含增菌液均质袋

致病菌增菌液在划完选择性平板后可以灭菌处理掉了吗，还是要全部实验结束再处理。如果不能处理，是要放在培养箱继续培养还是可以放4℃冰箱，培养箱培养着很臭呢

请教一下各位：白色念球菌培养用什么增菌液合适？非常感谢～

检测沙门氏菌时用到的TTB增菌液怎么配置啊？每只样只用10ml，而且要现用现配，10ml的TTB加碘液和0.5%的煌绿水溶液怎么加啊？

如题！我想测定菌株对六价铬的还原能力如何？需要测定菌液中六价铬含量的变化，可以按照哪个标准来测定呢？用DPC方法测定中的重铬酸钾一定要用优级纯吗，分析纯可以吗？期待大家的答复，谢谢！

[color=#444444]前期稀释时用[/color][color=#444444]scdlp[/color][color=#444444]液体增菌液代替生理盐水，稀释完的菌液放到冰箱可以保存几天第二天或者第三天再拿出来涂布菌落总数还准确么[/color]

麦氏浊度的菌液如何配制?

稀释好的菌液是否培养两天计数后，再用来实验？10版药典说菌液制备后在两个小时内使用，大家是怎样做的呢？

BP冷却到一定的温度后，为什么卵黄增菌液倒入BP时，BP里有很大的块

[font=SimSun, STSong, &]请问铜绿假单胞菌菌液如何保存好？买什么类型的保存箱好？[/font]

药典附录上说的菌液制备“上述培养物用0.9％无菌氯化钠溶液制成每一毫升含菌数为50~100cfu的菌悬液”这一句话中，菌悬液是怎么确定含菌数为50~100cfu？

有没有做过芽孢菌液中乳酸的？方法标准号是多少？谢谢！

药典附录上说的菌液制备“上述培养物用0.9％无菌氯化钠溶液制成每一毫升含菌数为50~100cfu的菌悬液”菌悬液是怎么确定含菌数为50~100cfu？

各位大神，想请问 用2216e液体培养基培养的菌液 想获得无菌上清液应该用哪一种滤膜呀？]

[back=rgb(255, 255, 255)][color=#000000][size=4] 用行标SN/T1022-2001霍乱弧菌检验标准.里面的这句描述不理解,希望高人帮忙指点一下.[/size][/color][/back][back=rgb(255, 255, 255)][color=#000000][size=4]称取检样25克,加入装有225毫升碱性蛋白月工资水增菌液(APW)的广口瓶内.36度培养6h-8h和16h-24h。以接种环取6h-8h和16h-24h增菌培养液的生长物划线TCBS平板。[/size][/color][/back][back=rgb(255, 255, 255)][color=#000000][size=4]是说同一个APW增菌液在6-8小时时划线，16-24小时时再划线，而不是要另外的接种于其他的增菌液，是这样么？还有霍乱弧菌在T1N1平板上形态是怎样的？[/size][/color][/back]

旋转蒸发仪蒸发过滤的菌液时产生大量的泡沫，达不到想要的结果，问厂家，说是气密性太好，所以把气压搞低了，但是经过两个小时后，蒸发效果几乎为零，这个应该怎么弄呢

求助前辈们，最近正在搞课题，我们要用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/bp][color=#3333ff]GC-MS[/color][/url]测定菌液中的短链脂肪酸（乙酸、丙酸、丁酸、异丁酸、戊酸、己酸和异戊酸），但是因为资源有限，我们没有甲酯标液，所以想自己先把这几种酸甲酯化后再测定，比如将乙酸甲酯化成乙酸甲酯。我参考了药典中鸦胆子和亚麻子等方法，这两种中药的脂肪酸含量测定也是先将标准品甲酯化后再测定，比如先把油酸标准品进行一个甲酯化处理。所以我也想参照这种方法对自己的标液进行甲酯化处理。但是我测的是短链脂肪酸，都是易挥发的有机溶剂，如果按照长链脂肪酸的甲酯化方法，那需要进行皂化处理和氮吹吗？还是可以直接加BF3甲醇溶液进行甲酯化？顺便说一下，全校的[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp][color=#3333ff]气相[/color][/url]只有一种柱子，那就是HP-5柱子。

