间加入骨形态发生蛋白4（BMP4），可以胚胎干细胞转化为原始生殖细胞的。为了验证这一发现，他向胚胎干细胞提供高浓度的BMP4，结果显示，几乎所有的胚胎干细胞都变成了PGCs。他和科学家们都预计这一过程非常复杂。http://www.ibioo.com/data/attachment/portal/201308/25/095620gaqefeejnqejxuu3.jpg人造小鼠生殖细胞产生小鼠胚胎的过程（点击图片查看大图）Saitou的方法严格遵循了自然过程，这与其他从事类似研究的人形成了鲜明的对比，以色列魏茨曼科学研究所的干细胞专家Jacob Hanna说。许多科学家尝试通过信号分子轰击干细胞在体外创造特定类型的细胞，然后筛选细胞混合物得到他们想要的细胞。但是他们忽略了这些细胞的自然形成过程和这些人造细胞与自然形成细胞的相似程度。Saitou找出了形成生殖细胞所需的条件，去除多余的信号干扰并将每个过程的时间精确控制，给他的同事们留下了深刻的印象。英国谢菲尔德大学的干细胞生物学家Harry Moore将这种生殖细胞发育的精确重现视为一场“胜利”。到了2009年， Saitou在小鼠生殖细胞出现之前从外胚层取了一些细胞，这成了研究的起点。但是想要真正掌握这个过程中，Saitou希望从细胞培养开始。当时正值Hayashi从英国剑桥大学回到日本，和Saitou一样，Hayashi在该领域先驱Azim Surani英国的实验室里完成了4年的研究。Surani盛赞这两位科学家说，他们的“气质、风格和解决问题的方法能够相互补充”。 Saitou “处理事情时很有系统性、完成目标一心一意”，而Hayashi“工作时更有直觉、视角更广阔、处理问题方法相对更加宽松”，他说。“他们确实形成了一个非常强大的团队。”Hayashi加入了Saitou京都大学的团队，他很快就发现，那里不同于剑桥。在京都大学，Hayashi用在理论讨论上的时间比曾经少得多，而更多的时间都花在实验上。他说“在日本，我们只管‘做’，这有时是非常低效的，但有时又酝酿着巨大的成功”。Hayashi同样以外胚层细胞作为起点，但与Saitou不同的是，他试图培养一个能够产生原始生殖细胞的稳定细胞系。可惜这种方法没有奏效。Hayashi借鉴其他研究结果——一个关键调控分子(activin A)和生长因子（bFGF）可以将培养的早期胚胎干细胞转化成类似于外胚层细胞的细胞类型。这引发了Hayashi将这两个因素结合起来的想法，诱导胚胎干细胞分化为外胚层，然后采用Saitou之前的方法把这些细胞成为的PGCs。通过这种新的方法，他最终获得了成功。为了证明这些人造的原始生殖细胞是真实的拷贝，他们必须证明这些细胞可以进一步发育成精子和卵子。这一进程是非常复杂和难以理解的。所以研究小组将这一工作留给了自然——Hayashi将PGCs植入无法产生精子的小鼠的睾丸，观察这些细胞是否会发育。Saitou认为，这是可行的，但还是感到有些担忧。当实验进行到第3或4只小鼠时，他们发现小鼠的输精管里充满了精子。“这一切都发生得恰如其分，我知道他们会产生幼仔，”Hayashi说。研究小组将这些精子注入卵细胞中并植入雌性小鼠的胚胎，结果产生了大量的雌性和雄性后代。他们利用诱导多能干细胞（iPS）进行反复的实验，成熟的细胞被重新编程为胚胎状态。此外，精子被用于生产幼仔，证明它们具有基本功能——这是干细胞分化领域的罕见成就。Clark说：“这是整个多能性干细胞研究领域里在培养皿中生成全功能细胞类型少有的成功案例之一。”他们预计形成卵细胞更复杂，但是在去年，Hayashi在体外条件下制作有正常着色的原始生殖细胞并转入白化小鼠的卵巢，将产生的卵细胞体外受精后植入代孕。当透过幼崽半透明的眼睑看到黑色的眼睛时，他知道这一切又成功了。生殖细胞的回馈目前，许多研究人员已经能够复制验室培养原始生殖细胞的过程。人造原始生殖细胞特定用于表观遗传学研究：通过修饰DNA确定哪些基因表达。最常见的修饰就是为DNA碱基加上甲基，这些修饰在有些情况下，能够反映生物所经历的历史过程。与其它类型的细胞类似，表观遗传标记改变了原始生殖细胞在胚胎发育过程中的命运，但原始生殖细胞有个与众不同的特点，就是当它们发育成精子和卵子后，表观遗传标记被擦除。这就允许细胞创建能够形成任何类型细胞的受精卵。表观遗传微妙变化中出现错误将会导致不孕不育并出现器官故障，如如睾丸癌。Surani和Hanna的团队已经利用人造原始生殖细胞研究不同酶在表观遗传调控中的作用，也许有一天，能够解答表观遗传网络如何参与疾病调控。事实上，体外产生的原始生殖细胞可以为研究提供数百万个细胞，而不是供科学家研究了40个左右，这些细胞可以通过解剖早期胚胎获得。Hanna说：“这是一个大问题，因为我们这里有这些稀有的原始生殖细胞正在经历我们尚不了解的全基因组表观遗传变化。”“体外模型为科学家们提供了前所未有的方便，” Clark表示认同。临床意义但是Hayashi和Saitou没有办法向乞求帮助的不孕夫妻提供帮助。在这种方法被运用在临床之前，还有许多问题需要梳理。Saitou和Hayashi发现，虽然运用他们的技术所产生的后代通常似乎是健康和大量的，但这些后代产生的原始生殖细胞并生不完全“正常”。 第二代原始生殖细胞产生的卵细胞往往是脆弱、畸形的，并且从支持它们生长的组织上脱离。当受精时，卵细胞内部会分为三组染色体，而不是正常的两组，体外受精的成功率也只有正常原始生殖细胞的三分之一。哈佛医学院从事表观遗传学研究的Yi Zhang，使用Saitou的方法在研究中发现，体外受精过程中，人造的原始生殖细胞不能像自然状态下产生的原始生殖细胞一样，抹去它们的表观遗传标记。“我们必须要知道，这些都是PGCs的类似细胞，而不是真正的原始生殖细胞，”他说。此外，这项技术还存在两个大的挑战。首先是在不将PGCs放回睾丸或卵巢的前提下买入和使它们变成成熟的精子和卵子，Hayashi目前正在试图破解PGCs生成卵子或精子的生物信号，使人工培育条件下完成这一阶段成为可能。但最可怕的挑战是在人体重复上述所有的工作。该小组已经在利用Saitou找到的关键调控基因来调整人类的iPS细胞，但是Saitou 和Hayashi都知道，人类的信息调控网络不同于小鼠。此外，Saitou有无数的小鼠胚胎进行解剖，但无法在人类胚胎进行

关键词（必填项目）：胚胎干细胞培养目的（必填项目）：正确规范胚胎干细胞培养背景知识（选填项目）：无。原理（选填项目）：无主体内容：目录一、细胞二、一般培养-保持胚胎干细胞处于未分化状态培养基细胞复苏冻存细胞明胶包被细胞传代三、体外分化培养基包被有多聚鸟氨酸/纤维结合蛋白的培养板（使用或不使用盖玻片）体外分化方法四、移植细胞的准备细胞多能性胚胎干细胞产生于小鼠胚泡1．表达绿色荧光蛋白（EGFP）的B5-ES细胞。由Dr. Nagy的实验室制备。2．D3-ATCC; CRL-1934. 我们得到时大约传了17代。3．J1-由Dr. Jaenish的实验室友情提供。我们得到时大约传了7－9代。4．J1rtTA-rtTA表达J1细胞，由Dr. Jaenish的实验室友情提供。5．表达黄色荧光蛋白的YC5-ES细胞，由Dr. Nagy的实验室提供。一般培养--维持ES细胞处于未分化状态ES细胞培养用含有ESGRO（白血病抑制因子）的高糖培养基来阻止细胞的分化。为细胞提供包被有0.1％明胶的平板作为粘附细胞的基质。建议每2－3天从达到80％－90％融合的平板按1：8的比率传代细胞一次，细胞传代以后，在将细胞接种在0.1％明胶包被的培养皿之前，通过预先将细胞接种在没有经过包被的组织培养板2个小时，使分化细胞粘附，从而将分化和未分化细胞分开。将细胞全程置于37℃，5％CO2，100％湿度条件下培养。培养基ES:配制一20×不含DMEM，HS，ESGRO的溶液（该溶液也能用于EB培养基--见下文）。分装在50ml FALCON管中，（稀释为2×，每管42ml），贮存在-20℃。通过将21ml该溶液，HS和ESGRO加入450mlDMEM中制备培养基，0.2μm滤膜过滤。贮存于4℃。 注：一瓶DMEM是500ml。贮存液 DMEM(高糖) [/s

