伐地考昔二聚体

1.从引物自身着手，重新设计引物，这是最根本解决这一问题的办法。2.可能模板有问题，模板浓度过小，适当加大模板量。3.Taq酶，引物，Mg2+浓度可能过高，可降低它们的浓度。4.将上下引物混合后，在100℃的沸水中煮5分钟，然后迅速拿出至于冰块之上瞬时冷却，这时再加入反应体系当中，引物二聚体就会消失的。理由：引物可能会发生发夹结构，自身环化等结构，在100℃的沸水中煮5分钟可使引物变为单链，以减少二聚体。不过有人认为在PCR仪上95度变性5min也同样达到目的，而且成功试过通过延长退火时间也可以消除引物二聚体。5.所配MIX中加5%的甘油或者5%的DMSO,可以增强特异性。6.PCR反应体系的配制在冰上进行，最后加Taq酶，PCR结束后，产物勿放置在室温下过长时间，有人认为室温下有些Taq酶会将多余的引物合成为二聚体。7.增加循环数。8.降低退火温度后有条带，则应逐渐提高温度，若提高温度的同时产物量减少，则考虑增加Mg2+浓度（根据扩增片断长度而定，片段长则相应镁离子浓度应该高一些）。9.若降低退火温度，发现还是只有引物二聚体，而且镁离子的浓度在20-25mmol/l没有区别，则考虑Buffer等试剂没有完全融解、混匀，导致吸取的试剂浓度不对。10.以上次的PCR产物作模板二次PCR,可以提高引物与模板的特异性，减少引物二聚体，如果两次时间间隔短的话，可以把原产物稀释100-1000倍，如果间隔较长可以稀释50-100倍。

甲基环戊二烯二聚体有没有异构体？在[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相[/url]上出几个峰？用什么色谱柱？

附件是原料巯基丙酮用酒精稀释后进的gcms，请问巯基丙酮二聚体的峰到底是14.866还是22.072，或者说两者都是？还有，根据香料通则，这个东西的含量要达到95%，根据图上看有个很大的巯基丙酮，含量应该不到95%，巯基丙酮是本来就有的呢还是二聚体分解出来的？大家做原料控制的时候怎么做的呢？

如题，乙偶因二聚体在气相上能出得来不？如何测定乙偶姻中二聚体的含量？

求二聚酸中单体、二聚体、三聚体含量测定方法？

我的化合物是属于含金属锂离子的复合物，然后又加了溴离子，(即得到了这样的二聚体，其他实验已证实该二聚体的存在)，做了高分辨质谱发现了双电荷的峰，这个双电荷的 峰正好是显示含2个锂离子的二聚体的分子量那么我能不能判断我的东西在加了溴离子之后可以形成二聚体注：我的化合物不能络合两个金属锂离子，不加溴离子之前的高分辨质谱中也没发现二聚体的峰

在解析ESI低分辨时，如何区分有二倍关系的是二具体，还是因为出现了多点带电，比如说，我打了个ESI+低分辨300-500有个离子峰M/Z=415.2，响应强度为2.40e3。而600-1000范围有两个较强的离子峰M/Z=785.4，M/Z=807.4，响应强度为681。从785.4和807.4可判断出807.4为加Na，785.4为加H，415.2也是加Na。那么分子量到底是多少，按二聚体算的话，分子量应该为392,。如果说是415.2带了两个电荷，那么分子量是不是应该就是784。（请高手给讲讲，这ESI源打质谱如何判断分子量）图上传不上

请各位老师谈谈方向，我想试试GC测三氧化硫以及二聚体三聚体的含量。

[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp][color=#3333ff]气相[/color][/url]如何检测乙偶姻二聚体？查沸点279，出峰却很早，与乙偶姻出峰在一个位置上。

我想从猪肝中分离纯化金属硫蛋白,样品经过Sephadex G-75凝胶柱后,提出其中MT二聚体的蛋白峰,分子量14000左右,经过浓缩后上弱阴离子交换柱,采用0.01-1.0M醋酸铵缓冲液线性梯度洗脱,PH8.3,但是经过一次实验后溶液的PH降低,大量洗脱平衡后仍不能达到8.3,现在我该怎么办?请赐教.

