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霍氏假单胞菌

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霍氏假单胞菌相关的资讯

  • 乐百氏矿泉水铜绿假单胞菌超标
    乐百氏矿泉水铜绿假单胞菌超标   “上海发布”及“上海质监发布”官方微博昨天披露,乐百氏(广东)饮用水有限公司上海分公司生产的“乐百氏”饮用天然矿泉水被检出“铜绿假单胞菌”超标。   检查结果来自市质监局近期针对本市瓶(桶)装饮用水生产企业的专项监督抽查,涉及铅、总砷、亚硝酸盐、游离氯、氰化物、大肠菌群、霉菌等多项指标,乐百氏是被抽检的82批次产品中唯一不合格的品牌,该品牌18.9升的桶装饮用天然矿泉水被查出铜绿假单胞菌超出标准规定限值。记者在乐百氏公司官方主页上看到,该公司桶装水产品主要有4款,并称其中乐百氏饮用天然矿泉水源“来自地下深层天然水源,含多种天然矿物质,部分市场有售。”当记者致电乐百氏客服热线,被告知该款产品已于今年2月停售。截至发稿时,乐百氏方面并没有就停售前已对外售出的产品如何处置作出表态。记者了解到,目前上海市场在售的桶装水,只有纯净水和矿物质水两种,并没有所谓桶装的“天然矿泉水”。   据了解,铜绿假单胞菌又称绿脓杆菌,土壤、水、空气,正常人的皮肤、呼吸道和肠道等都有该菌存在。疾控中心专家表示,该菌是一种条件致病菌,只在某种特定条件下才能致病。由于机体抵抗力降低,被严重烧伤或患代谢性疾病、血液病、恶性肿瘤的患者,以及术后或某些治疗后的患者比较容易感染该菌。不过,如果过多饮用细菌超标的饮用水,可能会导致腹泻等症状。   专家还建议,饮用水产品在出厂前都会经过消毒工艺,消毒工艺通常包括氯气消毒、臭氧消毒、紫外消毒等。消费者在产品开封后如发现有异味,很有可能为企业消毒过量,建议及时退换,及时与经销商联系。
  • 乐百氏饮用水检出铜绿假单胞菌超标
    近日,“上海发布”及“上海质监发布”官方微博披露,乐百氏(广东)饮用水有限公司上海分公司生产的“乐百氏”饮用天然矿泉水被检出“铜绿假单胞菌”超标。   检查结果来自上海市质监局近期针对本市瓶(桶)装饮用水生产企业的专项监督抽查,涉及铅、总砷、亚硝酸盐、游离氯、氰化物、大肠菌群、霉菌等多项指标,乐百氏是被抽检的82批次产品中唯一不合格的品牌,该品牌18.9升的桶装饮用天然矿泉水被查出铜绿假单胞菌超出标准规定限值。   据了解,铜绿假单胞菌又称绿脓杆菌,土壤、水、空气,正常人的皮肤、呼吸道和肠道等都有该菌存在。疾控中心专家表示,过多饮用细菌超标的饮用水,可能会导致腹泻等症状。
  • 饮用水中铜绿假单胞菌快速检测解决方案
    饮用水中铜绿假单胞菌快速检测解决方案饮用水微生物铜绿假单胞菌检测仪深芬仪器厂家生产的铜绿假单胞菌/绿脓杆菌检测仪能快速测定矿泉水、包装饮用水、等水体中铜绿假单胞菌;微生物致病菌检测仪广泛应用于天然矿泉水行业、饮用水行业、制药行业、饮料行业、研究单位、检验检疫机构、质量监控机构等部门。在致病菌微生物检测领域,测量准确性和测量速度之间的矛盾一直没有解决,针对这一现状深圳市芬析仪器制造有限公司研制了一款集温控技术、生物技术、光谱分析技术于一体的微生物致病菌检测仪,CSY-WSW饮用水中铜绿假单胞菌快速检测仪操作简单,无需增菌,缩短了检测时间,测试时间不超过1小时,是一种新型快速检测微生物致病菌含量的仪器。饮用水中铜绿假单胞菌快速检测仪检测项目:金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、志贺氏菌、李斯特菌、副溶血性弧菌、溶藻性弧菌、阪崎肠杆菌、沙门氏菌、蜡样芽孢杆菌、铜绿假单胞菌的定量检测。(支持检测项目定制)对于铜绿假单胞菌,我国最新的饮用水标准 GB19298-2014《包装饮用水》明确规定:水样中铜绿假单胞菌不得检出。另外,按照食品安全相关法律法规的要求:出厂前应对每批次成品进行铜绿假单胞菌检测,如果检出,则为不合格产品,应该立即停止销售和召回。饮用了含有铜绿假单胞菌的饮用水,是否会损害健康呢?主要取决于两个因素:第一,铜绿假单胞菌含量情况,第二,不合格饮用水的饮用量情况。因为人体免疫系统能有效地抵抗该细菌的感染,因此,正常情况下,如果铜绿假单胞菌在水中的含量不高,并且饮用量也不多,一般不会出现什么不良反应。但是,像刚出生不久的婴儿或是受到大面积烧伤的病人这类情况,由于其免疫系统不健全或是出现免疫缺陷时,则极易受到铜绿假单胞菌的感染。受感染的病人通常会出现发热、黄疸、脾大、伤口溃烂,并产生肺炎、泌尿系感染、脑膜炎、败血症等继发性疾病。所以,铜绿假单胞菌对抵抗力较弱的人群存在较大健康风险,容易引起急性肠道炎、脑膜炎、败血症和皮肤炎症等疾病。饮用水中铜绿假单胞菌快速检测仪技术参数:1、显示屏幕:7寸彩色中文液晶触摸显示屏2、操作系统:Android 9.0操作系统,芯片A53 联发科 2G+16G(外置TF内存支持扩展128G)3、样品信息:检测通道可独立设置样品名称、样品来源单位名称、单位地址(三级联动)、责任人、联**式、信用代码等信息4、智能检测:无需增菌,兼容单通道独立检测或多通道同时检测测试时间(前处理+测试)不超过1小时5、用户信息:可设置检测单位名称、单位地址(三级联动)、联**话、责任人、检测人员、审核员等,可多账户设置6、数据分析:对检测结果进行圆饼图、柱状图、折线图进行统计、汇总、分析;7、数据导出:支持USB数据导出,格式可选(TXT、Excel)8、GPS定位:支持卫星定位功能9、系统更新:支持远程更新、新版本自动更新10、通讯接口:外置SIM卡插口(支持2G/3G/4G全网通)、外置存储TF内存插口、RS232、USB A型、USB B型、网口、wifi、蓝牙11、打印功能:内置热敏打印机,可通过USB B型外链打印机,单条或多条数据合并打印,可打印检测结果检测报告可打印检测项目、样品名称、检测结果、结果判断、检测日期 、检测单位、检验人员、被检测单位等信息;USB B型接口可连接A4打印机打印结果。12、数据上传:支持SIM(2G/3G/4G全网通)、网口、wifi进行数据传输及对接各地监管平台13、检测通道:16通道检测14、检测结果:定性定量分析15、检测时间:60分钟16、样品类别:可检测固体、液体、表面17、饮用水中铜绿假单胞菌快速检测仪尺寸:385mm*330mm*170mm深圳市芬析仪器制造有限公司主营业务:农药残留检测仪、ATP荧光检测仪、食品安全检测仪、水质检测仪、土壤肥料养分检测仪、农产品质量安全检测仪、免疫层胶体金/荧光分析仪、兽药残留检测仪、重金属检测仪、水分测定仪/固含量检测仪、检测试剂检测卡检测箱定制等,OEM代工/ODM贴牌等项目合作,详细内容可咨询夏经理。
  • 北京工商局检测发现“发光猪肉”因含“荧光假单胞菌”
    工商局称与猪肉安全无关,未检出荧光增白物质 专家称加热数秒能杀死细菌   ■ “市场买回猪肉 半夜发出蓝光”追踪   猪肉为何会在黑夜里发出荧荧蓝光?昨天下午,北京市工商局对外揭晓“谜底”:通过抽检发现,这是一种叫荧光假单胞菌的细菌在“作祟”,与猪肉安全无关。   专家介绍称,该细菌并不可怕,对正常人群不具有致病性。   抽检未发现荧光增白物   近期,有几位消费者反映在建欣苑菜市场、八里桥市场等处购买的猪肉,夜晚会发出荧光,担心吃了可能对身体有害。而这些肉都是从正规屠宰场批发,且肉身上有检验检疫章(本报12月12日曾报道)。   近日,北京工商部门组织了抽检,由北京市食品安全监控中心对送检样本进行荧光增白物质和荧光假单胞菌检测,结果显示,送检样本均未检出荧光增白物质,不过都检出了荧光假单胞菌。   猪肉煮熟可杀灭该细菌   “荧光假单胞菌能产生黄绿色荧光色素而使猪肉发光”,中国农业大学微生物系教授王贺祥介绍,这种细菌在肉及肉制品、禽蛋类等蛋白质丰富的食品中,易生长繁殖。   王贺祥说,荧光假单胞菌属于革兰氏阴性嗜冷菌,广泛存在于土壤、水、植物、动物活动环境中,也是存在于人类肠道的正常细菌,对正常人群不具有致病性,不必对其恐慌。   如何杀灭猪肉上的细菌呢?王贺祥介绍,该菌在42℃就会停止生长,超过70℃,只需数秒即可杀死。   市工商局也表示,消费者购买到的“发光猪肉”,可能在屠宰、储存、运输、销售等过程中污染了荧光假单胞菌,只要猪肉本身没有腐败变质,可以通过焯、炒、煮等方式将猪肉熟制后食用,不会对人体健康产生影响。
  • 山西:饮用水中检出铜绿假单胞菌、大肠菌群 黑芝麻糊检出霉菌超标
    p & nbsp & nbsp 12月11日,山西省食药监局公布了10大类170批次食品监督抽检结果,检出不合格样品9批次,涉及饮料8批次、方便食品1批次。 /p p   通报显示,8批次饮料全部为饮用水,来自临猗县峨嵋润泽泉纯净水厂、稷山县黄花源饮用水有限公司、稷山县秦井天然饮品有限公司、晋中津美饮业有限公司、运城市方大银蝶泉饮品有限公司、夏县怡鑫源饮品有限公司、临县观音圣泉饮品有限公司、夏县禹洋水业有限公司8家生产企业。其中有6批次检出铜绿假单胞菌,2批次检出大肠菌群和铜绿假单胞菌。 /p p   铜绿假单胞菌是常见的细菌之一,常存在于潮湿的环境,如土壤、水、空气中,该菌是一种条件致病菌,在机体抵抗力降低等特定条件下可致病。饮用水中铜绿假单胞菌不合格原因可能是:一是原料水体受到感染;二是生产过程中卫生控制不严格,杀菌不彻底,从业人员未经消毒的手直接与饮用水或容器内壁接触;三是包装材料清洗消毒有缺陷。 br/ /p p   大肠菌群是国内外通用的食品污染常用指示菌之一。食品中检出大肠菌群,提示被致病菌(如沙门氏菌、志贺氏菌、致病性大肠杆菌)污染的可能性较大。大肠菌群超标的原因可能是由于产品的加工原料、包材受污染,或生产过程中产品受人员、生产设备、环境的污染,或者有灭菌工艺的产品灭菌不彻底等原因导致。 br/ /p p   另外,大同市华林有限责任公司振华南街超市销售的标称桂林周氏顺发食品有限公司生产的手工纯香黑芝麻糊检出霉菌超标。 br/ /p p   霉菌在自然界很常见,霉菌可使食品腐败变质,破坏食品的色、香、味,降低食品的食用价值。霉菌超标可能是加工用原料受霉菌污染,或者生产过程中卫生条件控制不严,样品储运条件控制不当导致。 br/ /p p   针对抽检中发现的不合格产品,山西省食药监局已按照《中华人民共和国 strong class=" keylink" 食品安全法 /strong 》的规定,责成相关市局及时进行核查处置,采取封存、下架、召回不合格产品等措施防控食品安全风险,督促企业查找原因,消除隐患。消费者如果在市场上发现被通报的不合格食品,可拨打12331投诉举报。 br/ /p p br/ br/ /p
  • 中国饮料工业协会发布《包装饮用水中铜绿假单胞菌的快速检测方法(征求意见稿)》团体标准
    中国饮料工业协会已批准《包装饮用水中铜绿假单胞菌的快速检测方法》团体标准立项,该项团体标准由中国饮料工业协会团体标准技术工作委员会归口,中国饮料工业协会技术工作委员会组织起草。根据《中国饮料工业协会团体标准管理办法》,起草工作组按照标准制修订工作程序,完成了标准征求意见稿。现公开征求意见,截止2023年8月14日前返回标准意见反馈表。点此下载全部附件
  • 【菌株新品】十月好时光,新品与您相会
    北纳生物十月上新,多种菌株新品前来与您相会!链格孢,聚多曲霉(萨氏曲霉) 等热门产品全部现货供应,欢迎您的选购!产品目录BNCC编号产品名称36535链格孢341546三孢布拉氏霉340405须癣毛癣菌 336669奇异变形杆菌139696帕勒隆尼氏假单胞菌 336543多主枝孢(蜡叶芽枝霉)354297假单胞菌 336536聚多曲霉(萨氏曲霉)
  • 津津有“卫”丨食品中米酵菌酸质谱分析技术
    自然界中广泛存在的椰毒假单胞菌很容易在食品表面生长,在26摄氏度、中性偏酸的条件下能产生大量米酵菌酸(Bongkrekic acid),分子量486.605。发酵玉米面制品、河粉、肠粉、粿条、米粉等湿米粉,以及银耳和木耳等食物,受椰毒假单胞菌污染而产生米酵菌酸毒的风险比较大。米酵菌酸具有很好的耐热性,正常的烹饪加热无法让其失活,食品一旦产生了米酵菌酸毒素,加热后食用仍可引起中毒。 目前我国仅对银耳中米酵菌酸的最高含量规定为250 μg/KG,其它食品中尚未有具体规定。米酵菌酸结构式 液相色谱质谱联用技术分析食品中米酵菌酸 样品前处理:称取2 g试样(精确至0.01 g)于50mL离心管中,加入25 mL 1%氨水80%甲醇水溶液,充分混匀,超声提取30 min(干样超声前需要暗处放置1 h),10000r/min离心5 min,取上清液5 mL于PAX小柱(阴离子固相萃取小柱,60mg/3 mL,预先用3 mL甲醇和2 mL水活化),待流干后依次用2 mL水和3 mL甲醇淋洗除杂,并弃去所有流出液。最后用5 mL 1%甲酸甲醇溶液洗脱,洗脱液于50℃氮吹浓缩近干,用50%乙腈水定容到1 mL,过滤膜后测定。 液相色谱条件:BEH C18色谱柱(100 mm× 2.1 mm,2.5 μm);柱温:30 ℃;进样体积:5.0 μL;流动相:(A)0.1 %甲酸水溶液和(B)乙腈;流速:0.35 mL/min;梯度洗脱程序:0 ~ 3.0 min,30 % B~90 % B;3.0 ~ 5.0 min,90 % B;5.0 ~ 5.5 min,90 % B~30 % B;5.5 ~ 9.0 min,30 % B。质谱条件:仪器型号:LCMS-8045/50/60系列 ESI—:离子源接口电压:4.5 kV;干燥气:氮气,10 L/min;加热气:空气,10 L/min;碰撞气:氩气;脱溶剂管温度:250 ℃;接口温度:250 ℃;ESI负离子多反应监测模式(MRM):m/z 485.2441.2 (CE 14V,定量离子对),485.2397.2 (CE 18V)。米酵菌酸标准溶液1ng/mL 某阳性米粉样品中检测到米酵菌酸 不管是在餐馆还是在自家厨房,只要这些食物的外观气味出现异常,就应立即停止食用。如果吃了之后身体出现不适,疑似中毒,需尽快催吐,排出胃内容物,以减少毒素的吸收,同时保存好可疑食品,及时就医。 其它相关内容请向岛津索取:1、鱼贝类毒素之质谱分析2、蘑菇毒素之质谱分析3、真菌毒素分析4、生物毒素分析质谱数据库5、食品安全应用文集
  • 人体对“细菌”和“病毒”感染分不清楚,原因竟然是噬菌体作怪!
