粉状毕赤酵母

试剂1M LiCl 50% PEG3350 (氯化锂转化法只能PEG3350,不能用PEG8000,PEG3350在北京莱博生物有售,80元/100克)2mg/ml salmon sperm DNA / TE（10mM Tris-Cl, pH8.0, 1.0mM EDTA）-20℃保存注：醋酸锂对毕氏酵母无效,对酿酒酵母有效，仅氯化锂有效；PEG3350可屏蔽高浓度LiCl的毒害作用。感受态毕氏酵母的制备1. 接种Pachia pastoris到50ml YPD培养基中，30℃摇菌过夜（约24～28h）培养到OD值为0.8～1.0（约108 Cells/ml）；培养基里有流沙样的菌体在流动2. 收获细胞，用25ml无菌水洗涤一次，室温下1500g离心10min；3. 重悬细胞于1ml 100mM LiCl溶液中，将悬液转入1.5ml离心管；4. 离心机最大速度离心15秒沉淀菌体，重悬菌体于400ul 100mM LiCl溶液中；5. 按50ul/管分装，立即进行转化；注：不要将感受态酵母菌冰浴；

毕赤酵母表达操作手册（精译版）[~150514~][~150513~]

很多朋友问这样一个问题：为什么毕赤酵母表达困难?他们自己也很纳闷，重组酵母pcr检测也证明目的基因重组了，但是诱导之后就是在表达上清中检测不到目的蛋白，仔细研究操作手册后仍然不知道原因。本人，根据自己的经验，采用倒推的方法，按实验过程从后向前分析，供大家参考：1、诱导之后表达上清中检测不到目的蛋白：分析1：检测的方法是否有问题，要考虑是不是蛋白表达量低而没有检测到? 如果是蛋白表达低，可以选择浓缩蛋白，具体的方法很多，有TCA、丙酮、浓缩柱等等方法，之前在本版已经发过帖，在此不赘述。 2、如果蛋白浓缩N倍之后仍然检测不到，那基本可以确证蛋白并不在上清中。那么蛋白到哪里去了，考虑是否没有分泌出来，而是在胞内，那就需要通过裂解酵母来检 测胞内蛋白，具体的方法很多，在此也不赘述，曾整理过相关破碎的帖子。 3、如果胞内也没有目的蛋白表达，那么基本可以确定蛋白并没有表达。 4、为什么没有表达呢?倒推回来就是诱导的过程了，诱导体系是什么?甲醇浓度是多少?培养问题是多少，转速是多少?这些都要注意。甲醇一般是0.5%-1.0%，本人用的 是0.5%，也有很多人也用1.0%，曾见过一个帖子，说超过1.5%反而会抑制表达，没有验证过，供大家参考。培养问题28-30度比较合适，转速250rpm比较合适，诱导 体系没有固定的体系，说明书上推荐的是BMGY到OD600 2~6，换到BMMY中OD600 为1左右。 5、如果诱导的过程也没有问题，那问题就复杂了，特别是重组酵母PCR检测证明目的基因确实已经发生了重组。这个时候是最郁闷的了，但是郁闷怎么办，还是要找原 因，在此我给的建议是先做RT-PCR证明mRNA水平的情况，也就是说有没有转录。如果转录了，后续的操作也没有问题(本帖的1、2、3、4项)，那么只有重新设计实 验，比如换酵母株，有文章上说：用GS115表达不出蛋白，换KM71H后，大部分克隆能表达。 6、有个帖子说的很好，在此和大家分享一下。 1、 菌株：用GS115表达不出蛋白，换KM71H后，大部分克隆能表达。 2、温度：　在28度和室温下诱导表达，表达水平可能都不低。 3、pH：手册上用6.0，pH提高到6.8，不表达的蛋白可能就表达出来。BMMY的pH7.0-7.5比较合适。国内外做的最好的rHSA，最适pH大概5-6左右。pH3的时 候yeast和peptone好像会沉淀的，可以用磷酸和磷酸二氢钾调，具体比例自己去试试。 4、偏爱密码子： codon bias一般不是主要的问题，你要表达的蛋白特性才是主要问题，酵母对分子量大(30KD以上)，结构复杂(如一些蛋白酶)，二硫键含量多的 蛋白往往不能有效表达，尤其是分泌表达。密码子改造对一些较小的而且结构简单的蛋白表达量的提高可能有一些作用。比如一位战友用Pichia酵母表达一个单链 抗体，29KD，含有2对二硫键，表达量约几毫克每升，选用酵母偏好密码子全基因合成后，表达量没有什么提高。 5、表达时间与空质粒转化对照：诱导时间长了以后，是会有很多蛋白分泌出来的，时间越长杂蛋白就越多，且分子量都比较大。最好做一个空质粒转化的对照， 这样就会比较肯定到底是不是自身的蛋白分泌的结果。 6、污染：每个样品从G418板上挑10个左右单克隆于2ml BMGY摇菌(30ml玻璃管，比LB管大一点)，纱布一般用8层，一天左右看着比较浑离心，留样1ml，余 1ml换2ml BMMY诱导表达，3,4层纱布足够了。 污染一般都是跟瓶口覆盖有关的原因造成的，只盖纱布肯定会污染。加盖报纸后，就再没遇到过污染。如果只用6层纱布，污染的可能当然很大，100ml三角瓶， 装量10ml培养液，用橡筋把8层纱布和2层报纸拴紧封口，空气浴摇床。 7、不表达：蛋白有没有表达就要看你的运气了，一般重复2-3次实验都没有表达菌株，这个蛋白就放弃表达了。 8、表达量： 30KD,10mg/L表达量已经很高，最直接的方法是发酵，一般提高5-10倍。大肠杆菌一样出现大团的超表达蛋白。 9、糖基化：酵母分泌表达的N糖基化是可以预测的，有如下序列：N X S/T就是潜在的糖基化位点，X为任意氨基酸，1个糖基化位点会加上1-3KD左右的糖基。另外可 能还有O糖基化话，但是无法预测其位点，不过很少听说表达蛋白有O糖基化的。如果胞内表达，不存在糖基化的问题。 10、表型与表达：重组SalI和BglII酶切产生单交换和双交换，结果就是产生Mut+和Muts表型的菌株;前者在甲醇诱导表达时生长快，消耗的甲醇多，后者生长慢，消耗 的甲醇少，所以诱导表达时Muts表型要求更高的菌体浓度。一般用Mut+表型的较多，但是对某些蛋白Muts菌株可能表达的更好，只有试试才知道你的蛋白用那种菌 株表达较好。 11、培养基 YPD：最基本的培养用;BMGY：诱导表达前培养用;BMMY：诱导表达用;MD：电转化后筛选his+用。 YEPD是不能代替BMGY的，因为有葡萄糖，这样残留的葡萄糖会影响下一步的诱导表达。不过有一种方法是可行的，就是用YPG培养基代替，只是把YEPD中的葡萄糖 用3%的甘油代替，也可以降低成本。摇瓶毕竟不能和发酵罐比，甘油残余会抑制甲醇利用。 BMGY、BMMY灭菌后才能加甲醇、磷酸钾、生物素。配制BMMY时也没必要用5%过滤除菌的甲醇，在灭菌后使用前加100%甲醇至你要的浓度。 YNB可以高压灭菌，没问题的，也可以0.22um过滤处理，天冬氨酸和苏氨酸要待培养基高压灭菌后加入;配YPD时可以加入YPD一起灭菌，但时间不能太长，温度不能 太高，一般121-125度12-15分钟足够了。若时间过长，温度过高，可能导致YPD焦化。glucose和含氮化合物在一起容易产生美拉德反应，这是配制培养基中的禁忌。 颜色很深的话，基本不能使用了。或者含有葡萄糖和/或YNB的培养基108度35min高压灭菌。 小量发酵其实可以把培养基成分中的YNB和生物素去除，培养基价格便宜，操作又方便，可以直接灭菌，效果也很好(效果不比含YNB的差)。 如果是用自己配置的培养基，如玉米浸提液、麦芽浸提液、麦麸浸提液等等，可以不用换液，采取添料来维持酵母对培养基的营养需要。 用无机盐进行大规模发酵，更省钱。更多有关蛋白表达纯化的相关资料，请点击：资料专区