我正在制备双特异抗体，采用半分子互换方法，即一半A 一半B，但是交联后，仍有少量的A和B的污染，因为我是想得到需要的双特异性抗体，因此需要纯化，请问如何才能做到？ 据说可以用分析型CIEX实现 不知道具体的方法和原理如何 望指教，谢谢 我的联系方式时 13936179062 微信 电子邮件是 13936179062@139.com

多方求助无果，希望有高人指点。急急我们实验室在做重组人复合α干扰素（cIFN）的聚合与降解研究。cIFN单体中有两条分子内二硫键，它们在巯基乙醇作用下可以被还原打开，并且在空气中会形成分子间二硫键，进而引起cIFN聚合。再向这些聚合体中添加过量巯基乙醇后绝大多数的聚合体都被离解成单体，但是通过还原SDS-PAGE仍可以看到有微量的二聚体。理论上还原条件下二硫键是不存在的，所以我们推测这个二聚体应该是其他化学键引起的。我想知道的是：1、蛋白质除了二硫键是否还有其他的化学键可以引起蛋白质共价聚合体。2、用什么方法可以鉴定蛋白质聚合体中单体间的化学键？[em0812][em0812][em0811][em0811][em0811]

我是学超分子化学的，以前我用NMR稀释的方法，通过记录特征H化学位移的变化，应用Origin进行非线性拟和可以求得氢键二聚体的结合常数。但对于结合常数高的二聚体，由于NMR灵敏度的限制，在浓度很小的情况下难以进行测定。现打算采用UV-vis（适宜低浓度）来进行测定，但我对UV-vis很陌生，特向大家请教！

人血白蛋白多聚体测定法本法系用分子排阻色谱法测定人血白蛋白多聚体含量。照分子排阻色谱法（附录Ⅲ D）测定。色谱条件与系统适用性试验 用亲水硅胶高效体积排阻色谱柱（SEC，排阻极限300kD，粒度10μm），柱直径7.5mm,长60cm；以含1％异丙醇的pH7.0 0.2mol/L磷酸盐缓冲液为流动相；检测波长为280nm ；流速为每分钟0.6ml。取每1ml含蛋白质为12mg 的人血白蛋白溶液20μl，注入色谱柱，记录色谱图,人血白蛋白单体峰与二聚体峰间的分离度应大于1.5，拖尾因子按人血白蛋白单体峰计算应为0.95～1.40。测定法 取供试品适量，用流动相稀释成每1ml约含蛋白质12mg的溶液,取20μl，注入色谱柱，记录色谱图60分钟（色谱柱长60cm）。按面积归一法计算，色谱图中未保留（全排阻）峰的含量(%)除以2，即为人血白蛋白多聚体含量请教：为何除以2呢？很奇怪呀

在做二羟基丙酮的硅烷化分析的时候，出现一个问题：当标准样品的量比较少的时候比如10mg左右的时候，气相上出来的是二羟基丙酮的硅烷化的峰，但是当标品的来那个超过20mg的时候会出来二羟基丙酮硅烷化峰以及二羟基丙酮二聚体硅烷化峰，不知哪位专家做过此物质的分析，可否指点一下。