    蒙大拿大学的研究人员在《Science》发表了关于细菌如何引起感染的新见解,可能有助于未来的抗感染治疗。 研究对象不是细菌,而是感染病毒的噬菌体,作为国家卫生研究院资助项目的一部分,帮助开发细菌感染疫苗。“噬菌体通常被视为细菌寄生虫,”该论文的合着者助理教授Patrick Secor说。由于耐抗生素的细菌流行率越来越高,利用噬菌体(噬菌体疗法)替代抗生素杀死致病细菌的研究逐渐升温。噬菌体多种多样,被认为是地球上最普遍的生物实体。“当我们寻找感染致病菌铜绿假单胞菌的噬菌体时,我们发现大多数菌株都感染了一种名为Pf的噬菌体,但这种噬菌体不会杀死它们的细菌宿主,”Secor说。当Secor和斯坦福大学的研究人员在人体伤口中寻找Pf噬菌体时,他们惊讶地发现了大量丝状噬菌体——平均每个拭子上有100万个Pf噬菌体。Secor课题组以前研究过噬菌体是如何影响细菌毒性的。“因此,我们问,这些Pf噬菌体是否可能直接与人体免疫系统相互作用?”他们与斯坦福大学的合作者一起发现,Pf噬菌体被免疫细胞识别为了病毒,识别冷病毒的细胞表面受体同样也可以识别噬菌体。“这是一个关键的发现,”Secor说。“这些噬菌体诱导了抗病毒反应,但是面对细菌感染,这是一种不适当的免疫反应。”研究人员认为,这种不适当的免疫反应使细菌在伤口或肺内获得“掩护”,从而建立感染。研究人员希望,他们的发现可以刺激新研究,通过靶向感染细菌的噬菌体发展控制感染的有效策略。
  • 屈臣氏两度菌落超标上“黑榜”
    宣称"至清至纯"的屈臣氏旗下饮用水近日被曝"菌落总数"超标。日前,广州市质监局在网站公布"2013年广州市生产领域食品质量监督抽查第九批公告",其中饮料类不合格产品多达18批次,屈臣氏18.9L/桶的蒸馏水菌落总数超标80倍登上"黑榜".   无独有偶,9月份,屈臣氏一个批次的饮用矿物质水(18.9L/桶,生产日期20130424C)也因菌落总数"上榜".专家表示,菌落总数超标的水或饮料可能引起呕吐、腹泻、头晕、恶心等症状,但从口感上一般比较难分辨。昨日,屈臣氏相关人士向本报表示,公司正在进一步了解和跟进此事,尚没有确切调查结果。   饮料类产品成为此次抽检的"重灾区".其中,由广州真和药业有限公司太平分公司于2013年6月20日生产的"邓老凉茶"冲剂被检出霉菌数量超过标准值10倍有余。此外,在广州市白云硒珍矿泉水厂于2013年7月3日生产的"西珍"牌饮用天然矿泉水(18.9升/桶)中,条件致病菌"铜绿假单胞菌"被检测出。记者查阅相关资料发现,该类致病菌可引发败血症、呼吸道感染以及心内膜炎等临床问题。与此同时,屈臣氏的桶装蒸馏水也上榜,而绿源山泉、高山月、水分子、茶之泉、青水居、农峡山泉、怡翠山泉、凤凰山等饮用水均被检测出菌落超标或酵母超标。   "菌落总数是衡量饮用水质量状况的重要指标,总数含量的高低,表明饮用水受微生物污染的程度大小。"龙腾资本董事总经理周璐在接受《国际金融报》记者采访时表示,根据规定,蒸馏水是按照GB 19298-2003《瓶(桶)装饮用水卫生标准》进行检测的,其中规定菌落总数的限值不能超过20.企业再生产过程中由于桶和桶盖消毒不完全、生产设备清洗不完全,或是车间清洁程度不够等都会导致超标。此次质监部门是从生产环节上抽查的,仍检出菌落总数有问题,屈臣氏需要认真调查是什么原因。不过,据了解,虽然目前水的国标中微生物指标有"菌落总数"一项,但是包括食品法典委员会等机构并无这一要求。
  • 米酵素菌到底有多可怕?
    1953-1994年,我国学者先后在16个省份陆续发现了由当地特色食品引起的椰假单胞菌食物中毒545起,中毒人数3352人,死亡1401人,平均病死率高达41.80%。米酵菌酸中毒一直是我国病死率较高的一种微生物性食物中毒。到了如今,由于米酵菌酸而引起的中毒死亡事件也从未停止过。2018年7月,浙江金华久泡黑木耳中毒事件中,3人中毒,1人死亡。2018年10月,广东河源和东莞河粉中毒事件中,7人中毒,3人死亡。2020年7月,广东惠来河粉(粿条)中毒事件中,11人中毒,1人死亡。2020年10月,黑龙江鸡西酸汤子中毒事件中,9人中毒,9人死亡。 图1:变质后会含有米酵菌酸的食物 科普时间 Popular Science TimeQ:米酵菌酸是什么椰毒假单胞菌酵米面亚种产生的一种可以引起食物中毒的毒素。系统命名为:3-羧甲基-17-甲氧基-6,18,21-三甲基-廿二碳-2,4,8,12,14,18-七烯二酸。 图2:米酵菌酸结构式 Q:怎么判断有没有米酵菌酸中毒食用了含有米酵菌酸的食物后,2至24小时会出现上腹不适,恶心、呕吐(呕吐为胃内容物,重者呈咖啡色样物),轻微腹泻、头晕、全身无力等。重者可出现皮肤黄染、肝脾肿大、皮下出血、呕血、血尿、少尿、意识不清、烦躁不安、惊厥、抽搐、休克等,体温一般不升高,病死率高达40%-*。如果出现了疑似米酵菌酸中毒的情况,应立即手法或药物催吐,催吐后口服活性炭,并尽快到医院治疗。凡与患者吃过同种食物的人,不论是否发病,一律送往医院观察、治疗。Q:如何对米酵菌酸中毒SAY NO?专家提示,在生活中为了避免米酵菌酸中毒,应严禁用浸泡、霉变的玉米制作食品。家庭制备发酵谷类食品时要勤换水,保持卫生,要保证食物无异味产生,最好的预防措施是不制作、不食用酵米面。通过结构式可以看出米酵菌酸含有三个羧基,参考国标GB5009.189—2016提供的银耳及其制品中米酵菌酸的提取与测定方法,选用INNOTEG MAX 60mg/3ml强阴离子交换固相萃取柱(货号:223-12002 )进行前处理,可有效去除基质干扰,完全适用于国标规定的净化方法,具有高效、快速、回收率好等优点。Q:如何检测米酵菌酸?1、提取干试样经粉碎过后称取 20.00 g(精确至 0.01 g)置于锥形瓶中,加 100 mL 甲醇 / 氨水 / 水溶液 (80:1:19,v/v/v);鲜(湿)样试经剪碎、匀浆后称取 10.0 g(精确至 0.01 g),加入 80 mL 甲醇 / 氨水 / 水溶液溶液(80:1:19, v/v/v);混匀,室温下避光浸泡 1 h,超声提取 30 min,过滤;干试样滤液取 50 mL,鲜(湿)试样取滤液 40 mL,置 80 ℃水浴中(加入沸石)浓缩至约3 min,待净化。 2、净化SPE 小柱(货号:223-12002 ):INNOTEG 混合型阴离子交换MAX 固相萃取柱60mg/3ml;活化:5ml 甲醇、5ml 水;上样:上样液用氨水调pH 至9-10,控制流速1d/s;淋洗:5ml 水和5ml 甲醇淋洗,弃去流出液,真空泵抽干;洗脱:6ml 2% 甲酸甲醇溶液洗脱,收集洗脱液;浓缩上机:40℃水浴氮吹至干,加入0.5mL甲醇,涡旋溶解,混匀,过滤后进行HPLC 分析。 图3:色谱图 MAX固相萃取柱型号及规格填料量/mg体积/mL包装/(支/盒)型号60350223-12002150630223-12003500630223-12004200630223-12005
  • 延禧攻略:高贵妃究竟死于哪种细菌感染?
