氧化偶氮苯甲醚

纺织品中4-氨基偶氮苯的检出限、回收率的验证报告前言：随着GB 18401，Oeko—Tex Standard 100，Eco—Lable等多项国内外法规的实施，禁用偶氮染料的检测越来越受到重视，这些染料被人体皮肤吸收后可能在体内分解产生多种有害芳香胺，经人体的活化作用使细胞的DNA结构和功能发生改变．从而诱发细胞癌变或畸变等病变。4一氨基偶氮苯(4一amino azo benzene．简称4一AAB)是这些有害芳香胺中的一种，在Oeko—Tex Standard 100等标准中，4一氨基偶氮苯属于禁用芳香胺的一种。为了实验室在4-AAB测试上的精确度，本文分析了方法的线性范围、加标回收率、方法复现性、方法检测限等内容。1、试验部分1.1 仪器设备与试剂安捷伦7890-5975C气质联用仪，毛细管色谱柱：DB-5MS 30m×0.25mm×0.25μm；恒温水浴锅；振荡器；分析天平。4-氨基偶氮苯标准品，固体粉末，纯度99.0%；蒽-d10标准品，固体粉末，纯度97.8%，均购自安谱科学仪器有限公司。氢氧化钠、氯化钠、连二亚硫酸钠、叔丁基甲醚，均为分析纯，购自国药集团化学试剂有限公司，所用水为三级水。标准溶液：4-氨基偶氮苯标准液，100mg/L，溶解在叔丁基甲醚中；蒽-d10，100mg/L内标液，溶解在叔丁基甲醚中。均保存在密封棕色样品瓶中放置冰箱冷藏，保质期1个月。蒽-d10内标工作液（2mg/L）：用叔丁基甲醚配制，此溶液现配现用。4-氨基偶氮苯标准液（0.5mg/L、1.0mg/L、2.0mg/L、5.0mg/L）：用叔丁基甲醚配制，此溶液现配现用。1.2 样品前处理将纺织样品剪成5mm×5mm的小片，混合。从混合样中称取1.0g，精确0.01g，置于反应器中，加入9mL20g/L（pH值=13.7）的氢氧化钠溶液，将反应器密闭，用力振摇，使所有试样浸于液体中。打开瓶盖，再加入1.0mL200mg/mL的连二亚硫酸钠溶液，将反应器密闭，用力振摇，使溶液充分混匀。置于40℃恒温水浴中保温30min。取出后1min冷却到室温。 然后加入10mL蒽-d10内标工作液，再加入7g氯化钠，将反应器密闭，用力振摇混匀后于机械振荡器中振摇45min，静置，待两相分层后，取上层清液进行GC/MS分析。1.3 GC-MS仪器条件毛细管色谱柱：DB-5MS 30m×0.25mm×0.25μm；载气：氦气（≥99.999%）；流量：1.0mL/min；进样口温度：250℃；质谱接口温度：280℃；离子化方式：EI，70eV；质量扫描方式：定性分析使用全扫描（scan）方式；定量分析使用选择离子（sim）方式，监测离子为：4-氨基偶氮苯197u，蒽-d10内标188u；柱温：50℃（0.5min），25℃/min→260℃（5min）；进样量：1μL；进样方式：不分流进样。在此仪器条件下，4-氨基偶氮苯和内标蒽-d10混标溶液的总离子流图和质谱图如下： http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/07/201507211406_556443_2974654_3.jpg 图1 4-氨基偶氮苯和内标蒽-d10混标溶液的总离子流图http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/07/201507211406_556444_2974654_3.jpg 图2 4-氨基偶氮苯的质谱图2、结果与讨论2.1、方法的线性范围线性范围是指试样浓度与响应讯号之间保持线性关系的浓度范围。配制标准系列溶液，其中4-氨基偶氮苯的浓度分别为0.5mg/L、1.0mg/L、2.0mg/L、5.0mg/L，标准溶液进行GC-MS分析，得到内标校正曲线。曲线的各标准点浓度回读值及曲线线性方程和线性相关系数见表1，曲线如图3.本次试验对内标曲线进行了方法线性的验证。 表1 4-氨基偶氮苯标准曲线线性方程、线性相关系数及标准溶液浓度回读结果标准溶液浓度/（mg/L）标准溶液浓度回读值及回收率标准溶液浓度回读值/（mg/L）回收率0.50.4794.0%1.00.9494.0%2.02.02101.0%5.05.20104.0%标准曲线线性方程Response=2.044e-002*Amt-2.507e-002线性相关系数R20.995http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/07/201507211406_556445_2974654_3.jpg 图3 标准曲线图由R2及线性方程对标准溶液浓度的回读情况可认为此标准曲线线性良好，因此，4-氨基偶氮苯在0.5～5.0mg/L的范围内线性良好。