跟大家分享一下，聚氨酯的IR分析 v3250-3500 ms OH伸缩振动、NHCO的顺式NH伸缩振动。 v2940、2860 s CH2、CH3伸缩振动。 v2240-2280 s NCO特征吸收峰。 v2120 s 碳化二亚胺吸收峰。 v1770-1785 s 脲二酮环（二聚体）中的C=O。 v1715-1750 vs 酯基C=O、酰胺I键C=O。 v1689-1710 s 异腈脲酸酯（三聚体）中C=O(1408-1430也有峰） v1600-1615 苯环C=C骨架伸缩振动。 v1520-1560 ms 酰胺II键（N-H)变形振动。 v1450-1470 CH2变形振动、CH3非对称变形振动。 v1380 CH3对称变形振动 v1225-1235 聚酯C-O伸缩或OH变形振动 v1060-1150 宽s C-O-C（脂肪族醚）吸收峰。

1.O-H伸缩振动羧酸在浓溶液或固态中因强氢键成二聚体。 强氢键源于离子共振，阻碍游离羟基振动，仅稀非极性溶剂或蒸气相中可见（约3520 cm?1）。 二聚体O-H振动宽且强，范围3300~2500 cm?1，常集中于3000 cm?1，伴弱C-H振动。 长波长精细结构为倍频与复合频。 β-二酮等也有此吸收，但较弱，C-O振动频率较低。与醚类溶剂形成分子间氢键，O-H吸收约3100 cm?1。 2.C-O伸缩振动羧酸C-O振动强于酮，单体约1760 cm?1。二聚体对称，仅不对称振动有吸收，氢键与共振降低频率至1720~1706 cm?1。 分子内氢键影响更大，如水杨酸1665 cm?1，对羟基苯甲酸1680 cm?1。 不饱和共轭轻微降低频率，α,β-不饱和及芳基共轭酸二聚体约1710~1680 cm?1。 α位电负性取代基（如卤素）轻微增加频率，旋转异构致双重谱带。 3.C-O伸缩与O-H弯曲振动羧酸红外光谱中，C-O伸缩约13201210 cm?1，O-H弯曲约14401395 cm?1，两者有相互作用。 二聚体C-O伸缩强吸收约1315~1280 cm?1，长链脂肪酸呈双峰。 O-H面外弯曲特征谱带约920 cm?1，中等强度峰宽。

德国MAIER MCHD气体聚集170cm3变压器非电量保护设备是一款专为油浸式变压器设计的先进保护系统，旨在实时监测变压器内部的气体聚集情况，确保变压器在非电量因素方面的安全运行。以下是对该设备的详细介绍： [b]一、产品概述[/b] 德国MAIER，作为电力设备领域的知名品牌，其MCHD气体聚集保护设备集成了高精度气体传感器、智能控制单元以及独特的油位监测系统，能够准确监测变压器内部的气体聚集量，并在达到预设阈值（如170cm3）时发出报警或跳闸信号，从而有效防止因气体聚集过多而引发的变压器故障。 [b]二、主要功能特点[/b] [list=1][*][font=-apple-system, BlinkMacSystemFont, &]高精度气体监测[/font]：[list][*]设备内置高精度气体传感器，能够实时监测变压器油中的气体含量和气体聚集情况。传感器通过测量油液中溶解气体和游离气体的浓度变化，将气体聚集信息转化为电信号进行输出。[*]当变压器内部气体聚集量超过预设的阈值（如170cm3）时，传感器会立即触发报警或跳闸机制，确保变压器得到及时保护。[/list][*][font=-apple-system, BlinkMacSystemFont, &]油位与气体综合监测[/font]：[list][*]除了气体监测外，设备还配备有油位监测系统。通过浮子式油位传感器和带触点的磁性开关，实时监测油位的变化情况。当油位下降超过一定范围时，同样会触发报警信号，提醒运维人员及时处理。[*]油位与气体综合监测的设计，使得设备能够更全面地掌握变压器的运行状态，提高保护的准确性和可靠性。[/list][*][font=-apple-system, BlinkMacSystemFont, &]智能控制单元[/font]：[list][*]设备内置智能控制单元，对传感器输出的信号进行处理和分析，并根据预设的保护逻辑进行自动保护操作。智能控制单元具备自我诊断和故障报警功能，能够及时发现并报告设备自身的故障情况。[*]同时，智能控制单元还支持远程监控和集中管理功能，使得运维人员可以远程获取变压器的运行状态信息，实现远程控制和故障诊断。[/list][*][font=-apple-system, BlinkMacSystemFont, &]高可靠性设计[/font]：[list][*]设备采用高质量材料和先进制造工艺，确保在恶劣环境下仍能稳定可靠地工作。开关元件与油路分离设计，防止紫外线影响和电缆套管引起的泄漏问题。[*]设备的防护等级高，具备防潮、防尘、防腐蚀等特性，确保长期使用的稳定性和可靠性。[/list][/list] [b]三、应用场景[/b] 德国MAIER MCHD气体聚集170cm3变压器非电量保护设备广泛应用于电力、石油、化工、冶金等行业的油浸式变压器保护中。特别是在对变压器内部气体聚集监测要求较高的场合，如大型变电站、重要负荷供电点等，该设备能够发挥更加显著的作用。 [b]四、总结[/b] 德国MAIER MCHD气体聚集170cm3变压器非电量保护设备以其高精度的气体监测、油位与气体综合监测、智能控制单元以及高可靠性设计等特点，为油浸式变压器的安全运行提供了有力保障。在未来的发展中，该设备将继续在电力设备保护领域发挥重要作用，推动电力行业的安全、稳定、高效发展。