    有没有人在追《延禧攻略》?该古装剧一改往日女主纯良无辜小白兔的人设,一路打怪升级,战斗力爆表。成了这段时间大家热议的头号大剧!在剧中,高贵妃就是嚣张跋扈的代名词,明明只是一个贵妃,却演出了皇太后的气势,屡屡将毒手伸向皇子......比如,泥萌最爱的“五阿哥”~战斗女主终于按捺不住,在某次高贵妃在与皇上观看打铁花表演时,借着“万紫千红”的戏用铁水烫伤了高贵妃的后背,更惨的是铁水被有心之人混进了金汁,使得高贵妃的病情日渐恶化,最后自杀领盒饭走人......看到这里,很多人要问:金汁为何物?为什么这么厉害?金汁名字看似很高大上,实质却是最原始污秽,它是最肮脏的粪便和尿液熬成的金色浓稠汤汁。那么,问题来了,粪便有这么大的杀伤力吗?铁的熔点有1535℃,虽然粪便中含有大量细菌,但高温不是能灭菌吗?按照铁水的高温,往铁水里加入粪水,那些细菌命再硬也早就被杀死了,还有什么能力害人? 对,实际上,金汁的作用很纯粹,就是想恶心你,心理上膈应你。高贵妃真正死因是烫伤创面细菌感染,和有没有混入金汁关系不大。人一但被烧伤,皮肤屏障功能受损,创面渗出的体液及坏死组织会成为细菌的良好培养基,很容易造成感染,在那个没有抗生素的时代,这都是分分钟要命的。也有网友感叹了,高贵妃要是活在现代,就不会被感染了,一定能活到全剧终。那么,一定是这样吗? 像高贵妃被超高温度的铁水大面积烫伤,往往导致全层皮肤的深度烧伤(医学上称为Ⅲ度烧伤),非常严重,救治难度很高。就算高贵妃活在现代,医院各种有创检查和治疗(如气管切开、留置导尿、动静脉置管等)、血液制品的输入、和抗菌素长时间全身应用都是会可引发或导致感染,如果不幸的再感染“超级细菌”,再加上像高贵妃这样“不配合”的病人,高贵妃还是有可能会全身感染而亡! 那么被烫伤的高贵妃最可能感染的病菌有哪些呢? 1.铜绿假单胞菌大面积烧伤创面感染最常见的细菌是铜绿假单胞菌,本菌属于非发酵革兰氏阴性杆菌。菌体细长且长短不一,菌体的一端有单鞭毛,在暗视野显微镜或相差显微镜下观察可见细菌运动活泼。 本菌为专性需氧菌,生长温度范围25~42℃,最适生长温度为25~30℃,该菌有4℃不生长而在42℃可以生长的特点。在普通培养基上可以生存并能产生水溶性的色素,如绿脓素(pyocynin)与带荧光的水溶性荧光素(pyoverdin)等,在血平板上会有透明溶血环。铜绿假单胞菌能产生多种致病物质,主要是内毒素、外毒素、蛋白分解酶和杀白组胞素等。其致病特点是引起继发感染,多发生在机体抵抗力降低时,如大面积烧伤,长期使用免疫抑制剂等。临床上常见的有皮肤和皮下组织感染,中耳炎、脑膜炎、呼吸道感染、尿道感染、败血症等。铜绿假单胞菌具有多重耐药的特性,能天然抵抗多种抗生素,对抗生素耐药有多种耐药机制,如产生的多种β内酰胺酶、产氨基糖苷类钝化酶、细菌细胞外膜蛋白改变使抗菌药进入菌体的量减少、细菌细胞膜上存在多种外排泵以及细菌旋转酶或拓扑异构酶发生改变等,在治疗铜绿假单胞菌的感染过程中,一方面充分考虑其耐药机制,选用耐药率低的药物,避免诱导铜绿假单胞菌产生β内酰胺酶而对抗菌药物广泛耐药。另一方面,由于长期的各种抗生素治疗,分离菌株可能发生耐药性的改变,因此,初次分离的敏感菌株在治疗3~4 d 后应重新培养做药敏试验。 2.金黄色葡萄球菌 金黄色葡萄球菌为革兰染色阳性球菌,直径约1μm,排列成葡萄串状,无芽胞,无鞭毛,不能运动。大多数无荚膜。平板上菌落厚、有光泽、圆形凸起,直径0.5~1.0mm。血平板菌落周围形成透明的溶血环。常引起皮肤组织化脓性感染,金黄色葡萄球菌产生的多种外毒素也可引起败血症及脓毒血症,是医院感染的主要病原菌。随着抗生素的广泛滥用,耐药的金黄色葡萄球菌开始出现并逐年增多,现已遍及全球,其中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA),也称超级细菌。除甲氧西林外,MRSA对其他所有与甲氧西林结构相似的β-内酰胺类抗生素以及氨基糖苷类、四环素类、氟喹诺酮类等药物均有不同程度耐药,使得抗感染的难度大大增加。 3.大肠埃希菌 大肠埃希菌为革兰氏阴性短杆菌,大小0.5×1~3微米。周生鞭毛,能运动,无芽孢。目前,大肠埃希菌已成为医院感染的重要机会致病菌之一,当机体抵抗力下降时可引起人体各部位内源性感染。比如大面积烧伤的人,大肠杆菌侵入血流,会引起败血症。近年来,随着抗生素应用的日益增多,特别是许多广谱抗生素及新型抗生素的广泛应用,细菌的耐药性日益严重,多重耐药的肠杆科细菌对全球健康的威胁与日俱增。产超广谱β内酰胺酶(ESBL)和碳青霉烯酶是菌株耐药的常见原因。 4.鲍曼不动杆菌 鲍曼不动杆菌为革兰阴性球杆菌,单个或成双排列,有时呈丝状或链状。无芽胞,无鞭毛,革兰染色不易脱色。在血琼脂平板上35C 培养18~24 h ,形成直径2~3 mm 、圆形、灰白色、光滑、边缘整齐的菌落,部分菌落呈黠液状。在麦康凯琼脂等平板上35℃培养18~24 h ,形成粉红色菌落, 48 h后菌落呈深红色,部分菌株呈黠液型菌落。鲍曼不动杆菌是条件致病菌,广泛存在于自然界。该菌对湿热紫外线及化学消毒剂有较强抵抗力,常规消毒只能抑制其生长而不能杀灭,因此,在医院,患者机体抵抗力下降加上各种侵入性操作和长期使用广谱抗生素治疗,一些不动杆菌伺机而动,趁机占领“阵地”且产生了耐药性,逐步成为医院感染的重要病原菌,主要引起呼吸道感染,也可引发败血症、泌尿系感染、继发性脑膜炎等,对危重患者威胁很大。特别是耐碳青霉烯类的鲍曼不动杆菌,发展迅猛,甚至出现“全耐药”的鲍曼不动杆菌,已引起临床和微生物学者的严重关注。 抗生素的出现如奇迹一样帮人类解决了无数的问题,使人类在与众多疾病的战斗中能够占主导地位。但近几年,抗生素的错误及过度使用,病毒和病菌的抗药性越来越强,对人类构成的威胁也越来越大。因此,即便是活在现代,高贵妃依然难逃厄运。
  • QIAcuity数字PCR系统助力 “细菌耐药性研究及新药开发”
    背景近年来,多重耐药性 (multi-drug resistance, MDR) 的出现已成为多国关注的公共卫生问题,作为细菌变异及过度使用抗菌药物的结果,它的主要机制是外排膜泵基因突变,其次是外膜渗透性的改变和产生超广谱酶。最常见的耐药菌为革兰阳性菌MDR-TB和MDR-MRSA,以及在ICU中常出现的鲍曼不动杆菌和铜绿假单胞菌。统计数据显示,血液感染细菌铜绿假单胞菌与30%至50%的高死亡率有关。正因为如此,迫切需要开发新的抗菌药来对抗感染。数字PCR 技术作为一项高灵敏性、高精确性、绝对定量技术,可有效助力病原微生物耐药性分析及新药研发等应用。QIAGEN的QIAcuity数字PCR系统基于纳米微孔板技术,采用集成式一体化设计理念,支持多通道检测,可实现高通量、高灵敏性检测。接下来小编带您一起解读QIAcuity数字PCR系统在该研究领域的实际应用案例。本案例中,来自英国朴茨茅斯大学、泰国纳瑞宣大学和披博宋甘皇家大学的研究人员基于QIAGEN QIAcuity dPCR平台,建立了多重反转录数字PCR (mRT-dPCR),深入研究了氢奎宁(抗疟疾药物)的天然化合物对临床常见微生物的抗感染机制。方法与结果研究者首先在前期细菌实验中发现氢奎宁可以抑制和杀死几种临床重要细菌,即金黄色葡萄球菌、阴沟肠杆菌、大肠杆菌、肺炎克雷伯菌以及常见的多重耐药病原体铜绿假单胞菌。通过进一步研究,作者发现氢奎宁对铜绿假单胞菌的杀菌浓度是其他菌株的2-4倍,且在4-8h内对铜绿假单胞菌不仅有抑菌杀菌作用,还存在呈剂量依赖性。为了进一步验证氢奎宁对多重耐药病原体铜绿假单胞菌的抗菌和耐药机理,即氢奎宁是否能够在铜绿假单胞菌中诱导其主要的外排泵类型,即耐药节结化细胞分化家族 (RND) 相关基因的异常表达。作者利用QIAcuity dPCR系统,建立了多重数字PCR (mdPCR) 和多重反转录数字PCR (mRT-dPCR) 两套研究路线,成功用于快速检测多种临床相关细菌中是否存在mexB、mexD和mexY这三种关键基因,并对其表达量的变化也进行了进一步的分析。结果表明,在0.5X MIC氢奎宁作用1h后,mexD和mexY的表达量分别提高了20.8±4.31和11.8±5.01倍,而相比之下mexB的表达水平则相对稳定(1.6±0.15倍)。这些数据表明,在P. aeruginosa ATCC27853菌株中,虽然氢奎宁诱导了MexCD-OprJ和MexXY外排膜泵的上调,但MexAB-OprM外排膜泵则并没有上调,意味着铜绿假单胞菌是通过上调MexCD-OprJ和MexXY外排膜泵的水平而诱导了一种保护机制来避免氢奎宁引起的细胞应激,进而产生一定程度的耐药性。结论研究者基于QIAcuity dPCR系统建立的多重反转录数字PCR (mRT-dPCR) 技术路线,阐明了低剂量的氢奎宁可诱导铜绿假单胞菌特异性RND型外排膜泵基因表达水平变化,进而引起了一定程度的耐药性。研究者也表示将进一步研究氢奎宁的抗菌活性和副作用,揭示氢奎宁的分子靶标,从而对氢奎宁在临床中的使用提供更多指导。 参考文献:Hydroquinine Possesses Antibacterial Activity, and at Half the MIC, Induces the Overexpression of RND-Type Efflux Pumps Using Multiplex Digital PCR in Pseudomonas aeruginosa. Nontaporn Rattanachak, Sattaporn Weawsiangsang, Touchkanin Jongjitvimol, Robert A Baldock and Jirapas Jongjitwimol 1,4,5,END
  • 北京市将建监测网严防“超级细菌”
    日前,一种“超级细菌”现身印度等国,引起广泛关注,耐药患者之所以频现,与抗生素滥用有关。昨天,北京市医疗机构药事管理专家委员会成立,本市将在年内建立细菌耐药监测网,及时发现耐药致病菌。初期包括所有三级医院和部分二级医院,未来将覆盖包括社区医院在内的所有医疗机构。   据悉,药事专家委员会的抗菌药物与细菌耐药监测组将承担抗菌药物的临床应用监测,收集数据并进行汇总、分析、上报和提出改进意见。   “超级细菌”对几乎所有抗菌药物均耐药,加强抗菌药物合理应用是降低细菌耐药的有效措施之一。北京大学临床药理研究所常务副所长吕媛表示,目前,我国超级耐药细菌监控网络还未监测到俗称“超级细菌”的多重耐药菌,但随着国际交往的日益紧密,极有可能在我国“现身”。   吕媛称,耐药性的出现主要是因为抗生素的不合理使用所致,本市即将建立的耐药监测网是要对各医疗机构的细菌耐药情况进行监测。届时,将从临床病人处分离致病菌,研究其对哪些抗菌类药物耐药,并根据全市汇总情况对医院用药进行指导。例如,目前发现肺炎链球菌对红霉素的耐药率比较高,就不建议医院使用。同时,也将对临床医生开展抗生素使用的培训。目前计划监测网内的医疗机构每3个月报一次监测结果,将来希望实现实时上报。   专家表示,被媒体广泛关注的多重耐药菌(即“超级细菌”)并非首个耐药菌,只是其耐药特点与其他耐药菌不同而已,如铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌等都是目前临床较为关注的耐药菌。   应对措施:二三级医院处方每月点评   昨天,药事专家委员会表示,将在每个月从二、三级医院抽取100张处方,对抗生素是否过量等进行评估,提高药品使用的合理性和安全性。   药事专家委员会共分为药事管理组、抗菌药物与细菌耐药监测组、合理用药与药品不良反应监测组、处方点评组、学科建设与药学研究组、临床药学组、药品质量管理组和中药组等8个小组。其中,处方点评组将对本市医疗机构的用药情况和趋势进行监测,这也是本市首次建立合理用药的预警监测机制。   北京大学人民医院药剂科主任李玉珍表示,处方点评组将在每个月随机收集全市二、三级医院的100张处方,对门诊处方中的注射剂、抗菌素、每张处方金额及开药例数等多项内容进行评估。   李玉珍表示,届时,将对目前本市医疗机构用药的前十种进行排名,那些“安全无效”的辅助性药品、中药、注射剂等都不能在前十名之内。   马上就访:合理用药将缓解医疗费增长过快   北京市卫生局副局长郭晋和表示,目前用药不合理的现象仍然存在。他透露,如果在今后的处方点评中,不合格处方达到一定数量,将根据卫生部相关处方点评管理办法对医院进行处罚。   郭晋和表示,处方点评措施就是用合理用药来遏制医疗费的增长过快,规范医院用药,不要为了经济效益过度用药
  • 一键生成耗材报价单?就在珀金埃尔默耗材平台!还有双重好礼和促销!