毕赤酵母多拷贝表达载体试剂盒说明书，是个很不错的资料，对于做蛋白表达的版友来说很有用的。包括多酵母及表达，背景知识等的综述，实验技术路线，方案，详细的培养基及培养条件，注意事项。以及表达分析。[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=158198]毕赤酵母多拷贝表达载体试剂盒说明书[/url]

酵母膏和酵母粉的营养成分差不多，可否认为可以用酵母粉替换酵母膏,你尝试过没，说说体会吧。

【中文名称】饲料酵母粉【英文名称】feed yeast powder【性状】 有浓香气味。【用途】 是一种蛋白质含量高，氨基酸齐全，且含有B族维生素、微量元素及各种酶，是一种营养价值高的单细胞蛋白。能促进禽畜的新陈代谢，可增强禽畜的抗病能力，提高禽畜的生长速度、繁殖能力、肉质和毛皮质量，特别适宜以气味觅食得鱼虾喂养。【制备或来源】 用酒糟液发酵而成。其工艺路线有三种：（1）酒糟经冷却、净化、增殖、浓缩、质壁分离后，再干燥、粉碎得产品；（2）将酒糟接种发酵后，经干燥，去杂质粉碎得产品；（3）将酒糟沉渣加营养盐液，以酵母为微生物源，发酵后，经分离、干燥、粉碎得产品。【生产单位】 杭州长征化工厂；河南南阳酒精总厂酵母厂；