本品是一种最基本的非选择性培养基，含有氮源、碳源和微量无机盐适合一般细菌的生长繁殖。因含有动、植物两种蛋白质，苛养菌也可利用其中的营养进行增殖。 【用途】： 用于志贺氏菌的增菌培养 【贮藏条件】： 2～8℃,避光储存，拆封后及时放入冰箱冷藏； 【保质期】：6个月；【注意事项】 1、检查平板内是否干裂或染菌，如长菌请勿使用； 2、请在洁净的环境下操作，避免杂菌干扰； 3、经过预培养的培养基严禁使用； 4、在冰箱储存很久的培养基容易出现一些冷凝水，请在洁净的环境下将水倒出，然后在培养箱放置10-30Min，待其表面干燥后再接种；或在使用前，提前一到两周放置室温即可； 5、弃物处理：使用后应高压灭菌或焚烧后按一般垃圾处理，也可按专业技术人员指示方法处理。 有需要志贺氏菌增菌肉汤-新生霉素的请私聊我。

大家好！请教大家该如何怎样配置菌悬液？我所需要的菌液浓度大概为10-7？有什么容易的方法？请大家多多指教！

国标菌落的检测中，如何使用均质袋？用于稀释样品的生理盐水应该事先放进均质袋中一起灭菌，还是先装在容器中灭菌，做实验时再倒入均质袋中？这样的话，如何保证均质袋是无菌的？谢谢。

国标菌落的检测中，如何使用均质袋？用于稀释样品的生理盐水应该事先放进均质袋中一起灭菌，还是先装在容器中灭菌，做实验时再倒入均质袋中？这样的话，如何保证均质袋是无菌的？谢谢。

金黄色葡萄球菌血浆凝固酶的增菌液选用BP平板的菌落还是血平板的菌落啊？我们实验室做了一个样品，选BP平板的菌落的增菌液做血浆凝固酶试验，凝集；选血平板的菌落的增菌液做血浆凝固酶试验，不凝集。这是为什么？结果判定为金黄色葡萄球菌阳性还是阴性呢？

公司买的是二代大肠埃希菌的冻干粉珠，配有一瓶水剂，没有说明书。用作微生物控制菌检查。请问大家：1.水剂是不是溶菌液？把这个水剂倒入冻干粉里溶解接种，接种至营养琼脂里就是复苏吧？培养出的是二代么还是3代？之前看有些人是要同时接种至营养肉汤和营养琼脂，有什么区别么？那个是不是适用于0代菌种。2.在32.5度培养箱，以前说培养一天，培养2-3天也可以吧。最多可以培养多久？3.培养好怎么保存呢？保存冰箱里？牛皮纸包裹还是甘油混合液？4.培养出的菌种，放冰箱可以放2-3个月么？2-3个月后就灭菌处理了？

沙门氏菌比对实验【摘要】食品是人类感染沙门氏菌的主要途径。采用传统的平板分离培养方法，进行沙门氏菌能力比对实验，并对实验结果进行分析。【关键词】 食品 沙门氏菌 能力比对食品是人类感染沙门氏菌的主要途径。污染源主要是人和家畜的粪便，沙门氏菌常存在于动物中，特别是禽类和猪。沙门氏菌属于肠杆菌科，其分布广，菌型多，检验及鉴定方法较为繁杂。本次比对实验依据的方法标准是：GB 4789.4-2010，只检测到沙门氏菌属。2011年5月6日~11日参加了某组织的食品微生物检测实际操作培训班。培训结束后，申请参加了其组织提供的沙门氏菌能力比对实验。1 试验1.1 材料1.1.1 样品1份样品（编号：3，塑料离心管带管盖，用封口膜密封严实，不漏液）。食品伙伴网提供。1.1.2 设备及器皿冰箱（2～5℃）；电热恒温培养箱（36℃±1℃、42 ℃±1 ℃）；显微镜；电子天平（感量0.01 g）；无菌锥形瓶（300mL）；无菌吸管（lmL、10mL）；无菌培养皿；无菌试管（3 mm×50 mm、10 mm×75 mm）、接种环（针）。1.1.3 培养基和试剂缓冲蛋白胨水（BPW）；四硫磺酸钠煌绿（TTB）增菌液；亚硒酸盐胱氨酸（SC）增菌液；亚硫酸铋（BS）琼脂；沙门氏菌科玛嘉显色培养基；三糖铁（TSI）琼脂；生化鉴定试剂盒；沙门氏菌O 和H 诊断血清。所试验用的培养基和试剂均经本所沙门氏菌标准菌株（鼠伤寒沙门氏菌：ATCC14028，第3代）验证合格，在有效期内使用。