    作为一名实验员,你是否有过以下经历?常常为仪器耗材购买而烦恼?迟迟拿不到报价单?忘记货号?反复打客服咨询?价格不清楚不好做预算?找不到销售?买到假货!?珀金埃尔默耗材团队急你所急,倾情打造的“珀金埃尔默耗材订购平台”上线啦!在耗材平台,您可以快速即时地获取您想要的耗材信息(货号、价格、促销信息、经销商信息),把您所需的耗材加入购物车,一键生成报价单,帮助您极速缩短响应及采购时间。快来尝鲜吧!尝鲜期5月9日-6月25日,还有双重好礼等着你!尝鲜路径:一重好礼:在平台推广和首次耗材促销期间,凡是通过“珀金埃尔默耗材订购平台”查询并生成报价单的客户(无需成交哦!),即有机会抽取精美礼品:一等奖1名:Kindle二等奖3名:小米充电宝三等奖10名:毛巾礼盒二重好礼:通过平台实现成交的客户(与第一重好礼可重复),我们也会抽取:一等奖1名:Apple AirPods 2二等奖3名:蓝牙音响三等奖10名:毛巾礼盒注:一等奖仅限成交金额最高的1名。 活动时间:5月9日-6月25日活动规则:我们将在活动结束后10个工作日内抽取获奖者并在公众号公布结果,届时也会有工作人员与您联络确认奖品邮寄事宜。 此外,更有耗材大促销活动:活动日期:5月9日-6月25日促销货号及产品——可拆卸石英炬管:N0780130——Optima 8x00N0770338——2x00/4x00/5x00/7x00 DVN8122006——NexION/ELAN活动细则:一支8.8折,两支7.7折,三支6.6折!(不累计,只针对单一货号)我们每季度都会推出耗材促销并有活动,请您持续关注!真假耗材鉴别您可知道耗材的真实来源?原厂的配件是否真实地抵达您的手中?分批采购了相同的商品却得不到预期的实验效果?在此,我们公布全国授权经销商信息,并且我们为每件出厂耗材配备二维码,只要您通过“耗材甄别”系统即可查询耗材真假信息。你还在犹豫什么?精美礼品等你领取!现在就打开珀金埃尔默微信公众号首页,点击【耗材订购平台】进行查询吧! 立即关注珀金埃尔默微信公众号操作流程: 关于珀金埃尔默:珀金埃尔默致力于为创建更健康的世界而持续创新。我们为诊断、生命科学、食品及应用市场推出独特的解决方案,助力科学家、研究人员和临床医生解决最棘手的科学和医疗难题。凭借深厚的市场了解和技术专长,我们助力客户更早地获得更准确的洞见。在全球,我们拥有12500名专业技术人员,服务于150多个国家,时刻专注于帮助客户打造更健康的家庭,改善人类生活质量。2018年,珀金埃尔默年营收达到约28亿美元,为标准普尔500指数中的一员,纽交所上市代号1-877-PKI-NYSE。了解更多有关珀金埃尔默的信息,请访问www.perkinelmer.com.cn
  • 绿脓杆菌或引起眼药水致盲,MALDI-TOF助力快速鉴定
    导读据中国经济网近日报道,美国FDA针对印度某药企生产的眼药水发出警告,该眼药水可能导致细菌感染,造成失明甚至死亡。该款眼药水是人工泪液,用于润滑眼球。美国疾控中心已确认共有55名患者感染了一种罕见绿脓杆菌耐药菌株,其中5名患者永久性失明,1名患者因血液感染死亡。绿脓杆菌又称铜绿假单胞菌,是比较常见的一种致病菌,常引发呼吸道、胃肠道、尿道等感染。专家认为,本次感染是由于眼睛可以通过泪管与鼻腔相连,致病菌可以从眼睛进入鼻腔,再进入血液等其他体液或组织,从而导致疾病。使用岛津MALDI-TOF微生物鉴定系统,可以快速鉴定绿脓杆菌,守护明亮双眸。认识绿脓杆菌绿脓杆菌又称铜绿假单胞菌( Pseudomonas aeruginosa) ,是一种革兰阴性条件致病菌,抗药性较强,是一种重要的食源性和水源性致病菌,如蔬菜、水果、瓶装水、桶装水中均较常见。同时也是医院内常见的引发慢性感染和急性感染的致病菌之一,严重者可引发患者肺部功能衰竭以及纤维化囊肿。其引起的感染具有进展快、易耐药、病死率高等特点,所以快速准确的鉴定铜绿假单胞菌显得尤为重要。常见检测方法目前,传统的微生物检测方法有生化反应法和16S rRNA序列分析法。生化反应法主要依靠铜绿假单胞菌的生物学特征,通过分离培养结合生化检测等方法对细菌进行鉴定,需经过增菌、选择性分离培养、鉴定等步骤,不仅操作繁琐、检测时间长、费时费力,且容易延误诊断,难以满足快速诊断及治疗的需要。因此,致病菌的快速鉴定仍是临床微生物检验工作者面临的重要问题。MALDI-TOF质谱法是近年来广泛用于微生物快速鉴定的方法,微生物都有自身独特的蛋白组成, 因而拥有独特的蛋白质图谱。细菌蛋白主要取决于细菌自身的遗传因素, 受培养基、培养时间以及其他培养条件等外部因素的影响较小, 因而具有很好的稳定性和可重复性。常见检测方法比较表岛津解决方案MALDI-TOF微生物鉴定系统优势&bull 数据库使用岛津MALDI-TOF iDPlus Assurance、Confidence、Performance等多款仪器,采集待测微生物的核糖体蛋白质谱图,与数据库中的标准谱图进行匹配检索,可以快速的进行致病菌鉴定。数据库中含有3400种以上微生物的标准图谱,涵盖大部分常见细菌及真菌。同时还支持用户自行追加新的标准谱图,以满足数据库中未收录菌种的鉴定需要。自建库流程图(以绿脓杆菌为例)&bull MALDI-TOF质谱法检测速度快从质谱数据采集到给出鉴定结果最快只需数十秒。日常使用只需要基质、纯水及少量有机试剂,成本低廉。使用MALDI-TOF专用384孔靶板,可以单次高通量检测384个样品,同时靶板可重复使用。鉴定流程图微生物鉴定流程图绿脓杆菌鉴定案例使用MALDI-TOF采集绿脓杆菌质谱图,导入微生物鉴定数据库匹配检索,可以快速检测绿脓杆菌。绿脓杆菌质谱图绿脓杆菌数据库检索结果结语使用岛津MALDI-TOF iDPlus微生物鉴定系统采集菌株的核糖体蛋白质谱图, 与数据库比对后, 可以快速获得绿脓杆菌的鉴定结果,为科研分析或临床筛查提供依据。MALDI-TOF质谱法快捷、准确、成本低,将在致病菌快速鉴定与分析中, 发挥着越来越大的作用。本文内容非商业广告,仅供专业人士参考。
  • 矿泉水新标取消菌落总数 强调致病菌
    矿泉水新标取消菌落总数强调致病菌 或致部分水企转型纯净水(图) 矿泉水新标准的出台或将迫使部分企业转做纯净水   记者近日从国家标准化委员会获悉,备受关注的《饮用天然矿泉水》和《饮用天然矿泉水检验方法》的两个国家标准发布,其中溴酸盐有了与世界卫生组织一致的限定值,最高不得超过0.01mg/L。同时增加了粪链球菌、铜绿假单胞菌和产气荚膜梭菌3项微生物指标。   记者从多家水企获悉,如要达标,必须先进行设备的改造,根据企业规模,少则数十万,多则上百万。因此,不排除有水企为降低成本而转型生产纯净水。   取消菌落总数强调致病菌   “此前媒体所报道的溴酸盐致癌也间接导致新标准的修改,总体来说是一个进步。”广州一水企负责人告诉记者,溴酸盐这个问题一直都存在,只是没有引起足够的重视,加上旧的《饮用天然矿泉水》国家标准已经十多年没有修改,确实已经到了要修改的地步。   据其介绍,正常情况下,水中不含溴酸盐,但普遍含有溴化物。当用臭氧对水消毒时,溴化物与臭氧反应,氧化后会生成溴酸盐。国际癌症研究中心(IARC)认为,溴酸钾对实验动物有致癌作用,但溴酸盐对人的致癌作用还不能肯定,为此将溴酸盐列为对人可能致癌的物质。   记者了解到,新标准取消了菌落总数,更强调致病菌。广州八奇饮用水有限公司总经理罗灏认为,这更具科学性。他表示,菌落总数是一个很笼统的概念,产品一开封就会受到污染,菌落总数不合格也是很正常的,但强调致病菌则是另一个概念,更能保障人体健康。   不堪成本压力或转型纯净水   据了解,如要达标,企业必须先进行工艺和设备的改进。罗灏表示,对于矿泉水来说,新标准的实施对产品要求更严格了,但实际上,在保留矿泉水原有口感的情况下,又对溴酸盐有限定值,对企业来说也是不小的难题。溴酸盐致癌在国内的说法也是这几年才出现,目前技术上还不是很成熟,但仍有各种方法可以尝试,大家正在研究一个更高效、节约成本的方法。   记者了解到,企业首先要进行设备的改造,根据企业规模,少则数十万,多则上百万。“不排除有水企转做纯净水,纯净水不存在溴酸盐的问题。”某矿泉水负责人告诉记者,新标准的出台也是规范市场的一个手段,不能达标的将被清出市场。
  • 单细胞拉曼光谱揭示氮循环功能菌研究获新进展
    p   氮是维持生命活动最重要的营养元素之一。氮气是氮元素的丰富来源,但由于性质惰性,不能为生物直接利用。氮的生物地球化学循环是将氮转化成生物可利用形式的关键过程。固氮微生物,包括固氮细菌和固氮古菌,可将惰性的氮气转化成生物可利用的氨态氮或硝态氮。据估计,生物可利用氮的半数由生物固氮过程提供。然而,微生物种类和功能丰富多样,超过99%的环境菌目前无法实现纯培养,因而对环境中固氮菌功能和活性的认识仍非常不足。环境微生物的不可纯培养性,带来了方法学上的挑战。从单细胞水平上研究环境微生物可克服纯培养或富集培养的限制,实现在环境介质下的原位研究。拉曼光谱(包括SERS、常规和共振拉曼)可在单细胞水平上对微生物进行无损检测,并提供微生物组成的指纹图谱。拉曼光谱与稳定同位素标记结合(Stable isotope probing, SIP),利用微生物同化SIP标记底物引起蛋白、脂类、色素的特征拉曼谱峰偏移,已实现从单细胞水平上检测环境功能菌。 /p p   中国科学院城市环境研究所城市土壤与生物地球化学研究组(朱永官团队),在发展单细胞拉曼-15N2SIP技术用于固氮功能菌的研究上做了开拓性工作。针对土壤中的固氮菌,首次建立单细胞共振拉曼与15N2标记联用技术,发掘出15N2相关的指示固氮菌的特征偏移谱峰,即细胞色素c共振拉曼峰的偏移。利用此指示峰,实现在单细胞水平上检测复杂土壤环境中的固氮菌,并利用指示峰的偏移程度,在单细胞水平上,比较了土壤固氮菌的固氮活性。此外,研究组与牛津大学教授Wei Huang合作,针对包括固氮菌在内的多种氮循环(N2、NH4、NO3)功能菌,率先发展表面增强拉曼光谱(SERS)-15N SIP联用技术,利用SERS对微生物中含氮生物分子腺嘌呤的选择性增强,获得不同15N标记氮源引起的细菌腺嘌呤谱峰的显著线性偏移,并利用SERS-15N SIP研究厦门杏林湾水体中细菌对15N2、15NH4Cl、15NO3不同氮源的选择性代谢。上述工作促进了对大量未知环境菌群的深入认识,尤其是氮循环功能菌及其活性的深入解析。 /p p   相关研究成果分别以Functional Single-Cell Approach to Probing Nitrogen-Fixing Bacteria in Soil Communities by Resonance Raman Spectroscopy with15N2Labeling为题,发表在Anal. Chem.上;以Surface-enhanced Raman spectroscopy combined with stable isotope probing to monitor nitrogen assimilation at both bulk and single-cell level为题,发表在Anal. Chem.上。研究工作得到了国家重点研发计划和国家自然科学基金等的资助。 /p p style=" text-align: center " img src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201808/insimg/95e9fe92-ccc2-4ded-8e88-bac97919cf0d.jpg" title=" W020180807542181390530.jpg" / /p p style=" text-align: center " 城市环境所在发展单细胞拉曼光谱揭示氮循环功能菌研究中取得进展 /p
  • 质谱追“凶” | 夏日清凉,谨防细菌感染!