抗体是一种结构复杂的生物大分子，由多个氨基酸组成。即便是天然的抗体，其结构也是各不相同。抗体药物中使用到的单克隆抗体（IgG）在生产工艺（细胞培养、分离纯化）与保存过程中易发生不均一性的变化，包括抗体蛋白的二聚体、多聚体、脱酰胺化、末端氨基酸突变以及糖链部分的结构差异。这些不均一性会使药物的药效、安全性方面受到影响。 而随着生产工艺及分析手段的进步，单克隆抗体类药物的质量控制将更加严格。高效液相色谱（HPLC）作为一种分离技术，在蛋白质、抗体等生物大分子的分离分析方面已得到越来越广泛的应用。 高效液相色谱法（HPLC）可对抗体药物以及重组蛋白药物中的不均一性进行有效地分析。比如，尺寸排阻色谱法（SEC）利用了分子空间结构的不同，可对抗体多聚体、片段、PEG化蛋白等样品进行有效分析。离子交换色谱（IEC）、疏水色谱（HIC）、反相（RPC）以及亲水色谱法（NPC/HILIC）可对抗体中的带电异构体、结构异构体，或者由于糖基化、脱酰胺化和氧化等作用引起的杂质进行高分辨率分析。 近年来，科学家们一直致力于在生物药分离领域开发具有革新性的色谱分离介质，基于尺寸排阻、离子交换色谱等多种HPLC分离技术实现了对抗体多聚体、各种抗体异构体的高效分离，在抗体药物的质量控制方面提供了有效地监控手段。

由于化学发光信号的检测多采用光电倍增管，后者只对400 ~ 750 nm 的光辐射具有响应，因此早期化学发光的研究也局限于这一波长范围的光辐射。从广义上来说，伴随化学反应的任何波长光辐射都可以认为是化学发光。因此，可以采用不同的检测器对不同波长范围的化学发光进行检测，从而扩展化学发光的研究范围。对于非可见光区的化学发光，目前研究最多的是近红外区的化学发光（IR-CL），往往用于激发态化学反应的机理和动力学等的研究而不是用于分析测定，可以获得有关激发态振动和转动能级的信息。常见的IR-CL 反应往往发生在[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相[/url]或者气体分子在固体表面的反应，以避免复杂基体的干扰。小分子的IR-CL小分子振动激发态的生成可以有很多方式，最常见的包括活性氧和原子态氢诱导的IR-CL 现象。活性氧参与的红外化学发光反应可以有三种情况。(1) 活性氧与气态小分子发生碰撞反应生成新的激发态物种。文献中常见的反应体系包括：氧原子与乙烯分子反应生成处于振动激发态的CO、CO2、HCO、H2CO 等，在红外区产生多峰发射；大气中的N 原子与活性氧分子反应生成激发态的NO*而产生极光现象。(2) 化学反应生成单线态氧而在1268 nm 处产生单线态氧的双分子发射。这种情况比较普遍，例如亲核试剂催化双环氧乙烷（Dioxirane）分解可以生成单线态氧而发光；亚油酸过氧化物与HOONO 反应也可以生成具有红外发射特性的单线态氧。(3) 单线态氧还可以通过电子-电子能量转移将能量传递给共存的Bi2、Se2等二聚体得到振动激发态而产生红外化学发光。此外，水合三氧化物（Hydrotrioxide）在分解生成自由基的过程中也伴随着红外光发射