美国南加州大学科学家表示，他们新发现的名为IQ－1的小分子在防止胞胎干细胞分化成一种或多种特殊细胞方面具有决定性作用，该研究成果有望帮助人们开发出无污染大规模培养胚胎干细胞的方法。有关研究刊登在美国《国家科学院院报》网站上。　　干细胞疗法是许多科学家研究的热门项目，大规模培养胚胎干细胞是干细胞疗法成功发展的前提。目前，实验鼠纤维原细胞饲养层是唯一被证明为能够培养胚胎干细胞的方法。在此方法中，必要的化学信号能促使胚胎干细胞不断分裂而不分化。然而，南加州大学凯克医学院医学和药学教授迈克尔卡恩博士表示，人体胚胎干细胞用饲养层培养会遭受实验鼠糖蛋白标识的污染，如果将培养的干细胞用于人体，或许出现可怕的免疫反应。　　作为发现IQ－1小分子的研究小组主要研究人员，卡恩表示，他们发现的小分子帮助人们向实现无实验鼠纤维原细胞饲养层培养胚胎干细胞的方法往前迈进了一步。对于IQ－1的工作原理，卡恩解释说，Wnt通道（也就是细胞信号通道）对干细胞具有分叉效应（dichotomouseffects），IQ－1能够在阻断Wnt通道一个分叉的同时，增强来自Wnt通道另分叉的信号。这样，人们可以从根本上维持干细胞的生长和所需的力量。　　卡恩认为，如果人们能够创造出一个化学物质环境的系统来培养人体胚胎干细胞，那么就可以避免干细胞受污染的危险，它将让科学家的工作更加容易，这是研究小组的奋斗目标。凯克医学院干细胞和再生医学中心主任马丁佩拉博士表示，卡恩他们的研究让人们能够观察胚胎干细胞内部分子控制机制，其新发现有望帮助人们开发出大规模繁殖纯胚胎干细胞的技术。

10月6日出版的新一期英国《自然》杂志刊登报告说，美国研究人员用人类卵细胞培养出了胚胎干细胞，虽然这项成果还存在一些缺陷，但已是“黄禹锡造假事件”后最接近培养出正常人类胚胎干细胞的成果。这一成果可能引起有关克隆问题的新一轮大争论。http://www.bioon.com/biology/UploadFiles/201110/2011100911202350.jpg（图片来自原文）将体细胞中的遗传物质植入卵细胞中，将其培育成为胚胎干细胞甚至最终培养出新的个体，就是常说的克隆技术，著名的克隆羊“多利”就是用这种技术得到的。2004年，韩国研究人员黄禹锡曾宣称用这种方法培育出了人类胚胎干细胞，引起一时轰动，但后来证明这是一起造假事件。此后，许多科研人员都进行了这方面的尝试，但一直没有成功。相关研究面临的障碍是，如果先将人类卵细胞中的遗传物质去掉，再植入另一个体细胞的遗传物质，这样得到的卵细胞分裂几次后就会停止发育。而美国纽约干细胞基金实验室等机构的研究人员报告说，如果留下一部分原有卵细胞中的遗传物质，再另外加上体细胞的部分遗传物质，这样得到的卵细胞可以发育到具有70至100个细胞的囊胚阶段，达到可以提取胚胎干细胞的阶段。胚胎干细胞具备发育成各种组织和器官的潜力，如果能够培育出人类胚胎干细胞，就意味着能够培育出属于某个人自己的组织和器官，可用于个性化的医疗。当然这也会引起有关克隆人的争议。本次研究虽然能够培育出人类胚胎干细胞，但也存在一些缺陷。最重要的是这些细胞中存在3组染色体，即卵细胞原有的1组染色体和来自体细胞的2组染色体，而正常的人类细胞只有2组染色体。因此，这种人类胚胎干细胞还不具备实用性。但是《自然》杂志同时发表的社论指出，这是自“黄禹锡造假事件”后最接近培养出可用人类胚胎干细胞的成果，在大方向上证明这仍然是一条可行的道路。社论认为，这将引起新一轮的有关克隆人的大争论，甚至提出联合国有必要开始考虑制订监管克隆的规章制度。

[size=4]人类体细胞克隆胚胎是福还是祸？！进行人类治疗性克隆研究，造福人类呢？还是制造克隆人的时代到来？福兮？祸兮？[/size]

中国科技网讯 从一个受精卵发育成多种功能的胚胎，细胞要经过上千次分裂和复杂的排列重组。据物理学家组织网6月3日报道，霍华德·休斯医学研究院珍妮莉娅法姆研究学院开发出一种最新的成像技术，能以前所未有的速度和精确度看到这一过程，让人们能追踪胚胎成形时每个细胞在几天甚至几小时内的变化。相关论文发表在6月3日出版的《自然·方法学》上。 研究人员演示了一段约20小时的果蝇胚胎发育视频。在视频中，生物结构逐渐出现，从一小团简单的细胞簇慢慢变长，变成上万个细胞紧紧挤在一起的拉长的小胚胎，然后在新形成的肌肉收缩舒张下开始颤动，此时胚胎仅有半毫米长。此外，论文中还有一段果蝇胚胎中枢神经系统完整的发育视频，跟踪了单个细胞发育出感觉器官、脑叶及其他结构的过程，由于分辨率足够高，还能看到神经轴突尖端迅速变化。 发明该技术的珍妮莉娅法姆研究学院的菲利普·凯勒说，要理解一个单细胞怎样变成了复杂的组织，真实看到这一过程非常重要。传统光学显微镜速度太慢，无法跟踪细胞在生命初期的迅速变化，也容易破坏一个活胚胎，只能通过把多阶段、多组织的照片拼在一起，才能推测发生的变化，但“细胞分裂重组每次都不一样，这种观察方法可能会产生误导”。 新技术基于一种高速非侵入式光学显微镜，称为SiMView光层显微镜，能从4个角度同时拍摄图像，不仅能跟踪细胞运动，还能对发展过程进行数量分析。该显微镜由凯勒小组和德国的欧洲分子生物实验室合作开发，攻克了传统光学显微镜的两个难题：一是光源对样本造成的伤害，二是对海量数据进行处理分析。 大部分光源都会伤害细胞，使其中的荧光标记消失。研究小组设计的照明技术是一种激光扫描层，一次照射样本极薄的一层以减少伤害，由探测仪记录下被照亮的部分。光层来自两个相反方向，并用两个探测仪来探测荧光，照明与探测相结合，提供了4个不同的观察角度。不仅能避免由于光散射而造成的模糊，还将图像采集速度提高了50倍。 要让照亮样本和探测荧光在时间、位置上协调一致，时机吻合极为重要，光层交叉通过会造成图像模糊，发光间隔仅几毫秒。为了保持精度，SiMView还安装了实时调节的电子系统。 显微镜每秒会收集350Mb的数据，一个样本一天要产生海量数据，而不同条件或不同基因的发育对比实验，所要求的数据比这还要多好多倍。为此，研究人员开发出一种新的计算方法，能识别并跟踪显微镜视频中单个细胞并自动分析。这些都构成了拍摄活样本这一完整技术框架的必要组成部分。 凯勒表示，他们还将继续改进显微镜使计算过程更加有效。今后不仅能追踪胚胎中细胞的一代代世系，还可能控制发育以探索发育机制，并研究其他更大更复杂样本的发育过程。（常丽君） 《科技日报》（2012-06-05 二版）