1.抗菌药物贮存液制备 　　抗菌药物贮存液浓度不应低于1000μg/ml(如1280μg/ml)或10倍于最高测定浓度。溶解度低的抗菌药物可稍低于上述浓度。抗菌药物直接购自厂商或相关机构。所需抗菌药物溶液量或粉剂量可公式进行计算。例如：需配制100 ml浓度为1280μg/ml的抗生素贮存液，所用抗生素为粉剂，其药物的有效力为750μg/mg。用分析天平精确称取抗生素粉剂的量为182.6 mg。根据公式计算所需稀释剂用量为：（182.6 mg×750μg/ml）/1280μg/ml=107.0ml，然后将182.6 mg抗生素粉剂溶解于107.0ml稀释剂中。制备抗菌药物贮存液所用的溶剂和稀释剂见表5。配制好的抗菌药物贮存液应贮存于-60℃以下环境，保存期不超过6个月。2.药敏试验用抗菌药物浓度范围 　　根据NCCLS抗菌药物敏感性试验操作标准，药物浓度范围应包含耐药、中介和敏感分界点值，特殊情况例外。3. 培养基　　 NCCLS推荐使用Mueller-Hinton（MH）肉汤，pH7.2~7.4。需氧菌及兼性厌氧菌在此培养基中生长良好。在测试葡萄球菌对苯唑西林的敏感性时，应在肉汤中加入2%（W/V）氯化钠，按制造厂家的要求配制需要量的MH肉汤。嗜血杆菌属菌使用HTM肉汤，肺炎链球菌和其它链球菌使用含2%~5%溶解马血的MH肉汤。4.接种物的制备　　 有2种方法配制接种物，一是细菌生长方法，用接种环挑取形态相似待检菌落3-5个，接种于4-5ml的水解酪蛋白（MH）肉汤中，35℃孵育2-6h。增菌后的对数生长期菌液用生理盐水或MH肉汤校正浓度至0.5麦氏比浊标准，约含1~2×108CFU/ml。二是直接菌落悬液配制法，对某些苛养菌，如流感嗜血杆菌、淋病奈瑟菌和链球菌及甲氧西林耐药的葡萄球菌等菌株，推荐直接取培养18~24h的菌落调配成0.5麦氏比浊标准的菌悬液。用MH肉汤将上述菌悬液进行1∶100稀释后备用。注意应在15分钟内接种完配制好的接种物，并取一份接种物在非选择性琼脂平板上传代培养，以检查接种物纯度。5.稀释抗菌药物的制备及菌液接种　　 取无菌试管（13×100mm）13支，排成一排，除第1管加入1.6mlMH肉汤外，其余每管加入MH肉汤1ml，在第1管加入抗菌药物原液（如1280μg/ml） 0.4ml混匀，然后吸取1ml至第2管，混匀后再吸取1ml至第3管，如此连续倍比稀释至第11管，并从第11管中吸取1ml弃去，第12管为不含药物的生长对照。此时各管药物浓度依次为256、128、64、32、16、8、4、2、1、0.5、0.25μg/ml。然后在每管内加入上述制备好的接种物各1ml，使每管最终菌液浓度约为5×105CFU/ml。第1管至第11管药物浓度分别为128、64、32、16、8、4、2、1、05、0.25、0.125μg/ml。6.孵育　　 将接种好的稀释管塞好塞子，置35℃普通空气孵箱中孵育16~20h；嗜血杆菌和链球菌在普通空气孵箱中孵育20~24h；对可能的耐甲氧西林葡萄球菌和耐万古霉素肠球菌应持续孵育满24h。7.结果判断与解释 　　在读取和报告所测试菌株的MIC前，应检查生长对照管的细菌生长情况是否良好，同时还应检查接种物的传代培养情况以确定其是否污染，质控菌株的MIC值是否处于质控范围。以肉眼观察，药物最低浓度管无细菌生长者，即为受试菌的MIC。甲氧苄胺嘧啶或磺胺药物的肉汤稀释法终点判断，与阳性生长对照管比较抑制80%细菌生长管药物浓度为受试菌MIC。根据NCCLS推荐的分界点值标准，判断耐药（resistant, R）、敏感(susceptible, S)或中介（intermediate, I）。S表示被测菌株所引起的感染可以用该抗菌药物的常用剂量治疗有效，禁忌症除外。R指该菌不能被抗菌药物的常用剂量在组织液内或血液中所达到的浓度所抑制，或属于具有特定耐药机理（如β-内酰胺酶），所以临床治疗效果不佳。I是指MIC接近药物的血液或组织液浓度，疗效低于敏感菌。还表示被测菌株可以通过提高剂量（如β-内酰胺类药物）被抑制，或在药物生理性浓集的部位（如尿液）被抑制。另外，中介还作为“缓冲域”，以防止由微小的技术因素失控，所导致较大的错误解释。