[align=center][b][/b][/align][align=center][b]高顺式聚丁二烯橡胶催化体系的分析研究[/b][/align]2012年11月1日欧盟轮胎标签法规—EC1222/2009实施，要求出口欧盟的轮胎必须标示出轮胎的燃油效率、滑动噪声和湿抓着力等级。高顺式顺丁橡胶是生产高性能绿色轮胎的重要原材料，常见用于子午线轮胎、斜交轮胎胎侧和胎面配方中。不同催化体系的顺丁橡胶应用性能差异较大，尤其是稀土顺丁橡胶。橡胶行业对不同催化体系的高顺式顺丁橡胶的应用非常关注。主要基于以下诉求：1、轮胎厂急欲了解品牌轮胎中不同催化体系高顺式顺丁橡胶的应用方向，以便采购生胶原材料，提高自我品牌轮胎性能。2、合成橡胶生产厂急欲知道不同催化体系高顺式顺丁橡胶在轮胎中的应用现状与前景。3、合成橡胶应用技术研究人员急欲掌握不同催化体系高顺式顺丁橡胶的应用性能。采用裂解[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]、[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Wp][color=#3333ff]原子吸收光谱[/color][/url]（FAAS、GAAS）可以对高顺式聚丁二烯橡胶生胶及硫化胶催化体系进行定性、定量分析。1、采用裂解[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]对高顺式顺丁胶（单用和并用）进行定性。2、进行样品处理，样品处理有三种方法：A、干法灰化，B、湿法消解，C、半降解。3、采用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Wp][color=#3333ff]原子吸收光谱[/color][/url]测试样品中的钕、镍、钴、铝。优化测试条件，消除存在干扰。检测限能达到ppb级。4、根据检测结果，总结国内外轮胎用高顺式顺丁橡胶催化体系的不同及应用方向。

我们单位最近开展阴离子合成洗涤剂的检测项目，我们用二氮杂菲萃取分光光度法检测水质中的阴离子合成洗涤剂含量，可是怎么也做不好。请做过的老师给我详细的操作过程，最好有具体数值，我参考一下自己到底是哪地方出现问题？谢谢~~~~

我做的合成实验由于容易生成二聚体、多聚体，一般用GPC来大概地看下合成产物中的单体含量，但是合成单体为三种同分异构体的混合物，我想请教：1、同分异构体在GPC中会表现出差别吗？（分子量虽然相同，但是结构不同的话流体力学体积应该不同吧，有影响吗？）2、有差别的话，表现在什么地方呢？请高手赐教，多谢！