大神们，帮忙推荐台主要针对小鼠骨髓细胞数检测的仪器，再一个就是能对小鼠血细胞的种类分类，计数。要求不高。。但是这种针对性的仪器还这难找。。

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各国争相发展的重点项目　　iPS技术，即诱导性多能干细胞技术，是一种将成体成熟、分化的体细胞重编程获得类似胚胎干细胞的新兴技术。2007年11月美国和日本科学家分别独立宣布可将人类皮肤细胞转化为iPS细胞。这一发现被《自然》和《科学》杂志分别评为2007年第一和第二大科学进展。之后，iPS细胞研究迅猛发展，不同的国家和实验室纷纷报道了多种方法建立的iPS细胞系。就连世界第一只体细胞克隆动物多利羊的培育者伊恩·威尔莫特也宣布放弃人类胚胎干细胞克隆研究，转而进行 iPS 细胞研究，因为他认为这种细胞比胚胎干细胞更具潜在优势。　　我国连续多年将干细胞研究列入“863”、“973”、国家自然基金重点项目。国务院2006年发布的《国家中长期科学和技术发展规划纲要（2006-2020年）》中，干细胞作为五项生物技术之一成为未来15年我国前沿技术的重点研究领域。　　致瘤风险浮出水面　　Yamanaka研究组在《自然·生物技术》上发表的文章显示，用iPS细胞诱导的神经干细胞，即使不含c-Myc（曾被认为是导致肿瘤的主要原因），在植入NOD/SCID免疫缺陷小鼠后仍有很强的致瘤性，甚至高于胚胎干细胞。　　　他们共研究了36个iPS细胞克隆，在诱导方式上，有些诱导剂配方中含有c-Myc基因，有些没有，因此具有较好的代表性。同时他们选择了3株胚胎干细胞作为对照。在45周的观察中，移植胚胎干细胞来源神经干细胞的34只小鼠有4只长出肿瘤。在100只移植胚胎成纤维细胞来源的iPS神经干细胞小鼠中34只发现肿瘤，概率和胚胎干细胞相当。在55只移植成人成纤维细胞来源的iPS神经干细胞小鼠中46只发现肿瘤，概率远高于胚胎干细胞。在36只移植肝细胞来源的iPS神经干细胞小鼠中10只发现肿瘤，概率高于胚胎干细胞。8只移植胃上皮细胞来源的iPS神经干细胞小鼠中未发现肿瘤。病理学检查证实肿瘤均为畸胎瘤，部分为恶性畸胎瘤。　　研究还发现，以前认为致瘤性很强的c-Myc在去掉后并没有减少iPS神经干细胞的致瘤性，相反以前认为没有致瘤性的Nanog基因却可以明显增强iPS神经干细胞的致瘤性。　　这次试验的另一个意外结果是并未发现在生成的肿瘤细胞中有c-Myc或其他基因的激活。以前的观点认为，转入的癌基因是iPS致瘤性的基础，只要在iPS细胞诱导成功后通过各种方法去除已完成使命的癌基因即可使iPS细胞免于致瘤性。这次试验的结果无疑给这些想法留下了阴影，而且使iPS致瘤的机制更加扑朔迷离。

[em0808]我要做的是小鼠的卵细胞的电镜，但是我所能获得的卵细胞的数量有限的，不知道有什么技巧可以保证细胞能包埋进去，听说有人做了好几次就没有作出来呀 急哦 谢谢大家了

1. 利用诱导性多功能干细胞构建出小鼠精子祖细胞日本京都大学研究人员通过体外诱导胚胎干细胞(ESCs)和诱导性多功能干细胞(iPSCs)，形成原始生殖细胞样细胞(primordial germ cell-like cells, PGCLCs)，最后进一步分化，通过体内植入不能生育的小鼠睾丸中，产生了外观正常的精子。将这些精子注射到雌性小鼠的卵细胞中，不久雌性小鼠生出了健康的小鼠后代。2. 鉴定出阿尔茨海默病Alzheimer's disease的生物标记美国研究人员利用一种一般性和无偏差的方法---组合文库筛选(Combinatorial Library Screening)来鉴定出诊断上有用的抗体，而避免进行抗原鉴定。该方法涉及利用非自然的合成分子组合文库对病人血清样品和对照样品进行比较性筛选，这样就可鉴定出病人血清样品中要比和对照样品中保留极其多IgG抗体的分子，随后利用这些分子作为捕获试剂来捕获诊断上有用的抗体。研究人员利用多发性硬化症(multiple sclerosis)小鼠模式动物和证实这种方法的实用性，并利用该方法在阿尔茨海默病小鼠模式动物中鉴定出两种候选的IgG抗体生物标记。3. 发现干细胞多能性的选择性剪接开关加拿大多伦多大学研究人员发现了进化上保守的特异的FOXP1选择性剪接开关,可调控干细胞的多能性。研究人员发现这种剪接开关产生的FOXP1胚胎干细胞特异性异构体，与典型的FOXP1异构体相比，着不同的DNA结合性质。选择性剪接事件改变了FOXP1胚胎干细胞特异性异构体的DNA结合性质，促进维持多能性所需的转录因子基因的表达，包括OCT4、NANOG、NR5A2和GDF3，同时抑制胚胎干细胞分化所需的基因。同时，研究小组还发现FOXP1胚胎干细胞特异性异构体促进体细胞高效重编程为诱导性多功能干细胞(iPSC)。4. 追踪神经胶质瘤的起源美国研究人员利用双标记嵌合分析(Mosaic Analysis with Double Markers，MADM)---该技术的精髓在于用绿色荧光蛋白明确标示突变细胞，还有一个关键特色就是无论一个突变的绿色细胞何时产生，总是同时产生一个正常的红色细胞---来分析神经胶质瘤(glioma)的起源。他们将胶质瘤病人体内发现的两种流行突变p53与NF1导入神经干细胞(neural stem cells, NSCs)中，对源自神经干细胞的所有细胞系所作的进一步分析清楚地显示了少突胶质前体细胞(Oligodendrocyte precursor cells,OPCs)是该肿瘤的来源细胞，因为任何可见的肿瘤标志可被检出之前，变异的绿色少突胶质前体细胞的数量大大超过了其正常的红色对应物数量，足足超了130倍。为了进一步证实这点，研究人员也将p53与NF1突变直接导入小鼠少突胶质前体细胞，结果发现这些小鼠产生神经胶质瘤，从而再次证实少突胶质前体细胞是神经胶质瘤的来源。5. 发现新的组蛋白修饰方式美国芝加哥大学Ben Mary癌症研究所研究人员在细胞中筛查出了67个新组蛋白修饰标记，并从中发现了一种新型组蛋白翻译后修饰方式---赖氨酸巴豆酰化(lysine crotonylation)修饰。通过进一步的结构及基因组定位分析，研究人员证实氨酸巴豆酰化修饰是一种进化高度保守，且在生物学功能上完全不同于组蛋白赖氨酸乙酰化的蛋白质修饰方式。研究人员还发现在人类体细胞和小鼠精子细胞基因组中，组蛋白赖氨酸巴豆酰化分布于基因活性转录启动区域或增强子上。在减数分裂后的精子细胞中，赖氨酸巴豆酰化高丰度集中在性染色体上，被用来标记睾丸特异性基因。

日本理化学研究所（REKIN）的小保方晴子等人 2014 年年初在《自然》上发表了两篇干细胞研究领域的重磅论文，但很快被质疑其研究存在学术不端。日本理化学研究所和《自然》（Nature）随后分别展开调查。日本理化学研究所在 4 月 1 日认定小保方晴子篡改及捏造实验数据。但目前对于该研究的争议还有一个关键性的问题尚未解决：小保方晴子等人在研究中观察到的现象究竟存在吗？或者说 STAP 真的存在吗？日本媒体 6 月 3 日发表的报道称，在对 STAP 实验中用到的细胞进行了基因检测后，结果显示，不存在。根据小保方晴子等人的研究结果，对体细胞进行简单的酸浴刺激，或者施加物理应激，就可以得到 STAP 细胞。这些细胞具有和胚胎干细胞相同的特性。对这些细胞进行进一步操作后，它们也可以形成可自我更新的干细胞系，这就是 STAP 干细胞，它们具有和胚胎干细胞系几乎相同的特性。之前《自然》上发表的论文中报告称，小保方晴子所在的实验室共创建了 8 个 STAP 干细胞系。今年3月，论文合作者之一、山梨大学的若山照彦曾要求文章的第一作者向其提供用某一品系的小鼠细胞制备的 STAP 细胞，但当若山照彦对细胞进行了简单的遗传分析后发现，文章的第一作者小保方晴子给他的干细胞，是由其他品系的小鼠细胞制备的。这表明这些细胞可能受到了污染。但是若山照彦并没有发现《自然》发表的论文中提到的 STAP 干细胞系存在问题。为了验证他的结论，若山照彦将 20 个干细胞系（包括论文中提到的 8 个），寄送给了一家匿名的独立遗传分析小组进行检测。根据日媒援引多方信源的报道，这次检测的结果已经送回理研。检测结果显示，所有 STAP 干细胞系都与论文声称的小鼠品系不符，这一结果对 STAP 现象是否存在提出了质疑。若山照彦表示，他将尽快召开媒体发布会公布相关检测细节。另据报道，日本理化所将有可能支持小保方晴子继续研究工作，设法重演STAP结果。