沙门氏菌检验培养基和试剂 缓冲蛋白胨水（BPW ) 四硫磺酸钠煌绿（TTB ）增菌液 亚硒酸盐胱氨酸（SC ）增菌液 亚硫酸秘（Bs）琼脂 HE(Hoktoen Entoric）琼脂。 木糖赖氨酸脱氧胆盐（XLD）琼脂 沙门氏菌属显色培养基 三糖铁（TsI）琼脂 蛋白陈水、靛基质试剂 尿素琼脂（pH7.2 )。 氰化钾（KCN ）培养基 赖氨酸脱羧酶试验培养基 糖发酵管 邻硝基酚份B-D半乳糖苷（ONPG）培养基 半固体琼脂 丙二酸钠培养基 沙门氏菌O和H 诊断血清。 API 20E 生化鉴定试剂盒或VITEK GN 生化鉴定卡

菌株保存的是第三代，-80℃保存, 再取出来活化的话属于第几代？ 答：保存的是第三代复活出来后，如果采用平板或肉汤活化相当于转接了一代，就是第四代，如果还在瓷珠里的话就还是原来的代数。如果是保存在斜面上，这一支斜面一直就是第三代，如果转接到另一支斜面就是第四代。传代原则，菌株活化复苏不论以任何形式繁殖了一次就算是传了一代。但如果仅是物理位置的转移没有繁殖就不是传代。 [b]02[/b] 菌株传代保存到瓷珠里一定要挑单菌落吗？ 答：不一定非挑单菌落，但是一定要挑相同特征的菌落，就是说从同一个菌落纯化出来的，以保证它们的特性完全一致。原则是尽量多挑，宁多勿少。 [b]03[/b] 菌株冷冻保存是-70℃还是-80℃有具体标准规定么？ 答：有标准。《SN/T 2632-2010 微生物菌株常规保藏技术规程》是关于菌株保藏的一个标准，大家可以学习一下，各个保存方式都有介绍，但是瓷珠是比较新兴的保存方式暂时里面还没有收录。GB4789.28-2013建议长期冷冻储存是在不高于-70℃条件下。 [b]04[/b] 怎样延长菌株的保存时间呢？ 答：大量的实验证明菌株在低温、干燥、缺氧、缺营养的条件下保存效果是最好的，越接近这种保存条件，菌株的保存时间越长。例如甘油冻存管，在-80℃保存时间大于在-20℃。冻干菌粉在-20℃保存时间会比2~8℃长。 [b]05[/b] 怎样纯化菌株？ 答：纯化就是从可疑菌落平板上挑取单菌落再划线到合适的非选择性平板（如TSA、NA等）上，分离出单菌落的过程。 [b]06[/b] 我们只保存第一代菌株是不是要重新传代保存呢，认证老师会不会认为这是个错误？ 答：一般情况下认证老师不会提出这种问题。最佳储存方式应该是，制备第一代菌株的甘油冻存管，置于超低温冰箱进行长期保存。第二代菌株作为工作储备菌株，进行斜面保存。使用第二代工作储备菌株进行转接后为第三代工作菌株。 [b]07[/b] 为何要将第三代作为工作菌株？ 答：菌株在多次传代后，菌株的变异概率会大大增加，因此菌株传代需控制在五代以内，而第一代菌株通常相对不稳定，需传至第三代使菌株稳定。