    炎炎夏日,舒适又健康的运动莫过于游泳,然而游泳之后有人会出现眼部、耳朵或者皮肤的一些不适症状,这些有可能是泳池水中的微生物所导致的感染。目前,国内对外开放的正规游泳池池水都会用氯进行消毒处理,因为氯溶于水中时能分解成次氯酸和次氯酸盐这两种化学成分,这些化学成分会破解微生物的保护层。有些微生物是能够在氯的威力下被杀灭的,如容易引发淋病的淋病奈瑟菌、容易引发梅毒的梅毒螺旋体、容易引发腹泻的志贺氏杆菌、容易引发肺炎的军团杆菌,以及大肠杆菌、艾滋病毒,都是不能在消毒环境中存活的。但是,有些微生物是不能被消毒剂杀灭的,例如绿脓杆菌,又称铜绿假单胞菌(学名:Pseudomonas aeruginosa),它会引发炎症和脓肿。绿脓杆菌,1882年首先由Gersard从伤口脓液中分离到,是一种革兰氏阴性菌、好氧、呈长棒形的细菌,只有单向的运动性。它是一种机会性感染细菌,且对植物亦是机会性感染的,感染后因脓汁和渗出液等病料呈绿色,故得名。绿脓杆菌的分离培养及电镜照片(图片来源:中国科学院微生物研究所)绿脓杆菌感染可发生在人体任何部位和组织,严重时会引起心内膜炎、胃肠炎、脓胸甚至败血症。所以,当游泳后出现炎症和脓肿就医时,临床能否更快、更准确地鉴定是否为绿脓杆菌感染、或是其它微生物感染,就变得更加的重要了。精准医疗源于精准诊断全自动微生物质谱检测系统,是广州禾信康源医疗科技有限公司(以下简称“禾信康源”)在全面掌握核心技术和先进制造工艺下,历时5年,完全自主、正向开发的一款基于基质辅助激光解吸电离法(MALDI)的质谱检测系统,主要应用于微生物菌株鉴定、病毒核酸检测、蛋白多肽分析等方面,具有检测通量大、准确可靠、经济快速、样品耗费量少与操作简单等优势。质谱技术应用于细菌等微生物的快速鉴定分析,是利用标准菌株绘制微生物的蛋白质指纹图谱存储形成数据库。再将待检微生物的质谱数据图与数据库中的标准蛋白指纹图谱数据进行比对,从而实现细菌、真菌、分枝杆菌、厌氧菌等微生物的快速鉴定和分型,相比于表型鉴定、生理生化法、化学发光法等传统的微生物鉴定技术,质谱技术在鉴定速度、结果准确率、技术成本、质量控制、操作便捷等各方面都具有明显优势,是微生物检验技术史上一次里程碑式的革新。Figure 1禾信全自动微生物质谱检测系统实测铜绿假单胞菌硬件系统一体化免清洗离子源,集成独创的微小角度激光入射,有效提高灵敏度;智能化、高抽速真空泵系统,进靶即可采样,无需等待;超高频、长寿命固体激光器,信号采集及寿命均优于传统氮气激光器,使得样品分析速度更快,终身免维护;高稳定性信号采集系统,极大提升了仪器的重复性;模块化设计,内置前级泵,整机结构更加紧凑,维护简单。软件系统拥有自主知识产权的自动化控制采集软件,全过程智能化监控仪器状态,可自由切换多个数据库;提供专业的菌种中文名称,无需另外翻译,国内客户使用更便捷;多台云服务器同时执行鉴定,全面提升鉴定效率,可及时完成软件升级与数据库更新。数据库源于中国疾控中心(CDC)多年研究积累,品质保证,包含3500余种、60000余株菌种谱图,满足多应用领域的检测需求;数据库存于云服务器,可随时更新,客户也可根据自身需求建立自己的专属数据库。小贴士:如何找干净的泳池呢?1、看池水;要看水面有无颗粒漂浮,池底有无沉淀,池水的泡沫能否在15秒内消散。以8道泳池为例,站到泳池侧面穿过水面看第四、五泳道线,如果看不到说明水质不好。2、看证件;看看卫生许可证,员工健康证、卫生知识培训合格证等信息是否公示在游泳池旁,是否公示了当日水质情况,包括水温、PH值、余氯浓度、投放消毒药情况、循环水次数或新注入水量等。3、看池底;看看泳池底部,或泳池旁边的出水口,看是否有水源源不断进出的现象。如果有,则说明其水循环消毒装置在正常运作,可放心戏水游泳。4、看设施;正规的游泳池更衣后必须通过强制性淋浴和含有较高余氯的浸脚消毒池可以进入游泳池。
  • 宁夏质量技术协会立项《食品接触用PET瓶盖中大肠菌群检验-滤膜法》等8项团体标准
    各相关单位:根据《宁夏质量技术协会团体标准管理办法》的相关规定,宁夏质量技术协会经专家研究审核,决定对《食品接触用PET瓶盖中大肠菌群检验-滤膜法》《食品接触用PET瓶盖中菌落总数和霉菌检验-滤膜法》《食品接触用PET瓶盖中金黄色葡萄球菌检验》《一次性卫生用品中大肠埃希氏菌O157:H7快速检测方法-实时荧光PCR法》《一次性卫生用品中金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、溶血性链球菌检验-多重实时荧光PCR法》《产可得然胶土壤杆菌菌株诱变筛选技术规程》《可得然胶含量快速检测方法-微孔板法》《产可得然胶土壤杆菌菌株冻干保存技术规程》团体标准批准立项,现予以公示。请参与起草单位严格按照《宁夏质量技术协会团体标准管理办法》团体标准制定工作要求,严把质量关,加强组织协调,增强本标准的适用性和有效性,确保标准高质量,按期完成标准编制工作。标准制定过程中如有问题,请联系宁夏质量技术协会秘书处。联系人:杨老师电 话:0951-8762976地 址:宁夏银川市兴庆区玉皇阁南街292号
  • 程控定量封口机-一块定量检测水中大肠杆菌数量的仪器2024实时更新
    型号推荐:程控定量封口机-一块定量检测水中大肠杆菌数量的仪器2024实时更新,在水质监测的迫切需求下,程控定量封口机以其独特的优势,为水样中细菌微生物的快速、准确检测开辟了新的途径。它不仅能够针对绿脓假单胞菌群、肠球菌、总大肠菌群等多种致病菌进行高效检测,还具备野外携带、应急响应及定量检测的能力,成为水质安全的重要保障。 一、高效精准,细菌微生物无所遁形 程控定量封口机集成了先进的检测技术,能够迅速且准确地识别水样中的各类细菌微生物,包括绿脓假单胞菌群、肠球菌、总大肠菌群、粪大肠杆菌及大肠埃希菌等。其高效的检测速度,使得水质监测工作更加及时有效。 二、便携应急,适应多种监测场景 该封口机设计紧凑,轻便易携,非常适合野外作业和应急响应。无论是在偏远的山区水源地,还是突发的水污染事件现场,都能迅速投入使用,为水质安全提供第一时间的检测保障。 三、定量检测,科学评估水质状况 除了快速检测外,程控定量封口机还具备定量检测的功能。它能够精确测量水样中细菌微生物的数量,为水质评估提供科学的数据支持。这一特性使得水质监测结果更加准确可靠,为水质管理决策提供了有力依据。 四、方法优势无需在无菌室内操作。2.手工操作时间小于 1 分钟。3.无需培养基制备和大量玻璃器皿灭菌。4.24小时即可完成定性定量分析,无需验证试验。 程控定量封口机以其高效精准、便携应急及定量检测的特点,在水质监测领域发挥了重要作用。它不仅提升了水质监测的效率和准确性,还满足了野外和应急响应的需求,为水质安全保障提供了坚实的技术支持。随着技术的不断进步和应用领域的拓展,相信该设备将在未来发挥更加广泛和重要的作用。
  • 常见滴眼液-左氧氟沙星滴眼液抑菌剂测定
    左氧氟沙星滴眼液抑菌剂的含量测定#左氧氟沙星滴眼液简介左氧氟沙星滴眼液是抗生素药物,属于处方药。其主要成分为氧氟沙星的左旋体,抗菌活性约为氧氟沙星的两倍,通过抑制细菌DNA旋转酶(细菌拓扑异构酶耳)的活性,阻碍细菌DNA的复制而达到抗菌作用。左氧氟沙星具有抗菌谱广,抗菌作用强的特点,对大多数肠杆菌科细菌,如大肠埃希菌、克雷伯菌属、沙雷氏菌属、彩杆菌属、志贺菌属、沙门氏菌属、枸橼酸杆菌、不动杆菌属以及铜绿假单胞菌、流感嗜血杆菌、淋病菌等革兰阴性菌有较强的抗菌活性。左氧氟沙星的滴眼液,用于治疗敏感菌导致的眼脸炎、睑腺炎、泪囊炎、结膜炎、睑板腺炎、角膜炎以及用于眼科围手术期的无菌化疗法。# 色谱条件仪器:WiSys 5000;色谱柱:月旭Xtimate® C18 (4.6×250mm,5μm)。流动相:三乙胺磷酸溶液(每1000mL水中加入三乙胺4mL和磷酸7mL)/乙腈=35/65;检测波长:214nm;柱温:30 ℃;流速:1.0mL/min;进样量:20μL;参考方法:中国药典2020版第二部-左氧氟沙星滴眼液。#谱图和数据‍总结使用月旭Xtimate® C18 (4.6×250mm,5μm)色谱柱可以药典要求下满足左氧氟沙星滴眼液抑菌剂的含量测定要求。订货信息‍
  • FDA批准质谱仪系统VITEK MS用于鉴定193种不同致病细菌和真菌
    2013.8.21,FDA批准美国第一个质谱仪检测系统用于自动识别已知能导致人体严重疾病的细菌和酵母的上市。该质谱仪系统VITEK MS能鉴定出193不同微生物,可在一系列自动化测试过程中进行192种不同的测试,而且每个测试只需要大约一分钟。   谱仪系统VITEK MS可以鉴别诸如念珠菌、隐球菌和马拉色氏霉菌属组的酵母茵和葡萄球菌科、链球菌科、肠杆菌科、假单胞菌科和类杆属组的细菌,这些酵母茵和细菌跟皮肤感染、肺炎、脑膜炎和血液感染有关。HIV或AIDS、癌症治疗或器官移植后的抗排斥治疗损害或削弱免疫系统的患者特别容易受到这些细菌感染。   VITEK MS采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术,该技术利用激光打破酵母和细菌标本成小颗粒,形成一个独特的微生物模型。VITEK MS在检测系统数据库自动将这些微生物模型与193种已知的酵母和细菌进行比对,从而鉴别微生物。   此与其他要求大量微生物繁殖来检测的鉴别方法相比,质谱分析方法只需要少量的酵母或细菌繁殖,所以只要微生物生长到可视程度后就可以马上开始检测,通常在在18到24小时内。传统的方法需要五天才能得出相同的鉴别结果。   FDA通过新型分类程序审查了VITEK MS,这是对一些新型低中度风险且不完全等同于已知合法市售的医疗设备的调控途径。   VITEK MS再临床上用于鉴别由人体标本培养得到的微生物,它与联合其它临床和实验室发现相互结合,从而辅助诊断细菌和真菌感染。   VITEK MS的制造商为北卡罗来纳州达勒姆的生物梅里埃公司。
  • 一谱识菌: MALDI-TOF MS 在病原微生物临床应用的专家共识
    摘要 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术在微生物学检验中具有检测速度快、鉴定准确率高、检测成本低、检测通量高、可鉴定菌种类型广泛等特点。随着微生物质谱技术的快速发展和广泛应用,MALDI-TOF MS的规范化使用及管理、技术要点等内容亟须广泛普及,以更好推动该技术在临床微生物学实验室的高效使用。专家组通过对国内外相关指南共识及文献的阅读和讨论,结合我国MALDI-TOF MS的临床应用现状,就临床实际工作中存在的常见问题,对影响或决定MALDI-TOF MS技术规范化使用、结果准确解读、科研探索等方面存在的问题进行了反复和深入的讨论,最终形成本共识。随着实践经验的不断总结和临床研究的不断深入,编写组将不定期对共识内容进行更新和完善。基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption ionization time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)是一种新型软电离有机质谱技术,用于分析生物分子(如DNA、蛋白质、多肽、糖类等)和大分子量的有机分子 [ 1 ] ,使得微生物蛋白质指纹图谱进行菌种鉴定成为可能。随着MALDI-TOF MS仪器临床使用日渐广泛,越来越多的临床问题需要规范。本专家共识旨在对日常使用MALDI-TOF MS进行病原微生物鉴定的常见问题给出详细建议,仅供临床微生物学实验室参考。 一、概述 问题1: MALDI-TOF MS进行病原微生物鉴定的优势和局限性有哪些?推荐意见1 :推荐MALDI-TOF MS作为细菌、酵母及酵母样真菌鉴定的首选方法之一。MALDI-TOF MS用于病原微生物鉴定,与临床常用微生物鉴定方法包括菌落和镜下形态学、生化、免疫学以及基因测序相比,具有明显的优势 [ 2 , 3 ] 。1.快速、简便、通量高:前处理及上机操作步骤操作简单,短时间内即可完成多标本检测。2.