食品安全国家标准 小鼠精原细胞或精母细胞染色体畸变试验

原文是Purton, L.E., and Scadden, D.T. (2007). Limiting Factors in Murine Hematopoietic Stem Cell Assays. Cell Stem Cell 1, 263-270.发表在2007年cell stem cell 杂志上，最近由于要进行相应的课题研究，拿来精读了一番，做了一个笔记，发上来和大家分享，由于初涉小鼠造血干细胞这个领域，肯定有很多地方理解不全和错误，请大家指正。下面是我的精读笔记：小鼠造血干细胞研究方法综述一．关于HSC 免疫表型1. Thy1.1lo,Lin-Sca-1+Cells:其缺点是Thy1.1只表达于C57BL/Ka-Thy1.1小鼠，不表达于常用的C57BL/6小鼠；2. Lin- c-Kit+ Sca-1+ Cells（LSK）：异质性，含有祖细胞，HSC含量不超过10%；结合CD34和Flt3可以分为long-term repopulating HSCs (LKS+ CD34- Flt3-) ，short-term repopulating HSCs (LKS+ CD34+ Flt3-) ，以及multipotent progenitors(LKS+ CD34+ Flt3+)；3.荧光染料标记HSC: Rhodamine 123, Hoescht 33342, 以及Side Population，Rhodamine 123为线粒体染料，Hoescht 33342为DNA染料，HSC能够更多地将这两种染料泵出细胞外，所以染色较浅；4. SLAM Family Members：SLAM antigens (CD150+ CD244-CD48- cells)，其优点是不像Thy1.1和Sca-1其表达受到品系和发育阶段等的影响，在更多的种系的小鼠中适用二．克隆形成实验：主要反映的是祖细胞的造血能力，不反映HSC，检测T系和B系需要另外特定的培养条件；三．Cobblestone Area-Forming Cells/Long-Term Culture-Initiating Cells，鹅卵石样区域形成细胞实验/长期培养-启动细胞实验：体外检测更早期造血干/祖细胞的方法，但由于feeder layers和培养条件不同，实验结果在不同实验室间稳定性较差，对于其是否真正能检测造血干细胞也比较有争议，不过在一些情况下，比如归巢（homing）或植入（engraftment）有缺陷导致体内造血重建实验无法进行时，这两个方法是较好的替代方法；四．Colony-forming unit-spleen (CFU-S)脾集落单位形成实验：属于短期（1-3周）体内重建实验，检测的干祖细胞比体外CFC早，但比HSC晚；五．long-term repopulating assays，长期重建实验，包括：1. competitive repopulation assay：竞争重建实验：属于定性或者半定量研究HSC重建能力的方法，不能区别是HSC的数量还是质量造成的结果差异，得到的结果为RU即重建单位；2. limiting dilution assay：统计的指标是造血重建失败的小鼠数目，采用泊松分布来计算HSC的频率，得到的结果为CRU即竞争重建单位；Stem Cell公司的免费软件L-Calc,可用于分析实验结果。limiting dilution assay有两种方法：1CRU assay，采用最小数的HSC作为竞争细胞，可以在单细胞水平检测HSC；2也称为CRU assay，采用标准的，足量的HSC作为竞争细胞，不能在单细胞水平检测HSC；3serial transplant assay，多代移植，最为严格的检测造血干细胞的方法；六：Limiting Dilution Assays需要考虑的几个重要因素：1.竞争细胞：1compromised bone marrow，即连续两代重建成功的骨髓细胞，比较耗时2W41/W41受体小鼠：c-kit基因发生突变，具有更加敏感的宿主微环境，能够检测更少的植入的HSC，不需要另外的HSC作为支持细胞（竞争细胞）；3全骨髓细胞（whole bone marrow cells）：经验表明2 X105 competing bone marrow cells比较适合2.受测细胞（Test Cells, Unknown HSC Potential）：有人用LKS+ CD34- cells，但作者认为全骨髓细胞最好，原因是这种方法是在功能上评价HSC，避免了HSC在基因修饰的小鼠中免疫表型发生变化导致的结果的不可靠，在作者实验室通常采用的受测全骨髓细胞数为8 X 103到2 X106；3.重建失败的标准：现在一般认为受测细胞的重建比例小于1%为重建失败；在重建比例中，红细胞是不计算在内的，因为其不表达CD45,但一般认为只要其他系重建成功，红系应该也会重建成功；4.分析重建的时间点：看长期造血重建，最少要16周，最佳是六个月；5.其他考虑因素：归巢，HSC各系分化阻滞或减弱，祖细胞增殖动力学特性的改变，造血微环境对HSC的影响等等七．区分供体，受体的遗传学标志：最常用的是CD45.1,CD45.2系统，还有可以通过性别（Y染色体）来区分。

TAG: ips 冈野荣之 干细胞 绒猴 http://img.antpedia.com/attachments/2010/12/27501_201012101146281.jpg　　据物理学家组织网12月8日报道，日本研究人员称，他们利用诱导多功能干细胞（iPS）使一只瘫痪小猴的运动能力恢复到接近正常水平，这只小猴因为脖子以下脊椎受伤而不能正常运动。　　日本东京庆应义塾大学冈野荣之教授称，这是世界上第一个在小型灵长类动物身上用干细胞修复脊椎损伤的例子。此前，他和研究小组曾用相似方法，帮一只小鼠恢复了运动能力。　　研究人员移植了四种基因到人体皮肤细胞，生成诱导多功能干细胞，然后再把诱导多功能干细胞注射到一只瘫痪的绒猴（美洲产小型长尾猴）体内。冈野荣之说，考虑到治疗最佳时机，研究人员在绒猴受伤后第九天进行了注射，这是最有效的时机。在随后的两到三周内，绒猴开始活动它的四肢。“6周以后，它恢复到了又能到处蹦跳的水平，这已经非常接近于正常水平。它用前肢抓住物体的力量也恢复到了80%。”　　但冈野荣之说，虽然用人类胚胎干细胞作为治疗癌症和其他疾病具有很大潜力，但要取得能发育成几乎所有组织的细胞，就要破坏人类胚胎，因此胚胎干细胞研究面临诸多争议，并受到宗教保守人士的反对。而日本研究人员的新研究为在人类身上使用类似医疗技术开拓了道路。

榜样的力量是无穷的。每个领域都有取得杰出成就的成功人士，他们也是后生崇拜学习的偶像。科研领域也不例外。作为目前最热门的研究领域--干细胞，该领域的大牛都有谁？他们都在做什么？笔者总结了一下这个领域的牛人，分为国际篇、华人篇和国内篇三部分介绍。本文仅代表笔者的个人观点，欢迎补充。一 、国际篇http://www.bioon.com/biology/UploadFiles/201103/2011030320555014.jpg山中伸弥 （Shinya Yamanaka）http://www.gladstone.ucsf.edu/gladstone/site/yamanaka/5年前，提起Shinya Yamanaka，可能只有做胚胎干细胞的人略有耳闻，而现在他的名字在科研领域可谓是家喻户晓。虽然在iPS之前，他也做出了一些重要的工作，如发现Nanog和Eras在小鼠胚胎干细胞中的作用(2003，Cell；2003，Nature)，但这些跟iPS相比，再好的工作光芒都会被掩盖，即使是CNS（Cell，Nature，Science）级别的工作。传统的观点认为核移植是获得个体特异的多能干细胞的主要途径，但该方法技术难度高，成功率低，至今没有获得人的核移植胚胎干细胞。笔者至今仍记得2007年初（刚进实验室）看到Shinya Yamanaka于2006年发表在Cell上关于iPS的论文时的兴奋心情。我立刻意识到这项工作的重要性，虽然他们最初的结果并不完美，当时获得的iPS细胞按现在的标准只能算是半成品，因此部分人对这项工作的看法是半信半疑。直到一年后，Shinya Yamanaka和Rudolf Jaenisch同时在Nature上报道获得可以生殖系传递的iPS细胞，基本上打消了人们对这个发现的质疑，而随后越来越多的工作进一步证实这个发现。虽然这两年内他的产出不多（2010年有分量的工作只有一篇PNAS），但仅凭2006年那篇论文已经使他成为诺贝尔奖最热门的候选人。http://www.bioon.com/biology/UploadFiles/201103/2011030320561312.jpgRudolf Jaenischhttp://www.wi.mit.edu/research/faculty/jaenisch.html提到Rudolf Jaenisch，在干细胞领域可谓是人尽皆知。1967年从德国慕尼黑大学获得博士学位，现就职于美国麻省理工学院（MIT）的whitehead 研究所，他是该研究所的创始人之一。Rudolf Jaenisch在一系列领域都做出了有影响的工作，包括基因敲除小鼠、表观遗传学研究、核移植、iPS等，并将这些领域的几乎所有的重要问题都解决，唯一的遗憾是自己开创的领域不多。笔者有幸听过一次他的讲座，也同他有过简短的交谈，给人总体印象是一个典型的德国人，比较严肃。他曾经担任过国际干细胞学会的主席。http://www.bioon.com/biology/UploadFiles/201103/2011030320570463.jpg他的许多学生都成为优秀的科学家，如诺华（中国）生物医学研究有限公司的副总裁李恩；近年内的学生有哈佛大学的Konrad Hochedlinger、Alex Meissner 和Kevin Eggan、斯坦福大学的Marius Wernig以及即将去以色列任职的Jacob Hanna等。他的学生无疑是最成功的"牛二代"。http://www.bioon.com/biology/cell/476456.shtml