请问谁知道酵母酶解粉是什么？它和酵母粉之间有什么区别吗？

葡萄酒在瓶装时，必须认真考虑葡萄酒是否已经达到了除菌、灭菌的目的。为了准确达到这个目的，就要对瓶装的葡萄酒进行快速而可靠的检验。这里列举了3个检查方法，仅供同行朋友们在实际生产中，根据企业的实际条件进行参考。　　一、格森海姆(Geisenheimer)检定法　　将被检验的葡萄酒在无菌的条件下，接入与其等量的葡萄汁，便为酵母提供了良好的繁殖条件，酵母开始快速繁殖和发酵。酵母繁殖的速度和发酵的强度，是衡量被检样品染菌的程度。　　具体操作如下：　　取标准试管3支，分别注入10mL葡萄汁，并加棉塞封口，置于高压灭菌锅中灭菌；将吸管用纸包好，并在160℃下灭菌。然后小心的拔除葡萄酒瓶的软木塞，立即用火焰将瓶口附着的微生物灭除，再用无菌吸管从瓶底吸出10mL被检葡萄酒，移入已灭菌葡萄汁的试管内，每份样品做平行样3支。　　若被检的样品活酵母较多，在3—5天内即可检定其发酵度；若酵母较少，发酵需要两倍于此的时间，由此可断定生产线是否处于受控状态，断定瓶装酒出厂后是否会发生浑浊等质量事故。　　这个方法十分简便，不需要特别的仪器，对小型葡萄酒厂十分适用，这是其优点。缺点是只能检定出葡萄酒中是否存在酵母菌，无法进行定量分析。　　二、薄膜过滤法　　借助于不同孔径的过滤片(孔径一般为2微米以下)，在无菌条件下过滤被检葡萄酒，分离出酵母及其它微生物，然后对滤片上的微生物进行生长培养，计算出现的菌落数，并进行其它各项必要的检查。　　操作方法如下：　　将所有参与过滤的仪器、器皿进行彻底消毒，在无菌的条件下进行过滤等操作。在每次分析之前，将过滤器及过滤片置于高压锅内灭菌，用经火焰烧过的镊子取已灭菌的过滤片放入过滤器中。　　被检瓶酒在开启前，必须仔细用75%酒精擦拭瓶口，小心地拔除软木塞，勿使开瓶刀穿通软木塞。　　开始时先将软木塞拔出四分之三，然后用手轻轻取下软木塞，瓶口在倒酒前先用火焰烧一下，再将葡萄酒一点一点地倒入过滤漏斗中。　　过滤结束后，用火焰烧过的镊子在漏斗内取出滤片，置于培养皿中，并摆放平整，倒入适量的酵母培养基(约3mL)，然后标明日期和试样编号，置于生物培养箱内，在25℃下培养3—5天。为避免凝结水影响菌落生长，将培养皿反扣于培养箱内。若过滤片上的酵母菌是活的，酵母即进行繁殖，在培养基上会出现菌落。　　如果未发现菌落生长，说明被检的葡萄酒是稳定的，不会出现酵母菌引起的浑浊；如果每瓶样有5个以上的菌落出现，说明葡萄酒的除菌或杀菌操作不彻底，葡萄酒有不稳定的因素，应该严格检查生产过程中的每个环节，直到查出原因为止。　　这一方法能对瓶装酒内各种微生物进行定量检定，但需要选择适当孔径的滤片和培养基，并由掌握基本微生物学的熟练人员操作。　　三、快速检定法　　薄膜过滤法可以用显微镜对滤片做仔细检查，迅速检出活酵母；快速检定法则可将死的和活的微生物区别开来，但要求瓶装酒内必须不含其他悬浮物。　　在适宜的温度下，于8—14小时内，具有繁殖能力的菌体生长成为微小的菌落，用显微镜观察，可将死的、没有繁殖能力的菌落区别开来。活菌体在培养时会形成小的菌落，死菌体只有单个的存在。

下列哪类物质是酵母菌细胞壁主要的成分()。 A、甘露聚糖 B、脂质 C、无机盐 D、蛋白质

酵母菌在中国的研究与开发 从2000年开始，在国家葡萄产业从2000年开始，在国家葡萄产业技术体系、国家自然基金等项目的支持下，刘延琳教授团队二十多来坚持不懈进行本土酵母资源的收集、鉴定、挖掘、优选，建立了保藏2万余份本土葡萄酒酵母的种质资源库，开发了典型特征突出、综合性状优良、功能细分的系列本土酵母菌种30株。经过研究测试，CEC01和CECA这2株中国本土优良葡萄酒酵母菌种具有耐受力强、发酵力强、香气表达力强等特点，率先于2013-2014年进入产业化应用，现已实现对进口葡萄酒酵母30%的国产化替代。经过规模化产业应用，这2个菌种生产的葡萄酒活性干酵母已批量出口至欧洲传统葡萄酒主产国，提升了中国葡萄酒产业的国际竞争力和美誉度。技术体系、国家自然基金等项目的支持下，刘延琳教授团队二十多来坚持不懈进行本土酵母资源的收集、鉴定、挖掘、优选，建立了保藏2万余份本土葡萄酒酵母的种质资源库，开发了典型特征突出、综合性状优良、功能细分的系列本土酵母菌种30株。经过研究测试，CEC01和CECA这2株中国本土优良葡萄酒酵母菌种具有耐受力强、发酵力强、香气表达力强等特点，率先于2013-2014年进入产业化应用，现已实现对进口葡萄酒酵母30%的国产化替代。经过规模化产业应用，这2个菌种生产的葡萄酒活性干酵母已批量出口至欧洲传统葡萄酒主产国，提升了中国葡萄酒产业的国际竞争力和美誉度。

最近遇到奶粉酵母菌检测结果1000cfu/g，严重超标，一般情况不会出现这种情况啊？谁有经验指教下啊？

【中文名称】饲料酵母【英文名称】feed yeast【性状】 黄色粉末。有特殊香味。【用途】 在饲料中作蛋白源，在鸡饲料中添加4%，相当鱼粉的效果。【制备或来源】 将黄粉（或味精废液）用酵母菌培养，制得的菌体与培养基混合，再经脱水，干燥制得。【其他】 含粗蛋白65%以上，并含有18种氨基酸，其中8种是动物必须氨基酸。另外含有磷、钾、钙、镁等微量元素及多种维生素。【生产单位】 浙江义乌糖厂；山东省科学院生物研究所；山东省莱州酵母厂；