准确度高:MALDI-TOF MS的鉴定准确率为90.0%~95.0%,显著高于微生物生化鉴定系统 [ 4 ] 。MALDI-TOF MS检测的是保守且具有种特异性的核糖体蛋白,对近缘菌种的区分能力较传统方法更强,尤其对有重要临床意义的菌种鉴定有明显优势。例如对凝固酶阴性葡萄球菌和引起心内膜炎的HACEK群菌种 [ 5 ] 。3.鉴定范围广:相比生化鉴定方法,MALDI-TOF MS能鉴定更多的临床菌种,除了常见细菌,还适用于分枝杆菌、酵母及酵母样真菌、丝状真菌、专性厌氧菌等 [ 6 ] 。根据行业标准《医用质谱仪第2部分:基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪》(YY/T 1740.2-2021),商业参考谱图数据库应包含≥700种微生物 [ 7 ] 。4.检测成本低:试剂耗材(靶板、试剂、校准品)少、成本低。尽管MALDI-TOF MS有许多优势,但也需要注意该技术在微生物鉴定方面的局限性,主要包括以下几个方面:(1)部分近缘菌种鉴定易混淆。近缘菌种由于核糖体蛋白的内在相似性,使得谱图难以区分,包括但不限于大肠埃希菌/志贺菌属、蜡样芽孢杆菌复合群、肺炎链球菌和缓症链球菌群、洋葱伯克霍尔德菌复合群、鼻疽/类鼻疽伯克霍尔德菌、无色杆菌属、弗劳地柠檬酸杆菌复合群、阴沟肠杆菌复合群、沙门菌属、结核分枝杆菌复合群 [ 6 ] 。随着数据库的扩展和算法的改进,区分以上近缘菌种的能力会逐步改善。各制造商的易混淆菌种清单可参考相应的产品说明书。(2)混合菌鉴定困难。尽管有不少研究尝试对混合培养物进行鉴定 [ 8 , 9 , 10 ] ,但尚无可靠的混合菌鉴定系统投入临床使用,目前的MALDI-TOF MS准确鉴定仍需以获得纯菌落为前提。(3)仅适用于可体外培养并形成纯菌落的病原微生物。MALDI-TOF MS目前无法用于耶氏肺孢子菌、衣原体、立克次体等微生物的鉴定。(4)数据库存在局限性。MALDI-TOF MS的微生物鉴定性能依赖于制造商数据库中菌种的覆盖程度,建库菌株的数量和来源,入库谱图的质量等 [ 3 ] 。因此,当制造商数据库(包括临床库与科研库)无法满足用户当地的菌种鉴定需求时,实验室可以通过自建库进行补充,若自建库与本品牌的科研库鉴定发生冲突,应采用基因测序进行确认,参见问题11。 二、标本制备 问题2:在MALDI-TOF MS鉴定过程中,如何保证生物安全?推荐意见2: 确定或疑似高致病性的微生物,在鉴定前需依据其生物学特征进行充分灭活,确保生物安全。操作要点:(1)MALDI-TOF MS鉴定过程中,应根据《微生物和生物医学实验室生物安全通用准则》保证生物安全,包括对鉴定病原微生物的灭活、化学试剂的防护以及医疗废物处理等。(2)MALDI-TOF MS操作应在生物安全二级及以上实验室进行,涉及活菌操作应在二级生物安全柜内完成。(3)操作中使用的甲酸、乙腈及三氟乙酸(trifluoroacetic acid,TFA)等化学试剂,应做好通风,避免体表接触。(4)布鲁菌、炭疽芽孢杆菌、结核分枝杆菌以及疑似高致病性病原菌的质谱鉴定,需采用具有灭活效能的试剂进行相应处理,如乙醇、TFA [ 11 , 12 , 13 ] 。灭活后在二级及以上生物安全柜内使用甲酸乙腈提取法涂布靶板 [ 13 ] 。为保证生物安全,亦可增加预灭活步骤,如在平板中加入75%的乙醇溶液,完全覆盖培养物,静置30 min后挑取菌落鉴定。此外,建议对分枝杆菌额外增加高温灭活的步骤(80 ℃/90 min或95 ℃/30 min) [ 11 , 14 ] 。问题3 不同类型病原微生物的前处理流程?推荐意见3: 推荐MALDI-TOF MS 鉴定不同类型的病原微生物时,采用适宜前处理方法进行操作,其中甲酸乙腈提取法应用范围较广。MALDI-TOF MS 鉴定前处理的主要目的是灭活病原微生物、破坏其细胞壁及提取胞内蛋白质。不同类型微生物细胞壁的结构和成分不同,破壁难易程度有别,从而直接影响蛋白质释放。因此需要选择适当的前处理流程,主要包括:直接涂抹法、原位甲酸提取法、甲酸乙腈提取法、双甲酸法等多种方法 [ 6 ] , 图1 中总结了不同类型微生物的 MALDI-TOF MS 样品制备流程。图1 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱鉴定不同病原微生物适用的前处理方法高致病性微生物的鉴定,应在灭活后采用甲酸乙腈提取法。双甲酸法能有效提升丝状真菌的检出率 [ 15 ] ,且较甲酸乙腈提取法更简单。但无法保证对真菌的充分灭活,尤其是挑菌涂抹靶板过程中孢子可能溢散,需要考虑生物安全及交叉污染风险。部分分枝杆菌与丝状真菌等病原微生物细胞壁厚,即使采用推荐的前处理方法,谱图质量仍不理想,应摸索更适当的前处理方法,如添加超声(18 ℃下进行,40 W 峰值功率和50% 占空比超声 1 min [ 16 ] )、冻融(‒ 75 ℃ 30 min或‒ 20 ℃ 60 min,室温融化 [ 17 ] )等步骤。问题4: 培养基对MALDI-TOF MS鉴定病原微生物有什么影响?推荐意见4: 使用不同培养基通常对MALDI-TOF MS鉴定结果影响不大,推荐优选非选择性的固体培养基进行鉴定。用固体和液体培养基获得的图谱可能存在差异,研究表明液体培养基会降低某些微生物的鉴定准确率 [ 18 , 19 , 20 ] ,但绝大部分情况下对鉴定结果影响不大 [ 3 , 6 ] 。尽管在液体培养基中微生物生长状态更为均一,但固体培养基更符合临床应用场景 [ 21 , 22 ] ,建议选择制造商推荐的培养基。不同固体培养基对于常见病原微生物的核糖体蛋白影响甚微,对鉴定准确性影响不大,但以下原因会对图谱质量产生影响 [ 22 , 23 , 24 , 25 , 26 ] 。培养基影响微生物蛋白质表达谱:MALDI-TOF MS蛋白质指纹图谱主要由核糖体蛋白和其他高丰度管家蛋白的信号组成。培养基对于前者影响小,但是可能会通过改变其他蛋白质的表达情况而影响谱图 [ 23 , 27 ] ,具体机制不明。培养基成分造成的电离抑制效应:培养基含有多种选择性成分,包括抗菌药物、盐和酸碱指示剂等。盐是质谱的电离抑制剂,例如使用直涂法鉴定麦康凯培养基(MacConkey agar,MAC)培养的假单胞菌时,可能由于培养基中含有胆盐成分造成电离抑制而影响鉴定,但某些肠道分离株的鉴定似乎不受MAC成分的影响 [ 26 ] 。培养基中的色素可影响鉴定结果:虽然暂无培养基中色素影响质谱鉴定的报道,但Buskirk等 [ 28 ] 研究发现真菌色素会抑制解吸/电离过程,电离抑制存在浓度依赖性,在高黑色素浓度(5 000 ng/spot)下接近 100%,提示含色素的培养基如MAC可能具有类似的效果 [ 26 ] 。血琼脂培养基中的血红蛋白可对谱图造成干扰:生长在哥伦比亚血培养基上的金黄色葡萄球菌较甘露醇盐琼脂培养基上菌落具有更多的峰 [ 27 ] ,但不会改变菌种的鉴定结果 [ 21 ] 。问题5: 哪些临床标本可直接进行鉴定?推荐意见5: 推荐MALDI-TOF MS直接鉴定血培养阳性标本,按照标准操作流程,可有效缩短标本周转时间(turnaround time,TAT),但应注意其局限性。原则上MALDI-TOF MS鉴定需采用纯菌落,但有部分临床标本无须分纯培养即可直接进行质谱鉴定,包括血培养阳性标本、尿液标本、无菌体液标本,其中用血培养阳性标本直接鉴定较为成熟,能缩短TAT,满足临床快速诊疗的需求。血培养阳性标本:菌体的富集是影响阳性血培养直接鉴定效率的重要因素 [ 29 , 30 ] 。通过富集技术处理阳性血培养标本后,直接用MALDI-TOF MS进行鉴定 [ 31 ] ,主要方法有短时培养法、分离胶促凝管富集法和试剂盒富集法( 图2 )。此外,需关注血培养阳性样本的涂片革兰染色结果是否为单一病原微生物,如有两种及以上形态的病原微生物,可影响鉴定结果。图2 血培养阳性病原微生物的基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱鉴定方法尿液标本:研究表明尿路感染患者的尿液中有足够的菌量(≥10 5 CFU/ml),可直接进行病原微生物质谱鉴定,建议先用尿分析仪对菌量进行评估 [ 32 ] 。同样需要关注涂片革兰染色是否为单一病原微生物。参考步骤:(1)低速(2 000~4 000× g)离心去除白细胞、细胞碎片及黏液;(2)高速(10 000~14 000× g)离心沉淀菌体;(3)无菌水清洗沉淀后用甲酸乙腈提取法进行MALDI-TOF MS上机前处理 [ 32 , 33 , 34 ] 。无菌体液标本:脑膜炎患者的脑脊液标本的直接质谱鉴定方法报道相对较少 [ 35 , 36 ] ,主要因为标本中菌量较低,检测灵敏度无法保证。研究显示无菌体液如脑脊液 [ 37 ] 、腹腔积液 [ 38 ] 、关节滑液 [ 39 , 40 ] 标本可先接种于血培养瓶中进行培养增菌,在血培养仪报阳后进行质谱鉴定,同样能显著缩短TAT。此外,略过分纯培养步骤,直接用原始标本进行质谱鉴定病原微生物仍存在局限性:(1)无法鉴定混合微生物;(2)标本中人体细胞干扰或菌量不足可能导致鉴定结果不可靠 [ 32 , 41 ] ,因此在进行无菌体液标本直接鉴定的同时,需要对此标本进行平行的传代培养,并在获得纯菌落后进行最终鉴定结果的确认。 三、结果分析与解读 问题6: 采集到质量较差的谱图时,如何分析原因?推荐意见6: 推荐采用新鲜菌落进行MALDI-TOF MS鉴定,针对不同病原微生物的特征,选择恰当的前处理方法提高谱图质量。合格的谱图应包含丰富的谱峰信息,体现在峰数量较多且分散、强度错落有致、分辨率较高、信噪比较高。在日常工作中,如果质控正常,采集到的谱图质量仍不理想,可能的原因如下 [ 3 , 6 ] 。标本因素:(1)建议使用新鲜的菌落进行鉴定,此时微生物处于指数生长期,有利于采集到优质谱图;随生长时间延长,菌龄增加,影响谱图质量 [ 42 ] 。(2)肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌、隐球菌等黏液型菌落,由于细胞壁外有荚膜,导致破壁困难,鉴定性能下降 [ 18 ] ,建议使用棉签拂去菌落表面黏液,再挑取下层菌落进行点靶。前处理操作:若前处理方法选择不当,导致细胞壁破碎效果差,蛋白质释放不足,容易出现杂峰干扰、峰数量少、信号低等问题。点靶操作:因操作者手法问题造成点靶质量差,常见于以下几种情况( 图3A~3D )。(1)菌量过少( 图3B )可能造成谱图信号弱。(2)菌量过多( 图3C ),涂靶过厚,容易造成谱图分辨率差、质量轴漂移等现象。(3)涂靶不均匀( 图3D ),自动采集过程中容易采空,或者厚薄不均造成结晶分布不均,影响激光激发效果,重复性差。(4)培养基成分干扰,挑取菌落时混入培养基,涂靶后鉴定容易受到培养基峰的干扰。图3 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱点靶效果示意图(3A示菌量适宜,3B示菌量过少,3C示菌量过多,3D示涂靶不均匀)问题7: 当谱图质量合格但鉴定结果不理想时,如何分析原因?如何确定处理方法?推荐意见7: 当谱图质量合格但鉴定结果不理想时,推荐通过校准/质控排查仪器原因,观察菌落排查标本混合菌、污染等原因,最后考虑数据库的局限性,可用自建库进行改善。仪器原因:质量轴发生偏移,可能的原因包括未进行校准或校准不当、靶板平整度不合格、结晶不理想及其他仪器系统原因等。可通过在靶板不同区域进行质控/校准菌株的鉴定操作快速排查。当校准/质控未通过或不同区域质量轴差异较大时,需保证靶板的平整度,并及时对仪器进行校准。标本原因:(1)混合菌或者培养物被污染。如果标本在质谱鉴定前未获得纯菌落,谱图中可能含有多菌种谱峰信息,导致鉴定失败。建议重新挑取纯菌落,或者重新通过分纯培养获得纯菌落。(2)标本间交叉污染。操作不当导致的交叉污染,如靶板清洗不充分、不同靶点之间枪头混用、标本溢出靶点等,可能导致谱图信息混杂,影响鉴定结果。