胚胎干细胞实验虽然具有很高的医疗价值，但也由于伦理问题而饱受争议。英国《每日邮报》7月23日报道，有关英国多家实验室正在进行人兽杂交胚胎干细胞实验的新闻于近日曝光，在政界和学界引起强烈反响。制造150多个杂交胚胎根据《每日邮报》目前掌握的数字，英国多家实验室在过去3年中一直秘密进行人兽杂交胚胎的实验，并且已经制造了150多个同时包含人类和动物基因的杂交胚胎。这些实验都是在《人类受精与胚胎学法案》颁布之后实施的，目的据称是为了通过胚胎干细胞的研究为多种疾病寻找有效的疗法。这一消息曝光后立即引起了英国社会的广泛关注。在英国议会质询会上了解到这一事件的议员阿尔顿勋爵表示，胚胎干细胞实验无论是从伦理上还是科学上都无法成功，而人兽杂交的干细胞胚胎实验更是无法容忍。“科学家对这一实验唯一能给出的解释是：如果你们让我们做下去的话，我们就会向你们证明它的疗效。但我认为这完全是感情上的敲诈。毕竟到目前为止，所有80种干细胞治疗方法全部来自成年人的干细胞，而不是胚胎干细胞。”是否正当引发争议英国公益组织“生殖伦理学评论”的约瑟芬·昆塔瓦莱告诉记者：“为什么他们要躲避公众的视线呢？如果他们所做的是正大光明的事情，我们也就根本不需要通过议会问询的方式才能了解真相了。”很多科学家“为了实验而实验”，这根本不是正确的科学态度。科学界的反应略有不同。罗宾·洛威尔·巴奇教授来自英国医学研究理事会的国家医学研究院，他认为，近期披露的人兽杂交胚胎实验并不足虑，因为根据相关法律，这些胚胎必须在创造后14天内销毁；相反，更值得人们警惕的是那种将人类基因植入动物胚胎体内的实验。2008年颁布的《人类受精与胚胎学法案》使多种杂交物种合法化，并赋予伦敦国王学院、华威大学等3所研究机构进行相关实验的权利。所有实验目前均因为经费不足而终止，但科学家相信这一领域具有光明的未来。（来源：现代快报）

胎盘亚全能干细胞定义： 　　亚全能干细胞自胚胎形成的第5到7天开始出现，能分化形成200 多种人体组织器官细胞，但不能形成一个完整的人体。胎盘亚全能干细胞是来源于新生儿胎盘组织的一族亚全能干细胞，其在发育阶段与胚胎干细胞接近，具备分化形成三个胚层的组织细胞的能力，但不会形成畸胎瘤。 　　胎盘亚全能干细胞的主要特性与功能： 　　胎盘亚全能干细胞是取自胎盘组织的一类亚全能干细胞，胎盘亚全能干细胞具有以下特性： 　　1. 具有强大的增殖能力和多向分化潜能，在适宜的体内或体外环境下具有分化为间充质干细胞，上皮干细胞、神经干细胞、肝干细胞，肌细胞、成骨细胞、软骨细胞、基质细胞等多种细胞的能力。可以用来修复受损或病变的组织器官，治疗心、脑血管疾病、神经系统疾病、肝脏疾病、骨组织病、角膜损伤、烧伤烫伤、肌病等多种疾病。 　　2.具有免疫调节作用，通过负性免疫调节功能，抑制机体亢进的免疫反应，使机体免疫功能恢复平衡，从而可以用来治疗造血干细胞移植之后的免疫排斥反应以及克隆氏病、红斑狼疮，硬皮病等自身免疫系统疾病。 　　3.胎盘亚全能干细胞定向培养的间充质干细胞是人体微环境的重要组成部分，移植间充质干细胞可以改变造血微环境，重建免疫系统，促进造血功能恢复，与造血干细胞共移植能显著提高白血病和难治性贫血等的治疗效果。 　　4.具有来源方便，细胞数量充足，易于分离、培养、扩增和纯化，传代扩增30多代后仍具有干细胞特性。 　　胎盘亚全能干细胞的用途： 　　胎盘作为理想的亚全能干细胞来源，在抗衰老及疾病治疗领域显示了其独特的功能，治疗疾病种类如下： 　　心脑血管系统疾病 　　糖尿病 　　肝肾损伤 　　脑及脊髓神经损伤 　　自身免疫性疾病 　　移植物抗宿主病 　　与造血干细胞共移植治疗血液病 　　缺血性血管病 　　肺及其它组织器官纤维化 　　抗衰老，恢复健康体态 　　胎盘亚全能干细胞的储存流程： 　　在新生儿娩出、胎盘剥离子宫排出后，由接生的医生尽快按照干细胞库胎盘标准采集规程进行胎盘的采集，然后放置在干细胞库特定的装置工具中，在限定时限内运送到干细胞库，由专业的技术人员进行亚全能干细胞的分离、提取、培养、检测等技术流程，直到根据最终检测结果来确认所获得的干细胞是否具有长期保存的价值。 　　保存和期限 　　目前国际上通用的干细胞保存技术是将获得的干细胞储存在-196℃深低温状态，医学研究与临床实践证明保存一百多年的细胞仍然具有活性。干细胞保存已有几十年的历史，胎盘干细胞库在与客户签订的合同期限内对干细胞库中所保管的胎盘亚全能干细胞活性负责。 　　安全性 　　胎盘的采集简便易行，不会引起母亲和新生儿任何不适的感觉或产生任何不良的影响。过去胎盘通常作为废物丢弃，而从胎盘中提取亚全能干细胞进行保存，是宝贵的生命资源再生。 　　而干细胞行业数据显示，胎盘亚全能干细胞基因稳定、不易突变，动物实验证明无致瘤性，使用安全可靠，对适应症范围疾病治疗效果好，优于传统医疗手段。 　　胎盘亚全能干细胞的优势 　　1.取材方便，原料来源充足，是生命资源的再生。 　　2.分化能力强可以定向诱导分化为间充质干细胞、血管干细胞、上皮干细胞、神经干细胞和肝干细胞等多种干细胞。 　　3.数量充足，使用方便，增殖能力强，培养后数目可达10亿，可以供多人多次使用。 　　4.在人群中使用不需要配型，不会产生免疫排斥反应，同时，血缘关系越亲近，生物利用度会越高，使用的效果越好。 　　5.治疗疾病范围广，抗衰老，恢复健康体态，心脑血管系统疾病，糖尿病，肝肾损伤，脑及脊髓神经损伤，自身免疫性疾病，移植物抗宿主病等多种疾病。

[b][size=15px][color=#595959]丹参酮IIA[/color][/size][/b][size=15px][color=#595959] (TIIA)[/color][/size][size=15px][color=#595959]是中药丹参的主要脂溶性活性成分，具有延缓[/color][/size][b][size=15px][color=#595959]动脉粥样硬化[/color][/size][/b][size=15px][color=#595959](AS)[/color][/size][size=15px][color=#595959]的作用。[/color][/size][size=15px][color=#595959]TIIA还可以通过发挥抗炎和抗氧化作用来治疗帕金森病等神经系统疾病。[/color][/size][size=15px][color=#595959]然而，目前尚不清楚TIIA是否[/color][/size][size=15px][color=#595959]可以通过调节[/color][/size][b][size=15px][color=#595959]胞葬作用(e[/color][/size][size=15px][color=#595959]fferocytosis)[/color][/size][/b][size=15px][color=#595959]从而改善动脉粥样硬化。[/color][/size] [align=center] [/align] [size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959]该研究旨在[b]确定TIIA是否可以通过增强胞葬作用来减少脂质积累和治疗AS[/b]。[/color][/size] [size=15px][color=#595959]首先，对LDLR敲除(LDLR-/-)小鼠进行为期24周的体内实验，分别采用组织病理学染色、[/color][/size][size=15px][color=#595959]免疫[/color][/size][size=15px][color=#595959]荧光和Western blot实验从疗效和机制两部分进行验证；此外，利用细胞在体外再次验证。具体实验设计方案如下：在体内，以西方饮食（高脂肪饮食）喂养12周的LDLR-/-小鼠为AS模型，以正常饮食喂养的LDLR-/-小鼠为空白对照组。TIIA组和阳性对照组(阿托伐他汀，ATO)分别通过腹腔注射(15 mg/kg/d)和灌胃(1.3 mg/kg/d)干预12周。体外分别用ox-LDL (50 ug/mL)或ox-LDL (50 ug/mL) + TIIA (20 uM/L或40 uM/L)培养RAW264.7细胞。[/color][/size] [size=15px][color=#595959]采用Masson染色和油红O染色分别评价[/color][/size][size=15px][color=#595959]主动脉[/color][/size][size=15px][color=#595959]斑块和RAW264.7细胞泡沫细胞形成的病理变化。采用生化方法检测小鼠血脂水平。采用免疫荧光法检测斑块中凋亡细胞和胞葬作用相关信号的表达。采用RT-q[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]和Western blot方法观察小鼠主动脉和RAW264.7细胞中胞葬作用相关分子的变化趋势。还使用中性红法评估RAW264.7细胞的吞噬能力。[/color][/size] [align=center] [/align] [size=15px][color=#595959]与模型组比较，TIIA降低了血清TC、TG、LDL-C水平(p 0.01)，减少了小鼠主动脉富含脂质斑块的相对管腔面积(p 0.01)，增强了小鼠主动脉斑块的稳定性(p 0.01)，减少了ox-LDL诱导的RAW264.7细胞脂质堆积(p 0.01)，上调了ox-LDL诱导的RAW264.7细胞的胞葬作用相关分子表达，提高了胞葬作用率。[/color][/size] [align=center] [/align] [size=15px][color=#595959]TIIA可能[b]通过增强巨噬细胞的胞葬作用功能来减少脂质积累[/b]，从而治疗AS。继续深入研究TIIA使巨噬细胞在AS中保持[b]强吞噬和[/b][/color][/size][b][size=15px][color=#595959]消化[/color][/size][size=15px][color=#595959]吸收[/color][/size][/b][size=15px][color=#595959]的具体机制，可能会推动TIIA作为巨噬细胞胞浆作用的靶向治疗剂的进展。[/color][/size]