宗庆后：当前形势下饮料行业发展破局的战略思考！　　今日，2015年中国饮料工业协会年会在上海举行，杭州娃哈哈集团有限公司董事长兼总经理宗庆后出席并发言，以下为全文：　　当前形势下饮料行业发展破局的战略思考　　——在中国饮料工业协会2015年会上的致辞　　尊敬的各位领导、各位同仁：　　很高兴能够在金秋时节与大家欢聚一堂，参加饮料协会一年一度的盛会，在这里要感谢协会的赵理事长和各位领导、同事一年来的辛勤工作，感谢协会为大家提供这样一个相互交流学习的平台。　　确实这几年饮料行业的发展又到了一个瓶颈期，以前我们行业始终保持着每年20%以上的增长速度，但是这些年的增速却明显放缓，去年仅11.72%，今年1-8月就仅有4.72%。这说明增长乏力已经成为行业性的问题，特别是一些大企业遇到的问题更为突出。我想这也是今天我接到“当前形势下饮料行业发展破局的战略思考”这个题目的原因，在此我仅能抛砖引玉冒昧地谈一谈自己的几点想法，讲的不对之处还请大家批评指正。　　有人把饮料行业这几年发展势头慢下来归结为是经济低迷造成的，但我感觉经济大环境对我们行业的影响不是太大，毕竟饮料是快速消费品，哪怕经济差一点但吃还是要吃的、喝亦是要喝的，像08年经济危机时我们饮料行业还是大幅增长的。我认为我们饮料行业这二年增幅下降主要有以下几个原因。

聚丙烯腈纤维中加入第二、第三单体的作用答：丙烯腈为第一单体，它是聚丙烯腈纤维的主体，对纤维的许多化学、物理及力学性能起着主要的作用。第二单体为结构单体，加入量为5%~10%，通常选用含酯基的乙烯基单体，这些单体的取代基极性较氰基弱，基团体积又不大，可以减弱聚丙烯腈大分子间的作用力，从而改善纤维的手感和弹性，克服纤维的脆性，也有利于染料分子进人纤维内部。第三单体又称染色单体，是使纤维引入具有染色性能的基团，改善纤维的染色性能，一般选用可离子化乙烯基单体，加入量为0.5%~3%。