酵母之我见：可以是图片（包括各种酵母的图片：电镜扫描的、培养基上的……），酵母的分类介绍、酵母的用途……只要是关于酵母您尽管畅所欲言～～～★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★（P.S：只要您的发言符合本主题内容，就可以轻轻松松得积分）视图片及发言内容，加2-10分，赶快来分享你的知识吧本期活动长期有效！！！

最近身边有朋友在学做馒头，关注了些有关馒头的问题。网上有人说，其实老面发的馒头不如酵母发的好，因为老面里面是一些乱七八糟的杂菌，可能对肠胃不好，而酵母就是酵母菌。第二个问题是，用老面做馒头，肯定要放碱，会不会不如不放碱的酵母馒头好呢?还有很多朋友问：自发粉到底是什么东西?它做的馒头和传统的馒头一样吗?和酵母发酵做成的馒头有什么区别?吃馒头和面包哪个更有营养?有这样类似疑问的朋友实在不少，咱们还是从头一个问题一个问题地弄清楚。

我们平常所吃的馒头、面包，都是面经过发酵而制成的，它们蓬松有弹性，口感很好，还带有特殊的香味。而用来发酵的无论是从前的酵头，还是现在的发酵粉，其实都是添加剂酵母菌。现在酵母菌的作用已经不仅仅只停留在发酵作用上了，由于其独特的品性，酵母菌的用途也越来越广，成为一种多功能的食品添加剂。 酵母菌功用之一发酵 发酵是酵母菌最主要的功用。人类很早就开始将酵母菌应用于食品生产中，例如酒精饮料、酱油、食醋、馒头和面包的发酵等等。在面包和馒头的生产中，酵母发酵产生大量二氧化碳．使面团膨胀，形成松软的组织。 在食品工业上常见的酵母菌有啤酒酵母，用于生产啤酒、白酒和酒精，以及制做面包；葡萄酒酵母，也称酿酒酵母，用于酿造葡萄酒和果酒，也用于啤酒和白酒的酿造。其中啤酒酵母是食品工业上应用最为广泛的微生物之一，啤酒酵母菌体内维生素、蛋白质含量很高，其药用价值也很高，还可以用于做饲料，提取核酸、麦角醇、谷胱甘肽、凝血质和三磷酸腺苷等。