建议规范操作并按照说明书正确清洗靶板。(3)培养条件不同。当待测株与建库株的培养方法不一致时,可能鉴定失败。如部分丝状真菌在不同的培养基类型、培养天数、温度等条件下,可能会对谱图产生较大的影响 [ 21 , 43 ] 。数据库原因:(1)数据库菌种覆盖度不足。如果数据库中未包含待测菌株的菌种参考谱图,则无法正确鉴定。(2)待测菌株与数据库中同种菌株差异较大。虽然数据库中包含待测菌种,但由于亚种、地域、标本来源、是否产黏液等因素导致的同种菌株之间差异性,鉴定结果可能不理想。问题8: 单个标本重复鉴定出现不同的鉴定结果,如何解读结果及处理?推荐意见8: 单个标本重复鉴定出现不同结果,多是由于鉴定未到种水平所致。可能匹配质谱易混淆的近缘菌种,也可能是由于分辨率不足/数据库菌种缺失导致的匹配到多个低置信度的同属不同种,如有必要需重新制样或进一步补充其他方法进行区分。多次采集/多点采集鉴定出现不同结果,考虑以下原因和相应处理流程。近缘菌种易混淆:MALDI-TOF MS对于部分亲缘关系相近的菌种没有足够的区分度。常见的易混淆结果是复合群内的不同种,如阴沟肠杆菌复合群,包括阴沟肠杆菌、阿氏肠杆菌、霍氏肠杆菌、神户肠杆菌等,也有可能是属内多个近缘菌种,如李斯特菌属里的单核细胞增生李斯特菌、无害李斯特菌、斯氏李斯特菌、威氏李斯特菌等,甚至可能是不同属的菌株混淆,如大肠埃希菌与志贺菌属。建议关注制造商的易混提示/低分辨提示,再根据临床是否需要鉴定到种水平采取相应措施。种特征不明显:谱图缺失种特异峰,分辨水平低,谱图与数据库中多个菌种匹配。通常体现为谱图质量不高,峰相对少,打分较低。建议采用提取法或者更充分的破壁方法进行前处理。数据库缺少待测菌种:此时谱图可能会与数据库中存在的近缘菌种匹配,得出多个结果。通常发生在少见罕见菌种鉴定,谱图质量好,但分数不高。若多个结果属于同一个属,建议质谱报告为属水平结果,并通过基因测序等其他方法进行种水平鉴定。混合菌和交叉污染:通常体现为不同菌种结果亲缘关系并不相近,且分数不高、峰较多。建议通过规范取样、制样来避免交叉污染;若是怀疑混合菌,进行重新分纯。问题9: 病原微生物采用不同方法鉴定,结果不一致时应如何处理?推荐意见9: 不同微生物鉴定方法学的适用性、病原谱、准确率有区别,当MALDI-TOF MS鉴定结果与其他方法不一致,推荐使用基因测序作为鉴定“金标准”。病原微生物鉴定常见方法包括形态学、生化、MALDI-TOF MS和基因测序鉴定,对于一些肠道病原菌还需补充血清凝集试验。目前实验室采用全自动微生物生化鉴定仪和MALDI-TOF MS较为广泛,而基因测序可作为难鉴定菌的备选方案 [ 44 , 45 ] 。基因测序方法中,Sanger测序能够实现大部分常见微生物的种水平鉴定,但某些菌种(如诺卡菌、非结核分枝杆菌等),其特征核酸序列片段(如16S rRNA)分辨力有限,无法准确鉴定,常需要联合多个特殊性片段测序,甚至需要全基因组测序 [ 46 ] 。在日常的微生物鉴定时,应明确所采用方法的局限性及所要达到的鉴定水平(属/复合群/种),选用适宜的鉴定技术,必要时采用多种方法确认。当不同方法鉴定结果不一致时,需要考虑如下因素:特定病原微生物采用不同方法学鉴定时的可信度:(1)肺炎链球菌和缓症链球菌群,质谱鉴定可能出现错误,而生化鉴定技术可作为补充 [ 6 ] ;(2)鲍曼不动杆菌复合群内菌种,生化鉴定方法尚无法有效鉴别,MALDI-TOF MS可明确区分复合群,基因测序可准确鉴定;(3)肠道致病菌,需补充血清凝集试验实现不同血清型的鉴别。所选择方法的病原菌谱:不同鉴定方法所能覆盖的病原菌谱存在差异,基因测序MALDI-TOF MS生化鉴定。若鉴定结果不一致,应考虑待测菌是否在所选方法的病原菌谱内。如按蚊伊丽莎白金菌可被质谱正确鉴定,但生化鉴定卡的病原菌谱并不包括此菌种,可能被误鉴定为脑膜炎脓毒伊丽莎白金菌。所选择方法的鉴定准确率:目前MALDI-TOF MS鉴定准确率已经接近分子方法,高于生化鉴定。不同方法结果不一致时,基因测序仍被认为是菌种鉴定的“金标准” [ 47 ] 。问题10: 不常见病原微生物的鉴定结果如何验证?推荐意见10: Sanger测序可用于验证不常见病原微生物的质谱鉴定结果,推荐16S 核糖体RNA(16S ribosomal RNA,rRNA)(细菌)/内转录间隔区(internal transcribed spacer,ITS)(真菌)作为靶基因,当无法鉴定到种水平,需要加测其他保守基因。对不常见病原微生物的鉴定结果,建议查询其基本信息,并采用其他方法学的复核和验证,优先选择基因测序。病原学分子鉴定技术可采取保守区核酸扩增和Sanger测序结合的方式,细菌靶基因首选16S rRNA基因,通过与数据库中已知序列比对,相似度超过98.7%为同一种 [ 48 ] ,无已知序列超过阈值则可能是新种;真菌首选ITS基因,通常使用相似度97.0%作为同种阈值 [ 49 ] 。当首选靶基因分辨率不足(不止一个种超过阈值)时,需加测其他保守基因,具体可参照临床和实验室标准协会(Clinical and Laboratory Standards Institute,CLSI)MM18 [ 50 ] 。基于测序技术的快速发展和成本的有效控制,亦可采用基因组测序技术实现不常见病原微生物的准确鉴定,基于基因组序列的平均核苷酸一致性分析,与模式菌株或参考菌株比对分值超过94.0%可认定为待鉴定菌种与模式菌株菌种一致 [ 51 ] 。问题11; 哪些病原微生物鉴定到种水平有重要临床意义?推荐意见11: 临床鉴定病原微生物需要尽可能鉴定到种水平。当质谱分辨率不足时,对于影响公共健康或影响临床决策的病原微生物,推荐采用其他鉴定方法报告到种水平。原则上临床鉴定病原微生物应尽可能鉴定到种水平。MALDI-TOF MS无法鉴定到种时,需根据临床意义判断是否可报告至复合群或属水平。如有必要到种水平,可采用改进前处理提高质谱鉴定分数、或辅以其他方法进一步鉴定。以下几种情况需报告到种水平甚至是亚种水平。影响公共健康、与严重疾病相关的病原微生物:细菌,如炭疽芽孢杆菌、鼠疫耶尔森菌、霍乱弧菌、白喉棒杆菌、单核细胞增生李斯特菌;真菌,如新型隐球菌与格特隐球菌、耳念珠菌等需要报告到种 [ 52 ] 。菌种间致病性存在差异的病原微生物:例如(1)肺炎链球菌是临床常见的致病菌,而口腔/缓症链球菌常被认为是定植菌 [ 53 ] 。(2)血培养常见污染菌如凝固酶阴性葡萄球菌、棒杆菌属、丙酸杆菌等,若≥2套被检出,应鉴定到种以判断其临床意义。(3)血液或无菌体液中的牛链球菌群常与肠道肿瘤密切相关,应鉴定至亚种水平 [ 54 ] 。(4)尿标本分离到的解脲棒杆菌常与肾结石相关 [ 55 ] ,而在乳腺组织、脓液分离出的克罗彭施泰特棒杆菌则与肉芽肿性乳腺炎相关 [ 56 ] ,需鉴定到种水平。(5)嗜水气单胞菌复合群常无需鉴定到种,但如该类细菌引起食源性腹泻需进行病原学溯源或引起肠外血流感染、尿路感染及组织脓肿时,应准确鉴定到种水平 [ 57 ] 。与经验使用抗菌药物相关的病原微生物:例如鲍曼不动杆菌尽管与皮特不动杆菌或医院不动杆菌同属于一个复合群,但鲍曼不动杆菌感染患者往往表现出更高的耐药率和病死率 [ 58 , 59 , 60 ] ,需要进行区分。真菌中容易产生耐药尤其是多药耐药的菌种,例如耳念珠菌
  • 美国再次爆发活禽引发的沙门氏菌疫情
    据美国食品安全新闻网报道,美国疾控中心日前表示,近日美国22个州出现了由活禽引发的沙门氏菌疫情,目前疫情已造成76人感染,17人住院就医。   此次疫情疑似与密苏里州的一处家禽孵化场有关。本次疫情爆发地分布于阿拉斯加州、加利福尼亚州、科罗拉多州、佛罗里达州等22个州。   在感染者当中,有37%的感染者其年龄介于10岁及其以下,约有93%的感染者表示,从16家孵化场订购了活禽。   美国疾控中心表示,人们在接触了鸡、鸭以及其他家禽后,应该尽快洗净双手,以防沙门氏菌感染,另外不要让小孩碰家禽。
  • 君乐宝获批国家地方联合工程实验室
    近日,国家发改委公布2013国家地方联合工程实验室名单,凭借着企业功能性乳酸菌资源及应用技术工程实验室创新成果和技术优势,石家庄君乐宝乳业光荣上榜。作为河北省内首家乳品领域上榜企业,体现出了君乐宝以创新研发谋求企业发展的经营模式已经受到社会各界广泛赞许,企业专属技术工程实验室成果建设同时赢得了政府部门及权威机构实质认同。   记者获悉,国家地方联合工程实验室是依托企业、转制科研机构、科研院所或高校等设立的研究开发实体。君乐宝乳业国家地方联合工程实验室建设面积达3300平方米。工程实验室还将根据技术工作需要,建设菌种资源开发实验室、乳酸菌功能研究实验室、乳酸菌发酵剂研究实验室、乳酸菌应用研究实验室等专业实验室,以及菌种保藏中心、乳酸菌发酵乳、菌粉制剂中试车间等项目。   君乐宝功能性乳酸菌开发国家地方联合工程实验室将瞄准国际与国内乳酸菌科学前沿,开展乳酸菌相关研究,创立以企业为核心的现代化工程实验室,使其成为乳酸菌研究和人才培养基地,为河北省的乳酸菌发展提供技术支持,最终建成国家级乳酸菌研究的前沿实验室。   &ldquo 乳酸菌发酵剂作为发酵乳生产的核心技术,长期被国外垄断。君乐宝功能性乳酸菌开发国家地方联合工程实验室本次通过政府部门批准认可,将有效摆脱依赖国外进口乳酸菌的现象,研究出适合国内人群的乳酸菌菌种,对于加快河北省乳制品行业的发展、促进产业结构调整,提升产业的持续发展能力和市场竞争力具有重大意义&rdquo ,君乐宝实验室项目负责人表示。
  • Nature | 菌群代谢物激活自然杀伤性T细胞的机制
    机体与共生微生物相互作用,共同进化,在机体的免疫系统发育和稳态维持发挥关键作用。微生物代谢物多样性水平很高,宿主已经进化出复杂的机制来区分病原体和共生体衍生而来的分子。但是在一个物种中,微生物代谢物仍然会存在结构变异。以结构为基础探究化学异构体的生物学作用极具挑战性。在人肠道微生物中,脆弱拟杆菌经常用于研究共生菌衍生物活性的分子机制。目前已经鉴定出α-半乳糖神经酰胺(α-Galactosylceramide BfaGCs)是由脆弱拟杆菌产生的可用做免疫调节分子的衍生物。新生小鼠脆弱拟杆菌单菌定植或者新生小鼠口服BfaGCs可以调节肠道NKT细胞数量。而给与小鼠BfaGCs突变的脆弱拟杆菌,小鼠的表现类似于无菌小鼠。也有报道发现鞘氨醇单胞菌可以调控肠道NKT(natural killer T)细胞功能。但是菌群衍生物在调控宿主免疫系统中的分子机制尚不清楚。2021年11月10日,来自哈佛大学的Dennis L. Kasper 团队在Nature 上发表题为Host immunomodulatory lipids created by symbionts from dietary amino acids 的文章。本研究从结构水平上证实BfaGCs可以直接作用于NKT细胞,与CD1d和TCR结合激活NKT。作者首先利用LC-MS/MS技术分析脆弱拟杆菌鞘脂发现BfaGCs是同源酰基链的混合物。其中C34丰度最高。鉴于共生菌来源鞘脂的结构多样性,作者系统构建了16个BfaGCs类似物,7个异构体。支链BfaGCs在真核生物中相对少见,原核生物中更常见。于是作者评估了支链氨基酸对于BfaGCs生物合成的影响。分析后发现支链氨基酸可以直接渗入脂质决定BfaGCs的结构,而不含氨基酸时BfaGCs倾向于单支和非支化结构。进一步研究发现宿主饮食中补充或者去除支链氨基酸直接影响单支和分支型鞘脂的比例。这些结果在分子水平证实了宿主膳食对于肠道菌群衍生物合成的影响。接下来作者开始通过靶向脆弱杆菌支链氨基酸代谢途径来探究支链BfaGCs对于肠道NKT的调控作用。支链氨基酸转氨酶BCAT将支链氨基酸脱氨基为a-酮羧酸,进一步再转化为支链脂肪酸。作者构建了目标基因敲除菌株(BF9343-Δ3671)。对比发现野生菌株与敲除菌株在小鼠肠道定植水平相当,敲除菌株产生不含分支的BfaGCs水平更高。分析结果显示敲除菌株定植的小鼠成年后结肠NKT细胞数量较高。作者又利用BMDC(小鼠骨髓来源树突状细胞)和NKT共培养体系评估21种合成BfaGCs对NKT的作用。检测IL2的产生水平,作者把21中合成物分成了两组:强刺激物和弱刺激物。10个属于强刺激物都是分支结构,11个弱刺激物没有这些结构。作者又直接挑选了支链和不含支链的代表合成分子SB2222和SB2223,浓度梯度实验发现支链长度与刺激强度无关。作者用脆弱拟杆菌主要合成的SB2217 和SB2219进行体内实验。对比与KRN7000诱导的IFNr产生和CD1d配体OCH诱导的IL4,含支链的SB2217则只能较弱的产生IFNr和IL4,不含支链的SB2219则几乎不能产生IFNr和IL4。预防性给与小鼠SB2217可以保护小鼠免受炎症,减少小鼠体重减轻和组织损伤。为了细致分析SB2217的体内效应,作者分析了SB2217处理后脾脏NKT细胞的转录组特征。分析发现SB2217可以促进NKT相关细胞因子表达以及免疫信号的激活。这表明SB2217是CD1d的功能性配体和NKT细胞的激动剂。最后作者分析了BfaGC和CD1d、TCR相互作用的晶体结构,从结构水平上证明了BfaGC是由CD1d呈递的配体,并被NKT细胞受体以保守方式识别。亲和力比较支链BfaGC SB2217大于非支链 SB2219。本研究证实BfaGCs的分支结构是激活NKT细胞的关键决定因素,从而诱导特定的免疫调节基因表达特征,并从结构水平和亲和力分析证实了BfaGCs与CD1d和TCR相互作用方式。本文为菌群、饮食以及免疫系统相互作用提供了分子机制范式。原文链接:https://doi.org/10.1038/s41586-021-04083-0