１１月下旬，美日两个研究小组几乎同时宣布成功地将人体皮肤细胞改造成了几乎可以和胚胎干细胞相媲美的干细胞——“ｉＰＳ细胞”，它也被通俗地称为“皮肤干细胞” 。它的诞生仿佛给沉寂一时的国际干细胞研究打入了一剂强心剂。 诞生仅一月有余，“ｉＰＳ细胞”相关科研成果和技术革新就屡见报端，一些国家及科学界对这种细胞表现出强烈的关注，纷纷制订相关的研究计划。 “ｉＰＳ细胞”到底有什么神奇之处，使国际干细胞研究出现了如此热闹的景象？ 科学家让普通体细胞“初始化”，使其具备干细胞功能，这就是“ｉＰＳ细胞”。“ｉＰＳ细胞”具有和胚胎干细胞类似的功能，却绕开了胚胎干细胞研究一直面临的伦理和法律等诸多障碍，因此在医疗领域的应用前景非常广阔。这一新技术也被权威科学杂志《自然》、《科学》分别评为今年第一大和第二大科学进展。

日本东京大学的研究人员宣布，他们开发出了用诱导多功能干细胞（iPS细胞）制造血小板的技术，并通过动物实验确认了制造出来的血小板具有止血功能。iPS细胞是具有较强分化潜力的干细胞，由皮肤细胞等体细胞经基因改造“诱导”发育而成。培养这类细胞不需要利用人类早期胚胎，而且可以无限增殖，因此新技术有望用于大量生产输血用的血小板。东京大学副教授江藤浩之率领的研究小组，在11月22日的美国《实验医学杂志》（Journal of Experimental Medicine）月刊上发表论文说，他们首先利用人体皮肤纤维组织母细胞和脐带血细胞制造出iPS细胞，然后加入几种血液细胞增殖因子和营养细胞，培养出能够制造血小板的巨核细胞，最终制造出血小板。研究人员将制造出的血小板输给小鼠，发现血小板集中到受伤的血管上，形成血栓，正常发挥了血小板的功能。研究人员使用了与癌症有关的cMyc基因，能够高效制造巨核细胞并生产血小板。由于血小板中不存在含有遗传信息的细胞核，而且混杂其中的其他细胞的细胞核可以通过照射放射线和过滤去除，所以临床应用时不会有癌变的危险。血小板是血液细胞之一，能够凝固血液，防止出血。手术时使用的血小板现在完全依赖献血。研究小组准备确认新技术的安全性之后，早日将其应用于手术。

【序号】：3【作者】：朱琳邹德庆范作卿【题名】：蚕蛹羧甲基壳聚糖对小鼠成纤维细胞增殖与生长的影响【期刊】：蚕业科学. 【年、卷、期、起止页码】：2017,43(03)【全文链接】：https://kns.cnki.net/kcms2/article/abstract?v=3uoqIhG8C44YLTlOAiTRKibYlV5Vjs7iAEhECQAQ9aTiC5BjCgn0RurLuDBf62EN5lCHC3tB7EA_NCYlyZxEZRugsuO02raR&uniplatform=NZKPT

美国研究人员说，已经在利用皮肤细胞“制造”精子的研究中取得初步成功，完成关键步骤。受不育问题困扰的男士有望在几年内通过这种新型人工干预手段实现为人父的梦想。相关研究报告由《细胞—报告》月刊发表。 击破关键美国匹兹堡大学医学院詹姆斯·伊斯利博士带领研究小组，用多种化学品混合物“回拨”皮肤细胞的生物钟，把它们变成功能与胚胎干细胞类似的细胞，接着使用营养物质培养成圆形细胞。 伊斯利说，这是用皮肤细胞“制造”精子过程中最困难的一步。先前，已经有研究人员成功地用胚胎干细胞“造”出精子。这些研究结果可以为伊斯利博士团队接下来的研究提供借鉴，也就是说，他们距成功可能只有几步之遥。伊斯利博士团队使用的皮肤细胞全部来自男性。他们也曾经尝试使用女性皮肤细胞，但没有成功。 伦理之争今年早些时候，以色列与德国研究人员在实验室中利用老鼠生殖细胞“造”出精子。与用老鼠生殖细胞或胚胎干细胞相比，用男性皮肤细胞制造精子有无可比拟的优势。 老鼠生殖细胞来自老鼠，胚胎干细胞通常来自胚胎，与之相比，利用皮肤细胞培养精子在伦理上更容易为人接受。因为这种细胞可以从想圆“父亲梦”的成年男性身上采集，由它“制造”的精子里含有这名男性的基因。不过，受到相关法律限制，即使伊斯利博士团队的研究在短时间内获得成功，也不可能随后在欧美等地投入临床。一直以来，关于通过人工手段干预生殖是否符合伦理规范的争论从未停止。 英国《每日邮报》28日援引从事相关医学研究的菲莉帕·泰勒的话报道：“研究人员承认，他们的工作‘充满生物伦理学挑战’。” 带来希望伊斯利博士团队在研究报告中写道，不管存在何种争论，至少在短期内，这一成果可能帮助人们开发新型治疗不孕症的药物和避孕用具。不孕已经成为困扰不少育龄夫妇的难题。统计数字显示，在英国，六分之一的夫妇有生育困难问题，其中，40%的“责任”在男方。三分之一的不孕夫妇经过一系列复杂检查后仍然无法确定不孕的原因。因此，伊斯利博士团队的研究成果对不少不孕夫妇而言意义重大。英国设菲尔德大学男性生殖专家艾伦·佩西谈到这项研究结果时说：“毫无疑问，这是一项好成果。”

美科学家利用干细胞技术培育出有两个父亲的老鼠后代 据外媒报道，美国科学家利用生物干细胞技术，利用两只公鼠培养出“后代”。这一实验的成功将有助于保护濒危物种，甚至可以帮助同性伴侣拥有属于双方的孩子。Biology of Reproduction 在12月8日刊发的文章称，美国德得克萨斯州安德森癌症中心的科学家从一个公鼠(XY)胎儿的干细胞中，制造出一个诱导多功能干细胞系(IPS)。这些诱导多功能干细胞是由成熟的干细胞经历基因重组，形成类似胚胎干细胞的状态。这些诱导多功能干细胞中的一些在成长过程中，自行失去了Y染色体，转变成XO细胞。这些XO细胞之后被注入老鼠胚胎内，再移植到代孕母鼠体内，生产出携带原来公鼠身上的X染色体子鼠。之后，这些新生的小老鼠中的母鼠跟正常的公鼠交配，它们的孩子、无论公鼠还是母鼠，都会同时携带两个“父亲”的基因。研究者们还称，通过这一技术，也可以生产出含有两个母鼠基因的子鼠。然而，这项研究中还介绍，这一技术用在人身上还需要很长的时间。目前，对于人类的诱导突变干细胞的利用还受到严格限制。