2.2 方法的准确性和重复性验证方法的准确性验证通过加标回收率体现。在待测样品中加入一定已知浓度的标准样品，混合均匀后，按照GB/T 23344-2009方法进行前处理和仪器分析，据算回收率。回收率计算公式为：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/07/201507211425_556473_2974654_3.png。本试验选择的是阴性样品进行加标试验，http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/07/201507211425_556474_2974654_3.png。在本试验中，通过对阴性样品进行3个浓度水平的加标试验计算回收率。试验结果见表2。方法重复性验证是指在相同的测量条件下，对同一被测量进行连续多次测量所得结果之间的一致性。重复性的估算方法通过在同一实验室内，由同一试验人员用相同的试验设备至少做6次平行试验，测得的数据用统计的方法计算精密度，一般用相对标准偏差表示。本试验在相同的检测条件下，称取1.0g阴性纺织品样品，分别进行3个浓度水平的加标试验，每个水平进行6次平行试验，通过计算相对标准偏差RSD体现方法的重复性效果。试验结果见表2。 表2 4-氨基偶氮苯3个水平加标试验及6次平行测定的结果试验次数加标水平/（mg/kg）5.010.050.0测定值回收率测定值回收率测定值回收率

邻氨基苯甲醚同分异构体的分离摘要：为了实现邻氨基苯甲醚同分异构体的完全分离，作者采用气相色谱-质谱联用方法，通过改进色谱条件，使其取得了完全分离。试验表明采用气-质联用方法可以实现邻氨基苯甲醚同分异构体的完全分离。关键词：邻氨基苯甲醚；分离；异构体The Separation of O-Anisidine and Its isomersAbstract: In order to achieve the complete separation of o-anisidine and its isomers, the authors used gas chromatography - mass spectrometry methods, by improving the chromatographic conditions, so as to achieve their complete separation. The results showed that the gas-chromatography-mass spectrometry method can achieve the complete separationof o-anisidine and its isomers. Keywords: o-Anisidine; separation; isomers 1 前言采用气相色谱-质谱联用方法检测染料产品中23种有害芳香胺含量，按照现行国家标准GB/T17592-2006《纺织品禁用偶氮染料的测定》中提供的色谱条件，不但检测时间很长，而且大多数同分异构体保留时间相同或非常接近，同时这些异构体的质谱图又非常相似，从而造成无法使用特征离子对其进行定性和定量。如采用其它分析手段共同鉴别，如薄层色谱、液相色谱等，需要重新寻找条件，而且更换仪器费时费力，且多数实验室不一定同时具备这些设备。作者对芳香胺邻氨基苯甲醚及其异构体分离的问题进行了研究，其中，邻氨基苯甲醚属于有害芳香胺，而其同分异构体不属于有害芳香胺。作者通过改进色谱条件，使以上化合物达到很好的分离，提高了检测效率，减少了检测过程中的假阳性检出。2 试验2.1 仪器与试剂气相色谱-质谱联用仪（GC-MS）：Agilent 7890A/5975C，美国Agilent公司毛细管柱：DB-17MS柱（30m×0.25mm×0.25μm）乙醚、硫酸亚铁等以上试剂均为分析纯；甲醇 色谱纯 美国Fisher公司旋转蒸发仪 上海亚荣生化仪器厂邻氨基苯甲醚及其同分异构体均为德国Dr.Ehrenstorfer公司。