  • 国产首个细菌检验质谱仪进入临床应用
    中国科技网讯(记者 张克 通讯员 陈捷)近日,我国自主研发的首款飞行时间质谱仪(Clin-ToF)通过北京协和医院的论证,已正式进入该医院检验科开始临床使用。根据北京协和医院检验科的实验对比,这款国产质谱仪在革兰阴性菌方面的检测与国际领先的布鲁克质谱系统鉴定效能相当。对此,北京协和医院检验科主任徐英春表示,这说明在一些特定的细菌检测领域,拥有自主知识产权的国产质谱仪已达到国际领先水平。据了解,这款可对细菌蛋白质组、基因组进行全方位研究的先进质谱仪由毅新博创公司研发,于2012年通过了欧盟CEIVD认证,2014年通过中国食品药品监督管理总局认证。它能够快速检测识别革兰氏阴性菌,而这类细菌是常见的引发人体腹泻、肺炎、伤口感染等病症的病原微生物。北京协和医院检验科大夫表示,呼吸科、皮肤科、消化科、骨科、妇科等诸多科室有超过40%的疾病与细菌有关,而医院的重症监护病房(ICU)由于其接收病人的特殊性,也成为医院感染的高危科室之一,而快速准确检测细菌可以正确指导医生用药,避免使用无效抗生素引发的药物滥用问题,同时也能提高救治因细菌感染导致病情加重的患者的效率。据协和医院检验科专家介绍说,北京协和医院本次使用这款国产质谱仪评估了该院1999年—2000年、2014年—2016年间所保存的1025株革兰氏阴性菌,包括大肠埃希菌、流感嗜血杆菌及铜绿假单胞菌等,同时利用国外先进的布鲁克质谱系统进行对比。检测结果显示,这款国产质谱仪(Clin-ToF)鉴定的准确率达98.05%,在革兰氏阴性菌方面的鉴定能力和效率方面,与国际领先技术相当。根据该评估实验所撰写的论文已于近日发表在《中华检验医学杂志》上。据介绍,革兰氏阴性菌是多种细菌的统称,包括痢疾杆菌、肺炎杆菌、流感(嗜血)杆菌、百日咳杆菌等致病细菌,而运用质谱仪来检验细菌是检验医学领域的新技术。这种检测设备能够准确、快速地鉴定患者体内致病细菌的耐药性。通过对质谱分析,可以判断对细菌的蛋白质进行鉴定,准确判断出其对哪一种抗生素具有耐药性,从而帮助医生拟定更精确的治疗方案,避免不能准确判断时,可能要尝试多种抗生素才能找到有效药物的情况出现,从而实现个体化精准治疗,并遏制治疗过程中的抗生素滥用。然而,此前很多临床微生物实验室都面临着标本检测周期过长的问题,运用质谱检测技术则可缩短至少1天的鉴定时间,而有研究证实,在重症监护室(ICU)临床治疗中,抗生素如果晚一小时准确治疗,病人存活率下降8%。因此,这种技术也被认为是临床微生物实验室的革命,而我国此前在该领域尚无自主产品。此次检测可以说是国产医学检验质谱仪的一大突破,北京协和医院已将该仪器应用于临床检测。实际上, 除了在医疗领域之外,微生物检测在食品安全、生物安全等领域都有着极为重要的意义。而毅新博创公司在国家重大科学仪器设备开发专项项目的支持下,与军事医学科学院等机构合作,已经建立了包含2200种微生物蛋白指纹图谱的数据库,可以实现以蛋白指纹图谱对微生物进行管理。据介绍,蛋白指纹图谱是每种微生物的标志物,类似于人类的指纹一样,建立这个数据库就如同给细菌一个身份证,据此可以准确辨别它们,从而为防止微生物危害人体健康筑好屏障。
  • 河南严密监测“超级细菌”专家称一般人不会感染
    10月26日,中国疾控中心通报了3例感染超级细菌的病例,其中一名福建患者因肺癌晚期死亡,暂不确定致病细菌在患者病情发展中的作用。另两名宁夏患者均为体重偏轻的新生儿,目前健康状况良好。   “超级细菌”是什么?会全球大蔓延吗?如果我省出现“超级细菌”携带者,各部门将如何快速反应?昨日,记者采访了有关专家。“我省目前没有发现超级细菌的病例。”省疾控中心副主任许汴利说,在一定的条件下,诸如有其他基础疾病,人体免疫力低下,病菌又达到一定数量时才可能导致感染。“通常来说,只有重病患者,在重症监护病房的患者,气管插管的患者,这些人才有可能感染超级细菌。对于普通公众来说,完全无需紧张。”   据了解,针对“超级细菌”,我国卫生部门已经做出了严密的布控。   许汴利说,国家卫生部已经下发泛耐药诊疗指南,对超级细菌的防控、监测、实验室诊断、相应的治疗等,做出了详细规定。   目前国家耐药监测网络和重大传染病监测网络已经遍布河南省各大医院,而且除了国家网络之外,尚有省级网络、市级网络以及院内监测网络。一旦发现超级细菌患者,将及时予以针对性治疗,并第一时间逐级上报。   此次携带“超级细菌”的3名病例,2例来自宁夏。2名患儿均为低体重儿,在这两名患儿的标本中,发现了具有NDM-1基因的屎肠球菌。在另一名来自福建的老年肺癌患者体内,则发现了具备这种基因的鲍曼不动杆菌。   这些“超级细菌”究竟从何而来?   郑州人民医院呼吸内科主任于洪涛博士说,所谓“超级细菌”,就是携带了NDM-1基因的细菌。因为具有NDM-1金属酶而具备了泛耐药性,而实际上,细菌有几百种抵抗机制,这种基因只是抵抗机制的一种。带有NDM-1基因的细菌,并不是最近才发现的。   于洪涛说,在很早之前,医学界就在铜绿假单胞菌和不动杆菌中发现了NDM-1。之所以这次被冠以“超级细菌”的称谓,是因为媒体的广泛关注,而且与此前不同,这次国外报道的NDM-1,是在埃希氏大肠杆菌和肺炎克雷伯氏菌中发现的。
  • 大肠菌群平板计数法的常见问题有哪些?
    大肠菌群平板计数法的常见问题有哪些?1、VRBA培养相关问题(1)所用器皿是否需要灭菌?答:不需要。配制培养基所用到的锥形瓶、玻璃棒、勺子等均不需要灭菌,但要求一定要清洗干净,表面无污渍、无残留。煮沸完成后,取下锥形瓶,用一般常用的卫生纸(软纸)覆盖瓶口,用橡皮筋缠绕,待冷却至适宜温度即可倾注培养基。在倾注培养基时,须点燃酒精灯,稍微灼烧锥形瓶口。(2)如何保持“煮沸2min”?答:可以用电磁炉或电热板进行加热煮沸,在该培养基即将煮沸时调低温度。实际操作时,不需要严格按照此要求进行,加热煮沸数秒即可。原因:本培养基很难保持煮沸2min,一旦煮沸,则培养基很快上涌、翻腾,若不调低温度或立刻采取其他措施,则培养基可在数秒内喷涌出来,严重者可喷涌2米以上、电磁炉周围1—2米范围内都是培养基飞溅的范围(实验室危险因子之一)。(3)若培养基未用完,是否可以冷藏起来下次用?答:不可以。4789.28中已规定,固体培养基最多允许熔融1次(指的是经过高压灭菌冷却后的培养基还可以熔融一次后使用)。且VRBA培养基冷却后,再次熔融时非常容易喷涌,若温度控制不当,底部培养基熔融后很快就会发生喷涌(即培养基未完全熔融就会发生喷涌现象)。(4)倾注完成后是否需要“覆盖一层”?如何覆盖?答:一般情况下不需要覆盖。在实际操作过程中,若检验员初次接触该食品(或食品品类),则有必要在倾注培养基后再覆盖一层(原因是不清楚该样品是否会发生蔓延)。而如此往复测试几次后,若该样品或食品品类均不存在蔓延现象,则以后的实验中都不需要进行覆盖。若重复多次测试后都有蔓延现象,则以后的检验中zuihao都进行覆盖,zuihao是在原培养基已凝固或半凝固(不会发生晃动)时再倾注一层培养基(“一层”是指缓慢倾注培养基至培养基刚好能够覆盖整个平皿)。 2、如何确定培养基上长的是不是大肠菌群?答:建议新手们认真按照标准进行证实试验,此证实试验简单易操作,每一次VRBA上有菌落生长都进行证实试验,如此往复3-4次,对于哪种形态才是大肠菌群已经能够了然于心。3、两个梯度都长了菌,如何选取?答:选取15-150CFU之间的平板(指的是VRBA平板上所有菌落数在此范围),挑取可疑菌落进行证实试验。详细举例说明:若有两个连续梯度的4个平板上菌落数均在15-150之间,则4个平板上的菌落都要挑取进行证实试验,实际操作时,可灵活操作,如:1:10的两个平板上的菌落数分别为120、123,1:100的两个平板的菌落数分别为16、18,严格来讲必须至少在每个平板上分别挑取5个可疑菌落、5个典型菌落进行证实试验,如此需要40根GBLB肉汤管。建议使用镍合金接种环(即传统的接种环,而不是一次性塑料接种环),因为VRBA上生长的菌落(无论典型或可疑)大部分长在底层、且菌落一般较大,被培养基覆盖,传统的接种环较细,用以刮去上层培养基较方便,挑取菌落也较方便。 4、如何进行证实试验?菌落选取数量?答:同上所述,建议新手们VRBA上的所有不同形态的菌落都进行证实试验。每种不同形态都挑取5-10个进行证实试验(若BGLB管足够,建议多挑取几个进行试验)。注意:A.每种可疑菌落挑取5个,每个菌落放入1管GBLB管中;B.“产气者,记为大肠菌群阳性管”,就要求在实验前须认真筛选BGLB管,凡产气的GBLB管应弃去不用。 5、结果如何计算?答:首先,在VRBA培养24h后进行计数,分别计数可疑大肠菌群和典型大肠菌群(何为可疑、何为典型?同“2”,检验员多进行几次实验后自然很清楚典型的大肠菌群是何种形态)的数量。假如在1:10的平板上可疑大肠菌群有10个,典型大肠菌群有6个;其次,进行证实试验,挑取上述可疑和典型大肠菌群各5个(或者全部挑取),假如10个可疑大肠菌群中有3个证实为阳性,6个典型大肠菌群中有5个证实为阳性,则计算方法如下:最终大肠菌群数=经证实的大肠菌群数=可疑大肠菌群经证实的数量+典型大肠菌群经证实的数量=10×(6/10)×10+6×(5/6)×10=110。 6、若平板上很多菌落,最终证实全部为阴性,结果如何计算?答:根据第3条,选取适宜菌落数的平板挑取菌落进行证实试验,若证实全部为阴性,则需要再挑取更低稀释度的平板上的菌落(建议可疑和典型菌落分别挑取10个)进行证实试验,若第二次证实试验均呈阴性,以<1乘以zuidi稀释度进行计算,如:1:10的平板菌落数分别为120、123,1:100的平板上菌落数分别为16、18,首先挑取1:100的两个平板上的菌落进行证实试验,若全部为阴性,再挑取1:10的两个平板上的菌落进行证实试验,若1:10的平板上的菌落数证实为阴性,则最终计算过程为<1x10,最终结果为<10;若1:10的的平板上的菌落有阳性管,则按照第5条进行计算。中国微生物菌种查询网专业为各企事业单位,科研院所,各级学校提供微生物菌种产品查询、购买服务!网站主要提供的产品:质控菌种,标准菌种,中国微生物菌种4万多株,细胞系/株1万多株其中金黄色葡萄球菌,大肠埃希氏菌(大肠杆菌),沙门氏菌,黑曲霉,铜绿假单胞菌,枯草芽孢杆菌,链球菌,白色念珠菌,志贺氏菌等为常用菌株。
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