[color=initial]一、菌种选育[/color] [list=1][*] 传统选育方法 [list][*]从自然界中筛选优良菌株：可以从不同的啤酒生产环境、土壤、水果等来源中采集酵母样本，通过分离、纯化和筛选，找到具有优良发酵性能和风味特征的酵母菌株。例如，从传统的啤酒酿造地区采集土壤样本，从中分离出可能适合啤酒发酵的酵母菌株。[*]诱变育种：利用物理（如紫外线、X 射线等）或化学（如亚硝基胍、硫酸二乙酯等）诱变剂对现有酵母菌株进行处理，使其发生基因突变，然后筛选出具有优良性状的突变株。例如，用紫外线照射酵母菌株，使其发生基因突变，然后通过发酵实验筛选出发酵速度快、产酒精能力强的突变株。[/list][*] 现代生物技术选育方法 [list][*]基因工程技术：通过基因克隆、表达和调控等手段，对酵母菌株进行改良。例如，可以将具有优良发酵性能的基因导入到酵母菌株中，使其获得更好的发酵能力和风味特征。或者通过基因编辑技术，对酵母菌株的特定基因进行修饰，以改善其性能。[*]高通量筛选技术：利用自动化设备和先进的检测技术，对大量的酵母菌株进行快速筛选。例如，使用微流控芯片技术，可以同时对数千个酵母菌株进行发酵实验和分析，大大提高了筛选效率。[/list][/list] [color=initial]二、优化发酵工艺[/color] [list=1][*] 控制发酵条件 [list][*]温度控制：根据不同的酵母菌株和啤酒类型，确定最佳的发酵温度。一般来说，低温发酵可以产生更多的风味物质，而高温发酵则可以加快发酵速度。例如，对于淡色啤酒，可以采用较低的发酵温度（8-12℃），以获得清爽的口感和丰富的风味；而对于深色啤酒，可以采用较高的发酵温度（15-20℃），以促进麦芽的焦香和酵母的代谢。[*]压力控制：适当的压力可以促进酵母的发酵活动，提高啤酒的质量。例如，在发酵过程中，可以通过控制发酵罐的压力，使酵母在一定的压力下进行发酵，从而提高发酵效率和啤酒的风味。[*]pH 值控制：保持适宜的 pH 值对于酵母的生长和发酵至关重要。一般来说，啤酒发酵的 pH 值在 4.0-5.5 之间。可以通过调整麦汁的 pH 值、添加缓冲剂等方法，控制发酵过程中的 pH 值。[/list][*] 优化麦汁成分 [list][*]调整麦汁浓度：根据不同的啤酒类型和酵母菌株，确定最佳的麦汁浓度。一般来说，高浓度的麦汁可以产生更多的酒精和风味物质，但也会增加酵母的代谢负担。例如，对于高浓度啤酒，可以采用较高的麦汁浓度（12-16°P），以获得浓郁的口感和香气；而对于低浓度啤酒，可以采用较低的麦汁浓度（8-10°P），以获得清爽的口感。[*]优化麦汁营养成分：确保麦汁中含有足够的碳源、氮源、维生素和矿物质等营养物质，以满足酵母的生长和发酵需求。例如，可以添加适量的麦芽提取物、酵母营养盐等，提高麦汁的营养价值。同时，要避免麦汁中含有过多的不良成分，如脂肪酸、醛类、酮类等，这些成分会影响酵母的代谢，导致酵母产生异味。[/list][*] 合理的酵母接种量和接种时间 [list][*]确定最佳的酵母接种量：酵母接种量过大或过小都会影响发酵效果和啤酒质量。一般来说，酵母接种量在 0.5-1.5×10?个细胞 / 毫升麦汁之间。可以根据酵母菌株的特性、麦汁浓度、发酵温度等因素，确定最佳的酵母接种量。例如，对于发酵速度快的酵母菌株，可以适当减少接种量；而对于发酵速度慢的酵母菌株，则可以适当增加接种量。[*]选择合适的接种时间：在麦汁冷却至适宜的接种温度后，及时接种酵母。过早或过晚接种酵母都会影响发酵效果。一般来说，在麦汁冷却至 8-12℃后，尽快接种酵母，以保证酵母的生长和发酵活动顺利进行。[/list][/list] [color=initial]三、酵母管理[/color] [list=1][*] 酵母的扩培和储存 [list][*]酵母扩培：采用科学的酵母扩培方法，确保酵母的数量和质量。一般来说，酵母扩培需要经过多个阶段，从原始菌种开始，逐步扩大培养，直到达到所需的酵母数量。在扩培过程中，要严格控制温度、pH 值、营养物质等条件，保证酵母的生长和繁殖。[*]酵母储存：正确储存酵母可以延长其使用寿命和保持其质量。酵母储存的条件包括低温、干燥、无氧等。一般来说，酵母可以储存在冰箱或冷库中，温度控制在 0-4℃之间。同时，要避免酵母与空气接触，以免酵母氧化和变质。在储存过程中，要定期检查酵母的质量，如有必要，可以进行活化和再培养。[/list][*] 酵母的回收和再利用 [list][*]酵母回收：在啤酒发酵结束后，及时回收酵母。可以采用离心、过滤等方法，将酵母从啤酒中分离出来。回收的酵母要经过清洗、消毒等处理，去除杂质和残留的啤酒成分。[*]酵母再利用：经过处理后的酵母可以再次用于啤酒发酵。但要注意控制酵母的使用次数，一般来说，酵母的使用次数不宜超过 5-7 次。随着使用次数的增加，酵母的活性和发酵性能会逐渐下降，需要及时更换新的酵母菌株。[/list][*] 酵母的检测和监控 [list][*]定期检测酵母的质量：包括酵母的活性、数量、纯度、发酵性能等指标。可以采用显微镜观察、平板计数、发酵实验等方法，对酵母进行检测。例如，通过显微镜观察酵母细胞的形态和大小，判断酵母的活性和健康状况；通过平板计数法，确定酵母的数量和纯度；通过发酵实验，检测酵母的发酵性能和产酒精能力。[*]监控发酵过程中的酵母状态：在啤酒发酵过程中，要密切关注酵母的生长和代谢情况。可以通过检测发酵液的温度、pH 值、糖度、酒精含量等指标，了解酵母的发酵活动。同时，要注意观察发酵液的外观、气味等变化，如有异常情况，要及时采取措施进行处理。[/list][/list] 通过以上方法，可以有效地提高啤酒酵母的质量，从而生产出品质优良的啤酒

我们测定固体样品中霉菌和酵母菌，刚开始使用“马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）”进行测定，由于样品是灰色粉末状，培养了三天后看不出长菌迹象。 同时采用“霉菌酵母菌显色培养基”进行了检测，不到两天就长出蓝绿色圆点，根据说明书说是酵母菌，我又将PDA培养基覆盖到蓝绿色菌的平皿中培养了24小时，长出很多菌，请帮忙分析一下是什么菌？为什么同一样品采用PDA和“显色培养基”进行检测，一个可以检测出霉菌，而另一个检测不出来，很头痛，也不知道怎么判定，求助！

[b][color=#646464][color=#1a1a1a]酵母抽提物，英文Yeast Extract，简称YE。[/color][/color][/b][color=#1a1a1a]酵母抽提物可以说是食物风味诱惑的原动力，让吃货们欲罢不能的味道，很多时候其实是YE在起作用。[/color][color=#1a1a1a][color=#1a1a1a]对于食品工业生产和餐饮门店，是非常熟悉的。家庭厨房中一般不会见到，其实他是隐藏的。[color=#1a1a1a]回家看看家里酱油瓶子的配料表上，不管是老抽、生抽、味极鲜，都能看到他的名字。[/color][/color][/color][color=#1a1a1a]它的神奇之处，在于包含了人体可直接吸收利用的可溶性营养及风味物质的浓缩物，[color=#1a1a1a]如20种氨基酸和多肽、核苷酸、维生素、有机酸和矿物质等等。[color=#1a1a1a]复杂成分带来多种丰富而饱满的味道。[/color][/color][/color][color=#1a1a1a]家用时，假如手抖放多了，除了味道太重，也没别的危害。[color=#1a1a1a]而且素食者也可以用，是难得的同时营养、调味和保健三大功能的食品调味料。[/color][/color][color=#1a1a1a]酵母抽提物的原料是啤酒酵母、葡萄酒酵母和面包酵母为原料。[color=#1a1a1a]主流产品是啤酒酵母，很大一部分产量是啤酒酿造的副产品。[color=#1a1a1a]这个以前是当做废弃物的，后来发现这个宝贝的味道太浓郁，再稍作加工大有可为。[/color][/color][/color]