[b][size=15px][color=#595959]红三叶草[/color][/size][/b][size=15px][color=#595959](Trifolim pratense L.)是一种传统中药，具有调节更年期症状、心脏问题、炎症性疾病、牛皮癣和认知缺陷的作用。在以往的报道中，对红三叶草的研究主要集中在临床实践方面。红三叶草的药理作用尚未完全阐明。[/color][/size] [font=&][size=16px][color=#232323][/color][/size][/font][size=15px][color=#595959]为了确定调节[b]铁下垂[/b]的分子，检测了[b]红三叶草(Trifolium pratense L.)提取物(RCE)[/b]是否影响化学处理或[b]胱氨酸/谷氨酸反转运蛋白(xCT)[/b]缺乏引起的铁下[/color][/size][font=&][size=16px][color=#232323]垂。 [/color][/size][/font] [size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][font=&][/font][/color][/size][b][size=15px][color=#595959]小鼠胚胎成纤维细胞(MEFs)[/color][/size][/b][size=15px][color=#595959]通过erastin/Ras-选择性致死3(RSL3)处理或xCT缺失诱导铁下垂细胞模型。用Calcein-AM和BODIPY-C荧光染料分别测定细胞内[b]铁和脂质过氧化水平[/b]。蛋白和mRNA分别用Western blot和real-time聚合酶链反应定量。对xCT MEFs进行RNA测序分析。 [/color][/size] [size=15px][color=#595959]RCE对erastin/RSL3处理和xCT缺失所致的铁下垂均有显著抑制作用。RCE的抗铁衰作用与细胞铁衰模型中细胞铁积累和脂质过氧化等铁衰表型变化相关。[/color][/size] [size=15px][color=#595959]重要的是，RCE影响铁代谢相关蛋白的水平，包括铁调节蛋白1、转运蛋白1 (FPN1)、二价金属转运蛋白1和转铁蛋白受体。通过RCE对xCT MEFs进行RNA测序分析，发现细胞防御基因表达上调，细胞死亡相关基因表达下调。[/color][/size] [size=15px][color=#595959][/color][/size][color=#3573b9]结论[/color][b][size=15px][color=#595959][/color][/size][/b][font=mp-quote, -apple-system-font, BlinkMacSystemFont, &][size=15px][color=#595959][/color][/size][/font] [b][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][/b][font=&][size=16px][color=#232323][/color][/size][/font][b][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][/b][font=&][size=16px][color=#232323][/color][/size][/font][size=15px][color=#595959]RCE可通过[b]调节细胞铁稳态[/b]，有效抑制由erastin/RSL3处理和xCT缺乏引起的铁下垂。这是首次报道RCE在与铁中毒细胞死亡相关的疾病中具有治疗潜力，特别是由细胞铁代谢失调引起的铁中毒。[/color][/size]

[size=3][font=宋体]来自中国科学院院动物研究所，遗传与发育生物学研究所的研究人员首次发现了可以用来判断小鼠干细胞多能性水平的关键基因决定簇，对于干细胞多能性水平决定机理的研究和干细胞的临床应用具有重要的促进作用。这一研究成果公布在[/font][font=Times New Roman]6[/font][font=宋体]月[/font][font=Times New Roman]18[/font][font=宋体]日出版的科学杂志[/font][font=Times New Roman]Journal of Biological Chemistry[/font][font=宋体]（[/font][font=Times New Roman]JBC[/font][font=宋体]）的封面上。[/font][font=Times New Roman] [/font][/size][size=3][font=Times New Roman] [/font][/size][size=3][font=Times New Roman] [/font][/size][size=3][font=宋体]领导这一研究的是动物研究所周琪研究员和遗传与发育生物学研究所王秀杰研究员，前者长期从事克隆技术的研究工作，有多项成果分别发表在[/font][font=Times New Roman]Science[/font][font=宋体]、[/font][font=Times New Roman]Development[/font][font=宋体]、[/font][font=Times New Roman]Stem- cells[/font][font=宋体]、[/font][font=Times New Roman]Developmental Biology[/font][font=宋体]、[/font][font=Times New Roman]Biology of Reproduction[/font][font=宋体]、[/font][font=Times New Roman]Human Reproduction[/font][font=宋体]等世界著名学术刊物上，并成为获得国际转基因研究[/font][font=Times New Roman]genOway[/font][font=宋体]奖的首位华裔科学家，为我国在动物克隆和胚胎干细胞研究领域取得了突破性进展。[/font][/size][size=3][font=宋体]胚胎干细胞（[/font][font=Times New Roman]ES[/font][font=宋体]）及诱导性多能干细胞（[/font][font=Times New Roman]iPS[/font][font=宋体]）技术是近年来生命科学研究领域的持续热点，对揭示细胞重编程机制、研究个体发育以及再生医学的临床应用等都具有重要价值。[/font][font=Times New Roman]2009[/font][font=宋体]年动物所周琪研究组率先证实了[/font][font=Times New Roman]iPS[/font][font=宋体]细胞具有与胚胎干细胞相似的全能性，但同时亦发现获得具有完全多能性水平的[/font][font=Times New Roman]iPS[/font][font=宋体]细胞的效率极低，多数[/font][font=Times New Roman]iPS[/font][font=宋体]细胞由于重编程不完全而导致无法获得后代或后代具有生理缺陷等问题，成为其在再生医学中应用的一个巨大障碍。[/font][/size][font=宋体][size=3]尤其是人类干细胞系由于伦理学的限制，不能通过发育能力进行鉴定，更加难以确定其多能性水平。因此，如何准确地判断干细胞的多能性状态并对其进行精确分型是干细胞的基础研究和转化应用过程中一个急需解决的问题。[/size][/font][size=3][font=宋体]在这篇文章中，研究人员利用长期积累的大量具有不同发育潜能的小鼠[/font][font=Times New Roman]ES[/font][font=宋体]和[/font][font=Times New Roman]iPS[/font][font=宋体]细胞系，系统地分析了这些细胞的编码基因、小分子[/font][font=Times New Roman]RNA [/font][font=宋体]和蛋白质表达谱，发现了一组在胚胎干细胞和具有完全多能性的[/font][font=Times New Roman]iPS[/font][font=宋体]细胞中高表达，在仅具有部分多能性的[/font][font=Times New Roman]iPS[/font][font=宋体]细胞中不表达或表达水平极低的一个关键基因组区域。通过多种细胞系证明，位于这个区域内基因与[/font][font=Times New Roman]microRNA [/font][font=宋体]簇的表达与细胞多能性状态和发育潜能呈正相关，因此可以用来作为判断干细胞和[/font][font=Times New Roman]iPS[/font][font=宋体]细胞多能性水平的分子标记。[/font][/size][size=3][font=Times New Roman] [/font][/size][size=3][font=宋体]此发现于[/font][font=Times New Roman]4[/font][font=宋体]月[/font][font=Times New Roman]9[/font][font=宋体]日在[/font][font=Times New Roman]JBC[/font][font=宋体]在线发表后，即受到国际同行的普遍关注。美国生物化学与分子生物学协会对此成果发表了专题报道，并被[/font][font=Times New Roman]ScienceDaily[/font][font=宋体]等数十家国外媒体转载。由于在小鼠基因组中没有筛选出其他具有类似特性的基因簇，并且这一区域中的基因和[/font][font=Times New Roman]microRNA[/font][font=宋体]簇在哺乳动物中高度保守，因此，若此区域在人类干细胞中具有同样的功能，则可作为判断人的[/font][font=Times New Roman]ES[/font][font=宋体]与[/font][font=Times New Roman]iPS[/font][font=宋体]细胞系多能性水平的标准，将大大推动人类干细胞的机理及临床应用的研究进程。[/font][/size][size=3][font=Times New Roman] [/font][/size][size=3][font=宋体]此工作在[/font][font=Times New Roman]JBC[/font][font=宋体]在线发表后不久，[/font][font=Times New Roman]Nature[/font][font=宋体]杂志也在线刊发了美国科学家[/font][font=Times New Roman]Konrad Hochedlinger[/font][font=宋体]研究组的研究工作，他们在小鼠基因组的同一区域获得了与此成果一致的结论，进一步证明了此成果的正确性和科学意义。[/font][/size]