因此实际工作中通常选择第三代菌株作为工作菌株。 [b]08[/b] 质控菌株是不是传代超过五代就必须销毁处理？ 答：不一定。传代超过五代只是存在菌种变异可能，但如果传代到第六代、第七代……经过形态、生化特性、DNA特征等验证，性状保持稳定，那么这些五代后的菌还是可以正常使用。 [b]09[/b] 菌种编号意义？ 答：以金黄色葡萄球菌CMCC（B）26003为例，CMCC为中国医学菌种保藏中心缩写，其它常见菌种保藏中心还包括ATCC（美国标准菌种收藏所）、CICC（工业微生物菌种保藏中心）、FSCC（食品安全菌种保藏中心）；B的意思是细菌，对应还有F（真菌）；26003为CMCC的保藏编号。 [b]10[/b] 同样是金黄色葡萄球菌ATCC6538与ATCC25923有什么不同？ 答：ATCC6538与ATCC25923均为来自美国标准菌种收藏所（ATCC）的菌株，不同的编号表明这两株最初始的分离来源不同。但不同的编号的生化特性是否一样，需要进行具体分析。比如在实际生物学检验中发现金黄色葡萄球菌ATCC6538溶血能力较ATCC25923要强。 [b]11[/b] 使用瓷珠保藏管保存菌株，加入菌液摇匀后为什么要吸干菌液？ 答：瓷珠保存的原理为瓷珠为多孔结构，细菌吸附在瓷珠上，除去液体，则避免反复冻融时，液体冷冻过程中形成的冰晶损伤细菌，从而达到保护细菌的作用。如果不吸干菌液的话，那么瓷珠保存就达不到可以进行反复冻融的效果。 [b]12[/b] TSA斜面一般多少度保存，可以放在冷藏里吗？ 答：一般细菌的TSA斜面，2-8℃保存，即冷藏，但弧菌、绿脓杆菌、嗜水气单胞菌等对低温较敏感菌株，短期置于室温20-25℃保存，长期保存需使用甘油管或者瓷珠冻存。 [b]13[/b] 复苏冻干菌株是否可以采用液体培养基？ 答：可以，但使用液体复苏的话只能观察到培养基混浊，无法确定是否有污染。建议使用平板培养基复苏冻干菌株，有助于简单通过肉眼观察菌落形态以分辨复苏出来菌株是否存在污染，初步鉴定菌株纯度。 [b]14[/b] 复苏冻干菌株是否可以采用显色培养基？ 答：不建议采用显色培养基复苏冻干菌株。冻干菌株在冻干过程中会受到一定的损伤，复苏需要一个最适生长环境，故复苏培养基不能选用含有抑菌成分不利于菌株复苏的这类选择性培养基（显色培养基属于选择性培养基）。[b]15[/b] 产气荚膜梭菌做冻存时是否需要保持厌氧状态？ 答：不需要。产气荚膜梭菌虽属厌氧性细菌，但对厌氧程度要求并不太严格，按照一般菌株冻存方法进行冻存即可。如果是冻存严格厌氧菌，则需特殊的冻存方法。

请问各位前辈，做微生物实验中，拍打均质器所用到的均质袋 ，一般都是敞口的，这样一旦开封了，不就会被污染吗？ 难道不应该是用有密封条的那种均质袋吗？