光谱学被广泛应用于生物科学，适用于液体、膏、粉末、薄膜、纤维、气体和表面分析。该方法可以用于制药、食品、植物或动物组织中蛋白质、多肽、血脂、膜状物和碳水化合物特性分析。同时，光谱学可提供分子结构的详细信息。海洋光学采用光谱学方法分析114种不同酿酒酵母的特性。在200-1200nm波长范围内，详细分析两大光谱范围：LWUV-VIS和VIS-SWNIR。收集的114个品种中，有用于酿酒、酝酿、烘烤等工业品种；也有从特定环境下获取的品种，如致病株、水果和橡树分泌物。结果表明，光谱学方法是一种用于不同酿酒酵母特性分析的强有力方法，根据不同品种特有的光谱特性，可以实现不同品种酿酒酵母的特性分析与辨别。

[b]1. 目的[/b] 对《食品安全国家标准 食品生生物学检验 霉菌和酵母计数》GB4789.15-2016进行细化，指导微生物实验室霉菌和酵母计数检测具体操作。[b]2. 适用范围[/b]本操作规程适用于食品、化妆品及一次性筷子中霉菌和酵母菌的计数。[b]3. 设备及材料[/b]冰箱、霉菌培养箱、拍击式均质、显微镜、电子天平、高压灭菌器及其他灭菌和常规检测用器皿、材料。[b]4. 培养基及试剂[/b] 生理盐水（0.85%氯化钠溶液） 孟加拉红培养基或马铃薯葡萄粮琼脂[b]5. 检验程序 [/b] [table][tr][td=1,1,35] [/td][/tr][tr][td] [/td][td][img=,527,469]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/03/202403181712248843_5332_3247208_3.png[/img][/td][/tr][/table][b] 6. 操作步骤6.1 1:10样品匀液制 [/b]以生理盐水做样品稀释液。6.1.1食品样品 样品适宜时，取25g/ml样品加入装有225ml稀释液的均质袋中，用拍击式均质器充分混匀；如果样品硬度较大，不宜使用拍击式均质器时，取25g样品加入装有225ml稀释液的椎形瓶中充分振摇，制成1:10样品匀液。6.1.2 化妆品样品 油性液体，取10g/ml样品，先加入5ml灭菌石腊混匀，再加10 ml灭菌吐温80，42℃水浴，加75ml灭菌生理盐水，拍击均质1min，制成1：10样品匀液； 水溶性液体、膏、霜、粉剂等，称10 g样品加90ml灭菌生理盐水，拍击均质1min，制成1：10样品匀液 疏水性膏、霜及眉笔、口红等，称10 g/ml样品加10 ml灭菌液体腊和10 ml灭菌吐温80，再加入70 ml灭菌生理盐水，拍击均质3 min，制成1：10样品匀液。6.1.3 一次性筷子样品 取一次性筷子25g（通常取6双，表面积约为50平方厘米）加入装有225ml稀释液的无菌袋中充分振摇，作为1:10的样品匀液。[b]6.2 样品匀液稀释[/b]用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]移液枪[/color][/url][/color][/url]取1ml 1:10的样品匀液注入装有9ml稀释液的试管中，另换一个枪头，反复吹吸，制成1:100样品匀液。按此法依次制备10倍递增稀释的系列样品匀液。根据对样品污染状况的估计，选择2-3个适宜稀释度（液体样品可包括原液），在进行10倍递增稀释的同时，每个稀释度分别吸取1ml样品匀液加入2个无菌平皿内。同进分别取1ml样品稀释液加入2个平皿作空白对照。[b]6.3 倾注平皿[/b] 将冷却至46℃的孟加拉红培养基倾注平皿，及时转动平皿使培养基和样品匀液混合均匀。[b]注意：[/b]孟加拉红培养基可置46±1℃的水浴箱中保温，但不应超过4小时。凝固后的培养基只可复溶一次，否则将影响培养基质量。[b]6.4 培养[/b] 待琼脂凝固后，将平皿倒置，于28±1℃霉菌培养，3天后观观察，5天记录结果。[b]6.5 计数[/b] 肉眼观察，选取菌落数在10-150CFU的平板计数。根据检测要求，计数霉菌和酵母的总和或分别计数霉菌数和酵母数。霉菌、酵母和细菌的菌落鉴别可参照以下方法。[align=left]6.5.1肉眼观察菌落特征[/align][align=left]通常情况下肉眼观察，霉菌、酵母、细菌三种菌落在孟加拉红培基上的特征如下：[/align] [table][tr][td=1,1,83] 霉菌菌落[/td][td=1,1,482] 绒毛状、棉絮状、蛛网状。具有菌丝体，菌落较大，扁平，较干燥。颜色多样，白色、黑色、黄色多见，菌落正反面的颜色和边缘与中心的颜色常不一致，菌落周围有晕圈。[/td][/tr][tr][td=1,1,83] 酵母菌菌落[/td][td=1,1,482] 菌落较细菌大且厚，质地均匀，正反面和边缘、中央部位的颜色均一。光滑、湿润、常带黏性，菌落多为乳白色，少数为红色，个别为黑色。培养时间较长时可呈皱缩状，表面较干燥。位于琼脂内的菌落，可呈铁饼形、三角形及多角形。[/td][/tr][tr][td=1,1,83] 细菌菌落[/td][td=1,1,482] 由于受到抑制，通常会很小，红色，常呈橄榄形。[/td][/tr][/table]6.5.2 低倍镜观察菌落边缘形态肉眼观察菌落形态无法区别孟加拉红培养基上酵母和细菌时，可用低倍普通光学显微镜观察平板表面菌落边缘较薄较透光的部分，在边缘能看到细胞的是酵母，看不见的则是细菌。 [table=565][tr][td=1,1,83] 霉菌菌落[/td][td=1,1,482] 边缘可见明显的菌丝体。[/td][/tr][tr][td=1,1,83] 酵母菌菌落[/td][td=1,1,482] 边缘较规整，调节聚焦螺旋可见到细腻如细沙的结构。若无法确认可用接种针从边缘稍稍刮开菌落，即可在镜下见到卵圆形的细胞。[/td][/tr][tr][td=1,1,83] 细菌菌落[/td][td=1,1,482] 菌落紧密，边缘整齐，不易透光，看不到细沙粒样的结构。[/td][/tr][/table]6.5.3 染色法观察挑取菌落用亚甲基蓝或革兰氏染色，酵母菌霉菌在低倍镜下即可见到细胞或菌丝，而细菌不可见，无菌丝的酵母体积较大，在40倍显微镜下清晰可见，细菌则需在油镜下才能清楚观察。[b]7. 结果记录与报告[/b]7.1 结果记录计算两个平板菌落的平均值，再将平均值乘以相应的稀释倍数计算。7.1.1 若所有平板上菌落数均大于150CFU，则对稀释度最高的平板进行计数，其他夹板可记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。7.1.2 若所有平板上菌落数均小于10CFU，则按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。7.1.3 若所有稀释度平板均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数计算；如为原液，则以小于1计数。7.2 报告7.2.1 菌落数在100以内时，按“四舍五入”原则修约，采用两位有效数字报告。7.2.2 菌落数大于或等于100时，可将前3位数字采用“四舍五入”原则修约，取前两位数字，后面用0补齐位数表示结果（例如：结果为1210可表示为1200）；也可采用两位有效数字乘以10的指数形式来表示（例如：结果为1210可表示为1.2*10[sup]3[/sup]）。7.2.3 称重取样以CFU/g为单位，体积取样以CFU/ml为单位。7.2.4 根据检测要求分别报告霉菌和酵母数，或报告霉菌和酵母总数。[b]8. 参考文件[/b]《食品安全国家标准 食品微生物学检验 霉菌和酵母计数》 GB 4789.15-2016《一次性筷子 第1部分 木筷》 GB19790-2005《化妆品微生物标准检验方法》 GB 7918-1987