PCR相关经验分享PCR常见问题-分析及对策(无扩增产物、非特异性扩增、拖尾、假阳性)问题1：无扩增产物 现象：正对照有条带，而样品则无 原因: 1.模板:含有抑制物，含量低 2.Buffer对样品不合适 3.引物设计不当或者发生降解 4.反应条件：退火温度太高，延伸时间太短 对策: 1.纯化模板或者使用试剂盒提取模板DNA或加大模板的用量 2.更换Buffer或调整浓度 3.重新设计引物（避免链间二聚体和链内二级结构）或者换一管新引物 4.降低退火温度、延长延伸时间 问题2：非特异性扩增 现象：条带与预计的大小不一致或者非特异性扩增带 原因： 1.引物特异性差 2.模板或引物浓度过高 3.酶量过多 4.Mg2+浓度偏高 5.退火温度偏低 6.循环次数过多 对策： 1.重新设计引物或者使用巢式PCR 2.适当降低模板或引物浓度 3.适当减少酶量 4.降低镁离子浓度 5.适当提高退火温度或使用二阶段温度法 6.减少循环次数 问题3：拖尾 现象：产物在凝胶上呈Smear状态。 原因： 1.模板不纯 2.Buffer不合适 3.退火温度偏低 4.酶量过多 5.dNTP、Mg 2+浓度偏高 6.循环次数过多 对策： 1.纯化模板 2.更换Buffer 3.适当提高退火温度 4.适量用酶 5.适当降低dNTP和镁离子的浓度 6.减少循环次数 问题4：假阳性 现象：空白对照出现目的扩增产物 原因： 靶序列或扩增产物 的交*污染 对策： 1.操作时应小心轻柔，防止将靶序列吸入加样枪内或溅出离心管外； 2.除酶及不能耐高温的物质外，所有试剂或器材均应高压消毒。所用离心管 及加样枪头等均应一次性使用。 3.各种试剂最好先进行分装，然后低温贮存 PCR引物设计的黄金法则 （转自tiangen）1.引物最好在模板cDNA的保守区内设计。 DNA序列的保守区是通过物种间相似序列的比较确定的。在NCBI上搜索不同物种的同一基因，通过序列分析软件（比如DNAman）比对（Alignment），各基因相同的序列就是该基因的保守区2.引物长度一般在15~30碱基之间。 引物长度（primer length）常用的是18-27 bp，但不应大于38，因为过长会导致其延伸温度大于74℃，不适于Taq DNA 聚合酶进行反应。3.引物GC含量在40%~60%之间，Tm值最好接近72℃。 GC含量（composition）过高或过低都不利于引发反应。上下游引物的GC含量不能相差太大。另外，上下游引物的Tm值（melting temperature）是寡核苷酸的解链温度，即在一定盐浓度条件下，50%寡核苷酸双链解链的温度。有效启动温度，一般高于Tm值5~10℃。若按公式Tm= 4（G+C）+2（A+T）估计引物的Tm值，则有效引物的Tm为55~80℃，其Tm值最好接近72℃以使复性条件最佳。4.引物3′端要避开密码子的第3位。 如扩增编码区域，引物3′端不要终止于密码子的第3位，因密码子的第3位易发生简并，会影响扩增的特异性与效率。5.引物3′端不能选择A，最好选择T。 引物3′端错配时，不同碱基引发效率存在着很大的差异，当末位的碱基为A时，即使在错配的情况下，也能有引发链的合成，而当末位链为T时，错配的引发效率大大降低，G、C错配的引发效率介于A、T之间，所以3′端最好选择T。6. 碱基要随机分布。 引物序列在模板内应当没有相似性较高，尤其是3’端相似性较高的序列，否则容易导致错误引发（False priming）。降低引物与模板相似性的一种方法是，引物中四种碱基的分布最好是随机的，不要有聚嘌呤或聚嘧啶的存在。尤其3′端不应超过3个连续的G或C，因这样会使引物在GC富集序列区错误引发。7. 引物自身及引物之间不应存在互补序列。 引物自身不应存在互补序列，否则引物自身会折叠成发夹结构（Hairpin）使引物本身复性。这种二级结构会因空间位阻而影响引物与模板的复性结合。引物自身不能有连续4个碱基的互补。 两引物之间也不应具有互补性，尤其应避免3′ 端的互补重叠以防止引物二聚体（Dimer与Cross dimer）的形成。引物之间不能有连续4个碱基的互补。 引物二聚体及发夹结构如果不可避免的话，应尽量使其△G值不要过高（应小于4.5kcal/mol）。否则易导致产生引物二聚体带，并且降低引物有效浓度而使PCR 反应不能正常进行。8. 引物5′ 端和中间△G值应该相对较高，而3′ 端△G值较低。 △G值是指DNA 双链形成所需的自由能，它反映了双链结构内部碱基对的相对稳定性，△G值越大，则双链越稳定。应当选用5′ 端和中间△G值相对较高，而3′ 端△G值较低（绝对值不超过9）的引物。引物3′ 端的△G 值过高，容易在错配位点形成双链结构并引发DNA 聚合反应。（不同位置的△G值可以用Oligo 6软件进行分析）9.引物的5′端可以修饰，而3′端不可修饰。 引物的5′ 端决定着PCR产物的长度，它对扩增特异性影响不大。因此，可以被修饰而不影响扩增的特异性。引物5′ 端修饰包括：加酶切位点；标记生物素、荧光、地高辛、Eu3+等；引入蛋白质结合DNA序列；引入点突变、插入突变、缺失突变序列；引入启动子序列等。 引物的延伸是从3′ 端开始的，不能进行任何修饰。3′ 端也不能有形成任何二级结构可能。10. 扩增产物的单链不能形成二级结构。 某些引物无效的主要原因是扩增产物单链二级结构的影响，选择扩增片段时最好避开二级结构区域。用有关软件（比如RNAstructure）可以预测估计mRNA的稳定二级结构，有助于选择模板。实验表明，待扩区域自由能（△G°）小于