体外神经细胞的培养已成为神经生物学研究中十分有用的技术手段。神经细胞培养的主要优点是:(1)分散培养的神经细胞在体外生长成熟后,能保持结构和功能上的某些特点, 而且长期培养能形成髓鞘和建立突触联系,这就提供了体内生长过程在体外重现的机会。(2)能在较长时间内直接观察活细胞的生长、分化、形态和功能变化,便于使用各种不同的技术方法如相差显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、激光共聚焦显微镜、同位素标记、原位杂交、免疫组化和电生理等手段进行研究。(3)易于施行物理（如缺血、缺氧）、化学和生物因子（如神经营养因子）等实验条件, 观察条件变更对神经细胞的直接或间接作用。(4)便于从细胞和分子水平探讨某些神经疾病的发病机制，药物或各种因素对胚胎或新生动物神经细胞在生长、发育和分化等各方面的影响。 我们实验室从80年代始开展了神经细胞的体外培养工作，取得了一些经验，现将培养细胞分类及方法简要介绍如下:一.鸡胚背根神经节组织块培养 主要用于神经生长因子（NGF）等神经营养因子的生物活性测定。在差倒置显微镜下观察以神经突起的生长长度和密度为指标半定量评估NGF的活性。1． 材料和方法 （1）选正常受精的鸡蛋，置于37℃生化培养箱内孵化，每日翻动鸡蛋一次。 （2）取孵化8-12 d 的鸡蛋, 用70% 酒精消毒蛋壳，从气室端敲开蛋壳，用消毒镊剥除气室部蛋壳。（3）用弯镊钩住鸡胚颈部，无菌条件下取出鸡胚置小平皿内，除去头部后，腹侧向上置 灭菌毛玻璃片上,用眼科弯镊子打开胸腹腔，除去内脏器官。（4）在解剖显微镜下，小心除去腹膜，暴露脊柱及其两侧，在椎间孔旁可见到沿脊柱两侧 排列的背根节（图1），用一对5号微解剖镊小心取出。（5）置背根节于解剖溶液内，用微解剖镊去除附带组织，接种于涂有鼠尾胶的玻璃或塑料 培养瓶中，在DMEM无血清培养液中培养。2． 结果鸡胚背根神经节在含神经生长因子(NGF, 2.5S，20ng/ml)的无血清培养液中培养24 h,神经节长出密集的神经突起。而未加NGF的神经节培养24 h, 未见神经突起生长。二．新生大鼠、新生小鼠及鸡胚背根神经节分散细胞培养背根神经节（DRG）细胞起源于神经嵴，NGF研究先驱Levi-Montalcini的实验表明，外原性NGF能刺激DRG细胞生长发育并形成广泛的神经网络。在体外，分离培养的神经节在NGF存在的情况下，神经突起的生长在一天之内可长达数毫米，因此，利用培养的DRG细胞，进行轴突生长发育的研究，是最为经典而常用的方法之一。

在日前举行的第二次中国科协论坛“2009年中国干细胞研究高层战略研讨会”上，同济大学校长裴刚这样评价近10年来，国家对干细胞投入得到的回报，并没有白花钱。对于关注我国科研成果和科技进步的人来说，这句话对科研投入来说，应该是一个再好不过的答案。　　文章、实验室、重大项目、人才队伍，这些往往是衡量某项学科的科研水平在国际上所处位置的重要指标。从1999年12月，干细胞研究被评为世界十大科学研究之首，到今年，我国的干细胞研究已经走过了整整10年的历程。　　按照裴刚的统计，生命科学是国家重点支持的领域之一，支持的重大项目比例很高，在国际上发表文章的数量接近10%。我国干细胞领域实验室数量大约是50个，有超过一半的人员和经费用于干细胞研究，这50个实验室均在国际顶级杂志上发表过两篇以上的干细胞研究论文。裴刚说：“中国和美国的实验室数量跟中国和美国发表文章的数量比，还是好一些，我告诉大家我们没白花钱。”　　干细胞研究的重要性不言而喻。如果说21世纪是生物学的世纪，那么生物学中最前沿、最热门的一个研究领域应当是干细胞的研究。“干细胞是一类具有自我更新和分化潜能的细胞，包括胚胎干细胞和成体干细胞。”因为干细胞的这种特性，所以对很多疾病，如神经退行性疾病、各种血液干细胞疾病等都有很重要的治疗意义。然而，干细胞的来源却一直是难以解决的问题。　　在这个聚集了南开大学校长饶子和，北京大学生命科学学院教授、长江学者特聘教授邓宏魁，中国科学院动物研究所所长孟安明等20多位学者的研讨会上，加快建设大动物实验平台成为多位专家的共识。中国研究干细胞的动物模型，不能仅停留在小鼠等小动物上，今后要举全国之力试验大动物——猪、猴子干细胞。由于大动物在生物学的许多方面和人类更为相近，所以在临床应用上更加关键。从小动物模型到大动物模型，再到临床应用，这是一个发展的过程。中国科学院动物研究所研究员、国家杰出青年科学基金获得者周琪在讨论时说：“无论是技术研究还是产业化应用，建立大动物实验基地、建立中国特色的模式动物都是十分必要的，这是我们进行干细胞研究的基础。”　　抓住人才、机制创新，似乎每一个学科在谈到发展战略时，都要说这样的两点，干细胞领域亦不例外。对于国家实验室的模式，专家们也有着更高的期许：开放性的招聘，长期稳定的择优支持，国有评估，开放流动。如何把国家的需求、科研水平的提升、人才的培养和投入经费以及科研机制更好地融合，最终达到发展科技的目的，这并不是一件容易的事情，也是每个科研领域应该深入解决的问题。希望等到下一个十年，回顾干细胞领域的研究成果时，“我们没白花钱”这句话，能以更高的国际地位得到诠释。

###一部汇总，大家伙先看着，未完待续###原理与技术干细胞：成体干细胞、胚胎干细胞、诱导多能干细胞（ips）、肿瘤干细胞、分离、培养、鉴定、建系、分选、信号通路、起源、组织工程干细胞的培养《干细胞原理、技术与临床》核心章节131页/赵春华/ http://bbs.bioon.net/bbs/thread-358972-1-1.html分享一本最新出版的肿瘤干细胞的书http://bbs.bioon.net/bbs/thread-299056-1-1.html强烈推荐：一个关于干细胞的powerpoint http://bbs.bioon.net/bbs/thread-296701-1-1.html干细胞电子书免费下载http://bbs.bioon.net/bbs/thread-264289-1-1.html干细胞研究进展消息 http://bbs.bioon.net/bbs/thread-360149-1-1.html干细胞教师用ppt http://bbs.bioon.net/bbs/thread-362296-1-1.html英文版干细胞ppt集锦（很不错的） http://bbs.bioon.net/bbs/thread-272416-1-1.html干细胞从科研走向临床推广http://bbs.bioon.net/bbs/thread-353817-1-1.html干细胞可用于治疗脊髓损伤http://bbs.bioon.net/bbs/thread-353818-1-1.html老外是如何学习做干细胞的--干细胞课程http://bbs.bioon.net/bbs/thread-57973-1-1.html上传几篇大牛写的干细胞综述 http://bbs.bioon.net/bbs/thread-341447-1-1.html一篇干细胞的NICHE的年度综述！http://bbs.bioon.net/bbs/thread-287579-1-1.html上传几篇大牛写的干细胞综述4 http://bbs.bioon.net/bbs/thread-341451-1-1.html关于干细胞的PPT http://bbs.bioon.net/bbs/thread-259255-1-1.html【免费下载】肿瘤干细胞起源及其生物学特性/陈晶等/http://bbs.bioon.net/bbs/thread-358973-1-1.htmlhttp://www.nature.com/sc/journal/v45/n1/full/3101943a.htmlhttp://www.springerprotocols.com/Full/doi/10.1007/978-1-59745-060-7_10?encCode=QkVDOjAxXzctMDYwLTU0Nzk1LTEtODc5&tokenString=lSYIGGltPLruD0lr0AWrWg==&access=deniedhttp://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/jnr.20317/fullhttp://www.transplantation-proceedings.org/article/S0041-1345(08)00008-0/abstracthttp://www.nature.com/nprot/journal/v3/n12/full/nprot.2008.194.htmlNature实验方法-大鼠/小鼠少突胶质前体细胞培养 http://bbs.bioon.net/bbs/thread-358977-1-1.html成人胰腺多能干细胞生成与胰腺癌和非胰腺癌后代 http://bbs.bioon.net/bbs/thread-358980-1-1.htmlBMC Neurosci：电针治疗可以促进移植干细胞的存活和分化 http://bbs.bioon.net/bbs/thread-358982-1-1.htmlstem cells:揭示骨髓干细胞和AMSCs相当 http://bbs.bioon.net/bbs/thread-358984-1-1.html【免费下载】Nature Pro：鼠胚胎干细胞的分化 http://bbs.bioon.net/bbs/thread-358985-1-1.htmlStem Cells:Mesenchymal stem cells instruct oligodendrogenic fate decision onhttp://bbs.bioon.net/bbs/thread-358986-1-1.html胚胎干细胞培养标准化操作规程.dochttp://bbs.bioon.net/bbs/thread-311031-1-1.html干细胞的培养方法(图片)http://bbs.bioon.net/bbs/thread-264491-1-1.html人表皮干细胞的培养技术http://bbs.bioon.net/bbs/thread-323841-1-1.html用sphere法培养肿瘤干细胞的protocol http://bbs.bioon.net/bbs/thread-289291-1-1.html日本科学家关于脂肪干细胞的研究http://bbs.bioon.net/bbs/thread-328832-1-1.html