据美国物理学家组织网12月27日报道，美国伊利诺伊大学香槟分校食品科学与人类营养系、加州大学劳伦斯伯克利国家实验室和英国石油公司（BP）的科学家表示，他们对酿酒酵母进行了基因改造，新得到的酵母菌株可以发酵葡萄糖、纤维二糖（葡萄糖的前体物，由两个结合在一起的葡萄糖组成）和木糖，能更好更多地把植物发酵成替代燃料乙醇。相关研究发表在最新一期的美国《国家科学院院刊》上。酵母以糖为生，并在这个过程中能产生很多对人来说是“宝物”的废物——乙醇和二氧化碳，因此生物燃料工业也使用酵母将植物糖转变为生物乙醇。然而，大多数酵母无法将植物中的葡萄糖、纤维二糖和木糖这三种糖全部转化成有用的燃料，比如，酿酒酵母能很好地发酵葡萄糖，但对木糖却有心无力，这使得利用酵母制造生物燃料的成本居高不下。之前，科学家对酵母菌种进行基因改造，让其代谢木糖，但速度很慢，效率过低。研究小组成员之一、伊利诺伊大学食品科学和人类营养学教授金泳恕（音译）表示，经过基因改造的酵母无法发酵木糖的主要问题是，它接触木糖之前会吸收所有葡萄糖，酵母表面的葡萄糖转运蛋白更愿意同葡萄糖依附在一起。在此项新研究中，基因改造后的酿酒酵母可以同时将纤维二糖和木糖转化为乙醇。转化效率和转化得到的乙醇数量都提高了一倍，这主要归结于混合发酵的协同作用。金泳恕表示，新酵母菌种将木糖转化为乙醇的效率至少比目前已知酵母菌高20%，使其成为最好的发酵木糖的细菌。研究团队通过对酿酒酵母做出几个关键的改进而获得了这样的结果。首先，他们给予这种酵母一个纤维二糖转运蛋白，这意味着其能将纤维二糖直接带入细胞中，而只有当纤维二糖进入到细胞内部时，它才会被转化为葡萄糖。这种方法可以战胜酿酒酵母本身对葡萄糖的偏好，从而专注于将木糖吸收进酵母细胞中。接着，研究人员将从一个消耗木糖的酵母中提取的3种蛋白质插入酿酒酵母中，由此提高了新酵母菌种代谢木糖的速度和效率。他们也对一种人造的同功酶进行了基因修改，让木糖代谢的正常中间产物木糖醇积聚的数量最少。最后，该研究团队使用“进化工程”让新菌种利用木糖的能力达到最大。研究人员表示，混合发酵的成本优势也很明显，其乙醇产量也高于工业标准，这种研究很快将被商业化。