2.2 仪器操作条件色谱柱：DB一17MS 30m×0.25mm×0.25μm；温度：进样口220℃ ；辅助器280℃；离子源230℃ ；四极杆温度：150℃；柱温：40℃保持2分钟，以15℃／分钟升温至85℃ ，保持20分钟，再以30℃／分钟升至280℃，保持0分钟；载气：He；流速：1.0ml/分钟；离子化方式：EI；质量扫描范围：35—350；进样方式：不分流进样；进样0.2μL。2.3 执行标准试样处理按国标GB/T17592-2006执行。3 结果与讨论http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2010/11/201011021932_256750_1604317_3.jpg图1 邻(间、对)氨基苯甲醚总离子流图由图1可以看出，邻氨基苯甲醚及其异构体在本实验条件下，可以得到很好的基线分离。保留时间分别为：邻氨基苯甲醚(27.115分钟)；间氨基苯甲醚(28.509分钟)；对氨基苯甲醚(28.146分钟)。在对染料产品中23种有害芳香胺含量的测定过程中，由于异构体的存在，并且多数异构体的质谱图很相似，如果保留时间相同，往往会形成假阳性结果的产生。当前针对有害芳香胺的气相色谱/质谱检测方法，大多采用非极性或极性较弱的色谱柱，如HP-5MS，DB-5MS，DB-35MS，这些色谱柱普遍存在的缺点是对常见的芳香胺异构体不能很好的分离。本方法通过使用中等极性色谱柱DB-17MS(固定相等同于50％苯甲基聚硅氧烷)，同时使用三阶程序升温，很好的解决了这个问题。通过上面的数据与国标GB/T17592-

360℃，微溶于水，溶于乙醇、乙醚、氯仿、苯和油类染料中间体。用于合成偶氮染料，分散染料、噁嗪染料；还用于制油漆和颜料，以及醇溶黄和pH指示剂。 由于它是一种有害芳香胺，国际上对它的管控也比较严格，有些客户的限量要求为少于20mg/kg。EN14362-3就是国际通用的检测4-氨基偶氮苯的方法。仪器试剂QP2010SE GCMS 岛津叔丁基甲醚（AR） 上海国药氯化钠（AR） 广试连二亚硫酸钠 光华氢氧化钠 广试4-氨基偶氮苯（高纯） 阿拉丁实验过程先把样品剪碎成5×5大小，然后精确称量0.9903g布料，装进50ml平底烧瓶中。样品为斑马纹布料，如下：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/02/201402271911_491288_1616855_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/02/201402271912_491289_1616855_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/02/201402271912_491290_1616855_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/02/201402280902_491336_1616855_3.jpg开发方法时测得仪器检出限为：0.006mg/L方法限为：0.0063mg/L回收率测试：称取1g样品，并往样品中加入1ml，30mg/L的标液，再按步骤进行前处理，测试。最终算得回收率为：92%。结论：按EN14362-3的方法处理样品，过程简单，回收率高。

一般GCMS分析的目标物，在一定的柱流量下，出峰的温度应该是一样的。但最近发现，不同升温程序下，出峰的所在温度也不同。做偶氮中的4-氨基偶氮苯60-09-3分析，先摸方法。用了几种升温程序，柱流量都是1.5，进样口280度，离子源200度，传输线250度，现在只记得两个升温了如下：升温程序1： 80度，保持1min，然后40度/min升温至280度，保持1min；升温程序2： 100度，保持1min，然后50度/min升温至280度，保持1min，再20度/min升至300度，保持1min。最后我选了图中第三个的升温程序。。。现在出峰时间很稳定，都是在300度下，6.011min。图中的峰都确认是60-09-3，分子离子为197，参考离子92,120http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/09/201209091637_389667_1616855_3.jpg