目前酵母抽提物应用最多的是食品加工业和生物培养基，在方便面料包、鸡精粉、酱油、肉制品、食用香精等产品中，酵母抽提物已经得到了较好的应用推广；在膨化食品、饼干糕点等产品中的应用也有出现。 我想知道它可以在营养功能食品，如针对特殊人群的低脂，降血糖食品中使用吗？

?酵母的营养需求酒精发酵过程中，可吸收氮是酵母必不可少的营养物质，?即铵盐（NH4?+?）和氨基酸（有机氮）。它们天然存在于葡萄果汁中且含量随时都在变化。往往，天然的氮源并不能满足酵母的发酵需求。

如果在固体饮料中，增加了酵母粉，这个还需要检测霉菌吗？

最近公司在做霉菌和酵母菌的计数分离，用的是添加了氯霉素的虎红琼脂，请问标准酵母菌在该琼脂平板上是什么形态，最好能有图片。 沙门氏菌经过BS和DHL选择性分离后，用法国科玛嘉显色培养基培养，同时使用环凯的生化鉴定盒鉴定（10只一套那种），有时候显色培养基不显紫色可是生化鉴定却是阳性，请问如何判断，请教各位有没有标准沙门氏菌属在该生化鉴定套装中反应的图片，十分感谢！！

酵母感受态的制备:1. 取500-1000微升的酵母感受态菌株，加入到3到5毫升的新YPDA培养基中，30度震荡5-8小时，250rpm2. 取5微升摇好的感受态菌液加到25-50毫升的新YPDA培养基中，30度震荡培养15-20小时，浓度0.15-0.3（视情况想快点可多取点少摇一会）3. 离心700g，5分钟室温下，倒掉上清加入25-100毫升的新YPDA培养基，把菌体摇起来摇匀，30度震荡培养3-5小时4. 离心700g，5分钟室温下，倒掉上清，无菌水重悬（5-10毫升）5. 离心700g，5分钟室温下，倒掉上清，1.5毫升（1倍TE和LiAc的混合液）重悬，并转移到2毫升的离心管中6. 高速离心15秒（12000就可以）去上清加入50微升乘以感受态管数的量（1倍TE和LiAc的混合液）重悬并分装。感受态已制成7. 吸取50微升感受态到1.5或2.0的离心管中，加入5到15微升的质粒100ng（及5微升的carrier DNA有了加没有可以不加）8. 加入500微升的PEG/LiAc（1倍TE和LiAc、 PEG 40%的混合液）轻轻混匀9. 30培养30min，10分钟震荡一次10. 加入20微升的DMSO混匀11. 42度热激15min，每5min混匀一次12. 高速离心15秒，去掉上清加入500-800微升的YPDA或YPD plus重悬，30度培养，（转化时是可选步骤，筛库转化时需要培养90min）13. 离心去上清，以0.9%的生理盐水重悬。（可选步骤）14. 吸取100微升涂板，pGBKT→SD/-Trp→Y2H pGADT→SD/-Leu→Y187

β-葡聚糖的活性结构是由葡萄糖单位组成的多聚糖，它们大多数通过β-1,3结合，这是葡萄糖链连接的方式。它能够活化巨噬细胞、嗜中性白血球等，因此能提高白细胞素、细胞分裂素和特殊抗体的含量，全面刺激机体的免疫系统。那么，机体就有更多的准备去抵抗微生物引起的疾病。β-葡聚糖能使受伤机体的淋巴细胞产生细胞因子（IL-1）的能力迅速恢复正常，有效调节机体免疫机能。大量实验表明，β-葡聚糖可促进体内IgM抗体的产生，以提高体液的免疫能力。这种葡聚糖活化的细胞会激发宿主非专一性防御机制，故应用在肿瘤、感染病和治疗创伤方面深受瞩目。经特殊步骤萃取且不含内毒素的β-1,3-葡聚糖在美国FDA已认定是一种安全的物质，可添加在一般食品，许多报导显示老鼠口服酵母β-1,3-葡聚糖，可增加强腹膜细胞抗菌之吞噬作用。酵母葡聚糖是存在于酵母细胞壁中的一种具有增强免疫力活性的多糖——β-葡聚糖。β-葡聚糖广泛存在于各种真菌和植物，如香菇、灵芝、燕麦中，是它们发挥保健作用的主要功效物质。而酵母葡聚糖的免疫增强活性更强，并具有改善血脂、抗辐射、改善肠道功能的作用。

求大神解释一下，食品国标4789.15中，霉菌和酵母测定，计数怎么计，标准是小于或等于50cfu/g，测得，霉菌1cfu，酵母7cfu（稀释10倍），是总得计数40cfu/g合格，还是霉菌5cfu/g，酵母35cfu/g不合格。标准50是总和50，还是各25的意思。急急急！